JPH0276877A - Ｌ―６５４，０４０新規抗菌性物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は構造式■なる新規抗菌性化合物、Ｌ−６５４、
０４０に関するものであり、２−　（２，３−ジヒドロ
キシフェニル）−４，５−ジヒドロ−Ｎ−［３−［（１
−ヒドロキシ−２−オキソ−３（Ｒ）−ピペリジニル）
−アミノ］　−２（Ｒ）　−メチル−３−オキソブロビ
ル］−５Ｒ−メチル＝４３−才キサシ−ルーカルボキシ
アミドという構造武名を持つ。本発明は粗濃縮物におい
ての希釈形態、純粋な形態及び抗生物質として投与する
に適切なる処方形態などをとる新規化合物をも含むもの
である。

新規化合物１＝　−６５４，０４０は抗菌性物質として
有効であり、インビトロで多数の微生物に対してその能
力を示している。バスッレラマルトサイダ感染のマウス
にＬ　−６５４，０４０を腹腔投与すると生存期間が延
びる。

同様に本発明は新規抗菌性化合物、Ｌ−６５４，０４０
の調製方法に関するものであり、新たに発見された種で
あるストレブトベルチシリウムシンロエンゼＭＡ６０１
１の栄養培地による発酵に関するものである６本株、Ｍ
Ａ６０１１は本発明の新規抗菌性化合物、Ｌ−６５４，
０４０を産生ずる。

本発明は栄養培地による抗菌性物質の発酵調製方法と同
様に抗菌活性を有する新規かつ有効な抗の性物質を提供
するものである。

本発明に従かい以下の構造式なる抗菌性化合物が提供さ
れる。

Ｉ（ ■ 及びその製薬的許容塩、水化物、エステル、無水物ある
いはアミド。

抗菌性物質Ｌ　−６５４，０４０は制御された条件Ｆで
発酵ブロスを用いた微生物ストレブトベルチシリウムシ
ンロエンゼＭ　Ａ　６０１１．　Ａ　Ｔ　ＣＣ５３６９
９の増殖により得られる。発酵は懸濁した栄養物質を含
む培地あるいは培地中で十分に栄養懸濁物質が遊離され
ている透明な培地により行なわれる。

詳細な分類学に基づき、抗生物質産生微生物はｆｆ１ｆ
１ストレプトベルチシリウムシンロエンザとして同定さ
れている。この有効株はメルク　アントコ−、インク　
ローウェイ、ニューシャーシー、のカルチャーコレクシ
ョンにおいてＭＡ［３０１１と指定されている。１９８
７年の１２月１０日前後にこの増殖菌はアメリカタイプ
カルチャーコレクション、１２３０１バークローンドラ
イブ、ロツクビイル、メリーランド２０８５２、のカル
チャーコレクションに永久寄託され受託番号Ａ　ＴＣＣ
５３６９９として譲渡されている。

ストレプトベルチシリウムシンロエンゼＭ　ＡＢＯ３１
、ＡＴＣＣ５３６９９の形態学的及び培養上の特性 ストレブトベルチシリウムシンロエンゼＭＡ６０１１、
ＡＴＣＣ５３６９９の形態学的及び培養上の特性を以下
に示す６ １［ヨ　　態　　標準的培地及び方法を用いて、産生微
生物の形態学的及び培養上の特性をベルゲイ（Ｂｅｒｇ
ｅｙｌのマニュアル　才ブ　デターミナティブ　バクテ
リオロジー （ｉ＋１ａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖ
ｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙｌ、第８版、ウィリアム
ス　アンド　ゥィルキンス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ　＆　Ｗ
ｉｌｋｉｎｓｌに従がい調査した。既に報告がなされて
いるストレプトベルチシリウム属のその他の種との比較
を基に、産生微生物は新種の中の新株でありメルクコレ
クションにおいてストレブトベルチシリウムシンロエン
ゼ、株ＭＡ６０１１として同定されているものである。

■、−６５４，０４０産生微生物、ストレブトベルチシ
リウムシンロエンゼ ＭＡ−６０１１の坪養　の牛、 Ａ、形態学　　胞子柄は短かく、分岐を持ち、気中間糸
上に間隔をあけながら輪生体 を形成する。これらの分岐は順次、 いくつかの二次的分岐を形成し、そ れらは１０−１５個の胞子の直線的 連鎖からなっている。胞子表面は粗 面状を呈しており、高倍率下ではほ とんどいぼ状である（ＥＭ）。

イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ培地２）ＶＩ：裏面□
黒色 Ａ　：淡い中灰色 ＳＰ：強暗褐色 オートミール寒天培地（ＩＳＰ培地３）Ｖ　：裏面−暗
褐色 Ａ　：綿毛状の白色部分を持つ淡灰色 ＳＰ、暗褐色 （ｖ１＝宋養菌子、Ａ＝気中菌子、ｓｐ＝可溶性色素を
表わす。） 無機塩・スターチ寒天培地（ＩＳＰ培地４）Ｖ　：裏面
□褐色 Ａ　：綿毛状の白色部分を持つ淡灰色 ＳＰ：かすかな中褐色 グリセリン・アスパラギン寒天培地（ｒｓＰ培地Ｖ　、
裏面−→＆褐色 Ａ　：暗灰色と白色のました周辺部を持つ中灰色 ＳＰ：暗褐色 ペプトン・鉄・イースト寒天培地（ＩＳＰ培地■　・抗
褐色 Ａ　、無 ＳＰ：暗褐色 メラニン：有 ヂロシン寒天培地（ＩＳＰ培地７） Ｖ　：裏面□黒色 Ａ　・灰色 ＳＰ：暗褐色から黒色 ツアペック・ドックス寒天培地 ■　＝　無色、中明度 Ａ　：散在、灰色がかった白色 ＳＰ：無 その仙注意すべき点がなければ、すべての判定は２８°
Ｃ，３週間後に行なう、すべての培地におけるｐ　Ｈは
中性付近（６，８−７，２）とする。

Ｂ　炭素源利用能 プリドハムーゴトリーブ基礎培地（ｒｓｐ培地９）＋１
％炭素源、 ＋＝発育良好、±＝発育不良あるいは判別困難、−＝発
育なし　ネガティブコントロール（炭素源を含まない）
を対照 グルコース　　　＋ アラビノース　　± セルロース　　　− フルクトース　　＋ イノシトール　　± ラクトース　　　± マルトース　　　＋ マユ１−−ル　　　＋ マンノース　　　＋ ラフィノース　　± ラムノース　　　± シュクロース　　＋ キシロース　　　＋ Ｃ，４度範囲（イースト・デキストロース十食塩寒天培
地） ２８℃−栄ａ菌糸及び気中菌糸増殖良好、胞子形成あり ３７℃−栄養菌糸及び気中菌糸増殖良好、胞子形成あり ４２℃−栄養菌糸増殖良好、気中菌糸散在、胞子形成不
良 ５０℃□増殖なし り、酸素要求性（イースト・デキストロース十食塩寒天
培地中への穿刺培養） 好気性、増殖良好 Ｌ　−６５４，０４０の調製 本発明の新規抗菌性化合物の産生は制御された条件下で
微生物ストレブトベルチシリウムシンロエンゼを適切な
液体栄養培地中に植菌する好気的発酵により行なわれる
。その他の抗生物質産生時に使用されつる様な液体培地
が本発明の新規抗菌性化合物産生に適応させる。これら
の培地は微生物が同化しつる、炭素、窒素源及び無機塩
類を含んでいる。多数の発酵用培地によりストレブトベ
ルチシリウムシンロエンゼＭＡ６０１１．　ＡＴＣＣ５
３６９９からＬ　−６５４，０４０が産生され、発酵に
対して熟練した微生物学者達（当業者）により適切に調
整されている。

一般的に、グルコース、フルクトースあるいはスターチ
、同様にグリセロール、ペクチンあるいはペプトン処理
ミルクなど単独あるいは併用するところの炭水化物が栄
養培地中で同化炭素源として使用される。培地中で使用
される炭素ａ類の正確な量は、主にその培地中での他の
成分に依存する。しかし、−殻内には、培地重量の約１
％と６％の間において炭素源の量が変動する。これら炭
素源は単独あるいは幾つかを併用して培地中で用いられ
る。

多数の蛋白質物質が発酵過程中において窒素源として用
いられる６適切な窒素源としては、例えばイーストエキ
ス、イースト氷解物、大豆粉、蒸留可溶性物質、コーン
ステイープ、ベプｌ〜ン処理ミルク、ラード水、ビーナ
ツツミール、トマトペースト及びその他類似物などがあ
る。これら窒素源は単独あるいは併用で液体培地重量の
約０，２％から６％の間で用いられる。

培地中に取り込まれる栄養無８！１塩類として。

ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マ
グネシウム、リン酸、硫酸、塩酸、炭酸及び類似イオン
を産する通例の塩類が知られている。同様に微量金属と
して、コバルト、マグネシウム及び鉄なども含まれてい
る。

発酵は約２０℃から約４２℃の範囲内で行なわれる。ス
トレブトベルチシリウムシンロエン・ゼＭＡ６０１１．
ＡＴＣＣ５３６９９の培養増殖及び本発明の抗菌性化合
物の産主に適切な栄養培地のｐＨは約５．５から８．０
の間である。

抗生物質の小規模な発酵は常法に従がい、抗生物質産生
培養菌を適切な栄養培地に植菌し、その後、製造用培地
に移し変えて、一定温度の下、数日間振盪培養による発
酵操作を用いるものとする、培養終了後、以下記載のあ
る操作により抗生活性物質をその発酵ブロス中から単離
する。

小規模発酵は滅菌フラスコを用いて、ｌ、２゜３、ある
いは４段階の植菌移行操作により行なう。植菌段階での
栄養培地として、幾つかの適切な炭素及び窒素源の併用
が見られる。これらシード用の菌の入ったフラスコを一
定温度チエンバー内で最大量増殖を得られるまで（普通
、ｌ−３日）、振盪培養する。そして、得られた増殖菌
の一部分を、更にシード用培養に用いるかあるいは製造
用培地中へ植菌するものとする。シード用フラスコの中
間段階の菌を用いるとしても、本質的には、同様用式で
行なわれる。すなわち、フラスコ中の内容物の一部分を
次の段階のシード用培地に植菌するか、あるいは製造用
培地中へ植菌するものである。植菌された製造用フラス
コを一定温度で数日間（清適３か６５日）振盪培養する
。培養終で後、本発明の新規抗菌性化合物が単離される
。

大量培養に関しては、撹拌器及び発酵培地中に空気を送
り込むエアレーション装置のある適切なタンクを用いて
発酵することが好ましい。栄養培地をタンク中で調合し
、約１２０℃において加熱滅菌する６冷却後、この滅菌
培地中に産生微生物を予かしめ増殖しておいたシード培
養菌を植菌する。そして発酵を行なう。攪拌及び／ある
いはエアレーションを栄養培地に対して行ないながら、
一定温度を保ち、数日間（例えば、３−５日）発酵培養
する。

得られた今回の実施についてのガイドラインや実験的手
順、つまり、ストレブトベルチシリウムシンロエンゼ、
特に株Ｍ　Ａ　６０１１Ａ　Ｔ　ＣＣ５３６９９に対し
ての適切な発酵あるいは培養条件の決定は本発明の範囲
の中にあるものと理解されるものである。ストレプトベ
ルチシリウムの小規模あるいは大量を含む発酵について
のこの様な条件は通常適用され、あるいは容易に必要な
技術を持った人達により確かめられた。−殻内な政良法
である。

抗菌性剤として用いる時には、Ｌ−６５４，０４０が製
薬的調剤としての形態をとらねばならない。すなわち内
用、非経口あるいは局所投与に適切な有機あるいは無機
固形物あるいは液状製薬的賦形剤をそこに含む混合物あ
るいは結合物としての形態である。適切な賦形剤とは、
抗生物質とは反応しない物質であり１例えば水、ゲラチ
ン、ラクトース、スターチ、ステアリルアルコール、ス
テアリン酸マグネシウム、滑石、植物油、ベンジルアル
コール、ガム、プロピレングリコヘル、ポリアルキレン
グリコール、白色ワセリン、あるいはその他公知の製薬
的賦形剤などがある。製部的形態としては、例えば錠剤
、軟膏、クリームあるいはカプセル、あるいは液状溶液
として懸濁あるいは乳剤などがある。これらは滅菌され
、あるいは／８よび助剤として、防腐剤、安定剤、湿潤
剤、あるいは乳化作用因子、溶液増進剤、浸透圧調整用
の塩あるいは緩衝液などを含むものである。

乾燥体として、この抗生物質を投与する必要のある時に
は、抗生剤として必要な容量を含んだ、固形単一容１形
態として、カプセル、丸薬あるいは錠剤として使用され
る。これら容雀形態は、適切な微細分離した、希釈液、
溶加剤、崩壊剤、及び／あるいは結合剤などと、活性成
分を完全にかつ均一に混合することによって調製される
。例えば、スターチ、ラクトース、滑石、ステアリン酸
マグネシウム、植物ガム。これら単一容量形態の、Ｌ、
　−６５４、０４０抗菌性物質の総重量及び内容物に関
しては治療を受ける宿主のタイプや症状の度合やタイプ
及び体重などの因子に依存し広範囲に変化するものであ
る６通常、抗生物質は１日につき、体重１　ｋｇあたり
約５から約１００ｍｇ投与される。

本発明の範囲の中には非毒性であるＬ−６５４，０４０
の製薬的許容塩類も含まれている。例えばナトリウム、
カリウムあるいはカルシウムなどのアルカリ金属及びア
ルカリ土類金属、あるいはアモニウム塩、あるいはトリ
エチルアミン、Ｎ−エヂルービベリジン、ジベンジルエ
チレンジアミンなどの有機的塩基性塩などである。

同様に本発明の範囲の中には非ｉｎ性であるＬ−６５４
、０４０の製薬的許容エステル及びアミドも含まれてい
る。これらエステル及びアミドは熟練の技術者にとって
は容易に考えられる物であり、例えば、０１−４アルキ
ルエステル及びアミドなどを含むものである。

実施例Ｉ ＭＡ６０１１の発酵 メルク　カルチャー　コレクション寄託のＭＡ６０１１
凍結乾燥菌を無菌的に培地１　［１，０ｇ／２デキスト
ロース、１０　ｇ／ｆｆ可溶性スターチ、３．０ｇ／ｆ
ｆビーフエキス、５．０ｇ／ｇイーストオートライゼー
ト（アルブミンｐＨ、イーストプロダクツ、インク）、
５．０ｇ／ｇカゼイン酵素的加水分解物（ＮＺアミンタ
イプＥ、シ工’７　イールド）　、Ｃ１，０５ｇ／　Ｒ
）ＪｇＳＯ４４！ＩｚＯ１２ｍｆ２リン酸緩衝液（９１
、０ｇＫＨ２Ｐ　Ｏ−及び９５゜ＯｇＮａ）ＩＰＯ４を
含むＬＯＯＯ，Ｏｍｇの脱イオンＨ２０）、０．５ｇ／
、ｅＣａＣＯ−。

及び滅菌前にＮ　ａ　ＯＨでｐＨ７，０−７，２に調整
済みの１０００．０ｍＩ２の蒸留水］、予かじめ１２１
　”Ｃ１１６ｐｓｉ、２０分間の滅菌処理をしておいた
培地、を５０ｒｒ＋ｊ２含む２５０ｍｇのバッフル付き
エルレンマイヤーフラスコに移植し、綿栓をする。植菌
したフラスコを往復運動振盪機にかけ２２Ｏｒｐｍ、２
８°Ｃ１４８時間、振盪培養する。増殖してきた菌液１
．０ｍ℃を、上記同様様式で滅菌した培地１　５００ｍ
ｆｆを含む２ｅのバッフル付きエルレンマイヤーフラス
コに移植する。フラスコを往復運動振盪機にかけ１６０
　ｒｐｍ、２８℃、２４時間、振盪培養する。

第２段階接種菌の内容物すべてを培地２　（１０，０ｇ
／ｇビーナツツミール、１５．０ｇ／１２オート麦扮、
０１５ｇ／！アスコルビン酸ナトリウム。

１．０ｇ／、ｇクエン酸ナトリウム、０．５ｇ／ｆ２に
２ＨＰＯ４，０，０１Ｑｇ／４２　　ＣｏＣ１ｚ４＋Ｈ
２０，５，０ｒｎｊ２／ｆｆ大豆油、及び滅菌前にＮ　
ａ　ＯＨでｐＨ７，３−７，５に調整済みの１０００．
Ｏｍ　２蒸留水）、９．５βを含む１４リツターの攪拌
ジャー発酵装置に移す。　培地を２０分、１２１℃、１
６ｐｓｉで滅菌し、予かしめ９０分、１２１℃、１６ｐ
ｓ　ｉで滅菌しておいた発酵装置中へ無菌的に注入した
。発酵は３か６５日４００ｒｐｍの撹拌、３℃／　ｍ　
ｉ　ｎのエアレーション、２８℃において行なう。発酵
ブロス中より２４時間ごとにサンプルを取り出し、純度
、ｐ　［１、細胞容量、抗生物質産生についてアッセイ
する。

一実ｉ剋３− Ｌ−６５４，０４０の単離 １４−リッター発酵バッチ（６，７リツター）からすべ
てのプロスを取り出し、珪藻土と混合し、湿潤珪藻土に
より濾過する。約１．４ｇの抗生物質を含む濾液７Ｃを
ｐ　Ｈ５に調製して５００ｒｒ＋Ｊ２のアンバーライト
ＸＡＤ−２樹脂に３５ｍＩ２／　ｍ　ｉ　ｎで吸着させ
る。吸着後、水で洗浄して、ＩＣのＭｅ２Ｃｏ−Ｈ，Ｏ
（３：　２）でン容出する。溶出後、減圧下で２００ｍ
ｆｆに濃縮し、希Ｎ　ａ　ＯＦｌで中和する。ａ縮液を
２００　ｍ　ｆｉｌのｎ−ブタノール（ｎ−ＢｕＯ）Ｉ
）で抽出する。抽出物を２００　ｍ　Ｑの水で洗浄後、
濃縮して粘度の高いシロップ状にする。２バッチ分の濃
縮物をＭｅＯＨで４０ｍｊ２に希釈し、ＭｅＯＨを用い
た。１６４０ｍＪ２のセファデックスＬ　Ｈ−２０カラ
ムのクロマトグラフィーにかける。カラムをＭｅＯｆ−
１，１，５ｍＩ２／ｍｉｎで展開し、５００ｒｒ＋ｊ２
を排除した後、２０＋ｎｊＺずつ分画する、活性を示す
バイオアッセイ物は０．７７カラム容量において溶出し
てくる。分画３１−４５までを集め、約４０ｍεに濃縮
し、結晶化させる為に一晩、冷却する。獲得産物を濾過
し、ＭｅＯＨで洗浄後、真空３時間で乾燥する。収量は
５２７ｍｇでブロスからの回収率は２０％であった。更
に、母液をＬＨ−２０のカラムに再度かけ、単離してよ
り多くの産生物を結晶化した。抗生物質を、加熱冷却に
より水より再結晶させた。沸湯水中での溶解度は約１０
ｍｇ／ｍＱである。

−」Ｊ１九１− Ｌ−６５４，０４０の物理化学的特性 １、元素分析　ＣｚｏｌｌｚａＮ＜０７’１１２０計算
値　Ｃ，５３，０９：　　１１．６．２４：　　Ｎ、　
１２．３８実測値　Ｃ，５３，６３：　　１１．６．０
５：　　Ｎ、　１２．４６２、”ＣＮＭＲスペクトルを
室温中で約１０％（：Ｄ、Ｏｎ／ＣＤＣ１，使用ハ’）
　７　ンＳ　Ｃ−３００Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトルメーター
により記録した。化学シフトを内部テトラメチルシラン
（ＴＭＳ）をＯｐｐｍとしたｐｐｍにより示した。分子
構造式Ｃ２ｏＨ２ｓＮ　４０７に一致して２ｏ個の炭素
が＠認された。以下にその化学シフトを示す。

１５．１．２０．８．２１．５゜２７．５．４０．９．
４２．９．５０．２゜５０．８．７４．６．７９．７．
１１０．７　、１１９．５　、１１９．６　。

１１９．７　、１４６．２　、１４８．９　、１６６．
９　、１６８．３　。

■７３．ロ　、　　１７７．４　　ｐｐｍ　　。

３、紫外線データを示す。

４、Ｘ−線結晶学 Ｌ−６５４，０４０（ロットＬ−６８１，５０６−１２
Ｍ）のサンプルは水中で結晶を形成する。

水の１分子は結晶格子の中で共結晶化する。ｘ−線回折
解析により、相関配置を次の様に決定した。

Ｌ　−６５４，０４０ ■ 分子形成する生合成サブユニットはオルニチン、β−ア
ミノイソブチル酸、スレオニン、及び０−ピロカテコー
ル酸である。

Ｌ　−６５４，０４０の構造を直接的な方法により解析
した。

［主に、ビー、マルクン（Ｐ、ＭＵＬＴＡＮ）の多重開
始点タンジェント式によりＸ−線回折データーから結晶
構造を自動的に解析するプログラムを用いた。ヨーク大
学、イングランド、１９８０］。

ＮＭＲにより構造■を確認。

培養した種々の微生物に対して、その活性を調べた。■
、−６５４，０４０の結晶化サンプルを蒸留水で溶解し
、その内の１５えを菌の入っている栄養寒天感受性試験
プレートの表面にそれぞれ加えてい（。−晩培養後、予
かしめ添加した１５え部分での阻止領域直径を測定し、
各プレートに対する活性とする。結果を第１表に示す。

”　　　　　ＮＦＪ ″。

圓へ 水 べ→ｋ　　　’ニー　’ｎ　４ベニ区 壮　　コＩ−ｌ　　　区　ｐ吠へＲだ へ　　　　　賓　ト　ベ．　５　ト　七　も　１へ　、
き　逮”：、Ｆ＋λ　　区　　　　束　　か　　１＼　
　ヤ　　壇　　ｂ　　°き）ロ　〜ロロ　ロロ閃ロロへ
ロマロロ　　−一、−　　−　。４　−　　　　　　　
　眉； 」 １０ロ　ロロＶロロのｅｌ：１１寸。

−　　　　　　　　　　　　　　の　　　　　　　−ｌ
ｃ％Ｊｃｓｓ　　ｃｓｓ　　　　　　　　　　４＝ 冑 ＝　　　　　　　　　　　　　　　　　　　÷−　　心 −　へ ベー ゛へ０う　ｌ神ＨΔΔもトーへで Δ　　ｌ−１　　　→　　　　１　　コ　　７八　　ム
　　ム　　ロ　　ロ　　八　　べ１−１　　　、＞　　
　　　へ　　ｋ　　　）（　　　　、’）　　　ロ　　
ー−ｌ　　　べ　　ベト“ト、　　９！．　　　Ｃ−、
　　　　　　　ｘ　　　ｘｒ一実施例５ アセチル化吐効」 化合物Ｌ−６５４，０４０及びそのアセチル化誘導体（
アセチル−Ｌ　−６５４，０４０）について、種々の微
生物の増殖に対する阻止能を測定した。化合物Ｌ　−６
５４，０４０及びアセチル−し−６５４，ｏ４ｏは一２
０°Ｃで保存しである。テストは限定された寒天培地（
拮抗剤−フリー培地・ロッシュフオーミュラ）を用いた
寒天希釈法により行なう。Ｌ　−６５４，０４０を沸湯
水洛中で加熱しながら２．５６ｍ　ｇ　／　ｍ　、ｃ２
の濃度になる様に水に溶解する。アセチル−Ｌ　−１３
５４，０４０はメタノールに溶解し、水で希釈して３０
％メタノール中、２．５６ｍｇ／ｍ１２の濃度にする。

Ｌ　−６５４，０４０及びアセチル誘導体を水で２倍連
続希釈するにのアッセイのコントロール化合物として、
Ｄ−シクロセリンを水で溶解、希釈する。

融解寒天培地９に対して希釈抗生物質１を混合したもの
を各プレートに分注して、藁剤−寒天プレート・とじて
調製する。最終濃度３％メタノールを含むコントロール
プレートも同様に調製する。

寒天希釈法によるテスト用薬剤−寒天プレートに拮抗剤
フリーブロスで希釈したテスト菌を植菌する。最終植菌
数は約１０’ｃｆｕ／スポツトである。３５℃、２０時
間の培養後、そのプレートにおける増殖を調べる。閏の
増殖のない、あるいは５個前後のコロニーの分散が見ら
れる様な各化合物の最も低い濃度をもって最小阻止濃度
（ＭＩＣ）として記録する。

本化合物（Ｌ　−６５４，０４０、ロット６５４．０４
０−００１ＲＯＯＩ　）　、アセチル−Ｌ−６５４，０
４０（ロットＬ　−６５４，５０６−０１４３１及びＤ
−シクロセリンコントロールについての活性結果を第１
Ｉ表に示す。

５へ→ コ１−ロロロロロロロロロロ 、入口 、１ 一〇　　　　　　　　　　　　　・・癲−！・・ ＠心 ｒ＜）Σへ　心Ｈベキベ　％） ◇Ｒ国Ｑ　フＲコま八　箸石 Δト←０４Ｎ費Ｈ便　Ｘ憾 心ｒ′Ｘ！ロ全ト便　糎ｆ≦ ト、コ？−コ）へさ、→ ｊＥ　　、ｈｎｎｎ＋　、、Ｒ＞ ム　　　）Δ　、、８．ム　ＬＩ−１，ｄべ　へ−’−
Ｉｌｌ→７）口１ま ト　　　ベ　ベ　ヤ　ゝｒｒ　　訃　口　“ｂ　℃　や
結果より本化合物及びアセチル誘導体に対して感受性を
持つ株が２つ検出された。すなわち、スタフィロコッカ
スアウレウス２８６５とエシェリキアコリ３株の内の１
つ、膜透過性変異株である。アセチル誘導体はニス、ア
ルレウスに対して４倍高い活性を持ち、また変異株に対
しては同等の活性を示している。

実施例４で用いた寒天希釈法において、トリプシン処理
大豆寒天（ＢＢＬ）を拮抗剤フリー培地（ロツシュ）の
代わりに使用して、異なった微生物について更にアッセ
イを行なった。その結果を第１１１表に示した。

−１）−１＠　べ　’ｔ−’ｒ　　＼ 樵 、　　ゼロ 拐− ＋　　　　：圓に 二　　　　面ロ ー　　　　　　　　　　　　　・　− 山　　　　；凹）べ 実施例７ Ｌ　−６５４，０４０の生物−・活性 以下の点に関して、改良を加え、実施例４にける寒天希
釈法を更に他の異なった微生物にってアッセイした。

ｆａｌ拮抗剤フリー培地（ロツシュ）の代わりウィルキ
ンスーチャルグレン寒天を用いる。

（ｂ）植菌数／スポットについて約１０４だっのを約１
０’にする。

ｌｃ）培養時間を２４時間ではなく４８時間とる。

（ｄ＋培養を嫌気的条件下で行なう。

結果を第１Ｖ表に示す。

へ　＄− 菱　Ｉ″Ｆ＋３　１ｉ　　、Ｌ、　　コー　　１１１１
１１１　　　甲）　　へ　　“特　　ベ　　ム（Ｊ　　
　’４　　　Ｋ　　　’＜　　　’＜　　　頁　　゛く
　　°く　　１へ＋、　　゛り一」　　　ム　　ベＱ　
　　　　　　　　　　　　　、　　　　　　　　　　　
。

＜ｓ＋ｏ’ｔｓｏｚｌ　　　ｌ　　　ｌ　　　Ｉ　　　
ｌ　　　ｌ　　　ｌ　　　ｌ＼ｔ−ｌト°（へ　、Δ、
△、き、へ７人小、へ、へペ　廁 ＋：ｈ　　釦 鼾　巨 八　　。

七　ρ 、き　　、ハ　　〕　　　　　ベ　　ベ　　ベ　　１１
　１１　　区　　へ　　へ八　　口　　く　　→　　　
母デ　　−、　　マ　１ト　　１１．　　　　　　。　
　　　　　　　　　、　【　　ｍ　　　本１　１　〉、
へ　１１１１１１１１　　　１’ｓ＋、：’ｓ　　、Δ
　道　”：、　　’Ｊ　　シ　シ　シ　シ　口　′」　
シ　　シ　へ　”（−スＪ１１影− 感染に対する防御及び延命期間を、エリスロマイシン併
用で調べ、インビボでの効果を検討した。

パスツレラマルトサイグ（４６７８）あるいはボルデテ
ラブロンキセブチ力感染の雌のチャールズリバーＣＤＩ
マウスの腹腔にブロス培養希釈菌を接種した。エリスロ
マイシン及び／あるいはＬ　−６５４，ｆ１４０をＯ及
び６時間で腹腔内投与した。

両抗生物質はそれぞれに水に溶解して投与するが、Ｌ　
−６５４，０４０は事前に沸湯水浴中で、溶解させつる
為に加熱してお（必要がある。治療薬併用テストにおい
て、エリスロマイシン及びＬ−６５４，０４０をそれぞ
れ単独でタイトレージョンする。あるいはＬ　−６５４
，０４０の２つの固定レベルにおいてエリスロマイシン
をタイトレージョンする。

すべての抗生物質を２つの容量に分けて異なった腹部部
分に投与するものである。各エリスロマイシンタイトレ
ージョンは少なくとも４つの容量レベルで４倍の増強効
果がみられ、各レベルには５匹のマウスを用いた。

７日目にマウスを観察してクヌドセン、エル。

エフ（Ｋｎｕｄｓｅｎ、　Ｌ、　Ｆ、ｉ等ジェイ、アメ
ル、スタット、アソク（Ｊ、　Ａｍｅｒ、　５ｔａｔ、
　Ａｓ５ｏｃ）　、第４２巻、第２８２頁、（１９４７
）の方法により、５０％効果量あるいは５０％致死量を
計算した。

溶解度及び人手可能蛍などの制約によりテストに用いら
れるＬ　−６５４，０４０の最高レベルは腹腔内１６０
ｍｇ／ｋｇＸ２容量である。またこのレベルは先の実験
からも明らかな様に５非感染マウスにとってトレランス
になる量でもある。このレベルにおいて、ボルデテラあ
るいはパスツレラ感染後のマウスに延命効果が見られ、
パスツレラ感染動物においては、その延命効果が統計学
的に有意（０，０２５＜Ｐ＜０．０５）であるとされた
。

その他、パスツレラ感染の治療に際してエリスロマイシ
ンと併用したＬ　−６５４，０４０の実験は、その併用
治療藁が、エリスロマイシン単独よりも若干高い効果を
示すが互いに相互作用を及ぼしていると思われるレベル
のものではない。

腹腔内投与の結果より、Ｌ−６５４，０４０はバスツレ
ラマルトサイダあるいはボルデテラブロンキセブチ力に
対する防御は出来ないが、それら感染マウスの生存期間
を延ばす事は可能である。この延命効果は２通りのパス
ツレラテストに対して１つのレベルで、統計学的に有意
である。

上記記載の明細書は説明の為の実施例を含み本発明の原
理を示すものであるが、本明細書記載の方法、操作手順
には、常に改良、応用、変法、操作の省略、あるいは添
加的操作などが加えられ。

それらを含めたものが本発明の実施である事は理解され
ているところである。そして、それは以下の請求の範囲
の中に示しである。

【図面の簡単な説明】

第１図はＬ　−６５４，０４０の単離段階を示すもので
ある。 第１図 発酵ブロス 濾過 含有溶出液 １ｊｒ縮 ↓　　　　　　　　ローＢｕ０１１で抽出ｎ−ＢｕＯ，
ｌｌ抽出物 結晶 手続補正−書 平ｒ＆１年５月２２日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、以下の構造式 I なる化合物 ▲数式、化学式、表等があります▼ I あるいは、その製薬的許容塩、水化物、エステル、無水
   物、あるいはアミド。 ２、ストレプトベルチシリウムシンロエンゼ株ＭＡ６０
   １１の同化源として炭素、窒素及び無機塩類を含む液体
   栄養培地による好気性深部培養法及び当該化合物の回収
   より成る請求項１記載の化合物の調製方法。 ３、請求項１記載の化合物の抗菌性を示す有効量及び製
   薬的許容担体を含む抗菌性構成 物。 ４、ＡＴＣＣ寄託５３６９９の純培養。 ５、ＡＴＣＣ寄託５３６９９。 ６、請求項１記載の化合物を産生し、ＡＴＣＣ５３６９
   ９で表わされるストレプトベルチシリウムシンロエンザ
   ＭＡ６０１１株。