JPH02265479A - セルラーゼの製造法 - Google Patents
セルラーゼの製造法Info
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- JPH02265479A JPH02265479A JP63185260A JP18526088A JPH02265479A JP H02265479 A JPH02265479 A JP H02265479A JP 63185260 A JP63185260 A JP 63185260A JP 18526088 A JP18526088 A JP 18526088A JP H02265479 A JPH02265479 A JP H02265479A
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- ferm
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はセルラーゼの製造法に関し、更に詳しくは、バ
チルス属に属する中性および好アルカリ性生産菌を特定
条件下に培養し、その培地から中性セルラーゼ、アルカ
リセルラーゼあるいはアルカリ耐性セルラーゼを採取す
ることを特徴とするセルラーゼの製造法に関する。
チルス属に属する中性および好アルカリ性生産菌を特定
条件下に培養し、その培地から中性セルラーゼ、アルカ
リセルラーゼあるいはアルカリ耐性セルラーゼを採取す
ることを特徴とするセルラーゼの製造法に関する。
従来、セルラーゼはセルロースをグルコース。
又ハ七ロビオース、或いはセロオリゴ糖まで分解する酵
素反応を触媒する複雑な酵素群として理解されており、
その作用機構にエリ、Ｃ７酵１ｃｘ酵素とβ−グルコ／
ダーゼ、或いはエキソ−β−グルカナーゼ、エンド−β
−グルカナーゼ、セロビアーゼなどの名称で呼ばれる酵
素を含有すると言われる。過去数十年のセルラーゼの研
究は専らバイオマス資源の有効利用を図るという観点か
ら。
素反応を触媒する複雑な酵素群として理解されており、
その作用機構にエリ、Ｃ７酵１ｃｘ酵素とβ−グルコ／
ダーゼ、或いはエキソ−β−グルカナーゼ、エンド−β
−グルカナーゼ、セロビアーゼなどの名称で呼ばれる酵
素を含有すると言われる。過去数十年のセルラーゼの研
究は専らバイオマス資源の有効利用を図るという観点か
ら。
例えばトリコデルマ属、アスペルギルス属、アクレモニ
ウム属、７ミコーラ属等のカビ類にその供給源を求めら
れて！！九。
ウム属、７ミコーラ属等のカビ類にその供給源を求めら
れて！！九。
これらのカビが生産するセルラーゼは、その大部分が中
性乃至酸性ｐＨにおいて最適且つ安定な酵素活性を有す
る。所謂中性若しくは酸性セルラーゼである。
性乃至酸性ｐＨにおいて最適且つ安定な酵素活性を有す
る。所謂中性若しくは酸性セルラーゼである。
一方、細菌に由来するセルラーゼも、その大部分は中性
若しくは酸性セルラーゼであり、このアルカリセルラー
ゼの生産例としては、僅かに、好アルカリ性バチルスに
属する細菌を培養して培地よりセルラーゼＡを生産する
方法（特公昭５０〜２８５１５号公報）、セルロモナス
に属する細菌を培養してアルカリセルラーゼ３０１−Ａ
ｆｔ生産する方法（特開昭５８−２２４６８６号公報）
、好アルカリ性バチルス４１１３９株を培養してカルボ
キシメチルセルラーゼを生産する方法（Ｆｕｋｕｍｏｒ
ｉ Ｆ、。
若しくは酸性セルラーゼであり、このアルカリセルラー
ゼの生産例としては、僅かに、好アルカリ性バチルスに
属する細菌を培養して培地よりセルラーゼＡを生産する
方法（特公昭５０〜２８５１５号公報）、セルロモナス
に属する細菌を培養してアルカリセルラーゼ３０１−Ａ
ｆｔ生産する方法（特開昭５８−２２４６８６号公報）
、好アルカリ性バチルス４１１３９株を培養してカルボ
キシメチルセルラーゼを生産する方法（Ｆｕｋｕｍｏｒ
ｉ Ｆ、。
Ｋｕｄｏ Ｔ、ａｎｄ Ｈｏｒｉｋｏｓｈｉ Ｋ、、
Ｊ、Ｇｅｎ、 Ｍｌｃｒｏｂｉｏｌ、。
Ｊ、Ｇｅｎ、 Ｍｌｃｒｏｂｉｏｌ、。
１３１．３３３９．（１９８５））及びストレットマイ
セス属の一５ｔ−用いてアルカリセルラーゼを生産する
方法（’ｌ”ｉ−開時６１−１９４８３号公報）等が知
られているに過ぎない。しかしながら、これらの細菌に
於いてはその生産性が乏しく、工業的生産にかなう発酵
技術は未だ皆無でるる。ところが、ごく最近になって好
アルカリ性細菌の一種でろるバチルス・エスピー（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、 ） ＫＳＭ−６３５（ＦＥＢＭ
Ｐ−８８７２） が衣料用洗浄剤組成物として適
したアルカリセルラーゼＫを著量に生産することが見出
され１％許出願された（％願昭６１−２５７７７６号）
。
セス属の一５ｔ−用いてアルカリセルラーゼを生産する
方法（’ｌ”ｉ−開時６１−１９４８３号公報）等が知
られているに過ぎない。しかしながら、これらの細菌に
於いてはその生産性が乏しく、工業的生産にかなう発酵
技術は未だ皆無でるる。ところが、ごく最近になって好
アルカリ性細菌の一種でろるバチルス・エスピー（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｓｐ、 ） ＫＳＭ−６３５（ＦＥＢＭ
Ｐ−８８７２） が衣料用洗浄剤組成物として適
したアルカリセルラーゼＫを著量に生産することが見出
され１％許出願された（％願昭６１−２５７７７６号）
。
しかしながら、工業的スケールでセルラーゼ生産菌を培
養し、セルラーゼを高生産性にて生産した例はなく、高
生産性の培養法の技術の開発が急がれている。
養し、セルラーゼを高生産性にて生産した例はなく、高
生産性の培養法の技術の開発が急がれている。
本発明者らは工業的に有利にセルラーゼを製造すべく鋭
意研究をおこなつ友結果、培地中忙鉄含有物質を含有せ
しめることにＪ：リセルラーゼの生産性が著しく向上す
ることを見い出し９本発明を完成し友。
意研究をおこなつ友結果、培地中忙鉄含有物質を含有せ
しめることにＪ：リセルラーゼの生産性が著しく向上す
ることを見い出し９本発明を完成し友。
すなわち１本発明は、セルラーゼ生産菌を鉄含有物質を
含む培地中で培養することを特徴とするセルラーゼの製
造法を提供するものでるる。
含む培地中で培養することを特徴とするセルラーゼの製
造法を提供するものでるる。
本発明方法において用いる。培地中に加えられる鉄含有
物質としては、鉄粉、Ｆｅｄ、Ｆ’ｅＳＯ，。
物質としては、鉄粉、Ｆｅｄ、Ｆ’ｅＳＯ，。
ＦｅＣ／、 、 Ｆｅ（ＯＨ）ｙ 、 Ｆｅ５（ＰＯ＜
）２などの２価鉄化合物： Ｆｅｚｅｓ 、 Ｆｅｚ
（Ｓｏｎ ）ａ 、 ＦｅＣ１５、Ｆｅ （ＯＨ）ｓ
。
）２などの２価鉄化合物： Ｆｅｚｅｓ 、 Ｆｅｚ
（Ｓｏｎ ）ａ 、 ＦｅＣ１５、Ｆｅ （ＯＨ）ｓ
。
Ｆ ｅ Ｐ Ｏｓ 、 Ｆ ｅＮＨＬ （８０４’）２
などの３価鉄化合物；スレオニン鉄；ヘモグロビン、ミ
オグロビン、チトクローム類、カタラーゼ等の鉄含有た
んばく質などが挙げられる。これら鉄含有物質は、培地
中にＦｅとして０．１ ｐｐｍ以上、好１しくはｌｐｐ
ｍ〜１０００ ｐｐｍ配合でれる。
などの３価鉄化合物；スレオニン鉄；ヘモグロビン、ミ
オグロビン、チトクローム類、カタラーゼ等の鉄含有た
んばく質などが挙げられる。これら鉄含有物質は、培地
中にＦｅとして０．１ ｐｐｍ以上、好１しくはｌｐｐ
ｍ〜１０００ ｐｐｍ配合でれる。
を几１本発明方法において用いられるセルラーゼ生産菌
は、セルラーゼを産生ずるものであれば何れでも良いが
、バチルス属に属するセルラーゼ生産菌が好ましく、そ
の例としては、バチルス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｐ、 ） ＫＳＭ−６３５（ＦＥＲＭＰ−８８７２
）、同ＫＳＭ−６３５ｎ（ＦＥＲＭ Ｐ−９０８３）、
同ＫＳＭ−６３５ｖ（ＦＥＲＭ Ｐ−９０８４）。
は、セルラーゼを産生ずるものであれば何れでも良いが
、バチルス属に属するセルラーゼ生産菌が好ましく、そ
の例としては、バチルス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｐ、 ） ＫＳＭ−６３５（ＦＥＲＭＰ−８８７２
）、同ＫＳＭ−６３５ｎ（ＦＥＲＭ Ｐ−９０８３）、
同ＫＳＭ−６３５ｖ（ＦＥＲＭ Ｐ−９０８４）。
同ＫＳＭ−６３５ｒ （ＦＥＲＭ Ｐ−９０８５） 、
同ＫＳＭ−６３５ｎｖ（ＦＥＲＭ Ｐ−９０８６）、同
ＫＳＭ−４２５（ＦＥＲＭ Ｐ−９００７） 、同ＫＳ
Ｍ−５３４（ＦＥＲＭＰ−’ＪＯＩＯ）、同ＫＳＭ−５
２１（Ｆ’ＥＲＭ Ｐ−９００９）。
同ＫＳＭ−６３５ｎｖ（ＦＥＲＭ Ｐ−９０８６）、同
ＫＳＭ−４２５（ＦＥＲＭ Ｐ−９００７） 、同ＫＳ
Ｍ−５３４（ＦＥＲＭＰ−’ＪＯＩＯ）、同ＫＳＭ−５
２１（Ｆ’ＥＲＭ Ｐ−９００９）。
同ＫＳＭ−５８０（ＦＥＢＭ Ｐ−９０１３）、同Ｉ（
ＳＭ−３４４（ＦＥＢＭ Ｐ−９００８）、同ＫＳＭ−
５３９（ＦＥＲＭ Ｐ−９０１１）、同ＫＳＭ−５７７
（ＦＥＲＭ Ｐ−９０１２）、同ＫＳＭ−５２２（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−９３７０）。
ＳＭ−３４４（ＦＥＢＭ Ｐ−９００８）、同ＫＳＭ−
５３９（ＦＥＲＭ Ｐ−９０１１）、同ＫＳＭ−５７７
（ＦＥＲＭ Ｐ−９０１２）、同ＫＳＭ−５２２（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−９３７０）。
同ＫＳＭ−５８８（ＦＥＲＭ Ｐ−９３７１）、同ＫＳ
Ｍ−５９７（ＦＥＢＭ Ｐ−９５７３） 等が挙げ
られる。
Ｍ−５９７（ＦＥＢＭ Ｐ−９５７３） 等が挙げ
られる。
このウチバチルス・エスピーＫＳＭ−６３５の菌学的性
状を例示すれば次の通りでるる。
状を例示すれば次の通りでるる。
菌学的性状：
＋１） ＩＩ微鏡的観察
菌の大きさは、 ０．５〜１．２ ／ｊｆｉＸ １．５
〜４．０μｍの桿菌で、菌体の一端に内生胞子（０，７
〜１．２μｍＸｌ、Ｑ 〜２．０／ｊｆｉ）’（ｚ形成
する。周鞭毛會有し運動性がらり、ダラム染色は陽性で
ある。
〜４．０μｍの桿菌で、菌体の一端に内生胞子（０，７
〜１．２μｍＸｌ、Ｑ 〜２．０／ｊｆｉ）’（ｚ形成
する。周鞭毛會有し運動性がらり、ダラム染色は陽性で
ある。
ｒ２１ 各種培地における生育状態
生育のｐＨ範囲は８〜ＩＬ＆Ｃｉり１通常、炭酸ソーダ
（Ｎａ１ＣＯｓ ） が０．５〜１．０％添加石れ友
培地で生育が最も良好でるる。以下に示した諸性質は、
全て１．０重量５のＮａ１ＣＯｓ存在下での菌学的性状
である。
（Ｎａ１ＣＯｓ ） が０．５〜１．０％添加石れ友
培地で生育が最も良好でるる。以下に示した諸性質は、
全て１．０重量５のＮａ１ＣＯｓ存在下での菌学的性状
である。
■ 肉汁寒天培地
集落の形状は円形１表面は偏平である。集落の色調は白
色乃至黄色の半透明であり、光沢がるる。
色乃至黄色の半透明であり、光沢がるる。
■ 肉汁液体培地
生育し、混濁する。培地のｐＨｔ−中性にすると生育し
ない。
ない。
７％食塩肉汁液体培地で生育し、混濁する。
肉汁ゼラチン穿刺培養
生育しない。
■ リドマスミルク培地
ミルクの凝固、ベグトン化は陰性、
（３） 生理学的性質
硝酸還元能は有するが、脱窒反応はしない。
ＭＲ反応は不明でるるがｖＰ反応は陽性。
インドールを生成しない。
硫化水素の生成は認められない。
澱粉の加水分解、資化性は＊い。
クエン酸を利用する。
硝酸、亜硝酸を資化する。塩化アンモニウムの利用性は
微弱であるが、リン酸アン七二ラムは利用する。
微弱であるが、リン酸アン七二ラムは利用する。
■ キングＢ培地で淡黄色を示すが螢光性はない０
■ ウレアーゼは陰性。
０ オキシダーゼは凝陽性。
■ カタラーゼは陽性
◎ 生育の範囲
生育の温度範囲は２０〜４５℃にろり、生育最適温度は
２９〜３７℃。生育ｐＨ範囲は８〜１１にあり、生育最
適ｐＨは９．５〜１０．２゜Ｏ酸素に対する態度は好気
的でるる。
２９〜３７℃。生育ｐＨ範囲は８〜１１にあり、生育最
適ｐＨは９．５〜１０．２゜Ｏ酸素に対する態度は好気
的でるる。
■ 糖の利用性
Ｄ−リボース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ
−４ルコース、Ｄ−マンノース。
−４ルコース、Ｄ−マンノース。
Ｄ−フラクトース、マルトース、シュークロース、トレ
ハＯ−ス、Ｄ−マンニットール、イノントール、グリセ
ａ−ルを資化する。Ｄ−ガラクトース、ラクトース、
Ｉ）−ソルビトール。スターチ、デキストリン、ラフイ
ーノースは利用できない。
ハＯ−ス、Ｄ−マンニットール、イノントール、グリセ
ａ−ルを資化する。Ｄ−ガラクトース、ラクトース、
Ｉ）−ソルビトール。スターチ、デキストリン、ラフイ
ーノースは利用できない。
■ カゼイン、ゼラチンの加水分解性は陰性。
０ ピオチン（又はデスチオビオチン）を生育に必要と
する。
する。
を几、バチルス・エスピーＫＳＭ−４′！５ のｐ′
１学的性状を例示すれば次の通りである。
１学的性状を例示すれば次の通りである。
菌学的性状：
（１）顕微鏡的観察
菌体の大きさは、０．４〜０．８μｍ Ｘ ｌ、 ５〜
４．０／Ｊｆｆｉの桿菌でめり、菌体の一端に楕円形の
内生胞子（０，８〜１．２ｐｍｘ１．２〜１．５μｍ）
を作る。周鞭毛を有し運動性がるる。ダラム染色は不定
。抗酸性はない。
４．０／Ｊｆｆｉの桿菌でめり、菌体の一端に楕円形の
内生胞子（０，８〜１．２ｐｍｘ１．２〜１．５μｍ）
を作る。周鞭毛を有し運動性がるる。ダラム染色は不定
。抗酸性はない。
（２）各種培地に於ける生育状態
■ 肉汁寒天平板培地
生育状態は弱い。集落の形状は円形でろジ。
表面は円滑１周縁も円滑でるる。又集落の色調は白色半
透明で光沢がある。
透明で光沢がある。
■ 肉汁寒天斜面培地
生育は弱く、その状態は拡布状で光沢が有り、白色半透
明である。
明である。
■ 肉汁液体培地
生育し、混濁する。
■ 肉汁ゼラチン穿刺培養
生育するが、その状態は弱く、ゼラチンの液化は認めら
れない。
れない。
■ リド１スミルク培地
ミルクの凝固、液化は認められない。父、ＩＪ ）マス
の変色も認めら礼なかつ九〇（３） 生理学的性質 ■ 硝酸塩の還元及び脱窒反応は共に、陰性。
の変色も認めら礼なかつ九〇（３） 生理学的性質 ■ 硝酸塩の還元及び脱窒反応は共に、陰性。
■ ５ｉ４Ｒテストは陰性、陽性、はっきりせず（ｐＨ
５，２）。
５，２）。
■ ｖｐテストは陰性（ｐＨ５，２）。
■ インドールの生成は陰性。
■ 硫化水素の生成は陰性。
■ 澱粉の加水分解は陽性。
■ クエン酸の利用はコーサ培地及びクリステンセン培
地で、ともに陰性。
地で、ともに陰性。
■ 無機窒素源の利用は硝酸塩、アンモニウム塩ともに
陰性。
陰性。
色素の生成は陰性。
ウレアーゼは陰性。
オキシダーゼは陽性。
カタラーゼは陽性。
生育の範囲
生育の温度範囲は１５〜３７℃、生育最適温度範囲￥ｉ
２５〜３０℃。
２５〜３０℃。
生育のｐＨ範囲はｐＩ（５〜１０．生育最適、Ｈ範囲は
ＰＨ６〜９でめった。
ＰＨ６〜９でめった。
■ 酸素に対する態度は通性嫌気性である。
０ ０−Ｆテスト
生育するが、好気嫌気共に生育悪し。
０ 糖の利用性（＋：二利する。−２利用しない）
ＩＬ−アラビノース ＋
２、 Ｄ−キシロース ＋
３、 Ｄ−グルコース ＋
４、 ０−マンノース ＋
５、 フラクトース ＋
６、 Ｄ−ガラクトース ＋
７、麦芽糖 （−
８゜ショ糖 十
９、乳糖 十
１０、トレハロース ＋
１１、 Ｄ−ソルビット ＋１２、Ｄ−マン
ニット 上 １３、イノジット − １４、グリセリン ± １５、デンプン ＋ ＯｖＰ培地に於けるｐｌ（ ｐＩｆ ５．２ ［相］ 食塩含有培地に於ける生育 ５％で生育せず。
ニット 上 １３、イノジット − １４、グリセリン ± １５、デンプン ＋ ＯｖＰ培地に於けるｐｌ（ ｐＩｆ ５．２ ［相］ 食塩含有培地に於ける生育 ５％で生育せず。
７％で生育せず。
１０％で生育せず。
＠ ｐＨ５，７に於ける生育
生育せず。
［相］ ゾハイドロキシアセトンの生成陰性、陽性は、
はっきりせず。
はっきりせず。
Ｏフェニルアラニンの脱アミノ化は陰性。
［相］ カゼインの分解は陰性。
［相］ チロシンの分解は陰性。
本発明方法において用いる培地には、前記した糖類のほ
か必要に応じて他の資化される適当な炭素源、窒素源又
は有機栄養源、無機塩等を添加することができる。
か必要に応じて他の資化される適当な炭素源、窒素源又
は有機栄養源、無機塩等を添加することができる。
炭素源の例としては、籾殼、麩、濾紙、−紋紙類、おが
屑、などの植物繊維質、廃糖蜜、（可溶性）デンゾン、
転化糖、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ’）、ア
ビセル、セルロース綿、キシラン、ペクチンに加え、資
化し得る炭素源、例えば、リボース、アラビノース、キ
シａ−ス、グルコース、マンノース、フラクトース、ガ
ラクトース、麦芽糖、シヨ糖、乳糖、トレハロース、マ
ンニット、イノ／ノド、グリセリンや資化し得る有機酸
１例えば、リンゴ酸、酢酸、クエン酸などが挙げられる
。ま九、窒素源るるいは有機栄養源としては、例えば硝
酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム等の硝
酸塩類；各種由来の酵母エキス、各種動物組織のエキス
、各種植物組織のエキス、動物性又は植物性蛋白及びそ
のペプトンが挙げられる。無機塩としては、例えば炭酸
ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルンウム、炭酸水素
ナトリウム、炭酸水素カリウム等の炭酸塩；す／酸ナト
リウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリ
ウム、リン酸カリウム、ｔｏリン酸カリウム、ピロリン
酸ナトリウム、トリ？リリン酸ナトリウム、ヘキサメタ
リン酸ナトリウム等等のリン酸塩、塩化ナトリウム、塩
化カリウム塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグ
ネシウム等の無機塩が使用できる。さらに重金属塩類が
使用されるが天然培地を含む培地では必ずしも添加を必
要としない。
屑、などの植物繊維質、廃糖蜜、（可溶性）デンゾン、
転化糖、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ’）、ア
ビセル、セルロース綿、キシラン、ペクチンに加え、資
化し得る炭素源、例えば、リボース、アラビノース、キ
シａ−ス、グルコース、マンノース、フラクトース、ガ
ラクトース、麦芽糖、シヨ糖、乳糖、トレハロース、マ
ンニット、イノ／ノド、グリセリンや資化し得る有機酸
１例えば、リンゴ酸、酢酸、クエン酸などが挙げられる
。ま九、窒素源るるいは有機栄養源としては、例えば硝
酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム等の硝
酸塩類；各種由来の酵母エキス、各種動物組織のエキス
、各種植物組織のエキス、動物性又は植物性蛋白及びそ
のペプトンが挙げられる。無機塩としては、例えば炭酸
ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルンウム、炭酸水素
ナトリウム、炭酸水素カリウム等の炭酸塩；す／酸ナト
リウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリ
ウム、リン酸カリウム、ｔｏリン酸カリウム、ピロリン
酸ナトリウム、トリ？リリン酸ナトリウム、ヘキサメタ
リン酸ナトリウム等等のリン酸塩、塩化ナトリウム、塩
化カリウム塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグ
ネシウム等の無機塩が使用できる。さらに重金属塩類が
使用されるが天然培地を含む培地では必ずしも添加を必
要としない。
また、上記以外の栄養源を必要とする変異株を用いる場
合には、その栄養要求を満たす物質を培地に添加する。
合には、その栄養要求を満たす物質を培地に添加する。
本発明方法による培養は、前記条件に工って通気攪拌す
る以外は常法に従って実施することができる。例えは培
地全加熱等にニジ殺菌した後、セルラーゼ生産菌を接種
し、１５〜５０℃で半日ないし７日間、好ましくは１〜
３日間培養することにより実施できる。なお、培地のｐ
Ｈは用いる微生物にエフ相違するが、５〜１２．５８度
に調整すると良い結果が得られる。また、水に難溶性の
炭素源を使用する場合は、各種界面活性剤１例えば？リ
オキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル。
る以外は常法に従って実施することができる。例えは培
地全加熱等にニジ殺菌した後、セルラーゼ生産菌を接種
し、１５〜５０℃で半日ないし７日間、好ましくは１〜
３日間培養することにより実施できる。なお、培地のｐ
Ｈは用いる微生物にエフ相違するが、５〜１２．５８度
に調整すると良い結果が得られる。また、水に難溶性の
炭素源を使用する場合は、各種界面活性剤１例えば？リ
オキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル。
ソルビタン脂肪酸エステル、？リオキシエチレンアルキ
ルエーテル等の界面活性剤を添加することも可能でるり
、その添加量は０．０１〜２％、好ましくは０．１〜１
％でろる。
ルエーテル等の界面活性剤を添加することも可能でるり
、その添加量は０．０１〜２％、好ましくは０．１〜１
％でろる。
本発明方法によれば、セルラーゼを工業的規模で生産す
ることができる。
ることができる。
次に実施例を挙げ１本発明を説明する。なお。
実施例中においてＣＭＣアーゼ活性は次の如くして測定
した。
した。
ＣＭＣアーゼ活性測定法：
１０ｘｇＣＭＣ（出湯国策）Ｑルゾ社’）、１００ｐ１
００ｐグリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ９，０）を含む
基質用液０．９１！Ｌｔに０．１ ｇＬｔの酵素溶液を
加え、３０℃、２０分反応した。反応後、３，５−ジニ
トロ−サリチル酸（３、５−ｄｉｎｔｔｒｏ −５ａｌ
ｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ（ＤＮＳ））法にて還元糖の定
量を行った。すなわち１反応液１．０１にＤＮＳ試薬１
． Ｏｄ金加え、５分間、１００℃で加熱発色させ、冷
却後、４．０ＩＩｌｊの脱イオン水を加えて希釈した。
００ｐグリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ９，０）を含む
基質用液０．９１！Ｌｔに０．１ ｇＬｔの酵素溶液を
加え、３０℃、２０分反応した。反応後、３，５−ジニ
トロ−サリチル酸（３、５−ｄｉｎｔｔｒｏ −５ａｌ
ｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ（ＤＮＳ））法にて還元糖の定
量を行った。すなわち１反応液１．０１にＤＮＳ試薬１
． Ｏｄ金加え、５分間、１００℃で加熱発色させ、冷
却後、４．０ＩＩｌｊの脱イオン水を加えて希釈した。
これ全波長５３５ ｎｍで比色定量し友。酵素力価は、
上記の条件下で１分間に１μｍ ０１のグルコースに相
当する還元糖全生成する酵素量を１単位とし友。
上記の条件下で１分間に１μｍ ０１のグルコースに相
当する還元糖全生成する酵素量を１単位とし友。
実施例１
（１）下に示す培地にバチルス・エスピーＫＳＭ−６３
５ｎｖ（ＦＥＢＭ Ｐ−９０８６）’に接種し。
５ｎｖ（ＦＥＢＭ Ｐ−９０８６）’に接種し。
３０℃で適当時間振盪（又は好気）培養して種培地を得
た。
た。
味 液 ８ ％
（味の素■製）
グルコース ０．５ ％（別滅菌）魚肉エキス
０．５ ％ 酵母エキス ０．０５％ 炭酸ナトリウム ０．５ ％（別滅菌）（１１）次い
で（１）で得九種培地金下に示す主培地に１％接種し、
２００１培養槽を用いて３０℃で２日間、通気培養した
。この培養にエフ、培ｍｌｌ当り５０，０００単位のア
ルカリセルラーゼを得友。
０．５ ％ 酵母エキス ０．０５％ 炭酸ナトリウム ０．５ ％（別滅菌）（１１）次い
で（１）で得九種培地金下に示す主培地に１％接種し、
２００１培養槽を用いて３０℃で２日間、通気培養した
。この培養にエフ、培ｍｌｌ当り５０，０００単位のア
ルカリセルラーゼを得友。
味 液 ８ ％
フラクトース ２．２％
グルコース ０．３％
Ｆ ｅ Ｓ ０４ ・７ Ｌ ０ ５ ｐｐｍ酵母エ
キス ０．１％ 炭酸ナトリウム ０．５％ 実施例２ （１）下に示す培地にノ；チルス・ニスｆ−ＫＳＭ−４
２５（ＦＥＲＭ Ｐ−９００７）を接種し、３０℃で適
当時間振とう（又は好気）培養して種培地を得た。
キス ０．１％ 炭酸ナトリウム ０．５％ 実施例２ （１）下に示す培地にノ；チルス・ニスｆ−ＫＳＭ−４
２５（ＦＥＲＭ Ｐ−９００７）を接種し、３０℃で適
当時間振とう（又は好気）培養して種培地を得た。
シュークロース １ ％
コーンステイーシリ ７ ％
カー
酵母エキス ０．５ ％
ＫＨ，ＰＯ，０，１％
Ｎａ！ＨＰＯ，・１２Ｈ１００，２５％ＭｇＳＯ４・７
Ｈ，００，０２％ ｐＨ６，８ （Ｉｌｌ 次いで（１）で得九種培地ヲ（１）と同じ
組成の主培地（対照）およびこの対照培地にＦ ｅ Ｓ
０４・７Ｈ２０を５ ｐｐｍ添加した主培地にそれぞ
れ１％接種し、２００１培養槽を用いて３０℃で２日間
１適気培養し友。この培養により、下記第１表に示した
セルラーゼ’を得ｆｃｒ。
Ｈ，００，０２％ ｐＨ６，８ （Ｉｌｌ 次いで（１）で得九種培地ヲ（１）と同じ
組成の主培地（対照）およびこの対照培地にＦ ｅ Ｓ
０４・７Ｈ２０を５ ｐｐｍ添加した主培地にそれぞ
れ１％接種し、２００１培養槽を用いて３０℃で２日間
１適気培養し友。この培養により、下記第１表に示した
セルラーゼ’を得ｆｃｒ。
第 １ 表
実施例３〜１１
主培地としてＦｅ５０． ＊ ７Ｈ１０５ｐｐｍのかわ
りに下表成分を用いた以外は実施例１と同様にして培養
をおこない、下記第２表に示したアルカリセルラーゼを
得友。
りに下表成分を用いた以外は実施例１と同様にして培養
をおこない、下記第２表に示したアルカリセルラーゼを
得友。
第 ２ 表
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、鉄含有物質を鉄として０．１ｐｐｍ以上含有する培
地を用い、セルラーゼ生産菌を培養することを特徴とす
るセルラーゼの製造法。 ２、セルラーゼ生産菌がバチルス属に属するものである
特許請求の範囲第１項記載のセルラーゼの製造法。 ３、鉄含有物質が鉄粉、鉄の２価イオン、鉄の３価イオ
ン、鉄含有たんぱく質及びスレオニン鉄から選ばれたも
のである特許請求の範囲第１項記載のセルラーゼの製造
法。 ４、ヘモグロビン、ミオグロビン、チトクローム類及び
カタラーゼ等の鉄含有たんぱく質から選ばれたものであ
る特許請求の範囲第３項記載のセルラーゼの製造法。 ５、培養を１５〜５０℃でおこなう特許請求の範囲第１
項記載のセルラーゼの製造法。 ６、培養を半日ないし７日間おこなう特許請求の範囲第
１項記載のセルラーゼの製造法。 ７、培地のｐＨが５〜１２．５である特許請求の範囲第
１項記載のセルラーゼの製造法。 ８、培地に０．０１〜２％の界面活性剤を添加する特許
請求の範囲第１項記載のセルラーゼの製造法。 ９、セルラーゼ生産菌がバチルス・エスピーＫＳＭ−６
３５（ＦＥＲＭ Ｐ−８８７２）、同ＫＳＭ−６３５ｎ
（ＦＥＲＭ Ｐ−９０８３）、同ＫＳＭ−６３５ｖ（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−９０８４）、同ＫＳＭ−６３５ｒ（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−９０８５）、同ＫＳＭ−６３５ｎｖ（ＦＥＲＭ
Ｐ−９０８６）、同ＫＳＭ−４２５（ＦＥＲＭ Ｐ−９
００７）、同ＫＳＭ−５３４（ＦＥＲＭ Ｐ−９０１０
）、同ＫＳＭ−５２１（ＦＥＲＭ Ｐ−９００９）、同
ＫＳＭ−５８０（ＦＥＲＭ Ｐ−９０１３）、同ＫＳＭ
−３４４（ＦＥＲＭ Ｐ−９００８）、同ＫＳＭ−５３
９（ＦＥＲＭＰ−９０１１）、同ＫＳＭ−５７７（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−９０１２）、同ＫＳＭ−５２２（ＦＥＲＭ
Ｐ−９３７０）、同ＫＳＭ−５８８（ＦＥＲＭ Ｐ−９
３７１）及び同ＫＳＭ−５９７（ＦＥＲＭ Ｐ−９５７
３）のいずれかである特許請求の範囲第１項記載のセル
ラーゼの製造法。 １０、セルラーゼ生産菌の培養において、炭素源として
籾殼、麩、濾紙、一般紙類、おが屑、廃糖蜜、（可溶性
）デンプン、転化糖、カルボキシメチルセルロース（Ｃ
ＭＣ）、アビセル、セルロース綿、キシラン、ペクチン
、リボース、アラビノース、キシロース、グルコース、
マンノース、フラクトース、ガラクトース、麦芽糖、シ
ヨ糖、乳糖、トレハロース、マンニット、イノシット、
グリセリン、リンゴ酸、酢酸及びクエン酸から選ばれた
化合物の一種又は二種以上を用いることを特徴とする特
許請求の範囲第１項記載のセルラーゼの製造法。 １１、セルラーゼ生産菌の培養において、窒素源あるい
は有機栄養源として硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝
酸アンモニウム、酵母エキス、動物組織のエキス、植物
組織のエキス、並びに動物性又は植物性蛋白及びそのペ
プトンから選ばれる化合物の一種又は二種以上を用いる
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載のセルラー
ゼの製造法。 １２、セルラーゼ生産菌の培養において、無機塩として
炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸
水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、リン酸ナトリウム
、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、
リン酸カリウム、ピロリン酸カリウム、ピロリン酸ナト
リウム、トリポリリン酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸
ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カル
シウム、硫酸ナトリウム及び硫酸マグネシウムから選ば
れる無機の塩類の一種又は二種以上を用いることを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載のセルラーゼの製造法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63185260A JPH02265479A (ja) | 1987-11-05 | 1988-07-25 | セルラーゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62-279813 | 1987-11-05 | ||
| JP27981387A JPH02435A (ja) | 1987-11-05 | 1987-11-05 | アルカリセルラーゼ製造法 |
| JP63185260A JPH02265479A (ja) | 1987-11-05 | 1988-07-25 | セルラーゼの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02265479A true JPH02265479A (ja) | 1990-10-30 |
Family
ID=17616277
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27981387A Pending JPH02435A (ja) | 1987-11-05 | 1987-11-05 | アルカリセルラーゼ製造法 |
| JP63185260A Pending JPH02265479A (ja) | 1987-11-05 | 1988-07-25 | セルラーゼの製造法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27981387A Pending JPH02435A (ja) | 1987-11-05 | 1987-11-05 | アルカリセルラーゼ製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JPH02435A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6409044B1 (en) | 2000-03-30 | 2002-06-25 | Playtex Products, Inc. | Dispensing orifice |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2859393B2 (ja) * | 1990-07-24 | 1999-02-17 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | セルラーゼ及びその製造法 |
| CN1326995C (zh) * | 2005-01-31 | 2007-07-18 | 湖南大学 | 一种利用生物表面活性剂提高绿色木霉纤维素酶活的方法 |
| CN100351145C (zh) * | 2005-03-08 | 2007-11-28 | 南京农业大学 | 超市生鲜肉高氧气调保鲜包装方法 |
-
1987
- 1987-11-05 JP JP27981387A patent/JPH02435A/ja active Pending
-
1988
- 1988-07-25 JP JP63185260A patent/JPH02265479A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6409044B1 (en) | 2000-03-30 | 2002-06-25 | Playtex Products, Inc. | Dispensing orifice |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02435A (ja) | 1990-01-05 |
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