JPH0242096A - フエノールインドー３’−アザフエニル−β−Ｄ−グルコシド誘導体、その製法及びβ−グルコシダーゼ活性測定用試薬への利用 - Google Patents
フエノールインドー３’−アザフエニル−β−Ｄ−グルコシド誘導体、その製法及びβ−グルコシダーゼ活性測定用試薬への利用Info
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- JPH0242096A JPH0242096A JP19069588A JP19069588A JPH0242096A JP H0242096 A JPH0242096 A JP H0242096A JP 19069588 A JP19069588 A JP 19069588A JP 19069588 A JP19069588 A JP 19069588A JP H0242096 A JPH0242096 A JP H0242096A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はフェノールインド−３１−アザフェニル−β−
Ｄ−グルコシド誘導体、その製法、β−グルコシダーゼ
活性の測定法及びβ−グルコシダーゼ活性の測定用試薬
に関する。
Ｄ−グルコシド誘導体、その製法、β−グルコシダーゼ
活性の測定法及びβ−グルコシダーゼ活性の測定用試薬
に関する。
β−グルコシダーゼは高等植物の葉、根、稲子、菌類、
細菌、動物の臓器等に広く存在し、特に哺乳類の肝、腎
、腸粘膜等のりソゾーム内に局在することが知られてい
る。本酵素の活性測定は食品分析、工業用試験、臨床面
で有用であり、特に臨床面の応用において、リソシーム
のβ−グルコシダーゼの先天性欠損に由来すると言われ
るゴーシュ病あるいは血清中のβ−グルコシダーゼ活性
が上昇すると言われている糖尿病等の診断において意義
が大きい。従来、β−グルコシダーゼ活性の測定用基質
としては、例えばｐ−二トロフェニル−β−〇−グルコ
シドが知られている（ Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 ８６
．３６１〜３３５ （１９６２）：］。
細菌、動物の臓器等に広く存在し、特に哺乳類の肝、腎
、腸粘膜等のりソゾーム内に局在することが知られてい
る。本酵素の活性測定は食品分析、工業用試験、臨床面
で有用であり、特に臨床面の応用において、リソシーム
のβ−グルコシダーゼの先天性欠損に由来すると言われ
るゴーシュ病あるいは血清中のβ−グルコシダーゼ活性
が上昇すると言われている糖尿病等の診断において意義
が大きい。従来、β−グルコシダーゼ活性の測定用基質
としては、例えばｐ−二トロフェニル−β−〇−グルコ
シドが知られている（ Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 ８６
．３６１〜３３５ （１９６２）：］。
しかし、前記のｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコシ
ドをβ−グルコシダーゼ活性測定用基質として用いる場
合は、生成するｐ−二）。
ドをβ−グルコシダーゼ活性測定用基質として用いる場
合は、生成するｐ−二）。
フェノール（着色物質）を測定する際の波長が約４００
ｎｍ付近であるため、試料自体の黄色物質による阻害
を受け、したがって測定精度が著しく低下することのほ
か、前記基質より酵素作用によって生成したｐ−ニトロ
フェノールを充分解離させる際、反応液のｐＨを１０〜
１１程度と言う高アルカリ性とするため、酵素反応を停
止させねばならないので、酵素活性の測定を連続的に行
うことが著しく困難となる等の欠点がある。
ｎｍ付近であるため、試料自体の黄色物質による阻害
を受け、したがって測定精度が著しく低下することのほ
か、前記基質より酵素作用によって生成したｐ−ニトロ
フェノールを充分解離させる際、反応液のｐＨを１０〜
１１程度と言う高アルカリ性とするため、酵素反応を停
止させねばならないので、酵素活性の測定を連続的に行
うことが著しく困難となる等の欠点がある。
本発明者／は、従来技術の欠点を改善するため研究を進
めた結果、新規なフエノールインド−３フーアザフエニ
ルーβ−Ｄ−グルコシド誘導体を創製し、この化合物が
β−グルコシダーゼ活性の測定用試薬としてきわめて有
用であることを見出した。
めた結果、新規なフエノールインド−３フーアザフエニ
ルーβ−Ｄ−グルコシド誘導体を創製し、この化合物が
β−グルコシダーゼ活性の測定用試薬としてきわめて有
用であることを見出した。
本発明は、次式
（式中Ｒは水素原子又はアシル基、ＸｌないしＸ。
は水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アジ
ド基、アシル基、スルホン酸基、ニトロソ基、スルホニ
ル基、スルホキシル基、チオシアノ基、インチオシアノ
基、イソニトリル基、イミノ基、アゾ基、ジアゾ基、ア
ルキル基、アリル基又はアリール基を意味し、ｘ４とＸ
、及び／又はｘ６とＸ、は連結して縮合芳香環を形成し
てもよく、またｘ２又はＸ、はそれぞれｘ４又はｘ６と
エーテル結合を形成してもよい）で表わされるフェノー
ルイン）”−３’−７ザフエニルーβ−Ｄ−グルコシド
誘導体である。
ド基、アシル基、スルホン酸基、ニトロソ基、スルホニ
ル基、スルホキシル基、チオシアノ基、インチオシアノ
基、イソニトリル基、イミノ基、アゾ基、ジアゾ基、ア
ルキル基、アリル基又はアリール基を意味し、ｘ４とＸ
、及び／又はｘ６とＸ、は連結して縮合芳香環を形成し
てもよく、またｘ２又はＸ、はそれぞれｘ４又はｘ６と
エーテル結合を形成してもよい）で表わされるフェノー
ルイン）”−３’−７ザフエニルーβ−Ｄ−グルコシド
誘導体である。
式■のフェノールインド−３′−アザフェニル−β−Ｄ
−グルコシド誘導体としては、例えば下記の化合物が挙
げられる。フェノール／インｔドー５７−クロロ−６′
−アザフェニル−β−り一グルコシト、フェノールイン
ド−２’、５’−シクロｏ ’ ３／−アザフェニル
−β−Ｄ−ｆルコシト、フエノールインド−３′−アザ
フェニル−β−り一りルコシド、テトラアセチル−（フ
ェノールインド−５′−クロロ−６′−アザフェニル）
−β−Ｄ−グルコシド、テトラアセチル−（フェノール
インド−２’ｓ ５’ −シクロロー３′−アザフェニ
ル）−β−Ｄ−グルコシド、テトラアセチル−（フェノ
ールインド−ｓ／−アザフェニル）−β−Ｄ−グルコシ
ド、テトラアセチル−（２，５−ジメチル−フェノール
インド−３′−アザフェニル）−β−Ｄ−クルコシド、
テトラアセチル−（１−ｆフトールイン）’−３’−ア
ザフェニル）−β−Ｄ−グルコシドなど。
−グルコシド誘導体としては、例えば下記の化合物が挙
げられる。フェノール／インｔドー５７−クロロ−６′
−アザフェニル−β−り一グルコシト、フェノールイン
ド−２’、５’−シクロｏ ’ ３／−アザフェニル
−β−Ｄ−ｆルコシト、フエノールインド−３′−アザ
フェニル−β−り一りルコシド、テトラアセチル−（フ
ェノールインド−５′−クロロ−６′−アザフェニル）
−β−Ｄ−グルコシド、テトラアセチル−（フェノール
インド−２’ｓ ５’ −シクロロー３′−アザフェニ
ル）−β−Ｄ−グルコシド、テトラアセチル−（フェノ
ールインド−ｓ／−アザフェニル）−β−Ｄ−グルコシ
ド、テトラアセチル−（２，５−ジメチル−フェノール
インド−３′−アザフェニル）−β−Ｄ−クルコシド、
テトラアセチル−（１−ｆフトールイン）’−３’−ア
ザフェニル）−β−Ｄ−グルコシドなど。
式Ｉのフエノールインド−３′−アザフェニル−β−Ｄ
−グルコシド誘導体は、次式 り製造することができる。
−グルコシド誘導体は、次式 り製造することができる。
化合物■は、どのような方法で合成してもよ〜・が、例
えば公知化合物であるテトラアセチル−α−Ｄ−ｆルコ
シルプロマイトニ、次式（式中Ｒ、Ｘ＋ 、Ｘｌ及びＸ
、は前記の意味を有する）で表わされる５−アミノ−２
−ピリジニルオキシ−β−Ｄ−グルコシド誘導体に、次
式（’ｘ＋ないしＸ、は前記の意味を有する）で表わさ
れる２−ハイドロキシ−５−二トロビリジン誘導体を酸
化銀等の触媒の存在下に作用させ（Ｋｏｅｎｉｇｓ −
Ｋｎｏｒｒ法）、次式（式中Ｘ、ないしｘ７は前記の意
味を有する）で表わされるキノン誘導体を作用させるこ
とによＲ （式中Ｒ，Ｘ、ないしＸ、は前記の意味を有する）で表
わされる５−ニトロ−２−ピリジニルオキシーβ−Ｄ−
グルコシド誘導体に得たのち、これを原料として、常法
に従って例えばラネーニッケルを触媒に用い接触還元に
よってニトロ基なアミン基に変換させることにより化合
物■を合成することができる（ Ｃａｎ、 Ｊ、 Ｃｈ
ｅｍ、 ３８巻３６３頁１９６０年）。
えば公知化合物であるテトラアセチル−α−Ｄ−ｆルコ
シルプロマイトニ、次式（式中Ｒ、Ｘ＋ 、Ｘｌ及びＸ
、は前記の意味を有する）で表わされる５−アミノ−２
−ピリジニルオキシ−β−Ｄ−グルコシド誘導体に、次
式（’ｘ＋ないしＸ、は前記の意味を有する）で表わさ
れる２−ハイドロキシ−５−二トロビリジン誘導体を酸
化銀等の触媒の存在下に作用させ（Ｋｏｅｎｉｇｓ −
Ｋｎｏｒｒ法）、次式（式中Ｘ、ないしｘ７は前記の意
味を有する）で表わされるキノン誘導体を作用させるこ
とによＲ （式中Ｒ，Ｘ、ないしＸ、は前記の意味を有する）で表
わされる５−ニトロ−２−ピリジニルオキシーβ−Ｄ−
グルコシド誘導体に得たのち、これを原料として、常法
に従って例えばラネーニッケルを触媒に用い接触還元に
よってニトロ基なアミン基に変換させることにより化合
物■を合成することができる（ Ｃａｎ、 Ｊ、 Ｃｈ
ｅｍ、 ３８巻３６３頁１９６０年）。
化合物■としては例えば５−アミノ−２−ピリジニルオ
キシ−β−Ｄ−グルコシド、テトラアセチル−（５−ア
ミノ−６−クロロ−２−ピリジニルオキシ）−β−Ｄ−
グルコシド、５−アミノ−３，４−ジクロロ−２−ピリ
ジニルオキシ−β−Ｄ−グルコシド、５−アミノ−６−
ブロモ−２−ピリジニルオキシ−β−Ｄ −’ｆルコシ
ド、５−アミノ−３，６−ジフルオロ−２−ピリジニル
オキシ−β−Ｄ−グルコシド、テトラクロロアセチル−
（５−アミノ−６−ヨード−２−ピリジニルオキシ）−
β−Ｄ−グルコシド等が挙げられる。
キシ−β−Ｄ−グルコシド、テトラアセチル−（５−ア
ミノ−６−クロロ−２−ピリジニルオキシ）−β−Ｄ−
グルコシド、５−アミノ−３，４−ジクロロ−２−ピリ
ジニルオキシ−β−Ｄ−グルコシド、５−アミノ−６−
ブロモ−２−ピリジニルオキシ−β−Ｄ −’ｆルコシ
ド、５−アミノ−３，６−ジフルオロ−２−ピリジニル
オキシ−β−Ｄ−グルコシド、テトラクロロアセチル−
（５−アミノ−６−ヨード−２−ピリジニルオキシ）−
β−Ｄ−グルコシド等が挙げられる。
化合物■としては例えばｐ−キノン、２−クロロ−ｐ−
キノン、２，６−ジクロロ−ｐ−キノン、２，５−ジメ
チル−ｐ−キノン、２．５，５，６−テトラクロロ−ｐ
−キノン（クロラニル）、１．４−ナフトキノン、アン
スラキノン等が挙げられる。
キノン、２，６−ジクロロ−ｐ−キノン、２，５−ジメ
チル−ｐ−キノン、２．５，５，６−テトラクロロ−ｐ
−キノン（クロラニル）、１．４−ナフトキノン、アン
スラキノン等が挙げられる。
目的物質である化合物Ｉを製造するに際しては、化合物
■を無水条件下で、中性有機溶媒に溶解し、中性脱水剤
を共存させ、触媒量の強酸を加えたのち、化合物■を作
用させることが好ましい。
■を無水条件下で、中性有機溶媒に溶解し、中性脱水剤
を共存させ、触媒量の強酸を加えたのち、化合物■を作
用させることが好ましい。
化合物■の使用量は、化合物Ｈの１０〜５０倍モル当量
好ましくは１５〜２５倍モル当量である。
好ましくは１５〜２５倍モル当量である。
中性有機溶媒としては、エーテル類例えばジエチルエー
テル、ＴＨＦ 、ジオキサン等、炭化水素類例エバノル
マルヘキサン、ベンゼン、トルエン等、ハロゲン化炭化
水素類例えばジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロ
エタン、四塩化炭素等、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）、ジメチルアセトアミド（’ＤＭＡ ） 、ヘキサ
ホスホラミド（ＨＭＰＡ ）、ジメチルスルホキー／ド
（ＤＭＳＯ）などが挙げられ、これらを組み合わせて用
いてもよい。Ｒが水素原子である化合物■の場合は、溶
媒としてはジオキサン、ＤＭＦなどが好ましく、Ｒがア
シル基である化合物Ｈの場合は、ジクロロメタン、トル
エンなどが好ましい。溶媒の量は、化合物■の重量の１
０〜１００倍程度好ましくは４０〜６０倍である。
テル、ＴＨＦ 、ジオキサン等、炭化水素類例エバノル
マルヘキサン、ベンゼン、トルエン等、ハロゲン化炭化
水素類例えばジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロ
エタン、四塩化炭素等、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）、ジメチルアセトアミド（’ＤＭＡ ） 、ヘキサ
ホスホラミド（ＨＭＰＡ ）、ジメチルスルホキー／ド
（ＤＭＳＯ）などが挙げられ、これらを組み合わせて用
いてもよい。Ｒが水素原子である化合物■の場合は、溶
媒としてはジオキサン、ＤＭＦなどが好ましく、Ｒがア
シル基である化合物Ｈの場合は、ジクロロメタン、トル
エンなどが好ましい。溶媒の量は、化合物■の重量の１
０〜１００倍程度好ましくは４０〜６０倍である。
中性脱水剤としてはモレキュラシープ、Ａ１□０１．５
１０２、無水Ｎａ２ＳＯ４ｓ無水ＭｇＳＯ４等が挙げら
れ、これらを組み合わせて用いてもよい。その量は、化
合物■の重量の０．５〜５倍好ましくは０．８〜１．５
倍である。強酸としてはトリフルオロ酢酸、トリクロロ
酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、発
煙硫酸、ＡＩ Ｃ１３、ＢＦ、／Ｅｔ２ｏ。
１０２、無水Ｎａ２ＳＯ４ｓ無水ＭｇＳＯ４等が挙げら
れ、これらを組み合わせて用いてもよい。その量は、化
合物■の重量の０．５〜５倍好ましくは０．８〜１．５
倍である。強酸としてはトリフルオロ酢酸、トリクロロ
酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、発
煙硫酸、ＡＩ Ｃ１３、ＢＦ、／Ｅｔ２ｏ。
ＴｉＣｌ４、ＦｅＣｌ３等が挙げられ、これらを組み合
わせて用いてもよい。その量は化合物■の０．０１〜０
．１倍モル当量好ましくは０．０２〜０．０４倍モル当
量である。
わせて用いてもよい。その量は化合物■の０．０１〜０
．１倍モル当量好ましくは０．０２〜０．０４倍モル当
量である。
反応温度及び反応時間は、化合物■、化合物■、溶媒及
び強酸の種類によって異なるが、通常反応温度は１５〜
２５℃であり、０．５〜４時間反応を継続して行うこと
により反応は終了する。
び強酸の種類によって異なるが、通常反応温度は１５〜
２５℃であり、０．５〜４時間反応を継続して行うこと
により反応は終了する。
Ｒが水素原子である化合物Ｉは、β−グルコシダーゼ活
性の測定に用いることができる。
性の測定に用いることができる。
したがって本発明は、次式
（式中Ｘ１ないしｘ７は前記の意味を有する）で表わさ
れるフェノールインド−３′−アザフェニル−β−〇−
グルコシド誘導体及び緩衝剤を含有するβ−グルコシダ
ーゼ活性の測定用試薬である。
れるフェノールインド−３′−アザフェニル−β−〇−
グルコシド誘導体及び緩衝剤を含有するβ−グルコシダ
ーゼ活性の測定用試薬である。
定量のための有利な系は１〜２０ ｍＭのフェノールイ
ン）”−３’−アザフェニル−β−Ｄ−グルコシド誘導
体及び２〜１００ ｍＭの緩衝剤を含有する系である（
ｐＨ４〜１０）。緩衝剤としては、リン酸塩、酢酸塩、
炭酸塩、トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン
、ホウ酸塩、クエン酸塩、ジメチルグルタル酸塩等が用
いられる。また必要に応じて溶解補助剤、安定化剤とし
てグリセリン、牛血清アルブミン、トリトンＸ１００等
を加えてもよい。
ン）”−３’−アザフェニル−β−Ｄ−グルコシド誘導
体及び２〜１００ ｍＭの緩衝剤を含有する系である（
ｐＨ４〜１０）。緩衝剤としては、リン酸塩、酢酸塩、
炭酸塩、トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン
、ホウ酸塩、クエン酸塩、ジメチルグルタル酸塩等が用
いられる。また必要に応じて溶解補助剤、安定化剤とし
てグリセリン、牛血清アルブミン、トリトンＸ１００等
を加えてもよい。
本発明の試薬は、乾燥物あるいは溶解した形で存在して
よく、薄膜状の担体、例えばシート、含浸性の紙等に含
浸されていてもよい。本試薬を用いることにより、各種
の試料に含有されるβ−グルコシダーゼの活性を、簡単
な操作で正確に、しかも高感度で測定することができる
。
よく、薄膜状の担体、例えばシート、含浸性の紙等に含
浸されていてもよい。本試薬を用いることにより、各種
の試料に含有されるβ−グルコシダーゼの活性を、簡単
な操作で正確に、しかも高感度で測定することができる
。
次ニ、本発明のβ−グルコシダーゼ活性の測定法につい
て説明する。
て説明する。
まずβ−グルコシダーゼを含む試料に、フェノールイン
）”−３’−アザフェニル−β−Ｄ −４”ルコシド誘
導体（■′）を１〜２０ ｍＭ、好ましくは２〜６ ｍ
Ｍ程度加え、更に緩衝剤を加え、３０〜６０℃、ｐＨ４
〜１０好ましくはｐＥ（６〜８で６分間以上、好ましく
は５〜１２０分間酵素反応させ、生成する青色色素（フ
ェノールインド−３′−アザフェノール誘導体）を５８
５〜６．５０ｎｍ１好ましくは６００〜６２０ ｔａｎ
の吸収波長で、連続的もしくは断続的に吸光度値を測定
し、あらかじめ測定したβ−グルコシダーゼ標品の吸光
度値と対比させて試料中のβ−グルコシダーゼ活性を算
出する。
）”−３’−アザフェニル−β−Ｄ −４”ルコシド誘
導体（■′）を１〜２０ ｍＭ、好ましくは２〜６ ｍ
Ｍ程度加え、更に緩衝剤を加え、３０〜６０℃、ｐＨ４
〜１０好ましくはｐＥ（６〜８で６分間以上、好ましく
は５〜１２０分間酵素反応させ、生成する青色色素（フ
ェノールインド−３′−アザフェノール誘導体）を５８
５〜６．５０ｎｍ１好ましくは６００〜６２０ ｔａｎ
の吸収波長で、連続的もしくは断続的に吸光度値を測定
し、あらかじめ測定したβ−グルコシダーゼ標品の吸光
度値と対比させて試料中のβ−グルコシダーゼ活性を算
出する。
本発明に用いられるβ−グルコシダーゼ含有試料として
は、β−グルコシダーゼを含有するものであれば何れを
用いてもよく、具体的には微生物の培養液、植物の抽出
液、動物の体液、組織及びそれらの抽出液等が挙げられ
る。
は、β−グルコシダーゼを含有するものであれば何れを
用いてもよく、具体的には微生物の培養液、植物の抽出
液、動物の体液、組織及びそれらの抽出液等が挙げられ
る。
また緩衝剤としては、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩
、トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ホウ
酸塩、クエン酸塩、ジメチルグルタル酸塩等が挙げられ
る。
、トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ホウ
酸塩、クエン酸塩、ジメチルグルタル酸塩等が挙げられ
る。
本発明の測定法によれば、試料に含まれる例エバグルコ
ース、ビリルビン、ヘモグロビン等の影響を受けること
なく、簡易に、β−グルコシダーゼ活性を自動分析法、
用手法゛等により精度良く測定することができる。
ース、ビリルビン、ヘモグロビン等の影響を受けること
なく、簡易に、β−グルコシダーゼ活性を自動分析法、
用手法゛等により精度良く測定することができる。
実施例１
テトラアセチル（フエノールインド−３′−アザフェニ
ル）−β−Ｄ−グルコシドの製造＋１） テトラアセ
チル−α−Ｄ−グルコシルブロマイド３．４６ 、！ｉ
’ （８，４２ｍＭ）をアセトニトリル１５０ｍＡ！に
溶解し、２−ハイドロキシ−５−ニトロピリジン４．５
６７！ （３２，６ｍＭ）及びトリエチルアミｙ３．２
９．！ｉ’（３２，６ｍＭ）を加え、３５°Ｃで１５時
間攪拌しながら反応させた。反応終了後、アセトニトリ
ルを留去し、残有をシリカゲルクロマトグラフィにより
精製し、メタノール−ジクロロメタン混液（容量比１
二９９）で溶出した目的区分を濃縮し、メタノール−水
から再結晶すると、テトラアセチル−（５−ニトロ−２
−ピリジニルオキシ）−β−Ｄ−グルコシドが１．２２
、！ｌｉ＋ （２，５６ｍＭ、 ６０．４％）得ら
れる。
ル）−β−Ｄ−グルコシドの製造＋１） テトラアセ
チル−α−Ｄ−グルコシルブロマイド３．４６ 、！ｉ
’ （８，４２ｍＭ）をアセトニトリル１５０ｍＡ！に
溶解し、２−ハイドロキシ−５−ニトロピリジン４．５
６７！ （３２，６ｍＭ）及びトリエチルアミｙ３．２
９．！ｉ’（３２，６ｍＭ）を加え、３５°Ｃで１５時
間攪拌しながら反応させた。反応終了後、アセトニトリ
ルを留去し、残有をシリカゲルクロマトグラフィにより
精製し、メタノール−ジクロロメタン混液（容量比１
二９９）で溶出した目的区分を濃縮し、メタノール−水
から再結晶すると、テトラアセチル−（５−ニトロ−２
−ピリジニルオキシ）−β−Ｄ−グルコシドが１．２２
、！ｌｉ＋ （２，５６ｍＭ、 ６０．４％）得ら
れる。
融点：１４５．５〜１４６．５°Ｃ
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長〔λｍａ
ｘ ） （ｎｍ） ＝２０７，２８２赤外線吸収スペク
トル（ｍ−リ：１７４６．１６０６．１５８２．１５２
４．１４７２．１６８２．１６５０．１３０６．１２１
８．１０７６．１０３４．９０４．８４２．７６８．６
９４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＦＩＺ）（アグリコン
部分のみ） ｐｐｆｆｉ： （ＣＤＣｌ２）９、０７
（Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｊ ＝２．７Ｈｚ）、８．４４ （Ｉ
Ｈ，ｄｄ、 Ｊ ＝９．０Ｈｚ、 ２．７Ｈｚ）、６
．９５ （Ｉ ＨＳａ、 Ｊ ＝９．０Ｈｚ）シリカゲ
ル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒：メタノール／ジク
ロロメタン＝ ２ ： ８ ） ：Ｒｆ＝０．２６（２
） （１）で得たテトラアセチル−（５−ニトロ−２
−ピリジニルオキシ）−β−Ｄ−グルコシド６５８ ＝
９ （１，４０ｍＭ）を１，４−ジオキサン６０ｍ１に
溶解し、１０％パラジウム−カーボン１６３ ＝９を加
え、常圧下に水素ガスを導入しながら室温で２４時間、
強攪拌下反応させた。次いで、パラジウム−カーボンを
戸別し、ν液の１，４−ジオキサンを留去したのち、シ
リカゲルクロマトグラフィにより精製し、メタノール−
ジクロロメタン混液（容量比２：９８）で溶出した目的
区分を濃縮し、メタノールから再結晶すると、テトラア
セチル−（５−アミノ−２−ピリジニルオキシ）−β−
Ｄ−グルコシドが５７２ｍ９（１，３０ｍＭ、９２．９
％）得られる。
ｘ ） （ｎｍ） ＝２０７，２８２赤外線吸収スペク
トル（ｍ−リ：１７４６．１６０６．１５８２．１５２
４．１４７２．１６８２．１６５０．１３０６．１２１
８．１０７６．１０３４．９０４．８４２．７６８．６
９４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＦＩＺ）（アグリコン
部分のみ） ｐｐｆｆｉ： （ＣＤＣｌ２）９、０７
（Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｊ ＝２．７Ｈｚ）、８．４４ （Ｉ
Ｈ，ｄｄ、 Ｊ ＝９．０Ｈｚ、 ２．７Ｈｚ）、６
．９５ （Ｉ ＨＳａ、 Ｊ ＝９．０Ｈｚ）シリカゲ
ル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒：メタノール／ジク
ロロメタン＝ ２ ： ８ ） ：Ｒｆ＝０．２６（２
） （１）で得たテトラアセチル−（５−ニトロ−２
−ピリジニルオキシ）−β−Ｄ−グルコシド６５８ ＝
９ （１，４０ｍＭ）を１，４−ジオキサン６０ｍ１に
溶解し、１０％パラジウム−カーボン１６３ ＝９を加
え、常圧下に水素ガスを導入しながら室温で２４時間、
強攪拌下反応させた。次いで、パラジウム−カーボンを
戸別し、ν液の１，４−ジオキサンを留去したのち、シ
リカゲルクロマトグラフィにより精製し、メタノール−
ジクロロメタン混液（容量比２：９８）で溶出した目的
区分を濃縮し、メタノールから再結晶すると、テトラア
セチル−（５−アミノ−２−ピリジニルオキシ）−β−
Ｄ−グルコシドが５７２ｍ９（１，３０ｍＭ、９２．９
％）得られる。
融点： １８５．５〜１８６．５°Ｃ（分解）紫外部・
可視部吸収スペクトル：吸収極大波長〔帖ａｘ：］（ｎ
ｍ） ＝２０４．２６２．３０７赤外線吸収スペクトル
（Ｃｍ″）：３３９０．６６６０．１７５２．１６２４
．１５８６．１４９０．１４２２．１６７０．１２３０
．１０６６．９０６．８２８、核磁気共鳴スペクトル（
２００ＭＨｚ）（アグリコン部分のみ） ｐｐＩｌ：
（ＤＭｓｏ−ａ、）７、６２ （Ｉ Ｈ，ｄｄ、 Ｊ
＝２．９Ｈｚ、 ０．５Ｈｚ）、７、０３ （Ｉ Ｈ
，ｄｄ、 Ｊ ＝８．５Ｈｚ、２．９Ｈｚ）、６．６５
（Ｉ Ｈｌｄｄ、 Ｊ ＝８．５に、 ０．５Ｈｚ）
シリカゲル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒：メタノー
ル／ジクロロメタン＝ ５ ： ９７） ：Ｒ，＝０．
２１（３）ｐ−ベンゾキノン１４０ｇ（１３，０ｍＭ）
を１゜４−ジオキサン’１５ｍ１に溶解し、さらにトリ
フルオロ酢酸Ｑ、 ２ｒａｔ及びモレキュラシープ（４
Ａ）（和光紬薬社製）ｓ、ｏ、７を加え、混和してお（
。
可視部吸収スペクトル：吸収極大波長〔帖ａｘ：］（ｎ
ｍ） ＝２０４．２６２．３０７赤外線吸収スペクトル
（Ｃｍ″）：３３９０．６６６０．１７５２．１６２４
．１５８６．１４９０．１４２２．１６７０．１２３０
．１０６６．９０６．８２８、核磁気共鳴スペクトル（
２００ＭＨｚ）（アグリコン部分のみ） ｐｐＩｌ：
（ＤＭｓｏ−ａ、）７、６２ （Ｉ Ｈ，ｄｄ、 Ｊ
＝２．９Ｈｚ、 ０．５Ｈｚ）、７、０３ （Ｉ Ｈ
，ｄｄ、 Ｊ ＝８．５Ｈｚ、２．９Ｈｚ）、６．６５
（Ｉ Ｈｌｄｄ、 Ｊ ＝８．５に、 ０．５Ｈｚ）
シリカゲル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒：メタノー
ル／ジクロロメタン＝ ５ ： ９７） ：Ｒ，＝０．
２１（３）ｐ−ベンゾキノン１４０ｇ（１３，０ｍＭ）
を１゜４−ジオキサン’１５ｍ１に溶解し、さらにトリ
フルオロ酢酸Ｑ、 ２ｒａｔ及びモレキュラシープ（４
Ａ）（和光紬薬社製）ｓ、ｏ、７を加え、混和してお（
。
これに実施例１（２）で得たテトラアセチル−（５−ア
ミノ−２−ピリジニルオキシ）−β−Ｄ−グルコシド５
７２ｍ９（１，３０ｍＭ）を加え、室温で４．５時間攪
拌しながら反応させる。次いで反応液に無水炭酸カリウ
ムを反応液の液性が中性になるまで加えたのち、この炭
酸カリウムを戸別し、涙液の１，４−ジ′オキサンを留
去する。この残有をシリカゲルクロマトグラフィにより
精製し、メタノール−ジクロロメタン混液（容量比２
： ９８ ）で溶出した目的区分をメタノールから再結
晶すると、テトラアセチル−（フェノールインド−３’
−アザフェニル）−β−Ｄ−４ルコシドが５２３ｍ９（
０，９８７ｍＭ、 ７０．５％）得られる。
ミノ−２−ピリジニルオキシ）−β−Ｄ−グルコシド５
７２ｍ９（１，３０ｍＭ）を加え、室温で４．５時間攪
拌しながら反応させる。次いで反応液に無水炭酸カリウ
ムを反応液の液性が中性になるまで加えたのち、この炭
酸カリウムを戸別し、涙液の１，４−ジ′オキサンを留
去する。この残有をシリカゲルクロマトグラフィにより
精製し、メタノール−ジクロロメタン混液（容量比２
： ９８ ）で溶出した目的区分をメタノールから再結
晶すると、テトラアセチル−（フェノールインド−３’
−アザフェニル）−β−Ｄ−４ルコシドが５２３ｍ９（
０，９８７ｍＭ、 ７０．５％）得られる。
融点：１７６．５〜１７８．５°Ｃ
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長〔λｍａ
ｘ〕（ｎｍ） ＝２２２ （ｓｈ）、２５８．２８８．
４４８赤外線吸収スペクト＃ （Ｃｒｎ′″″１） ：
ｔ ７４８．１６４０．１５８２．１４７０．１６６
６．１２６０．１０６２．１０６２．９０４．８７０．
８３０．５９８核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨ２）
（アグリコン部分のみ）ｐ四： （ＣＤ３ｏＤ） ７、７４ （Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｊ＝２．７Ｈｚ）、７、６
４ （Ｉ ＨＳｄｄ、 Ｊ ＝８．４ｆ（ｚ、 ２．７
Ｈｚ）、７、５０ （Ｉ ＨＳｄｄ、 Ｊ ＝ｆ Ｏ，
ＯＨｚ、 ２．７Ｈｚ）、７、１４ （Ｉ Ｈ，ｄｄ、
Ｊ＝１０．５Ｈｚ１２．７Ｈｚ）、６．９１ （Ｉ
Ｈ，ｄ、 Ｊ＝８．４Ｈｚ）、６．７１ （Ｉ Ｈ，ｄ
ｄ、 Ｊ ＝１０．０Ｈｚ、 ２．２Ｈｚ）、６．６０
（Ｉ Ｈ，ｄｄ、 Ｊ ＝１０．３Ｈｚ、２．５ Ｈ
ｚ ）シリカゲル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒：メ
タノール／ジクロロメタン＝ ３ ： ９７ ） ：Ｒ
，＝０．５０実施例２ ｐ−ベンゾキノン１９．０＆ （１７６ｍＭ）を１．４
−ジオキサン１００ｍ１に溶解し、さらにトリフルオロ
酢酸０．５ ｍｌ及びモレキュラシープ（４Ａ）１９０
ｇを加え、混和してお（。これに実施例１（２）で得た
テトラアセチル−（５−アミノ−２−ピリジニルオキシ
）−β−Ｄ−１”ルコシドを無水炭酸カリウム−無水メ
タノールを用いて脱アセチル化して得た５−アミノ−２
−ピリジニルオキシ−β−Ｄ−グルコシド２．４７９（
８，８２ｍＭ ）を加え、室温下３時間攪拌しながら反
応させる。この反応液をそのままシリカゲルクロマトグ
ラフィにより精製し、メタノール−ジクロロメタン混液
（容量比１：４）で溶出した目的区分を濃縮し、メタノ
ールから再結晶すると、フェノールインド−３′−アザ
フェニル−β−り一グルコシドが２．０７ ｇ（５，７
２ｍＭ、 ６４．８％）得られる。
ｘ〕（ｎｍ） ＝２２２ （ｓｈ）、２５８．２８８．
４４８赤外線吸収スペクト＃ （Ｃｒｎ′″″１） ：
ｔ ７４８．１６４０．１５８２．１４７０．１６６
６．１２６０．１０６２．１０６２．９０４．８７０．
８３０．５９８核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨ２）
（アグリコン部分のみ）ｐ四： （ＣＤ３ｏＤ） ７、７４ （Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｊ＝２．７Ｈｚ）、７、６
４ （Ｉ ＨＳｄｄ、 Ｊ ＝８．４ｆ（ｚ、 ２．７
Ｈｚ）、７、５０ （Ｉ ＨＳｄｄ、 Ｊ ＝ｆ Ｏ，
ＯＨｚ、 ２．７Ｈｚ）、７、１４ （Ｉ Ｈ，ｄｄ、
Ｊ＝１０．５Ｈｚ１２．７Ｈｚ）、６．９１ （Ｉ
Ｈ，ｄ、 Ｊ＝８．４Ｈｚ）、６．７１ （Ｉ Ｈ，ｄ
ｄ、 Ｊ ＝１０．０Ｈｚ、 ２．２Ｈｚ）、６．６０
（Ｉ Ｈ，ｄｄ、 Ｊ ＝１０．３Ｈｚ、２．５ Ｈ
ｚ ）シリカゲル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒：メ
タノール／ジクロロメタン＝ ３ ： ９７ ） ：Ｒ
，＝０．５０実施例２ ｐ−ベンゾキノン１９．０＆ （１７６ｍＭ）を１．４
−ジオキサン１００ｍ１に溶解し、さらにトリフルオロ
酢酸０．５ ｍｌ及びモレキュラシープ（４Ａ）１９０
ｇを加え、混和してお（。これに実施例１（２）で得た
テトラアセチル−（５−アミノ−２−ピリジニルオキシ
）−β−Ｄ−１”ルコシドを無水炭酸カリウム−無水メ
タノールを用いて脱アセチル化して得た５−アミノ−２
−ピリジニルオキシ−β−Ｄ−グルコシド２．４７９（
８，８２ｍＭ ）を加え、室温下３時間攪拌しながら反
応させる。この反応液をそのままシリカゲルクロマトグ
ラフィにより精製し、メタノール−ジクロロメタン混液
（容量比１：４）で溶出した目的区分を濃縮し、メタノ
ールから再結晶すると、フェノールインド−３′−アザ
フェニル−β−り一グルコシドが２．０７ ｇ（５，７
２ｍＭ、 ６４．８％）得られる。
融点：１１７．Ｏ〜１２３．０℃
紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長〔λｍａ
ｘ ：］（ｎｍ）＝２２２．２６８．２８７（ｓｈ）、
赤外線吸収スペクトル（ｃ１′ｎ−り：３３９０．１６
３８．１５８２．１４７０．１３７２．１２７０．１０
６６．８６６．８６０ 核磁気共鳴スペクトル（２ｏｏＭＨ２）（アグリコン部
分のみ）解： （ＤＭＳＯ−ｄ、） ７．８６ （Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｊ ＝２．２Ｈｚ、）、７
、５２ （Ｉ Ｈ，ｄｄ、 Ｊ ＝８．８Ｈｚ、２．２
Ｈｚ ）、７、３８ （Ｉ Ｈ，ｄｄｌＪ ＝１０．
０Ｈｚ、 ２．４Ｈｚ）、７、２２ （Ｉ Ｈｌｄｄ、
Ｊ ＝＝１０．４Ｈｚ、 ２．４Ｈｚ）、６．９８
（Ｉ Ｈ，ａ、 Ｊ ＝８．８Ｈｚ）、６．７５ （Ｉ
Ｈ，ｄｄ、 Ｊ ＝１０．０Ｈｚ、 ２．１Ｈｚ）、
６．６３ （Ｉ Ｈ，ｄｃｌ、 Ｊ＝Ｉ Ｏ，４Ｈｚ、
２．１Ｈｚ）シリカゲル薄層クロマトグラフィ（展開溶
媒二メタ、／−ル／ジクロロメタン＝１＝４）：Ｒｆ＝
０．４５なお、このフエノールインド−３′−アザフェ
ニル−β−Ｄ−グルコシドは実施例１（３）で得られた
テトラアセチル−（フエノールインド−３′−７ｆフエ
ニル）−β−Ｄ−グルコシドヲ無水炭酸カリウム−無水
メタノールを用いて脱アセチル化しても得ることができ
る（７２．９％）。
ｘ ：］（ｎｍ）＝２２２．２６８．２８７（ｓｈ）、
赤外線吸収スペクトル（ｃ１′ｎ−り：３３９０．１６
３８．１５８２．１４７０．１３７２．１２７０．１０
６６．８６６．８６０ 核磁気共鳴スペクトル（２ｏｏＭＨ２）（アグリコン部
分のみ）解： （ＤＭＳＯ−ｄ、） ７．８６ （Ｉ Ｈ，ｄ、 Ｊ ＝２．２Ｈｚ、）、７
、５２ （Ｉ Ｈ，ｄｄ、 Ｊ ＝８．８Ｈｚ、２．２
Ｈｚ ）、７、３８ （Ｉ Ｈ，ｄｄｌＪ ＝１０．
０Ｈｚ、 ２．４Ｈｚ）、７、２２ （Ｉ Ｈｌｄｄ、
Ｊ ＝＝１０．４Ｈｚ、 ２．４Ｈｚ）、６．９８
（Ｉ Ｈ，ａ、 Ｊ ＝８．８Ｈｚ）、６．７５ （Ｉ
Ｈ，ｄｄ、 Ｊ ＝１０．０Ｈｚ、 ２．１Ｈｚ）、
６．６３ （Ｉ Ｈ，ｄｃｌ、 Ｊ＝Ｉ Ｏ，４Ｈｚ、
２．１Ｈｚ）シリカゲル薄層クロマトグラフィ（展開溶
媒二メタ、／−ル／ジクロロメタン＝１＝４）：Ｒｆ＝
０．４５なお、このフエノールインド−３′−アザフェ
ニル−β−Ｄ−グルコシドは実施例１（３）で得られた
テトラアセチル−（フエノールインド−３′−７ｆフエ
ニル）−β−Ｄ−グルコシドヲ無水炭酸カリウム−無水
メタノールを用いて脱アセチル化しても得ることができ
る（７２．９％）。
実施例３
β−グルコシダーゼ活性の測定法Ａ（ｅｎｄｏ−ｐａ
ｉｎ を法） （１）基質液の調製 フエノールインド−３１−アザフェニル−β−Ｄ−グル
コシド５ ｍＭをとり、１０ ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
＝６．０）を加えて全量を１−ｅとして基質液とする。
ｉｎ を法） （１）基質液の調製 フエノールインド−３１−アザフェニル−β−Ｄ−グル
コシド５ ｍＭをとり、１０ ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
＝６．０）を加えて全量を１−ｅとして基質液とする。
（２）標品β−グルコシダーゼ液の調製市販のアーモン
ド由来のβ−グルコシダーゼを０．０５％ウシ血清アル
ブミン含有１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）に加
え、それぞれ０．１．２．６．４及び５１１９／４３の
濃度に溶解して標品β−グルコシダーゼ液とする。
ド由来のβ−グルコシダーゼを０．０５％ウシ血清アル
ブミン含有１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）に加
え、それぞれ０．１．２．６．４及び５１１９／４３の
濃度に溶解して標品β−グルコシダーゼ液とする。
（６）試料液の調製
β−グルコシダーゼ活性測定用試料１０〜を精密に秤量
し、０．０５％ウシ血清アルブミン含有１０ ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）を加えて全量を１００ｍ１と
して試料液とする。
し、０．０５％ウシ血清アルブミン含有１０ ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）を加えて全量を１００ｍ１と
して試料液とする。
（４）検量線の作成
基質液１Ｔｎｌに各濃度の標品β−グルコシダーゼ液０
．５ ｍｌを加え、３７℃で１５分間加温する。
．５ ｍｌを加え、３７℃で１５分間加温する。
これに２００ ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液２ ｍｌをと
吸光度の関係より検量線を作成する。
吸光度の関係より検量線を作成する。
東洋紡社製β−グルコシダーゼ（１２，Ｏｕ／ｍ９）を
使用した場合、検量線の式はσ＝９５．５・Ａ −３６
，７４（Ｕ ：酵素活性ｕ〃、Ａ：吸光度）となる。そ
のグラフを第１図に示す。
使用した場合、検量線の式はσ＝９５．５・Ａ −３６
，７４（Ｕ ：酵素活性ｕ〃、Ａ：吸光度）となる。そ
のグラフを第１図に示す。
（５）試料液中のβ−グルコシダーゼ活性の測定基質液
１ｒｎｌに試料液０．５ ｍＡ’を加え、６７℃で１５
分間加温する。これに２００ ｍＭ炭酸ナトリウム水溶
液２ｍｌを加え、ただちに６１０ ｎｍにおける吸光度
を測定する。こ・の吸光度の値と（４）で作成した検量
線から算出して試料液中のβ−グルコシダーゼ活性の測
定を行うことができる。
１ｒｎｌに試料液０．５ ｍＡ’を加え、６７℃で１５
分間加温する。これに２００ ｍＭ炭酸ナトリウム水溶
液２ｍｌを加え、ただちに６１０ ｎｍにおける吸光度
を測定する。こ・の吸光度の値と（４）で作成した検量
線から算出して試料液中のβ−グルコシダーゼ活性の測
定を行うことができる。
なお、試料液の酵素活性の値が検量線の測定範囲（０〜
６０ ｕ７１３ ）を越えた場合は０．０５％ウシ血清
アルブミン含有１０ ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ＝ ６
．０ ）を用いて相当する倍数の希釈を行ったのち、再
測定を行う。
６０ ｕ７１３ ）を越えた場合は０．０５％ウシ血清
アルブミン含有１０ ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ＝ ６
．０ ）を用いて相当する倍数の希釈を行ったのち、再
測定を行う。
実施例４
β−グルコシダーゼ活性の測定法Ｂ（ｒａｔｅ−ａｓｓ
ａｙ法） （１）基質液の調製 フエノールインド−３フーアザフエニルーβ−Ｄ−グル
コシド５ ｍＭをとり、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．０ ）を加えて全量を１沼として基質液とする。
ａｙ法） （１）基質液の調製 フエノールインド−３フーアザフエニルーβ−Ｄ−グル
コシド５ ｍＭをとり、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．０ ）を加えて全量を１沼として基質液とする。
（２）標品β−グルコシダーゼ液の調製市販のアーモン
ド由来のβ−グルコシダーゼを０．０５％ウシ血清アル
ブミン含有１０ ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に
加え、０．１．２．３．５．１０ｍ９μの濃度に溶解し
て標品β−グルコシダーゼ液とする。
ド由来のβ−グルコシダーゼを０．０５％ウシ血清アル
ブミン含有１０ ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に
加え、０．１．２．３．５．１０ｍ９μの濃度に溶解し
て標品β−グルコシダーゼ液とする。
（３）試料液の調製
β−グルコシダーゼ活性測定用試料１０■を精密に秤量
し、０．０５％ウシ血清アルブミン含有１０ ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）を加えて全量を１ｏｏｍｌと
して試料液とする。
し、０．０５％ウシ血清アルブミン含有１０ ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）を加えて全量を１ｏｏｍｌと
して試料液とする。
（４）検量線の作成
基質液１ｍｌを６７°Ｃで６分間加温したのち、各濃度
の標品β−グルコシダーゼ液０．５ ｍｌを加え、６７
℃で２．５分間加温後からの１分間の６１０ ｎｍにお
ける吸光度の変化量を測定する。
の標品β−グルコシダーゼ液０．５ ｍｌを加え、６７
℃で２．５分間加温後からの１分間の６１０ ｎｍにお
ける吸光度の変化量を測定する。
このときの標品β−グルコシダーゼ液液性性吸光度の変
化量の関係より検量線を作成する。
化量の関係より検量線を作成する。
東洋紡社製β−グルコシダーゼ（１２，０ｕ／ｍ９ ）
を使用した場合、検量線の式はＵ＝１７．ＩＦ・（△Ａ
）×１０３（Ｕ二酵素活性ｕ ／４３、△Ａ：吸光吸光
度変化量／色なるそのグラフを第２図に示す。
を使用した場合、検量線の式はＵ＝１７．ＩＦ・（△Ａ
）×１０３（Ｕ二酵素活性ｕ ／４３、△Ａ：吸光吸光
度変化量／色なるそのグラフを第２図に示す。
（５）試料液中のβ−グルコシダーゼ活性の測定基質液
’ｌ ｒｎｌを６７℃で３分間加温したのち、試料液１
ｍｌを加え、６７°Ｃで２．５分間加温後からの１分
間の６１０ ｎｍにおける吸光度の変化量を測定する。
’ｌ ｒｎｌを６７℃で３分間加温したのち、試料液１
ｍｌを加え、６７°Ｃで２．５分間加温後からの１分
間の６１０ ｎｍにおける吸光度の変化量を測定する。
この吸光度変化量と（４）で作成した検量線から算出し
て試料液中のβ−グルコシダーゼ活性の測定を行うこと
ができる。
て試料液中のβ−グルコシダーゼ活性の測定を行うこと
ができる。
なお、試料液の酵素活性の値が検量線の測定範囲（０〜
１２０ｕ／、、ｇ）を越えた場合は０゜０５％ウシ血清
アルブミン含有１０ ｍＭ リン酸緩衝液（Ｉ）Ｈ＝７
．ＣＩ）を用いて相当する倍数の希釈を行ったのち、再
測定を行う。
１２０ｕ／、、ｇ）を越えた場合は０゜０５％ウシ血清
アルブミン含有１０ ｍＭ リン酸緩衝液（Ｉ）Ｈ＝７
．ＣＩ）を用いて相当する倍数の希釈を行ったのち、再
測定を行う。
実施例５
測定用試薬
（１）試薬の組成
含有物
試薬Ａ：フェノールインドー６′−アザフェニル−β−
Ｄ−グルコシド リン酸緩衝液（ｐＨ＝６．ｏ ） 精製水 試薬Ｂ：炭酸ナトリウム 精製水 濃度 ５．０ｍＭ １０．０ｍＭ ２００ ｍＭ 試薬Ｃ：ウシ血清アルブミン ０．０５％ リン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０ ） １０．０ｍＭ 精製水 （２）測定法 まず、測定用試料１０ｍ９を精密に秤量し、試薬Ｃを加
えて全量を１００ｍ１とし、これを試料液とする。次い
で試薬Ａ ｊ ｍｅに試料液Ｊ’ ０．５ ｒｎｌを加
え、６７°Ｃで１５分間加温する。これに試薬Ｂを２
ｍｌ加え、ただちに６１０ ｎｍにおける吸光度を測定
する。この吸光度の値とあらかじめ作成した検量線から
算出して試料液中のβ−グルコシダーゼ活性の測定を行
うことができる。
Ｄ−グルコシド リン酸緩衝液（ｐＨ＝６．ｏ ） 精製水 試薬Ｂ：炭酸ナトリウム 精製水 濃度 ５．０ｍＭ １０．０ｍＭ ２００ ｍＭ 試薬Ｃ：ウシ血清アルブミン ０．０５％ リン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０ ） １０．０ｍＭ 精製水 （２）測定法 まず、測定用試料１０ｍ９を精密に秤量し、試薬Ｃを加
えて全量を１００ｍ１とし、これを試料液とする。次い
で試薬Ａ ｊ ｍｅに試料液Ｊ’ ０．５ ｒｎｌを加
え、６７°Ｃで１５分間加温する。これに試薬Ｂを２
ｍｌ加え、ただちに６１０ ｎｍにおける吸光度を測定
する。この吸光度の値とあらかじめ作成した検量線から
算出して試料液中のβ−グルコシダーゼ活性の測定を行
うことができる。
なお、試料液の酵素活性の値が検量線の測定範囲を越え
た場合は試薬Ｃを用いて相当する倍数の希釈を行ったの
ち、再測定を行う。
た場合は試薬Ｃを用いて相当する倍数の希釈を行ったの
ち、再測定を行う。
第１図は実施例３におけるβ−グルコシダーゼ活性と生
成する青色色素の波長６１０ｎｍにおける吸光度の関係
を示すグラフ、第２図は実施例４におゆるβ−グルコシ
ダーゼ活性と生成する青色色素の波長６１０ｎｍにおけ
る吸光度の変化量の関係を示すグラフであって、図中の
直線はそれぞれの検量線を示す。
成する青色色素の波長６１０ｎｍにおける吸光度の関係
を示すグラフ、第２図は実施例４におゆるβ−グルコシ
ダーゼ活性と生成する青色色素の波長６１０ｎｍにおけ
る吸光度の変化量の関係を示すグラフであって、図中の
直線はそれぞれの検量線を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、次式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中Ｒは水素原子又はアシル基、Ｘ＿１ないしＸ＿７
は水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アジ
ド基、アシル基、スルホン酸基、ニトロソ基、スルホニ
ル基、スルホキシル基、チオシアノ基、イソチオシアノ
基、イソニトリル基、イミノ基、アゾ基、ジアゾ基、ア
ルキル基、アリル基又はアリール基を意味し、Ｘ＿４と
Ｘ＿５及び／又はＸ＿６とＸ＿７は連結して縮合芳香環
を形成してもよく、またＸ＿２又はＸ＿３はそれぞれＸ
＿４又はＸ＿６とエーテル結合を形成してもよい）で表
わされるフエノールインド−３′−アザフェニル−β−
Ｄ−グルコシド誘導体。 ２、次式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中Ｒ、Ｘ＿１、Ｘ＿２及びＸ＿３は後記の意味を有
する）で表わされる５−アミノ−２−ピリジニルオキシ
−β−Ｄ−グルコシド誘導体に、次式▲数式、化学式、
表等があります▼（III） （式中Ｘ＿４ないしＸ＿７は後記の意味を有する）で表
わされるキノン誘導体を作用させることを特徴とする、
次式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中Ｒは水素原子又はアシル基、Ｘ＿１ないしＸ＿７
は水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アジ
ド基、アシル基、スルホン酸基、ニトロソ基、スルホニ
ル基、スルホキシル基、チオシアノ基、イソチオシアノ
基、イソニトリル基、イミノ基、アゾ基、ジアゾ基、ア
ルキル基、アリル基又はアリール基を意味し、Ｘ＿４Ｘ
＿５及び／又はＸ＿６とＸ＿７は連結して縮合芳香環を
形成してもよく、またＸ＿２又はＸ＿３はそれぞれＸ＿
４又はＸ＿６とエーテル結合を形成してもよい）で表わ
されるフエノールインド−３′−アザフェニル−β−Ｄ
−グルコシド誘導体の製法。 ３、次式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ′） （式中Ｘ＿１ないしＸ＿７は水素原子、ハロゲン原子、
ニトロ基、シアノ基、アジド基、アシル基、スルホン酸
基、ニトロソ基、スルホニル基、スルホキシル基、チオ
シアノ基、イソチオシアノ基、イソニトリル基、イミノ
基、アゾ基、ジアゾ基、アルキル基、アリル基又はアリ
ール基を意味し、Ｘ＿４とＸ＿５及び／又はＸ＿６とＸ
＿７は連結して縮合芳香環を形成してもよく、またＸ＿
２及びＸ＿３はＸ＿４及びＸ＿５とエーテル結合を形成
してもよい）で表わされるフエノールインド−３′−ア
ザフェニル−β−Ｄ−グルコシド誘導体を有効成分とす
るβ−グルコシダーゼ活性の測定用試薬。 ４、β−グルコシダーゼ含有試料に、第３請求項に記載
のフエノールインド−３′−アザフェニル−β−グルコ
シド誘導体（ I ′）を加え、酵素反応によつて生成す
る青色色素を５８５〜６５０ｎｍの波長で測定すること
を特徴とする、β−グルコシダーゼ活性の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19069588A JPH0242096A (ja) | 1988-08-01 | 1988-08-01 | フエノールインドー３’−アザフエニル−β−Ｄ−グルコシド誘導体、その製法及びβ−グルコシダーゼ活性測定用試薬への利用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19069588A JPH0242096A (ja) | 1988-08-01 | 1988-08-01 | フエノールインドー３’−アザフエニル−β−Ｄ−グルコシド誘導体、その製法及びβ−グルコシダーゼ活性測定用試薬への利用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0242096A true JPH0242096A (ja) | 1990-02-13 |
Family
ID=16262319
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19069588A Pending JPH0242096A (ja) | 1988-08-01 | 1988-08-01 | フエノールインドー３’−アザフエニル−β−Ｄ−グルコシド誘導体、その製法及びβ−グルコシダーゼ活性測定用試薬への利用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0242096A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002053766A1 (fr) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Japan Science And Technology Corporation | Procede permettant de determiner l'activite enzymatique des hydrolases du sucre |
| EP1071212A4 (en) * | 1998-02-12 | 2004-11-03 | Omron Tateisi Electronics Co | SEMICONDUCTOR RELAY |
-
1988
- 1988-08-01 JP JP19069588A patent/JPH0242096A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1071212A4 (en) * | 1998-02-12 | 2004-11-03 | Omron Tateisi Electronics Co | SEMICONDUCTOR RELAY |
| WO2002053766A1 (fr) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Japan Science And Technology Corporation | Procede permettant de determiner l'activite enzymatique des hydrolases du sucre |
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