JPH02420A - 連鎖球菌感染に対する治療組成物、形質転換宿主、免疫方法及び遺伝子工学的産物 - Google Patents
連鎖球菌感染に対する治療組成物、形質転換宿主、免疫方法及び遺伝子工学的産物Info
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- JPH02420A JPH02420A JP63209327A JP20932788A JPH02420A JP H02420 A JPH02420 A JP H02420A JP 63209327 A JP63209327 A JP 63209327A JP 20932788 A JP20932788 A JP 20932788A JP H02420 A JPH02420 A JP H02420A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、連鎖球菌感染症、特にＡ群連鎖球菌感染症に
対する免疫に関するものである。
対する免疫に関するものである。
本発明の範囲は広範に及び、重要な応用例が幾つも考え
られる。本発明者が知見する限り、本発明は、毒性細菌
に起因する感染に対する免疫に効果のある、該毒性細菌
の防御抗原（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｎｔｉｇｅｎ）を
有する生物体ヘヒ’ｙ ／Ｌ／ （ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌＶｉｎ（］ Ｖｅｈｉｃ１８）を最初に提供し得たも
のである。
られる。本発明者が知見する限り、本発明は、毒性細菌
に起因する感染に対する免疫に効果のある、該毒性細菌
の防御抗原（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｎｔｉｇｅｎ）を
有する生物体ヘヒ’ｙ ／Ｌ／ （ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌＶｉｎ（］ Ｖｅｈｉｃ１８）を最初に提供し得たも
のである。
リューマチ熱及びリューマチ性心臓疾患を誘発するＡ群
連鎖球菌株に対する安全で有効なワクチンに関する開発
研究はすでに６０年以上も行なわれて来ている（Ｌａｎ
Ｃｅｒｔｅｌ（１，”ｃｕｒｒｅｎｔ ＫｎＯＷＩｅｄ
Ｑｅｏｒ Ｔｙｐｅ−３ｐｅｃｉｆｉｃ ＨＰｒｏｔｅ
ｉｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｔｏ ＧｒｏｕｐＡ ５ｔｒ
ｃｐｔｏｃｏｃｃｉ Ｊ、 ｒｍｍｕｎｏｌ 、
Ｖｏｌ、８９ ｐｐ。
連鎖球菌株に対する安全で有効なワクチンに関する開発
研究はすでに６０年以上も行なわれて来ている（Ｌａｎ
Ｃｅｒｔｅｌ（１，”ｃｕｒｒｅｎｔ ＫｎＯＷＩｅｄ
Ｑｅｏｒ Ｔｙｐｅ−３ｐｅｃｉｆｉｃ ＨＰｒｏｔｅ
ｉｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｔｏ ＧｒｏｕｐＡ ５ｔｒ
ｃｐｔｏｃｏｃｃｉ Ｊ、 ｒｍｍｕｎｏｌ 、
Ｖｏｌ、８９ ｐｐ。
３０７−３１３ （１９６２）参照）。化Ｗ：Ｊ連鎖球
菌又はＡ群連鎖球菌以外に一世紀の間により詳細な調査
研究の対象となった細菌種は、僅かであったことが報告
されている。化ｒｆ３連鎖球菌が急性リューマチ熱の最
初で主要な、そして唯一の病因菌であるという確信が研
究者の間で深まるに従って、より確固とした決意と努力
により、その毒性又は抗原性成分がリューマチを誘発す
る可能性のある細菌生産物を詳細に分析しようと試みら
れた。リューマチ熱及び連鎖球菌に関する研究全体につ
いては、５ｔｏｌｌｅｒｎ＋ａｎ、 Ｒｈｅｕｍａｔｉ
ｃ Ｆｅｖｅｒ ａｎｄ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａＩ
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｃ１１ｎ
ｉｃａｌ ＣａｒｄｉｏｌｏｇｉｃａｌＨＯｎＯＱｒａ
ＤｈＳ、 Ｇｒｕｎｅ ａｎｄ ５ｔｒａｔｔｏｎ、
１９７５）を参照すべし。
菌又はＡ群連鎖球菌以外に一世紀の間により詳細な調査
研究の対象となった細菌種は、僅かであったことが報告
されている。化ｒｆ３連鎖球菌が急性リューマチ熱の最
初で主要な、そして唯一の病因菌であるという確信が研
究者の間で深まるに従って、より確固とした決意と努力
により、その毒性又は抗原性成分がリューマチを誘発す
る可能性のある細菌生産物を詳細に分析しようと試みら
れた。リューマチ熱及び連鎖球菌に関する研究全体につ
いては、５ｔｏｌｌｅｒｎ＋ａｎ、 Ｒｈｅｕｍａｔｉ
ｃ Ｆｅｖｅｒ ａｎｄ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａＩ
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ （Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｃ１１ｎ
ｉｃａｌ ＣａｒｄｉｏｌｏｇｉｃａｌＨＯｎＯＱｒａ
ＤｈＳ、 Ｇｒｕｎｅ ａｎｄ ５ｔｒａｔｔｏｎ、
１９７５）を参照すべし。
Ａ群連鎖球菌に対７る免疫に於ける、Ｍタンパクの中心
的な役割についてはＳＬｏ ｌ Ｉｅｒｍａｎによる解
説がある。また、Ｂｅａｃｈｅｙ ａｎｄ ５ｅｙｅｒ
、 ”Ｐｒ１ＬＩｌａｒｙＳＬｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ
ｒｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｒ Ｇｒｏｕｐ
八５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ＨＰｒｏｔｅｉｎ
ｓ、 Ｓｅｍ１ｎａｒｓ １ｎＩｎｒｅｃ口ｏｎｕ
ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ、 Ｖｏｌ、４． ｐ ４０１−４
１０． Ｊ、Ｂ。
的な役割についてはＳＬｏ ｌ Ｉｅｒｍａｎによる解
説がある。また、Ｂｅａｃｈｅｙ ａｎｄ ５ｅｙｅｒ
、 ”Ｐｒ１ＬＩｌａｒｙＳＬｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ
ｒｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｒ Ｇｒｏｕｐ
八５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ＨＰｒｏｔｅｉｎ
ｓ、 Ｓｅｍ１ｎａｒｓ １ｎＩｎｒｅｃ口ｏｎｕ
ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ、 Ｖｏｌ、４． ｐ ４０１−４
１０． Ｊ、Ｂ。
Ｒｏｂｂ ｉ ｎｓ、 Ｊ、 Ｃ，旧Ｉｔ ａｎｄ Ｊ
、Ｃ，５ａｄｏｒ（ｅｄｓ、、 Ｇｅｏｒｇ丁旧ｅｍｅ
ｖｅｒｌａｇ、 ｐｕｂ、、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
ａｎｄ ＳＬｕｔｔｇａｒｔ１９８２）も参照の
こと。
、Ｃ，５ａｄｏｒ（ｅｄｓ、、 Ｇｅｏｒｇ丁旧ｅｍｅ
ｖｅｒｌａｇ、 ｐｕｂ、、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
ａｎｄ ＳＬｕｔｔｇａｒｔ１９８２）も参照の
こと。
ワクチン開発の試みは、ヒトに投与され連鎖球菌生産物
のほとんど全てのものが非常に重大な毒性反応を引き起
こしてしまうために、これまで失敗に帰していた。これ
らの生産物のうちの成るものは、ヒト組織、特に、心臓
と交差反応してしまう抗体を生起せしめることが示され
ている（Ｋａｐｌａｎ ａｎｄ Ｈｅｙｅｒｓｅｒｉａ
ｎ、 ”Ａｎ Ｉｍｎ＋ｕｎｏｌｏｇｉｃａＣｒｏｓ
ｓ−Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｒｏｕｐ
Ａ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＣｅｌｌｓ ａｎｄ
１Ｉｕｎ＋ａｎ Ｈｅａｒｔ Ｔｉ５ｓｕｅ、 Ｌａｎ
ｃｅｔ、 ＶｏｌＩ Ｄｌｒ、 ７０６−７１０ （１
９６２）； Ｚａｂｒｉｓｋｉｅ ａｎｄ Ｆｒｅｉｍ
ｅｒ”Ａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｌａ口
ｏｎｓｈｉｐ Ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｔｉｒｏｕｐ
Ａ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｄ Ｈａｍｍａ
ｌｉａｎ Ｍｕｓｃｌｅ照）。
のほとんど全てのものが非常に重大な毒性反応を引き起
こしてしまうために、これまで失敗に帰していた。これ
らの生産物のうちの成るものは、ヒト組織、特に、心臓
と交差反応してしまう抗体を生起せしめることが示され
ている（Ｋａｐｌａｎ ａｎｄ Ｈｅｙｅｒｓｅｒｉａ
ｎ、 ”Ａｎ Ｉｍｎ＋ｕｎｏｌｏｇｉｃａＣｒｏｓ
ｓ−Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｒｏｕｐ
Ａ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌＣｅｌｌｓ ａｎｄ
１Ｉｕｎ＋ａｎ Ｈｅａｒｔ Ｔｉ５ｓｕｅ、 Ｌａｎ
ｃｅｔ、 ＶｏｌＩ Ｄｌｒ、 ７０６−７１０ （１
９６２）； Ｚａｂｒｉｓｋｉｅ ａｎｄ Ｆｒｅｉｍ
ｅｒ”Ａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｌａ口
ｏｎｓｈｉｐ Ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｔｉｒｏｕｐ
Ａ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｎｄ Ｈａｍｍａ
ｌｉａｎ Ｍｕｓｃｌｅ照）。
Ａ群連鎖球菌の表面上に成るＭタンパクは該生物の防御
抗原を含有していると長い間考えられて来たが、Ｍタン
パクをＦＪｌＭｉすると、これはリューマチ熱を予防す
るよりも、それを引き起す可能性のある有害な組織交差
反応性抗原と関連するものになってしまうのでないかと
いう不安があった。
抗原を含有していると長い間考えられて来たが、Ｍタン
パクをＦＪｌＭｉすると、これはリューマチ熱を予防す
るよりも、それを引き起す可能性のある有害な組織交差
反応性抗原と関連するものになってしまうのでないかと
いう不安があった。
この不安は、成る秤のリューマチ原因菌である連ｔ！１
球菌が心臓との交差反応性を有する抗原と非常に深い関
連のあるＭタンパクを産生ずるという事実の発見によっ
て不動のものとなってきた（Ｋａｐｌａｎ、 ”ｒｍ
ｍｕｎｏｌｏａｉｃ Ｉｔｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ５ｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ａｎｄ Ｔｉ５ｓｕｅ Ａｎ
ｔｉ！１ｅｎｓ、 １． Ｐｒ０ｔ）ｅｒｔｉｅ３ ｏ
ｒ’ａ０ 八ｎｔｉｇｅｎ ｉｎ Ｃｅｒｔａｉ
ｎ ５ｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｇｒｏｕｐ Ａ
ＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｎｇ ａ
ｎ Ｌｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｃｒｏｓｓ−Ｒｅａｃｔ
ｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ １ｌｅａｒｔ
Ｔｉ５ｓｕｅ、 Ｊ。
球菌が心臓との交差反応性を有する抗原と非常に深い関
連のあるＭタンパクを産生ずるという事実の発見によっ
て不動のものとなってきた（Ｋａｐｌａｎ、 ”ｒｍ
ｍｕｎｏｌｏａｉｃ Ｉｔｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ５ｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ａｎｄ Ｔｉ５ｓｕｅ Ａｎ
ｔｉ！１ｅｎｓ、 １． Ｐｒ０ｔ）ｅｒｔｉｅ３ ｏ
ｒ’ａ０ 八ｎｔｉｇｅｎ ｉｎ Ｃｅｒｔａｉ
ｎ ５ｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｇｒｏｕｐ Ａ
ＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｎｇ ａ
ｎ Ｌｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｃｒｏｓｓ−Ｒｅａｃｔ
ｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｈｕｍａｎ １ｌｅａｒｔ
Ｔｉ５ｓｕｅ、 Ｊ。
Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｖｏｌ、９０． ｐ、ｓ９ｓ、 （
１９６３）参照）。実際に、最近になって、Ｍタンパク
分子のうちの一つが、その共有結合ＩＲ造内に、ヒト心
臓組織の筋肉タンパクとも交差反応することのできる抗
連鎖球菌防即抗体を誘発するエピトープを有しているこ
とが判明した（Ｄａｌｅ ａｎｄ Ｂｅａｃｈｃｙ、
”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ＾ｎｔｉｇｅｎｉｃ Ｄｅｔ
ｅｒｍｉｎａｎｔ ｏｆ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ
ＨＰｒｏｔｅｉｎ ５ｈａｒｅｄ ｗｉｔｈ
Ｓａｒｃｏｌｅｍｍａｌ ＨｅｍｂｒａｎｅＰｒｏｔ
ｅｉｎｏｒ ｌｌｕｍａｎ ｔｌｅａｒｔ、
Ｊ、 Ｅｘａ、 Ｈｅｄ。
１９６３）参照）。実際に、最近になって、Ｍタンパク
分子のうちの一つが、その共有結合ＩＲ造内に、ヒト心
臓組織の筋肉タンパクとも交差反応することのできる抗
連鎖球菌防即抗体を誘発するエピトープを有しているこ
とが判明した（Ｄａｌｅ ａｎｄ Ｂｅａｃｈｃｙ、
”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ＾ｎｔｉｇｅｎｉｃ Ｄｅｔ
ｅｒｍｉｎａｎｔ ｏｆ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ
ＨＰｒｏｔｅｉｎ ５ｈａｒｅｄ ｗｉｔｈ
Ｓａｒｃｏｌｅｍｍａｌ ＨｅｍｂｒａｎｅＰｒｏｔ
ｅｉｎｏｒ ｌｌｕｍａｎ ｔｌｅａｒｔ、
Ｊ、 Ｅｘａ、 Ｈｅｄ。
Ｖｏｌ、 １５６． Ｉ）＋１．１１６５−１１７６（
１９８２）参照）。
１９８２）参照）。
１９８１年８月１８日発行された米国特許明ｍ書第４．
２８４，５３７号（Ｅ、 Ｂｅａｃｈｅｙ）には、２４
型Ｍタンパクから得られた２つのペプチドフラグメント
のアミノ酸配列が開示されている。更に、これら二つの
天然フラグメントのうちのいずれも、ポリリジンのよう
なキャリアと共有結合された際、化膿連鎖球菌に対して
有効な型持異的オプソニン抗体を誘発し得ることも開示
されている。これら二つのフラグメン１−はいずれも天
然抽出物であって、夫々３５Ｗのアミノ酸を含有してい
る。
２８４，５３７号（Ｅ、 Ｂｅａｃｈｅｙ）には、２４
型Ｍタンパクから得られた２つのペプチドフラグメント
のアミノ酸配列が開示されている。更に、これら二つの
天然フラグメントのうちのいずれも、ポリリジンのよう
なキャリアと共有結合された際、化膿連鎖球菌に対して
有効な型持異的オプソニン抗体を誘発し得ることも開示
されている。これら二つのフラグメン１−はいずれも天
然抽出物であって、夫々３５Ｗのアミノ酸を含有してい
る。
１９８４年６月１２日付発行の米国特許明Ｈｉ出第４．
４５４，１２１号（Ｅ、 Ｂｅａｃｈｅｙ ）には、合
成ペプチド（５−ＣＢ７）が開示されており、僅が１２
個のアミノ酸しか合右していない２４型Ｍタンパクの５
−ＣＢ７特異断片（Ｓ−ＣＢ７ （１８−２９））に
防御抗原決定基が存在していることが示されている。こ
れによると、５−ＣＢ７のＣ末端残基がメチオニンであ
り、そのＣ末端がホモセリンである天然のＣＢ−７１ｉ
片とは異なっていると言われている。更に上記明細書に
は、５−ＣＢ７を適当なハブテンキャリア、例えば天然
物であるＢＳＡ若しくはＯｖ△、又は合成ポリリジンの
ようなものと共有結合させた複合体が開示されている。
４５４，１２１号（Ｅ、 Ｂｅａｃｈｅｙ ）には、合
成ペプチド（５−ＣＢ７）が開示されており、僅が１２
個のアミノ酸しか合右していない２４型Ｍタンパクの５
−ＣＢ７特異断片（Ｓ−ＣＢ７ （１８−２９））に
防御抗原決定基が存在していることが示されている。こ
れによると、５−ＣＢ７のＣ末端残基がメチオニンであ
り、そのＣ末端がホモセリンである天然のＣＢ−７１ｉ
片とは異なっていると言われている。更に上記明細書に
は、５−ＣＢ７を適当なハブテンキャリア、例えば天然
物であるＢＳＡ若しくはＯｖ△、又は合成ポリリジンの
ようなものと共有結合させた複合体が開示されている。
この研究に関づるより訂細な報告は、Ｎａｔｕｒｅ、
Ｊｕｌｙ 、３０，１９８１．Ｂｅａｃｈｅｙ
他、 ２９２． ｐ ４５７−４５９に記載されて
いる。
Ｊｕｌｙ 、３０，１９８１．Ｂｅａｃｈｅｙ
他、 ２９２． ｐ ４５７−４５９に記載されて
いる。
１９８５年６月４日付発行の米国特許明細書箱４．５２
１，３３４号（名称：合成ポリペプチドフラグメント、
Ｅ、 Ｉｆ、 Ｂｅａｃｈｅｙ）には、ＣＢ３ 、ＣＢ
４及びＣＢ５という三種ペプチドフラグメントのアミノ
酸配列、並びＣＢ３−ＣＢ７に含まれる抗原決定基に対
応する抗原決定基を含有する２４型Ｍタンパクの３７ア
ミノ酸配列が開示されている。一方、１９８６年７月１
日付発行の米国特許明細書箱４．５９７．９６７号（名
称：合成ポリペプチドフラグメント、［，１１Ｂｅａｃ
ｈｅｙ）には、ポリリジンのようなキャリアに共有結合
したときに、化膿連鎖球菌に対して有効な型持異的オプ
ソニン抗体を誘発しくりることが開示されている。
１，３３４号（名称：合成ポリペプチドフラグメント、
Ｅ、 Ｉｆ、 Ｂｅａｃｈｅｙ）には、ＣＢ３ 、ＣＢ
４及びＣＢ５という三種ペプチドフラグメントのアミノ
酸配列、並びＣＢ３−ＣＢ７に含まれる抗原決定基に対
応する抗原決定基を含有する２４型Ｍタンパクの３７ア
ミノ酸配列が開示されている。一方、１９８６年７月１
日付発行の米国特許明細書箱４．５９７．９６７号（名
称：合成ポリペプチドフラグメント、［，１１Ｂｅａｃ
ｈｅｙ）には、ポリリジンのようなキャリアに共有結合
したときに、化膿連鎖球菌に対して有効な型持異的オプ
ソニン抗体を誘発しくりることが開示されている。
１９８５年５月３１日出願の米国特許出願第７３９．９
６３号（名称：連鎖球菌Ｍタンパクの生物学的活性ハイ
ブリッドペプチド及びその組成並びに使用、Ｅ、１１、
Ｂｅａｃｈｃｙ他）明細書には、化膿連鎖球菌に対する
オプソニン作用及び殺細菌作用を右し、ヒト又は宿主の
心臓の組織抗原とは血清学的交差反応性を示さない抗体
を誘発することのできる、Ｍ５、Ｍ６及びＭ２４タンパ
クのフラグメントを含有覆るペプチド配列が開示されて
いる。１９８６年５月 １日出願の米国特許出願第８５
８，４３６号（名称：Ｓバ！連鎖球菌Ｍタンパクのアミ
ノ末端の防御エピトープの局在化、Ｅ、 Ｉｔ、 Ｂｅ
ａｃｈｃｙ他）明細書には、Ｍ５型タンパク抗原複合体
の合成についての開示がある。
６３号（名称：連鎖球菌Ｍタンパクの生物学的活性ハイ
ブリッドペプチド及びその組成並びに使用、Ｅ、１１、
Ｂｅａｃｈｃｙ他）明細書には、化膿連鎖球菌に対する
オプソニン作用及び殺細菌作用を右し、ヒト又は宿主の
心臓の組織抗原とは血清学的交差反応性を示さない抗体
を誘発することのできる、Ｍ５、Ｍ６及びＭ２４タンパ
クのフラグメントを含有覆るペプチド配列が開示されて
いる。１９８６年５月 １日出願の米国特許出願第８５
８，４３６号（名称：Ｓバ！連鎖球菌Ｍタンパクのアミ
ノ末端の防御エピトープの局在化、Ｅ、 Ｉｔ、 Ｂｅ
ａｃｈｃｙ他）明細書には、Ｍ５型タンパク抗原複合体
の合成についての開示がある。
また、１９８６年３月１４日出願の米因特ｂ１出願第８
３９、７５０号（名称：合成Ｍタンパク一連鎖球菌（６
型）、［、Ｉｌ、 Ｂｅａｃｈｃｙ他）明細内には、Ｍ
６型タンパク抗原複合体の合成が開示されている。
３９、７５０号（名称：合成Ｍタンパク一連鎖球菌（６
型）、［、Ｉｌ、 Ｂｅａｃｈｃｙ他）明細内には、Ｍ
６型タンパク抗原複合体の合成が開示されている。
１掲の特許用朝出は、リコーマヂ熱及びリューマヂ性心
臓疾■の原因となる連鎖球菌感染症に対づる安全かつ有
効なワクチンの開発に貢献しく９る、免疫原性のある小
ペプチドフラグメントを開示するものである。ここで用
いられる手法は、非常に小さいペプチドを使用すること
によって、Ｍタンパク分子の大きな部分を除去すること
が可能になり、これによって、ヒト組織との免疫学交差
反応が誘発される１会を減らそうというものである。
臓疾■の原因となる連鎖球菌感染症に対づる安全かつ有
効なワクチンの開発に貢献しく９る、免疫原性のある小
ペプチドフラグメントを開示するものである。ここで用
いられる手法は、非常に小さいペプチドを使用すること
によって、Ｍタンパク分子の大きな部分を除去すること
が可能になり、これによって、ヒト組織との免疫学交差
反応が誘発される１会を減らそうというものである。
化膿連鎖球菌Ｍタンパクの合成ペプチドによって引き起
こされる型特異的防御免疫についてのその他の情報に関
しては、Ｂｅａｃｈｅｙ、ｅｔ ａｌ、、”Ｔｙｐｅ
Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎ
ｉｔｙ Ｅｖｏｋｅｄ ｂｙ ５ｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐ
ｅｐｔｉｄｅ Ｏｆ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｙｏａｅｎｅｓ ＨＰｒｏｔｅｉｎ ” Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｖｏｌ、２９２． Ｎｏ、５８２２． ｐｐ
４５７−４５９ （Ｊｕｌｙ ３０．１９８１）参照
のこと。
こされる型特異的防御免疫についてのその他の情報に関
しては、Ｂｅａｃｈｅｙ、ｅｔ ａｌ、、”Ｔｙｐｅ
Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎ
ｉｔｙ Ｅｖｏｋｅｄ ｂｙ ５ｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐ
ｅｐｔｉｄｅ Ｏｆ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｙｏａｅｎｅｓ ＨＰｒｏｔｅｉｎ ” Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｖｏｌ、２９２． Ｎｏ、５８２２． ｐｐ
４５７−４５９ （Ｊｕｌｙ ３０．１９８１）参照
のこと。
更に、Ｈａｓｔｙ、 ｅｔ ａｌｓ、 ”ｌ（ｙｂｒｉ
ｄｏｍａｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ 八ｇａｉｎｓｔ
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｎｏｎ−Ｐｒ
ｏｔｅｃｔｉｖｅ Ａｎｔｇｃｎｉｃ Ｄｅｔｅｒｍ
ｉｎａｎｔｓ ｏｆ ａ ５ｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ
ＤｅｆｉｎｅｄＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｇｍ
ｅｎｔ ｏｆ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ＨＰｒ
ｏｔｅｉｎ、” Ｊ、 ＥＸＩ）、 Ｈｅｄ、
Ｖｏｌ、１５５． ｐ（Ａｐｒｉｌ １９８２）
；ａｎｄ ｔｌｏｐｐ ａｎｄ Ｗｏｏｄｓ、”
Ｐｒｅｄｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｎｔｉｇｅｎｉ
ｃ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｆｒｏｍＡｃｉｄ
５ｅｑｕｅｎｃｅｓ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａ口、 Ａ
ｃａｄ。
ｄｏｍａｓ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ 八ｇａｉｎｓｔ
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｎｏｎ−Ｐｒ
ｏｔｅｃｔｉｖｅ Ａｎｔｇｃｎｉｃ Ｄｅｔｅｒｍ
ｉｎａｎｔｓ ｏｆ ａ ５ｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ
ＤｅｆｉｎｅｄＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｇｍ
ｅｎｔ ｏｆ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ＨＰｒ
ｏｔｅｉｎ、” Ｊ、 ＥＸＩ）、 Ｈｅｄ、
Ｖｏｌ、１５５． ｐ（Ａｐｒｉｌ １９８２）
；ａｎｄ ｔｌｏｐｐ ａｎｄ Ｗｏｏｄｓ、”
Ｐｒｅｄｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｎｔｉｇｅｎｉ
ｃ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｆｒｏｍＡｃｉｄ
５ｅｑｕｅｎｃｅｓ、 Ｐｒｏｃ、 Ｎａ口、 Ａ
ｃａｄ。
ｕＳ＾、Ｖｏｌ、７８．Ｎｏ、６，１１１）、３８２４
−２８ （Ｊｕｎｅ参照のこと。
−２８ （Ｊｕｎｅ参照のこと。
ｔｌＯｎ
八ｍｌｎ。
Ｓｃ＋。
１９８１ ）も
これまでに述べたような進展にもかかわらず、これらの
非交差反応性免疫原性ポリペプチドを含有する経口投与
用ワクチンの開発は未だなされておらず、これらについ
ては依然として強い要望が存在する。
非交差反応性免疫原性ポリペプチドを含有する経口投与
用ワクチンの開発は未だなされておらず、これらについ
ては依然として強い要望が存在する。
本発明は、これらのペプチドを、それらを合成すること
のできる弱毒化非毒性組換細菌の形態で投与することに
よって、当該医薬分野、特に連鎖球菌感染の抑制に於い
て更なる進展と進歩をもたらすものである。
のできる弱毒化非毒性組換細菌の形態で投与することに
よって、当該医薬分野、特に連鎖球菌感染の抑制に於い
て更なる進展と進歩をもたらすものである。
Ｍタンパクについては数々の血清型が知られており、そ
れらは互いに対立遺伝子である遺伝子上にコードされて
いる。各血清型は化膿連鎖球菌の貸なる株に対応し、夫
々のアミン末端配列において識別されるのみである。
れらは互いに対立遺伝子である遺伝子上にコードされて
いる。各血清型は化膿連鎖球菌の貸なる株に対応し、夫
々のアミン末端配列において識別されるのみである。
本発明は、全般に、連鎖球菌感染に対するオプソニン抗
体の誘発に有効な連鎖球菌Ｍタンパク抗原又は抗原フラ
グメントの合成に関する、遺伝子工学的手法に係わるも
のである。特に、本発明は、連鎖球菌Ｍタンパク抗原を
コード・発現する外来性核酸配列を含有する、非毒性形
質転換菌を提供するものである。
体の誘発に有効な連鎖球菌Ｍタンパク抗原又は抗原フラ
グメントの合成に関する、遺伝子工学的手法に係わるも
のである。特に、本発明は、連鎖球菌Ｍタンパク抗原を
コード・発現する外来性核酸配列を含有する、非毒性形
質転換菌を提供するものである。
更に本発明は、連鎖球菌感染症に対するオプソニン抗体
の誘発に有効である、発現された連鎖球菌Ｍタンパク抗
原を含有する非毒性形質転換宿主ノヒも提供する。
の誘発に有効である、発現された連鎖球菌Ｍタンパク抗
原を含有する非毒性形質転換宿主ノヒも提供する。
本発明のもう一つの目的は、非毒性細菌の毒性形態（Ｖ
ＵｒＵｌｅｎｔ ｒｏｒｍ）に対して有効なタンパク抗
原を提供するものである。
ＵｒＵｌｅｎｔ ｒｏｒｍ）に対して有効なタンパク抗
原を提供するものである。
本発明の特定目的の一つは、Ｍタンパク遺伝子、得、５
型Ｍタンパク遺伝子をコードするプラスミドを有する、
サルモネラ属の非毒性形質転換細菌、特に、チフィムリ
ウム種に属する該転換細菌を提供することにある。
型Ｍタンパク遺伝子をコードするプラスミドを有する、
サルモネラ属の非毒性形質転換細菌、特に、チフィムリ
ウム種に属する該転換細菌を提供することにある。
更に、本発明の目的は、連鎖球菌感染に対する全身性免
疫を付与し得るオプソニン抗体を誘発するに有効な連鎖
球菌Ｍタンパク抗原を提供することにある。
疫を付与し得るオプソニン抗体を誘発するに有効な連鎖
球菌Ｍタンパク抗原を提供することにある。
一つ以上のＭ血清型連鎖法菌株に対するオプソニン抗体
を誘発するに有効な多価連鎖球菌Ｍタンパク抗原を提供
するのも本発明の目的の一つである。
を誘発するに有効な多価連鎖球菌Ｍタンパク抗原を提供
するのも本発明の目的の一つである。
細菌の表面上にではなく、その細胞質内で発現された連
鎖球菌Ｍタンパク抗原を提供することも本発明の目的の
一つである。
鎖球菌Ｍタンパク抗原を提供することも本発明の目的の
一つである。
更に、本発明は、連鎖球菌Ｍタンパク抗原をコードする
遺伝子がクローニングされた宿主、特に非毒性外来微生
物宿主によって発現された際に、免疫を誘発するが、ヒ
ト組織、特に心！ｉｉ組織とは血清学的に交差反応性を
有することのない有効な抗原となり得る、連鎖球菌Ｍタ
ンパク抗原を提供することである。
遺伝子がクローニングされた宿主、特に非毒性外来微生
物宿主によって発現された際に、免疫を誘発するが、ヒ
ト組織、特に心！ｉｉ組織とは血清学的に交差反応性を
有することのない有効な抗原となり得る、連鎖球菌Ｍタ
ンパク抗原を提供することである。
連鎖法菌属の非Ａ群種に属する非毒性形質転換細菌を提
供することも本発明の目的の一つである。
供することも本発明の目的の一つである。
本発明の目的の一つは、非毒性であるにも拘らず、抗体
を誘発することのできる、形質転換宿主、例えば、細菌
、特に非毒性腸内細菌（ｅｎｔｅｒｉＣｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）を提供することにある。
を誘発することのできる、形質転換宿主、例えば、細菌
、特に非毒性腸内細菌（ｅｎｔｅｒｉＣｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）を提供することにある。
本発明の目的の一つは、免疫対象物内でコロニーを形成
することはないが、抗体の誘発に必要な限定された程度
で増殖する、非毒性形質転換宿主細菌を提供することで
ある。
することはないが、抗体の誘発に必要な限定された程度
で増殖する、非毒性形質転換宿主細菌を提供することで
ある。
本発明の目的の一つは、サルＥネラ・チフィムリウムの
形質転換であり、また、ストレプトコッカス・サングイ
スの形質転換をも目的とする。
形質転換であり、また、ストレプトコッカス・サングイ
スの形質転換をも目的とする。
本発明の更に別の目的の一つは、他の細菌種に対するオ
プソニン抗体を誘発するに有効なタンパク抗原をコード
し発現する、他のＩＩ菌種の外来性ヌクレオチド配列が
クローニングされている、非毒性形質転換宿主細菌であ
る。
プソニン抗体を誘発するに有効なタンパク抗原をコード
し発現する、他のＩＩ菌種の外来性ヌクレオチド配列が
クローニングされている、非毒性形質転換宿主細菌であ
る。
また、他の細菌種の抗原をコードし発現する遺伝子によ
って担持されているヌクレオチド配列を提供することも
本発明が目的とするものである。
って担持されているヌクレオチド配列を提供することも
本発明が目的とするものである。
また、非毒性形質転換宿主を製造するための、種々の遺
伝子工学的成分を提供することも本発明の目的の一つで
ある。
伝子工学的成分を提供することも本発明の目的の一つで
ある。
宿主細菌内に、連鎖球菌、特に血清型５．６及び２４の
連鎖球菌に対するオプソニン抗体を誘発するに有効な免
疫原性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をク
ローニングすることも本発明の目的の一つである。
連鎖球菌に対するオプソニン抗体を誘発するに有効な免
疫原性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をク
ローニングすることも本発明の目的の一つである。
抗−付着抗体（ａｎｔｉ−ａｄｈｅｓｉｖｅ ａｎｔｉ
ｂｏｄｙ）を誘発する大腸菌表面抗原をコードするヌク
レオチド配列を宿主細菌内でクローニングすることも本
発明の目的の一つである。
ｂｏｄｙ）を誘発する大腸菌表面抗原をコードするヌク
レオチド配列を宿主細菌内でクローニングすることも本
発明の目的の一つである。
非毒性細菌を調製するための遺伝子工学的操作も本発明
の目的である。
の目的である。
所望の連鎖球菌Ｍタンパク抗原を発現する外来性ヌクレ
オチド配列をサルモネラ・チフィムリウムでクローニン
グするのに必要とされる、プラスミド及び他の構築物を
製造することも本発明の目的である。特に、八ｒＯのサ
ルモネラ・チフイムリウム５Ｌ３２６１内で安定的に発
現されるプラスミド７′）製造は本発明の目的の一つで
ある。
オチド配列をサルモネラ・チフィムリウムでクローニン
グするのに必要とされる、プラスミド及び他の構築物を
製造することも本発明の目的である。特に、八ｒＯのサ
ルモネラ・チフイムリウム５Ｌ３２６１内で安定的に発
現されるプラスミド７′）製造は本発明の目的の一つで
ある。
連鎖球菌感染に対するオプソニン抗体を誘発し全身性免
疫を付与するに有効な投与はで、外来性ヌクレオチド配
列を含有する前記非ｍ性形質転換細菌をヒト等の哺乳動
物に投与し、連鎖球菌感染に対する免疫を付与すること
から成る、哺乳動物の免疫法も本発明の目的の一つであ
る。
疫を付与するに有効な投与はで、外来性ヌクレオチド配
列を含有する前記非ｍ性形質転換細菌をヒト等の哺乳動
物に投与し、連鎖球菌感染に対する免疫を付与すること
から成る、哺乳動物の免疫法も本発明の目的の一つであ
る。
非経口・経口投与を含めた本発明組成物の投与も本発明
の目的となる。
の目的となる。
連鎖球菌型の経口感染に対する免疫の提供も本発明の目
的の一つである。
的の一つである。
投与対象体によって非常に良く許容される非毒性組成物
を提供することも本発明の目的の一つである。
を提供することも本発明の目的の一つである。
経口投与にもかかわらず、患者の免疫が全身性であって
、比較的迅速かつ完全なものであることは本発明の顕著
な特徴の一つである。
、比較的迅速かつ完全なものであることは本発明の顕著
な特徴の一つである。
これまでに引用した文献に加えて、Ｂｒｏｗｎ Ｃｔ
ａｌ、、 ”Ａｎ Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ａｒｏＡ
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ Ｖａ
ｃｃｉｎｅ Ｅｌｉｃｉｔｓ Ｈｕｍｏｒａｌ ａｎｄ
Ｃｅ１ｌｕｌａｒ １ｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ Ｃ
１ｏｎｅｄ Ｇａ１ａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｉｎ
Ｈｅｃｅ、” ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｖｏｌ、
１５５．Ｎ。
ａｌ、、 ”Ａｎ Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ａｒｏＡ
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ Ｖａ
ｃｃｉｎｅ Ｅｌｉｃｉｔｓ Ｈｕｍｏｒａｌ ａｎｄ
Ｃｅ１ｌｕｌａｒ １ｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ Ｃ
１ｏｎｅｄ Ｇａ１ａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｉｎ
Ｈｅｃｅ、” ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｖｏｌ、
１５５．Ｎ。
１ （Ｊａｎｕａｒｙ １９８７）を挙げることができ
る。この文献は、サルモネラ・チフイリウム株３１３２
６１及びプラスミドｐＸＹ４１１のキャリアとして用い
られる弱また、本発明技術分野に於ける傘改技術を紹介
するその他の文献を本明細書の最後に列記した。
る。この文献は、サルモネラ・チフイリウム株３１３２
６１及びプラスミドｐＸＹ４１１のキャリアとして用い
られる弱また、本発明技術分野に於ける傘改技術を紹介
するその他の文献を本明細書の最後に列記した。
このＢｒｏｗｎ ｅｔ ａｌの刊行物は本明細餌の参考
文献とする。その他の関連ある刊行物は、Ｈｏ１ｓｃｔ
ｈ及び５ｔｏｃｋｅｒ “＾ｒｏｍａｔｉｃ−ｄｅｐ
ｅｎｄｅｎｔ ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＴｙｐｈｉｍｕｒ
ｉｕｍ ａｒｅ Ｎｏｎ−Ｖｉｒｕｌｅｎｔ ａｎｄ
ＥＨｅｃｔｉｖｅａｓ Ｌｉｖｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ
、” Ｎａｔｒｕｅ、 Ｖｏｌ、２９１（Ｈａｙ ２１
１９８１）； Ｓｍ１ｔｈ、 ｅｔ ａｌ、、 ”Ａ
ｒｏｍａｔｉｃ−ＤｅｐｅｎｄｅｎｔＳａｌｍｏｎｅｌ
ｌａ ＴｙｐｈｉＩＩｌｕｒｉｕＩＩｌａｒｅ Ｎ０Ｎ
−Ｖｉｒｕｌｅｎｔ ａｎｄＥＨｅｃｔｉｖｅ ａｓ
Ｌｉｖｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ、 ”Ａｍ、Ｊ、Ｖｅｔ
、Ｒｅ５Ｖｏ１．４５ Ｎｏ、１ （Ｊａｎｕａｒｙ
１９８４）； Ｓｍ１ｔｈ ｅｔ ａ“Ｖａｃｃ
ｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａ１ｖｅｓ 八ｇａｉ
ｎｓｔ ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＤｕｂｌｉｎ ｗｉｔ
ｈ Ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｓａ
ｌｍｏｎｅｌｌａＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｌｌｌ、” Ａ
ＩＲ，Ｊ、 Ｖｅｔ Ｒｅｓ、 Ｖｏｌ、４５ Ｎｏ
、１１（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １９８４）； Ｈａｓ
ｋｅｌｌ、ｅｔ ａｌ、、”Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒ＋ｕｍ ａｓ
Ｌｉｖｅ ０ｒａｌ Ｖａｃｃｎｅｓ ａｎｄ
Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ
＾ｎｔｉｇｅｎｓ ｔ。
文献とする。その他の関連ある刊行物は、Ｈｏ１ｓｃｔ
ｈ及び５ｔｏｃｋｅｒ “＾ｒｏｍａｔｉｃ−ｄｅｐ
ｅｎｄｅｎｔ ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＴｙｐｈｉｍｕｒ
ｉｕｍ ａｒｅ Ｎｏｎ−Ｖｉｒｕｌｅｎｔ ａｎｄ
ＥＨｅｃｔｉｖｅａｓ Ｌｉｖｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ
、” Ｎａｔｒｕｅ、 Ｖｏｌ、２９１（Ｈａｙ ２１
１９８１）； Ｓｍ１ｔｈ、 ｅｔ ａｌ、、 ”Ａ
ｒｏｍａｔｉｃ−ＤｅｐｅｎｄｅｎｔＳａｌｍｏｎｅｌ
ｌａ ＴｙｐｈｉＩＩｌｕｒｉｕＩＩｌａｒｅ Ｎ０Ｎ
−Ｖｉｒｕｌｅｎｔ ａｎｄＥＨｅｃｔｉｖｅ ａｓ
Ｌｉｖｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ、 ”Ａｍ、Ｊ、Ｖｅｔ
、Ｒｅ５Ｖｏ１．４５ Ｎｏ、１ （Ｊａｎｕａｒｙ
１９８４）； Ｓｍ１ｔｈ ｅｔ ａ“Ｖａｃｃ
ｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａ１ｖｅｓ 八ｇａｉ
ｎｓｔ ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＤｕｂｌｉｎ ｗｉｔ
ｈ Ａｒｏｍａｔｉｃ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｓａ
ｌｍｏｎｅｌｌａＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｌｌｌ、” Ａ
ＩＲ，Ｊ、 Ｖｅｔ Ｒｅｓ、 Ｖｏｌ、４５ Ｎｏ
、１１（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １９８４）； Ｈａｓ
ｋｅｌｌ、ｅｔ ａｌ、、”Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒ＋ｕｍ ａｓ
Ｌｉｖｅ ０ｒａｌ Ｖａｃｃｎｅｓ ａｎｄ
Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ
＾ｎｔｉｇｅｎｓ ｔ。
ｔｈｅ ５ｅｃｒｅｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｅ ５ｙ
ｓｔｅ１１．” Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８６（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
１９８６）である。
ｓｔｅ１１．” Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８６（Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
１９８６）である。
広い意味でｇｌｌ連ある遺伝子工学分野の特許には次の
ものがある。
ものがある。
Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇａ１ｉｂｅｒｔ等、 １９８４年
１月３１日発行米国特許Ｎｏ、４，４２８，９４１ ”
Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ５ｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｄｉｎ
ｇｔｈｅ ５ｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔ
ｉｔｉｓ Ｂ Ｖｉｒｕｓ、 ＶｅｃｔｏｒＣｏｎｔａ
ｉｎｉｎｇ ５ａｉｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ５ｅｑ
ｕｅｎｃｅ、 Ｐｒｏｃｅｓｓ八ｆｌｏｗｉへｇ ｔ
ｈｅ ０ｂｔｅｎｔｉｏｎ Ｔｈｅｒｅｏｆ ａ
ｎｄ ＡｎｔｉｇｅｎＯｂｔａｉｎｅｄ Ｔｈｅｒｅ
ｂｙ ： Ｈａｒｋ等、 １９８５年 ５月２１日発行
米国特許Ｎｏ、 ４，５１８，５８４ ”Ｈｕｍａｎ
ＲｅｃｏＩｌｌｂｉｎａｎｔＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉ
ｎ−２Ｈｕｔｅｉｎｓ、” ； Ｍａｒｋ等、 １
９８６年 ５月１３日発行米国特許Ｎｏ、４，５８８，
５８５ ” Ｉｌｕｍａｎ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
Ｃｙｓｔｅｉｎｅ Ｄｅｐｌｅｔｅｄ Ｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ−Ｂ Ｈｕｔｅｉｎｓ及びｒｔｕｔｔｅ
ｒ等、１９８７年３月２４日米国特許Ｎｏ。
１月３１日発行米国特許Ｎｏ、４，４２８，９４１ ”
Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ５ｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｄｉｎ
ｇｔｈｅ ５ｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔ
ｉｔｉｓ Ｂ Ｖｉｒｕｓ、 ＶｅｃｔｏｒＣｏｎｔａ
ｉｎｉｎｇ ５ａｉｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ５ｅｑ
ｕｅｎｃｅ、 Ｐｒｏｃｅｓｓ八ｆｌｏｗｉへｇ ｔ
ｈｅ ０ｂｔｅｎｔｉｏｎ Ｔｈｅｒｅｏｆ ａ
ｎｄ ＡｎｔｉｇｅｎＯｂｔａｉｎｅｄ Ｔｈｅｒｅ
ｂｙ ： Ｈａｒｋ等、 １９８５年 ５月２１日発行
米国特許Ｎｏ、 ４，５１８，５８４ ”Ｈｕｍａｎ
ＲｅｃｏＩｌｌｂｉｎａｎｔＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉ
ｎ−２Ｈｕｔｅｉｎｓ、” ； Ｍａｒｋ等、 １
９８６年 ５月１３日発行米国特許Ｎｏ、４，５８８，
５８５ ” Ｉｌｕｍａｎ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
Ｃｙｓｔｅｉｎｅ Ｄｅｐｌｅｔｅｄ Ｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ−Ｂ Ｈｕｔｅｉｎｓ及びｒｔｕｔｔｅ
ｒ等、１９８７年３月２４日米国特許Ｎｏ。
４６２５２５２ ”Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｂａｃｔ
ｅｒｉａｌ ＰｌａｓｍｉｄｓＣｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ｔｈｅ Ｃｏｄｉｎｇ ５ｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
Ｉｎ５ｕｌｉｎｅｎｅｓ ｒａｙｅｒｍａｎ等、 １９８７年５月１９日発行米国
特許Ｎｏ。
ｅｒｉａｌ ＰｌａｓｍｉｄｓＣｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ｔｈｅ Ｃｏｄｉｎｇ ５ｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
Ｉｎ５ｕｌｉｎｅｎｅｓ ｒａｙｅｒｍａｎ等、 １９８７年５月１９日発行米国
特許Ｎｏ。
４６６６８４６ ”Ｎｏｖｅｌ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖ
ｅｃｔｏｒｓ ＣｏｎｔａｉｎｉｎｇＳｅｌｅｃｔａｂ
ｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ Ｕｓ
ｅ ＋ｎ ＳＬｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｎｄ Ｒｅ１
ａｔｅｄ Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ、”及びＡｆｆｏｒｄ等
。
ｅｃｔｏｒｓ ＣｏｎｔａｉｎｉｎｇＳｅｌｅｃｔａｂ
ｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ Ｕｓ
ｅ ＋ｎ ＳＬｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｎｄ Ｒｅ１
ａｔｅｄ Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ、”及びＡｆｆｏｒｄ等
。
１９８７年５月１９日発行米国特許Ｎｏ、 ４，６６６
．８４７”Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｊ ＤＮＡ Ｍｅａｎ
ｓ ａｎｄ Ｈｅｔｈｏｄｓ ”本発明においては、Ｍ
タンパク遺伝子をコードＶるプラスミドは最初にクロー
ニングされ、５ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉにおい
て発現されるのが好ま［）い。大腸ｒｉ！ｉ様群のその
他のいずれの腸内桿菌、例えばＫｌｅｂｓｉｅｌｌａあ
るいはＦｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ等も使用し得るが、通
常は旦、ｃｏｌｉが好ましい。その後、前記のＭ遺伝子
を有するプラスミドをｌｉ離精製し、所望の非毒性細菌
、例えばａｒｏ＾−ｓ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（Ｓ
Ｌ３２６１）を形質転換するための構築物を製造する。
．８４７”Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｊ ＤＮＡ Ｍｅａｎ
ｓ ａｎｄ Ｈｅｔｈｏｄｓ ”本発明においては、Ｍ
タンパク遺伝子をコードＶるプラスミドは最初にクロー
ニングされ、５ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉにおい
て発現されるのが好ま［）い。大腸ｒｉ！ｉ様群のその
他のいずれの腸内桿菌、例えばＫｌｅｂｓｉｅｌｌａあ
るいはＦｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ等も使用し得るが、通
常は旦、ｃｏｌｉが好ましい。その後、前記のＭ遺伝子
を有するプラスミドをｌｉ離精製し、所望の非毒性細菌
、例えばａｒｏ＾−ｓ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（Ｓ
Ｌ３２６１）を形質転換するための構築物を製造する。
この突然変異株はＰＡ８Δ及び２．３−Ｄ Ｉ−Ｉ Ｂ
の両方について栄養標識を示す。前出のＢｒｏｗｎ等を
参照る。Ｃｌｅｍｅｎｔｓ等、”Ｃｏｎ５ｔｒｕｃｔｉ
ｏｎ ｏｒ ａ ＰＯｔｅｎｔｉａＬｉｖｅ Ａｒｏ
Ｖａｃｃｉｎｅ ｏｒ ｔｙｐｈｏｉｄ ｔ
ｙｐｅ ｆｅｖｅｒ ａｎｄｃｈｏｌｏｒｅａ
−Ｅ、ｃｏｌｉ −ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉａｒｒｈ
ｅａｓＩｎｆｅｃｔ、 Ｉｍｍｕｎ、、 ４６：５６４
−９ （１９８４）を参照されたい。また上山のＢｒＱ
Ｗｎ等において弓用されたその伯の文献、記事も参照さ
れたい。これ等も本明細書の参考文献とする。
の両方について栄養標識を示す。前出のＢｒｏｗｎ等を
参照る。Ｃｌｅｍｅｎｔｓ等、”Ｃｏｎ５ｔｒｕｃｔｉ
ｏｎ ｏｒ ａ ＰＯｔｅｎｔｉａＬｉｖｅ Ａｒｏ
Ｖａｃｃｉｎｅ ｏｒ ｔｙｐｈｏｉｄ ｔ
ｙｐｅ ｆｅｖｅｒ ａｎｄｃｈｏｌｏｒｅａ
−Ｅ、ｃｏｌｉ −ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉａｒｒｈ
ｅａｓＩｎｆｅｃｔ、 Ｉｍｍｕｎ、、 ４６：５６４
−９ （１９８４）を参照されたい。また上山のＢｒＱ
Ｗｎ等において弓用されたその伯の文献、記事も参照さ
れたい。これ等も本明細書の参考文献とする。
Ｍタンパク遺伝子をＳ、 ｐｙｏｇｅｎｅｓの有毒株か
ら得るのが好ましい。しかし、Ｓ、 肛赳堕屡の弱毒株
、無ｍ株から該遺伝子を得ることも可能であり、所望の
Ｍタンパクをコードしたヌクレオチド配列を製造するこ
とも可能である。
ら得るのが好ましい。しかし、Ｓ、 肛赳堕屡の弱毒株
、無ｍ株から該遺伝子を得ることも可能であり、所望の
Ｍタンパクをコードしたヌクレオチド配列を製造するこ
とも可能である。
本発明の組換えＤＮＡクローニングベクターは、Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａの単一の種又は株においての使用に限定
されない。それどころか該ベクターの適用は広く、例え
ばＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ属（例えばＳ
ｈｉｇｅｌｌａ、及びＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｅｎ
ｕｍｏｎｉａｅのようなＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ、 Ｅｎ
ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｃｎｅｓのような
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）のような他のダラム陰性細
菌の宿主細胞中で形質転換され得る。Ｓａｌ＋１０ｎｅ
ｌｌａａｒｉｚｏｎａのようなＳａｌｍｏｎｅｌ ｌａ
、及びＣ１ｔｒｏｂａｃｔｅｒは、適当に無毒化あるい
は弱毒化されれば使用し得る。
ｍｏｎｅｌｌａの単一の種又は株においての使用に限定
されない。それどころか該ベクターの適用は広く、例え
ばＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ属（例えばＳ
ｈｉｇｅｌｌａ、及びＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｅｎ
ｕｍｏｎｉａｅのようなＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ、 Ｅｎ
ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｃｎｅｓのような
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）のような他のダラム陰性細
菌の宿主細胞中で形質転換され得る。Ｓａｌ＋１０ｎｅ
ｌｌａａｒｉｚｏｎａのようなＳａｌｍｏｎｅｌ ｌａ
、及びＣ１ｔｒｏｂａｃｔｅｒは、適当に無毒化あるい
は弱毒化されれば使用し得る。
弱み化あるいは無毒化されれば使用し得る通常のＳａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ種としては、ｓ、ｐａｒａｔｙｐｈ＊
ＡＳ、 ｓｃｈｏｔｔｍｕｌｌｅｒｉ 、 Ｓ、
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ 、 Ｓ。
ｍｏｎｅｌｌａ種としては、ｓ、ｐａｒａｔｙｐｈ＊
ＡＳ、 ｓｃｈｏｔｔｍｕｌｌｅｒｉ 、 Ｓ、
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ 、 Ｓ。
ｐａｒａｔｙｐｈｉ Ｃ、Ｓ、 ｃｈｏｌｅｒａｅ
ｓｕｉｓ、 Ｓ、 ｍｏｎｔｅｖｉｄｅｏ、 Ｓ、
ｎｃｗｐｏｒｔ 、 Ｓ、 ｔｙｐｈｉ 、
Ｓ、 ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ 、 Ｓ、 ｇａｌｌ
ｉｎａｒｕｍ、 Ｓ、 ａｎａｔｕｍがある。
ｓｕｉｓ、 Ｓ、 ｍｏｎｔｅｖｉｄｅｏ、 Ｓ、
ｎｃｗｐｏｒｔ 、 Ｓ、 ｔｙｐｈｉ 、
Ｓ、 ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ 、 Ｓ、 ｇａｌｌ
ｉｎａｒｕｍ、 Ｓ、 ａｎａｔｕｍがある。
本発明によれば、一般に免疫群Ａではなく免疫群Ａ−０
の５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ ｒを含む、ｍｔｓ性（Ｄ、
アルいは無毒化もしくは弱毒化された５ｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ属の細菌を本発明の組換えＤＮＡクローニン
グベクターの宿主として使用し得る。細菌宿主として使
用できる適当な５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉにはＳ、 Ｃ
ｒｅｍｏｒｉｓ。
の５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ ｒを含む、ｍｔｓ性（Ｄ、
アルいは無毒化もしくは弱毒化された５ｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ属の細菌を本発明の組換えＤＮＡクローニン
グベクターの宿主として使用し得る。細菌宿主として使
用できる適当な５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉにはＳ、 Ｃ
ｒｅｍｏｒｉｓ。
Ｓ、ｒａｅｃａｌｉｓ Ｓ、５ａｌｉｖａｒｉｕｓ
Ｓ、Ｈｉｔｉｏｒ、 Ｓ。
Ｓ、Ｈｉｔｉｏｒ、 Ｓ。
旧ｔｉｓ 、 Ｓ、 Ｈｕｔａｎｓ及びｓ、 ５ａｎ
ＯＵｉＳがある。最復の種は現在において好ましい種で
ある。
ＯＵｉＳがある。最復の種は現在において好ましい種で
ある。
本発明に従って弱毒化及び形質転換し得る適当な微生物
は他にも知られている。これにはＯａｖ＋ｓ他、Ｈｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ （Ｈａｒｐｅｒ ＆ Ｒｏｗ、第
２版１９７３）を参照することができる。
は他にも知られている。これにはＯａｖ＋ｓ他、Ｈｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ （Ｈａｒｐｅｒ ＆ Ｒｏｗ、第
２版１９７３）を参照することができる。
一般に、いずれの腸内細菌も宿主細菌として使用し１ｑ
る。宿主細菌は患者中でオプソニン反応を発生するのに
充分な期間だけ生存することが好ましいが、弱毒化され
てコロニーを形成しないものの依然として限られた程度
で増殖して外来タンパク質に対し抗体を産生ずるような
任意の細菌株も使用できる。本発明の好ましい実／ＩＩ
態様においてはＳ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕＩｌｌの」
９ 株を使用するが、これは哺乳動物組織には見られな
い２つの代謝物ＰＡＢＡ及び２．３−Ｄ ＨＢを必要と
する。その結果、接種された細菌は数世代後にこれ等の
代謝物の欠如により死滅する。前掲のｔｌｏｉｓｅｊｈ
及び５ｔＯＣｋｅｒを参照されたい。
る。宿主細菌は患者中でオプソニン反応を発生するのに
充分な期間だけ生存することが好ましいが、弱毒化され
てコロニーを形成しないものの依然として限られた程度
で増殖して外来タンパク質に対し抗体を産生ずるような
任意の細菌株も使用できる。本発明の好ましい実／ＩＩ
態様においてはＳ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕＩｌｌの」
９ 株を使用するが、これは哺乳動物組織には見られな
い２つの代謝物ＰＡＢＡ及び２．３−Ｄ ＨＢを必要と
する。その結果、接種された細菌は数世代後にこれ等の
代謝物の欠如により死滅する。前掲のｔｌｏｉｓｅｊｈ
及び５ｔＯＣｋｅｒを参照されたい。
しかしながら、免疫化される患者の組織中に見られない
栄養化合物について代謝異常を有する突張変異微生物物
質、あるいは遺伝子操作によりそのようにされたもので
あればいずれのものも使用できる。
栄養化合物について代謝異常を有する突張変異微生物物
質、あるいは遺伝子操作によりそのようにされたもので
あればいずれのものも使用できる。
血清型５Ｍタンパク質抗原をコードする禍造遺伝子を含
むプラスミドを形質転換した無毒性ａｒｏ Ｓａｌｍ
ｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕ＋＋＋ ３１
３２６１は、完全なＭ５タンパク質分子を発現し、この
発現は殆と完全にｓ、 ｔｙｐｈ；ｍｕｒｔｕｍ細胞質
隔室内に限定される。ストレプトコッカスＭタンパク質
抗原のような免疫原性保護表面抗原が無毒性宿主細菌の
細胞質中に発現されるのは本発明に特有であり予期しく
ｑないことであった。
むプラスミドを形質転換した無毒性ａｒｏ Ｓａｌｍ
ｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕ＋＋＋ ３１
３２６１は、完全なＭ５タンパク質分子を発現し、この
発現は殆と完全にｓ、 ｔｙｐｈ；ｍｕｒｔｕｍ細胞質
隔室内に限定される。ストレプトコッカスＭタンパク質
抗原のような免疫原性保護表面抗原が無毒性宿主細菌の
細胞質中に発現されるのは本発明に特有であり予期しく
ｑないことであった。
このように、本発明に従い、特に血清型５のストレプト
コッカス感染に対するオプソニン抗体産生に有効なタン
パク質抗原をコードし発現する所望のヌクレオチド配列
を種々の宿主にクローニングし１ｑることが判る。従っ
て、広い意味においては複製の後に前記ヌクレオチド配
列が見られる形質転換宿主は前記ヌクレオチド配列に対
して異種である必要はなく、また該配列が微生物に対し
て異種である必要もない。
コッカス感染に対するオプソニン抗体産生に有効なタン
パク質抗原をコードし発現する所望のヌクレオチド配列
を種々の宿主にクローニングし１ｑることが判る。従っ
て、広い意味においては複製の後に前記ヌクレオチド配
列が見られる形質転換宿主は前記ヌクレオチド配列に対
して異種である必要はなく、また該配列が微生物に対し
て異種である必要もない。
温血動物の免疫化の特異内実／Ｉｆ！態様においては、
ａ）血清型５ストレプトコツカスＭタンパク質をコード
するｐＨＫ２Ｏ７ブラスミドを含む無毒性突然変異株Ｓ
ａ １ｍｏｎｅｌ ｌａの１．６５Ｘ １０９までの経
口投与はマウスに充分に許容されること、ｂ）プラスミ
ドｐＨに２０７はｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖ＋ｖｏ
の双方において非常に安定であること、Ｃ）最高投与量
（１０９）の細菌を投与されたマウスは、病理的影響な
しに３週間にも亘って肝に該微生物を成育させたこと、
ｄ）血清型５ストレプトコツカスＭタンパク質抗原遺伝
子を発現する無毒性形質転換５ａｌｌｌｌｏｎｅｌｌａ
により経口的に免疫化されたマウスは、血清型５ストレ
プトコツカスに対し３週間で早くもオプソニン血清抗体
を生産したこと、及びｅ）免疫化されたマウスは、３週
間口に同種血清型Ｍ５（異種血清型Ｍ２４ではない）ス
トレプトコッカスの腹腔内感染に対し完全に保護された
ことが示された。本発明の組成物を経口的に投与した場
合、交差反応免疫が見られないことは特筆に値する。無
毒性細菌中のＭタンパク質抗原の細胞質発現はこの経口
投与に対して特に有利である。抗原は、通常、好ましい
抗原の放出位置である小腸において無毒性細胞が死滅し
該抗原を放出するまで、該抗原は無毒性細菌の細胞質中
で胃の酸及び他の有害物質から保護される。
ａ）血清型５ストレプトコツカスＭタンパク質をコード
するｐＨＫ２Ｏ７ブラスミドを含む無毒性突然変異株Ｓ
ａ １ｍｏｎｅｌ ｌａの１．６５Ｘ １０９までの経
口投与はマウスに充分に許容されること、ｂ）プラスミ
ドｐＨに２０７はｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖ＋ｖｏ
の双方において非常に安定であること、Ｃ）最高投与量
（１０９）の細菌を投与されたマウスは、病理的影響な
しに３週間にも亘って肝に該微生物を成育させたこと、
ｄ）血清型５ストレプトコツカスＭタンパク質抗原遺伝
子を発現する無毒性形質転換５ａｌｌｌｌｏｎｅｌｌａ
により経口的に免疫化されたマウスは、血清型５ストレ
プトコツカスに対し３週間で早くもオプソニン血清抗体
を生産したこと、及びｅ）免疫化されたマウスは、３週
間口に同種血清型Ｍ５（異種血清型Ｍ２４ではない）ス
トレプトコッカスの腹腔内感染に対し完全に保護された
ことが示された。本発明の組成物を経口的に投与した場
合、交差反応免疫が見られないことは特筆に値する。無
毒性細菌中のＭタンパク質抗原の細胞質発現はこの経口
投与に対して特に有利である。抗原は、通常、好ましい
抗原の放出位置である小腸において無毒性細胞が死滅し
該抗原を放出するまで、該抗原は無毒性細菌の細胞質中
で胃の酸及び他の有害物質から保護される。
本発明によれば、前記無毒性ａ菌は、ストレプトコッカ
ス感染に対して免疫を与えるのに特に有用であり、ヒト
組織抗原、特に心臓のもと交差反応を生起しない免疫原
性ポリペプチドをコードし、発現するヌクレオチド配列
を含む組換体ＤＮＡクローニングベクターの宿主として
も使用し得る。
ス感染に対して免疫を与えるのに特に有用であり、ヒト
組織抗原、特に心臓のもと交差反応を生起しない免疫原
性ポリペプチドをコードし、発現するヌクレオチド配列
を含む組換体ＤＮＡクローニングベクターの宿主として
も使用し得る。
本発明による免疫原性ポリペプチドは、自己免疫エピト
ープを欠くＭタンパク分子の領域をコピーする合成オリ
ゴペプチドを含む。これ等は、Ｅ、 Ｂｅａｃｈｅｙ等
、 １９８１年８月１８日発行米国特許Ｎ。
ープを欠くＭタンパク分子の領域をコピーする合成オリ
ゴペプチドを含む。これ等は、Ｅ、 Ｂｅａｃｈｅｙ等
、 １９８１年８月１８日発行米国特許Ｎ。
４２８４５３７ 、Ｅ、Ｂｅａｃｈｅｙ 、 １９８４
年６月１２日発行米国特許Ｎｏ、 ４４５４１２１、Ｅ
、８ｅａｃｈｅｙ 、 １９８５年 ６月 ４日発行
米国特許Ｎｏ、 ４５２１３３４、Ｅ、Ｂｅａｃｈｅｙ
、 １９８６年１月１日発行米国特許Ｎｏ、 ４５９
７９６７、Ｅ、Ｂｅａｃｈｅｙ 、 １９８５年３月３
１日出願米国特許出願Ｎｏ、 ７３９９６３、ＥＢｅａ
ｃｈｅｙ等、 １９８６年３月１４日出願米国特許出願
順８３９７５０及びＥ、 Ｂｅａｃｈｅｙ等、 １９
８６年 ３月 １日出願米ｌ特許出願Ｎｏ、 ８５８４
３６に記載されている。上記は全て本明細書の参考文献
とする。
年６月１２日発行米国特許Ｎｏ、 ４４５４１２１、Ｅ
、８ｅａｃｈｅｙ 、 １９８５年 ６月 ４日発行
米国特許Ｎｏ、 ４５２１３３４、Ｅ、Ｂｅａｃｈｅｙ
、 １９８６年１月１日発行米国特許Ｎｏ、 ４５９
７９６７、Ｅ、Ｂｅａｃｈｅｙ 、 １９８５年３月３
１日出願米国特許出願Ｎｏ、 ７３９９６３、ＥＢｅａ
ｃｈｅｙ等、 １９８６年３月１４日出願米国特許出願
順８３９７５０及びＥ、 Ｂｅａｃｈｅｙ等、 １９
８６年 ３月 １日出願米ｌ特許出願Ｎｏ、 ８５８４
３６に記載されている。上記は全て本明細書の参考文献
とする。
血清型Ｍ２４ポリペプチドの高多価ワクチンのキレリア
ーとしての能力は、他の血清型Ｍポリペブ升ドフラグメ
ントと共に試験中である。
ーとしての能力は、他の血清型Ｍポリペブ升ドフラグメ
ントと共に試験中である。
本発明のもう一つの研究は、Ｍタンパク質発現ｌラスミ
ドにより形質転換されたＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓ
ａｎｇｕ ＋ ｓ細菌の使用である。血清型タイプ５Ｍ
タンパク質のＳ、ｓａｎｇｕｉｓにおける発現を行なっ
た。
ドにより形質転換されたＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓ
ａｎｇｕ ＋ ｓ細菌の使用である。血清型タイプ５Ｍ
タンパク質のＳ、ｓａｎｇｕｉｓにおける発現を行なっ
た。
Ｍタンパク遺伝子はシャトルベクタープラスミドに担持
されて宿主細菌中に形質転換され、該宿主細菌はその表
面に血清ｎ：！５Ｍタンパクフィブリルを発現した。さ
らにこの生物はフィブリノーゲンを結合することができ
、これにより該微生物を食作用に対して抵抗性とした。
されて宿主細菌中に形質転換され、該宿主細菌はその表
面に血清ｎ：！５Ｍタンパクフィブリルを発現した。さ
らにこの生物はフィブリノーゲンを結合することができ
、これにより該微生物を食作用に対して抵抗性とした。
本発明による、５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染に対す
る免疫化の望ましい方法は、ρ孔内に弱毒化Ｓ。
る免疫化の望ましい方法は、ρ孔内に弱毒化Ｓ。
ｓａｎｇｕｉｓを浸潤させ、通常５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓが宿主に侵入する正にその個所に局所免疫反応を
起すことである。
ｃｕｓが宿主に侵入する正にその個所に局所免疫反応を
起すことである。
本発明によるもう１つの研究は、宿主生物中に、Ｍタン
パク質発現プラスミドと共に第３のバクテリア種の抗原
を発現するプラスミドをクローニングすることである。
パク質発現プラスミドと共に第３のバクテリア種の抗原
を発現するプラスミドをクローニングすることである。
特に、Ｅ、ｃｏｌｉ ｃｓｌｌｓ。
株からクローン化されたｐｓｌ＋−２プラスミドをＳａ
ｌ］ゆユ旦ｕｒｉｕｍ中にクローニングし、宿主にＥ、
ｃｏｌｉ２９キロダルトン表面抗原を産生させた。これ
はＦｉｍ）−１抗開着抗体を産生ずる。これ等の抗開着
抗体はＥ、ｃｏｌｉに対して有効なだけではなく、他の
ダラム陰性細菌に対しても有効である。
ｌ］ゆユ旦ｕｒｉｕｍ中にクローニングし、宿主にＥ、
ｃｏｌｉ２９キロダルトン表面抗原を産生させた。これ
はＦｉｍ）−１抗開着抗体を産生ずる。これ等の抗開着
抗体はＥ、ｃｏｌｉに対して有効なだけではなく、他の
ダラム陰性細菌に対しても有効である。
本発明に特徴的な他の利点は、以下の非限定的実施例か
ら明らかになろう。
ら明らかになろう。
実施例 １
ＳＬｏｃｋｅｒ及びｔｌｏｓｅｉｔｈ （前掲）によ
り開発されたＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕ
ｒｉｕｍ ＳＬ ３２６１のａｒｏ−株を選択した。
り開発されたＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕ
ｒｉｕｍ ＳＬ ３２６１のａｒｏ−株を選択した。
この突然変異株形態の微生物物質は感染し得るが疾病を
引き起さないからである。この突然変異株はｐ−アミノ
安息香酸（ＰＡＢＡ）及び２．３−ジヒドロ安患香１１
９（［）Ｈｅ）の両者に栄養標識を示す。前掲の５ｔｏ
ｃｋｅｒ及び１ＩＯｓｅｉｔｈを参照されたい。
引き起さないからである。この突然変異株はｐ−アミノ
安息香酸（ＰＡＢＡ）及び２．３−ジヒドロ安患香１１
９（［）Ｈｅ）の両者に栄養標識を示す。前掲の５ｔｏ
ｃｋｅｒ及び１ＩＯｓｅｉｔｈを参照されたい。
Ｋｅｈｏｅ等、”ＣＩｏｎｉｒ＋ｏ ａｎｄ Ｇｅ
ｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ ５ｅｒｏｔｙｐｅ
５ｔ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｏ
ｒ ＧｒｏｕｐＡ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ：Ｅｖｉ
ｄｅｎｃｅ ｆｏｒ Ｈｕｌｔｉｐｌｅ Ｃｏｐｉｅｓ
ｏｒ ｔｈｅ Ｈ５Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｉｎ ｔ
ｈｅ ＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙＯｇｅｎｅｓ
Ｇｅｎｏｍｅ、” Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎｌ、
Ｖｏ、４８． ｐｐ１９０−１９７ （１９８５）及
びＰｏ１ｒｅｒ等、”Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆＰｒ
ｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｃａｒｄｉａｃ Ｔｉ５ｓ
ｕｅ Ｃｒｏｓｓ−ＲｅａｃｔｉｖｅＥｐｉｔｏｐｅｓ
ｏｆ Ｔｙｐｅ ５５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｈ
Ｐｒｏｔｅｉｎｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ ”Ｉｎｆｅｃｔ、 ｒｍｌＩｌｕｎＶｏｌ、
４８． ｐｐ、１９８−２０３ （１９８５） ニ記載
（７）Ｊ：ウニＬＴ、Ｍ５タンパク抗原構造遺伝子（ｓ
ｍｐ５）をＥ、ｃｏｌｉＬＥ３９２中でクローニングし
発現させた。これ等の二つの文献は水切１０書の参考文
献とする。
ｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ ５ｅｒｏｔｙｐｅ
５ｔ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｏ
ｒ ＧｒｏｕｐＡ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ：Ｅｖｉ
ｄｅｎｃｅ ｆｏｒ Ｈｕｌｔｉｐｌｅ Ｃｏｐｉｅｓ
ｏｒ ｔｈｅ Ｈ５Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｉｎ ｔ
ｈｅ ＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙＯｇｅｎｅｓ
Ｇｅｎｏｍｅ、” Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎｌ、
Ｖｏ、４８． ｐｐ１９０−１９７ （１９８５）及
びＰｏ１ｒｅｒ等、”Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆＰｒ
ｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｃａｒｄｉａｃ Ｔｉ５ｓ
ｕｅ Ｃｒｏｓｓ−ＲｅａｃｔｉｖｅＥｐｉｔｏｐｅｓ
ｏｆ Ｔｙｐｅ ５５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｈ
Ｐｒｏｔｅｉｎｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ ”Ｉｎｆｅｃｔ、 ｒｍｌＩｌｕｎＶｏｌ、
４８． ｐｐ、１９８−２０３ （１９８５） ニ記載
（７）Ｊ：ウニＬＴ、Ｍ５タンパク抗原構造遺伝子（ｓ
ｍｐ５）をＥ、ｃｏｌｉＬＥ３９２中でクローニングし
発現させた。これ等の二つの文献は水切１０書の参考文
献とする。
ＢｕｌｌａＳ及びＲｙｏ、”Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＬＴ２ ５ｔｒａｉｎｓ ｗｈ
ｉｃｈ ａｒｅ ｒ ｍ＋ ｆｏｒ ａｌｌ Ｔｈ
ｒｅｅＣｈｒａｒｎｏｓｏｍａｌｌｙ Ｌｏｃａｔｅ
ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｒ ［ｌＮＡ Ｒｅ５
ｔｒｉｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ ” Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ Ｖ
。
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＬＴ２ ５ｔｒａｉｎｓ ｗｈ
ｉｃｈ ａｒｅ ｒ ｍ＋ ｆｏｒ ａｌｌ Ｔｈ
ｒｅｅＣｈｒａｒｎｏｓｏｍａｌｌｙ Ｌｏｃａｔｅ
ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｒ ［ｌＮＡ Ｒｅ５
ｔｒｉｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ ” Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ Ｖ
。
１５６、 ｐＯ，４７１−４７４（１９ｇ３）及びＬｅ
ｄｅｒｂｅｒｇ及びＣｏｈｅｎ、 ’″Ｔｒａｎｓｆｏ
ｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙ
ｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ｂｙ Ｐｌａｓｌｉｄ
［１ｅｏｘｙｒｉｂｏ口ｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ、”
Ｊ。
ｄｅｒｂｅｒｇ及びＣｏｈｅｎ、 ’″Ｔｒａｎｓｆｏ
ｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙ
ｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ｂｙ Ｐｌａｓｌｉｄ
［１ｅｏｘｙｒｉｂｏ口ｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ、”
Ｊ。
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ 、、Ｖｏｌ、１１９．ＤＤ、１
０７２−１０７４ （１９７４）に記載のようにして
、プラスミドｐｉ（Ｋ２Ｏ２を単離し、精製し、最初１
．： Ｓａｌ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒ＋ｕｎ＋ （７）ｒ
ｍ”株１、 Ｂ ５０００中に形質転換した。上記二つ
の文献は水明ｉｓの参考文献とする。その後上記に引用
したＬｅｄｅｒｂｅｒｇ及びＣ０ｈＧｎ及びＢｕｌｌａ
ｓ及びＲｙｏによって記載された同じ手順を使用してＬ
Ｂ５０００から単離ｖＪ’Ｎしたプラスミドを−ａｒｏ
Ｓａｌ、 ｔ ｐｉｍｕｒｉｕｍＳＬ３２６１を形
質転換するのに使用した。
０７２−１０７４ （１９７４）に記載のようにして
、プラスミドｐｉ（Ｋ２Ｏ２を単離し、精製し、最初１
．： Ｓａｌ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒ＋ｕｎ＋ （７）ｒ
ｍ”株１、 Ｂ ５０００中に形質転換した。上記二つ
の文献は水明ｉｓの参考文献とする。その後上記に引用
したＬｅｄｅｒｂｅｒｇ及びＣ０ｈＧｎ及びＢｕｌｌａ
ｓ及びＲｙｏによって記載された同じ手順を使用してＬ
Ｂ５０００から単離ｖＪ’Ｎしたプラスミドを−ａｒｏ
Ｓａｌ、 ｔ ｐｉｍｕｒｉｕｍＳＬ３２６１を形
質転換するのに使用した。
形質転換されたＬＢ５０００及び５Ｌ３２６１は完全Ｍ
５り／バク分子を発現することが、全細胞溶解物のウレ
ーン１及び２）。Ｍ５タンパク質の典型的ｔｆ三重線（
前掲のＰｏ１ｒｅｒ等及びＫｅｈＯｅ等参照）は、バン
ドＭｒ ５９．５６及び５４にとして移動した。Ｓａｔ
ｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ５Ｌ３２６１により発現された
Ｍ５タンパク質の位置を決定するための予備的試験によ
り、該組換タンパク質は殆ど細胞質隔空内に限定されて
いることが示された。Ｍ５タンパク質は、抗生物質圧力
の非存在下においてさえ５Ｌ３２６１により安定に発現
された。即ち、約３５世代の成長に相当する５日間の２
次培養後に明らかに発現された（Ｆｉｇ、１；レーン３
−８）ものである。
５り／バク分子を発現することが、全細胞溶解物のウレ
ーン１及び２）。Ｍ５タンパク質の典型的ｔｆ三重線（
前掲のＰｏ１ｒｅｒ等及びＫｅｈＯｅ等参照）は、バン
ドＭｒ ５９．５６及び５４にとして移動した。Ｓａｔ
ｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ５Ｌ３２６１により発現された
Ｍ５タンパク質の位置を決定するための予備的試験によ
り、該組換タンパク質は殆ど細胞質隔空内に限定されて
いることが示された。Ｍ５タンパク質は、抗生物質圧力
の非存在下においてさえ５Ｌ３２６１により安定に発現
された。即ち、約３５世代の成長に相当する５日間の２
次培養後に明らかに発現された（Ｆｉｇ、１；レーン３
−８）ものである。
実施例 ２
形質転換Ｓａ１． ｔｙｐｈｕｎｕｒｉｕｍ ５Ｌ３２
６１のマウス許容性 予備的実験において、ＢＡＬＢ／ｃマウスを５Ｌ３２６
１−１）Ｈに２０７の増加投与量で感染させ、この動物
が前記スタンプロブ１〜分析により示された（Ｆｌ（］
１ ：形質転換微生物に耐えられるか否かを試験した
。
６１のマウス許容性 予備的実験において、ＢＡＬＢ／ｃマウスを５Ｌ３２６
１−１）Ｈに２０７の増加投与量で感染させ、この動物
が前記スタンプロブ１〜分析により示された（Ｆｌ（］
１ ：形質転換微生物に耐えられるか否かを試験した
。
最大１．６５ｘ １０９微生物数までの経口投与量を受
けたマウスで発病したり死亡したりするものはなかった
。接種後１，３．５及び１０周後に各投与徴群の２匹の
マウスを層殺し、その肝臓、牌臓及び腸を、硫酸カナマ
イシン５０Ｉｆｔ！Ｊ／ ｍｉ！及びＰＡＢＡ及びＤＨ
Ｂをそれぞれ＋Ｏ＃ ／ ｄ含むＨＣＣＯｎｋｅｙ培地
で５Ｌ３２６１−ｐＨＫ２０７について培養した。非ラ
クトース醗酵コロニーは、１週目には１０６微生物以上
を投与されたマウスのみからｌ１ｆｆｌすることができ
、３週目には１０９微生物の投与を受けたもののみから
単離することができた。３週目以後は単離物を回収する
ことはできなかった。３週目に単離されたコロニーは完
全Ｍ５タンパク質を発現し、これはｓｍｐ５がＩｎ
ＶＩＶＯで安定であることを示している（Ｆｉｇｌレー
ン９）。経口的に接種されたマウスから得た１、 ３．
５．９．１０．１５及び２００週目血清は、５Ｍタンパ
ク質及び５型５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｒに対する抗体を
示すごとがそれぞれＥＬＩＳＡ及びオプソニン化試験に
より明らかにされた（第２表）。免疫化侵２０週のマウ
スから得た唾液も、主としてＩＯＡ種の抗Ｍ５タンパク
質抗体を有することが示されたく第３表）。
けたマウスで発病したり死亡したりするものはなかった
。接種後１，３．５及び１０周後に各投与徴群の２匹の
マウスを層殺し、その肝臓、牌臓及び腸を、硫酸カナマ
イシン５０Ｉｆｔ！Ｊ／ ｍｉ！及びＰＡＢＡ及びＤＨ
Ｂをそれぞれ＋Ｏ＃ ／ ｄ含むＨＣＣＯｎｋｅｙ培地
で５Ｌ３２６１−ｐＨＫ２０７について培養した。非ラ
クトース醗酵コロニーは、１週目には１０６微生物以上
を投与されたマウスのみからｌ１ｆｆｌすることができ
、３週目には１０９微生物の投与を受けたもののみから
単離することができた。３週目以後は単離物を回収する
ことはできなかった。３週目に単離されたコロニーは完
全Ｍ５タンパク質を発現し、これはｓｍｐ５がＩｎ
ＶＩＶＯで安定であることを示している（Ｆｉｇｌレー
ン９）。経口的に接種されたマウスから得た１、 ３．
５．９．１０．１５及び２００週目血清は、５Ｍタンパ
ク質及び５型５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｒに対する抗体を
示すごとがそれぞれＥＬＩＳＡ及びオプソニン化試験に
より明らかにされた（第２表）。免疫化侵２０週のマウ
スから得た唾液も、主としてＩＯＡ種の抗Ｍ５タンパク
質抗体を有することが示されたく第３表）。
第１表
経口免疫化後のＢＡＬＢ／ｃマウスの器官中の１．７ｘ
ｌＯ’ Ｌ＋ｘｌＯ’ ＜１００ ＮＯＮ
Ｏ＜５０ ＮＯＮＯ＜５０ ＮｉｌＯ １、マウスは、第１日に１．７Ｘ１０９コロニ一形成単
位（ｃｆｕ）から始まるＳ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｌｕｍ
５Ｌ３２６ｉ株の１０倍希釈経口投与（当初投与量）、
第５日に１．１ｘ１ｏ”ｃｒｕから始まる経ロブースタ
ー投与債を連続的に与えられた。各１９与徂は硫酸カナ
マイシン５埒／ｍ１及びｐ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ
）及び２，３−ジヒドロキシ安息香ｑ （ＤＨＢ）をそ
れぞれ１埒／ｍｅ含むリン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ、 ｐ
Ｈ７，２）の２５Ｊ１１に懸濁した。
ｌＯ’ Ｌ＋ｘｌＯ’ ＜１００ ＮＯＮ
Ｏ＜５０ ＮＯＮＯ＜５０ ＮｉｌＯ １、マウスは、第１日に１．７Ｘ１０９コロニ一形成単
位（ｃｆｕ）から始まるＳ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｌｕｍ
５Ｌ３２６ｉ株の１０倍希釈経口投与（当初投与量）、
第５日に１．１ｘ１ｏ”ｃｒｕから始まる経ロブースタ
ー投与債を連続的に与えられた。各１９与徂は硫酸カナ
マイシン５埒／ｍ１及びｐ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ
）及び２，３−ジヒドロキシ安息香ｑ （ＤＨＢ）をそ
れぞれ１埒／ｍｅ含むリン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ、 ｐ
Ｈ７，２）の２５Ｊ１１に懸濁した。
２、腸（幽門部括約筋から直腸まで）、肝臓・胆■及び
［は無菌状態で取り出し、Ｃｅ１ｌｅｃｔｏｒ■（１０
０メツシュ： Ｂｅ１ｌｃｏ）で均一化したＰＢＳ中に
置き、ＰＡＢＡ及び叶Ｂをそれぞれ１０埒／ｄ含み、カ
ナマイシンｓｏ＃、’ｄを含むか含まなイＨａｃＣｏｎ
ｋｅｙ寒天培地上にプレート培養した。
［は無菌状態で取り出し、Ｃｅ１ｌｅｃｔｏｒ■（１０
０メツシュ： Ｂｅ１ｌｃｏ）で均一化したＰＢＳ中に
置き、ＰＡＢＡ及び叶Ｂをそれぞれ１０埒／ｄ含み、カ
ナマイシンｓｏ＃、’ｄを含むか含まなイＨａｃＣｏｎ
ｋｅｙ寒天培地上にプレート培養した。
３、非測定
第 ２ 表
Ｓ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ５Ｌ３２６１−ｐＨＫ２
０７により経口免疫化されたＢＡＬＢ／ｃマウスから得
た抗Ｍ５タンパク血清によるＭ５型Ｓ、ｐｙｏｇｅｎｅ
ｓのオプソニン化及びそれらの抗−ｐｅｐＭタンパク質
［［ＩＳ八へ価 ＥＬＴＳＡ力価 試験自消 免疫前 １週 ＩＩ ２０、．３ 抗−ｐｅｐＭ ５ ’ ｇＡ 〈５０ 〈５０ ０Ｏ Ｄ５ ｇＧ ＜５０ ２０Ｏ Ｄ 〈５０ 〈５０ 〈５０ 〈５０ ０Ｏ ＮＯ オプソニン化 パーセント２ １ 、 ＥＬＩＳＡ力価は、ＢＡＬＢ／Ｃマウス抗５Ｌ
３２６１− ｐＨＫ２Ｏ７血清、続いてパーオキシダー
ゼ抱合ヤギ抗マウスｆｑＡ、ＩｏＧまたはＩＣＩＩｖｌ
と反応させた固定ｐｃｐＭ５を使用して測定した。固定
１）ｅｌ）Ｍ２４に対して反応したマウス抗血清は全て
＜５０の力価を示した。
０７により経口免疫化されたＢＡＬＢ／ｃマウスから得
た抗Ｍ５タンパク血清によるＭ５型Ｓ、ｐｙｏｇｅｎｅ
ｓのオプソニン化及びそれらの抗−ｐｅｐＭタンパク質
［［ＩＳ八へ価 ＥＬＴＳＡ力価 試験自消 免疫前 １週 ＩＩ ２０、．３ 抗−ｐｅｐＭ ５ ’ ｇＡ 〈５０ 〈５０ ０Ｏ Ｄ５ ｇＧ ＜５０ ２０Ｏ Ｄ 〈５０ 〈５０ 〈５０ 〈５０ ０Ｏ ＮＯ オプソニン化 パーセント２ １ 、 ＥＬＩＳＡ力価は、ＢＡＬＢ／Ｃマウス抗５Ｌ
３２６１− ｐＨＫ２Ｏ７血清、続いてパーオキシダー
ゼ抱合ヤギ抗マウスｆｑＡ、ＩｏＧまたはＩＣＩＩｖｌ
と反応させた固定ｐｃｐＭ５を使用して測定した。固定
１）ｅｌ）Ｍ２４に対して反応したマウス抗血清は全て
＜５０の力価を示した。
２、オプソニン化は、関連５ｔｒｅｐｔＱＣＯＣＣｉの
仝好中球のパーセントで測定した。
仝好中球のパーセントで測定した。
３、マウスは、採血の４８時間前に０．１！ｄ！のリン
酸塩緩衝塩水、ｐＨ７，２中の５０ｐ９のｐｅｌ）Ｍ５
でブーストされた。
酸塩緩衝塩水、ｐＨ７，２中の５０ｐ９のｐｅｌ）Ｍ５
でブーストされた。
４、抗ｐｅｐＭ５及び抗ｐｅｐＭ２４はウサギにおイテ
調製し、陽性（同種反応）、及び陰性（異種反応）対照
とした。
調製し、陽性（同種反応）、及び陰性（異種反応）対照
とした。
５、ウサギ抗＋１ｅｌ）Ｍ５または抗＋）ｅｌｌ Ｍ２
４ニ対する抗体力価は測定していない。
４ニ対する抗体力価は測定していない。
第 ３ 表
Ｓ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｔｔ＋＋＋＋ ５Ｌ３２６１−ｐ
Ｈに２０７により経口的に免疫化されたＢＡＬＤ／ ｃ
マウスにおけるＭ５タンパク質に対する唾液抗体反応１
１ｇ＾ ｌ （ｌＡ＋ ｌ ｇＧ＋ ｌ ＱＨ免
疫前 ＜４＜４ ２０週３３２ ３２ ２０週＋ブースＩ−’ ６４ １２８１、唾液
はマウス（１群当り４匹）から採取して貯蔵し、その後
２％ピロカルピン０．１ｄと共に腹腔内投与した。
Ｈに２０７により経口的に免疫化されたＢＡＬＤ／ ｃ
マウスにおけるＭ５タンパク質に対する唾液抗体反応１
１ｇ＾ ｌ （ｌＡ＋ ｌ ｇＧ＋ ｌ ＱＨ免
疫前 ＜４＜４ ２０週３３２ ３２ ２０週＋ブースＩ−’ ６４ １２８１、唾液
はマウス（１群当り４匹）から採取して貯蔵し、その後
２％ピロカルピン０．１ｄと共に腹腔内投与した。
２、ＥＬＩＳＡ力価は、３１３２６１−ｐＨＫ２０７に
より免疫化したＢＡＬＢ／Ｃマウスから採取した唾液（
＞’ｆ！続的に２倍希釈した）と反応させ、続いてバー
オキシダゼ抱合ヤギ抗マウスＩｇＡまたは抗マ「クスＩ
ｇＡ＋［ＧＧ＋Ｉ（ＪＭ混合物と反応させた固定ｐｅｐ
Ｈ５を使用して測定した。
より免疫化したＢＡＬＢ／Ｃマウスから採取した唾液（
＞’ｆ！続的に２倍希釈した）と反応させ、続いてバー
オキシダゼ抱合ヤギ抗マウスＩｇＡまたは抗マ「クスＩ
ｇＡ＋［ＧＧ＋Ｉ（ＪＭ混合物と反応させた固定ｐｅｐ
Ｈ５を使用して測定した。
３、マウスは唾液採取の２０週前に免疫化した（第２表
参照）。
参照）。
４、マウスは唾液採取の６０時間前に、０．１−のリン
酸塩緩衝塩水中の５０埒のｐｅｐＨ５のブースター投与
量を注射した。
酸塩緩衝塩水中の５０埒のｐｅｐＨ５のブースター投与
量を注射した。
有ｉｓＬ １３４４ Ｓａｌ、ｔｙｐｈｉｍｉｕｒｉｕ
ｍにより腹腔的感染されたコントロールマウスも保護さ
れた。５型感染マウスは、ＬＤ５ｏを１００倍超える投
与量に対して保護された（第４表）。５型ストレプトコ
ツカスによる非経口的感染に対するこの保護は、付与さ
れた免疫が全身的なものであることを示している。
ｍにより腹腔的感染されたコントロールマウスも保護さ
れた。５型感染マウスは、ＬＤ５ｏを１００倍超える投
与量に対して保護された（第４表）。５型ストレプトコ
ツカスによる非経口的感染に対するこの保護は、付与さ
れた免疫が全身的なものであることを示している。
実施例 ３
一群のマウスを５Ｌ３２６１−ｐＨＫ２０７の２回の経
口投与により接種し最初の投与の２２日後に５型もしく
は２４型５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、または有１ｓａ１
．ｔｙｐｈｉｎ＋ｕｒｉｕ１１３４４親株（第３表）に
より感染させた。結果から容易に判るように、Ｍ５発現
Ｓａｔ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｉ突然変異株を投与さ
れたマウスは、５型５ｔｒｅｐｔＯＣ＋ｃｃｉの復腔内
感染に対し完全に保護されたが、２４：３５ｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｉによるものはそうではなかった。
口投与により接種し最初の投与の２２日後に５型もしく
は２４型５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、または有１ｓａ１
．ｔｙｐｈｉｎ＋ｕｒｉｕ１１３４４親株（第３表）に
より感染させた。結果から容易に判るように、Ｍ５発現
Ｓａｔ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｉ突然変異株を投与さ
れたマウスは、５型５ｔｒｅｐｔＯＣ＋ｃｃｉの復腔内
感染に対し完全に保護されたが、２４：３５ｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｉによるものはそうではなかった。
第 ４ 表
５Ｈ型タンパク質を発現するｐＨＫ２Ｏ７により形質転
換された ａｒｏ Ｓ、ｔｙｐｈｉｌｕｒｉｕ＋ｎ生
菌により経口的１に免疫化されたＢ＾１Ｂ／ｃマウスに
おけるＭ５型及び２４型５ｔｒｃｐｔｏｃｏｃｃ ｉま
たはｓ、 ｔｙｐｈｉｍｕｎｕｍの腹腔的注射による感
染 （ｓｍ １１株） １．７Ｘ １０５ １７×１０６ ８２４ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ （Ｖａｕｇｈｎ株） １．６Ｘ１０” １．６Ｘ １０’ １．６Ｘ １０” ｓ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｍ （ＳＬ １３４４株） ７．３ｘ １０１ ７．３Ｘ１０２ ７．３Ｘ１０３ １、各免疫化マウスは、感染前２２日に１．２Ｘ１０”
コロニー形成単位（ｃｆｕ）の、１７日に１．６Ｘ １
０９ｃｆｕのｐＨＫ２Ｏ７形質転換５Ｌ３２６１ Ｓ、
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの投与を受けた。各投与量は硫
酸カナマイシン５埒／ｉ及びｐ−アミノ安息香酸及び２
，３−ジヒドロキシ安息香酸をそれぞれ１埒／ｄ含むリ
ン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７□２）の２５ｍに懸濁
して投与した。
換された ａｒｏ Ｓ、ｔｙｐｈｉｌｕｒｉｕ＋ｎ生
菌により経口的１に免疫化されたＢ＾１Ｂ／ｃマウスに
おけるＭ５型及び２４型５ｔｒｃｐｔｏｃｏｃｃ ｉま
たはｓ、 ｔｙｐｈｉｍｕｎｕｍの腹腔的注射による感
染 （ｓｍ １１株） １．７Ｘ １０５ １７×１０６ ８２４ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ （Ｖａｕｇｈｎ株） １．６Ｘ１０” １．６Ｘ １０’ １．６Ｘ １０” ｓ、ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｍ （ＳＬ １３４４株） ７．３ｘ １０１ ７．３Ｘ１０２ ７．３Ｘ１０３ １、各免疫化マウスは、感染前２２日に１．２Ｘ１０”
コロニー形成単位（ｃｆｕ）の、１７日に１．６Ｘ １
０９ｃｆｕのｐＨＫ２Ｏ７形質転換５Ｌ３２６１ Ｓ、
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの投与を受けた。各投与量は硫
酸カナマイシン５埒／ｉ及びｐ−アミノ安息香酸及び２
，３−ジヒドロキシ安息香酸をそれぞれ１埒／ｄ含むリ
ン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７□２）の２５ｍに懸濁
して投与した。
２ 、 ＢへＬＢ／ｃｖウスにおけるＭ５及びＭ ２４
ＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃ ｉ及び５Ｌ１３４４のＬＤ５
ｏはそれぞれ約２Ｘ １０’３×１０３及び１Ｘ１０°
ＣＦＵである。
ＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃ ｉ及び５Ｌ１３４４のＬＤ５
ｏはそれぞれ約２Ｘ １０’３×１０３及び１Ｘ１０°
ＣＦＵである。
３、投与量は投与ＣＦＵとして測定した。
４、生存は生存マウスの数／感染マウスとして表わした
。
。
５、記録された死亡は全て感染後３〜６日の間に起った
。生存マウスは感染後３０日まで全て健常な所見であっ
た。
。生存マウスは感染後３０日まで全て健常な所見であっ
た。
５Ｌ−３２６１−１１８に２０７により経口的に免疫化
された一群のＢＡＬＢ／ｃｖウスに５型もしくは２４型
５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃＣ１、または有１ｓａ１．ｔｌ／
ｐｈｉｍｌｌｒｉＵｍ ＳＬ １３４４親株をρ孔内感
染させた。第５表に見られるように、５Ｌ３２６１−ｐ
ＨＫ２Ｏ７により経口的に免疫化されたマウスのみが、
さもなければ全ての免疫化動物を殺すのに充分な同種生
物の投与量による鼻孔的感染から生き残ることができた
。さらに、組換えＭ５タンパク質を発現するＳａｌ、
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ５Ｌ３２６１により付与され
た保護は、鼻孔的感染されたマウスがＭ２４型５ｔｒｅ
ｔ＋ｔｏｃｏｃｃ ｉに耐えられないことにより示され
るように、Ｍ型持異的である。マウスがの孔内接種によ
る感染に対して抵抗力を示すという事実は、Ｍ５タンパ
ク発現Ｓａ１．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ５Ｌ３２６
１による経口免疫化は局所免疫を与えるのに充りである
ことを示す。
された一群のＢＡＬＢ／ｃｖウスに５型もしくは２４型
５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃＣ１、または有１ｓａ１．ｔｌ／
ｐｈｉｍｌｌｒｉＵｍ ＳＬ １３４４親株をρ孔内感
染させた。第５表に見られるように、５Ｌ３２６１−ｐ
ＨＫ２Ｏ７により経口的に免疫化されたマウスのみが、
さもなければ全ての免疫化動物を殺すのに充分な同種生
物の投与量による鼻孔的感染から生き残ることができた
。さらに、組換えＭ５タンパク質を発現するＳａｌ、
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ５Ｌ３２６１により付与され
た保護は、鼻孔的感染されたマウスがＭ２４型５ｔｒｅ
ｔ＋ｔｏｃｏｃｃ ｉに耐えられないことにより示され
るように、Ｍ型持異的である。マウスがの孔内接種によ
る感染に対して抵抗力を示すという事実は、Ｍ５タンパ
ク発現Ｓａ１．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ５Ｌ３２６
１による経口免疫化は局所免疫を与えるのに充りである
ことを示す。
第 ５ 表
５Ｈ型タンパク質を発現するｐＨに２０７により形質転
換されりａｒｏ−Ｓ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ生菌に
より経口的１に免疫化されたＢ＾［８／Ｃマウスにおけ
るＭ５型及び２４型５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉまたはｓ
、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの鼻孔的接種による感染 感染微生物 投与量３ ８５５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ 、３．！ｌｘ １０
７（１０７（Ｓ株） 生 存 ４５ 非免液化 免疫化 Ｈ２４５ｊｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ ３．５Ｘ １０７ （Ｖａｕｇｈｎ株） ｔｙρ旧ｍｕｎｕ＋ｎ ４．３Ｘ １０’ （ＳＬ １３４４株） １、各免疫化マウスは、第１日に１．２ｘ １０ コ
ロニー形成単位（ｃｆｕ）の、第５日に１．６Ｘ１０９
のｐＨＫ２Ｏ７形買転換５Ｌ３２６１ Ｓ、ｔｙｐｈｉ
ｍｕｒｉｕｍの投与を受けた。各投！：３吊はＩｉ！Ｅ
酸カナマイシン５埒／蛇及びｐ−アミノ安息香酸及び２
，３−ジヒドロキシ安息香酸をそれぞれ１ Ｒ／ｒｄ含
むリン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ、 ｐＨ７，２）の２５１
１ｇに懸濁して投与した。
換されりａｒｏ−Ｓ、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ生菌に
より経口的１に免疫化されたＢ＾［８／Ｃマウスにおけ
るＭ５型及び２４型５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉまたはｓ
、 ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの鼻孔的接種による感染 感染微生物 投与量３ ８５５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ 、３．！ｌｘ １０
７（１０７（Ｓ株） 生 存 ４５ 非免液化 免疫化 Ｈ２４５ｊｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ ３．５Ｘ １０７ （Ｖａｕｇｈｎ株） ｔｙρ旧ｍｕｎｕ＋ｎ ４．３Ｘ １０’ （ＳＬ １３４４株） １、各免疫化マウスは、第１日に１．２ｘ １０ コ
ロニー形成単位（ｃｆｕ）の、第５日に１．６Ｘ１０９
のｐＨＫ２Ｏ７形買転換５Ｌ３２６１ Ｓ、ｔｙｐｈｉ
ｍｕｒｉｕｍの投与を受けた。各投！：３吊はＩｉ！Ｅ
酸カナマイシン５埒／蛇及びｐ−アミノ安息香酸及び２
，３−ジヒドロキシ安息香酸をそれぞれ１ Ｒ／ｒｄ含
むリン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ、 ｐＨ７，２）の２５１
１ｇに懸濁して投与した。
２６感染投与ｆｆｉ ハ、２０ｔＩ！Ｊ（７）ＰＢＳ（
鼻孔当１１）１０Ａｅ）中の内孔内投与ｃｆｕとして測
定した。
鼻孔当１１）１０Ａｅ）中の内孔内投与ｃｆｕとして測
定した。
３、マウスは最初の免疫化（即ちＭ１日）後１３週に感
染された。
染された。
４、生存は生存マウスの数／感染マウスとして表わした
。
。
５ 、５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉによる死亡は感染後２
〜４日の間ニ起す、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａによる死亡は
５〜７日の間に起った。生存マウスは感染後３０日まで
全て健常な所見であった。
〜４日の間ニ起す、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａによる死亡は
５〜７日の間に起った。生存マウスは感染後３０日まで
全て健常な所見であった。
上記の実施例は限定的なものと解するべきでなく、単に
本発明を説明するためのものである。本発明は、Ｍ血清
型５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉに対して広範囲に保護を与
える多価ワクチンを創造するための、任意の５ｔｒｅｐ
ｔＯＣＯＣＣｉ血清型Ｍタンパク質抗原の任意の数の免
疫原性ポリペプチド配列と、天然あるいは合成担体との
共有結合による組合せも包含するものである。
本発明を説明するためのものである。本発明は、Ｍ血清
型５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉに対して広範囲に保護を与
える多価ワクチンを創造するための、任意の５ｔｒｅｐ
ｔＯＣＯＣＣｉ血清型Ｍタンパク質抗原の任意の数の免
疫原性ポリペプチド配列と、天然あるいは合成担体との
共有結合による組合せも包含するものである。
本発明はまた。他の配列が共有結合する担体としてＭタ
ンパク質ポリペプチド配列を使用し、各５ｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｉ血清型のそれぞれに対しオプソニン反応を生
起することも包含する。血清型のポリペプチドは該担体
に結合しており、５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ血清型と同
様に、そのポリペプチドは担体として作用する。
ンパク質ポリペプチド配列を使用し、各５ｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｉ血清型のそれぞれに対しオプソニン反応を生
起することも包含する。血清型のポリペプチドは該担体
に結合しており、５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ血清型と同
様に、そのポリペプチドは担体として作用する。
本発明はまた、Ｍタンパク質構造遺伝子の領域において
、ｓ、 ｐｙｏｇｅｎｅｓ染色体上にそのような多価ポ
リペプチドについてのヌクレオチド配列をコードし、そ
れをプラスミド中にクローニングし、該プラスミドを無
毒性宿主細菌中に形質転換することも包含する。合成ヌ
クレオチド配列が好ましいが、生存細菌ＩＩｌ胞から得
たヌクレオチド配列も範囲に包含される方法及び生成物
の種々の変型あるいはその等何物を困難なく開発するこ
とができるであろう。
、ｓ、 ｐｙｏｇｅｎｅｓ染色体上にそのような多価ポ
リペプチドについてのヌクレオチド配列をコードし、そ
れをプラスミド中にクローニングし、該プラスミドを無
毒性宿主細菌中に形質転換することも包含する。合成ヌ
クレオチド配列が好ましいが、生存細菌ＩＩｌ胞から得
たヌクレオチド配列も範囲に包含される方法及び生成物
の種々の変型あるいはその等何物を困難なく開発するこ
とができるであろう。
（以下余白）
形質転換された無毒性宿主細菌中に他の有毒細菌種に対
してオプソニン反応を生起する免疫原性ボリベブヂード
を発現する免疫原性ポリペプチドの発現及び両種のポリ
ペプチドの共有結合のための遺伝物質をクローニングす
ることも包含する。本発明はまた、得られた弱術化無渚
宿主生物も包含するものであり、この生物は、１種以上
の細菌に対し：オプソニン反応を生起し得る広スペクト
ルワクＣ−ンとして経口投与できるものである。
してオプソニン反応を生起する免疫原性ボリベブヂード
を発現する免疫原性ポリペプチドの発現及び両種のポリ
ペプチドの共有結合のための遺伝物質をクローニングす
ることも包含する。本発明はまた、得られた弱術化無渚
宿主生物も包含するものであり、この生物は、１種以上
の細菌に対し：オプソニン反応を生起し得る広スペクト
ルワクＣ−ンとして経口投与できるものである。
＼１業者であれば、本発明の概念及び特許請求のＢｅａ
ｃｈｅｙ、 ｅｊ ａｌｓ、、 ”Ｒｅｐｅａｔｉｎｇ
Ｃｏｖａｌｅｎ七５ｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄＰｒｏ
ｊｅｃｔｉｖｅ ＩｎｖｎｕｎｏｇｅｎｉｃｉＬｙ ｃ
ｄ Ｎａｔｌｖｅ ａｎｄ ５ｙｎｈｈｅｔ１ｃＰｏｌ
ｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ
Ｔｙｐｅ ２４ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｍ
Ｐｒｏｔｅｉｎど Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈａｍ、 Ｖ
ｏｌ、 ２５８． Ｎｏ、 ２１ ｐｐ１３．２５０
−１３，２５７ ＋１９８３１゜ｖａｎ ｄｅ Ｒｉ
ｊｎ、 ｅｔ ａｌｓ、、 ”Ｇｒｏｕｐ Ａ ５Ｉ
−ｒｅｐｔｏｃｏｃｅａｌ Ａｎｔｉｇｅｎｓｃｒｏｓ
ｓ−ｉｅａｃ仁Ｌｖｅ ｗｉヒｈ Ｍｙｏｃａｒｄ
ｉｕｍ、” Ｊ、 ＬＪ２． Ｍｅｄ、、 Ｖ
ｏｌ。
ｃｈｅｙ、 ｅｊ ａｌｓ、、 ”Ｒｅｐｅａｔｉｎｇ
Ｃｏｖａｌｅｎ七５ｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄＰｒｏ
ｊｅｃｔｉｖｅ ＩｎｖｎｕｎｏｇｅｎｉｃｉＬｙ ｃ
ｄ Ｎａｔｌｖｅ ａｎｄ ５ｙｎｈｈｅｔ１ｃＰｏｌ
ｙｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ
Ｔｙｐｅ ２４ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｍ
Ｐｒｏｔｅｉｎど Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈａｍ、 Ｖ
ｏｌ、 ２５８． Ｎｏ、 ２１ ｐｐ１３．２５０
−１３，２５７ ＋１９８３１゜ｖａｎ ｄｅ Ｒｉ
ｊｎ、 ｅｔ ａｌｓ、、 ”Ｇｒｏｕｐ Ａ ５Ｉ
−ｒｅｐｔｏｃｏｃｅａｌ Ａｎｔｉｇｅｎｓｃｒｏｓ
ｓ−ｉｅａｃ仁Ｌｖｅ ｗｉヒｈ Ｍｙｏｃａｒｄ
ｉｕｍ、” Ｊ、 ＬＪ２． Ｍｅｄ、、 Ｖ
ｏｌ。
１４６、 ｐｐ、 ５７９−５９９ ＋１９７７
１゜ｖａｎ ｄａ Ｒｌｊｎ、 ｅｔ ａｌｇ
、、 ”Ｉｍｒｏｕｎｏｃｈａ＋ｎ１ｃａｌ Ａｎ
ａｌｙｓｌｓ ｏｆ 工ｎＬａｃｔＭ Ｐｒｏヒ
ｓｉｎ ５ｅａｒｓヒｄ Ｆｒｏｍ Ｃａ１ｌ
Ｗａｌｌ−Ｌａｓｓ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、
”工ｎｆｅｃｔ、 Ｉｍｍｕｎ、、 ｖｏｌ、 ３２．
ｐｐ、 ｆ１６−９１ （１９８１）。
１゜ｖａｎ ｄａ Ｒｌｊｎ、 ｅｔ ａｌｇ
、、 ”Ｉｍｒｏｕｎｏｃｈａ＋ｎ１ｃａｌ Ａｎ
ａｌｙｓｌｓ ｏｆ 工ｎＬａｃｔＭ Ｐｒｏヒ
ｓｉｎ ５ｅａｒｓヒｄ Ｆｒｏｍ Ｃａ１ｌ
Ｗａｌｌ−Ｌａｓｓ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、
”工ｎｆｅｃｔ、 Ｉｍｍｕｎ、、 ｖｏｌ、 ３２．
ｐｐ、 ｆ１６−９１ （１９８１）。
Ｅｄ＋ｎａｎ ａｎｄ Ｂｅｇｇ、 ”Ａ Ｐ
ｒｏヒｅｉｎ ５ｅｑｕｅｎａｔｏｒ、” ！９ｙ
５ととシｉユＪ、 Ｂｉｏｃｈａｍ、 Ｖｏｌ、 １．
ｐｐ、 ８０−９１ ＋１９６７１゜Ｐｈ１ｌｌｉ
ｐｓ、 ｅＬ ａｓｓ、、 ”Ｓヒｒｅｐヒｏｃｏ
ｃｃａｌ Ｍ ＰｒｏヒｅＬｎ： Ｈｅ１ｉｃａ
ＩＣｏｉｌｅｄ −Ｃｏ１１ ５ｔｒｕｃｔｕｒｅ
ａｎｄ Ａｒｒａｎｇａｍｅｎヒ ｏｎ ｔｈｅ
Ｃｅ１ｌＳｕｒｆａｃｅ、” Ｐｒｏｃ、 ）Ｊａ
ｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ、 Ｖｏｌ、
７８． Ｎｏ、 ８ｐｐ、 ４６Ｂ９−４６９３
（Ａｕｇｕｓヒ １９８１１゜Ｌａｖｅｒ、 ａｔ ａ
ｌｇ、 ’Ａｎｊｉｇｅｎｉｃ Ｄｒｉｆｔ ｉｎ Ｔ
ｙｐｅ Ａ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｌｒｕｓ＋Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ Ｍａｐｐｉｎｇ ａｎｄ Ａｎｔｉｇ
ｅｎｉｃ Ａｎａｌｙｓｔｓ ｏｆＡ／ＰＲ／８／
：１４＋ＨＯＮｌｌ Ｖａｒｉａｎｔｓ ５ｅｌｅｃ
ｔｅｄ Ｗｉｔ−ｈ ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ、” Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ
ｉ、ＵＳＡ、Ｖｏｌ、７６゜Ｎｏ、 ３． ｐｐ、
１４２５−１４２９ （Ｍａｒｃｈ １９７９１
゜ＡｔａｓｓＬ、 ”Ａｎｊｉｇｅｎｉｃ ５ｔｒ
ｕｃヒｕｒｅ ｏｆ Ｍｙｏｇｌｏｂｉｎ； Ｔ
ｈｅ ＣｏｍｐｌｅｔｅＩｍｍｕｎｏｃｈａｍｉｃａ
ｌ Ａｎａヒｏｍｙ ｏｆ ａ Ｐｒｏ仁ｅｉ
ｎ ａｎｄ ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＲｅｌａｊｉ
ｎｇ ＊ｏ Ａｎヒｉｇｅｎｉｃ Ｓセｒｕｃヒ
ｕｒｅｓ ｏｆ Ｐｒｏヒｅｉｎｓど工ｍｍｕｎｏ
ｃｈａｍｉｓヒ【 、 Ｖｏｌ、 １２． ｐｐ
、 ４２３−４３１１ ＋１９７５１゜Ｋａｂａｔ
、Ｓ七ｒｕｅヒｕｒａｌ ｔｓ ｉｎ Ｉｎ
ｖｎｕｎｏｌ ａｎｄ工ｒｒｅｎｕｎｏｃｈｅｒ
ｎ１ｓ＊ｒ 、 ｐｐ、 ８９−４００ （Ｈｏｌ
ｔ、 Ｒｈ１ｎｅｈａｒｔ ＆Ｗｉｎｓｔｏｎ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、（１９６８１゜Ｎ１５ｏｎｏｆｆ、Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ １ｎ 工ｎｖｎｕｎｏｌ ａｎｄ ｒ
ｎｖｎｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔ ｔ Ｖｏｌ。
ｒｏヒｅｉｎ ５ｅｑｕｅｎａｔｏｒ、” ！９ｙ
５ととシｉユＪ、 Ｂｉｏｃｈａｍ、 Ｖｏｌ、 １．
ｐｐ、 ８０−９１ ＋１９６７１゜Ｐｈ１ｌｌｉ
ｐｓ、 ｅＬ ａｓｓ、、 ”Ｓヒｒｅｐヒｏｃｏ
ｃｃａｌ Ｍ ＰｒｏヒｅＬｎ： Ｈｅ１ｉｃａ
ＩＣｏｉｌｅｄ −Ｃｏ１１ ５ｔｒｕｃｔｕｒｅ
ａｎｄ Ａｒｒａｎｇａｍｅｎヒ ｏｎ ｔｈｅ
Ｃｅ１ｌＳｕｒｆａｃｅ、” Ｐｒｏｃ、 ）Ｊａ
ｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ、 Ｖｏｌ、
７８． Ｎｏ、 ８ｐｐ、 ４６Ｂ９−４６９３
（Ａｕｇｕｓヒ １９８１１゜Ｌａｖｅｒ、 ａｔ ａ
ｌｇ、 ’Ａｎｊｉｇｅｎｉｃ Ｄｒｉｆｔ ｉｎ Ｔ
ｙｐｅ Ａ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｌｒｕｓ＋Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ Ｍａｐｐｉｎｇ ａｎｄ Ａｎｔｉｇ
ｅｎｉｃ Ａｎａｌｙｓｔｓ ｏｆＡ／ＰＲ／８／
：１４＋ＨＯＮｌｌ Ｖａｒｉａｎｔｓ ５ｅｌｅｃ
ｔｅｄ Ｗｉｔ−ｈ ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ、” Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ
ｉ、ＵＳＡ、Ｖｏｌ、７６゜Ｎｏ、 ３． ｐｐ、
１４２５−１４２９ （Ｍａｒｃｈ １９７９１
゜ＡｔａｓｓＬ、 ”Ａｎｊｉｇｅｎｉｃ ５ｔｒ
ｕｃヒｕｒｅ ｏｆ Ｍｙｏｇｌｏｂｉｎ； Ｔ
ｈｅ ＣｏｍｐｌｅｔｅＩｍｍｕｎｏｃｈａｍｉｃａ
ｌ Ａｎａヒｏｍｙ ｏｆ ａ Ｐｒｏ仁ｅｉ
ｎ ａｎｄ ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＲｅｌａｊｉ
ｎｇ ＊ｏ Ａｎヒｉｇｅｎｉｃ Ｓセｒｕｃヒ
ｕｒｅｓ ｏｆ Ｐｒｏヒｅｉｎｓど工ｍｍｕｎｏ
ｃｈａｍｉｓヒ【 、 Ｖｏｌ、 １２． ｐｐ
、 ４２３−４３１１ ＋１９７５１゜Ｋａｂａｔ
、Ｓ七ｒｕｅヒｕｒａｌ ｔｓ ｉｎ Ｉｎ
ｖｎｕｎｏｌ ａｎｄ工ｒｒｅｎｕｎｏｃｈｅｒ
ｎ１ｓ＊ｒ 、 ｐｐ、 ８９−４００ （Ｈｏｌ
ｔ、 Ｒｈ１ｎｅｈａｒｔ ＆Ｗｉｎｓｔｏｎ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、（１９６８１゜Ｎ１５ｏｎｏｆｆ、Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ １ｎ 工ｎｖｎｕｎｏｌ ａｎｄ ｒ
ｎｖｎｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔ ｔ Ｖｏｌ。
１、 ｐｐ、 １２０−１８７ （１９７刀。
Ｍｕｎｏｚ、 ＭｅｅＬｏｄｓ ｉｎ Ｉｎｗｎ
ｕｎｏｌ ａｎｄ Ｉａｖｎｕｎｏｃｈｅｍ
ｉｓ 、 Ｖｏｌ、 ３゜ｐｐ、 １４
６−１６０ ＋１９７０１゜Ｍａｎｊｕｌａ ａｎｄ
Ｐｉｓｃｈｅｔｔｉ、 ”Ｔｒｏｐｏｍｙｏｓｌｎ−
１１ｋｅ ５ｅｖｅｎ Ｒｅ５ｉｄｕｅＰｅｒｉｏｄｉ
ｃｌＬｙ ｉｎ Ｔｈｒｅｅ 工ｏｖｎｕｎｏｌ
ｏｇｉｃａｌｌｙ Ｄｉｓｊ１ｎｃヒＳｌ：ｒｅｐ仁
ｏｃｏｃｃａｌ Ｍ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｌｔ
ｓ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅＡｎｔ
ｉｐｈａｇｏｃｙｔ４ｃ Ｐｒｏｐｅｒヒｙ ｏｆ ｔ
ｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌｇ、” Ｊ、 Ｅ２３２゜Ｍｅｄ
、、 Ｖｏｌ、 １５５． ｐｐ、 ６９５−
７０８ （１り８０）。
ｕｎｏｌ ａｎｄ Ｉａｖｎｕｎｏｃｈｅｍ
ｉｓ 、 Ｖｏｌ、 ３゜ｐｐ、 １４
６−１６０ ＋１９７０１゜Ｍａｎｊｕｌａ ａｎｄ
Ｐｉｓｃｈｅｔｔｉ、 ”Ｔｒｏｐｏｍｙｏｓｌｎ−
１１ｋｅ ５ｅｖｅｎ Ｒｅ５ｉｄｕｅＰｅｒｉｏｄｉ
ｃｌＬｙ ｉｎ Ｔｈｒｅｅ 工ｏｖｎｕｎｏｌ
ｏｇｉｃａｌｌｙ Ｄｉｓｊ１ｎｃヒＳｌ：ｒｅｐ仁
ｏｃｏｃｃａｌ Ｍ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｌｔ
ｓ Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅＡｎｔ
ｉｐｈａｇｏｃｙｔ４ｃ Ｐｒｏｐｅｒヒｙ ｏｆ ｔ
ｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌｇ、” Ｊ、 Ｅ２３２゜Ｍｅｄ
、、 Ｖｏｌ、 １５５． ｐｐ、 ６９５−
７０８ （１り８０）。
Ｂｅａｃｈｅｙ ａｎｄ ５ｔｏｌｌｅｎｎａｎ、
”Ｔｏｘｉｃ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ５ｔｒａｐセｏ
ｃｏｃｃａｌ ＭＰｒｏヒｓｏｎ ｏｎ Ｐｌａｔ
ｅｌｅセｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃ
ｌｅａｒ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓｉｎ Ｈｕｍａｎ
Ｂｌｏｏｄ、” Ｊ、 ル史、 Ｍａｄ、 Ｖｏｌ、
１３４． ｐｐ、 ３５１−３６５（１９７１）。
”Ｔｏｘｉｃ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ５ｔｒａｐセｏ
ｃｏｃｃａｌ ＭＰｒｏヒｓｏｎ ｏｎ Ｐｌａｔ
ｅｌｅセｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃ
ｌｅａｒ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓｉｎ Ｈｕｍａｎ
Ｂｌｏｏｄ、” Ｊ、 ル史、 Ｍａｄ、 Ｖｏｌ、
１３４． ｐｐ、 ３５１−３６５（１９７１）。
Ｄａｌｅ、 ｅｔ ａｌｓ、、 ”Ｈｅｔｅｒｏｇｅ
ｎｅｃｉｔｙ ｏｆ Ｔｙｐｅ−５ｐｅｃｉｆｉｃ ａ
ｎｄ Ｃｒｏｓｓ −Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ａｎｔｉｇｅ
ｎｌｃ Ｄｅｔｅｒ＋ｎ１ｎａｎｔｓ Ｗｉｔｈｉｎ
ａ Ｓｉｎｇｌｅ ＭＰｒｏヒｅｏｎ ｏｆ Ｇｒ
ｏｕｐ Ａ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉど 正、
旦ｘ５ｚ、 Ｍｅｄ、 Ｖｏｌ。
ｎｅｃｉｔｙ ｏｆ Ｔｙｐｅ−５ｐｅｃｉｆｉｃ ａ
ｎｄ Ｃｒｏｓｓ −Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ａｎｔｉｇｅ
ｎｌｃ Ｄｅｔｅｒ＋ｎ１ｎａｎｔｓ Ｗｉｔｈｉｎ
ａ Ｓｉｎｇｌｅ ＭＰｒｏヒｅｏｎ ｏｆ Ｇｒ
ｏｕｐ Ａ ５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉど 正、
旦ｘ５ｚ、 Ｍｅｄ、 Ｖｏｌ。
１５５、ｐｐ、１０２６−１０３［１＋１９８０１゜ａ
ｅａｃｈｓｙ、 ｅＬ ａｌｇ、 ”Ｐｕｒｉｆ
ｌｃａＬｌｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｌｅｓ
ｏｆ ＨＰｒｏヒｅｉｎＥｘｔｒａｃｔｅｄ ｆ
ｒｏｍ Ｇｒｏｕｐ Ａ Ｓヒｒｅｐヒｏｃｏｃ
ｃ１ ｗｌｔｈ Ｐｅｐｇｉｎ＋Ｃｏｖａｌｅｎｊ
５ｔｒｕｃヒｕｒｅ ｏｆ ヒｈｅ Ａｍ１
ｎｏ Ｔｅｒｍｌｎａｌ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆＴ
ｙｐｅ ２４ Ｍ Ａｎｔｌｇｅｎ、” Ｊ、 Ｅｇ２
． Ｍｅｄ、 Ｖｏｌ、 １４．５ ｐｐ。
ｅａｃｈｓｙ、 ｅＬ ａｌｇ、 ”Ｐｕｒｉｆ
ｌｃａＬｌｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｌｅｓ
ｏｆ ＨＰｒｏヒｅｉｎＥｘｔｒａｃｔｅｄ ｆ
ｒｏｍ Ｇｒｏｕｐ Ａ Ｓヒｒｅｐヒｏｃｏｃ
ｃ１ ｗｌｔｈ Ｐｅｐｇｉｎ＋Ｃｏｖａｌｅｎｊ
５ｔｒｕｃヒｕｒｅ ｏｆ ヒｈｅ Ａｍ１
ｎｏ Ｔｅｒｍｌｎａｌ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆＴ
ｙｐｅ ２４ Ｍ Ａｎｔｌｇｅｎ、” Ｊ、 Ｅｇ２
． Ｍｅｄ、 Ｖｏｌ、 １４．５ ｐｐ。
１４６９−１４８３ ＋１９７７１゜Ｂａａｃｈｅｙ
、 ｅｔ ａｌｇ、、 ’Ｉ’ｒｉｍａｒｙ ５ｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ ｏｆｆ Ｐｒｏｔｅｃ辷ｌｖｅ Ａｎｔｌ
ｇｅｎｓｏｆ Ｔｙｐｅ ２４ Ｓヒｒｅｐヒｏ
ｃｏｃｃａｌ Ｍ Ｐｒｏｔｅｉｎ、” 、Ｚ、
旦１ｏ１． （ｈａｍ、。
、 ｅｔ ａｌｇ、、 ’Ｉ’ｒｉｍａｒｙ ５ｔｒｕ
ｃｔｕｒｅ ｏｆｆ Ｐｒｏｔｅｃ辷ｌｖｅ Ａｎｔｌ
ｇｅｎｓｏｆ Ｔｙｐｅ ２４ Ｓヒｒｅｐヒｏ
ｃｏｃｃａｌ Ｍ Ｐｒｏｔｅｉｎ、” 、Ｚ、
旦１ｏ１． （ｈａｍ、。
Ｖｏｌ、 ２５５． ｐｐ、 ６２［１４−６２８９＋
１９８０１゜Ｂｅａｃｈｅｙ、 ｅｔ ａｌｓ、、
”Ｒｅｐｅａｔｉｎｇ Ｃｏｖａｌｅｎｔ ５ｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ ０ｆＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｍ
Ｐｒｏヒｓｉｎ、 ”Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、
Ａｃａｄ、 旦ｃｉ、 ＵＳＡ。
１９８０１゜Ｂｅａｃｈｅｙ、 ｅｔ ａｌｓ、、
”Ｒｅｐｅａｔｉｎｇ Ｃｏｖａｌｅｎｔ ５ｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ ０ｆＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｍ
Ｐｒｏヒｓｉｎ、 ”Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、
Ａｃａｄ、 旦ｃｉ、 ＵＳＡ。
Ｖｏｌ、 ７５． ｐｐ、 ３１６コーコ１６７
（１９７１１１゜Ｂｅａｃｈａｙ、 ｅｔ ａｓｇ
、、 ”ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｅ Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ
Ｌｏ ＩｍｍｕｎｉｚａＬｉｏｎ剋ｔｈ ａ ５
Ｌｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ Ｄｅｆｌｎｅｄ Ｐｏ１
ｙｐｅｐＬ１ｄｅ Ｆｒａｇｍｅｎヒ ｏｆｓｊｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃａｌ Ｍ Ｐｒｏｊｅｉｎ、” Ｊ、 Ｅ
ｑ、 Ｍｅｄ、、 Ｖｏｌ、 １５０． ｐｐ。
（１９７１１１゜Ｂｅａｃｈａｙ、 ｅｔ ａｓｇ
、、 ”ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｅ Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ
Ｌｏ ＩｍｍｕｎｉｚａＬｉｏｎ剋ｔｈ ａ ５
Ｌｒｕｃｔｕｒａｌｌｙ Ｄｅｆｌｎｅｄ Ｐｏ１
ｙｐｅｐＬ１ｄｅ Ｆｒａｇｍｅｎヒ ｏｆｓｊｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃａｌ Ｍ Ｐｒｏｊｅｉｎ、” Ｊ、 Ｅ
ｑ、 Ｍｅｄ、、 Ｖｏｌ、 １５０． ｐｐ。
［１６２１１９７９＋。
第１図は、ｐＨに２０７で形質転換されたサルモネラ・
チフィリウムＬＢ５０００ （レーン１）及び５Ｌ３２
６１（レーン２〜９）によって発現された５型Ｍタンパ
クのイムノプロット分析に於ける粒子構造を示す写真で
ある。 （以下余白）
チフィリウムＬＢ５０００ （レーン１）及び５Ｌ３２
６１（レーン２〜９）によって発現された５型Ｍタンパ
クのイムノプロット分析に於ける粒子構造を示す写真で
ある。 （以下余白）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）連鎖球菌Ｍタンパク抗原をコードし、それを発現
する外来性ヌクレオチド配列を含有する、非毒性形質転
換細菌。 （２）発現された連鎖球菌Ｍタンパク抗原が連鎖球菌感
染に対するオプソニン抗体を誘発するに有効であること
を特徴とする、請求項１記載の細菌。 （３）発現された連鎖球菌Ｍタンパク抗原が連鎖球菌５
型に対するオプソニン抗体を誘発し、それに対する免疫
を付与するに有効であることを特徴にする、請求項２記
載の細菌。（４）付与される免疫が全身性であることを
特徴する、請求項３記載の細菌。 （５）非毒性細菌の毒性形態に対するオプソニン抗体を
誘発するに有効なタンパク抗原も発現することを特徴と
する、請求項２記載の細菌。 （６）外来性ヌクレオチド配列が、連鎖球菌属の細菌由
来のものであることを特徴とする、請求項２記載の細菌
。 （７）前記細菌が毒性株であることを特徴とする、請求
項６記載の細菌。 （８）非毒性細菌がサルモネラ属であることを特徴とす
る、請求項６記載の細菌。 （９）非毒性サルモネラ菌がサルモネラ・チフィムリウ
ムであることを特徴とする、請求項８記載の細菌。 （１０）サルモネラ・チフィムリウム株が￥Ａｒｏ＾−
Ｓａｌ￥チフィムリウムＳＬ３２６１であることを特徴
とする、請求項９記載の細菌。 （１１）非毒性細菌が、連鎖球菌属の全ての非Ａ群種か
ら成る群から選ばれることを特徴とする、請求項２記載
の細菌。 （１２）非毒性非Ａ群連鎖球菌がストレプトコッカス・
サングイスであることを特徴とする、請求項１１記載の
細菌。 （１３）発現される連鎖球菌Ｍタンパク抗原が細胞質抗
原であることを特徴とする、請求項２記載の細菌。 （１４）前記抗原がヒト組織抗原と血清学的に交差反応
性でないことを特徴とする、請求項１３記載の細菌。 （１５）前記ヒト組織抗原が心臓組織抗原であることを
特徴とする、請求項１４記載の細菌。 （１６）外来性ヌクレオチド配列がプラスミド内に含有
されていることを特徴とする、請求項２記載の細菌。 （１７）前記プラスミドが血清型５Ｍの連鎖球菌遺伝子
をコードすることを特徴とする、請求項１６記載の細菌
。 （１８）前記プラスミドが前記非毒性細菌内で安定して
含有されることを特徴とする、請求項１７記載の細菌。 （１９）非毒性細菌がサルモネラ属に属し、外来性ヌク
レオチド配列が連鎖球菌属の毒性細菌のものであり、そ
して発現された連鎖球菌Ｍタンパク抗原が細胞質抗原で
あることを特徴とする、請求項２記載の細菌。 （２０）Ｍタンパク抗原が血清型５のＭタンパク抗原で
あることを特徴とする、請求項１９記載の細菌。 （２１）非毒性細菌が、投与によって、限られた期間の
間だけ増殖することを特徴とする、請求項１記載の細菌
。 （２２）非毒性細菌が、侵入することのできる毒性株で
あるが疾患を引き起こすことはできない突然変異体であ
ることを特徴とする、請求項１記載の細菌。 （２３）免疫対象物の組織中には見出すことのできない
、代謝物質に対する栄養マーカーを示すことを特徴とす
る、請求項２２記載の細菌。 （２４）前記代謝物質がパラ−アミノ−安息香酸及び２
，３−ジヒドロ安息香酸であることを特徴とする、請求
項２３記載の細菌。 （２５）請求項１記載の細菌を、連鎖球菌感染に対する
オプソニン抗体を誘発しそれに対する免疫を付与するに
有効な量で含有することを特徴とする治療組成物。 （２６）請求項２５記載の組成物を、連鎖球菌感染に対
するオプソニン抗体を誘発しそれに対する免疫を付与す
るに有効な量で哺乳動物に投与することを特徴とする、
哺乳動物の免疫方法。 （２７）経口で投与することを特徴とする、請求項２６
記載の方法。 （２８）経口投与によって、自己免疫が引き起こされる
ことのないことを特徴とする、請求項２７記載の方法。 （２９）連鎖球菌感染に対する免疫を付与するオプソニ
ン抗体を誘発するに有効な連鎖球菌Ｍタンパク抗原の合
成をコードし、非毒性細菌の外来性ＤＮＡ配列を含有す
ることを特徴とする、ＤＮＡヌクレオチド配列。 （３０）Ｍタンパク抗原を産生する特異血清型の連鎖球
菌のＭ型連鎖球菌に感染しやすい哺乳動物に防御免疫を
付与する、連鎖球菌Ｍタンパク抗原のアミノ酸配列であ
つて、該免疫動物の心臓組織抗原と血清学的に交差反応
性でない、前記配列。 （３１）前記哺乳動物がＭ５型連鎖球菌に感染しやすい
ことを特徴とする、請求項３０記載のアミノ酸配列。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/088,626 US5162226A (en) | 1987-08-24 | 1987-08-24 | Therapeutic compositions against streptococcal infections, transformed hosts, methods of immunization and genetically engineered products |
| US088,626 | 1987-08-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02420A true JPH02420A (ja) | 1990-01-05 |
Family
ID=22212456
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63209327A Pending JPH02420A (ja) | 1987-08-24 | 1988-08-23 | 連鎖球菌感染に対する治療組成物、形質転換宿主、免疫方法及び遺伝子工学的産物 |
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| Country | Link |
|---|---|
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Families Citing this family (29)
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|---|---|---|---|---|
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| US5846547A (en) * | 1996-01-22 | 1998-12-08 | Regents Of The University Of Minnesota | Streptococcal C5a peptidase vaccine |
| US6355255B1 (en) | 1998-12-07 | 2002-03-12 | Regents Of The University Of Minnesota | Streptococcal C5a peptidase vaccine |
| US6752988B1 (en) * | 2000-04-28 | 2004-06-22 | New Horizons Diagnostic Corp | Method of treating upper resiratory illnesses |
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