JPH025845A - バクテリオシンを用いてリステリア・モノサイトゲネスを抑制する方法 - Google Patents
バクテリオシンを用いてリステリア・モノサイトゲネスを抑制する方法Info
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- JPH025845A JPH025845A JP63332213A JP33221388A JPH025845A JP H025845 A JPH025845 A JP H025845A JP 63332213 A JP63332213 A JP 63332213A JP 33221388 A JP33221388 A JP 33221388A JP H025845 A JPH025845 A JP H025845A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
［微生物の薔託］
この発明全実施するのに使用さ几る好適したバクテリオ
シンは、特許手続上の微生物の寄託の国際的１承認に関
するブダペスト条約の規定に基いてアメリカ合衆国、イ
リノイ州、ペオリア、アスダのノーザン・リイジョナル
・リサーチ・ラボラトリ−（Ｎｏｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｌ
ｏｎａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
）に寄託されているペジオコツクス・アシデイラクテイ
シイ （Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｌ Ｉａｃ
ｔｉｃｉ ） ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０によって生産
される。 〔産業上の利用分野〕 この発明はバクテリオシン金用い食品中に産生ずる病源
体であるリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒ
ｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）を、この病源体に
よって汚染されつる食品或は他の製品中で抑制する方法
に関するものである。特にこの発明はペジオコックスー
アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄ！ｏｃｏｃｃｕｓ ａｃ
ｌｄｉ−１ａｃｔ（ｃｉ ）から誘導されるバクテリオ
シンを用い、リステリア・モノサイトゲネスによって汚
染されつる食品或は他の製品中で同病原体を抑制する方
法に係る。 〔従来の技術〕 「バクテリオシン（ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ ） Ｊ
なる用語はコリシン型のタンパク質であって生産細菌に
よる致死生合成、関連菌種中での内部比活性、及び感受
性細菌上での特定受容体の吸収によって特徴付けられる
ものを指す（Ｔａｇｇ、 Ｊ 、 Ｒ，、Ａ、Ｓ、Ｄａ
ｊａｎｉ 。 ａｎｄ Ｌ、 Ｗ、 Ｗａｎｎａｍａｋｅｒ 、 Ｂａ
ｃｔｅｒｌｏｌ 、 Ｒｅｗ 、 ４０ 。 ７２２−７５６ （１９７６））。バクテリオシンは故
多くの細菌によって生産されると報告されて来て會 いるが、バクテリオシンによって抑制される菌株は普通
、バクテリオシンを生産する菌株と関連したものである
（Ｇｏｎｚａｌｅｚ 、 Ｃ，Ｆ、 、 ａｎｄ
Ｂ 、 Ｓ 。 Ｋｕｎｋａ 、 Ａｐｐｌ 、 Ｅｎｖｉｒｏｎ 、
Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌ 、 ５３ 、２５３４−２５３
８ （１９８７）。 本願出願人の出願に係る特願昭６３−２７３９７ 号に
ハヘジオコックス・アシデイラフティシイ、特にペジオ
コツクス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄｉｏ−ｃｏｃ
ｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）ＮＲＲＬ −Ｂ−
１８０５０から誘導されるバクテリオシンの調製法と同
バクテリオシン金用い変敗性細菌、特にラクトバチルス
・ファメンツム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅ
ｒｍｅｎｔｕｍ ）及びラクトバチルス・ビイファメン
ツム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｉ ｆｅｒｍｅｎ
ｔｕｍ）を抑制する方法とが、開示さｎている。こｎら
の変敗性細菌は、ラクトバチルス属及びペジオコックス
属の乳酸生産性菌株である。ラクトコックス・ラクチス
（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ）ラクトコッ
クス・ラクチスの亜種ジアセテラクチｏｒｉｓ） （
以前はストレプトコックス属に分類）或ハストレブトコ
ックス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐ−ツクス°ソドネ
ンシス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ５ｏｄｏｎｅｎｓｉ
ｓ）、ｘｙｌｏｓｕｓ） 、スタフ・ｆロコックス・エ
ビテルミテイクトパチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔ
ｏｂａｃｉｌｉｕｓａｃｉｄｐｈｉ ｌｕｓ ）、ラク
トバチルス・ラクチス（Ｌａｃｔｏ−出せな刀λつに０
このため上記した）（タテリオシンはグラム陽性乳酸菌
といつｔ限らｎた範凹の細菌に対する抑制活性を有する
と、結論された。 リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍ
ｏｎｏ −ｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）は汚染食品中に導入
さｎることが示されて来ている（ Ｊ、 Ａｐｐｉｅｄ
Ｂａｃｔ、 ６３ 、１−１１（１９８７））。バ
クテリオシン培養物はｐＨに対し敏感であジ酸性下では
普通、上記した微生物の成長ケ抑制するが、食品につい
てｐＨが十分に酸性でない場合が多い。 リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｌａ ｍ
ｏｎｏ −ｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ） ｕ、動物及び人類
に重い病気を生じさせる。この病気及び本菌種は、Ｊ
、 Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂａｃｔ 。 ６３ 、１−１１ （１９８７）に記載されている。 リステリア・モノサイトゲネスは冷凍温度でも工く成長
し、このため冷凍によシ成長を抑制するといった通常の
手段はリステリア・モノサイトゲネスについては効果が
ない。このことから流通市場での問題が生じ、その−例
としてはいくつかの銘柄のリステリア（Ｌｉ５ｔｅｒｉ
ａ ）汚染アイスクリーム・バーの回収といった、最近
公けになつ次問題がある。 Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍ
ａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ 、Ｖｏ１２ 、
１２３５−１２４５（１９８６）によると、他の属に関
連してのリステリア（Ｌｌｓｔｅｒｉａ ）属の分類学
上の位置はまだ決定されていないとされている。しかし
ながらリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉ
ａ属の菌種と全く異なつｔものであることは明確である
。 〔発明課題〕 したがってこの発明の目的とするところは、リステリア
−％ノサイトゲネス（Ｌｌｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙ
ｔｏ −ｇｅｎｅｓ ）によって汚染されうる食品或は
他の製品中で同病原体を、バクテリオシンを用いて抑制
する方法を提供するにある。まｔこの発明は、単純で経
済的に突施できる上記病源体の抑制方法を提供すること
も目的としている。 ［−膜内な説明］ この発明はリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓ−ｔ
ｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）によシ汚染
されうる食品或は他の組成物中でリステリア・モノサイ
トゲネスの生育を抑制する方法に係り、同方法はペジオ
コツクス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃ
ｕｓ ａｃｉｄｉ −１ａｃｔｉｃ＋ ）中でバクテリ
オシフ生産遺伝暗号を担持するＤＮＡから得られたバク
テリオシフを上記した食品或は他の組成物中に、リステ
リア・モノサイトゲネスを抑制するのに有効な量だけ導
入することを特徴とする。 この発明［ｔ７’Ｃ１！Ｊステリア・モノサイトゲネス
（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）
全汚染物として含みうる食品中でリステリア・モノサ
イトゲネスを抑制する方法に係り、同方法はペジオコツ
クス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ
ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ ）中でバクテリオシン生
産遺伝暗号を担持するＤＮＡを含む細菌から得られたバ
タテリオシンを上記食品中に、リステリア・モノサイト
ゲネスを抑制するのに有効な量だけ添加すること４４ｅ
Ｊ徴とする。 好ましいバクテリオシンはＦＡ−１である。 この発明に用いられる好ましいバクテリオシンＰＡ−Ｉ
Ｕアメリカ合衆国、イリノイ州、ベオリアのノーザン・
リイジョナル・リサーチ・ラボラド リ −（Ｎｏｔｈ
ｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ） に寄託されＰＡＣｌ、
Ｏといつ九名称でも知らｎているペジオコツクス・アシ
デイラクテイシイ（Ｐｅｄｉｏ−ｃｏｃｃｕｓ ａｃｉ
ｄｌｌａｃｔｉｃｌ）ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０によっ
て生産さｎる。ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ
は、食肉の発酵に使用されている市販の菌種である。こ
の好ましい菌種は、バクテリオシン生産遺伝暗号を担持
する９、４キロ塩基対（６，２Ｍｄａｌ ）のプラスミ
ドを含んでいる。周知の遺伝子組換え技術を用い、バク
テリオシン生産遺伝暗号を担持するＤＮＡ遺伝子断片ｔ
−切断してベクターと結合させ、他の微生物中へと挿入
して該他の微生物にバクテリオシンを生産させることが
できる。 ＰＡ−１のようなバクテリオシフ全作製する最も簡単な
方法は、細胞増殖後にバクテリオシンを含む増殖培地を
乾燥して粉末にすることである。 固形分は増殖培地から、濾過または遠心分離法によって
除去できる。低分子量の化合物は膜濾過、特に逆浸透法
によって除去できる。無脂乾燥乳（ｎｏｎ−ｆａｔ ｄ
ｒｙ ｍ１ｌｋ 、 ＮＦＤＭ ）の工うな食品等級の
乾燥助剤を、バクテリオシンを含む溶液を乾燥させるた
めに使用することができる。バクテリオシンはタンパク
質性の物質であり沈澱法によって、或は逆浸透法のよう
な他の公知の方法によって、増殖培地から分離すること
もでき、その分離物を次いで純粋な形のものへと乾燥で
きる。バクテリオシンは約１６，５００ダルトンの分子
量を有し、試験管内（イン ビトロ）でプロテアーゼ、
パパイン或はアルファーキモトリプシンを混合すること
によって不活性化され、ホスホリパーゼ ｃ、リソチー
ム、ＤＮアーゼ（ＤＮａｓｅ）及びＲＮアーゼ（ＲＮａ
ｓｅ）或は水中での１・００℃への加熱ＶＣよっては影
響上受けず、約４−９間のｐＨ範囲でリステリア゛モノ
サイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇ
ｅｎｅｓ）を抑制する。本バクテリオシンの調製法と４
１Ｈ１ｎＩＩ述した特願昭６３−２７３９７号に述べら
れている。 食品中で用いるバクテリオシフの望ましいｔｈ、食品１
グラム当、０ＰＡ−１の工うなバクテリオシフ １−１
００，０００任意単位（Ａｒｂｉｔｒａｒｙ Ｕｎｉｔ
、 Ａ Ｕ ）テする。バクテリオシンのｔＡＵｈ寒
大平板上のグラム陽性細菌の指示体（公式にはベジオコ
ックス・セレビシ：ｒ−−（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ
ｃｅｒｅｖｉｓ４ａｅ） ＦＢＢ−６３として知られて
いるペジオコックス・ベントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ） ＦＢＢ−６３）
の密生地（ｌａｗｎ）について明白な生育抑制領域（ａ
ｄｅｆｉｎｉｔｅ Ｚｏｎｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ
１ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ） ｉなお生じさせるところの
、培養物上ｕ液の最大希釈液（ｈｉｇｈｅｓｔ ｄｉｌ
ｕｔｉｏｎ ） ５ ａｔと、定義さＡ７’ｊ。 リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍ
ｏｎｏ−ｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）によシ最も汚染され易
い食品は乳類を基材料とするチーズ、アイスクリーム或
ハアイスミルク、及びコテージチーズである。機械で処
理され最終包装時に熱処理されない食品は、特に汚染さ
れ易い。牛肉、豚肉或は家禽肉のような肉類は、屠殺中
或は屠殺後に汚染されうる。魚も処理中に汚染されうる
。 詰め物、潤滑剤、包帯、培養基等を含む医療用及び獣医
用製品ハ、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅ
ｒｌａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）で汚染されう
る。また化粧品及びそれに関連した個の製品も、本病源
体で汚染されつる。食品及び経口摂取さｎる他のｊｉ！
ｌ！？３において危害が最大であるも、上述のような製
品においてもペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（
Ｐｅｄｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｌｄｌｌａｃｔｌｃｌ
）から誘導されｔバクテリオシンは問題とする病原体を
抑制するのに有用である。これらの製品は全て、生体外
或は生体内で生組織と接触して病気を発生させうる。 〔図面に結果を示した試験の説明〕 第１因は指数増殖期のリステリア・モノサイトゲネス（
Ｌｉ５ｔｅｒ＋ａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）培
養物に対し、ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（
ＰｅｄｉＯ−ｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ
）由来のＰＡ−１と称しであるバクテリオシン倉吉む粉
末ｋｌＦｓ加することの効果を示している。リステリア
・モノサイトゲネス培養物に対しＦＡ−１粉末＝ｉ２０
０Ｕ （単位）／−または５００ Ｕ／−の割合で添加
し、濁度（これは細胞の個数を示す指標となる。）を波
長６６０ナノメータで時間の関数として測定した。記号
中、黒丸は標準（Ｐ Ａ −１ｋ ／ＩＩｓ加せず）、
白丸は２００Ｕ／、ｊＰＡ−１牙、白抜き正方形は５０
０ Ｕ／、ｊＰＡ−１全、そｎぞｎ示している。 第２図は、ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ （
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｌｄｌｌａｃｔｉｃｉ）
ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０（ＰＡＣｌ、０ともいう。）
中でバクテリオシンＰＡ−１の生産遺伝暗号を担持する
プラスミドｐＳＲＱ１１の制限エンドヌクレアーゼ地図
を、示している。９．４キロ塩基対のプラスミド１）Ｓ
ＲＱＩ １は、数個の制限エンドヌクレアーゼ部位の位
置で示されている。バクデリオシンＰＡ−１ｉ１１伝子
の担持領域のおおまかな位置が示されている。ＰＡ−１
遺伝子中に４個の制限部位Ｈ１ｎｄ ｍ、Ｘｂａ Ｉ、
Ｃ１ａ１、 Ｐｖｕ ｆｌが見出された。 〔明細な説明〕 バクテリオシンの製造の交めに用いた方法と材料は、次
の通υであつ友。 菌株：ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄ
ｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｌ）ＮＲＲ
Ｌ −Ｂ−１８０５０ｆ、常法に従い３５℃で成長させ
ＭＲＳグロス（アメリカ合衆国、ミシガン州、デトロイ
トのＤｉ ｆ ｃｏ社製）で培養した・ バクテリオシンの検定：バクテリオシンの産生を、細胞
或はフィルター滅菌後のブロス試料１ＭＲ５寒天（Ｄｉ
ｆｃｏ社製）上に滴下することにより検定した。活性度
全検定する几めフィルター滅菌後のプロス試料を系列希
釈（無菌水中に１：１，１：２，１：４，１：８，１：
１６）により希釈した。指示細胞（ヘジオコックス・ベ
ントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏ
ｓａｃｅｕｓ）ＦＢＢ６３Ｃ） ｅ！種さｎている軟寒
天（０，７５％）で検定平板をおおった。 こｎらの検定平板について３２℃で１８時間、培養上行
なった。 第１表に掲げた培地をそれぞｎ、１００−量調製した。 培地をオートクレーブ処理前にｐＨ６，８に調整した。 培地にＮＲＲＬ −Ｂ −１８０５０の８時間培養物を
１％の割合で植菌し、次いで３５℃で１８時間培養した
。１８時間後に培養物の２５−全４℃で１０分間、１２
，０００ Ｘ ｇで遠心分離処理した。次に上登液ｋ
０．２２ミクロンフィルタ・−（アメリカ合衆国、マサ
チュウセツツ州、ペッドフォードのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ
仕製）を用いてフィルター滅菌し、指示菌株としてのベ
シオコックス・ベントサセウス（Ｐｅｄｉ＋） −ｃｏ
ｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ） Ｆ Ｂ Ｂ
６３ Ｃｆ阻害する最小希釈度（力価）について試験し
た。 栄養学的な研究の結果を、第１表に要約して掲げる。 第 １ 表 バクテリオシンの生産に関する Ｎ ＲＲＬ −Ｂ −１８０５０の栄養学的研究培地
力価ＭＲＳラクトバ
チルス・ブロス（Ｄｉｆｃｏ社製） １：４＋ＭＲ５
＋酵母エキス（英国、パシングスト１：８＋−りの０ｘ
ｏｉｄ社製）２％ ＭＲ５＋ＨＹ−ＣＡＳＥ （商標、アメリカ合衆国、１
・４＋ニユーヨーク州、ノーウィッチの ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社＃）１％ＭＲ
３＋ＨＹ−５ＯＹ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐ
ｒｏｄｕｃｔｓ １ ： ４＋社製）１％ ＭＲ５＋カザミノ酸（Ｄｉｆｃｏ社製）１％ １；
４ＭＲ５＋酵母エキス２％十ＨＹ−ＣＡＳＥ１％ １
：４ＭＲ５＋酵母エキス２％＋ＨＹ−５ＯＹ１％ １
：４ＭＲ５＋酵母エキス２％十カザミノ酸１％ １：８
＋（ｂ）ＨＹ−３ＯＹ １％を補充 ＨＹ−ＣＡＳＥ １ ％ 酵母エキス２．５％ ブドウ糖 ２０％ ＨＹ−５ＯＹ １ ％ 酵母エキス２．５％ ブドウ糖 ２．０％ ＨＹ−ＣＡＳＥ １．２ ％ ＨＹ−３ＯＹ１．２％、酵母エキス２．０％ブドウ糖
５．０％ ホエー６％ ブドウ糖 １％ １：４＋ ＭＲ５基体（プロテオース・ペプトンを除（ＭＲ５の全
成分を含む実験室調製物）（ａ） ＨＹ−ＣＡＳＥ １
％を補充 ｌ：４ホ工−６％ ブドウ糖 １％ 酵母エキス２％ Ｉ：２ ホエー ６ ％ １：２＋ ブドウ糖１％ カザミノ酸２％ ホエー ６％ ブドウ糖 １％ 酵母エキス ２％ カザミノ酸 ２％ １：２ ペプトン化乳１０％に下記のものを補充（ａ）酵母エキ
ス２．０％＋ブドウ糖０．５％（ｂ）酵母エキス２．０
％＋ブト象糖象形１Ｃ）酵母エキス２．０％＋ブドウ糖
２％１．４＋ １＝４＋
シンは、特許手続上の微生物の寄託の国際的１承認に関
するブダペスト条約の規定に基いてアメリカ合衆国、イ
リノイ州、ペオリア、アスダのノーザン・リイジョナル
・リサーチ・ラボラトリ−（Ｎｏｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｌ
ｏｎａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
）に寄託されているペジオコツクス・アシデイラクテイ
シイ （Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｌ Ｉａｃ
ｔｉｃｉ ） ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０によって生産
される。 〔産業上の利用分野〕 この発明はバクテリオシン金用い食品中に産生ずる病源
体であるリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒ
ｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）を、この病源体に
よって汚染されつる食品或は他の製品中で抑制する方法
に関するものである。特にこの発明はペジオコックスー
アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄ！ｏｃｏｃｃｕｓ ａｃ
ｌｄｉ−１ａｃｔ（ｃｉ ）から誘導されるバクテリオ
シンを用い、リステリア・モノサイトゲネスによって汚
染されつる食品或は他の製品中で同病原体を抑制する方
法に係る。 〔従来の技術〕 「バクテリオシン（ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ ） Ｊ
なる用語はコリシン型のタンパク質であって生産細菌に
よる致死生合成、関連菌種中での内部比活性、及び感受
性細菌上での特定受容体の吸収によって特徴付けられる
ものを指す（Ｔａｇｇ、 Ｊ 、 Ｒ，、Ａ、Ｓ、Ｄａ
ｊａｎｉ 。 ａｎｄ Ｌ、 Ｗ、 Ｗａｎｎａｍａｋｅｒ 、 Ｂａ
ｃｔｅｒｌｏｌ 、 Ｒｅｗ 、 ４０ 。 ７２２−７５６ （１９７６））。バクテリオシンは故
多くの細菌によって生産されると報告されて来て會 いるが、バクテリオシンによって抑制される菌株は普通
、バクテリオシンを生産する菌株と関連したものである
（Ｇｏｎｚａｌｅｚ 、 Ｃ，Ｆ、 、 ａｎｄ
Ｂ 、 Ｓ 。 Ｋｕｎｋａ 、 Ａｐｐｌ 、 Ｅｎｖｉｒｏｎ 、
Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌ 、 ５３ 、２５３４−２５３
８ （１９８７）。 本願出願人の出願に係る特願昭６３−２７３９７ 号に
ハヘジオコックス・アシデイラフティシイ、特にペジオ
コツクス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄｉｏ−ｃｏｃ
ｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）ＮＲＲＬ −Ｂ−
１８０５０から誘導されるバクテリオシンの調製法と同
バクテリオシン金用い変敗性細菌、特にラクトバチルス
・ファメンツム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅ
ｒｍｅｎｔｕｍ ）及びラクトバチルス・ビイファメン
ツム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｉ ｆｅｒｍｅｎ
ｔｕｍ）を抑制する方法とが、開示さｎている。こｎら
の変敗性細菌は、ラクトバチルス属及びペジオコックス
属の乳酸生産性菌株である。ラクトコックス・ラクチス
（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ １ａｃｔｉｓ）ラクトコッ
クス・ラクチスの亜種ジアセテラクチｏｒｉｓ） （
以前はストレプトコックス属に分類）或ハストレブトコ
ックス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐ−ツクス°ソドネ
ンシス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ５ｏｄｏｎｅｎｓｉ
ｓ）、ｘｙｌｏｓｕｓ） 、スタフ・ｆロコックス・エ
ビテルミテイクトパチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔ
ｏｂａｃｉｌｉｕｓａｃｉｄｐｈｉ ｌｕｓ ）、ラク
トバチルス・ラクチス（Ｌａｃｔｏ−出せな刀λつに０
このため上記した）（タテリオシンはグラム陽性乳酸菌
といつｔ限らｎた範凹の細菌に対する抑制活性を有する
と、結論された。 リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍ
ｏｎｏ −ｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）は汚染食品中に導入
さｎることが示されて来ている（ Ｊ、 Ａｐｐｉｅｄ
Ｂａｃｔ、 ６３ 、１−１１（１９８７））。バ
クテリオシン培養物はｐＨに対し敏感であジ酸性下では
普通、上記した微生物の成長ケ抑制するが、食品につい
てｐＨが十分に酸性でない場合が多い。 リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｌａ ｍ
ｏｎｏ −ｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ） ｕ、動物及び人類
に重い病気を生じさせる。この病気及び本菌種は、Ｊ
、 Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂａｃｔ 。 ６３ 、１−１１ （１９８７）に記載されている。 リステリア・モノサイトゲネスは冷凍温度でも工く成長
し、このため冷凍によシ成長を抑制するといった通常の
手段はリステリア・モノサイトゲネスについては効果が
ない。このことから流通市場での問題が生じ、その−例
としてはいくつかの銘柄のリステリア（Ｌｉ５ｔｅｒｉ
ａ ）汚染アイスクリーム・バーの回収といった、最近
公けになつ次問題がある。 Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍ
ａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ 、Ｖｏ１２ 、
１２３５−１２４５（１９８６）によると、他の属に関
連してのリステリア（Ｌｌｓｔｅｒｉａ ）属の分類学
上の位置はまだ決定されていないとされている。しかし
ながらリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉ
ａ属の菌種と全く異なつｔものであることは明確である
。 〔発明課題〕 したがってこの発明の目的とするところは、リステリア
−％ノサイトゲネス（Ｌｌｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙ
ｔｏ −ｇｅｎｅｓ ）によって汚染されうる食品或は
他の製品中で同病原体を、バクテリオシンを用いて抑制
する方法を提供するにある。まｔこの発明は、単純で経
済的に突施できる上記病源体の抑制方法を提供すること
も目的としている。 ［−膜内な説明］ この発明はリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓ−ｔ
ｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）によシ汚染
されうる食品或は他の組成物中でリステリア・モノサイ
トゲネスの生育を抑制する方法に係り、同方法はペジオ
コツクス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃ
ｕｓ ａｃｉｄｉ −１ａｃｔｉｃ＋ ）中でバクテリ
オシフ生産遺伝暗号を担持するＤＮＡから得られたバク
テリオシフを上記した食品或は他の組成物中に、リステ
リア・モノサイトゲネスを抑制するのに有効な量だけ導
入することを特徴とする。 この発明［ｔ７’Ｃ１！Ｊステリア・モノサイトゲネス
（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）
全汚染物として含みうる食品中でリステリア・モノサ
イトゲネスを抑制する方法に係り、同方法はペジオコツ
クス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ
ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ ）中でバクテリオシン生
産遺伝暗号を担持するＤＮＡを含む細菌から得られたバ
タテリオシンを上記食品中に、リステリア・モノサイト
ゲネスを抑制するのに有効な量だけ添加すること４４ｅ
Ｊ徴とする。 好ましいバクテリオシンはＦＡ−１である。 この発明に用いられる好ましいバクテリオシンＰＡ−Ｉ
Ｕアメリカ合衆国、イリノイ州、ベオリアのノーザン・
リイジョナル・リサーチ・ラボラド リ −（Ｎｏｔｈ
ｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ） に寄託されＰＡＣｌ、
Ｏといつ九名称でも知らｎているペジオコツクス・アシ
デイラクテイシイ（Ｐｅｄｉｏ−ｃｏｃｃｕｓ ａｃｉ
ｄｌｌａｃｔｉｃｌ）ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０によっ
て生産さｎる。ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ
は、食肉の発酵に使用されている市販の菌種である。こ
の好ましい菌種は、バクテリオシン生産遺伝暗号を担持
する９、４キロ塩基対（６，２Ｍｄａｌ ）のプラスミ
ドを含んでいる。周知の遺伝子組換え技術を用い、バク
テリオシン生産遺伝暗号を担持するＤＮＡ遺伝子断片ｔ
−切断してベクターと結合させ、他の微生物中へと挿入
して該他の微生物にバクテリオシンを生産させることが
できる。 ＰＡ−１のようなバクテリオシフ全作製する最も簡単な
方法は、細胞増殖後にバクテリオシンを含む増殖培地を
乾燥して粉末にすることである。 固形分は増殖培地から、濾過または遠心分離法によって
除去できる。低分子量の化合物は膜濾過、特に逆浸透法
によって除去できる。無脂乾燥乳（ｎｏｎ−ｆａｔ ｄ
ｒｙ ｍ１ｌｋ 、 ＮＦＤＭ ）の工うな食品等級の
乾燥助剤を、バクテリオシンを含む溶液を乾燥させるた
めに使用することができる。バクテリオシンはタンパク
質性の物質であり沈澱法によって、或は逆浸透法のよう
な他の公知の方法によって、増殖培地から分離すること
もでき、その分離物を次いで純粋な形のものへと乾燥で
きる。バクテリオシンは約１６，５００ダルトンの分子
量を有し、試験管内（イン ビトロ）でプロテアーゼ、
パパイン或はアルファーキモトリプシンを混合すること
によって不活性化され、ホスホリパーゼ ｃ、リソチー
ム、ＤＮアーゼ（ＤＮａｓｅ）及びＲＮアーゼ（ＲＮａ
ｓｅ）或は水中での１・００℃への加熱ＶＣよっては影
響上受けず、約４−９間のｐＨ範囲でリステリア゛モノ
サイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇ
ｅｎｅｓ）を抑制する。本バクテリオシンの調製法と４
１Ｈ１ｎＩＩ述した特願昭６３−２７３９７号に述べら
れている。 食品中で用いるバクテリオシフの望ましいｔｈ、食品１
グラム当、０ＰＡ−１の工うなバクテリオシフ １−１
００，０００任意単位（Ａｒｂｉｔｒａｒｙ Ｕｎｉｔ
、 Ａ Ｕ ）テする。バクテリオシンのｔＡＵｈ寒
大平板上のグラム陽性細菌の指示体（公式にはベジオコ
ックス・セレビシ：ｒ−−（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ
ｃｅｒｅｖｉｓ４ａｅ） ＦＢＢ−６３として知られて
いるペジオコックス・ベントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ） ＦＢＢ−６３）
の密生地（ｌａｗｎ）について明白な生育抑制領域（ａ
ｄｅｆｉｎｉｔｅ Ｚｏｎｅ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ
１ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ） ｉなお生じさせるところの
、培養物上ｕ液の最大希釈液（ｈｉｇｈｅｓｔ ｄｉｌ
ｕｔｉｏｎ ） ５ ａｔと、定義さＡ７’ｊ。 リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍ
ｏｎｏ−ｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）によシ最も汚染され易
い食品は乳類を基材料とするチーズ、アイスクリーム或
ハアイスミルク、及びコテージチーズである。機械で処
理され最終包装時に熱処理されない食品は、特に汚染さ
れ易い。牛肉、豚肉或は家禽肉のような肉類は、屠殺中
或は屠殺後に汚染されうる。魚も処理中に汚染されうる
。 詰め物、潤滑剤、包帯、培養基等を含む医療用及び獣医
用製品ハ、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅ
ｒｌａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）で汚染されう
る。また化粧品及びそれに関連した個の製品も、本病源
体で汚染されつる。食品及び経口摂取さｎる他のｊｉ！
ｌ！？３において危害が最大であるも、上述のような製
品においてもペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（
Ｐｅｄｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｌｄｌｌａｃｔｌｃｌ
）から誘導されｔバクテリオシンは問題とする病原体を
抑制するのに有用である。これらの製品は全て、生体外
或は生体内で生組織と接触して病気を発生させうる。 〔図面に結果を示した試験の説明〕 第１因は指数増殖期のリステリア・モノサイトゲネス（
Ｌｉ５ｔｅｒ＋ａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）培
養物に対し、ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（
ＰｅｄｉＯ−ｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ
）由来のＰＡ−１と称しであるバクテリオシン倉吉む粉
末ｋｌＦｓ加することの効果を示している。リステリア
・モノサイトゲネス培養物に対しＦＡ−１粉末＝ｉ２０
０Ｕ （単位）／−または５００ Ｕ／−の割合で添加
し、濁度（これは細胞の個数を示す指標となる。）を波
長６６０ナノメータで時間の関数として測定した。記号
中、黒丸は標準（Ｐ Ａ −１ｋ ／ＩＩｓ加せず）、
白丸は２００Ｕ／、ｊＰＡ−１牙、白抜き正方形は５０
０ Ｕ／、ｊＰＡ−１全、そｎぞｎ示している。 第２図は、ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ （
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｌｄｌｌａｃｔｉｃｉ）
ＮＲＲＬ−Ｂ−１８０５０（ＰＡＣｌ、０ともいう。）
中でバクテリオシンＰＡ−１の生産遺伝暗号を担持する
プラスミドｐＳＲＱ１１の制限エンドヌクレアーゼ地図
を、示している。９．４キロ塩基対のプラスミド１）Ｓ
ＲＱＩ １は、数個の制限エンドヌクレアーゼ部位の位
置で示されている。バクデリオシンＰＡ−１ｉ１１伝子
の担持領域のおおまかな位置が示されている。ＰＡ−１
遺伝子中に４個の制限部位Ｈ１ｎｄ ｍ、Ｘｂａ Ｉ、
Ｃ１ａ１、 Ｐｖｕ ｆｌが見出された。 〔明細な説明〕 バクテリオシンの製造の交めに用いた方法と材料は、次
の通υであつ友。 菌株：ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄ
ｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｌ）ＮＲＲ
Ｌ −Ｂ−１８０５０ｆ、常法に従い３５℃で成長させ
ＭＲＳグロス（アメリカ合衆国、ミシガン州、デトロイ
トのＤｉ ｆ ｃｏ社製）で培養した・ バクテリオシンの検定：バクテリオシンの産生を、細胞
或はフィルター滅菌後のブロス試料１ＭＲ５寒天（Ｄｉ
ｆｃｏ社製）上に滴下することにより検定した。活性度
全検定する几めフィルター滅菌後のプロス試料を系列希
釈（無菌水中に１：１，１：２，１：４，１：８，１：
１６）により希釈した。指示細胞（ヘジオコックス・ベ
ントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏ
ｓａｃｅｕｓ）ＦＢＢ６３Ｃ） ｅ！種さｎている軟寒
天（０，７５％）で検定平板をおおった。 こｎらの検定平板について３２℃で１８時間、培養上行
なった。 第１表に掲げた培地をそれぞｎ、１００−量調製した。 培地をオートクレーブ処理前にｐＨ６，８に調整した。 培地にＮＲＲＬ −Ｂ −１８０５０の８時間培養物を
１％の割合で植菌し、次いで３５℃で１８時間培養した
。１８時間後に培養物の２５−全４℃で１０分間、１２
，０００ Ｘ ｇで遠心分離処理した。次に上登液ｋ
０．２２ミクロンフィルタ・−（アメリカ合衆国、マサ
チュウセツツ州、ペッドフォードのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ
仕製）を用いてフィルター滅菌し、指示菌株としてのベ
シオコックス・ベントサセウス（Ｐｅｄｉ＋） −ｃｏ
ｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ） Ｆ Ｂ Ｂ
６３ Ｃｆ阻害する最小希釈度（力価）について試験し
た。 栄養学的な研究の結果を、第１表に要約して掲げる。 第 １ 表 バクテリオシンの生産に関する Ｎ ＲＲＬ −Ｂ −１８０５０の栄養学的研究培地
力価ＭＲＳラクトバ
チルス・ブロス（Ｄｉｆｃｏ社製） １：４＋ＭＲ５
＋酵母エキス（英国、パシングスト１：８＋−りの０ｘ
ｏｉｄ社製）２％ ＭＲ５＋ＨＹ−ＣＡＳＥ （商標、アメリカ合衆国、１
・４＋ニユーヨーク州、ノーウィッチの ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社＃）１％ＭＲ
３＋ＨＹ−５ＯＹ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐ
ｒｏｄｕｃｔｓ １ ： ４＋社製）１％ ＭＲ５＋カザミノ酸（Ｄｉｆｃｏ社製）１％ １；
４ＭＲ５＋酵母エキス２％十ＨＹ−ＣＡＳＥ１％ １
：４ＭＲ５＋酵母エキス２％＋ＨＹ−５ＯＹ１％ １
：４ＭＲ５＋酵母エキス２％十カザミノ酸１％ １：８
＋（ｂ）ＨＹ−３ＯＹ １％を補充 ＨＹ−ＣＡＳＥ １ ％ 酵母エキス２．５％ ブドウ糖 ２０％ ＨＹ−５ＯＹ １ ％ 酵母エキス２．５％ ブドウ糖 ２．０％ ＨＹ−ＣＡＳＥ １．２ ％ ＨＹ−３ＯＹ１．２％、酵母エキス２．０％ブドウ糖
５．０％ ホエー６％ ブドウ糖 １％ １：４＋ ＭＲ５基体（プロテオース・ペプトンを除（ＭＲ５の全
成分を含む実験室調製物）（ａ） ＨＹ−ＣＡＳＥ １
％を補充 ｌ：４ホ工−６％ ブドウ糖 １％ 酵母エキス２％ Ｉ：２ ホエー ６ ％ １：２＋ ブドウ糖１％ カザミノ酸２％ ホエー ６％ ブドウ糖 １％ 酵母エキス ２％ カザミノ酸 ２％ １：２ ペプトン化乳１０％に下記のものを補充（ａ）酵母エキ
ス２．０％＋ブドウ糖０．５％（ｂ）酵母エキス２．０
％＋ブト象糖象形１Ｃ）酵母エキス２．０％＋ブドウ糖
２％１．４＋ １＝４＋
【：４十
ペプトン化乳１０％に下記のものを補充（ａ）酵母エキ
３２形＋ガラクトーク０．５％（ｂ）＃母エキス２％＋
ガラクトース１％１十 １＝２＋ トウモロコシ浸出液基体（トウモロコシ浸出液４粥＋ブ
ドウ糖５％十酵母エキス３％）に下記のもの全補充 （ａ）ＨＹ−ＣＡＳＥ １％ （ｂ） ＨＹ −ＣＡ Ｓ Ｅ ２％（ｃ）ＨＹ−５
ＯＹ １％ （ｄ）ＨＹ−３ＯＹ ２％ （Ｓｈｅｆｆｉｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％（ｆ
）Ｎ−Ｚ ＡＭＩＮＥ ＴＹＰＥ ＡＳ （商標。 ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社＃）１％（ｇ
）ＰＥＰＴＩＣＡＳＥ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社農）１％ （ｈ）ＰＲＩＭＡＴＯＮＥ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅ
ｌｄＰｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％ （ｉ）ＰＲＩＭＡＧＥＮ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅｌ
ｄＰｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％ （ｊ）ＡＬＢＵＴＯＮＥ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅｌ
ｄＰｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％ （ｋ）ＥＤＡＭＩＮ ＴＹＰＥ Ｓ （商標。 ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％＋１
）ＴＲＹＰＴＯＮＥ （ｉ？！ｉ標、Ｄｉｆｃｏ社製）
１％１：４＋ １＝４ １：２＋ １：４ １：２＋ １：４ １：４ 】：２＋ １：２＋ １：２＋ １：２＋ トウモロコシ浸出液基体（トウモロコシ浸出液４％士ブ
ドウ糖５％十酵母エキ ス３％）に下記のものを補充 （ａ）ＨＹ−ＣＡＳＥ １％
１：４クエン酸アンモニウム０．２％ （ｂ） ＨＹ −ＣＡ Ｓ Ｅ １％
１：４クエン酸ナトリウム０．５％ （ｃｌＨＹ−ＣＡＳＥ １９６
１：２＋Ｍｇ５ｏ ４０．０１％ （ｄ） ＨＹ −ＣＡ Ｓ Ｅ １％
１；２＋ＭｎＳＯ４０，００５％ （第１表完） 以上の第１表中に掲げ７′ＣＨＹ−ＣＡＳＥ％ＨＹ−Ｓ
ＯＹ。 Ｎ−Ｚ ＡＭＩＮＥ ＴＹＰＥ ＡＳ、 ＰＥＰＴＩＣ
ＡＳＥ％ＰＲＩＭＡＴＯＮＥ、ＰＲＩＭＡＧＥＮ％ＡＬ
ＢＵＴＯＮＥ、ＥＤＡＭＩＮ ＴＹＰＥ Ｓ、及び
ＴＲＹＰＴＯＮＥはタンパク質補充物である。 バクテリオシンＰＡ−１の生産に対し最も有効な培地は
、酵母エキス２％を補充したＭ ＲＳグロスであるよう
に考えられる。他の培地はそれほどは有効でないが、タ
ンパク質補充物は一般にバクテリオシンの生産全促進す
ると認められる。ホエー基体の培地はバクテリオシンＰ
Ａ−１の生産に対し、有効性が最も低い。 例２−乾燥バタテリオシンＰＡ−１の製造ペジオコツク
ス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄ ｉ ｏ−ｃｏｃｃ
ｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ ） ＮＲＲＬ −Ｂ
−１８０５０ｔｌ−１酵母エキス（Ｄｉ ｆ ｃｏ社製
）２％を補充した１１のＭＲＳブロス中におき３５℃で
１晩、増殖させた。細胞全遠心分離によりベレット化し
、上澄液を集め友。乾燥を促進するために無脂乾燥乳扮
全１０％（氷量／容量）まで添加した。次にこの混合物
を凍結乾燥して乾燥粉末とした。 例 ３ クリームドレッシングを混合したコテージテーズ（ｐＨ
５，１）Ｋ対しその１グラム当勺、６．５Ｘ１０ｊｃｆ
ｕ （コロニー形成単位）の割合でリステリア・モノ
サイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇ
ｅｎｅｓ冷加え友。例２のバクテリオシン粉末（ＰＡ−
１）を同コテージテーズに対し、１０または５０Ｕ（単
位）／ｇコテージテーズの割合で添加した。試料全混合
し４℃で養生し、複数の両分を取出しＭｃＢｒｉｄｅ’
ｓＡｇａｒ （Ｄｉ ｆｃｏ社）に植菌して３２℃で培
養して、リステリア・モノサイトゲネスの生育について
調べた。 第２表に結果を示す。 モノサイトゲネスに対するバクテリオシン（ＦＡ−１）
の活性 ハーフ・エンド・ハーフ クリーム（ｐＨ６，７）Ｉｃ
対しリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ
ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ） ｆ ４．３ Ｘ
１０”ｃｆｕ／ｍｔクリームの割合で加えた。同クリー
ムに対しバクテリオシン粉末ＰＡ−１を、５０Ｕ／−ク
リームの割合で淑加した。試料を混合して４℃で培養し
、複数画分全採取しリステリア・モノサイトゲネスの生
育について調べた。 結果を第３表に示す。 第 ３ 表 （注：ＬＭは６．５ Ｘ １０Ｐ細胞／ｇのリステリア
・モノサイトゲネスを示す。） 例 ４ （注：ＬＭは４．３Ｘ１０ｍ細胞／−のリステリア・モ
ノサイトゲネスを示す。） 例 ５ チーズソース（ｐＨ５，２５）に対しリステリア・モノ
サイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇ
ｅｎｅｓ ） ｆ、５．３×１０” ｃｆｕ ／ ｇチ
ーズソースの割合で加え友。このチーズソースにバクテ
リオシン粉末ＰＡ−１ｉ１０または５０ Ｕ／ｃｒソー
スの割合で添加した。試料を混合して４℃で培養し、複
数画分を採椴してリステリア・モノサイトゲネスの生育
について調べた。結果を第４表に示す。 第４表 （注：ＬＭは５．３Ｘ１０”細胞／ｃｒのリステリア・
モノサイトゲネス全ポス。） 例３−５から判明するようにバクテリオシンＰＡ−１は
食品中で、種々のｐＨ値においてリステリア・モノサイ
トゲネス（Ｌｌｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎ
ｅｓ ）の生育を制御するのに有効であつに０クリーム
に関する例４ではｐＨが最初６．７であシ、リステリア
が抑制され友。チーズソースに関する例５ではｐＨが５
．２５で、僅かに酸性であつ九。これらの２例の両者及
びコテージチーズに関する例において、リステリア・モ
ノサイトゲネスが抑制された。 例 ６ の効果 リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏ
ｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）の指数増殖期培養物に対し
無菌のＦＡ−１バクテリオシン粉末を、プロス１−当υ
２００Ｕ及び５００Ｕの割合で加え友。・リステリア・
モノサイトゲネス１ＡＰＴグロス中におき３２℃で養生
し皮。６６０ ｎｍ での吸光度を、時間の関数として
測定した。第１図はその測定結果を示しておシ、培養物
に対し無菌のＰＡ−１粉末を加え友とき３．７５時間後
に６６０ ｎｍでの吸光度が減少し始め友のに対し、対
照では増加し続は九こと、つ１シ濁度が増して行つｔこ
とが示されている。この結果はリステリア・モノサイト
ゲネスに対しバクテリオシンＰＡ−１が、単罠阻害性の
ものであるばかりでなく殺菌性のものでもあることを示
している。 例 ７ バクテリオシンＰＡ−１粉末ｔ−ＡＰＴグロスに溶かし
、２倍希釈を系列的に行なって１００ＯＵ／−から２．
ＯＵ／−の範囲の濃度のものを得た。各試料に１−当夛
約Ｉ Ｘ １０”細胞のリステリア・モノサイトゲネス
（Ｌｌｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）
を加え、３２℃で２４時間培養した。ＭＩＣ値は視認し
うる濁シを示さない最小濃度の試料の濃度とした。 ＭＢＣ値は、ＡＰＴ寒天上で平板培養し几とき集落形成
単位（ＣＦＵ）ｔ−出現させなかった最小濃度の試料の
濃度とした。結果を、第５表に要約して掲げる。 第 ５ 表 第５表に示されている通りリステリア・モノサイトゲネ
ス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ
） ｐ Ｐ Ａ −１バタテリオシンに対し極めて感受
性であり、そのａｆは指示菌株ペジオコックス・ベント
サセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ 匹駒判室期） Ｆ
Ｂ Ｂ ６３ Ｃよりむしろ大きいＯ 例 ８ ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄｌｏ−
ｃｏｃｃｕｓ ａｃｌｄｉｌａｃｔｉｃｉ）ＮＲＲＬ
−Ｂ−１８０５０ＰらプラスミドＤＮＡを単離し、既報
前の方法（Ｇｏｎｚａ ｆｅｚ 。 Ｃ，Ｆ、 、 ａｎｄ Ｂ、 Ｓ、 Ｋｕｎｋａ 、
Ａｐｐｌ 、 Ｅｎｖｉｒｏｎ 、Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１
４６ 、８１−８９ （１９８３））に従ってＤＮＡ試
料を寒天ゲル電気泳動にかけ友。第２図に示すプラスミ
ドｐｓＲＱ１１の制限酵素地固ヲ、（１）２種の酵素に
よる消化後に得ｆＣ，ＤＮＡ断片の分析、（ｕ） ０．
７％アガロース・５．０％ポリアクリルアミド・ゲル電
気泳動法によるＤＮＡ断片の分析といつ九手法を組合せ
て作成し次。 １６．５００ダルトンといつ友バクテリオシンＰＡ−１
の概略の分子量からしてバクテリオシンＰＡ−１の生産
金司どる遺伝子はプラスミドｐ Ｓ ＲＱｌｌ上で、１
．６ ｋｂのＮｄｅＩ部位とａ２ ｋｂのＣ１ａ Ｉ部
位との間の４５０ ｂｐ断片にエンコードされていると
認められる（第２図）。 バクテリオシン（ＦＡ−１）ｌ’！中性に近い声値でさ
え有効であつ九。バクテリオシン（ＰＡ−１）がリステ
リア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｌａ ｍｏｎｏ
−ｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ） ｆ抑制することは、（リ
リステリア・モノサイトゲネスがヒトに対する病原菌で
あること、（１１） ！Ｊステリア・モノサイトゲネス
の生態学的地位がペジオコツクス・アシデイラクテイシ
イ（Ｐｅｄｌｏ−ｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉ １ａｃｔ
ｉｃＩ ）に近接していないことからして、予想外であ
った。
３２形＋ガラクトーク０．５％（ｂ）＃母エキス２％＋
ガラクトース１％１十 １＝２＋ トウモロコシ浸出液基体（トウモロコシ浸出液４粥＋ブ
ドウ糖５％十酵母エキス３％）に下記のもの全補充 （ａ）ＨＹ−ＣＡＳＥ １％ （ｂ） ＨＹ −ＣＡ Ｓ Ｅ ２％（ｃ）ＨＹ−５
ＯＹ １％ （ｄ）ＨＹ−３ＯＹ ２％ （Ｓｈｅｆｆｉｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％（ｆ
）Ｎ−Ｚ ＡＭＩＮＥ ＴＹＰＥ ＡＳ （商標。 ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社＃）１％（ｇ
）ＰＥＰＴＩＣＡＳＥ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ
Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社農）１％ （ｈ）ＰＲＩＭＡＴＯＮＥ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅ
ｌｄＰｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％ （ｉ）ＰＲＩＭＡＧＥＮ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅｌ
ｄＰｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％ （ｊ）ＡＬＢＵＴＯＮＥ （商標、 ５ｈｅｆｆｉｅｌ
ｄＰｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％ （ｋ）ＥＤＡＭＩＮ ＴＹＰＥ Ｓ （商標。 ５ｈｅｆｆｉｅｌｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）１％＋１
）ＴＲＹＰＴＯＮＥ （ｉ？！ｉ標、Ｄｉｆｃｏ社製）
１％１：４＋ １＝４ １：２＋ １：４ １：２＋ １：４ １：４ 】：２＋ １：２＋ １：２＋ １：２＋ トウモロコシ浸出液基体（トウモロコシ浸出液４％士ブ
ドウ糖５％十酵母エキ ス３％）に下記のものを補充 （ａ）ＨＹ−ＣＡＳＥ １％
１：４クエン酸アンモニウム０．２％ （ｂ） ＨＹ −ＣＡ Ｓ Ｅ １％
１：４クエン酸ナトリウム０．５％ （ｃｌＨＹ−ＣＡＳＥ １９６
１：２＋Ｍｇ５ｏ ４０．０１％ （ｄ） ＨＹ −ＣＡ Ｓ Ｅ １％
１；２＋ＭｎＳＯ４０，００５％ （第１表完） 以上の第１表中に掲げ７′ＣＨＹ−ＣＡＳＥ％ＨＹ−Ｓ
ＯＹ。 Ｎ−Ｚ ＡＭＩＮＥ ＴＹＰＥ ＡＳ、 ＰＥＰＴＩＣ
ＡＳＥ％ＰＲＩＭＡＴＯＮＥ、ＰＲＩＭＡＧＥＮ％ＡＬ
ＢＵＴＯＮＥ、ＥＤＡＭＩＮ ＴＹＰＥ Ｓ、及び
ＴＲＹＰＴＯＮＥはタンパク質補充物である。 バクテリオシンＰＡ−１の生産に対し最も有効な培地は
、酵母エキス２％を補充したＭ ＲＳグロスであるよう
に考えられる。他の培地はそれほどは有効でないが、タ
ンパク質補充物は一般にバクテリオシンの生産全促進す
ると認められる。ホエー基体の培地はバクテリオシンＰ
Ａ−１の生産に対し、有効性が最も低い。 例２−乾燥バタテリオシンＰＡ−１の製造ペジオコツク
ス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄ ｉ ｏ−ｃｏｃｃ
ｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ ） ＮＲＲＬ −Ｂ
−１８０５０ｔｌ−１酵母エキス（Ｄｉ ｆ ｃｏ社製
）２％を補充した１１のＭＲＳブロス中におき３５℃で
１晩、増殖させた。細胞全遠心分離によりベレット化し
、上澄液を集め友。乾燥を促進するために無脂乾燥乳扮
全１０％（氷量／容量）まで添加した。次にこの混合物
を凍結乾燥して乾燥粉末とした。 例 ３ クリームドレッシングを混合したコテージテーズ（ｐＨ
５，１）Ｋ対しその１グラム当勺、６．５Ｘ１０ｊｃｆ
ｕ （コロニー形成単位）の割合でリステリア・モノ
サイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇ
ｅｎｅｓ冷加え友。例２のバクテリオシン粉末（ＰＡ−
１）を同コテージテーズに対し、１０または５０Ｕ（単
位）／ｇコテージテーズの割合で添加した。試料全混合
し４℃で養生し、複数の両分を取出しＭｃＢｒｉｄｅ’
ｓＡｇａｒ （Ｄｉ ｆｃｏ社）に植菌して３２℃で培
養して、リステリア・モノサイトゲネスの生育について
調べた。 第２表に結果を示す。 モノサイトゲネスに対するバクテリオシン（ＦＡ−１）
の活性 ハーフ・エンド・ハーフ クリーム（ｐＨ６，７）Ｉｃ
対しリステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ
ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ） ｆ ４．３ Ｘ
１０”ｃｆｕ／ｍｔクリームの割合で加えた。同クリー
ムに対しバクテリオシン粉末ＰＡ−１を、５０Ｕ／−ク
リームの割合で淑加した。試料を混合して４℃で培養し
、複数画分全採取しリステリア・モノサイトゲネスの生
育について調べた。 結果を第３表に示す。 第 ３ 表 （注：ＬＭは６．５ Ｘ １０Ｐ細胞／ｇのリステリア
・モノサイトゲネスを示す。） 例 ４ （注：ＬＭは４．３Ｘ１０ｍ細胞／−のリステリア・モ
ノサイトゲネスを示す。） 例 ５ チーズソース（ｐＨ５，２５）に対しリステリア・モノ
サイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇ
ｅｎｅｓ ） ｆ、５．３×１０” ｃｆｕ ／ ｇチ
ーズソースの割合で加え友。このチーズソースにバクテ
リオシン粉末ＰＡ−１ｉ１０または５０ Ｕ／ｃｒソー
スの割合で添加した。試料を混合して４℃で培養し、複
数画分を採椴してリステリア・モノサイトゲネスの生育
について調べた。結果を第４表に示す。 第４表 （注：ＬＭは５．３Ｘ１０”細胞／ｃｒのリステリア・
モノサイトゲネス全ポス。） 例３−５から判明するようにバクテリオシンＰＡ−１は
食品中で、種々のｐＨ値においてリステリア・モノサイ
トゲネス（Ｌｌｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎ
ｅｓ ）の生育を制御するのに有効であつに０クリーム
に関する例４ではｐＨが最初６．７であシ、リステリア
が抑制され友。チーズソースに関する例５ではｐＨが５
．２５で、僅かに酸性であつ九。これらの２例の両者及
びコテージチーズに関する例において、リステリア・モ
ノサイトゲネスが抑制された。 例 ６ の効果 リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏ
ｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）の指数増殖期培養物に対し
無菌のＦＡ−１バクテリオシン粉末を、プロス１−当υ
２００Ｕ及び５００Ｕの割合で加え友。・リステリア・
モノサイトゲネス１ＡＰＴグロス中におき３２℃で養生
し皮。６６０ ｎｍ での吸光度を、時間の関数として
測定した。第１図はその測定結果を示しておシ、培養物
に対し無菌のＰＡ−１粉末を加え友とき３．７５時間後
に６６０ ｎｍでの吸光度が減少し始め友のに対し、対
照では増加し続は九こと、つ１シ濁度が増して行つｔこ
とが示されている。この結果はリステリア・モノサイト
ゲネスに対しバクテリオシンＰＡ−１が、単罠阻害性の
ものであるばかりでなく殺菌性のものでもあることを示
している。 例 ７ バクテリオシンＰＡ−１粉末ｔ−ＡＰＴグロスに溶かし
、２倍希釈を系列的に行なって１００ＯＵ／−から２．
ＯＵ／−の範囲の濃度のものを得た。各試料に１−当夛
約Ｉ Ｘ １０”細胞のリステリア・モノサイトゲネス
（Ｌｌｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ）
を加え、３２℃で２４時間培養した。ＭＩＣ値は視認し
うる濁シを示さない最小濃度の試料の濃度とした。 ＭＢＣ値は、ＡＰＴ寒天上で平板培養し几とき集落形成
単位（ＣＦＵ）ｔ−出現させなかった最小濃度の試料の
濃度とした。結果を、第５表に要約して掲げる。 第 ５ 表 第５表に示されている通りリステリア・モノサイトゲネ
ス（Ｌｉ５ｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ
） ｐ Ｐ Ａ −１バタテリオシンに対し極めて感受
性であり、そのａｆは指示菌株ペジオコックス・ベント
サセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ 匹駒判室期） Ｆ
Ｂ Ｂ ６３ Ｃよりむしろ大きいＯ 例 ８ ペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（Ｐｅｄｌｏ−
ｃｏｃｃｕｓ ａｃｌｄｉｌａｃｔｉｃｉ）ＮＲＲＬ
−Ｂ−１８０５０ＰらプラスミドＤＮＡを単離し、既報
前の方法（Ｇｏｎｚａ ｆｅｚ 。 Ｃ，Ｆ、 、 ａｎｄ Ｂ、 Ｓ、 Ｋｕｎｋａ 、
Ａｐｐｌ 、 Ｅｎｖｉｒｏｎ 、Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１
４６ 、８１−８９ （１９８３））に従ってＤＮＡ試
料を寒天ゲル電気泳動にかけ友。第２図に示すプラスミ
ドｐｓＲＱ１１の制限酵素地固ヲ、（１）２種の酵素に
よる消化後に得ｆＣ，ＤＮＡ断片の分析、（ｕ） ０．
７％アガロース・５．０％ポリアクリルアミド・ゲル電
気泳動法によるＤＮＡ断片の分析といつ九手法を組合せ
て作成し次。 １６．５００ダルトンといつ友バクテリオシンＰＡ−１
の概略の分子量からしてバクテリオシンＰＡ−１の生産
金司どる遺伝子はプラスミドｐ Ｓ ＲＱｌｌ上で、１
．６ ｋｂのＮｄｅＩ部位とａ２ ｋｂのＣ１ａ Ｉ部
位との間の４５０ ｂｐ断片にエンコードされていると
認められる（第２図）。 バクテリオシン（ＦＡ−１）ｌ’！中性に近い声値でさ
え有効であつ九。バクテリオシン（ＰＡ−１）がリステ
リア・モノサイトゲネス（Ｌｉ５ｔｅｒｌａ ｍｏｎｏ
−ｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ） ｆ抑制することは、（リ
リステリア・モノサイトゲネスがヒトに対する病原菌で
あること、（１１） ！Ｊステリア・モノサイトゲネス
の生態学的地位がペジオコツクス・アシデイラクテイシ
イ（Ｐｅｄｌｏ−ｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉ １ａｃｔ
ｉｃＩ ）に近接していないことからして、予想外であ
った。
第１図はリステリア・モノサイトゲネスの培養物につい
て吸光度を測定した試験結果を示すグラフ、第２図ハヘ
ジオコックス・アシデイラフティシイ中のプラスミドｐ
Ｓ ＲＱ １１の制限酵素地図である。 ＦＩＧ、 １ 新編（ＨＥ：Ｓ）
て吸光度を測定した試験結果を示すグラフ、第２図ハヘ
ジオコックス・アシデイラフティシイ中のプラスミドｐ
Ｓ ＲＱ １１の制限酵素地図である。 ＦＩＧ、 １ 新編（ＨＥ：Ｓ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、リステリア・モノサイトゲネス（￥Ｌｉｓｔｅｒｉ
ａ￥￥ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ￥）によつて汚染さ
れうる食品或は他の製品中でリステリア・モノサイトゲ
ネスの生育を抑制する方法であつて、ペジオコツクス・
アシディラクテイシイ（￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥￥
ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ￥）中でバクテリオシン生産
遺伝暗号を担持するＤＮＡから得られたバクテリオシン
を上記した食品或は他の製品中に、リステリア・モノサ
イトゲネスを抑制するのに有効な量だけ導入することを
特徴とする方法。 ２、請求項１に記載の方法において、前記バクテリオシ
ンが約１６，５００ダルトンの分子量を有し、試験管内
でプロテアーゼ、パパイン或はアルファーキモトリプシ
ンを混合することによつて不活性化され、ホスホリパー
ゼＣ、リソチーム、ＤＮアーゼ及びＲＮアーゼ或は水中
での１００℃への加熱によつては影響を受けず、約ｐＨ
４−９間のｐＨ範囲でリステリア・モノサイトゲネス（
￥Ｌｉｓｔｅｒｉａ￥￥ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ￥
）を抑制する能力をもつものである方法。 ３、請求項１に記載の方法において、前記バクテリオシ
ンが前記したペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（
￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃ
ｉ￥）用の増殖培地から抽出した水浴液の形で生産され
たものであり、上記増殖培地がバクテリオシンの生産を
促進するアミノ酸源を含むものである方法。 ４、請求項３に記載の方法において、前記した増殖培地
中のアミノ酸源が酵母エキスである方法。 ５、請求項３に記載の方法において、前記水溶液を乾燥
助剤と共に乾燥させて流動性の粉末を得、この粉末を食
品に添加する方法。 ６、請求項５に記載の方法において、前記乾燥助剤が無
脂乾燥乳である方法。 ７、請求項６に記載の方法において、前記粉末が１グラ
ム当り約１−１００，０００ＡＵのバクテリオシンを含
むものである方法。 ８、請求項１から７までの何れか一項に記載の方法にお
いて、前記したペジオコツクス・アシディラクテイシイ
（￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄｉｌａｃｔｉ
ｃｉ￥）が前記ＤＮＡを、バクテリオシンの生産遺伝暗
号を担持する９．４キロ塩基対のプラスミドとして含む
ものである方法。 ９、請求項１から７までの何れか一項に記載の方法にお
いて、前記したペジオコツクス・アシデイラクテイシイ
がペジオコツクス・アシデイラクテイシイ（￥Ｐｅｄｉ
ｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ￥）ＮＲ
ＲＬ−Ｂ−１８０５０である方法。 １０、請求項１に記載の方法において、前記バクテリオ
シンが、前記したペジオコツクス・アシデイラクテイシ
イ（￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄｉｌａｃｔ
ｉｃｉ￥）を増殖させた増殖培地から抽出されたところ
のバクテリオシンを含む水溶液を乾燥させて得られた粉
末状のものである方法。 １１、請求項１に記載の方法において、前記バクテリオ
シンが、前記したペジオコツクス・アシデイラクテイシ
イ（￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄｉｌａｃｔ
ｉｃｉ￥）の増殖培地を膜濾過して低分子量化合物を除
去し得られたものである方法。 １２、請求項１１に記載の方法において、前記バクテリ
オシンが凍結乾燥された粉末状のものである方法。 １３、請求項１に記載の方法において、前記バクテリオ
シンが、前記したペジオコツクス・アシデイラクテイシ
イ（￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄｉｌａｃｔ
ｉｃｉ￥）の水性増殖培地から分離され乾燥されたもの
である方法。 １４、請求項１に記載の方法において、前記ＤＮＡがバ
クテリオシン生産遺伝暗号を担持するプラスミドである
方法。 １５、リステリア・モノサイトゲネス（￥Ｌｉｓｔｅｒ
ｉａ￥￥ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ￥）を汚染物とし
て含みうる食品中でリステリア・モノサイトゲネスの生
育を抑制する方法であつて、ペジオコツクス・アシデイ
ラクテイシイ（￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄ
ｉｌａｃｔｉｃｉ￥）中でバクテリオシン生産遺伝暗号
を担持するＤＮＡを含む細菌から得られたバクテリオシ
ンを上記食品中に、リステリア・モノサイトゲネスを抑
制するのに有効な量だけ添加するこを特徴とする方法。 １６、請求項１５に記載の方法において、前記バクテリ
オシンを食品中に、前記したペジオコツクス・アシデイ
ラクテイシイ（￥Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄ
ｉｌａｃｔｉｃｉ￥）を増殖させた増殖培地から抽出し
た水溶液の形で添加する方法。 １７、請求項１５に記載の方法において、前記したペジ
オコツクス・アシデイラクテイシイ（￥Ｐｅｄｉｏ−ｃ
ｏｃｃｕｓ￥￥ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ￥）を増殖さ
せた増殖培地から抽出され前記バクテリオシンを含む水
溶液を乾燥助剤と共に、或は乾燥助剤なしで乾燥して流
動性の粉末を得、この粉末を食品に添加する方法。 １８、請求項１５に記載の方法において、前記バクテリ
オシンを食品に対し、食品１グラム当り約１−１００，
０００ＡＵだけ添加する方法。 １９、請求項１５に記載の方法において、前記した食品
が乳、乳誘導物、食肉、またはコテージチーズを含めて
のチーズの何れかを含むものである方法。 ２０、請求項１５に記載の方法において、前記した食品
が調製されたサラダ、食肉、コテージチーズを含めての
チーズ、アイスミルク、またはアイスクリームの何れか
である方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/148,044 US4929445A (en) | 1988-01-25 | 1988-01-25 | Method for inhibiting Listeria monocytogenes using a bacteriocin |
| US148,044 | 1988-01-25 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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| JPH0451154B2 JPH0451154B2 (ja) | 1992-08-18 |
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| JP63332213A Granted JPH025845A (ja) | 1988-01-25 | 1988-12-29 | バクテリオシンを用いてリステリア・モノサイトゲネスを抑制する方法 |
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| JP (1) | JPH025845A (ja) |
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| GR3006077T3 (ja) | 1993-06-21 |
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