JPH02711A - 動物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物に起因する病気から予防するための組成物 - Google Patents
動物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物に起因する病気から予防するための組成物Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
この発明は微生物に起因する病気ので防するための組成
物と予防する方法に関する。より詳しくは、この発明は
特別なマイコプラズマ生物における核酸前駆物質の生合
成系を欠く微生物に起因する病気、最も詳しくはエム・
ヒオニューモニエ−（Ｍ 、 ｈｙｏｐｎｅｕｍｏ旧ａ
ｃ）に起因する豚のマイコプラズマ性ｌＴｈ１ｉ炎をｒ
防するための組成物と予防する方法に関′する。
物と予防する方法に関する。より詳しくは、この発明は
特別なマイコプラズマ生物における核酸前駆物質の生合
成系を欠く微生物に起因する病気、最も詳しくはエム・
ヒオニューモニエ−（Ｍ 、 ｈｙｏｐｎｅｕｍｏ旧ａ
ｃ）に起因する豚のマイコプラズマ性ｌＴｈ１ｉ炎をｒ
防するための組成物と予防する方法に関′する。
種々な微生物、例えばマイコプラズマ生物に起因する病
気か存在する。マイコプラズマ・ヒオニューモニエー（
Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｂｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）
に起因する病気（特に豚における）は財界中で発生し、
豚の損失を伴う病気である。一般にこの病気は無能、短
小、病弱な動物を生し、又治癒した豚はしばしば［１和
見閑による二次感染を受は易い。
気か存在する。マイコプラズマ・ヒオニューモニエー（
Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｂｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）
に起因する病気（特に豚における）は財界中で発生し、
豚の損失を伴う病気である。一般にこの病気は無能、短
小、病弱な動物を生し、又治癒した豚はしばしば［１和
見閑による二次感染を受は易い。
豚をマイコプラズマ性肺炎から予防するためのワクチン
を作り出す数多くの試みがなされたが、そのようなワク
チンの生産は成功しなかった。
を作り出す数多くの試みがなされたが、そのようなワク
チンの生産は成功しなかった。
クリステンセン（にｒｉｓｔ、ｃｎｓｅｎ）ら（アメリ
カン・ジャーナル・才ブ・ヘテリナリー・リサーチ（八
ｍ、Ｊ、Ｖｅｊ、Ｉ（Ｃｓ、） （１９８１年）、４２
巻、７８４ベージ）はマイコプラズマ・ヒオニューモニ
エーの熱不活化細胞を注射後、豚をマイコプラズマ性肺
炎から予防する効果を認めなかった。
カン・ジャーナル・才ブ・ヘテリナリー・リサーチ（八
ｍ、Ｊ、Ｖｅｊ、Ｉ（Ｃｓ、） （１９８１年）、４２
巻、７８４ベージ）はマイコプラズマ・ヒオニューモニ
エーの熱不活化細胞を注射後、豚をマイコプラズマ性肺
炎から予防する効果を認めなかった。
エセライト（εｔｈｅｒｉｄｅ）ら（リサーチ・オブ・
ペテリナリー・サイエンス（Ｒｅｓ、Ｖｅｔ、Ｓｃｉ
、）（１９８２年）、３３巻、１８８ページ）はマイコ
プラズマの生ワクチンを静脈内、皮下又は腹腔内に投与
後、マイコプラズマによる１匝臓のコロニー形成に対し
て不完全な予防しか認めなかった。
ペテリナリー・サイエンス（Ｒｅｓ、Ｖｅｔ、Ｓｃｉ
、）（１９８２年）、３３巻、１８８ページ）はマイコ
プラズマの生ワクチンを静脈内、皮下又は腹腔内に投与
後、マイコプラズマによる１匝臓のコロニー形成に対し
て不完全な予防しか認めなかった。
ロス（Ｒｏｓｓ）らはアメリカン・ジャーナル・オブ・
ベテリナリー・リサーチ（１９８４年）、４５巻、１８
９９ベージにおいて凍結融解法により：Ａ復したマイコ
プラズマ・ヒオニューモニエー抽出液の使用は変動する
予防効果のみを示し、ある場合には障害の発達を増加さ
せることを報告している。又、ロスらはそのような作用
物を豚に注射することにより、ＶＰＰ−１１株の１５代
ないし２０代納代培養の２４時間培養の１ｍｆｆ１と合
併したＶＰＰ−１１株を含む肺炎罹患肺の１０％懸濁液
からの上滑の４ｍ１Ｌの気管内投与による挑戦に対しで
ある程度予防すると主張している。
ベテリナリー・リサーチ（１９８４年）、４５巻、１８
９９ベージにおいて凍結融解法により：Ａ復したマイコ
プラズマ・ヒオニューモニエー抽出液の使用は変動する
予防効果のみを示し、ある場合には障害の発達を増加さ
せることを報告している。又、ロスらはそのような作用
物を豚に注射することにより、ＶＰＰ−１１株の１５代
ないし２０代納代培養の２４時間培養の１ｍｆｆ１と合
併したＶＰＰ−１１株を含む肺炎罹患肺の１０％懸濁液
からの上滑の４ｍ１Ｌの気管内投与による挑戦に対しで
ある程度予防すると主張している。
（発明が解決しようとするａ題）
これらの結果として、今日に至るまで、マイコプラズマ
性肺炎から豚を保護する有効なワクチンは開発されてい
ない。
性肺炎から豚を保護する有効なワクチンは開発されてい
ない。
この発明の一つの態様により、微生物に起因する病気の
予防するための組成物と予防する方法が提供される。
予防するための組成物と予防する方法が提供される。
この発明の一つの態様により、予防すべき微生物の外部
表面により分泌され、及び／又は１）「記外部表面上で
露出されるヌクレアーゼ（核酸分解酵素）（その上うな
ｉ胞の外部表面により分泌され、及び／又は館記外部表
面上で露出されるヌクレアーゼを、ここでは「（１つ又
は複数の）外来性ヌクレアーゼ」と称する。）を認識す
るパラトープを持つ抗体を生産するヌクレアーゼ（核酸
分解酵素）及び／又はその断片及び／又は誘導体を使用
することにより、核酸曲駆物質（プリン及び／又はピリ
ミジン）の生合成系を欠く微生物に起因する病気を予防
するための組成物と予防する方法が提供される。
表面により分泌され、及び／又は１）「記外部表面上で
露出されるヌクレアーゼ（核酸分解酵素）（その上うな
ｉ胞の外部表面により分泌され、及び／又は館記外部表
面上で露出されるヌクレアーゼを、ここでは「（１つ又
は複数の）外来性ヌクレアーゼ」と称する。）を認識す
るパラトープを持つ抗体を生産するヌクレアーゼ（核酸
分解酵素）及び／又はその断片及び／又は誘導体を使用
することにより、核酸曲駆物質（プリン及び／又はピリ
ミジン）の生合成系を欠く微生物に起因する病気を予防
するための組成物と予防する方法が提供される。
ヌクレアーゼはデオキシツボヌクレアーゼ（ＤＮＡ分解
酵素又はＤＮａｓｅ）及び／又はリボヌクレアーゼ（Ｒ
ＮＡ分解酵素又はＲＮａｓｅ）及び／又はその断片及び
／又はその誘導体であることかでき、前記ヌクレアーゼ
は、ＲＮａｓｅ又はその断片を使用した場合、予防すべ
き微生物の表面により分泌され、及び／又は館記表面上
で露出されるＲＮａｓｅ（外来性ＲＮａｓｅ）を認識す
る抗体を生産するか、又は前記ヌクレアーゼは、ＤＮａ
ｓｅ及び／又はＤＮａｓｅ断片及び／又は誘導体を投与
した場合、予防すべき微生物の表面により分泌され、及
び／又は前記表面上で露出されるＤＮａｓｅを認識する
抗体を生産する。
酵素又はＤＮａｓｅ）及び／又はリボヌクレアーゼ（Ｒ
ＮＡ分解酵素又はＲＮａｓｅ）及び／又はその断片及び
／又はその誘導体であることかでき、前記ヌクレアーゼ
は、ＲＮａｓｅ又はその断片を使用した場合、予防すべ
き微生物の表面により分泌され、及び／又は館記表面上
で露出されるＲＮａｓｅ（外来性ＲＮａｓｅ）を認識す
る抗体を生産するか、又は前記ヌクレアーゼは、ＤＮａ
ｓｅ及び／又はＤＮａｓｅ断片及び／又は誘導体を投与
した場合、予防すべき微生物の表面により分泌され、及
び／又は前記表面上で露出されるＤＮａｓｅを認識する
抗体を生産する。
使用するＲＮａｓｅ又はＤＮａｓｅの断片及び／又は誘
導体は、それがここに記述するような抗体を生産するこ
とができる間、酵素活性を持っても持たなくてもよい。
導体は、それがここに記述するような抗体を生産するこ
とができる間、酵素活性を持っても持たなくてもよい。
この発明は何等かの説明によって限定されるべきではな
いが、核酸Ｉ）η駆物質を合成する能力のないある種の
生物は増殖と感染に必要なプリンとどリミジンを得るた
めに核酸の存在を一必要とし、細胞表面により分泌され
、及び／又は館記表面上で露出されるヌクレアーゼは宿
主細胞によって供給される核酸からプリンとピリミジン
を生産するよう機能すると信じられている。外来性ヌク
レアーゼを認識するパラトープを持つ抗体の生産を誘導
する適当なヌクレアーゼ（１つ又は複数）及び／又は断
片（１つ又は複数）及び／又は誘導体の投与により外来
性ヌクレアーゼに特異的に結合又はこれを除去し、それ
によって微生物の増殖と感染から予防する。かくして、
予防すべき微生物の外来性ＲＮａｓｅ及び／又は外来性
ＤＮａｓｅを認識する抗体の生産を動物に誘導すること
により、その微生物の増殖又はそれによる感染は除去さ
れるか又は遅延させることができる。
いが、核酸Ｉ）η駆物質を合成する能力のないある種の
生物は増殖と感染に必要なプリンとどリミジンを得るた
めに核酸の存在を一必要とし、細胞表面により分泌され
、及び／又は館記表面上で露出されるヌクレアーゼは宿
主細胞によって供給される核酸からプリンとピリミジン
を生産するよう機能すると信じられている。外来性ヌク
レアーゼを認識するパラトープを持つ抗体の生産を誘導
する適当なヌクレアーゼ（１つ又は複数）及び／又は断
片（１つ又は複数）及び／又は誘導体の投与により外来
性ヌクレアーゼに特異的に結合又はこれを除去し、それ
によって微生物の増殖と感染から予防する。かくして、
予防すべき微生物の外来性ＲＮａｓｅ及び／又は外来性
ＤＮａｓｅを認識する抗体の生産を動物に誘導すること
により、その微生物の増殖又はそれによる感染は除去さ
れるか又は遅延させることができる。
ある場合においては、ＤＮａｓｅ又はその断片及び／又
はその誘導体もしくはＲＮ ａ ｓ ｅ又はその断片及
び／又はその誘導体を使用することにより予防をするこ
とができる。他の場合においては、ＲＮａｓｅ（又はそ
の断片及び／又はその誘導体）を使用するのみ、又はＤ
Ｎａｓｅ （又はその断片及び／又はその誘導体）を使
用するのみでｒ防することかできる。ある場合において
は、ＲＮａｓｅとＤＮａｓｅの両方（又は適当な断片及
び／又はｊＡ誘導体を没年することが必要なことかある
。自明のことであるが、そのような使用の型は微生物が
増殖と感染に必要なプリンとピリミジンを生産するため
にＲＮａｓｅ又はＤＮａｓｅ又は両方を必要とするか否
かに依存する。好ましいＤＮａｓｅ又はその断片及び／
又はその誘導体はＤＮＡエンドヌクレアーゼである。
はその誘導体もしくはＲＮ ａ ｓ ｅ又はその断片及
び／又はその誘導体を使用することにより予防をするこ
とができる。他の場合においては、ＲＮａｓｅ（又はそ
の断片及び／又はその誘導体）を使用するのみ、又はＤ
Ｎａｓｅ （又はその断片及び／又はその誘導体）を使
用するのみでｒ防することかできる。ある場合において
は、ＲＮａｓｅとＤＮａｓｅの両方（又は適当な断片及
び／又はｊＡ誘導体を没年することが必要なことかある
。自明のことであるが、そのような使用の型は微生物が
増殖と感染に必要なプリンとピリミジンを生産するため
にＲＮａｓｅ又はＤＮａｓｅ又は両方を必要とするか否
かに依存する。好ましいＤＮａｓｅ又はその断片及び／
又はその誘導体はＤＮＡエンドヌクレアーゼである。
この発明により予防すべき微生物の代表的な例として、
マイコプラズマ、アコレプラズマ（ａｃｈｏｌｃｐｌａ
ｓｍａ） 、ウレアプラズマ（ｕｒｅａｐ ｌａｓｍａ
）、スピロプラズマ（ｓｐｉ Ｉｏｐｌａｓｍａ）、及
びアネアロプラズマ（ａｎｅｒｏｐｌａｓｍａ）を挙げ
ることができる。
マイコプラズマ、アコレプラズマ（ａｃｈｏｌｃｐｌａ
ｓｍａ） 、ウレアプラズマ（ｕｒｅａｐ ｌａｓｍａ
）、スピロプラズマ（ｓｐｉ Ｉｏｐｌａｓｍａ）、及
びアネアロプラズマ（ａｎｅｒｏｐｌａｓｍａ）を挙げ
ることができる。
−ｒ防を実現するために使用するヌクレアーゼは、予防
を検討している微生物から外来性ヌクレアーゼを回収す
ることにより得ることができる。
を検討している微生物から外来性ヌクレアーゼを回収す
ることにより得ることができる。
更に別な方法として、予防を検討する微生物の１つ又は
複数の抗原決定基（エピトープ）のアミノ酸配列をコー
トする組換えＤＮＡ分子を、遺伝子工学技術によりヌク
レアーゼ又はその断片及び／又はその誘導体を生産する
ために使用することができる。遺伝子工学技術により生
産されるそのようなヌクレアーゼ又はその断片及び／又
はその誘導体は、予防すなわち免疫応答を検討している
微生物の外来性ヌクレアーゼを認識する抗体を生産する
。
複数の抗原決定基（エピトープ）のアミノ酸配列をコー
トする組換えＤＮＡ分子を、遺伝子工学技術によりヌク
レアーゼ又はその断片及び／又はその誘導体を生産する
ために使用することができる。遺伝子工学技術により生
産されるそのようなヌクレアーゼ又はその断片及び／又
はその誘導体は、予防すなわち免疫応答を検討している
微生物の外来性ヌクレアーゼを認識する抗体を生産する
。
好ましい具体化により、この発明はマイコプラズマ微生
物に起因する病気の予防を意図する。好ましい具体化に
より、そのような予防はＤＮａｓｅ又はその断片及び／
又はその誘導体により実現され、好ましいＤＮａｓｅは
ＤＮＡエンドヌクレアーゼである。
物に起因する病気の予防を意図する。好ましい具体化に
より、そのような予防はＤＮａｓｅ又はその断片及び／
又はその誘導体により実現され、好ましいＤＮａｓｅは
ＤＮＡエンドヌクレアーゼである。
この発明は更に、マイコプラズマに起因する病気をＤＮ
ａｓｅ又はその断片又はその誘導体を使用することによ
り予防することに関して記述されているか、しかしなか
らこのような方法は上に述べた他の種類の微生物に対す
る予防及び／又はＲＮａｓｅの使用に対しても等しく適
用することが可能である。
ａｓｅ又はその断片又はその誘導体を使用することによ
り予防することに関して記述されているか、しかしなか
らこのような方法は上に述べた他の種類の微生物に対す
る予防及び／又はＲＮａｓｅの使用に対しても等しく適
用することが可能である。
ワクチンに使用するＤＮａｓｅはマイコプラズマ生物か
ら得ることができ、すなわち、ＤＮａｓｅはＤＮａｓｅ
を可溶化する非イオン性界面活性剤のようなおだやかな
界面活性剤を使用してマイコプラズマ生物の１Ｉ５Ｎか
ら取り出すことができる。
ら得ることができ、すなわち、ＤＮａｓｅはＤＮａｓｅ
を可溶化する非イオン性界面活性剤のようなおだやかな
界面活性剤を使用してマイコプラズマ生物の１Ｉ５Ｎか
ら取り出すことができる。
非イオン性界面活性剤はＤＮａｓｅを可溶化するのに１
−分な星を使用する。一般に、非イオン性界面活性剤の
処理されるマイコプラズマ生物に対する爪Ｆｉｔ比は０
．０５：１から約１０．０：１であり、好ましくは約０
．５：１から５０＝１である。一般に処理は４０℃を超
えない温度で行い、最も一般的には１℃〜３７℃の程度
である。
−分な星を使用する。一般に、非イオン性界面活性剤の
処理されるマイコプラズマ生物に対する爪Ｆｉｔ比は０
．０５：１から約１０．０：１であり、好ましくは約０
．５：１から５０＝１である。一般に処理は４０℃を超
えない温度で行い、最も一般的には１℃〜３７℃の程度
である。
処理はＤＮａｓｅの可溶化か生ずるのに十分な時間行い
、一般にそのような時間は０，５〜１８時間の程度であ
るか、場合によっては、より長い時間又はより短い時間
を用いることもできる。
、一般にそのような時間は０，５〜１８時間の程度であ
るか、場合によっては、より長い時間又はより短い時間
を用いることもできる。
般に、ＤＮＡを可溶化するのに使用する溶液は０．０５
〜１．０Ｍの塩のイオン強度を持つ。
〜１．０Ｍの塩のイオン強度を持つ。
好ましい可溶化剤は０．２Ｍのナトリウムイオンを含む
。
。
トに示したように、一般にマイコプラズマ生物の膜はそ
のような処理を受ける。そのような膜は般に凍結融解の
反復、超音波処理などのような当該技術分野で公知の方
法により微生物を破壊して得ることができる。又は、Ｄ
Ｎａｓｅは全生物から得ることもできる。適当な方法の
選択は、ここに記述したことにより当業者が到達し得る
範囲にあると考えられる。
のような処理を受ける。そのような膜は般に凍結融解の
反復、超音波処理などのような当該技術分野で公知の方
法により微生物を破壊して得ることができる。又は、Ｄ
Ｎａｓｅは全生物から得ることもできる。適当な方法の
選択は、ここに記述したことにより当業者が到達し得る
範囲にあると考えられる。
ＤＮａｓｅはマイコプラズマ細胞培養の上清から取り出
すことも可能であり、たとえば、ＤＮａｓｅを細胞上清
から硫酸アンモニウムで沈殿させることかできる。
すことも可能であり、たとえば、ＤＮａｓｅを細胞上清
から硫酸アンモニウムで沈殿させることかできる。
更に別な方法としては、ＤＮａｓｅ又はその断片又はそ
の誘導体を遺伝子工学技術により得ることができ、たと
えば、予防を検討している微生物の外来性ヌクレアーゼ
を認識するパラトープを持つ抗体を生産するヌクレアー
ゼ又はその断片又はその誘導体（特にＤＮａｓｅ又はそ
の断片又はその誘導体）をコードする組換えＤＮＡ分子
を使用することにより得ることができる。
の誘導体を遺伝子工学技術により得ることができ、たと
えば、予防を検討している微生物の外来性ヌクレアーゼ
を認識するパラトープを持つ抗体を生産するヌクレアー
ゼ又はその断片又はその誘導体（特にＤＮａｓｅ又はそ
の断片又はその誘導体）をコードする組換えＤＮＡ分子
を使用することにより得ることができる。
この発明は動物を予防するためのワクチン、特に予防を
検討している生物に見出される外来性ヌクレアーゼを認
識する抗体を生産するヌクレアーゼ（又はその断片又は
誘導体）を使用することにより、上述の種類の微生物特
にマイコプラズマ生物に起因する病気から人間以外の動
物を予防するためのワクチンを提供する。かくして、マ
イコプラズマ生物から豚を予防するために使用するヌク
レアーゼ（又はその断片又はその誘導体）は１つ又は複
数の豚マイコプラズマに存在する外来性ＤＮａｓｅのエ
ピトープを持つ。ＤＮａｓｅは微生物から直接得るか、
又は遺伝子工学により作ることができる。
検討している生物に見出される外来性ヌクレアーゼを認
識する抗体を生産するヌクレアーゼ（又はその断片又は
誘導体）を使用することにより、上述の種類の微生物特
にマイコプラズマ生物に起因する病気から人間以外の動
物を予防するためのワクチンを提供する。かくして、マ
イコプラズマ生物から豚を予防するために使用するヌク
レアーゼ（又はその断片又はその誘導体）は１つ又は複
数の豚マイコプラズマに存在する外来性ＤＮａｓｅのエ
ピトープを持つ。ＤＮａｓｅは微生物から直接得るか、
又は遺伝子工学により作ることができる。
この発明の思想と範囲内において、この発明のワクチン
の生産にヌクレアーゼの断片又は誘導体をたとえそれら
が酵素活性を持たなくても使用することが可能である。
の生産にヌクレアーゼの断片又は誘導体をたとえそれら
が酵素活性を持たなくても使用することが可能である。
ここで使用する用語のヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ又はＤ
Ｎａｓｅ）の断片又は誘導体は、ワクチンが予防する生
物の外来性ヌクレアーゼ（外来性ＲＮａｓｅ又はＤＮａ
ｓｅ）を認識する抗体を生産するエピトープを含むヌク
レアーゼ（ＲＮａｓｅ又はＤＮａｓｅ）の断片又は誘導
体である。
Ｎａｓｅ）の断片又は誘導体は、ワクチンが予防する生
物の外来性ヌクレアーゼ（外来性ＲＮａｓｅ又はＤＮａ
ｓｅ）を認識する抗体を生産するエピトープを含むヌク
レアーゼ（ＲＮａｓｅ又はＤＮａｓｅ）の断片又は誘導
体である。
上述の種類の生物たとえばマイコプラズマ性ｊシト炎の
ようなマイコプラズマ生物に起因する病気の予防、特に
マイコプラズマ性肺炎から豚を予防するためのワクチン
は、適当な生理的に受容可能な賦形剤たとえば担体及び
／又はアジュバントと組み合わせた上述のＤＮａｓｅの
ようなヌクレアーゼ及び／又はその断片又はその誘導体
である。そのようなヌクレアーゼ及び／又は断片又は誘
導体は、微生物たとえばマイコプラズマ生物に起因する
病気、特にエム・ヒオニューモニエーに起因するマイコ
プラズマ性肺炎を予防するために有効な量をワクチンに
使用する。
ようなマイコプラズマ生物に起因する病気の予防、特に
マイコプラズマ性肺炎から豚を予防するためのワクチン
は、適当な生理的に受容可能な賦形剤たとえば担体及び
／又はアジュバントと組み合わせた上述のＤＮａｓｅの
ようなヌクレアーゼ及び／又はその断片又はその誘導体
である。そのようなヌクレアーゼ及び／又は断片又は誘
導体は、微生物たとえばマイコプラズマ生物に起因する
病気、特にエム・ヒオニューモニエーに起因するマイコ
プラズマ性肺炎を予防するために有効な量をワクチンに
使用する。
一般に、ワクチンはＤＮａｓｅ及び／又は断片又は誘導
体のようなヌクレアーゼを少なくとも１没与当り５マイ
クログラム、好ましくは少なくとも１投与当り１００マ
イクログラムを含む。大部分の場合、２０ミリグラム以
上のヌクレアーゼ、及び／又は断片又は誘導体を含むこ
とはない。
体のようなヌクレアーゼを少なくとも１没与当り５マイ
クログラム、好ましくは少なくとも１投与当り１００マ
イクログラムを含む。大部分の場合、２０ミリグラム以
上のヌクレアーゼ、及び／又は断片又は誘導体を含むこ
とはない。
般に多投与を用いる場合、ワクチンは８週間に３投与を
超える量を投与しない。
超える量を投与しない。
ここに記述するワクチン又は方法と関連して使用する用
語「予防」又は「予防する」は、ワクチンが生物に起因
する病気特にエム・ヒオニューモニエーに起因するマイ
コプラズマ性肺炎を予防し、及び／又は生物に起因する
病気特にエム・ヒオニューモニエーに起因するマイコプ
ラズマ性肺炎の重篤度を軽減することを意味する。
語「予防」又は「予防する」は、ワクチンが生物に起因
する病気特にエム・ヒオニューモニエーに起因するマイ
コプラズマ性肺炎を予防し、及び／又は生物に起因する
病気特にエム・ヒオニューモニエーに起因するマイコプ
ラズマ性肺炎の重篤度を軽減することを意味する。
ヌクレアーゼ及び／又は断片又は誘導体と組み合わせて
使用する賦形剤は広範囲の賦形剤の任意の１つとするこ
とかできる。適当な賦形剤の代表例としては鉱物油、明
言、合成ポリマーなどを挙げることができる。ワクチン
用賦形剤は当該技術分野で公知であり、適当な賦形剤の
選択はここに記述の内容により当業者が到達し得る範囲
内にある。適当な賦形剤の選択はワクチンを投与する方
法にも依存する。ワクチンは注射可能な投与形態とする
ことができ、又筋肉内、静脈内、気管内、腹腔内、鼻内
たとえば吸入剤として、又は眼内、又は皮下投与により
投与することができる。又、ワクチンは錠剤形態などを
作り、活性成分を飼料又は水と混合して経口的に投与す
ることもできる。
使用する賦形剤は広範囲の賦形剤の任意の１つとするこ
とかできる。適当な賦形剤の代表例としては鉱物油、明
言、合成ポリマーなどを挙げることができる。ワクチン
用賦形剤は当該技術分野で公知であり、適当な賦形剤の
選択はここに記述の内容により当業者が到達し得る範囲
内にある。適当な賦形剤の選択はワクチンを投与する方
法にも依存する。ワクチンは注射可能な投与形態とする
ことができ、又筋肉内、静脈内、気管内、腹腔内、鼻内
たとえば吸入剤として、又は眼内、又は皮下投与により
投与することができる。又、ワクチンは錠剤形態などを
作り、活性成分を飼料又は水と混合して経口的に投与す
ることもできる。
ワクチンを投与する他の手段はここに記述の内容により
当業者には明白であり、従って、この発明の範囲を特定
の供給形態に限定するものではない。
当業者には明白であり、従って、この発明の範囲を特定
の供給形態に限定するものではない。
又、ワクチンはここに記述のヌクレアーゼ又は断片又は
誘導体の外に活性成分又はアジュバントを含むこともで
きると理解すべきである。
誘導体の外に活性成分又はアジュバントを含むこともで
きると理解すべきである。
又、ワクチンは活性成分の組合せ、たとえば適当なヌク
レアーゼ断片の混合物又はヌクレアーセとヌクレアーゼ
断片の混合物などを含むことかできると理解すべきであ
る。
レアーゼ断片の混合物又はヌクレアーセとヌクレアーゼ
断片の混合物などを含むことかできると理解すべきであ
る。
般にワクチンはマイコプラズマ生物に起因する病気特に
エム・ビオニューモニエ−に起因するマイコプラズマ性
肺炎に罹患し得る人間以外の動物、特に豚及び牛に使用
する。
エム・ビオニューモニエ−に起因するマイコプラズマ性
肺炎に罹患し得る人間以外の動物、特に豚及び牛に使用
する。
この発明の他の態様により、Ｐ防すべき微生物の外来性
ヌクレアーゼにより認識されるパラトープを持つ抗体又
は抗体断片又は誘導体を使用することによる、上述の種
類の微生物に起因する病気から動物を予防するための組
成物と方法か提供される。
ヌクレアーゼにより認識されるパラトープを持つ抗体又
は抗体断片又は誘導体を使用することによる、上述の種
類の微生物に起因する病気から動物を予防するための組
成物と方法か提供される。
抗体は５藷技術分野で公知の方法により、−上述の性質
を持つヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ又はＤＮａｓｅ）から
生ｊ？にすることかでき、そのような抗体はモノクロー
ナル又はポリクローナル抗体であることかできる。抗体
又はその適当な部分又は誘導体は予防のために使用する
ことができる。
を持つヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ又はＤＮａｓｅ）から
生ｊ？にすることかでき、そのような抗体はモノクロー
ナル又はポリクローナル抗体であることかできる。抗体
又はその適当な部分又は誘導体は予防のために使用する
ことができる。
抗体は組成物として使用し、ヌクレアーゼ及び／又はヌ
クレアーゼ断片又は組成物の使用と関連して上述のよう
に投与することができる。抗体又は抗体断片又は誘導体
を使用する場合、ワクチンは一般に少なくとも１投与当
り５マイクログラム、好ましくは少なくとも１没与当り
５ｏマイクロクラムのそのような抗体又は断片又は誘導
体を含む。大部分の場合、単位投与量は２０ミリグラム
を超えない。
クレアーゼ断片又は組成物の使用と関連して上述のよう
に投与することができる。抗体又は抗体断片又は誘導体
を使用する場合、ワクチンは一般に少なくとも１投与当
り５マイクログラム、好ましくは少なくとも１没与当り
５ｏマイクロクラムのそのような抗体又は断片又は誘導
体を含む。大部分の場合、単位投与量は２０ミリグラム
を超えない。
かくして、この発明のこの態様により、動物を予防すべ
き微生物の外来性ヌクレアーゼを認識する抗体は動物の
外部で生産され、そのような抗体又はその断片又は誘導
体は動物を予防するため動物に投与される。
き微生物の外来性ヌクレアーゼを認識する抗体は動物の
外部で生産され、そのような抗体又はその断片又は誘導
体は動物を予防するため動物に投与される。
この発明の別の態様により、エム・ビオニューモニエ−
の外来性ＤＮａｓｅを認識する抗体を生産するＤＮａｓ
ｅ又はその断片又は誘導体が実質的に純粋な形で提供さ
れる。そのようなりＮａ５ｅ又はＤＮａｓｅ断片はエム
・ビオニューモニエ−の外来性ＤＮａｓｅに存在する１
つ又は複数のエピトープを含む。
の外来性ＤＮａｓｅを認識する抗体を生産するＤＮａｓ
ｅ又はその断片又は誘導体が実質的に純粋な形で提供さ
れる。そのようなりＮａ５ｅ又はＤＮａｓｅ断片はエム
・ビオニューモニエ−の外来性ＤＮａｓｅに存在する１
つ又は複数のエピトープを含む。
そのようなりＮａ５ｅは上述のようにエム・ビオニュー
モニエ−生物から直接取り出し、ｊ／ｒ’ｌして実Ｔτ
的に純粋なりＮａ５ｅを得ることかできる。
モニエ−生物から直接取り出し、ｊ／ｒ’ｌして実Ｔτ
的に純粋なりＮａ５ｅを得ることかできる。
又、この発明の思想と範囲内で遺伝子工学原理によりそ
のようなりＮａ５ｅを生産することができ、この場合、
この発明のエム・ビオニューモニエ−ＤＮａｓｅ又はそ
の断片又は誘導体はエム・ビオニューモニエ−以外の生
物により、たとえばエム・ビオニューモニエ−の外来ｅ
ＬＤＮａｓｅを認識する抗体を生産するアミノ酸配列を
コートする組換えＤＮＡ分子を使用することにより生産
することかできる。
のようなりＮａ５ｅを生産することができ、この場合、
この発明のエム・ビオニューモニエ−ＤＮａｓｅ又はそ
の断片又は誘導体はエム・ビオニューモニエ−以外の生
物により、たとえばエム・ビオニューモニエ−の外来ｅ
ＬＤＮａｓｅを認識する抗体を生産するアミノ酸配列を
コートする組換えＤＮＡ分子を使用することにより生産
することかできる。
外来性エム・ビオニューモニエ−ＤＮａｓｅは、更に次
の特性により特徴付けられる。
の特性により特徴付けられる。
Ａ 熱不安定性：細胞表面ＤＮａｓｅは５６℃、１０分
間定温保持することにより不活化される。
間定温保持することにより不活化される。
Ｂ、ｌ−リブシン感受性：細Ｕ表面ＤＮａｓｅ活性は完
全細胞をトリプシンて処理することにより消失する。
全細胞をトリプシンて処理することにより消失する。
Ｃ３見掛けの分子ｌｉｔ ： Ｓ Ｄ Ｓポリアクリル
アミド・ケル電気泳動にかけると、酵素は３５〜４０キ
ロダルトン（ｋＤａ）の見掛けの分子量を持っ−゛ｉ「
線として移動する。
アミド・ケル電気泳動にかけると、酵素は３５〜４０キ
ロダルトン（ｋＤａ）の見掛けの分子量を持っ−゛ｉ「
線として移動する。
Ｄ、イオン交換性：ＤＮａｓｅは０．０１７５ＭＮａＣ
ｆ１中でＤＥＡＥ−セルロースに結合し、０．０１７５
Ｍ〜ＯＪ ＭのＮａＣｆｔグラジェントにより溶離する
。ＤＮａｓｅは０．０１７５Ｍ Ｎ ａ ＣＱ中でホス
ホセルロースに結合し、０．０１７５Ｍ〜１．ＯＭのＮ
ａＣｆ１により溶離することができる。
ｆ１中でＤＥＡＥ−セルロースに結合し、０．０１７５
Ｍ〜ＯＪ ＭのＮａＣｆｔグラジェントにより溶離する
。ＤＮａｓｅは０．０１７５Ｍ Ｎ ａ ＣＱ中でホス
ホセルロースに結合し、０．０１７５Ｍ〜１．ＯＭのＮ
ａＣｆ１により溶離することができる。
この発明の１つの態様により、（ａ）免疫抑制活性を欠
くマイコプラズマ・ビオニューモニエ−抗原を認識する
抗体を生産する１つ又は複数のタンパク質と、（ｂ）マ
イコプラズマ・ビオニューモニエ−の外来性ヌクレアー
ゼを認識する抗体を生産する少なくとも１つのヌクレア
ーゼ又はその断片又は誘導体とから成るマイコプラズマ
性肺炎を予防するワクチンか提４Ｂされる。
くマイコプラズマ・ビオニューモニエ−抗原を認識する
抗体を生産する１つ又は複数のタンパク質と、（ｂ）マ
イコプラズマ・ビオニューモニエ−の外来性ヌクレアー
ゼを認識する抗体を生産する少なくとも１つのヌクレア
ーゼ又はその断片又は誘導体とから成るマイコプラズマ
性肺炎を予防するワクチンか提４Ｂされる。
ワクチンは前記タンパク質と＋：；１記メクレアーゼ又
はその断片又は誘導体をマイコプラズマ性肺炎を予防す
るに有効な量を含む。ワクチンは木質的に免疫抑制活性
を持つマイコプラズマ・ヒオニューモニエー抗原を含ま
ない。
はその断片又は誘導体をマイコプラズマ性肺炎を予防す
るに有効な量を含む。ワクチンは木質的に免疫抑制活性
を持つマイコプラズマ・ヒオニューモニエー抗原を含ま
ない。
ワクチンは（ａ）マイコプラズマ・ヒオニューモニエー
抗原を認識する抗体を生産する１つ又は複数のタンパク
質と、（ｂ）ヌクレアーゼ又はその断片又は誘導体とを
、ヌクレアーゼに対するタンパク質の重量比として約１
００：１から約１：４０、好ましくは約４＝１から約１
：４の範囲で含む。
抗原を認識する抗体を生産する１つ又は複数のタンパク
質と、（ｂ）ヌクレアーゼ又はその断片又は誘導体とを
、ヌクレアーゼに対するタンパク質の重量比として約１
００：１から約１：４０、好ましくは約４＝１から約１
：４の範囲で含む。
この発明の他の態様により、ワクチンは（ａ）上述のよ
うな成分から成るか、（ｂ）抗体又はその断片又は誘導
体と組み合わせて成ることができ、前記抗体又はその断
片又は誘導体はエム・ヒオニューモニエーの外来性ヌク
レアーゼにより認識されるエピトープ（１つ又は複数）
を持つ。抗体又はその断片又はその誘導体のエピトープ
（１つ又は複数）を認識する外来性ヌクレアーゼはＤＮ
ａｓｅ又はＲＮａｓｅであることができる。
うな成分から成るか、（ｂ）抗体又はその断片又は誘導
体と組み合わせて成ることができ、前記抗体又はその断
片又は誘導体はエム・ヒオニューモニエーの外来性ヌク
レアーゼにより認識されるエピトープ（１つ又は複数）
を持つ。抗体又はその断片又はその誘導体のエピトープ
（１つ又は複数）を認識する外来性ヌクレアーゼはＤＮ
ａｓｅ又はＲＮａｓｅであることができる。
抗体のタンパク質に対する重ＩＵｔ比は約１，０００＝
１から約ｔｏ、ｏｏｏ・１の範囲であることがてきる。
１から約ｔｏ、ｏｏｏ・１の範囲であることがてきる。
ｌ［ｉ願人はマイコプラズマ・ヒオニューモニエー生物
は多数の抗原を含み、それらのあるものは免疫抑制活性
を持ち、またそれらのあるものは免疫抑制活性を欠くこ
とを見出した。出願人は更に免疫抑制活性を欠くマイコ
プラズマ・ヒオニューモニエー抗原及び／又はそのよう
な抗原の断片はマイコプラズマ性肺炎に有効なワクチン
に使用するのに適していることを見出した。
は多数の抗原を含み、それらのあるものは免疫抑制活性
を持ち、またそれらのあるものは免疫抑制活性を欠くこ
とを見出した。出願人は更に免疫抑制活性を欠くマイコ
プラズマ・ヒオニューモニエー抗原及び／又はそのよう
な抗原の断片はマイコプラズマ性肺炎に有効なワクチン
に使用するのに適していることを見出した。
マイコプラズマ・ヒオニューモニエー抗原を認識する抗
体を引き出すタンパク質は天然起源であり、マイコプラ
ズマ・ヒオニューモニエー生物から得ることかできる。
体を引き出すタンパク質は天然起源であり、マイコプラ
ズマ・ヒオニューモニエー生物から得ることかできる。
又、タンパク質は組換えＤＮＡ起源であることもできる
。
。
使用するヌクレアーゼはマイコプラズマ・ヒオニューモ
ニエー生物の表面により分泌され、及び／又は１前記表
面上で露出されるＤＮａｓｅ及び／又はＲＮａｓｅ（外
来性ＤＮａｓｅ又は外来性ＲＮａｓｅ）を認識する抗体
を引き出すデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮＡ分解酵素
又はＤＮａｓｅ）又はその誘導体及び／又はリボヌクレ
アーゼ（ＲＮＡ分解酵素又はＲＮａｓｅ）又はその誘導
体であることがｆきる。
ニエー生物の表面により分泌され、及び／又は１前記表
面上で露出されるＤＮａｓｅ及び／又はＲＮａｓｅ（外
来性ＤＮａｓｅ又は外来性ＲＮａｓｅ）を認識する抗体
を引き出すデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮＡ分解酵素
又はＤＮａｓｅ）又はその誘導体及び／又はリボヌクレ
アーゼ（ＲＮＡ分解酵素又はＲＮａｓｅ）又はその誘導
体であることがｆきる。
ＤＮａｓｅを使用する場合、好ましいＤＮａｓｅ又は断
片及び／又はその誘導体はＤＮＡエンドヌクレアーゼで
ある。
片及び／又はその誘導体はＤＮＡエンドヌクレアーゼで
ある。
ワクチンに使用するマイコプラズマ・ヒオニューモニエ
ー抗原は天然起源であり、マイコプラズマ・ヒオニュー
モニエー生物特にマイコプラズマ・ヒオニューモニエー
生物の膜から得ることができる。上述のように、マイコ
プラズマ・ヒオニューモニエー生物特にマイコプラズマ
・ヒオニューモニエー生物の膜は免疫抑制活性を持つ抗
原と免疫抑制活性を持たない抗原とを含み、従ってワク
チン用抗原を得るには免疫抑制活性を欠くマイコプラズ
マ・ヒオニューモニエー抗原を選択的に取り出すことが
必要である。
ー抗原は天然起源であり、マイコプラズマ・ヒオニュー
モニエー生物特にマイコプラズマ・ヒオニューモニエー
生物の膜から得ることができる。上述のように、マイコ
プラズマ・ヒオニューモニエー生物特にマイコプラズマ
・ヒオニューモニエー生物の膜は免疫抑制活性を持つ抗
原と免疫抑制活性を持たない抗原とを含み、従ってワク
チン用抗原を得るには免疫抑制活性を欠くマイコプラズ
マ・ヒオニューモニエー抗原を選択的に取り出すことが
必要である。
たとえば、免疫抑制活性を持つ化合物又は組成物である
か否かを測定する方法はスター・エム（ＳｕＬｅｒ、Ｍ
、） 、 コビッシュ・エム（Ｋｏｂ １ｓｃｈ 、Ｌ
）ジェー・ニコレット（Ｊ、Ｎ１ｃｏｌｃｔ）、インフ
ェクション・アンド・イムニティー（Ｉｎｆｅｃｊ、ａ
ｎｄＩｍｍｕｎ、） （１９８５年）、４９巻、６１
５ベージ「スティムレーシミン・オブ・イムノグロブリ
ン・コンテイニング・セルス・アンド・アイソタイプ・
スペシフィック・アンチボディー・レスポンス・イン・
エキスベリメンタル・マイコプラズマ・ヒオニューモニ
エー・インフェクション・イン・スペシフィック・バト
ゲンーフリー・ピッゲス（（Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｃｏｎｔａｉｎ
ｉｎｇｃｅｌｌｓ ａｎｄ １ｓｏＬｙｐｅ ５ｐｅｃ
ｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ、ａｌ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ
ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ １ｎｆａｃｔｉｏｎ ｉ
ｎ ５ｐｅｃｉｆｉｃ ｐａｔｈｏｇｃｎ−ｆｒｅｅ
ｐｉｇｓ） Ｊに報告されている。
か否かを測定する方法はスター・エム（ＳｕＬｅｒ、Ｍ
、） 、 コビッシュ・エム（Ｋｏｂ １ｓｃｈ 、Ｌ
）ジェー・ニコレット（Ｊ、Ｎ１ｃｏｌｃｔ）、インフ
ェクション・アンド・イムニティー（Ｉｎｆｅｃｊ、ａ
ｎｄＩｍｍｕｎ、） （１９８５年）、４９巻、６１
５ベージ「スティムレーシミン・オブ・イムノグロブリ
ン・コンテイニング・セルス・アンド・アイソタイプ・
スペシフィック・アンチボディー・レスポンス・イン・
エキスベリメンタル・マイコプラズマ・ヒオニューモニ
エー・インフェクション・イン・スペシフィック・バト
ゲンーフリー・ピッゲス（（Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｃｏｎｔａｉｎ
ｉｎｇｃｅｌｌｓ ａｎｄ １ｓｏＬｙｐｅ ５ｐｅｃ
ｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ、ａｌ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ
ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ １ｎｆａｃｔｉｏｎ ｉ
ｎ ５ｐｅｃｉｆｉｃ ｐａｔｈｏｇｃｎ−ｆｒｅｅ
ｐｉｇｓ） Ｊに報告されている。
１つの方法により、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ
ーの膜は可溶性及び不溶性画分の両方を作るためにおだ
やかな界面活性剤特に非イオン性界面活性剤で処理する
ことができる。出願人は不溶性画分は免役抑制活性を欠
くマイコプラズマ・ヒオニューモニエー抗原を含み、一
方おだやかな界面活性剤処理で得られる可溶性画分は免
疫抑制活性を持つ物質の外に免疫抑制活性を欠くマイコ
プラズマ・ヒオニューモニエー抗原を含むことを見出し
た。おだやかな界面活性剤でマイコプラズマ・ヒオニュ
ーモニエー生物からのＩＩｒ；ｌを処理することにより
得られる不溶性画分は、少なくとも１つのマイコプラズ
マ・ヒオニューモニエーのヌクレアーゼ又はその断片及
び／又はその誘導体と共にマイコプラズマ性肺炎から動
物をＰ防するためのワクチンを作るために使用すること
ができ、又はその代りに可溶性画分を処理して免疫抑制
活性を含む物質を除き、それによってそのような両分ヲ
少なくとも１つのエム・ヒオニューモニエーのヌクレア
ーゼ又はその断片及び／又はその１誘導体と共にワクチ
ンを作るために使用することかできる。
ーの膜は可溶性及び不溶性画分の両方を作るためにおだ
やかな界面活性剤特に非イオン性界面活性剤で処理する
ことができる。出願人は不溶性画分は免役抑制活性を欠
くマイコプラズマ・ヒオニューモニエー抗原を含み、一
方おだやかな界面活性剤処理で得られる可溶性画分は免
疫抑制活性を持つ物質の外に免疫抑制活性を欠くマイコ
プラズマ・ヒオニューモニエー抗原を含むことを見出し
た。おだやかな界面活性剤でマイコプラズマ・ヒオニュ
ーモニエー生物からのＩＩｒ；ｌを処理することにより
得られる不溶性画分は、少なくとも１つのマイコプラズ
マ・ヒオニューモニエーのヌクレアーゼ又はその断片及
び／又はその誘導体と共にマイコプラズマ性肺炎から動
物をＰ防するためのワクチンを作るために使用すること
ができ、又はその代りに可溶性画分を処理して免疫抑制
活性を含む物質を除き、それによってそのような両分ヲ
少なくとも１つのエム・ヒオニューモニエーのヌクレア
ーゼ又はその断片及び／又はその１誘導体と共にワクチ
ンを作るために使用することかできる。
更に別な方法として、マイコプラズマ・ヒオニューモニ
エー生物から得られる膜を他の薬品で処理して免疫抑制
活性を持つ表面抗原を選択的にｉ＋丁溶化し、それによ
って免疫抑制活性を欠くマイコプラズマ・ヒオニューモ
ニエー抗Ｅ’ｌ（１つ又は複数）を含む不溶性画分を作
ることがてきる。他の可溶化剤の代表例としてはｎ−オ
クチルグルコシド、デオキシコール酸ナトリウム、ＣＨ
ＡＰＳ（３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアン
モニオコニ−プロパン・スルホネート）などか挙げられ
る。
エー生物から得られる膜を他の薬品で処理して免疫抑制
活性を持つ表面抗原を選択的にｉ＋丁溶化し、それによ
って免疫抑制活性を欠くマイコプラズマ・ヒオニューモ
ニエー抗Ｅ’ｌ（１つ又は複数）を含む不溶性画分を作
ることがてきる。他の可溶化剤の代表例としてはｎ−オ
クチルグルコシド、デオキシコール酸ナトリウム、ＣＨ
ＡＰＳ（３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアン
モニオコニ−プロパン・スルホネート）などか挙げられ
る。
免疫抑制活性を欠くマイコプラズマ・ヒオニューモニエ
ー抗原を／ｊｌる他の例としては、免疫抑制活性を欠く
１つ又は複数のマイコプラズマ・ヒオニューモニエー抗
原を得るように種々のマイコプラズマ・ヒオニューモニ
エー膜抗原と分離するための電気泳動的方法か挙げられ
る。
ー抗原を／ｊｌる他の例としては、免疫抑制活性を欠く
１つ又は複数のマイコプラズマ・ヒオニューモニエー抗
原を得るように種々のマイコプラズマ・ヒオニューモニ
エー膜抗原と分離するための電気泳動的方法か挙げられ
る。
上の方法などはここに記述の内容から当業者にとっては
明白なことである。
明白なことである。
免疫抑制活性を欠き、少なくとも１つのヌクレアーゼ又
はその断片及び／又はその誘導体と共にマイコプラズマ
性肺炎を予防するワクチンを作るのに使用するマイコプ
ラズマ・ヒオニューモニエー抗原は、一般に少なくとも
ｆｏｋＤａで一般に３５０ｋＤａより大きくない分子量
を持つ。大部分の場合、そのような抗原は２２ｋＤａ〜
１２１ｋＤａの分子量を持つ。ワクチンは１つ又は複数
のそのような抗原又はその断片を含むことがある。自明
のことであるが、断片はそわが得られる抗原より低い分
子量を持つ。１つの具体化において、ワクチンは２２．
５ｋＤａ、３４ｋＤａ、３６ｋＤａ、４１ｋＤａ、４４
ｋＤａ、４８ｋＤａ、５２ｋＤａ、６４ｋＤａ、７４．
５ｋＤａ、７９ｋＤａ、８８．５ｋＤａ、９６．５ｋＤ
ａ及び１２１ｋＤａの分子量を持つ１つ又は複数の抗原
を含む。１つ又は複数のそのような抗原をワクチンを作
るのに使用し、及び／又は前記１つ又は複数の抗原の断
片を少なくとも１つのヌクレアーゼ又はその断片又はそ
の誘導体と共に使用することはこの発明の思想と範囲内
て可能であると理解すべきである。
はその断片及び／又はその誘導体と共にマイコプラズマ
性肺炎を予防するワクチンを作るのに使用するマイコプ
ラズマ・ヒオニューモニエー抗原は、一般に少なくとも
ｆｏｋＤａで一般に３５０ｋＤａより大きくない分子量
を持つ。大部分の場合、そのような抗原は２２ｋＤａ〜
１２１ｋＤａの分子量を持つ。ワクチンは１つ又は複数
のそのような抗原又はその断片を含むことがある。自明
のことであるが、断片はそわが得られる抗原より低い分
子量を持つ。１つの具体化において、ワクチンは２２．
５ｋＤａ、３４ｋＤａ、３６ｋＤａ、４１ｋＤａ、４４
ｋＤａ、４８ｋＤａ、５２ｋＤａ、６４ｋＤａ、７４．
５ｋＤａ、７９ｋＤａ、８８．５ｋＤａ、９６．５ｋＤ
ａ及び１２１ｋＤａの分子量を持つ１つ又は複数の抗原
を含む。１つ又は複数のそのような抗原をワクチンを作
るのに使用し、及び／又は前記１つ又は複数の抗原の断
片を少なくとも１つのヌクレアーゼ又はその断片又はそ
の誘導体と共に使用することはこの発明の思想と範囲内
て可能であると理解すべきである。
抗原（１つ又は複数）を特徴付ける分子量はレームリ（
Ｌａｅｍｍｌｉ）、ネーチャー （Ｎａｔｕｒｅ）（ロ
ンドン、１９７０年）、２２７さ、６８０〜６８５ペー
ジに記述のＳＤＳ緩衝液系を使用する不連続ポリアクリ
ルアミド・ケル電気泳動により、アクリルアミド濃度を
１２％とし、ビス−アクリルアミドのアクリルアミドに
対する比率を０．８：３０とすることにより得ることか
てきる。
Ｌａｅｍｍｌｉ）、ネーチャー （Ｎａｔｕｒｅ）（ロ
ンドン、１９７０年）、２２７さ、６８０〜６８５ペー
ジに記述のＳＤＳ緩衝液系を使用する不連続ポリアクリ
ルアミド・ケル電気泳動により、アクリルアミド濃度を
１２％とし、ビス−アクリルアミドのアクリルアミドに
対する比率を０．８：３０とすることにより得ることか
てきる。
非イオン性界面活性剤は免疫抑制活性を持つマイコプラ
ズマ・ヒオニューモニエー抗原を可溶化するのに１＝分
な量を使用する。−・般に、非イオン性界面活性剤の処
理されるマイコプラズマ・ヒオニューモニエー生物部分
に対する重量比は１０：１から約０．０５：１であり、
好ましくは約５．０：１から０．５：１である。処理は
一般に４０℃を超えない温度で行い、最も一般的には０
℃〜３７℃の程度で行う。
ズマ・ヒオニューモニエー抗原を可溶化するのに１＝分
な量を使用する。−・般に、非イオン性界面活性剤の処
理されるマイコプラズマ・ヒオニューモニエー生物部分
に対する重量比は１０：１から約０．０５：１であり、
好ましくは約５．０：１から０．５：１である。処理は
一般に４０℃を超えない温度で行い、最も一般的には０
℃〜３７℃の程度で行う。
処理は免疫抑制活性を持つマイコプラズマ・ヒオニュー
モニエー抗原を可溶化するのに十分な時間行い、一般に
その時間は０．５〜１２時間の程度であるが、場合によ
ってはより長く又はより短くすることができる。
モニエー抗原を可溶化するのに十分な時間行い、一般に
その時間は０．５〜１２時間の程度であるが、場合によ
ってはより長く又はより短くすることができる。
抗原（１つ又は複数）を可溶化するのに使用する溶液は
一般に０．０５〜１．０Ｍのイオン強度を持つ。好まし
い可溶化剤は０．２Ｍのナトリウム・イオンを含む。
一般に０．０５〜１．０Ｍのイオン強度を持つ。好まし
い可溶化剤は０．２Ｍのナトリウム・イオンを含む。
一般に、マイコプラズマ・ヒオニューモニエー生物の１
漠は上述のような処理を受ける。そのような膜は凍結融
解の反復、超音波処理などのような一般に当該技術分野
で公知の方法により生物を破壊して得ることができる。
漠は上述のような処理を受ける。そのような膜は凍結融
解の反復、超音波処理などのような一般に当該技術分野
で公知の方法により生物を破壊して得ることができる。
又は、抗原（１つ又は複数）は全生物から得ることもで
きる。適当な方法の選択はここに記述の内容から当業者
が到達し得る範囲内にあると考えられる。
きる。適当な方法の選択はここに記述の内容から当業者
が到達し得る範囲内にあると考えられる。
マイコプラズマ・ヒオニューモニエー生物を処理してマ
イコプラズマ・ヒオニューモニエー抗原及び／又はその
断片を得る外に、抗原及び／又はその断片は起源が組換
え体であり、種々な遺伝子工学的方法で得ることもでき
ると理解すべきである。
イコプラズマ・ヒオニューモニエー抗原及び／又はその
断片を得る外に、抗原及び／又はその断片は起源が組換
え体であり、種々な遺伝子工学的方法で得ることもでき
ると理解すべきである。
マイコプラズマ性肺炎Ｐ防用ワクチン、特に豚をマイコ
プラズマ性肺炎から予防するためのそれは、１つ又は複
数の免疫抑制活性を欠くエム・ヒオニューモニエー抗原
又はその断片又はその誘導体と、少なくとも１つの上述
のようなマイコプラズマ・ヒオニューモニエーのヌクレ
アーゼ（又はその断片又はその誘導体）とから成り、担
体又はアジュバントのような適当な生理的に受容可能な
賦形剤が配合される。マイコプラズマ・ヒオニューモニ
エー抗Ｊｇ、（１つ又は複数）及び／又はその断片（１
つ又は複数）並びに少なくとも１つの前記ヌクレアーゼ
及びその断片（１つ又は複数）及び／又はその誘導体（
１つ又は複数）は、マイコプラズマ性肺炎を予防する有
効量をワクチンに使用する。
プラズマ性肺炎から予防するためのそれは、１つ又は複
数の免疫抑制活性を欠くエム・ヒオニューモニエー抗原
又はその断片又はその誘導体と、少なくとも１つの上述
のようなマイコプラズマ・ヒオニューモニエーのヌクレ
アーゼ（又はその断片又はその誘導体）とから成り、担
体又はアジュバントのような適当な生理的に受容可能な
賦形剤が配合される。マイコプラズマ・ヒオニューモニ
エー抗Ｊｇ、（１つ又は複数）及び／又はその断片（１
つ又は複数）並びに少なくとも１つの前記ヌクレアーゼ
及びその断片（１つ又は複数）及び／又はその誘導体（
１つ又は複数）は、マイコプラズマ性肺炎を予防する有
効量をワクチンに使用する。
ワクチンはマイコプラズマ・ヒオニューモニエー抗原と
ヌクレアーゼを抗原のヌクレアーゼに対する重量比とし
て約１００：１から約１＝４０、好ましくは約４＝１か
ら約１：４の間で含むことができる。ワクチンの各投与
はエム・ヒオニューモニエー抗原の約１０μｇ〜約２０
０μｇとＤＮａｓｅの約０．５μｇ〜約１−、０００７
．ｔｇ、好ましくは抗原の約２５μｇ〜約１００μｇと
ＤＮａｓｅの約１０μｇ〜約２００μｇを含むことがで
きる。多投与を行う場合、投与数は一般に８週間に３投
与を超えないのが望ましい。この発明に次の実施例との
関連で更に説明するが、この発明の範囲はそれによって
限定されるものではない。
ヌクレアーゼを抗原のヌクレアーゼに対する重量比とし
て約１００：１から約１＝４０、好ましくは約４＝１か
ら約１：４の間で含むことができる。ワクチンの各投与
はエム・ヒオニューモニエー抗原の約１０μｇ〜約２０
０μｇとＤＮａｓｅの約０．５μｇ〜約１−、０００７
．ｔｇ、好ましくは抗原の約２５μｇ〜約１００μｇと
ＤＮａｓｅの約１０μｇ〜約２００μｇを含むことがで
きる。多投与を行う場合、投与数は一般に８週間に３投
与を超えないのが望ましい。この発明に次の実施例との
関連で更に説明するが、この発明の範囲はそれによって
限定されるものではない。
実施例１
マイコプラズマ・ヒオニューモニエーｖｐｐ−１１株、
３株又はＰ−５７２２３株を３．５Ｌのフリース（Ｆｒ
ｉ ｉｓ）培地中で約１０９〜１０１０変色単位／ ｍ
Ｉｔの密度となるまで増殖させ、遠心分離し、リン酸
緩衝液添加食塩水（ＰＢＳ）中で４回洗浄し、１０ ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ （ｐＨ８，０）と１０ｍＭＥＤＴＡ中
で凍結融解を反復することにより溶菌する。破片を１２
，０００ｇで１０分間遠心分離して除く。１０５，００
０ ｇ″ｒ：４５分間遠心分離して膜を回収し、ＰＢＳ
中で１回洗浄し、ＰＢＳ中１．０％゛ｒｒｉｔｏｎＸ
−１００で４１℃で１８時間かけて可溶化する。可溶化
した物質をセファロース（５ｅｐｈａｒｏｓｅ） Ｓ
−２００を用いるゲルｆ！過により分画し、活性のピー
クを合併する。酵素活性を２５ ｍ ＭＴｒｉｓ （ｐ
Ｈ８、０）添加３０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭＥＤＴ
Ａ、１ｍＭジチオスレイトール、０．３％ＴｒｉＬｏｎ
Ｘ −１００及び３ｍＭナトリウム・アジドで平衡させ
たＤＮＡ−セルロース上のアフィニティー・クロマトグ
ラフにより精製し、同一緩衝液で広く洗浄し、同一緩衝
液中１．０Ｍ塩化ナトリウムで溶離する。ＳＤＳポリア
クリルアミド・ゲル電気泳動により、酵素は３７ ／
３９ ｋ Ｄ ａの二重線を示す。
３株又はＰ−５７２２３株を３．５Ｌのフリース（Ｆｒ
ｉ ｉｓ）培地中で約１０９〜１０１０変色単位／ ｍ
Ｉｔの密度となるまで増殖させ、遠心分離し、リン酸
緩衝液添加食塩水（ＰＢＳ）中で４回洗浄し、１０ ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ （ｐＨ８，０）と１０ｍＭＥＤＴＡ中
で凍結融解を反復することにより溶菌する。破片を１２
，０００ｇで１０分間遠心分離して除く。１０５，００
０ ｇ″ｒ：４５分間遠心分離して膜を回収し、ＰＢＳ
中で１回洗浄し、ＰＢＳ中１．０％゛ｒｒｉｔｏｎＸ
−１００で４１℃で１８時間かけて可溶化する。可溶化
した物質をセファロース（５ｅｐｈａｒｏｓｅ） Ｓ
−２００を用いるゲルｆ！過により分画し、活性のピー
クを合併する。酵素活性を２５ ｍ ＭＴｒｉｓ （ｐ
Ｈ８、０）添加３０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭＥＤＴ
Ａ、１ｍＭジチオスレイトール、０．３％ＴｒｉＬｏｎ
Ｘ −１００及び３ｍＭナトリウム・アジドで平衡させ
たＤＮＡ−セルロース上のアフィニティー・クロマトグ
ラフにより精製し、同一緩衝液で広く洗浄し、同一緩衝
液中１．０Ｍ塩化ナトリウムで溶離する。ＳＤＳポリア
クリルアミド・ゲル電気泳動により、酵素は３７ ／
３９ ｋ Ｄ ａの二重線を示す。
実施例２
マイコプラズマ・ヒオニューモニエーｖｐｐ−１１株、
３株又はＰ−５７２２３株を１．ＯＬのフリース培地中
で約１０９〜１０Ｉ０変色単位／ｍ１の密度となるまで
増殖させた。細胞を遠心分離により除き、２３１ｇの固
体硫酸アンモニウムを氷上の上清に添加して４０％飽和
とする。タンパク質沈殿を遠心分離により回収し、１７
．５ｍＭリン酸カリウム（ｐｌ＋７．０）と３ｍＭナト
リウム・アジドに１１￥懸濁し、広く同一＃Ａ衝部数対
して透析した。活性画分は結合しないＤＥＡＥ−セルロ
ース上のイオン交換クロマトグラフにより、更に活性を
精製する。酵素活性を２５ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８，０）
、３０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭジ
チオスレイトール、０．３％ＴｒｉｔｏｎＸ −１００
及び３ｍＭナトリウム・アシドで名衡させたＤＮＡ−セ
ルロース−Ｆのアフィニティー・クロマトグラフにより
精製し、同一緩衝液て広く洗浄し、同一緩衝液中１．０
Ｍ塩化ナトリウムで溶離する。これはＤＮＡ−セルロー
ス画分である。ＳＤＳポリアクリルアミド・ゲル電気泳
動により、酵素は３７ ／ ３９ ｋ Ｄ ａの二重線
を示す。
３株又はＰ−５７２２３株を１．ＯＬのフリース培地中
で約１０９〜１０Ｉ０変色単位／ｍ１の密度となるまで
増殖させた。細胞を遠心分離により除き、２３１ｇの固
体硫酸アンモニウムを氷上の上清に添加して４０％飽和
とする。タンパク質沈殿を遠心分離により回収し、１７
．５ｍＭリン酸カリウム（ｐｌ＋７．０）と３ｍＭナト
リウム・アジドに１１￥懸濁し、広く同一＃Ａ衝部数対
して透析した。活性画分は結合しないＤＥＡＥ−セルロ
ース上のイオン交換クロマトグラフにより、更に活性を
精製する。酵素活性を２５ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８，０）
、３０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭジ
チオスレイトール、０．３％ＴｒｉｔｏｎＸ −１００
及び３ｍＭナトリウム・アシドで名衡させたＤＮＡ−セ
ルロース−Ｆのアフィニティー・クロマトグラフにより
精製し、同一緩衝液て広く洗浄し、同一緩衝液中１．０
Ｍ塩化ナトリウムで溶離する。これはＤＮＡ−セルロー
ス画分である。ＳＤＳポリアクリルアミド・ゲル電気泳
動により、酵素は３７ ／ ３９ ｋ Ｄ ａの二重線
を示す。
実施例３
実施例２からのＤＮＡ−セルロース画分の６ｍｌアソコ
ート（全ｆｆｉ １２ ｍ １１ ）を等量のフロイン
ト（１・ｒｃｕｎｄ）の不完全アジュバントとこれを滴
下添加しなから配合し、生成するホモジェネートを超音
波により絶えず混合した。
ート（全ｆｆｉ １２ ｍ １１ ）を等量のフロイン
ト（１・ｒｃｕｎｄ）の不完全アジュバントとこれを滴
下添加しなから配合し、生成するホモジェネートを超音
波により絶えず混合した。
ワクチン接種。
７Ｆ−ｊ令の小型豚にアジュバント添加ワクチンの２．
０ｍｆｔアリコートを臀部に皮下投与し、始発注射２週
間後にブースター注射を行って免疫した。
０ｍｆｔアリコートを臀部に皮下投与し、始発注射２週
間後にブースター注射を行って免疫した。
チャレンジ：
同−令の豚の他群を実験動物として、３日令でエム・ヒ
オニューモニエーＰ−５７２２３株を気管内に接種し、
以後の豚マイコプラズマ性肺炎（ＭＰＳ）のチャレンジ
のｒシーダー・ピッゲス（Ｓｅｅｄｅｒ ｐｉｇｓ）４
として使用した。最初のワクチン接種から３週間後、上
述の実験動物に接触露出によりエム・ヒオニューモニエ
ーの伝達を開示するためシーダー・ピッゲスと混合飼育
した。動物はＭＰＳチャレンジ開始の６週間後見体解削
するまで一緒にととめた。
オニューモニエーＰ−５７２２３株を気管内に接種し、
以後の豚マイコプラズマ性肺炎（ＭＰＳ）のチャレンジ
のｒシーダー・ピッゲス（Ｓｅｅｄｅｒ ｐｉｇｓ）４
として使用した。最初のワクチン接種から３週間後、上
述の実験動物に接触露出によりエム・ヒオニューモニエ
ーの伝達を開示するためシーダー・ピッゲスと混合飼育
した。動物はＭＰＳチャレンジ開始の６週間後見体解削
するまで一緒にととめた。
ワクチン無接柚豚６匹の内、２匹はＭＰＳ障害かあり４
匹は障害がなかった。ワクチン接種豚６匹の内、ＭＰＳ
障害のある豚はなく６匹全部障害はなかフだ。
匹は障害がなかった。ワクチン接種豚６匹の内、ＭＰＳ
障害のある豚はなく６匹全部障害はなかフだ。
実施例４
抗体の調製
エム・ヒオニューモニエーＰ−５７２２３ａをＩＬのフ
リース培地中で１０９〜ＩＱＩＯ変色単位／ ｍ ｊ２
の密度となるまで増殖させた。細胞を遠心分離して除き
、固体硫酸アンモニウムを０℃で４０％飽和か達成され
るまで増殖培禿の上清に添加した。タンパク質沈殿を遠
心分離により回収し、１７．５ｍＭリン酸カリウム（ｐ
ｌ＋７．０）と３ｍＭナトリウム・アジドに再懸濁し、
広く同一緩衝液に対して透析した。活性は更に上述のよ
うに、ＤＥＡＥ−セルロース上のイオン交換クロマトグ
ラフとＤＮＡセルロース上のアフィニティ・クロマトグ
ラフにより精製した。
リース培地中で１０９〜ＩＱＩＯ変色単位／ ｍ ｊ２
の密度となるまで増殖させた。細胞を遠心分離して除き
、固体硫酸アンモニウムを０℃で４０％飽和か達成され
るまで増殖培禿の上清に添加した。タンパク質沈殿を遠
心分離により回収し、１７．５ｍＭリン酸カリウム（ｐ
ｌ＋７．０）と３ｍＭナトリウム・アジドに再懸濁し、
広く同一緩衝液に対して透析した。活性は更に上述のよ
うに、ＤＥＡＥ−セルロース上のイオン交換クロマトグ
ラフとＤＮＡセルロース上のアフィニティ・クロマトグ
ラフにより精製した。
小型豚をフロイントの不完全アジュバント中ＤＮＡセル
ロース画分の２００マイクログラムで免疫した。始発注
射２週間後ブースター注射を行い、豚をその後２週間飼
育した。全エム・ヒオニューモニエータンパク質のウェ
スタン・プロット（ｌｆｃｓＬｅｒｎ ｂｌｏｔ）分析
により、抗血清は２６ｋＤａと９７ｋＤａの間にある見
掛は上の分子量を持つ少なくとも６つのタンパク質と１
：５０希釈で反応することか示された。
ロース画分の２００マイクログラムで免疫した。始発注
射２週間後ブースター注射を行い、豚をその後２週間飼
育した。全エム・ヒオニューモニエータンパク質のウェ
スタン・プロット（ｌｆｃｓＬｅｒｎ ｂｌｏｔ）分析
により、抗血清は２６ｋＤａと９７ｋＤａの間にある見
掛は上の分子量を持つ少なくとも６つのタンパク質と１
：５０希釈で反応することか示された。
このような抗血清は上述のワクチンを作るのに使用する
ことかできる。
ことかできる。
実７１ζ例５
Ｄ Ｎ ａ ｓ ｅの調製
マイコプラズマ・ヒオニューモニエーＰ−５７２２３株
を２ＳＬのフリース培地中で１０変色単位／ ｍ ｆＬ
と同等又はそれ以上まて増殖させた。細胞は遠心分離に
より回収し、廃棄した。
を２ＳＬのフリース培地中で１０変色単位／ ｍ ｆＬ
と同等又はそれ以上まて増殖させた。細胞は遠心分離に
より回収し、廃棄した。
培養上清を４℃で２５ ｍＭ’ｒｒｉｓ （ｐＨ８、０
）、１ｍＭＭｇＣｊ２２．１ｍＭＣａ（：ｊ２２及び１
ｍＭジチオスレイトールに透析し、同一緩衝液中でワッ
トマン（Ｗｈａｔｍａｎ）Ｄ Ｅ ５２− Ｄ ＥＡ
Ｅセルロース上を通過させた。結合しない両分を集め、
５０ ｍ ＭＴｒｉｓ （ｐＨ８、０）、５ ｍ Ｍ
Ｍ ｇ Ｃｌ ２、５ ｍ Ｍ Ｃａ ＣＩｌ、 ２及
び５ｍＭジチオスレイト・−ルに調節した。固体硫酸ア
ンモニウムを０℃で５５％飽和か達成されるまで添加し
た。不溶性物質を遠心分離により回収し、廃棄した。固
体硫酸アンモニウムを０℃で９０％飽和が達成されるま
で遠心分離上清に添加した。不溶性タンパク質を遠心分
離により回収し、冷たい５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐｕａ、０
）、５ｍＭＭｇＣＩＬ２．５ｍＭジチオスレイトール及
び０．１％ＣＨＡＰＳ（ｗ／ｖ）に再懸濁し、４℃で同
一緩衝液に透析し、ワットマンｐＨホスホセルロース上
を通過させた。
）、１ｍＭＭｇＣｊ２２．１ｍＭＣａ（：ｊ２２及び１
ｍＭジチオスレイトールに透析し、同一緩衝液中でワッ
トマン（Ｗｈａｔｍａｎ）Ｄ Ｅ ５２− Ｄ ＥＡ
Ｅセルロース上を通過させた。結合しない両分を集め、
５０ ｍ ＭＴｒｉｓ （ｐＨ８、０）、５ ｍ Ｍ
Ｍ ｇ Ｃｌ ２、５ ｍ Ｍ Ｃａ ＣＩｌ、 ２及
び５ｍＭジチオスレイト・−ルに調節した。固体硫酸ア
ンモニウムを０℃で５５％飽和か達成されるまで添加し
た。不溶性物質を遠心分離により回収し、廃棄した。固
体硫酸アンモニウムを０℃で９０％飽和が達成されるま
で遠心分離上清に添加した。不溶性タンパク質を遠心分
離により回収し、冷たい５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐｕａ、０
）、５ｍＭＭｇＣＩＬ２．５ｍＭジチオスレイトール及
び０．１％ＣＨＡＰＳ（ｗ／ｖ）に再懸濁し、４℃で同
一緩衝液に透析し、ワットマンｐＨホスホセルロース上
を通過させた。
ホスホセルロース・カラムを４℃で５０ｍＭＴｒｉｓ（
ｐＨ８，０）、５ｍＭＭｇＣＪ２．．５ｍＭＣａＣＪ２
２．５ｍＭジチオスレイトール、０． １％ＣＨＡＰＳ
（ｗ／ｖ）及び０．５ＭＫ（１！で溶離した。溶離した
物質を５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４，０）、 ０．
１％ＣＨＡ Ｐ Ｓ （ｗ ／ ｖ ）に透析し、４℃
でＤＮＡ−セファロース（１６０ｍｇ−Ｅ、ｃｏｌｉＤ
ＮＡ／ｍｕ、 ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）−
セファロース６Ｂ樹脂）上を通過させた。ＤＮＡ−セフ
ァロース・カラムを４℃で最初に５０ｍＭ酢酸ナトリウ
ム（ｐｌ＋４．０）、０．１％ＣＨＡＰＳ及び０．２Ｍ
ＮａＣｕ、次いで５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４，０
） 、 ０． １％ＣＨＡＰＳ（ｗ／ｖ）及び１．Ｏ
ＭＭｇＣｊ２２て溶麺した。最終溶離からの物質を生成
物として合併した。
ｐＨ８，０）、５ｍＭＭｇＣＪ２．．５ｍＭＣａＣＪ２
２．５ｍＭジチオスレイトール、０． １％ＣＨＡＰＳ
（ｗ／ｖ）及び０．５ＭＫ（１！で溶離した。溶離した
物質を５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４，０）、 ０．
１％ＣＨＡ Ｐ Ｓ （ｗ ／ ｖ ）に透析し、４℃
でＤＮＡ−セファロース（１６０ｍｇ−Ｅ、ｃｏｌｉＤ
ＮＡ／ｍｕ、 ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）−
セファロース６Ｂ樹脂）上を通過させた。ＤＮＡ−セフ
ァロース・カラムを４℃で最初に５０ｍＭ酢酸ナトリウ
ム（ｐｌ＋４．０）、０．１％ＣＨＡＰＳ及び０．２Ｍ
ＮａＣｕ、次いで５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４，０
） 、 ０． １％ＣＨＡＰＳ（ｗ／ｖ）及び１．Ｏ
ＭＭｇＣｊ２２て溶麺した。最終溶離からの物質を生成
物として合併した。
実施例３に記述の内容から明らかなように、この発明の
ワクチンを豚に予め接種した場合、マイコプラズマ・ヒ
オニューモニエーの感染を予防する明瞭な効果か認めら
れた。
ワクチンを豚に予め接種した場合、マイコプラズマ・ヒ
オニューモニエーの感染を予防する明瞭な効果か認めら
れた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）核酸前駆物質生合成系を欠く微生物の外来性ヌク
レアーゼを認識するパラトープを持つ抗体を生産する少
なくとも１つのヌクレアーゼ又はその断片又はその誘導
体、又は 前記微生物の外来性ヌクレアーゼを認識するパラトープ
を持つ抗体、抗体の断片、抗体の誘導体及びそれらの混
合物の 前記微生物に起因する病気から動物を予防するための有
効量を前記動物に投与することから成る動物を核酸前駆
物質生合成系を欠く微生物に起因する病気から予防する
方法。 （２）微生物はマイコプラズマ、アコレプラズマ、スピ
ロプラズマ、ウレアプラズマ及びアネアロプラズマから
成る群より選ばれる請求項１記載の動物を核酸前駆物質
生合成系を欠く微生物に起因する病気から予防する方法
。 （３）微生物はマイコプラズマである請求項２記載の動
物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物に起因する病気
から予防する方法。 （４）微生物はエム・ヒオニューモニエーである請求項
１記載の動物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物に起
因する病気から予防する方法。 （５）ヌクレアーゼ又はその断片又はその誘導体は免疫
抑制活性を欠くエム・ヒオニューモニエー抗原を認識す
る抗体を引き出す能力のある１つ又は複数のタンパク質
と組み合わせて投与する請求項４記載の動物を核酸前駆
物質生合成系を欠く微生物に起因する病気から予防する
方法。 （６）ヌクレアーゼはＤＮａｓｅである請求項１〜５の
いずれか１項記載の動物を核酸前駆物質生合成系を欠く
微生物に起因する病気から予防する方法。 （７）ＤＮａｓｅはＤＮＡエンドヌクレアーゼである請
求項１〜６のいずれか１項記載の動物を核酸前駆物質生
合成系を欠く微生物に起因する病気から予防する方法。 （８）動物は豚である請求項１〜７のいずれか１項記載
の動物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物に起因する
病気から予防する方法。 （９）投与は少なくとも５マイクログラムのＤＮａｓｅ
、ＤＮａｓｅ断片、ＤＮａｓｅ誘導体、又はそれらの混
合物を含む単位投与形態で行う請求項１〜８のいずれか
１項記載の動物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物に
起因する病気から予防する方法。 （１０）核酸前駆物質生合成系を欠く微生物の外来性ヌ
クレアーゼを認識するパラトープを持つ抗体を生産する
ヌクレアーゼ、前記ヌクレアーゼの断片、前記ヌクレア
ーゼの誘導体及びそれらの混合物と、 前記微生物の外来性ヌクレアーゼを認識するパラトープ
を持つ抗体、抗体の断片、抗体の誘導体及びそれらの混
合物とから成る群より選ばれる構成員、並びに生理的に
受容可能な担体から成る動物を核酸前駆物質生合成系を
欠く微生物に起因する病気から予防するための組成物。 （１１）構成員は微生物に起因する病気を予防するため
の有効量存在する請求項１０記載の動物を核酸前駆物質
生合成系を欠く微生物に起因する病気から予防するため
の組成物。（１２）微生物はマイコプラズマである請求
項１１記載の動物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物
に起因する病気から予防するための組成物。 （１３）微生物はエム・ヒオニューモニエーである請求
項１２記載の動物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物
に起因する病気から予防するための組成物。 （１４）組成物は免疫抑制活性を欠くエム・ヒオニュー
モニエー抗原を認識する抗体を引き出す能力のある１つ
又は複数のタンパク質を含む請求項１３記載の動物を核
酸前駆物質生合成系を欠く微生物に起因する病気から予
防するための組成物。 （１５）ヌクレアーゼはＤＮａｓｅである請求項１０〜
１４のいずれか１項記載の動物を核酸前駆物質生合成系
を欠く微生物に起因する病気から予防するための組成物
。 （１６）ヌクレアーゼはＤＮＡエンドヌクレアーゼであ
る請求項１０〜１５のいずれか１項記載の動物を核酸前
駆物質生合成系を欠く微生物に起因する病気から予防す
るための組成物。 （１７）３５〜４０ｋＤａの分子量を持つ外来性エム・
ヒオニューモニエーＤＮａｓｅを含む物質の組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/146,256 US4985243A (en) | 1988-01-20 | 1988-01-20 | Composition and method for protecting against diseases caused by microorganisms |
| US146,256 | 1988-01-20 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02711A true JPH02711A (ja) | 1990-01-05 |
| JPH0768142B2 JPH0768142B2 (ja) | 1995-07-26 |
Family
ID=22516535
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1007865A Expired - Lifetime JPH0768142B2 (ja) | 1988-01-20 | 1989-01-18 | 動物を核酸前駆物質生合成系を欠く微生物に起因する病気から予防するための組成物 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4985243A (ja) |
| EP (1) | EP0325191B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0768142B2 (ja) |
| AT (1) | ATE127693T1 (ja) |
| DE (1) | DE68924183T2 (ja) |
| DK (1) | DK22389A (ja) |
| ES (1) | ES2078900T3 (ja) |
| GR (1) | GR3017427T3 (ja) |
| IE (1) | IE890141L (ja) |
| PT (1) | PT89488A (ja) |
| ZA (1) | ZA89447B (ja) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5240706A (en) * | 1989-04-07 | 1993-08-31 | Ml Technology Ventures, L.P. | Intranasal administration of Mycoplasma hyopneumoniae antigen |
| CA2082155C (en) * | 1990-05-29 | 2008-04-15 | Krishnaswamy I. Dayalu | Swine pneumonia vaccine and method of preparation |
| US6113916A (en) * | 1990-05-29 | 2000-09-05 | American Cyanamid Company | Method of enhancing cell mediated immune responses |
| US5565205A (en) * | 1990-08-16 | 1996-10-15 | Solvay Animal Health, Inc. | Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof |
| US5338543A (en) * | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| USRE39494E1 (en) * | 1992-02-27 | 2007-02-27 | Intervet Inc. | Inactivated mycoplasma hyopneumoniae and uses therefor |
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| US5498527A (en) * | 1994-02-18 | 1996-03-12 | Ube Industries, Ltd. | Phosphorylcholine-containing glyceroglycolipid |
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| US8431123B2 (en) | 2003-07-14 | 2013-04-30 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic bacterial, fungal and protozoan infection |
| US8710012B2 (en) | 2003-07-14 | 2014-04-29 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating oncological diseases |
| WO2006130034A1 (fr) | 2005-04-25 | 2006-12-07 | Dmitry Dmitrievich Genkin | Procede pour prolonger la duree de vie d'animaux ou de l'humain |
| US8388951B2 (en) | 2003-07-14 | 2013-03-05 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating systemic DNA mutation disease |
| AU2003298972A1 (en) * | 2003-07-14 | 2005-02-04 | Dmitry Dmitrievich Genkin | Method for treating oncological, virulent and somatic diseases, method for controlling treatment efficiency, pharmaceutical agents and composition for carrying out said treatment |
| CA2621666A1 (en) * | 2005-09-09 | 2007-03-15 | Universitaet Zuerich | Antigens for vaccination against and detection of mycoplasma suis |
| US8871200B2 (en) | 2006-11-28 | 2014-10-28 | Cls Therapeutics Limited | Method for treating human diseases associated with an increased deoxyribonucleic acid content in extracellular spaces of tissues and a medicinal preparation for carrying out said method |
| UA114504C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
| US9120859B2 (en) | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| UA114503C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
| US10617743B2 (en) | 2014-06-19 | 2020-04-14 | Cls Therapeutics Limited | Method to improve safety and efficacy of anti-cancer therapy |
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