JPH0275958A - Ｄｎａ検出法 - Google Patents
Ｄｎａ検出法Info
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- JPH0275958A JPH0275958A JP22757788A JP22757788A JPH0275958A JP H0275958 A JPH0275958 A JP H0275958A JP 22757788 A JP22757788 A JP 22757788A JP 22757788 A JP22757788 A JP 22757788A JP H0275958 A JPH0275958 A JP H0275958A
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- dna
- probe
- fluorescent dye
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、ＤＮＡの検出法に関するものである。
更に詳細には１本発明は、医療、薬品、食品等の分野に
おいて、遺伝子あるいは感染症を誘発するウィルス等の
特定の塩基配列を有するＤＮＡの検出法に関する。
おいて、遺伝子あるいは感染症を誘発するウィルス等の
特定の塩基配列を有するＤＮＡの検出法に関する。
一般に、ＤＮＡの診断や変異ＤＮＡの検出にはプローブ
（探索子）が用いられ、プローブが結合するが、結合し
ないかによって、診断や検出の判断が行なわれている。
（探索子）が用いられ、プローブが結合するが、結合し
ないかによって、診断や検出の判断が行なわれている。
本発明では蛍光色素で標識されたＤＮＡをプローブとし
て用いることによって、ＤＮＡと結合したかどうかをす
みやかに測定することができるようになるので、医療、
薬品、食品等バイオ関連技術におけるＤＮＡの診断や変
異ＤＮＡの検出に大きく貢献するものである。
て用いることによって、ＤＮＡと結合したかどうかをす
みやかに測定することができるようになるので、医療、
薬品、食品等バイオ関連技術におけるＤＮＡの診断や変
異ＤＮＡの検出に大きく貢献するものである。
（従来技術及び問題点）
遺伝子であるＤＮＡは、４種の核酸塩基が高度に配列し
た２重らせん構造を構成しており、この塩基配列には、
ホルモン、酵素等の蛋白質の組成。
た２重らせん構造を構成しており、この塩基配列には、
ホルモン、酵素等の蛋白質の組成。
構造を決定する重要な遺伝情報が組み込まれている。こ
のヒトの遺伝子は５〜１０万といわれるが、遺伝的ある
いは突然変異によって生じる異常や変化、あるいはウィ
ルスなどの外界から生体に侵入してくる外因性遺伝子に
よって生体機能のバランスが損なわれる。この遺伝子レ
ベルでの分析は、従来より臨床分野において染色体検査
として行われているが塩基配列として１００万塩基以上
のものしか検出できず、これらは転座や欠失といった染
色体の構造異常として検査しているにすぎない。
のヒトの遺伝子は５〜１０万といわれるが、遺伝的ある
いは突然変異によって生じる異常や変化、あるいはウィ
ルスなどの外界から生体に侵入してくる外因性遺伝子に
よって生体機能のバランスが損なわれる。この遺伝子レ
ベルでの分析は、従来より臨床分野において染色体検査
として行われているが塩基配列として１００万塩基以上
のものしか検出できず、これらは転座や欠失といった染
色体の構造異常として検査しているにすぎない。
従って遺伝病等の遺伝子の変化、あるいは外因性遺伝子
に起因する疾患の診断にあたっては、臨床的な所見や生
化学的な検査法以外に直接ＤＮＡの変異を検出すること
ができれば非常に有力な手段となりうる。
に起因する疾患の診断にあたっては、臨床的な所見や生
化学的な検査法以外に直接ＤＮＡの変異を検出すること
ができれば非常に有力な手段となりうる。
最近では、比較的再現性のよいＤＮＡの操作技術が確認
され、またさまざまなりＮＡプローブの開発によってＤ
ＮＡを直接検出することが可能となり、ＤＮＡ診断とし
て臨床検査への応用が急速に注目されつつある。このＤ
ＮＡ診断は病気という表現型の変化が生じる前に病気の
診断や予測を行うことが可能であり、さらに、遺伝病の
出生前診断においては、羊水中の細胞ＤＮＡを検査する
ことによって胎児の遺伝病の判定が可能、すなわち、ど
の体細胞のＤＮＡでも検査対象とすることができる。
され、またさまざまなりＮＡプローブの開発によってＤ
ＮＡを直接検出することが可能となり、ＤＮＡ診断とし
て臨床検査への応用が急速に注目されつつある。このＤ
ＮＡ診断は病気という表現型の変化が生じる前に病気の
診断や予測を行うことが可能であり、さらに、遺伝病の
出生前診断においては、羊水中の細胞ＤＮＡを検査する
ことによって胎児の遺伝病の判定が可能、すなわち、ど
の体細胞のＤＮＡでも検査対象とすることができる。
現在ＤＮＡに関する検究は、 ＲＦＬＰ（１’ｌｅｓｔ
ｒｉｃｔｉｏｎＦｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏ
ｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）連鎖解析を中心として活発に行
われ、特に約３０種の遺伝病の遺伝子の変異も報告され
ている。検出法としては適当な制限酵素で切断したＤＮ
Ａ断片をポリアクリルアミド、あるいはアガロースゲル
等を用いる電気泳動法によって分離、ニトロセルロース
膜などに固定化後、マーカーで標識されたプローブＤＮ
Ａとのハイブリダイゼーション（ＤＮＡの２本鎖形成）
により検出する、いわゆるサザンブロッティング法が主
流である。マーカーとしては従来より、放射性同位体（
ＲＩ）が用いられ高感度分析が行われてきたが、ＲＩが
高価であり、また取り扱いの危険性、半減期が短く安定
したプローブを得にくいなどの問題がある。このような
観点から非ＲＩ標識プローブの開発が盛んに行われてき
た。これらには、ビオチン−アビジン法、ハプテン標識
法、ラベザイムーＰＯＤ法、ケミプローブ法などがあげ
られるが。
ｒｉｃｔｉｏｎＦｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏ
ｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）連鎖解析を中心として活発に行
われ、特に約３０種の遺伝病の遺伝子の変異も報告され
ている。検出法としては適当な制限酵素で切断したＤＮ
Ａ断片をポリアクリルアミド、あるいはアガロースゲル
等を用いる電気泳動法によって分離、ニトロセルロース
膜などに固定化後、マーカーで標識されたプローブＤＮ
Ａとのハイブリダイゼーション（ＤＮＡの２本鎖形成）
により検出する、いわゆるサザンブロッティング法が主
流である。マーカーとしては従来より、放射性同位体（
ＲＩ）が用いられ高感度分析が行われてきたが、ＲＩが
高価であり、また取り扱いの危険性、半減期が短く安定
したプローブを得にくいなどの問題がある。このような
観点から非ＲＩ標識プローブの開発が盛んに行われてき
た。これらには、ビオチン−アビジン法、ハプテン標識
法、ラベザイムーＰＯＤ法、ケミプローブ法などがあげ
られるが。
これらは短鎖のオリゴヌクレオチドをプローブとした場
合の標識物の立体障害による２本鎖形成のμ■害、ある
いは高価な酵素等の使用などの欠点を有する。さらに、
従来の検出法によるためサンプルＤＮＡの電気泳動、固
定化などの煩雑な操作を必要とするのが現状である。
合の標識物の立体障害による２本鎖形成のμ■害、ある
いは高価な酵素等の使用などの欠点を有する。さらに、
従来の検出法によるためサンプルＤＮＡの電気泳動、固
定化などの煩雑な操作を必要とするのが現状である。
（問題点を解決するための手段）
本発明は、上記問題点を解決するもので、高価なＲＩや
酵素等をマーカーとして使用することなしに、安価で、
ＤＮＡの固定化等の煩雑な操作なしに、簡易、迅速に特
定の塩基配列を有するＤＮＡを検出することを目的とし
てなされたものである。
酵素等をマーカーとして使用することなしに、安価で、
ＤＮＡの固定化等の煩雑な操作なしに、簡易、迅速に特
定の塩基配列を有するＤＮＡを検出することを目的とし
てなされたものである。
本発明は、蛍光標識された一本鎖ＤＮＡプローブを、分
析検体中のＤＮＡと接触させて２本鎖ＤＮＡを形成させ
、２本鎖形成前の蛍光偏光と２本鎖形成後の蛍光偏光と
の変位を測定して検体中のＤＮＡに、プローブに対応す
る塩基配列が存在することを検出する方法である。
析検体中のＤＮＡと接触させて２本鎖ＤＮＡを形成させ
、２本鎖形成前の蛍光偏光と２本鎖形成後の蛍光偏光と
の変位を測定して検体中のＤＮＡに、プローブに対応す
る塩基配列が存在することを検出する方法である。
本発明では、蛍光標識された一本鎖ＤＮＡプローブが、
例えば、ＤＮＡの３′末端に、アミノ基を少なくとも１
つ有するデオキシヌクレオチド誘導体を結合させ、更に
インチオシアネート基を少なくとも１つ有する蛍光色素
を結合したものが使用される四 本発明で使用するプローブの製造において、アミノ基を
少なくとも１つ有するデオキシヌクレオチド誘導体とし
ては、脂肪族１級アミンを有するものが反応性にすぐれ
ている。例として８−（６−アミノヘキシル）−アミノ
アデノシン−５′−トリフオスフェートや５−（３−ア
ミノアリル）−ウリジン−５′−トリフオスフェートな
どがあげられるが、これに限定されるものではない。
例えば、ＤＮＡの３′末端に、アミノ基を少なくとも１
つ有するデオキシヌクレオチド誘導体を結合させ、更に
インチオシアネート基を少なくとも１つ有する蛍光色素
を結合したものが使用される四 本発明で使用するプローブの製造において、アミノ基を
少なくとも１つ有するデオキシヌクレオチド誘導体とし
ては、脂肪族１級アミンを有するものが反応性にすぐれ
ている。例として８−（６−アミノヘキシル）−アミノ
アデノシン−５′−トリフオスフェートや５−（３−ア
ミノアリル）−ウリジン−５′−トリフオスフェートな
どがあげられるが、これに限定されるものではない。
また１本発明において、イソチオシアネート基を少なく
とも１つ有する蛍光色素としては、フルオレッセインイ
ソチオシアネート（ＦＩＴＣ） 、テトラメチルローダ
ミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、エオシンイン
チオシアネート、などがあげられる。
とも１つ有する蛍光色素としては、フルオレッセインイ
ソチオシアネート（ＦＩＴＣ） 、テトラメチルローダ
ミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、エオシンイン
チオシアネート、などがあげられる。
ＤＮＡの３′末端にアミノ基を少なくとも１つ有するデ
オキシヌクレオチド誘導体を結合させる場合は、デオキ
シヌクレオチジルトランスフェラーゼ又はポリアデニレ
ートポリメラーゼを用いるのが好ましい。
オキシヌクレオチド誘導体を結合させる場合は、デオキ
シヌクレオチジルトランスフェラーゼ又はポリアデニレ
ートポリメラーゼを用いるのが好ましい。
ＤＮＡはアミノ基を少なくとも１つ有するデオキシヌク
レオチド誘導体及びデオキシヌクレオチジルトランスフ
ェラーゼ又はポリアデニレートポリメラーゼを反応させ
た後、酵素及び未反応のデオキシヌクレオチド誘導体を
分離除去する。
レオチド誘導体及びデオキシヌクレオチジルトランスフ
ェラーゼ又はポリアデニレートポリメラーゼを反応させ
た後、酵素及び未反応のデオキシヌクレオチド誘導体を
分離除去する。
酵素反応は、リン酸緩衝液、カコジル酸緩衝液などを用
い、ＰＨ５〜９程度、温度３０〜４０℃程度で行なわれ
る。
い、ＰＨ５〜９程度、温度３０〜４０℃程度で行なわれ
る。
酵素反応によって得られたアミノ基を少なくとも１つ有
するデオキシヌクレオチド誘導体を３′末端に結合した
ＤＮＡにはイソチオシアネート基を少なくとも１つ有す
る蛍光色素を加えて反応させ、未反応の蛍光色素を分離
除去することによって蛍光色素で標識されたＤＮＡを得
ることができる。
するデオキシヌクレオチド誘導体を３′末端に結合した
ＤＮＡにはイソチオシアネート基を少なくとも１つ有す
る蛍光色素を加えて反応させ、未反応の蛍光色素を分離
除去することによって蛍光色素で標識されたＤＮＡを得
ることができる。
本発明においては、プローブＤＮＡに標識された蛍光色
素の偏光を観測するこによりＤＮＡを検出することがで
きる。すなわち、蛍光色素を標識した短鎖のオリゴヌク
レオチドをプローブとして、検体中の特定の塩基配列を
持つＤＮＡを認識して２本鎖を形成し、これによって生
じる蛍光色素の偏光変化を測定することによって、特定
のＤＮＡを検出する。
素の偏光を観測するこによりＤＮＡを検出することがで
きる。すなわち、蛍光色素を標識した短鎖のオリゴヌク
レオチドをプローブとして、検体中の特定の塩基配列を
持つＤＮＡを認識して２本鎖を形成し、これによって生
じる蛍光色素の偏光変化を測定することによって、特定
のＤＮＡを検出する。
励起光を垂直方向に偏光してサンプルに照射した場合、
生じる蛍光は、励起光と同じ方向の吸収モーメントを持
つ分子のみが励起され、蛍光を発するためにその垂直成
分と水平成分の強度比が異って観測される、すなわち偏
光が生じる。しかしながら、通常この偏光は、励起分子
の急速な回転ブラウン運動によって緩和され、ａ測され
ないことが多い、短い一本鎖プローブＤＮＡに標識され
た蛍光色素を考えた場合、まずプローブＤＮＡが、大き
なサンプルＤＮＡ中の特定の塩基配列を認識して相補的
な２本鎖形成を行う。このみかけ上の分子量の増大によ
って標識された蛍光色素の速い回転運動が緩和されて、
偏光異方性が大きくなることが期待される。すなわち、
偏光度の変化を観測することによって、プローブＤＮＡ
とサンプルＤＮＡとの２本鎖形成、つまりプローブＤＮ
Ａと相補鎖を持つＤＮＡの検出が可能となる。もちろん
、サンプル中に相補鎖がない場合、プローブＤＮＡは２
本鎖を形成せず、したがって偏光の変化は観測されない
。
生じる蛍光は、励起光と同じ方向の吸収モーメントを持
つ分子のみが励起され、蛍光を発するためにその垂直成
分と水平成分の強度比が異って観測される、すなわち偏
光が生じる。しかしながら、通常この偏光は、励起分子
の急速な回転ブラウン運動によって緩和され、ａ測され
ないことが多い、短い一本鎖プローブＤＮＡに標識され
た蛍光色素を考えた場合、まずプローブＤＮＡが、大き
なサンプルＤＮＡ中の特定の塩基配列を認識して相補的
な２本鎖形成を行う。このみかけ上の分子量の増大によ
って標識された蛍光色素の速い回転運動が緩和されて、
偏光異方性が大きくなることが期待される。すなわち、
偏光度の変化を観測することによって、プローブＤＮＡ
とサンプルＤＮＡとの２本鎖形成、つまりプローブＤＮ
Ａと相補鎖を持つＤＮＡの検出が可能となる。もちろん
、サンプル中に相補鎖がない場合、プローブＤＮＡは２
本鎖を形成せず、したがって偏光の変化は観測されない
。
（発明の効果）
本発明により、従来サザンブロッティング法など煩雑な
操作を必要としていた臨床分野におけるＤＮＡの診断を
迅速、簡易に行うことが可能となる。すなわちＤＮＡの
変異、あるいは感染症を誘発するウィルス等の外因性遺
伝子を迅速、簡易に検出することにより、各種の病気の
初期段階での診断、予防、治療が可能となる。
操作を必要としていた臨床分野におけるＤＮＡの診断を
迅速、簡易に行うことが可能となる。すなわちＤＮＡの
変異、あるいは感染症を誘発するウィルス等の外因性遺
伝子を迅速、簡易に検出することにより、各種の病気の
初期段階での診断、予防、治療が可能となる。
（実施例）
実施例１
重合度１２−１８のオリゴアデノシンをプローブＤＮＡ
として、３′末端にターミナルデオキシヌクレオチジル
トランスフェラーゼを用いて８−（６−アミノヘキシル
）−アミノ−５′−トリフオスフェートを重合し、さら
にフルオレッセインイソチオシアネートを反応させて蛍
光色素を４Ｌａｔ、た。このプローブＤＮＡに相補鎖を
持つポリチミジンを添加し、４０℃、３０分間２本鎖形
成を行った。第１図にポリチミジンの添加量の増加に対
する蛍光異方性比を示した。プローブであるオリゴアデ
ノシンが大きなポリチミジンと２本鎖形成を行い標識さ
れた蛍光色素の急速な回転ブラウン運動が緩和されたた
めに偏光異方性比が増大した。従って、この偏光異方性
比の増大により、プローブの２本鎖形成が確認された。
として、３′末端にターミナルデオキシヌクレオチジル
トランスフェラーゼを用いて８−（６−アミノヘキシル
）−アミノ−５′−トリフオスフェートを重合し、さら
にフルオレッセインイソチオシアネートを反応させて蛍
光色素を４Ｌａｔ、た。このプローブＤＮＡに相補鎖を
持つポリチミジンを添加し、４０℃、３０分間２本鎖形
成を行った。第１図にポリチミジンの添加量の増加に対
する蛍光異方性比を示した。プローブであるオリゴアデ
ノシンが大きなポリチミジンと２本鎖形成を行い標識さ
れた蛍光色素の急速な回転ブラウン運動が緩和されたた
めに偏光異方性比が増大した。従って、この偏光異方性
比の増大により、プローブの２本鎖形成が確認された。
実施例２
プラスミドｐＢＲ３２２の検出を行った。プローブＤＮ
ＡとしてｐＢＲ３２２中の２０塩基（６２０−６３９）
の配列を持つオリゴヌクレオチドを ＣＹＣＬＯＮＥ ＤＮＡ ５ＹＮＴＨＥＳＩＺＥＲ（Ｂ
ｉｏｓｅａｒｃｈ、 Ｉｎｃ、 ）で合成して使用した
。サンプルのｐＢＲ３２２は制限酵素ＥｃｏＲＩにより
７ｍＭ ＭｇＣｌ、と１２５ｍＭ ＮａＣ１を含む１０
ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐＨ７，５）中で２４時
間反応させて直鎖のＤＮＡとした。また、このｐＢＲ３
２２とλ−ＤＮＡのそれぞれの水溶液を１５分間煮沸し
、急冷することによって−本領ＤＮＡサンプルとした。
ＡとしてｐＢＲ３２２中の２０塩基（６２０−６３９）
の配列を持つオリゴヌクレオチドを ＣＹＣＬＯＮＥ ＤＮＡ ５ＹＮＴＨＥＳＩＺＥＲ（Ｂ
ｉｏｓｅａｒｃｈ、 Ｉｎｃ、 ）で合成して使用した
。サンプルのｐＢＲ３２２は制限酵素ＥｃｏＲＩにより
７ｍＭ ＭｇＣｌ、と１２５ｍＭ ＮａＣ１を含む１０
ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ緩衝液（ｐＨ７，５）中で２４時
間反応させて直鎖のＤＮＡとした。また、このｐＢＲ３
２２とλ−ＤＮＡのそれぞれの水溶液を１５分間煮沸し
、急冷することによって−本領ＤＮＡサンプルとした。
実施例１と同様に蛍光色素を標識した合成プローブＤＮ
Ａを各サンプルＤＮＡにそれぞれ加え、５ｘｓｓＰＥ緩
衝液（ｐＨ８，０）中で、６０℃、４時間ハイブリダイ
ゼーションを行った。表１に得られた偏光異方性を示す
、ブランクあるいはプローブＤＮＡと相補鎖を持たない
λ−ＤＮＡに比べてｐＢＲ３２２ではより大きな偏光異
方性が得られた。すなわちこの偏光異方性の増大により
ｐＢＲ３２２の検出ができた。
Ａを各サンプルＤＮＡにそれぞれ加え、５ｘｓｓＰＥ緩
衝液（ｐＨ８，０）中で、６０℃、４時間ハイブリダイ
ゼーションを行った。表１に得られた偏光異方性を示す
、ブランクあるいはプローブＤＮＡと相補鎖を持たない
λ−ＤＮＡに比べてｐＢＲ３２２ではより大きな偏光異
方性が得られた。すなわちこの偏光異方性の増大により
ｐＢＲ３２２の検出ができた。
第１表
本発明のＤＮＡ迅速、簡易検出法は、プローブとして用
いたオリゴヌクレオチドに標識された蛍光色素の偏光異
方性を測定するものであり、この変化により、特定の塩
基配列を有するＤＮＡの検出が可能となった。
いたオリゴヌクレオチドに標識された蛍光色素の偏光異
方性を測定するものであり、この変化により、特定の塩
基配列を有するＤＮＡの検出が可能となった。
第１図は、本発明においてオリゴアデノシンをプローブ
とした場合の、ポリチミジンの添加量に対する偏光異方
性変化を示したものである。 代理人 弁理士 戸 １）親 男
とした場合の、ポリチミジンの添加量に対する偏光異方
性変化を示したものである。 代理人 弁理士 戸 １）親 男
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、蛍光標識された一本鎖ＤＮＡプローブを、分析検体
中のＤＮＡと接触させて２本鎖ＤＮＡを形成させ、２本
鎖形成前の蛍光偏光と２本鎖形成後の蛍光偏光との変位
を測定して検体中のＤＮＡに、プローブに対応する塩基
配列が存在することを検出する方法。 ２、蛍光標識された一本鎖ＤＮＡプローブが、ＤＮＡの
３′末端に、アミノ基を少なくとも１つ有するデオキシ
ヌクレオチド誘導体を結合させ、更にイソチオシアネー
ト基を少なくとも１つ有する蛍光色素を結合させたもの
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22757788A JPH0275958A (ja) | 1988-09-13 | 1988-09-13 | Ｄｎａ検出法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22757788A JPH0275958A (ja) | 1988-09-13 | 1988-09-13 | Ｄｎａ検出法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0275958A true JPH0275958A (ja) | 1990-03-15 |
Family
ID=16863096
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22757788A Pending JPH0275958A (ja) | 1988-09-13 | 1988-09-13 | Ｄｎａ検出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0275958A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0838199A (ja) * | 1994-04-18 | 1996-02-13 | Becton Dickinson & Co | 核酸増幅の蛍光偏光検出方法 |
| DE4418691A1 (de) * | 1994-05-28 | 1996-02-22 | Boehringer Mannheim Gmbh | 3'-(4'-) nicht-radioaktiv markierte Nukleoside und Nukleotide mit Aminocarbonsäure-, Peptid- oder Carbonsäure-Spacer |
| US5939256A (en) * | 1992-11-27 | 1999-08-17 | Canon Kabushiki Kaisha | Detection of nucleic acid hybrid variation which interacts with double helix or with second reagent through double helix by charge transfer and probe for hybridizing with target nucleic acid |
| WO1999060158A1 (en) * | 1998-05-19 | 1999-11-25 | Laboratory Of Molecular Biophotonics | Solid phase for detecting nucleic acid and method for detecting nucleic acid |
| US6124342A (en) * | 1993-12-27 | 2000-09-26 | Canon Kk | Pharmaceutical compositions containing pyrylium compounds, pyrylium salts and process for manufacturing a medicament containing the aforesaid compounds |
| US6297008B1 (en) | 1996-10-03 | 2001-10-02 | Canon Kabushiki Kaisha | Process for detecting target nucleic acid, process for quantifying the same, and pyrylium compound for chemiluminescence analysis |
| WO2014089645A1 (pt) | 2012-12-11 | 2014-06-19 | Web Equipamentos Elétricos S.A. - Motores | Sistema de dreno para máquinas elétricas e máquinas elétricas compreendendo o mesmo |
-
1988
- 1988-09-13 JP JP22757788A patent/JPH0275958A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5939256A (en) * | 1992-11-27 | 1999-08-17 | Canon Kabushiki Kaisha | Detection of nucleic acid hybrid variation which interacts with double helix or with second reagent through double helix by charge transfer and probe for hybridizing with target nucleic acid |
| US6124342A (en) * | 1993-12-27 | 2000-09-26 | Canon Kk | Pharmaceutical compositions containing pyrylium compounds, pyrylium salts and process for manufacturing a medicament containing the aforesaid compounds |
| US6242477B1 (en) | 1993-12-27 | 2001-06-05 | Canon Kabushiki Kaisha | Pharmaceutical compositions containing pyrylium compounds, pyrylium salts and process for manufacturing a medicament containing the aforesaid compounds |
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| US6297008B1 (en) | 1996-10-03 | 2001-10-02 | Canon Kabushiki Kaisha | Process for detecting target nucleic acid, process for quantifying the same, and pyrylium compound for chemiluminescence analysis |
| WO1999060158A1 (en) * | 1998-05-19 | 1999-11-25 | Laboratory Of Molecular Biophotonics | Solid phase for detecting nucleic acid and method for detecting nucleic acid |
| WO2014089645A1 (pt) | 2012-12-11 | 2014-06-19 | Web Equipamentos Elétricos S.A. - Motores | Sistema de dreno para máquinas elétricas e máquinas elétricas compreendendo o mesmo |
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