JPH0430400B2 - - Google Patents
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- JPH0430400B2 JPH0430400B2 JP58241824A JP24182483A JPH0430400B2 JP H0430400 B2 JPH0430400 B2 JP H0430400B2 JP 58241824 A JP58241824 A JP 58241824A JP 24182483 A JP24182483 A JP 24182483A JP H0430400 B2 JPH0430400 B2 JP H0430400B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、これまで記載されたことのない微生
物、ノカルジア・オリエンタリス（Nocardia
orientalis）NRRL15232またはA51568を産生す
るその変異株（mutantまたはvariant）を深部通
気発酵の条件下で培養することにより製造され
る。本明細書中でA51568因子ＡおよびＢと称す
る抗生物質に関する。ノカルジア・オリエンタリ
スNRRL115232は通常A51568因子ＡおよびＢの
およそ95：５混合物を生成する。上記抗生物質は
病原性微生物、特に、ペニシリン耐性のグラム陽
性菌であるスタフイロコツカス属およびストプト
コツカス属の菌の増殖を抑制する。 非常に多くの微生物が病原性を有し、ヒトおよ
び動物の疾病誘因物質である。多年に亘り、病原
性微生物に対して有効な非常に多数の抗生物質が
開発されてきた。しかし、これらの病原微生物に
より引き起こされるヒトまたは動物の疾病をより
良く治療するために前記微生物に対して更に有効
な薬剤の開発が今なお望まれている。 抗生物質A51568印紙ＡおよびＢはグリコペプ
タイド系抗生物質に属する抗グラム陽性菌抗生物
質である。 当該分野で既に知られているグリコペプタイド
系抗生物質としては、特に、バンコマイシン
［McCormick et al.、アメリカ合衆国特許No.
3067099（1962年12月４日）。Williamson et al.、
J.Am.Chem.Soc.103、6580−6585（1981）に構造
記載。］、アクタプラニン（抗生物質Ａ−4696）
［Hamill et al.、アメリカ合衆国特許No.3952095
（1976年４月20日）。Debono、アメリカ合衆国特
許No.4322343（1982年３月30日）に部分構造記載］、
リストセチン［イリギス特許No.765886（1957年）。 Kalman et al.、J.Am.Chem.Soc.102、897−
905（1980）にリストセチン複合体の中の１因子、
リストセチンＡの構造記載。］，アボパルシン
［Kunstmann et al.、アメリカ合衆国特許No.
3338786（1967年８月29日）。Ellestand et al.、J.
Am.Chem.Soc.103、6522−6524（1981）に構造記
載。］が例示される。 本発明は、特に、構造式（）で表わされる単
離抗生物質もしくはその製薬上許容される塩また
はこれらのいづれかを主成分として含有する抗生
物質混合物を提供する。ここで、ｎが１の場合の
式（）の抗生物質をＡ−51568因子Ａと表わし、
ｎが２の場合をＡ−51568因子Ｂと表わす。 ［式中、ｎは１また２を表わす］ 抗生物質A51568因子Ａは白色無定形固体であ
る。抗生物質A51568因子のＡの元素分析は以下
のおおよそのパーセント組成を示す。 Ｃ、50.63％；Ｈ、5.07％；Ｎ、8.36％； Cl、8.19％；Ｏ、25.16％ 当該抗生物質の分子量は、フアスト・アトム・ボ
ンバードメント・マス・スペクトル（fast−
atom−bombardment mass spectrometry）に
よれば約1435である。 抗生物質のA51568因子Ａのプロトン核磁気共
鳴スペクトルは、ジメチルスルホキシド中60℃、
360MHzで測定した。構造式中の幾つかある６員
環を次式に示すようにアルフアベツトを付して識
別する。 化学シフト（ppm）の一覧は次の第１表に示す
とおりである。 【表】 【表】 ※ 不明
抗生物質A51568因子Ａのプロトン核磁気共鳴
スペクトルは、バンコマイシンのものと非常に類
似している。測定によりみられる主たる顕著な相
異点は、A51568のスペクトルにはＮ−（メチル）
ロイシンに関連したＮ−CH3共鳴が存在しないこ
とである。従つて、バンコマイシンのプロトン
NMRスペクトルは、A51568因子Ａのプロトン
NMRスペクトルにはみられない。239ppmにお
けるメチルの一重線を有する。 分子量、プロトンに核磁気共鳴スペクトル・デ
ーターおよび元素分析に基けば、A51568因子Ａ
の実験式はC65H73Cl2N9O24である。 抗生物質A51568因子Ａの66％ジメチルホルム
アミド水溶液中での電位差滴定によれば、pKa値
としてN62、88、103および12.85（開始PH＝6.12）
を示した。 抗生物質A51568因子Ａは次のような特異的旋
光を示す。［ａ］25℃ Ｄ＝−20.4°（ｃ＝10mg／ml，
水）、［ａ］25℃ 365＝−33.6°（ｃ＝10mg／ml，水）。 抗生物質A51568因子ＡのKBrペレツトにおけ
る赤外線吸収スペクトルは添付の第１図に示すと
おりである。その認識し得る吸収極値としては次
の値が観察される。3400（巾広，強）、3380（巾，
強）、1657（巾、強）、1587（やや強）、1505（やや
強）、1424（中程度）、1396（中程度）、1328（巾広，
弱）、1310（巾広，弱）、1231（やや強）、1174（弱）
、
1156（弱）、1128（中程度）、1062（やや強）、1028
（弱）、1015（弱）、990（弱）、882（弱）、881（弱
）cm
-1。 抗生物質A51568因子Ａの水中における、酸性、
中性および塩基性条件下での紫外線吸収極値を、
次の第２表に記載する。 第 ２ 表 抗生物質A51568因子ＡのUVスペクトル 酸性または中性 塩基性極値nm（ε） 極値nm（ε） 278（5500） 302（6000） 234（肩）（25000） 264（肩）（10000） 抗生物質A51568因子Ｂ（式においてｎ＝２）
は白色無定形固体である。A51568因子Ｂの分子
量はフアスト・アトム・ボンバードメント・マ
ス・スペクトルによれば約1437である。 抗生物質A51568因子Ｂのプロトン核磁気共鳴
スペクトルは、ジメチルスルホキシド中60℃、
360MHzで測定した。構造式中の幾つかある６員
環を次式に示すようにアルフアベツトを付して識
別する。 化学シフト（ppm）の一覧は、次の第３表を示
すとおりである。 【表】 【表】 ※ 不明
抗生物質A51568因子Ｂのプロトン核磁気共鳴
スペクトルは、バンコマイシンおよびA51568因
子Ａのものと非常に類似している。測定によりみ
られる主たる顕著な相異点は、バンコマイシンの
スペルトルにみられるＮ−（メチル）ロイシンに
関連したＮ−CH3共鳴ならびにバンコマイシンお
よびA51568因子Ａのスペクトルにみられるアス
パラギン共鳴が存在しないことである。バンコマ
イシンおよびA51568因子Ａにみられるアスパラ
ギン共鳴がA51568因子Ｂではグルタミン共鳴に
置き換わつている。 マス・スペクトル・データー、プロトン核磁気
共鳴スペクトル・データーおよび対応する
A51568因子Ａのデーターとの比較に基けば、抗
生物質A51568因子Ｂの実験式はC65H73Cl2N9O24
である。 因子ＡおよびＢを含有する抗生物質A51568混
合物はこれまで末記載の株、ノカルジア・オリエ
ンタリスNRRL15232を培養することにより製造
する。 本発明は、更に、これまで末記載の株、ノカル
ジア・オリエンタリスNRRL15232およびその生
物学的に純粋な菌株に関する。簡便するために、
ノカルジア・オリエンタリスNRRL15232の生物
学的に純粋な培養菌をA51568.1菌株と称する。 A51568.1菌株は、A51568菌から自然選択によ
り誘導される変異株である。このA51568菌は、
最初はメキシコのユカタンで採取した土壌試料か
ら単離した。 A51568.1菌株は、刊行物中のノカルジア属に
関する記載との比較と同時に実験的な比較からノ
カルジア・オリエンタスの菌株として分類され
る。上記刊行物とは、D.Berd、
“LaboratoryIdentification of Clinically
Important AerobicActinomycetes”、Appl.
Microbiol.25(4)、665−681（1973）；Bergey′s
Manual of Determinative Bacteriology、8th
Edition.R.E.Buchanan and N.E.Gibbons編集
（The Williams and Wilkins Co.、
Baltimore）；R.E.Gordon et al.、“Nocardia
coeliaca、Nocardiaautotrophia、and the
Nocardin Strain”、Int.J.Syst.Bacteriol.24(1)、
54−63（1974）；R.E.Gordon et al.、“Resistance
to Rifampin and Lysozyme of Strains of
some Species of Mycobacterium and
Nocardia as ａ Taxomic Tool′、Int.J.Syst.
Bacteriol.27(3)，176−178（1977）；S.A.
Waksman、The Actino−mycetes Vol.、
［The Williams and WiIkins Co.、Baltimore
（1961）］；R.E.Gordon et al.、“Some Bits and
Pieces of Genus Nocardia：N.carnea、N.
vacinii、N.transvalensis、N.orietalis、and N.
aerocolonigenes“、J.Gen.Microbiol.109、69−
78（1978）；S.J.Mishra et al.、”Identification
of Nocardiae and Streptomycetes of Medical
Importance”、J.CIin.Microbiol.11（６）、728−
736（1980）；Pittenger et al.、“Streptomyces
orientalis、n.sp.、the Source of
Vancomycin”、Antibiot.and Chemoth.
（）、642−647（1956）である。 Gordon et al.、“Nocardia coeliaca、
Nocardia autotrophia、and the Nocardin
Stain”、Int.J.Syst.Bacteriol.24(1)、54−63
（1974）に記載されているようなノカルジア種の
特徴付けに適した方法であると同時に、Shirling
and Gottlieb、“Methods of Characterization
of Streptmyces Species”、Int.J.Syst.Bacteriol.
16(3)，313−340（1966）に記載されているような
ストレプトマイセス種の特徴付けにインターナシ
ヨナル・ストレプトマイセス・プロジエクト
（ISP）が適しているとする方法または手段は次
のとおりであつた。 A51568.1菌株の特徴 形 態 A51568.1菌株は広範囲に基底および気中菌糸
体を生産する。光学顕微鏡下で観察すると、気中
菌糸はクモの巣様である。深部振盪条件下で増殖
させると、菌糸は短い菌糸体フラグメントに分壊
する。 気中菌糸を光学顕微鏡下で観察すると分生胞子
は観察されなかつたが、走査電子顕微鏡下では観
察される。この特徴は、A51568.1菌株をISP培地
No.５および水道水寒天培地で増殖させると観察さ
れる。胞子表面の状態は滑らか（Sm）である。
胞子の形状は球形〜円筒状であり、胞子は少量、
不規則に生成する。この形態は、バージーズ・マ
ニユアル（同上）の記載に従えば、非ストレプト
マイセス金属に分類される。 培養上の特徴 A51568.1菌株は、酵母−デキストローズ寒天
培地および他の多くの寒天培地上でよく増殖し、
その増殖は、しわ状あるいは薄片状になることも
あつた。全体色が灰色系（GY）あるいは時々は
白色系（Ｗ）である胞子を有する気中菌糸体を豊
富に産出した。TresnerとBackus系［Tresner
and Backns、“System of Color Wheels for
Streptomycete Taxonomy”、Appl.Microbiol.
11、335−338（1956）参照］における灰色系で最
も類似した色タブ（tab）はｄ明灰色〜2dc黄灰
色である。 気中での増殖は、典型的なストレプトマイセス
属はど密でも長くもない。この気中での増殖は、
無機塩−デンプン寒天培地（ISPNo.４），グリセ
リン−アスパラギン寒天培地（ISPNo.５）および
グリセリン−グリシン寒天培地上でみられるが、
酵母−麦芽エキス寒天培地（ISPNo.２）上で最も
よく観察される。 次の寒天培地上では、裏面に独特の暗褐色が観
察される。ISPNo.２、ISPNo.５，チロシン寒天培
地（ISPNo.７）およびグリセリン−グリシン寒天
培地。この色はPHにより影響されない。上記の培
地中ならびにツアペツクの溶液寒天培地中および
グルコースーアスパラギン寒天培地中では、明〜
赤褐色の可溶性色素も産生される。他の培地中で
のA51568.1菌株の裏面色は黄褐色である。 変化性をプレートで調べると、A51568.1菌株
はコロニーの混在型を示さなかつたので、安定し
た単離株である。 種々の培地上でノカルジア・オリエンタリス
ATCC19795と比較したA51568.1の培養上の特徴
を次の第４表に示す。 色名は、ISCC−NBS Centroid Color Charts
Sample No.2106（National Bureau of
Standards、U.S.Department of Commerce、
1958）およびthe Color Harmony Manual、4th
Edition（Color Standards Depart−ment、
Container Corporantion of America，
Chicago、Illinois、1958）に従つて表わした。 【表】 【表】 細胞壁に関する知見 加水分解したA51568.1菌株の全体細胞を用い
て、M.P.Lechevalier，“Identification of
Aerobic Actinomycetes of Clinical Im−
portance”，J.Lab.Clin.Med.71，931−944（1968）
のクロマトグラフイー法により、特性表示となる
糖類としてどのような糖類が存在するかを調べ
た。 加水分解した全体細胞を用いて、Becker et
al.，Appl.Micrbiol.11，421−423（1964）の方法
に従つて、ジアミノピメリン酸の異性体を測定し
た。 上記に関する試験結果を以下に示す。 【表】 上記の結果はＡ型の全体細胞糖パターンおよび
型の細胞壁を示し、主細胞壁成分のこの組合せ
はノカルジア属であることを示す。M.P.
Lechevalier（同上）参照。 全体細胞のメタノリシス物の薄層クロマトグラ
フイーを用いて、D.E.Minnikin et al.、
“Differentiation of Mycobacterium，Nocardi、
and Related Taxa by Thin−layer
Chromatographic analysis of Whole−
organism Methanolysates”、J.Gen.Microbiol.
88，200−204（1975）に記載の方法に従えば、ミ
コリン酸のメチルエステルは観察されなかつた。 上記の測定に加えて、A51568.1菌株をN.オリ
エンタリス関連の21株に関する刊行物中のデータ
ーならびにNRRL2451，NRRL2452および
ATCC19795と比較して調べた。培養上、形態上
および生理学上の特徴の比較を次の第５表に記載
する。 【表】 【表】 更に、A51586.1，NRRL2451，NRRL2452お
よびATCC19795菌株による炭水化物からの酸産
生をN.オリエンタリス関連の21株に関する刊行
物中の結果と比較した。これを次の第６表に記載
する。 【表】 A51568.1について観察した培養上、形態上お
よび生理学上の特徴により、R.E.Gordonet.al.
“Some Bits and Pieces of the Gemus
Nocardia：N.carnea，N.vaccinii、N.trans−
valensis、N.orientalis，andN.aerocoloni−
genes”、J.Gen.Microbiol.109、69−78（1978）お
よびS.J.Mishra et al.、”Identification of
Nocardia and Streptomycetes of Medical
Importance”，J.Cin，Microbiol.11(6)、728−736
（1980）に記載されているようなノルカジア属の
14種に関する記載と比較した。また、これと同時
に、A51568.1菌株とNRRL2451、NRRL2452お
よびATCC19755菌株とを実験的に比較した。 ここで、類似度係数を次式から計算した。 Ｓ＝［Ns+＋Ns-］／［Ns+＋Ns-＋Nd］×100 ［式中、Ns+＝陽性類似点の数 Ns-＝陽性類似点の数 Nd＝非類似点（相異点）の数］ W.A.Kurylowicz et al.、“Numerical Taxo−
nomy of Streptomycetes”、Polish
MedicalPublisher、，Warsaw（1975）参照。 類似度係数を計算するには、主に生理学上の特
徴を用いた。比較は、A51568.1菌株に対して他
の全ての株を観察することにより行つた。従つ
て、A51568.1自体の係数は100となつた。この比
較を次の第７表に記載する。 【表】 A51568.1菌株とN.オリエンタリスATCC19795
との類似点および相異点を次の第８表に示す。 第 ８ 表 A51568.1菌株とATCC19795菌株との類似点お
よび相異点 類 似 点 相 異 点 炭水化物から酸性成気中菌糸
数種の培地での培養上の特徴 カタラーゼ産成 気中菌糸体色 細胞壁−型 裏面色 分生胞子存在 可溶性色素産生 培養上の特徴 キサンチンの分解 分 解 Nacl耐性 カゼイン 硝酸還元 DNA ノボビオシンへの耐性類似点 ヒポキサンチン チロシン 菌糸体の分裂 ゼラチン液化 加水分解 エスキユリン 馬尿酸塩 脱脂乳 デンプン アデニンの分解不能 メラノイド色素産生無 形 態 フオスフアターゼ産生 耐 性 リゾチーム ペニシリン リフアンピン バシトラシン感受性 胞子の形状類似点 胞子の表面状態 染色反応 全体細胞の加水分解物の糖パターンＡ型 50℃、８時間後に生存 温度範囲（10−40℃） ウレアーゼ産生有機化合物の利用 CSM培地での生育増殖 A51568.1菌株は、the Northern Regional
Research Center、U.S.Department of Agri
−culture、Agricultural Research Service、
Peoria、Illinois 61604に寄託され、保存菌株
の一部となつており、NRRL15232の番号の下
に誰でもそこから入手できる。本微生物はブダ
ペスト条約に基づく国際寄託として、アグリカ
ルチヤラルリサーチカルチヤーコレクシヨン
（NRRL）に寄託されている（受託日：1982年
11月29日）。 抗生物質A51568因子ＡおよびＢの製薬上許
容される非毒性塩も本発明の一部である。“製
薬上許容される”塩とは、温血動物に対する全
体としての化合物の毒性が非塩型と比較して増
加しない塩である。抗生物質A51568因子Ａお
よびＢの代表的で適当な塩としては、有機およ
び無機酸（例えば、硫酸、リン酸、塩酸、酢
酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、
フマル酸など）と常法で反応させて製造する酸
付加塩ならびにカルボキシル基から強塩基（例
えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭
酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化アンモニ
ウム、ジエタノールアミン）などにより製造す
る塩が銃含される。 種々の細菌に対する抗生物質A51568因子Ａ
の活性を寒天希釈法で測定して、最少阻害濃度
（MIC）値を記載した次の第９表に示す。 【表】 【表】 多数の好気性菌に対する抗生物質A51568因
子ＡおよびＢの生体外系での活性を標準的寒天
希釈測定法を用いて測定した。24時間後を終了
点として読み取ることにより測定した結果を次
の第10表に記載する。 【表】 抗生物質A51568因子ＡおよびＢを試験して、
次の第11表を示すように、多数の嫌気性菌に対
して活性であることが分つた。ここでMIC値
は、寒天希釈法により測定した。 【表】 【表】 抗生物質A51568因子Ａは、寒天希釈法での
測定によれば、クロストリジウム・ジフイシレ
の多数の株に対しても活性である。本試験の結
果を次の第12表に記載する。 【表】 抗生物質A51568因子ＡおよびＢは、生体内
系において実験的細菌感染症に対する抗微生物
活性を示した。被験化合物の二種の用量を例と
なる感染症に罹つたマウスに皮下投与した場合
に得られる活性をED50〔被験動物の50％を保護
するのみ有効な投与量（mg／Kg）、Warren
Wick et al.、J.Bacteriol.81、233−235（1961）
参照〕で測定した。抗生物質A51568因子Ａお
よびＢのED50値は以下の如くである（単位は
mg／Kg×２）。 Ａ Ｂ スタフイロコツカス・アウレウス 3055
1.79 2.5 ストレプトコツカス・ピオゲネスＣ 203
3.03 7.94 ストレプトコツカス・ニユーモニアエ・パーク
2.71 2.5 また、抗生物質A51568因子Ｂはマウスに関
して、＞300mg／Kg（腹腔内投与）の50％致死量
（LD50）を示した。A51568因子ＡおよびＢは
類似の構造を有するので、A51568因子Ａも同
様に比較的非毒性であると考えられる。さらに
本発明の抗生物質は市販の抗生物質バンコマイ
シンと緊密な構造上の関連性を有するので、本
発明の抗生物質は、医薬用途に適さない程の毒
性を有しないと考えられる。 本発明は、その一側面として、ヒトまたは動
物に抗生物質A51568因子ＡもしくはA51568因
子Ｂまたはその製薬上許容される塩を抗生物質
として有効な非毒性量、約25mg〜約２，000mg
投与することを特徴とするヒトまたは動物にお
ける感染症を治療する方法を提供する。 ヒトにおける感染症を治療する際にには、本
抗生物質を非経口投与する（例えば、筋肉注
射、静脈内注入など）。注射の場合には、本抗
生物質またはその製薬上許容される賦形剤を加
えて所望の濃度にしたものを投与する。適当な
賦形剤としては、例えば、注射用水、0.9％食
塩水、５％デキストローズ、リンガー溶液また
は他の汎用される賦形剤が例示される。静脈内
注入で投与する場合は、本抗生物質またはその
塩を適当な濃度（例えば、約５％〜約10％）の
生理液または希栄養液とし、それをゆつくり注
入すればよい。または、本抗生物質を“ピギ
ー・バツク（piggy−back）”法で投与しても
よい。 本抗生物質またはその製薬上許容される塩
は、密封バイアル、滅菌したゴム栓付きバイア
ルまたはプラスチツクの袋中で単位投与剤型と
し得る。この単位投与剤型は、抗酸化剤、溶解
剤、拡散剤、緩衝剤などの添加剤を含有しても
よい。ある上記単位投与剤型は、ゴム（ブチル
ゴム）栓付きバイアル中にA51568因子Ａもし
くはＢまたはその製薬上許容される非毒性塩
100mgを含有する。また別の単位投与剤型は、
滅菌密封バイアル中に抗生物質A51568因子Ａ
もしくはＢまたはその塩250mgを含有する。静
脈内注入の場合は、本発明の単位投与剤型はプ
ラスチツクの袋中に抗生物質A51568因子Ａも
しくはＢまたはその製薬上許容される塩５ｇを
含有する。 抗生物質A51568因子ＡまたはＢを抗微生物
剤として用いる場合、経口的にも非経口的にも
投与できる。当業者は明らかなように、抗生物
質A51568因子ＡまたはＢは通常製薬上許容さ
れる担体または賦形剤と共に投与する。抗生物
質A51568因子ＡまたはＢの投与量は、例えば、
治療すべきある特定の感染症の性状および重症
度などの種々の考慮すべき事項に依存する。当
業者には公知なように、投与した投与量範囲お
よび／または単位投与量は、患者または宿主お
よび感染菌などの要因と共に、本明細書で提示
したMIC値およびED50値を考慮して決定すれ
ばよい。 抗生物質A51568因子ＡまたはＢは、特に、
スタフイロコツカス、ストレプトコツカスおよ
びプロピオニバクテリウム・アクネス菌の増殖
を抑制するのに有効であるので、例えば、にき
びの治療に用い得る。A51568因子ＡおよびＢ
の精製物は、皮膚に適用する場合は、イソプロ
ピルアルコールなどの製薬上許容される賦形剤
中に製剤化することができる。この溶液中の抗
生物質濃度は、約１〜約15重量／容量％をとり
得る。または、皮膚に適用するに際して、クリ
ームまたはローシヨンに仕上げることもでき
る。 A51568因子ＡおよびＢは、腸管において偽
膜大腸炎を誘発するクロストリジウム・ジフイ
シレ菌の増殖を抑制するものにも有用である。
従つて、A51568因子ＡおよびＢは、製薬上許
容される投与剤型に調製した当該抗生物質また
はその製薬所許容される非毒性塩の有効量を経
口投与することにより、偽膜大腸炎の治療に用
いることができる。このような用途には、
A51568因子ＡおよびＢをゼラチンカプセルま
たは液体懸濁液にして投与することもできる。 A51568因子ＡおよびＢは、これまで末記載
のノカルジア・オリエンタリスNRRL15232ま
たはA51568を生産するその変異株を、同化し
得る炭素源、窒素源および無機塩を含有する培
養培地中で深部通気発酵の条件下にて実質量の
抗生物質活性が得られるまで培養することによ
り製造する。大部分の抗生物質活性はブロスに
存在するが、菌糸体にも若干関係しているよう
である。本抗生物質は、菌糸体、即ち、生体の
固まりを去することにより発酵液から非常に
容易に分離したのち、液から、好ましくは適
当な溶離剤を用いた適当な吸着剤によるカラム
クロマトグラフイーにより単離する。 適当な吸着剤としては、炭素、陰イオンおよ
び陽イオン交換樹脂、ポリアミド、カルボキシ
メチルセルロース、スチレンおよびジビニルベ
ンゼンの多孔質共重合体（Daiaion HP−20，
Amberlite XAD樹脂、デキストランを重度に
連結させてできる親水不溶性分子ふるいクロマ
トグラフイー培体のようなDuolite樹脂など）
ならびにTSKゲル類などが例示される。
Daiaion樹脂は三菱化成工業株式会社（東京，
日本）の製品である。Amberlite XAD樹脂は
Rohm and Hass（Philadel−phia，
Pennsylvania）が製造している。Duolite樹脂
はDaiamond Shamrock（Redwood City，
California）の製品である。Sephadex樹脂は
Pharmacia Fine Chemicals AB（Uppsala，
Sweden）が製造している。TSKゲル類は、E.
Merck（Darmstadt，Germany）およびBio−
Rad，（2200Wright Ave.，Richmond，
California，94804）から入手できる。 ノカルジア・オリエンタリスNRRL15232で
A51568因子ＡおよびＢを製造するのに用い得
る培地は多種類である。しかし、生産の経済
性、至敵収率および生産物の単離し易さの点か
ら、ある特定の培地が好ましいものとなる。こ
の培地は同化し得る炭素源、窒素源および無機
塩を含有しなければならない。好ましい炭素源
としては、ポテト・デキストリン、ブラツクス
トラツプ糖蜜、グルコース、スクロース、ラク
トース、マルトースおよびデンプンなどが例示
される。炭素源の至適濃度は約２〜約５重量％
である。 好ましい窒素源としては、グルタミン酸ナト
リウム、肉ペプトン、硝酸ナトリウム硫酸アン
モニウム、硫酸アンモニウム、大豆粗粉および
酵母などが例示される。 微生物を増殖生育させるのに必要な微量必須
元素は、微生物の増殖および生合成の要求に見
合うだけの量は培地の他の成分中に不純物とし
て存在する。しかし、培養培地中に、ナトリウ
ム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、ア
ンモニウム、塩素、炭素、リン酸、硫酸、硝酸
などのイオンを生じ得る可溶性栄養素無機塩を
更に添加するのは有益である。 発泡が問題となる場合は、大量発酵培地にプ
ロピレングリコールなどの消泡剤を少量（即
ち、0.2ml／）加える必要がある。 少量のA51568因子ＡおよびＢはフラスコ振
盪培養を得ることができるが、実質量の本抗生
物混合物を製造するにはタンク内での深部通気
発酵が好ましい。タンク発酵の場合は、増殖期
の接種物を用いるのが好ましい。この増殖期の
接種物は少量の培養培地に胞子型または菌糸体
フラグメントを接種して新しい活発に増殖する
菌株を得ることにより製造される。この増殖期
に接種物を、次いで大型タンクに移して適当な
時間培養すると、抗生物質A51568混合物が最
大収率で製造される。 培養培地への接種物を得る別法は、胞子の水
性懸濁液の代わりに凍結乾燥ペレツトを用いる
方法である。凍結乾燥ペレツトは当該分野で知
られた方法で製造する。凍結乾燥に供する胞子
懸濁液の製造は、滅菌蒸留水の代わりに滅菌牛
血清を用いる事以外は、胞子の水性懸濁液の製
造と同様である。 NRRTL15232は約25〜約37℃の広い温度範
囲で増殖し得る。抗生物質A51568混合物を最
も良く生産するのは約32〜34℃である。 深部通気培養工程で通常そうであるように、
培養培地の隅々まで滅菌空気を拡散させる。当
該菌を効率良く増殖させるために、約100〜約
300rpmの撹拌下でのタンク生産に用いる空気
量は、１分間当り培養培地容量に対して約0.1
〜約0.25容量（ｖ／ｖ／分）の範囲内である。
100の発酵培地を入れた165容の容器におけ
る至適量は、約200rpmで回転するインペラー
（impeller）で撹拌した場合、約0.15（ｖ／ｖ／
分）である。 抗生物質活性は、発酵期間のうち、通常は約
24時間後に存在し、少なくとも約168時間は残
存している。抗生物質の生産は、約90時間〜約
114時間の発酵時間に最大となる。 本抗生物質混合物の生産を増加させるため
に、ｐ−ヒドロキシフエニルグリシンを５×
10-3Mの濃度で培地に加えてもよい。この添加
によりある実験では生産性が64％増加した。 生産性はリン酸塩の濃度にも影響される。リ
ン酸塩を極少量３×10-4M（0.05mg／ml）だけ
濃くすると、ある実験では収率が20％低下し
た。 本抗生物質活性は上清に存在する。試料とし
てブロスの試料全部を1000ｇで約15分間遠心分
離し、沈渣を測定用に取出す。測定はマイクロ
コツカス・ルテウス（Micrococcus luteus）
ATCC9341を用いた寒天ウエル・プレート
（wellplate）・テストにより微生物学的に行う。 抗生物質A51568混合物の生産は、発酵の間
バチルス・ズブチリス（Bacillus subtillis）
ATCC6633を用いた寒天拡散法またはスタフイ
ロコツカス・アウレウスATCC9114を用いた濁
り測定法で追跡できる。 従つて、本発明の別の側面は、ノカルジア・
オリエンタリスNRRL15232またはA51568を生
産するその変異株を、同化し得る炭素源、窒素
源および無機塩を含有する培養培地中で深部通
気発酵の条件下にて実質量の抗生物活性が得ら
れるまで培養することを特徴とする前記式
（）の抗生物質の製造法を提供することであ
る。 本発明の実施方法をより充分に例示するため
に、以下に実施例を提示する。 実施例 １ 第１段階の接種物の製造 ノカルジア・オリエンタリスNRRL15232の
寒天スラント培地用に次の培地を製造した。 成 分 量（ｇ／） 前煮沸オートミール 60.0 酵 母 2.5 K2HPO4 1.0 ツアペツクのミネラル・ストツク 5.0（ml／） 寒 天 25.0 脱イオン水 全量を１とする量 ツアペツクのミネラル・ストツクは以下の成分
で製造する。 成 分 量（ｇ／100ml） KCl 10.0 MgSO4・7H2O 10.0 FeSO4・7H2O 0.2 脱イオン水 全量を100mlとする量 殺菌前のPHは6.2。水酸化ナトリウム水溶液
でPH7.3に調整。殺菌後のPHは6.7 ノカルジア・オリエンタリスNRRL15232の
胞子は、上述の成分で製造した寒天スラントに
接種し、７日間、約30℃で培養した。成熟スラ
ント培地を滅菌蒸留水で包い、滅菌用具で掻き
取つて胞子または菌糸体を緩めた。得られた胞
子懸濁液１mlを以下の組成を有する培殖培地50
mlに接種するのに用いた。 成 分 量（ｇ／） ポテト・デキストリン 30.0 糖蜜、ブラツクストラツプ 20.0 バクトーペプトン（DifcoLaboratories） 7.0 Ｌ−チロシン 1.0 脱イオン水 全量を1.0とする量 混合物のPHは5.5。これを殺菌前に水酸化ナ
トリウム水溶液でPH7.0に調整した。殺菌後の
PHは6.1 この増殖期にある接種物を、直径２インチの
アーク（arc）により250rpmで回転する振盪器
上で約30℃、約48時間、250ml容の広口エーマ
ンマイヤー・フラスコ中で培養した。この培養
した培地を小さな発酵槽に接種する（接種物は
培地の0.8容量％にする）か、または大量の菌
糸体を生産するための第２段階のフラスコに接
種するのに用いる。 A51568.1の発酵 生産培地100に上記で得た培養済の培養培
地0.8％（800ml）を接種した。生産培地の組成
は次のとおりであつた。 成 分 量（ｇ／） ポリプロピレングリコール（2000） 0.2 ポテト・デキストリン 30.0 ブラツクストラツプ糖蜜 20.0 バクト−ペプチン（Difco Laboratories） 7.0 Ｌ−チロシン 1.0 脱イオン水 全量を100とする量 培地のPHは5.2。これを5N水酸化ナトリウム
水溶液で7.1に調整し、121℃、17〜19psiで45
分間滅菌した。滅菌後の培地のPHは6.2。 接種した生産培地を165容の発酵タンク中
で、30℃にて約114時間発酵させた。この発酵
培地に0.15（ｖ／ｖ／分）の速度にて滅菌空気
を通気して、汎用される撹拌器により約
200rpmで撹拌した。 本抗生物質活性は発酵液の上清に存在する。
全ブロス試料を1000ｇで遠心分離し、デカント
して残つた沈渣を測定に供して抗生物質活性を
調べた。これをPH6.0のリン酸緩衝液で希釈し
て、マイクロコツカス・ルテウスATCC9341菌
株測定法で用いた寒天ウエル・プレート・テス
トで微生物学的に測定する。 実施例 ２ 抗生物質A51568混合物の単離 因子ＡおよびＢをおよそ95：５の比率で含有
する抗生物質A51568全発酵ブロス３に過
助剤（Hyflo Supercel，ケイソウ土，Johns−
Manville，Corp.）を加えて過した。液は
2.7であり、PHは7.8であつた。この液を、
３×25cmのクロマトグラフイー・カラムに詰め
たDaiaionHP−20樹脂（多孔質、ベツト型の
スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、三菱化
成工業株式会社、東京、日本）に通じた。流出
液を廃棄しカラムを水１および25％メタノー
ル水溶液500mlで洗浄した。抗生物質A51568混
合物は、50％メタノール水溶液500mlづつでカ
ラムを２回洗浄して流出させた。因子Ａおよび
Ｂは同様にHP−20に吸着し、同一条件で溶出
する。従つて、本工程では因子は分離できなか
つた。流出した分画の抗生物質活性をB.ズブ
チリスを用いて測定した。より活性な分画を少
量まで濃縮し、凍結乾燥して、因子ＡおよびＢ
をおよそ95：５の比率で含有する粗製の抗生物
質A51568混合物905mgを得た。 実施例 ３ 抗生物質A51568混合物の精製 上記実施例２で得た粗製の抗生物質A51568
混合物（905mg）を水50mlに溶解し、1.7×44cm
のクロマトグラフイー・カラムに詰めた
Sephadex CM−25（NH4 +サイクル）
（Pharmacia Fine Chemicals AB，Uppsala，
Sweden）に通じた。流出液を廃棄し、カラム
を水250mlで洗浄したのち炭酸水素アンモニウ
ムの中高のグラデイエント（H2O→1M
NH4HCO3，100ml混合チエンバー）で溶出し
た。25mlづつ50分画採取し、B.ズブチリス測
定法を用いて抗生物質活性を調べた。 活性分画、即ち、抗生物質活性を有する分画
を合した。Sephadex CM−25を用いた場合、
因子Ａおよび因子Ｂは別々に吸着され溶出する
ので、因子Ａに富む分画は因子Ｂに富む分画と
一致しなかつた。混合物中に存在する因子Ｂの
量は因子Ａの量より少なかつたので、因子Ｂに
富む分画は因子Ａに富む分画より比較的低い抗
生物質活性を示した。合した分画は因子Ｂを殆
んど含んでいなかつた。生成物を脱塩するため
に、予め水中で平衡化したDaiaion HP−20樹
脂を詰めた1.7×10cmクロマトグラフイー・カ
ラムに上記の合した分画を通じ、カラムを水
200mlで洗浄して50％メタノール水溶液100mlで
溶出した。メタノール溶出液を蒸発乾固し、残
渣を少量の水に溶解して0.1N塩酸で酸性化し
た。これを凍結乾燥して精製された抗生物質
A51568因子A25mgを得た。 因子Ｂを単離するために，B.ズブリチスを
用いた測定法の代わりにHPLC側定法を用いて
実施例３の方法を行つた。これは、B.ズブリ
チスを用いた測定法では因子ＡおよびＢを分別
できないので必要な行程である。HPLC測定法
を用いれば、因子Ａに富む分画と因子Ｂに富む
分画を各々同定して別々に採取できる。この
別々に採取された物を実施例３の最終工程のよ
うにして脱塩して因子Ａに富む生産物と因子Ｂ
に富む生産物を得る。 実施例 ４ A51568因子ＡおよびＢの単離精製と分離 A51568の全ブロスから因子ＡおよびＢの
A51568混合物を分離するために、全ブロスを
Hyflo Supercelで過した。液を5NHClで
PH6.0〜6.5に調整したのち、Ionac Ｘ−236樹
脂（H+）を加えて（液100当り樹脂４），
活性物を吸着させるために撹拌した。上清を廃
棄し、樹脂を水（樹脂の10倍容）で洗浄した。
洗液を廃棄したのち、このＸ−236樹脂をカラ
ムに充填して0.1N塩化アンモニウム（カラム
の５倍容）で溶出し、４分の分画を直ちに
5NHClで中和した。抗生物質活性は、S.アウ
レウスおよびHPLCで追跡した。A51568因子
ＡおよびＢを含有する分画を合して、脱塩する
ためにDaiaionHP−20樹脂を詰めたカラムに
通じた。流出液を廃棄し、樹脂を0.1％H3PO4
を含有する５％イソプロピルアルコールで溶出
した。500ml分の分画を採取し、抗生物質活性
を調べた。活性分画を合し、濃縮して凍結乾燥
した。得られた不純な物質は、A51568因子Ａ
を95％およびA51568因子Ｂを５％含有してい
た。 生成物を更に精製し同時に因子ＡおよびＢに
分離するために、上記の因子ＡおよびＢの不純
な混合物を水に溶解し、CM−Sephadex Ｃ−
25を詰めたカラムに通じて水と
0.25NNH4HCO3の線型グラジエントで溶出し
た。分画をHPLCで調べて因子Ａを含有する分
画を因子Ｂを含有する分画と別々に採取した。 前工程で付加した塩を除去する為に、各々の
採取物をDaiaion HP−20樹脂を詰めたカラム
に通じて、0.1％H3PO4を含有する５％イソプ
ロピルアルコールで溶出した。各々のカラムに
ついてHPLC測定法に基いて適当な分画を採取
した。２つの採取物を濃縮し凍結乾燥して実質
的に純粋なA51568因子Ａおよび実質的に純粋
なA51568因子を各々得た。
物、ノカルジア・オリエンタリス（Nocardia
orientalis）NRRL15232またはA51568を産生す
るその変異株（mutantまたはvariant）を深部通
気発酵の条件下で培養することにより製造され
る。本明細書中でA51568因子ＡおよびＢと称す
る抗生物質に関する。ノカルジア・オリエンタリ
スNRRL115232は通常A51568因子ＡおよびＢの
およそ95：５混合物を生成する。上記抗生物質は
病原性微生物、特に、ペニシリン耐性のグラム陽
性菌であるスタフイロコツカス属およびストプト
コツカス属の菌の増殖を抑制する。 非常に多くの微生物が病原性を有し、ヒトおよ
び動物の疾病誘因物質である。多年に亘り、病原
性微生物に対して有効な非常に多数の抗生物質が
開発されてきた。しかし、これらの病原微生物に
より引き起こされるヒトまたは動物の疾病をより
良く治療するために前記微生物に対して更に有効
な薬剤の開発が今なお望まれている。 抗生物質A51568印紙ＡおよびＢはグリコペプ
タイド系抗生物質に属する抗グラム陽性菌抗生物
質である。 当該分野で既に知られているグリコペプタイド
系抗生物質としては、特に、バンコマイシン
［McCormick et al.、アメリカ合衆国特許No.
3067099（1962年12月４日）。Williamson et al.、
J.Am.Chem.Soc.103、6580−6585（1981）に構造
記載。］、アクタプラニン（抗生物質Ａ−4696）
［Hamill et al.、アメリカ合衆国特許No.3952095
（1976年４月20日）。Debono、アメリカ合衆国特
許No.4322343（1982年３月30日）に部分構造記載］、
リストセチン［イリギス特許No.765886（1957年）。 Kalman et al.、J.Am.Chem.Soc.102、897−
905（1980）にリストセチン複合体の中の１因子、
リストセチンＡの構造記載。］，アボパルシン
［Kunstmann et al.、アメリカ合衆国特許No.
3338786（1967年８月29日）。Ellestand et al.、J.
Am.Chem.Soc.103、6522−6524（1981）に構造記
載。］が例示される。 本発明は、特に、構造式（）で表わされる単
離抗生物質もしくはその製薬上許容される塩また
はこれらのいづれかを主成分として含有する抗生
物質混合物を提供する。ここで、ｎが１の場合の
式（）の抗生物質をＡ−51568因子Ａと表わし、
ｎが２の場合をＡ−51568因子Ｂと表わす。 ［式中、ｎは１また２を表わす］ 抗生物質A51568因子Ａは白色無定形固体であ
る。抗生物質A51568因子のＡの元素分析は以下
のおおよそのパーセント組成を示す。 Ｃ、50.63％；Ｈ、5.07％；Ｎ、8.36％； Cl、8.19％；Ｏ、25.16％ 当該抗生物質の分子量は、フアスト・アトム・ボ
ンバードメント・マス・スペクトル（fast−
atom−bombardment mass spectrometry）に
よれば約1435である。 抗生物質のA51568因子Ａのプロトン核磁気共
鳴スペクトルは、ジメチルスルホキシド中60℃、
360MHzで測定した。構造式中の幾つかある６員
環を次式に示すようにアルフアベツトを付して識
別する。 化学シフト（ppm）の一覧は次の第１表に示す
とおりである。 【表】 【表】 ※ 不明
抗生物質A51568因子Ａのプロトン核磁気共鳴
スペクトルは、バンコマイシンのものと非常に類
似している。測定によりみられる主たる顕著な相
異点は、A51568のスペクトルにはＮ−（メチル）
ロイシンに関連したＮ−CH3共鳴が存在しないこ
とである。従つて、バンコマイシンのプロトン
NMRスペクトルは、A51568因子Ａのプロトン
NMRスペクトルにはみられない。239ppmにお
けるメチルの一重線を有する。 分子量、プロトンに核磁気共鳴スペクトル・デ
ーターおよび元素分析に基けば、A51568因子Ａ
の実験式はC65H73Cl2N9O24である。 抗生物質A51568因子Ａの66％ジメチルホルム
アミド水溶液中での電位差滴定によれば、pKa値
としてN62、88、103および12.85（開始PH＝6.12）
を示した。 抗生物質A51568因子Ａは次のような特異的旋
光を示す。［ａ］25℃ Ｄ＝−20.4°（ｃ＝10mg／ml，
水）、［ａ］25℃ 365＝−33.6°（ｃ＝10mg／ml，水）。 抗生物質A51568因子ＡのKBrペレツトにおけ
る赤外線吸収スペクトルは添付の第１図に示すと
おりである。その認識し得る吸収極値としては次
の値が観察される。3400（巾広，強）、3380（巾，
強）、1657（巾、強）、1587（やや強）、1505（やや
強）、1424（中程度）、1396（中程度）、1328（巾広，
弱）、1310（巾広，弱）、1231（やや強）、1174（弱）
、
1156（弱）、1128（中程度）、1062（やや強）、1028
（弱）、1015（弱）、990（弱）、882（弱）、881（弱
）cm
-1。 抗生物質A51568因子Ａの水中における、酸性、
中性および塩基性条件下での紫外線吸収極値を、
次の第２表に記載する。 第 ２ 表 抗生物質A51568因子ＡのUVスペクトル 酸性または中性 塩基性極値nm（ε） 極値nm（ε） 278（5500） 302（6000） 234（肩）（25000） 264（肩）（10000） 抗生物質A51568因子Ｂ（式においてｎ＝２）
は白色無定形固体である。A51568因子Ｂの分子
量はフアスト・アトム・ボンバードメント・マ
ス・スペクトルによれば約1437である。 抗生物質A51568因子Ｂのプロトン核磁気共鳴
スペクトルは、ジメチルスルホキシド中60℃、
360MHzで測定した。構造式中の幾つかある６員
環を次式に示すようにアルフアベツトを付して識
別する。 化学シフト（ppm）の一覧は、次の第３表を示
すとおりである。 【表】 【表】 ※ 不明
抗生物質A51568因子Ｂのプロトン核磁気共鳴
スペクトルは、バンコマイシンおよびA51568因
子Ａのものと非常に類似している。測定によりみ
られる主たる顕著な相異点は、バンコマイシンの
スペルトルにみられるＮ−（メチル）ロイシンに
関連したＮ−CH3共鳴ならびにバンコマイシンお
よびA51568因子Ａのスペクトルにみられるアス
パラギン共鳴が存在しないことである。バンコマ
イシンおよびA51568因子Ａにみられるアスパラ
ギン共鳴がA51568因子Ｂではグルタミン共鳴に
置き換わつている。 マス・スペクトル・データー、プロトン核磁気
共鳴スペクトル・データーおよび対応する
A51568因子Ａのデーターとの比較に基けば、抗
生物質A51568因子Ｂの実験式はC65H73Cl2N9O24
である。 因子ＡおよびＢを含有する抗生物質A51568混
合物はこれまで末記載の株、ノカルジア・オリエ
ンタリスNRRL15232を培養することにより製造
する。 本発明は、更に、これまで末記載の株、ノカル
ジア・オリエンタリスNRRL15232およびその生
物学的に純粋な菌株に関する。簡便するために、
ノカルジア・オリエンタリスNRRL15232の生物
学的に純粋な培養菌をA51568.1菌株と称する。 A51568.1菌株は、A51568菌から自然選択によ
り誘導される変異株である。このA51568菌は、
最初はメキシコのユカタンで採取した土壌試料か
ら単離した。 A51568.1菌株は、刊行物中のノカルジア属に
関する記載との比較と同時に実験的な比較からノ
カルジア・オリエンタスの菌株として分類され
る。上記刊行物とは、D.Berd、
“LaboratoryIdentification of Clinically
Important AerobicActinomycetes”、Appl.
Microbiol.25(4)、665−681（1973）；Bergey′s
Manual of Determinative Bacteriology、8th
Edition.R.E.Buchanan and N.E.Gibbons編集
（The Williams and Wilkins Co.、
Baltimore）；R.E.Gordon et al.、“Nocardia
coeliaca、Nocardiaautotrophia、and the
Nocardin Strain”、Int.J.Syst.Bacteriol.24(1)、
54−63（1974）；R.E.Gordon et al.、“Resistance
to Rifampin and Lysozyme of Strains of
some Species of Mycobacterium and
Nocardia as ａ Taxomic Tool′、Int.J.Syst.
Bacteriol.27(3)，176−178（1977）；S.A.
Waksman、The Actino−mycetes Vol.、
［The Williams and WiIkins Co.、Baltimore
（1961）］；R.E.Gordon et al.、“Some Bits and
Pieces of Genus Nocardia：N.carnea、N.
vacinii、N.transvalensis、N.orietalis、and N.
aerocolonigenes“、J.Gen.Microbiol.109、69−
78（1978）；S.J.Mishra et al.、”Identification
of Nocardiae and Streptomycetes of Medical
Importance”、J.CIin.Microbiol.11（６）、728−
736（1980）；Pittenger et al.、“Streptomyces
orientalis、n.sp.、the Source of
Vancomycin”、Antibiot.and Chemoth.
（）、642−647（1956）である。 Gordon et al.、“Nocardia coeliaca、
Nocardia autotrophia、and the Nocardin
Stain”、Int.J.Syst.Bacteriol.24(1)、54−63
（1974）に記載されているようなノカルジア種の
特徴付けに適した方法であると同時に、Shirling
and Gottlieb、“Methods of Characterization
of Streptmyces Species”、Int.J.Syst.Bacteriol.
16(3)，313−340（1966）に記載されているような
ストレプトマイセス種の特徴付けにインターナシ
ヨナル・ストレプトマイセス・プロジエクト
（ISP）が適しているとする方法または手段は次
のとおりであつた。 A51568.1菌株の特徴 形 態 A51568.1菌株は広範囲に基底および気中菌糸
体を生産する。光学顕微鏡下で観察すると、気中
菌糸はクモの巣様である。深部振盪条件下で増殖
させると、菌糸は短い菌糸体フラグメントに分壊
する。 気中菌糸を光学顕微鏡下で観察すると分生胞子
は観察されなかつたが、走査電子顕微鏡下では観
察される。この特徴は、A51568.1菌株をISP培地
No.５および水道水寒天培地で増殖させると観察さ
れる。胞子表面の状態は滑らか（Sm）である。
胞子の形状は球形〜円筒状であり、胞子は少量、
不規則に生成する。この形態は、バージーズ・マ
ニユアル（同上）の記載に従えば、非ストレプト
マイセス金属に分類される。 培養上の特徴 A51568.1菌株は、酵母−デキストローズ寒天
培地および他の多くの寒天培地上でよく増殖し、
その増殖は、しわ状あるいは薄片状になることも
あつた。全体色が灰色系（GY）あるいは時々は
白色系（Ｗ）である胞子を有する気中菌糸体を豊
富に産出した。TresnerとBackus系［Tresner
and Backns、“System of Color Wheels for
Streptomycete Taxonomy”、Appl.Microbiol.
11、335−338（1956）参照］における灰色系で最
も類似した色タブ（tab）はｄ明灰色〜2dc黄灰
色である。 気中での増殖は、典型的なストレプトマイセス
属はど密でも長くもない。この気中での増殖は、
無機塩−デンプン寒天培地（ISPNo.４），グリセ
リン−アスパラギン寒天培地（ISPNo.５）および
グリセリン−グリシン寒天培地上でみられるが、
酵母−麦芽エキス寒天培地（ISPNo.２）上で最も
よく観察される。 次の寒天培地上では、裏面に独特の暗褐色が観
察される。ISPNo.２、ISPNo.５，チロシン寒天培
地（ISPNo.７）およびグリセリン−グリシン寒天
培地。この色はPHにより影響されない。上記の培
地中ならびにツアペツクの溶液寒天培地中および
グルコースーアスパラギン寒天培地中では、明〜
赤褐色の可溶性色素も産生される。他の培地中で
のA51568.1菌株の裏面色は黄褐色である。 変化性をプレートで調べると、A51568.1菌株
はコロニーの混在型を示さなかつたので、安定し
た単離株である。 種々の培地上でノカルジア・オリエンタリス
ATCC19795と比較したA51568.1の培養上の特徴
を次の第４表に示す。 色名は、ISCC−NBS Centroid Color Charts
Sample No.2106（National Bureau of
Standards、U.S.Department of Commerce、
1958）およびthe Color Harmony Manual、4th
Edition（Color Standards Depart−ment、
Container Corporantion of America，
Chicago、Illinois、1958）に従つて表わした。 【表】 【表】 細胞壁に関する知見 加水分解したA51568.1菌株の全体細胞を用い
て、M.P.Lechevalier，“Identification of
Aerobic Actinomycetes of Clinical Im−
portance”，J.Lab.Clin.Med.71，931−944（1968）
のクロマトグラフイー法により、特性表示となる
糖類としてどのような糖類が存在するかを調べ
た。 加水分解した全体細胞を用いて、Becker et
al.，Appl.Micrbiol.11，421−423（1964）の方法
に従つて、ジアミノピメリン酸の異性体を測定し
た。 上記に関する試験結果を以下に示す。 【表】 上記の結果はＡ型の全体細胞糖パターンおよび
型の細胞壁を示し、主細胞壁成分のこの組合せ
はノカルジア属であることを示す。M.P.
Lechevalier（同上）参照。 全体細胞のメタノリシス物の薄層クロマトグラ
フイーを用いて、D.E.Minnikin et al.、
“Differentiation of Mycobacterium，Nocardi、
and Related Taxa by Thin−layer
Chromatographic analysis of Whole−
organism Methanolysates”、J.Gen.Microbiol.
88，200−204（1975）に記載の方法に従えば、ミ
コリン酸のメチルエステルは観察されなかつた。 上記の測定に加えて、A51568.1菌株をN.オリ
エンタリス関連の21株に関する刊行物中のデータ
ーならびにNRRL2451，NRRL2452および
ATCC19795と比較して調べた。培養上、形態上
および生理学上の特徴の比較を次の第５表に記載
する。 【表】 【表】 更に、A51586.1，NRRL2451，NRRL2452お
よびATCC19795菌株による炭水化物からの酸産
生をN.オリエンタリス関連の21株に関する刊行
物中の結果と比較した。これを次の第６表に記載
する。 【表】 A51568.1について観察した培養上、形態上お
よび生理学上の特徴により、R.E.Gordonet.al.
“Some Bits and Pieces of the Gemus
Nocardia：N.carnea，N.vaccinii、N.trans−
valensis、N.orientalis，andN.aerocoloni−
genes”、J.Gen.Microbiol.109、69−78（1978）お
よびS.J.Mishra et al.、”Identification of
Nocardia and Streptomycetes of Medical
Importance”，J.Cin，Microbiol.11(6)、728−736
（1980）に記載されているようなノルカジア属の
14種に関する記載と比較した。また、これと同時
に、A51568.1菌株とNRRL2451、NRRL2452お
よびATCC19755菌株とを実験的に比較した。 ここで、類似度係数を次式から計算した。 Ｓ＝［Ns+＋Ns-］／［Ns+＋Ns-＋Nd］×100 ［式中、Ns+＝陽性類似点の数 Ns-＝陽性類似点の数 Nd＝非類似点（相異点）の数］ W.A.Kurylowicz et al.、“Numerical Taxo−
nomy of Streptomycetes”、Polish
MedicalPublisher、，Warsaw（1975）参照。 類似度係数を計算するには、主に生理学上の特
徴を用いた。比較は、A51568.1菌株に対して他
の全ての株を観察することにより行つた。従つ
て、A51568.1自体の係数は100となつた。この比
較を次の第７表に記載する。 【表】 A51568.1菌株とN.オリエンタリスATCC19795
との類似点および相異点を次の第８表に示す。 第 ８ 表 A51568.1菌株とATCC19795菌株との類似点お
よび相異点 類 似 点 相 異 点 炭水化物から酸性成気中菌糸
数種の培地での培養上の特徴 カタラーゼ産成 気中菌糸体色 細胞壁−型 裏面色 分生胞子存在 可溶性色素産生 培養上の特徴 キサンチンの分解 分 解 Nacl耐性 カゼイン 硝酸還元 DNA ノボビオシンへの耐性類似点 ヒポキサンチン チロシン 菌糸体の分裂 ゼラチン液化 加水分解 エスキユリン 馬尿酸塩 脱脂乳 デンプン アデニンの分解不能 メラノイド色素産生無 形 態 フオスフアターゼ産生 耐 性 リゾチーム ペニシリン リフアンピン バシトラシン感受性 胞子の形状類似点 胞子の表面状態 染色反応 全体細胞の加水分解物の糖パターンＡ型 50℃、８時間後に生存 温度範囲（10−40℃） ウレアーゼ産生有機化合物の利用 CSM培地での生育増殖 A51568.1菌株は、the Northern Regional
Research Center、U.S.Department of Agri
−culture、Agricultural Research Service、
Peoria、Illinois 61604に寄託され、保存菌株
の一部となつており、NRRL15232の番号の下
に誰でもそこから入手できる。本微生物はブダ
ペスト条約に基づく国際寄託として、アグリカ
ルチヤラルリサーチカルチヤーコレクシヨン
（NRRL）に寄託されている（受託日：1982年
11月29日）。 抗生物質A51568因子ＡおよびＢの製薬上許
容される非毒性塩も本発明の一部である。“製
薬上許容される”塩とは、温血動物に対する全
体としての化合物の毒性が非塩型と比較して増
加しない塩である。抗生物質A51568因子Ａお
よびＢの代表的で適当な塩としては、有機およ
び無機酸（例えば、硫酸、リン酸、塩酸、酢
酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、
フマル酸など）と常法で反応させて製造する酸
付加塩ならびにカルボキシル基から強塩基（例
えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭
酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化アンモニ
ウム、ジエタノールアミン）などにより製造す
る塩が銃含される。 種々の細菌に対する抗生物質A51568因子Ａ
の活性を寒天希釈法で測定して、最少阻害濃度
（MIC）値を記載した次の第９表に示す。 【表】 【表】 多数の好気性菌に対する抗生物質A51568因
子ＡおよびＢの生体外系での活性を標準的寒天
希釈測定法を用いて測定した。24時間後を終了
点として読み取ることにより測定した結果を次
の第10表に記載する。 【表】 抗生物質A51568因子ＡおよびＢを試験して、
次の第11表を示すように、多数の嫌気性菌に対
して活性であることが分つた。ここでMIC値
は、寒天希釈法により測定した。 【表】 【表】 抗生物質A51568因子Ａは、寒天希釈法での
測定によれば、クロストリジウム・ジフイシレ
の多数の株に対しても活性である。本試験の結
果を次の第12表に記載する。 【表】 抗生物質A51568因子ＡおよびＢは、生体内
系において実験的細菌感染症に対する抗微生物
活性を示した。被験化合物の二種の用量を例と
なる感染症に罹つたマウスに皮下投与した場合
に得られる活性をED50〔被験動物の50％を保護
するのみ有効な投与量（mg／Kg）、Warren
Wick et al.、J.Bacteriol.81、233−235（1961）
参照〕で測定した。抗生物質A51568因子Ａお
よびＢのED50値は以下の如くである（単位は
mg／Kg×２）。 Ａ Ｂ スタフイロコツカス・アウレウス 3055
1.79 2.5 ストレプトコツカス・ピオゲネスＣ 203
3.03 7.94 ストレプトコツカス・ニユーモニアエ・パーク
2.71 2.5 また、抗生物質A51568因子Ｂはマウスに関
して、＞300mg／Kg（腹腔内投与）の50％致死量
（LD50）を示した。A51568因子ＡおよびＢは
類似の構造を有するので、A51568因子Ａも同
様に比較的非毒性であると考えられる。さらに
本発明の抗生物質は市販の抗生物質バンコマイ
シンと緊密な構造上の関連性を有するので、本
発明の抗生物質は、医薬用途に適さない程の毒
性を有しないと考えられる。 本発明は、その一側面として、ヒトまたは動
物に抗生物質A51568因子ＡもしくはA51568因
子Ｂまたはその製薬上許容される塩を抗生物質
として有効な非毒性量、約25mg〜約２，000mg
投与することを特徴とするヒトまたは動物にお
ける感染症を治療する方法を提供する。 ヒトにおける感染症を治療する際にには、本
抗生物質を非経口投与する（例えば、筋肉注
射、静脈内注入など）。注射の場合には、本抗
生物質またはその製薬上許容される賦形剤を加
えて所望の濃度にしたものを投与する。適当な
賦形剤としては、例えば、注射用水、0.9％食
塩水、５％デキストローズ、リンガー溶液また
は他の汎用される賦形剤が例示される。静脈内
注入で投与する場合は、本抗生物質またはその
塩を適当な濃度（例えば、約５％〜約10％）の
生理液または希栄養液とし、それをゆつくり注
入すればよい。または、本抗生物質を“ピギ
ー・バツク（piggy−back）”法で投与しても
よい。 本抗生物質またはその製薬上許容される塩
は、密封バイアル、滅菌したゴム栓付きバイア
ルまたはプラスチツクの袋中で単位投与剤型と
し得る。この単位投与剤型は、抗酸化剤、溶解
剤、拡散剤、緩衝剤などの添加剤を含有しても
よい。ある上記単位投与剤型は、ゴム（ブチル
ゴム）栓付きバイアル中にA51568因子Ａもし
くはＢまたはその製薬上許容される非毒性塩
100mgを含有する。また別の単位投与剤型は、
滅菌密封バイアル中に抗生物質A51568因子Ａ
もしくはＢまたはその塩250mgを含有する。静
脈内注入の場合は、本発明の単位投与剤型はプ
ラスチツクの袋中に抗生物質A51568因子Ａも
しくはＢまたはその製薬上許容される塩５ｇを
含有する。 抗生物質A51568因子ＡまたはＢを抗微生物
剤として用いる場合、経口的にも非経口的にも
投与できる。当業者は明らかなように、抗生物
質A51568因子ＡまたはＢは通常製薬上許容さ
れる担体または賦形剤と共に投与する。抗生物
質A51568因子ＡまたはＢの投与量は、例えば、
治療すべきある特定の感染症の性状および重症
度などの種々の考慮すべき事項に依存する。当
業者には公知なように、投与した投与量範囲お
よび／または単位投与量は、患者または宿主お
よび感染菌などの要因と共に、本明細書で提示
したMIC値およびED50値を考慮して決定すれ
ばよい。 抗生物質A51568因子ＡまたはＢは、特に、
スタフイロコツカス、ストレプトコツカスおよ
びプロピオニバクテリウム・アクネス菌の増殖
を抑制するのに有効であるので、例えば、にき
びの治療に用い得る。A51568因子ＡおよびＢ
の精製物は、皮膚に適用する場合は、イソプロ
ピルアルコールなどの製薬上許容される賦形剤
中に製剤化することができる。この溶液中の抗
生物質濃度は、約１〜約15重量／容量％をとり
得る。または、皮膚に適用するに際して、クリ
ームまたはローシヨンに仕上げることもでき
る。 A51568因子ＡおよびＢは、腸管において偽
膜大腸炎を誘発するクロストリジウム・ジフイ
シレ菌の増殖を抑制するものにも有用である。
従つて、A51568因子ＡおよびＢは、製薬上許
容される投与剤型に調製した当該抗生物質また
はその製薬所許容される非毒性塩の有効量を経
口投与することにより、偽膜大腸炎の治療に用
いることができる。このような用途には、
A51568因子ＡおよびＢをゼラチンカプセルま
たは液体懸濁液にして投与することもできる。 A51568因子ＡおよびＢは、これまで末記載
のノカルジア・オリエンタリスNRRL15232ま
たはA51568を生産するその変異株を、同化し
得る炭素源、窒素源および無機塩を含有する培
養培地中で深部通気発酵の条件下にて実質量の
抗生物質活性が得られるまで培養することによ
り製造する。大部分の抗生物質活性はブロスに
存在するが、菌糸体にも若干関係しているよう
である。本抗生物質は、菌糸体、即ち、生体の
固まりを去することにより発酵液から非常に
容易に分離したのち、液から、好ましくは適
当な溶離剤を用いた適当な吸着剤によるカラム
クロマトグラフイーにより単離する。 適当な吸着剤としては、炭素、陰イオンおよ
び陽イオン交換樹脂、ポリアミド、カルボキシ
メチルセルロース、スチレンおよびジビニルベ
ンゼンの多孔質共重合体（Daiaion HP−20，
Amberlite XAD樹脂、デキストランを重度に
連結させてできる親水不溶性分子ふるいクロマ
トグラフイー培体のようなDuolite樹脂など）
ならびにTSKゲル類などが例示される。
Daiaion樹脂は三菱化成工業株式会社（東京，
日本）の製品である。Amberlite XAD樹脂は
Rohm and Hass（Philadel−phia，
Pennsylvania）が製造している。Duolite樹脂
はDaiamond Shamrock（Redwood City，
California）の製品である。Sephadex樹脂は
Pharmacia Fine Chemicals AB（Uppsala，
Sweden）が製造している。TSKゲル類は、E.
Merck（Darmstadt，Germany）およびBio−
Rad，（2200Wright Ave.，Richmond，
California，94804）から入手できる。 ノカルジア・オリエンタリスNRRL15232で
A51568因子ＡおよびＢを製造するのに用い得
る培地は多種類である。しかし、生産の経済
性、至敵収率および生産物の単離し易さの点か
ら、ある特定の培地が好ましいものとなる。こ
の培地は同化し得る炭素源、窒素源および無機
塩を含有しなければならない。好ましい炭素源
としては、ポテト・デキストリン、ブラツクス
トラツプ糖蜜、グルコース、スクロース、ラク
トース、マルトースおよびデンプンなどが例示
される。炭素源の至適濃度は約２〜約５重量％
である。 好ましい窒素源としては、グルタミン酸ナト
リウム、肉ペプトン、硝酸ナトリウム硫酸アン
モニウム、硫酸アンモニウム、大豆粗粉および
酵母などが例示される。 微生物を増殖生育させるのに必要な微量必須
元素は、微生物の増殖および生合成の要求に見
合うだけの量は培地の他の成分中に不純物とし
て存在する。しかし、培養培地中に、ナトリウ
ム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、ア
ンモニウム、塩素、炭素、リン酸、硫酸、硝酸
などのイオンを生じ得る可溶性栄養素無機塩を
更に添加するのは有益である。 発泡が問題となる場合は、大量発酵培地にプ
ロピレングリコールなどの消泡剤を少量（即
ち、0.2ml／）加える必要がある。 少量のA51568因子ＡおよびＢはフラスコ振
盪培養を得ることができるが、実質量の本抗生
物混合物を製造するにはタンク内での深部通気
発酵が好ましい。タンク発酵の場合は、増殖期
の接種物を用いるのが好ましい。この増殖期の
接種物は少量の培養培地に胞子型または菌糸体
フラグメントを接種して新しい活発に増殖する
菌株を得ることにより製造される。この増殖期
に接種物を、次いで大型タンクに移して適当な
時間培養すると、抗生物質A51568混合物が最
大収率で製造される。 培養培地への接種物を得る別法は、胞子の水
性懸濁液の代わりに凍結乾燥ペレツトを用いる
方法である。凍結乾燥ペレツトは当該分野で知
られた方法で製造する。凍結乾燥に供する胞子
懸濁液の製造は、滅菌蒸留水の代わりに滅菌牛
血清を用いる事以外は、胞子の水性懸濁液の製
造と同様である。 NRRTL15232は約25〜約37℃の広い温度範
囲で増殖し得る。抗生物質A51568混合物を最
も良く生産するのは約32〜34℃である。 深部通気培養工程で通常そうであるように、
培養培地の隅々まで滅菌空気を拡散させる。当
該菌を効率良く増殖させるために、約100〜約
300rpmの撹拌下でのタンク生産に用いる空気
量は、１分間当り培養培地容量に対して約0.1
〜約0.25容量（ｖ／ｖ／分）の範囲内である。
100の発酵培地を入れた165容の容器におけ
る至適量は、約200rpmで回転するインペラー
（impeller）で撹拌した場合、約0.15（ｖ／ｖ／
分）である。 抗生物質活性は、発酵期間のうち、通常は約
24時間後に存在し、少なくとも約168時間は残
存している。抗生物質の生産は、約90時間〜約
114時間の発酵時間に最大となる。 本抗生物質混合物の生産を増加させるため
に、ｐ−ヒドロキシフエニルグリシンを５×
10-3Mの濃度で培地に加えてもよい。この添加
によりある実験では生産性が64％増加した。 生産性はリン酸塩の濃度にも影響される。リ
ン酸塩を極少量３×10-4M（0.05mg／ml）だけ
濃くすると、ある実験では収率が20％低下し
た。 本抗生物質活性は上清に存在する。試料とし
てブロスの試料全部を1000ｇで約15分間遠心分
離し、沈渣を測定用に取出す。測定はマイクロ
コツカス・ルテウス（Micrococcus luteus）
ATCC9341を用いた寒天ウエル・プレート
（wellplate）・テストにより微生物学的に行う。 抗生物質A51568混合物の生産は、発酵の間
バチルス・ズブチリス（Bacillus subtillis）
ATCC6633を用いた寒天拡散法またはスタフイ
ロコツカス・アウレウスATCC9114を用いた濁
り測定法で追跡できる。 従つて、本発明の別の側面は、ノカルジア・
オリエンタリスNRRL15232またはA51568を生
産するその変異株を、同化し得る炭素源、窒素
源および無機塩を含有する培養培地中で深部通
気発酵の条件下にて実質量の抗生物活性が得ら
れるまで培養することを特徴とする前記式
（）の抗生物質の製造法を提供することであ
る。 本発明の実施方法をより充分に例示するため
に、以下に実施例を提示する。 実施例 １ 第１段階の接種物の製造 ノカルジア・オリエンタリスNRRL15232の
寒天スラント培地用に次の培地を製造した。 成 分 量（ｇ／） 前煮沸オートミール 60.0 酵 母 2.5 K2HPO4 1.0 ツアペツクのミネラル・ストツク 5.0（ml／） 寒 天 25.0 脱イオン水 全量を１とする量 ツアペツクのミネラル・ストツクは以下の成分
で製造する。 成 分 量（ｇ／100ml） KCl 10.0 MgSO4・7H2O 10.0 FeSO4・7H2O 0.2 脱イオン水 全量を100mlとする量 殺菌前のPHは6.2。水酸化ナトリウム水溶液
でPH7.3に調整。殺菌後のPHは6.7 ノカルジア・オリエンタリスNRRL15232の
胞子は、上述の成分で製造した寒天スラントに
接種し、７日間、約30℃で培養した。成熟スラ
ント培地を滅菌蒸留水で包い、滅菌用具で掻き
取つて胞子または菌糸体を緩めた。得られた胞
子懸濁液１mlを以下の組成を有する培殖培地50
mlに接種するのに用いた。 成 分 量（ｇ／） ポテト・デキストリン 30.0 糖蜜、ブラツクストラツプ 20.0 バクトーペプトン（DifcoLaboratories） 7.0 Ｌ−チロシン 1.0 脱イオン水 全量を1.0とする量 混合物のPHは5.5。これを殺菌前に水酸化ナ
トリウム水溶液でPH7.0に調整した。殺菌後の
PHは6.1 この増殖期にある接種物を、直径２インチの
アーク（arc）により250rpmで回転する振盪器
上で約30℃、約48時間、250ml容の広口エーマ
ンマイヤー・フラスコ中で培養した。この培養
した培地を小さな発酵槽に接種する（接種物は
培地の0.8容量％にする）か、または大量の菌
糸体を生産するための第２段階のフラスコに接
種するのに用いる。 A51568.1の発酵 生産培地100に上記で得た培養済の培養培
地0.8％（800ml）を接種した。生産培地の組成
は次のとおりであつた。 成 分 量（ｇ／） ポリプロピレングリコール（2000） 0.2 ポテト・デキストリン 30.0 ブラツクストラツプ糖蜜 20.0 バクト−ペプチン（Difco Laboratories） 7.0 Ｌ−チロシン 1.0 脱イオン水 全量を100とする量 培地のPHは5.2。これを5N水酸化ナトリウム
水溶液で7.1に調整し、121℃、17〜19psiで45
分間滅菌した。滅菌後の培地のPHは6.2。 接種した生産培地を165容の発酵タンク中
で、30℃にて約114時間発酵させた。この発酵
培地に0.15（ｖ／ｖ／分）の速度にて滅菌空気
を通気して、汎用される撹拌器により約
200rpmで撹拌した。 本抗生物質活性は発酵液の上清に存在する。
全ブロス試料を1000ｇで遠心分離し、デカント
して残つた沈渣を測定に供して抗生物質活性を
調べた。これをPH6.0のリン酸緩衝液で希釈し
て、マイクロコツカス・ルテウスATCC9341菌
株測定法で用いた寒天ウエル・プレート・テス
トで微生物学的に測定する。 実施例 ２ 抗生物質A51568混合物の単離 因子ＡおよびＢをおよそ95：５の比率で含有
する抗生物質A51568全発酵ブロス３に過
助剤（Hyflo Supercel，ケイソウ土，Johns−
Manville，Corp.）を加えて過した。液は
2.7であり、PHは7.8であつた。この液を、
３×25cmのクロマトグラフイー・カラムに詰め
たDaiaionHP−20樹脂（多孔質、ベツト型の
スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、三菱化
成工業株式会社、東京、日本）に通じた。流出
液を廃棄しカラムを水１および25％メタノー
ル水溶液500mlで洗浄した。抗生物質A51568混
合物は、50％メタノール水溶液500mlづつでカ
ラムを２回洗浄して流出させた。因子Ａおよび
Ｂは同様にHP−20に吸着し、同一条件で溶出
する。従つて、本工程では因子は分離できなか
つた。流出した分画の抗生物質活性をB.ズブ
チリスを用いて測定した。より活性な分画を少
量まで濃縮し、凍結乾燥して、因子ＡおよびＢ
をおよそ95：５の比率で含有する粗製の抗生物
質A51568混合物905mgを得た。 実施例 ３ 抗生物質A51568混合物の精製 上記実施例２で得た粗製の抗生物質A51568
混合物（905mg）を水50mlに溶解し、1.7×44cm
のクロマトグラフイー・カラムに詰めた
Sephadex CM−25（NH4 +サイクル）
（Pharmacia Fine Chemicals AB，Uppsala，
Sweden）に通じた。流出液を廃棄し、カラム
を水250mlで洗浄したのち炭酸水素アンモニウ
ムの中高のグラデイエント（H2O→1M
NH4HCO3，100ml混合チエンバー）で溶出し
た。25mlづつ50分画採取し、B.ズブチリス測
定法を用いて抗生物質活性を調べた。 活性分画、即ち、抗生物質活性を有する分画
を合した。Sephadex CM−25を用いた場合、
因子Ａおよび因子Ｂは別々に吸着され溶出する
ので、因子Ａに富む分画は因子Ｂに富む分画と
一致しなかつた。混合物中に存在する因子Ｂの
量は因子Ａの量より少なかつたので、因子Ｂに
富む分画は因子Ａに富む分画より比較的低い抗
生物質活性を示した。合した分画は因子Ｂを殆
んど含んでいなかつた。生成物を脱塩するため
に、予め水中で平衡化したDaiaion HP−20樹
脂を詰めた1.7×10cmクロマトグラフイー・カ
ラムに上記の合した分画を通じ、カラムを水
200mlで洗浄して50％メタノール水溶液100mlで
溶出した。メタノール溶出液を蒸発乾固し、残
渣を少量の水に溶解して0.1N塩酸で酸性化し
た。これを凍結乾燥して精製された抗生物質
A51568因子A25mgを得た。 因子Ｂを単離するために，B.ズブリチスを
用いた測定法の代わりにHPLC側定法を用いて
実施例３の方法を行つた。これは、B.ズブリ
チスを用いた測定法では因子ＡおよびＢを分別
できないので必要な行程である。HPLC測定法
を用いれば、因子Ａに富む分画と因子Ｂに富む
分画を各々同定して別々に採取できる。この
別々に採取された物を実施例３の最終工程のよ
うにして脱塩して因子Ａに富む生産物と因子Ｂ
に富む生産物を得る。 実施例 ４ A51568因子ＡおよびＢの単離精製と分離 A51568の全ブロスから因子ＡおよびＢの
A51568混合物を分離するために、全ブロスを
Hyflo Supercelで過した。液を5NHClで
PH6.0〜6.5に調整したのち、Ionac Ｘ−236樹
脂（H+）を加えて（液100当り樹脂４），
活性物を吸着させるために撹拌した。上清を廃
棄し、樹脂を水（樹脂の10倍容）で洗浄した。
洗液を廃棄したのち、このＸ−236樹脂をカラ
ムに充填して0.1N塩化アンモニウム（カラム
の５倍容）で溶出し、４分の分画を直ちに
5NHClで中和した。抗生物質活性は、S.アウ
レウスおよびHPLCで追跡した。A51568因子
ＡおよびＢを含有する分画を合して、脱塩する
ためにDaiaionHP−20樹脂を詰めたカラムに
通じた。流出液を廃棄し、樹脂を0.1％H3PO4
を含有する５％イソプロピルアルコールで溶出
した。500ml分の分画を採取し、抗生物質活性
を調べた。活性分画を合し、濃縮して凍結乾燥
した。得られた不純な物質は、A51568因子Ａ
を95％およびA51568因子Ｂを５％含有してい
た。 生成物を更に精製し同時に因子ＡおよびＢに
分離するために、上記の因子ＡおよびＢの不純
な混合物を水に溶解し、CM−Sephadex Ｃ−
25を詰めたカラムに通じて水と
0.25NNH4HCO3の線型グラジエントで溶出し
た。分画をHPLCで調べて因子Ａを含有する分
画を因子Ｂを含有する分画と別々に採取した。 前工程で付加した塩を除去する為に、各々の
採取物をDaiaion HP−20樹脂を詰めたカラム
に通じて、0.1％H3PO4を含有する５％イソプ
ロピルアルコールで溶出した。各々のカラムに
ついてHPLC測定法に基いて適当な分画を採取
した。２つの採取物を濃縮し凍結乾燥して実質
的に純粋なA51568因子Ａおよび実質的に純粋
なA51568因子を各々得た。
第１図はA51568因子ＡのKBrペレツトにお
ける赤外線吸収スペクトルを表わす。図中、横
軸は波数を縦軸は透過率を表わす。
ける赤外線吸収スペクトルを表わす。図中、横
軸は波数を縦軸は透過率を表わす。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式（） ［式中、ｎは１また２を表わす］ で表される抗生物質もしくはその製薬上許容され
る塩。 ２ ノカルジア・オリエンタンリスNRRL15232
またはA51568を生産するその変異株を同化し得
る炭素源、窒素源および無機塩を含有する培用培
地中で深部通気発酵の条件下にて実質量の抗生物
質活性が得られるまで培養して以下の式（）で
表される抗生物質もしくはその塩 を得ることを特徴とする製造方法。 ［式中、ｎは１また２を表わす］ ３ 培養培地から抗生物質A51568因子Ａを単離
する工程も合わせて包含する特許請求の範囲２記
載の方法。 ４ 培養培地から抗生物質A51568因子Ｂを単離
する工程も包含する特許請求の範囲２記載の方
法。 ５ 以下の式（）で表わされる抗生物質または
その製薬上許容される塩を主たる活性成分とし、
１種またはそれ以上の製薬上許容される賦形剤ま
たは担体と共に含有して成る哺乳動物の細菌感染
症治療剤。 ［式中、ｎは１また２を表わす］
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US45088082A | 1982-12-20 | 1982-12-20 | |
| US450880 | 1982-12-20 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3312467A Division JPH0771479B2 (ja) | 1982-12-20 | 1991-11-27 | 抗生物質ａ５１５６８因子ａおよびｂを産生する微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59118798A JPS59118798A (ja) | 1984-07-09 |
| JPH0430400B2 true JPH0430400B2 (ja) | 1992-05-21 |
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Family Applications (2)
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|---|---|---|---|
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| JP3312467A Expired - Lifetime JPH0771479B2 (ja) | 1982-12-20 | 1991-11-27 | 抗生物質ａ５１５６８因子ａおよびｂを産生する微生物 |
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| AU (1) | AU563466B2 (ja) |
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| DD (1) | DD210709A1 (ja) |
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-
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-
1991
- 1991-11-27 JP JP3312467A patent/JPH0771479B2/ja not_active Expired - Lifetime
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