JPH0285293A - 免疫促進性グアニン誘導体、その組成物及びその使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は免疫応答促進化合物（免疫促進物質）、特にグ
アニン環の７位及び８位が置換したグアニンヌクレオシ
ド誘導体、その誘導体を含む組成物及びそれらの使用法
に関する。

（発明の背景） 動物の免疫系は、個別に、そして、または協調して作用
する多くの要素から成り、その系により、動物宿主に対
して異物と判断される物質を阻止、除去または中和する
。全てではないが一般に、この免疫系により異物と判断
される物質は、その宿主以外のものに由来する。このよ
うな外来物質の例には感染性細菌及びその細胞活性産物
、ウィルス粒子及びそれらのタンパク質、昆虫の４針か
ら注入されたタンパク質及びそれらに類するものがある
。リューマチ関節炎のような自己免疫症では、その宿主
の免疫系が宿主製のタンパク質又は、自前のタンパク質
を異物として認識する。

免疫系の基本的因子は、胸腺由来のリンパ細胞（Ｔ細胞
）、骨髄で作られるリンパ細胞（Ｂ細胞）、中でも細菌
に対して細胞毒性を示す過酸化水素のような酸化剤を作
る酵素を生産する好中球及びＴ細胞のヘルパーＴ細胞へ
の転換を助ける、タンパク質設計されたインターロイキ
ンｌを生産すると同時に、その外来物質又は抗原にＴ細
胞を指し向けるマクロファージを含む白血球である。外
来物質に対し、順序よく連続的に作用するタンパク質の
複雑な混合物である補体も免疫応答において重要な役割
を果している。

Ｂ細胞は、中でも、それらの膜表面上のイムノグロブリ
ンの存在により、Ｔ細胞と区別することができる。膜結
合イムノグロブリンは、抗原レセプターとして機能し、
分泌イムノグロブリンは、抗体として機能する。

イムノグロブリンには、部分的にイムノグロブリン分子
を構成している５個の抗原的に異なる重鎮タンパク質に
基づいて、ＩｇＡ、ＩｇＤ、Ｉｇ　Ｅ　。

ＩｇＧ及びＩｇＭと呼ばれる５クラスが知られている。

また、Ｂ細胞は、補体レセプター（ＣＲ）、イムノグロ
ブリンのＦｃ領域に対するレセプター（ＦｃＲ）、Ｉ領
域関連抗原（［ａ）及び全ての抗血清により同定され、
かつＢ細胞の成熟及び活性化の様々な面に相関性をもつ
分化抗原類＜Ｌｙｂ　　１−７　）を含む、非イムノグ
ロブリン細胞マーカーを有している。これらのマーカー
は、Ｂ細胞を表現系で同定するのに有用である。

Ｂ細胞のイムノグロブリンが外来物質又は抗原と相互作
用を起こしたとき、Ｔ細胞、特にヘルパＴ細胞が体液性
免疫のために、Ｂ細胞を刺激し、抗体分泌細胞へと分裂
及び分化するのに必要である。サプレッサーＴ細胞は、
体液性免疫の制御に寄与する一方、細胞毒性Ｔ細胞及び
遅延型過敏症のＴ細胞仲介物は、細胞性免疫の重要な要
素である。

Ｔ細胞は、Ｔ細胞の機能に関連するＬｙｔ　１．　２及
び３及びＬ３Ｔ４と呼ばれる抗原を有している。

ヘルパーＴ細胞前駆体は、ｔ、ｙｔ　ｌ＋　　２−　３
−Ｌ３Ｔ４＋という発現型を有している。

ＢｉＢ胞が最初のメツセージを活性化抗原物質から受は
取った後、ヘルパーＴ細胞がイムノグロブリン分泌性Ｂ
細胞の活性化及び分化を助けることが知られている。し
かし、Ｔ！ＩＩ胞がＢ細胞へ与える活性化及び分化の第
２のメツセージの様式は現在でも全く理解されていない
。

グアノシン−３’、５’−サイクリック−リン酸（ＣＧ
ＭＰ）は、Ｂ細胞の増殖に必要な第２のメツセージを与
えるための天然物質と考えられている。９−ブロモグア
ノシン−３′　５′−サイクリック−リン酸（８−Ｂｒ
ｃＧＭＰ）は弱い合成細胞内リンパ細胞マイトジェンで
あることが分っている。

免疫応答は、人工的抑制（免疫抑制）又は、強化（免疫
強化又は免疫促進）により修正することができる。免疫
抑制すなわち、人工的に誘導される応答低下は、６種の
一般的方法（１）抗原による阻害、（２）特異的抗血清
又は抗体の投与、（３）抗リンパ細胞抗血清などの、そ
の他の生物学的試薬の使用、（４）薬剤又はホルモンの
使用、（５）放射及びリンパ組織の外科的除去により行
なうことができる。免疫強化には、免疫応答が展開する
速度の増加、応答強度又はレベルの増加、応答の延長、
又は、その他の非免疫原性物質に対する応答の展開に影
響を与える試薬の投与が含まれる。

免疫応答を強化することが知られている試薬は、−Ｃに
アジュバントと呼ばれ、そして、２種の一般的クラスに
分けることができる。（１）−Ｉｎ的な強化を提供する
もの、すなわち巾広い抗原に対して、細胞性、そして、
または体液性免疫応答を促進する物質及び（２）特異的
強化を提供するものすなわち、ある抗原に対してのみに
特異的な応答を促進する物質。

クラスｌのアジュバントとして作用しうる物質は、次に
示すカテゴリーに分類することができる。

（１）水あるいは油エマルジョン、例えばフロインドア
ジュバント、（２）合成ポリヌクレオチド、（３）ホル
モン、薬剤及びサイクリックヌクレオチド、（４）内毒
素、（５）タンパク質性リンフ才力イン及びモノ力イン
、例えばインターロイキン。

免疫強化状態とは、ワクチン化後の身体状態により説明
できる。この時点では、免疫応答はすでに抗原性応答に
より強化されているが、それ以上に、免疫程度そして、
または免疫期間を改善するように強化することができる
。

免疫強化は、正常の免疫応答を示す動物同様、不完全な
免疫応答を示す動物についても起こすことができる。後
者の状態では、免疫強化は、宿主動物の免疫不完全状態
に関係しており、そして、むしろ普通以上のレベルに応
答を強化するので、予防程度の免疫（すなわち、はぼ正
常レベル）が求められ、かつ、免疫再構成と呼ばれてい
る。以後の免疫強化という言葉には、免疫再構成を含む
と理解されるべきである。

ある病気及びＡＩＤＳ、ブルドン型低γ−グロブリン血
症、老化及び薬剤誘導免疫抑制などの生理的状態におい
て、抗原依存Ｂ細胞活性化及び分化は欠けており、そし
て、または、低下したレベルでのみ存在しており、それ
により、この宿主の体液性免疫応答が低下している。こ
れらの病気や状態は、免疫抑制状態の代表例である。こ
こで、もしうまく効果があがれば、活性化及び分化の促
進は、その病気の症状をうまく減少させ、そして、また
はその患者の状態を改善する。

グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）及びウェイグル（Ｗｅｉ
ｇＩｅ）に共譲渡された米国特許第４，５３９，２０５
号は、アルドースＳＡ（環）中５、又は６個の炭素原子
を有するアルドースに９−１′結合する、８位置換グア
ニン誘導体による動物細胞性応答の調節が報告されてい
る。この特許中に述べられている細胞の調節は主に一次
及び二次免疫応答の強化におけるアジュバンシテイーの
ような免疫調節に関係している。ある悪性状態に対する
活性も、Ｔ細胞置換活性、ＩＬ−１様活性（胸腺リンパ
球について検定する）及び好中球からのりソソーム酵素
放出の誘導古して公開されている。これらの分子中の８
位置換基は、水素に相対的な電子吸引性誘導効果を有し
ている。従って、ハロゲン、メルカプト又はそのチオク
ツ互変異性体、アシルメルカプト、アルキルスルフィド
、ニトロ、シアノ、ケト、ハロメチル及びメチレンオキ
シアルキル及びそれに類するものが有用なものとして公
開されており、−方、アミノ基のような電子供与性置換
基は不活性であることが分った。

さらに、共譲渡された、米国特許第４，５４３．９９２
号及びそれに相当して刊行されたヨーロッパ特許出願第
８３３０６７９１．１号は、動物の細胞性応答における
、８−ヒドロキシグアノシン（８−オキソグアノシン）
、７−メチル−８−オキソグアノシン及び７−メチル−
８−チオキソグアノシンの誘導体の使用を公開している
。さらに、米国特許第４．５３９．２０５号中に公開さ
れているグアニン誘導体を用いた結果も、米国特許第４
，６４３．９９２号に公開されており、この特許で最初
に公開されたグアニン誘導体を用いた結果と同じであっ
た。

また、米国特許第４．６４３，９９２で公開され、かつ
特許請求されている化合物の効果に関して、いくつかの
報文及び書￥ゴが本発明者及び協同研究者によって報告
がなされてきている。これら刊行された報文の例には、
グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）、プロシーデインゲイン
・ソサイアティー・オブ・エクスペリメンタル・バイオ
ロジー・アンド、メデイシン（Ｐｒｏｃ、　Ｓｏｃ、　
［ｉｘｐ、　Ｂｉｏｌ、　Ｍｅｄ、）　１７９４７９　
（１９８５）　、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）、ジャ
ーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、
　）１３６．３３３５　（１９８５）　、グツドマン（
Ｇｏｏｄｍａｎ　）及びウェイグル（Ｗｅｉｇｌｅ　）
　、ヒトのプリン代謝、パートＢ１ナイハン（Ｎｙｈａ
ｎ　）及びトンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ　）　ｋｍ、
プレナムプレス社、ニューヨーク、４５１頁及び４４３
頁（１９８６年）、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ　）、
及びウェイグル（Ｗｅｉｇｌｅ　）、ジャーナル・オプ
・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）１３５．
　３２８４　（１９８５）、グツドマン（Ｇｏｏｄｍａ
ｎ　）及びウオルファート（Ｗｏｌｆｅｒｔ　）、イム
ノロジカル・リサーチ（Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｒｅｓ、　
）　　５．　７１　　（１９８６）、グツドマン（Ｇｏ
ｏｄｍａｎ　）、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ
、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）、　　Ｌ　３７．　３７５３
（１９８６）、及びグツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ　）及
びヘンネン（Ｈｅｎｎｅｎ　）　、セルラーイムノロジ
ー（Ｃｅ１）、　　　［ｍｍｕｎｏｌ、）、　　　１０
２．　　３９５　　　（１９８６）がある。

（発明の概要） ヒト及び動物細胞における免疫応答の強化に、７．８−
二置換グアニンヌクレオシド（グアノシン誘導体）が使
用される。有用な二置換グアニンヌクレオシドは、一般
式（Ｉ）： （式中、Ｘは０．５ＳＳｅ又はＮＣＮで、Ｒ１はエチル
基より大きく　（２個の炭素原子より長く）かつデシル
基より小さい（１０個の炭素原子より短かい）長さの直
鎖、環状もしくは分枝鎖ヒドロカルビル基（ｈｙｄｒｏ
ｃａｒｂｙ　ｌ）基で、Ｒ２及びＲ３は・水素原子、水
酸基、低級アルコキシ基、低級アルカノイロキシ基及び
ベンゾキシ基からなる群から選ばれる同−又は異なる基
であるか、もしくは、Ｒ２及び　Ｒ２がいっしょになっ
て低級アルキリデンジオキシ基を形成し、及びＲ４は、
水素原子、低級アルカノイル基、及びベンゾイル基から
なる群から選ばれる） で表わされる構造を有する。好ましい本発明のグアノシ
ン誘導体は、ＸがＯ又はＳであり、かつＲ１がエチル基
以上でかつヘキシル基以下の長さを有するものである。

特に好ましいグアノシン誘Ｉｃは、７−アリル−８−チ
オクツグアノシン、７−アリル−８−オクソグアノシン
、７−ブチル８−オクソグアノシン、７−（２−ブテニ
ル）−８−オクソグアノシン、７−ベンジル−８−オク
ソグアノシン及び７−ブロプルー８−オクソグアノシン
である。一般式Ｉの化合物の医薬的に許容し得る非毒性
塩基付加塩も本発明に含まれる。

活性成分として、上述の二置換グアニンヌクレオシド誘
導体の免疫強化（又は免疫促進）効果量と共に、希釈量
の生理学的に許容し得るキャリヤーを含む免疫応答−増
強組成物も本発明の範囲である。

免疫応答、特に抗原特異的免疫応答を増強する方法も本
発明の範囲内である。この場合、白血球を、先に述べた
グアニンヌクレオシド誘導体の免疫促進量を含む組成物
と、水性媒体中で接触させる。この組成物と白血球との
接触は、接触した細胞がそれらの免疫応答の増強を示す
のに十分な時間維持される。この方法は、インビボでも
、または、細胞培養物に対しインビトロでも行なうこと
ができる。接触を受けた白血球は、Ｂリンパ球であるこ
とが望ましい。

アリルまたは炭化水素置換したアリル基で、７位置換を
受けた、８−オクソ、８−チオクツ又は、８−セレノク
ツプリンの合成法も考案された。本方法に従がい、プリ
ン出発物質であって、その８位を−Ｘ　　ＣＨｚ　　Ｃ
Ｒ＝ＣＨｚ基（式中、ＸはＳ１Ｏ又はＳｅ及びＲは水素
原子、低級アルキル基又はベンジル基）により、そして
、９位を保護基により置換されたプリン出発物質が提供
できる。８位で置換したプリン出発物質を、好ましくは
希釈された不活性液体媒体中、約５０℃から約２００°
Ｃの温度に加熱する。この温度を、そのプリン出発物質
の、（ｉ）８位が＝Ｘ基（ただし、Ｘは、出発物質中の
Ｘと同じもの）で、かつ（ｉｉ）７位がＣＨ２−ＣＲ＝
ＣＨ２基で置換するのに十分な期間（約１時間から約２
週間）維持する。また、この反応は、この液体媒体中、
触媒量のＰｄ（１！２を包含させることにより触媒する
ことができる。

また、このプリンは、リボース又はデオキシリボースに
９−１′結合しており、また、このプリン生成物はグア
ノシン、アデノシン又はイノシン誘導体であることが好
ましい。最も好ましいプリンヌクレオシドは、ここで議
論されているグアノシン誘導体である。

（本発明の詳細な説明） ■、序文 本発明は投与した宿主動物の免疫系を強化し、あるいは
、細胞培養物中の白血球を強化する免疫応答増強剤を考
案したものである。特に考案された免疫促進は、免疫化
抗原に選択的に抗原特異的なものである。

いくつかの報告されているマイトジェニックグアノシン
誘導体、例えばグアノシン−３’、５’サイクリック−
リン酸及びその８−ブロモ誘導体の効果の研究において
、生理学的に許容し得る希釈量のキャリヤーを含む組成
物中、効果量の活性成分として存在する時、新しいクラ
スの低分子量グアニンヌクレオシド誘導体は、ホ乳類細
胞の応答を調節する上で著しい効果を示すことが発見さ
れた。強いアジュパンティシティを起こす抗原特異的体
液性免疫応答の増強、Ｔ細胞置換因子様活性、Ｔヘルパ
ー活性、Ｔ細胞由来リンフォカイン分泌、Ｔ細胞の細胞
毒性活性及び免疫再構成活性は、特に調節されることが
分った細胞性応答の例である。これらの化合物及びその
使用法は、米国特許第４．５３９．２０５号及び第４．
６４３．９９２号に公開されている。

本発明の化合物は、上述の２つの特許の化合物に比べ、
驚異的に大きい活性を有することが分った。増強された
活性の知見は、多くの理由で驚くべきものであった。

上述の米国特許中に公開されている、最も活性のある化
合物は、白血球マイトジェンとして、及び抗原特異的ア
ジュバントとしての、７−メチル８−オキソゲアノシン
（７ｍ８ｏＧｕｏ）であった。以下に議論されているよ
うに、マイトジェネシティー及びアジュバンティシティ
ーは必ずしも関連しない現象である。

引きつづいて得られたデータから、７ｍ８ｏＧｕｑが８
−ヒドロキシグアノシン（８オキソグアノシン（８ｏＧ
ｕｏ）の互変異性体）又は、８−メルカプトグアノシン
（８ＭＧｕｏと呼ばれ、８−チオクツグアノシンの互変
異性体）のような化合物以上の増加した活性を示すとい
う事は驚くべきことであった。さらにそのいくつかを以
後の例として提供される一連のデータは、一連の８位置
換グアノシンの活性（マイトジェニシティ及びアジュバ
ンティシティ両方とも）が８位置換基の大きさが増すに
つれ減少することを明らかにした。

従って、置換基サイズ効果が見とめられる８位に隣接し
てグアノシン環上に、７ｍ８ｏＧｕｏのメチル基が結合
しているので、以前には置換基が存在していなかった７
位へのその基又はその他の基の付加は、問題としている
分子がサイズ惑受性の環内位置に隣接した位置により大
きい形で存在するという理由のみでこれも活性を低下さ
せることが期待されるであろう。７ｍ８ｏＧｕｏ以上に
、グアノシン環上７位により大きい置換基を有する本発
明の化合物の増加したアジュバンティシティは、なおさ
ら予期しがたいものであり、驚くべきものであった。

■、化合物 ここで考案された免疫促進化合物は、７，８−置換グア
ニンヌクレオシド誘導体（ここでは、グアノシン類又は
グアノシン誘導体とも呼ばれる）である。これらの化合
物は以下に示す一般弐Ｉ：３　　Ｒ２ （式中、Ｘは０、Ｓ　ＳＳｅ又はＮＣＮであり、Ｒ１は
エチル基より長く、かつデシル基より短かい直鎖、環状
又は分枝鎖ヒドロカルビル基であり、 Ｒ２及びＲ３は、水素原子、水酸基、低級アルコキシ基
、低級アルカノイロキシ基及びヘンジキシ基からなる群
から選ばれる同−又は異なる基であるか、もしくは、Ｒ
２及びＲ３がいっしょになって低級アルキリデンジオキ
シ基を形成し、及びＲ４は、水素原子、低級アルカノイ
ル基及びベンゾイル基ｌ！！ｌ）らなる群から選ばれる
基である）で表わされる構造を有する。

上記一般式中のリボシル基は、β−配位の結合によりそ
の環の１位に結合していることを意味していることに注
意せよ。さらに、Ｄ型のリボシル基を意味していると理
解しなければならない。

好ましいグアノシン誘導体は、ＸがＯ又はＳ、Ｒ１がエ
チル基以上でかつヘキシル基以下の長さを有し、かつ、
Ｒ２及びＲ３は水酸基もしくはアセトキシ基であるもの
である。特に好ましい態様では、Ｘは０であり、Ｒ１は
、プロピル基、アリル基、ブチル基、２−ブテニル基及
びベンジル基からなる群から選ばれたものであり、Ｒ２
及びＲ３は水酸基であり、及び、Ｒ４は水素である。

最も好ましくは、Ｘは０、Ｒ１はアリル基、Ｒ２及びＲ
３は水酸基及びＲ４は水素である。

先に示したように、Ｒ１基は、エチル基より長い。また
Ｒ１基は、デシル基よりも短かい。いわばＲ１は、各々
適当な水素原子を含んだ長さの、飽和した２個の炭素原
子よりも長く、かつ、飽和した１０個の炭素原子よりも
短かい炭化水素基である。単にプロピル、ブチル、ヘキ
シル、デシル等と呼ばれる炭化水素基は普通の直鎖ラジ
カルと理解される。分枝基とは、各々、２−プロピル又
はイソプロピルなどのように、通常用いられている数字
又は略式接頭語により指示されている。

ヒドロカルビル基の鎖長は分子中の最も長い炭素鎖に沿
って測定される。この長さは、公表されている結合角、
結合長、及び原子半径を用い、必要ならばジグザグ鎖を
描き、かつそれを測定することにより、もしくは、結合
角、結合長及び原子半径が公表されている値となってい
る市販のキ・７トを用いてモデルを組み立てることによ
り、容易に測定することができる。また、基の長さは、
不飽和結合は、飽和結合と同じ長さを持ち、かつ不飽和
結角は、飽和結合と同じ値であると仮定することにより
、いくぶん小さく測定されるン５り、上述の測定様式は
好ましいものである。長さは、その基の最長のものが測
定される。

Ｒ１は特定の長さを有するヒドロカルビル基である。炭
化水素ラジカルであるから、Ｒ１は炭素及び水素原子の
みを含む。

炭化水素及びヒドロカルビル基は大きく、脂肪族及び芳
香族に分けることができる。脂肪族基には（ｉ）飽和ア
ルカン（アルキル基）及び（ｉｉ）モノ及びポリ不飽和
アルケン及びアルキン（アルケニル及びアルキニル基）
がそれぞれ含まれる。

環状、直鎖及び分枝基は、各タイプの脂肪族基に存在す
る。芳香族Ｒ１基には、芳香族性ヘンゼン又はナフタレ
ン環が含まれる。脂肪族基に結合した芳香族環を含むア
ラルカン、アラルケン及びアラルキン基も、アルキル置
換ベンゼン及びナフタレン誘導体として、考慮されてい
る。代表的Ｒ１基を以下に示す。

すでに述べたように、Ｒ１基は、エチル基よりも長く、
かつデシル基よりも短かい。それゆえ、このグループの
アルキル基は、Ｃ：ｌ　　Ｃ９アルキル基と呼ばれる。

このＣ，−Ｃ，アルキル基は、以後議論されるＲＺ、Ｒ
：ｌ及びＲ４基の一部としても有用な、ここで“低級ア
ルキル基”と呼ばれるクラスのものがいくつか含まれて
いる。ここで低級アルキル基について議論するのが適切
である。

ここで“低級”と呼ばれている基は、それらが工から約
６個の原子を含むことを意味している。

この定義は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４の全てで使用さ
れているように、“低級”という語に適用される。Ｒ２
、Ｒ３及びＲ４に対しては、１〜３個の炭素原子を含む
“低級”基を使用することが望ましい。

低級アルキル基には、例えば、メチル、エチル、プロピ
ル、１ｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃブチル、ｔ
−７’チル、ｎ−ペンチル、３−メチル−２−ブチル、
■−メチルブチル、２−メチルフチル、ｎｅｏ−ペンチ
ル、ｎ−ヘキシル、■−メチルペンチル、３−メチルペ
ンチル、１−エチルブチル、２−エチルブチル、２−ヘ
キシル、３−ヘキシル及びそれに類するもののような、
直鎖及び分枝基両方が含まれる。Ｒ１のＣ：Ｉ　　Ｃｑ
アルキル基のグループには、低級基のグループのメチル
及びエチル基は含まれず、またヘプチル、オクチル及び
ノニルラジカルの他に、アルキル置換アルキル基である
、２−メチルヘプチル基のような分枝基までも含まれる
。Ｒ１基はエチルよりも長く、かつ、ヘキシルよりも短
かい直鎖であることが好ましく、また、Ｒ１の低級アル
キル基にプロピル、ブチル、及びペンチルが含まれる方
がより好ましい。

また、Ｊ】状脂肪族基も考案されており、これは、不飽
和アルケニル及びアルキニル基のグループだけでなくア
ルキル基のグループ中にも含まれつる。

そのような基には、シクロペンチル、シクロヘキシル、
シクロヘプチル及びシクロオクチル基が含まれる。また
、このグループには、２−シクロペンテニル、２−シク
ロへキセニル、３〜シクロへブテニル及びこれに類する
もののような不飽和基も含まれる。

さらに、考案された環状脂肪族基には、７位窒素原子と
環状構造の間に結合する、アルキレン、アルケニレン又
はアルキニレン基を有する基間様、直接グアニン環の７
位に結合する環に結合する１つ以上の低級アルキル基置
換を有する基が含まれる。前者の環状基のグループの代
表的基には、２７チルシクロペンチル、３−エチルシク
ロヘキシル及び４−ｉｓｏ−プロピルシクロヘプチルが
含まれる。後者の環状基のグループの代表的基には、２
−（シクロペンチル）エチル、３−（シクロヘキシル）
ブチル及びそれに類するものが含まれる。

不飽和基は、また別の脂肪族基のグループを構成する。

代表的−不飽和化合物には３−ブテニル、２−メチル−
３−ペンテニル、３−へキシニル及びそれに類するもの
が含まれる。また、１つ以上の不飽和結合を含むが芳香
族性でもある環状基は、上述のように環状基と考えられ
る。多不飽和基には、ブタジェニル、２−メチル−２，
４−ペン７−ジェニル及びそれに類するものが含まれる
。

Ｃ：ｌ　　Ｃ６β−アルケニル基は不飽和炭化水素基の
特に好ましいグループである。Ｃ３Ｃｓβアルケニル基
にはグアニンの７位窒素原子にβ結合するエチレン的二
重結合が含まれている。

代表的基には、アリル（２−プロベニＪｌ／）、２−ブ
テニル、２−ペンテニル、３−メチル−２−ペンテニル
及びこれに類するものが含まれる。

芳香族基は別の炭化水素Ｒ１基のグルニブを構成してい
る。代表的芳香族ラジカルには、フェニル及びナフタレ
ン基が含まれる。３−又は４−メチルフェニル、３−又
は４−イソプロピルフェニル、３−エチルナフチル、５
−メチルナフチルラジカル及びこれに類するもののよう
な、アルキル置換芳香族ラジカルも考案されている。

さらに、アラルキル基も考案されたＲ１基である。ベン
ジル、フェネチル及び３−フェニルブチル基は、このグ
ループの代表例である。ベンジルは特に好ましいＲ′基
である。

アラルケニル基であることから、シンナミル基（３−フ
ェニル−２−プロピル）は非常に近い関係の基である。

またシンナミル基もＲ３−Ｃ，βアルケニル基より長い
置換β−アルケニル基と見なすことができるが、その長
さのため、アジュバントとして驚くべき活性を示す。

Ｒ２及びＲ３基は同じでも、異なっていてもよく、また
水素、水酸基、低級アルコキシ基低級アルカノイロキシ
基及びベンゾキシ基からなる群がら選ばれるものである
。またＲ２及びＲ３は共に２’、３’−環状低級アルキ
リデンジオキシ基を形成することができる。代表的Ｒ２
及びＲ：１基を以下に議論する。

低級アルコキシ基は、酸素原子を介してグアニン糖環に
結合した低級アルキル基である。代表的低級アルコキシ
基には、メトキシ、エトキシ、イソプロピル、ブトキシ
、ヘキシロキシ及びそれに類するものが含まれる。低級
アルカノイロキシ基は、グアニン糖環水酸基及び低級ア
ルキルカルボン酸の間に形成されるエステルである。低
級アルカノイロキシ基の例にはホルモキシ、アセトキシ
、プロピオノキシ、ヘキサノイロキシ及びそれに類する
ものが含まれる。

２′−及び３′−水酸基の低級アルキルアセクール及び
ケタール誘導体は、２’、３’−環状低級アルキリデン
ジオキシ、又はより節単に、低級アルキリデンジオキシ
基と呼ばれる。これらの基は、置換したグアノシンリボ
シル基の２′−及び３′−水％、ｌと、ホルムアルデヒ
ド、アセトアルデヒド又はそれに類するもののようなア
ルデヒド又は、アセトン又はメチルエチルケトンのよう
な’ｒ　ｌ−ンとの反応により生成する。

ＲＺ及びＲ３は、水酸基、低級アルカノイロキシ基又は
ベンゾキシ基であることが好ましく、またさらに水酸基
又はアセトキシ基であることがより好ましい。Ｒ２及び
Ｒ３が低級アルカノイロキン基又はベンゾキシ基である
とき、それらの基は本発明の方法の白血球接触ステップ
の間又は直後に失なわれ、従ってグアノシンＸＮ　導体
の“プロドラッグ型を提供することができる。Ｒ２及び
Ｒ３は水酸基であることが最も好ましい。

Ｒ４は、水素原子、低級アルカノイル基及びベンゾイル
基からなるグループから選ばれる基である。Ｒ４が低級
アルカノイル基はベンゾイル基のとき、そのカルボキシ
ル基は、先に述べたように切断され、再び“プロドラッ
グを提供すると考えられている。

有用なグアノシンは、生理的ｐＨ値、すなわちｐＨ約７
．０からｐＨ７，５で、相対的に酸性の１位環内窒素に
より提供されるイオン電荷以外、実質的なイオン電荷を
もたない。従って、有用な分子にグアノシン中に存在し
ない酸及び塩基含有領域はない。

定義から、酸性及び塩基性基の不在はＲ１ラジカルから
伸びておりグアノシン分子全体に及んでいる。

グアニンは酸であり、従って塩基付加塩を形成する。こ
のような塩は保存安定性を与える上で有用であり、かつ
、宿主血液及びリンパ系あるいは培養媒体のバッファか
ら提供される緩衝効果のため、本発明の方法で用いるグ
アニン誘導体に付加的イオン電荷を与えることはない。

ここで、グアニン誘導体の医薬的に許容される、非毒性
塩基付加塩が有用となり、これは水又は、メタノールあ
るいはエタノールのような低級アルキルアルコールのよ
うな適当な溶媒中、適当な塩基で免疫応答増強剤を処理
することにより作ることができる。代表的無機塩基には
、ナトリウム、カリウム及びアンモニウムの水酸化物及
びこれに類するものが含まれる。代表的有機塩基には、
トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（ＴＲＩ
ｓ）　、４−　（２−ヒドロキシエチル）−１−ピヘラ
ジンーエタンスルホンＭ　（ＨＥＰＥＳ）及びこれに類
する塩基が含まれる。逆に、この塩基付加塩型は、酸で
処理することにより遊離型のグアノシンに変換すること
ができる。

ここで有用となる置換したグアニンヌクレオシド誘導体
は化学文献で公表されている操作、あるいはそれに類似
する操作を用いて容易に合成される。いくつかの代表的
合成法は、後に材料と方法のセクションに示す。−船釣
に、７．８位二置換グアニンヌクレオシド誘導体の合成
は、すでに形成されている９−１′−βアルドグルコシ
ドボンドから始めるが、この結合を最初に生成する必要
はない。本発明のいくつかの化合物を合成する新規でか
つ予想外の方法を後のセクションＶで議論する。

以後説明する代表的合成に加え、三つの代表的合成様式
をここで簡単に説明する。これらの様式は文献により提
供される合成様式の代表例であり、そして、合成する化
合物として、本発明の７−炭化水素置換−８−チオクツ
グアノシンを用いて説明する。

最初の様式では、７−炭化水素置換−８−チオクツグア
ノシンを適当な溶媒中α−１−クロロ（又はブロモ又は
アセトキシ）−２，３，５−トリベンジオイル−Ｄ−リ
ボースのような、適当なα−１−脱離置換リポース誘導
体と反応させ、βリボシル誘導体を生成させる。この反
応産物を回収し、ＨＰＬＣで分画することにより、目的
のグアノシン誘導体を得る。

第２の様式では、７−アリル−８−チオキソグアノシン
（２２４４４；例９）を酸化し対応するアルデヒドを生
成する。その後、生成した７（２−エタナール）−８−
チオクツグアノシンをライティング反応で縮合して７−
β−Ｃ３Ｃｂアルケニル（又は他の）ラジカル置換グア
ノシンを作り、これを使用のため、存在するその他の副
産物から分離する。それからこの不飽和グアノシンを還
元して、飽和置換体とすることができる。

第３の様式では、チオホスゲンと、適当に置換を受けた
２、５．６−）リアミノ−４−ヒドロキシピリドミジン
との反応による閉環が利用されている。より明確に言う
と、２−アミノ−４−ヒドロキシ−５−炭化水素置換−
アミノ−６−β−Ｄリボシルピリミジンを酸捕捉塩基の
存在下、チオホスゲンと反応させ、７−炭化水素−８−
チオクツグアノシン誘導体を得、これは使用するため、
その他の反応産物から分離できる。

■　組成物 本発明の組成物は先に説明した本発明の置換したグアニ
ンヌクレオシド誘導体の免疫強化（免疫応答増強又は免
疫促進）効果量を混合した、希釈量の生理的に許容され
るキャリヤーを含んでいる。

インビボ投与のための組成物は、慣例的な単位投与組成
物の形で経口又は腹腔内注射による投与で与えられる。

ここで用いている“単位投与”という語句及びその文法
的同義語は、ヒトの患者又は他の動物に対し単一投与に
適した物理的に分離した単位を意味し、例えば希釈剤又
はビヒクルなどの必要とされる生理的に許容されるキャ
リヤーと合せて、望ましい治療効果を生むのに必要であ
ると計算された、予め決められた効果量のグアノシン活
性成分を含んでいる。本発明の新しい単位投与型の説明
は、（ａ）この活性グアノシン誘導体成分の独特の性質
及び達成すべき特別な治療効果、及び（ｂ）ヒト及び他
の動物におけるインビボの場合同様、インヒドロでの治
療的用途のための、これら活性成分の調合技術に固有の
制限により記述されており、またそれらに直接依存する
。

本発明に従かう適当な単位投与型の代表例には錠剤、カ
プセル、丸薬、粉末包、顆粒、ウェハー及びそれに類す
るもの、前述のものを分離した形で多数含むもの、及び
液体溶液、エマルジョン及びサスペンションがある。液
体組成物は、皮下、静脈、筋肉注射、経口及びそれに類
する通常の方法で投与することができる。

効果的な免疫促進量として、インビボ投与される活性成
分量は患者の年令及び体重、治療される特定の症状、投
与頻度、及び投与経路に依存する。

１日当りの総投与範囲は、体重キログラム当り約０．０
１から約２００ミリグラム、好ましくは、体重キログラ
ム当り約０．１から約２５ミリグラム、そして、より好
ましくは体重キログラム当り約１から約１５ミリグラム
とすることができる。ヒト成人投与量は、１日当り約５
から約１４００ミリグラムの範囲で、単一投与又は３も
しくは４回に分けた投与により与えられる。家畜への投
与は、体重及び成人と比較した動物の代謝速度に比例し
た投与量を用いた、ヒトへの投与に対応している。

有効なインビボ濃度は、動物種毎に変化させることがで
きることは、当業者には認められるところであろう。ま
た当業者は、この適当な濃度が容易に決定しうろことを
知っている。

インビトロでの動物細胞の接触のための濃度は、ミリリ
ットル当り約１０６〜１０７細胞の細胞濃度に対し、約
ｌＸｌ０−”から約３Ｘ１０−’モル濃度である。この
濃度は、約１ｘｔｏ−５から約ｌＸｌ０−’モル濃度で
あることがより好ましい。

後に述べる結果のセクションからも分るように、与えら
れたグアノシンに対するピーク濃度、すなわち最も大き
いアジュバンティシティを提供する濃度は、マウス又は
ヒトのリンパ細胞システムで実験する場合、１０〜１０
０倍はど変化する。

組成物は固体でも液体でもよい。生理的に許容されるキ
ャリヤーは当分野でよく知られている。

液体キャリヤーの代表例には、活性成分グアノシン誘導
体及び水に加えてなんの物質も含まない、または、リン
酸緩衝液のような、生理的ｐＨ値、生理的イオン強度、
あるいはその両方のリン酸ナトリウムのようなバッファ
を含む無菌的水性溶液がある。さらに、水性キャリヤー
は、ナトリウム及びカリウムの塩化物、デキストロース
及びその他の溶質ばかりか、１つ以上のバッファ塩を含
むことができる。後者のキャリヤーは、リンガーズイン
ジェクション、デキストロースインジェクション、デキ
ストロース・アンド・ソディウムクロライドインジエク
ション及びラクテーティドリンガズインジェクションに
より例示される。

また液体組成物は、水に加えて、かつ水を除外するよう
に液相を含むこともできる。このような付加均相の代表
例には、グリセリン、綿実油、ゴマ油のような植物油及
び水−油エマルジョンがある。

代表的固体キャリヤーには、丸薬又は錠剤の製造で通常
使用される物質が含まれ、コーンスターチ、ラクトース
、リン酸二カルシウム、トラガカントゴム、及びメチル
セルロースＵ、Ｓ、Ｐ、のようなシックナー、５ｉｏｚ
ａ粉末、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸マグネシ
ウム及びそれに類するものがある。さらに固体キャリヤ
ーには、当分野でよく知られている、生分解性及び非生
分解性ポリマー、ポリペプチドキャリヤーＡＦＦＩ−Ｇ
ＥＬ　　６０１　　（カリホルニア、リッチモンド、バ
イオラドラボラトリーズ社から市販されているフェニル
ボロネートレジン）のようなアフィニティーキャリヤー
、リポソーム及び合成ポリマーがある。メチルパラヘン
及びプロピルパラヘンのような抗酸化剤は固液両組酸物
中に存在させることもできるし、また、ショ糖、又はテ
ンサイ１唐、サッカリンナトリウム、チクロナトリウム
及び　Ｇ、Ｄ、サール社から、商標ＮＵＴＲＡＳＷＥＥ
Ｔの名で販売されているジペプチドアスパラギン酸−フ
ェニルアラニンメチルエステル甘味料のような甘味料も
存在させることができる。

■　免疫促進法 白血球の免疫応答を増加させる方法も考案されている。

この免疫応答は、抗原特異的応答であることが望ましい
。本方法に従がい、Ｂ細胞、Ｔ＄１胞、好中球及びマク
ロファージのような白血球を、別々に、もしくは−緒に
、先に述べたグアニンヌクレオシド誘導体の免疫促進効
果■を含む、前述の組成物と、水性媒体中で接触させる
。

この方法は、インビボで、ヒト、マウス、ラット及びモ
ルモットような実験動物、あるいは、豚、馬、牛、犬及
び猫のような家畜及びペットに対して行なうことができ
る。またこの方法はモノクローナル抗体生産のためのハ
イブリドーマ培養物のような細胞培養物に対し、インビ
トロで行うこともできる。

グアノシン誘４体の組成物がそれ自体固体か液体かにか
かわらず、または、その組成物の液体が水性かどうかに
かかわらず、白血球は、水性媒体中で接触が行なわれる
。インビボ法の場合、その水性媒体は、少なくともその
一部が、血液又はリンパ液の水で供給される。インビト
ロ法の場合、その水性媒体は、少なくともその一部は、
使用した培養媒体で供給される。

その組成物と、白血球との接触は、接触を受ける細胞が
その免疫応答の増加を示すまで維持される。この免疫促
進は、それ自体、細胞増殖、抗体分泌の増加、Ｔヘルパ
ー活性の増加、Ｔ細胞及びマクロファージ由来のサイト
力イン生産の増加、好中球由来の酵素分泌及びそれに類
することにより明らかとなる。後に議論する結果は、ネ
ズミ牌細胞の非特異的マイトジェニック応答、ネズミＢ
細胞及びＴサプレッサー細胞を欠いたヒト末梢血液リン
パ細胞の抗原特異的応答、Ｔ細胞の抗原特異的増殖、ネ
ズミ免疫欠ｆＱ　Ｂ細胞における一次免疫応答のインビ
トロ再構成、ネズミＢ細胞における抗原特異的応答に対
するＴサプレッサー細胞置換活性及びネズミの抗体生産
の抗原特異的増加を示している。これら免疫応答の増加
は、本発明の方法の使用を説明するものであり、これを
制限するものではない。

インビボでの使用では、白血球及び至適濃度の組成物の
接触は、一般的に、その動物が代謝、排泄又はその両プ
１コセスにより体内からグアノシン誘導体が無くなるま
で維持する。ごの時間は免疫促進が表われるのに必要な
時間よりも長くなることもある。一般的に、個々の単位
投与との接触は、使用するキャリヤー又はビヒクルに依
存して、時間から約１週間以上までの期間維持される。

免疫欠損動物宿主には連続接触が有効である。インビト
ロでの接触は先に説明した免疫促進の１つが標準的検定
技術により明らかになるまで維持する。

一般的にこの維持時間には約１日から約７日間を要し、
より一般的には、約２日から約６日間である。

■　合成法 本発明はさらに９位窒素原子が反応から保護されている
７−アリル又は２炭化水素置換−アリル８オキソ、−８
−チオクツ又は８−セレノクツプリン誘導体の合成法も
考案している。特別に考案されているプリン誘４体は、
グアノシン、アデノシン及びイノシンもしくはそれらの
デオキシリポアナログの誘導体である。生成した最も好
ましいプリンは、グアノシン誘導体であり、以下にこれ
を詳細に議論する。

特別に考案されたプリン類に対する９位窒素原子は、保
護基を結合することにより、反応から保護される。もっ
とも好ましい保護基は、リボシル又はデオキシリボシル
基であり、またこのグアニンはそのリボシル又はデオキ
シリボシル基に９．１′−β結合している。その他の保
護基には、グリコジル及びアラビノシルのようなその他
の１グリコシド類、アセチル、ベンゾイル及びＬブチロ
キシカルボニルなどのアシルＨｉｄ及び各々ヘンシル及
びｃ２−ｃ６アルキルのような除去可能及び除去不能像
３ｉ７１が考案されている。９位保護基の特別な統一は
、その基がプリン分子の８位及び７位の反応を妨害しな
いかぎり、重要ではないと考えられている。同様に、そ
の他の置換基が、反応を妨害しない限ぎり、１位、２位
及び６位に存在することもできる。

本方法に従がい、プリン出発物質は、 Ｘ　　ＣＨｚ　ＣＲ＝ＣＦ（ｚ暴（式中、ＸはＯ，、Ｓ
又はＳｅ、　Ｒは水素原子、低級アルキル基又はベンジ
ル基）で８位が置換される。この８位置換プリン出発物
質を約５０°Ｃから約２００°Ｃの高温度に加熱する。

この高温度を、その８位置操出発物質が転移し、そして
（ｉ）８位が−Ｘ、％（式中の生産物におけるＸは、出
発物質におけるＸと同じである）により、かつ（ｉｉ）
７位が ＣＨｚ　　ＣＲ＝　ＣＨｚ　５　（式中、Ｒは、出発物
質におけるＲと同じである）により置換を受けたプリン
産物を生成するのに十分な時間（約１時間から約２週間
）維持する。産物７．８位二置換９位保護プリンＬＭ　
８体は、従来法で行うことのできる単離がなされること
が好ましい。

上述の反応は、反応条件に不活性な液体溶媒中に溶解も
しくは分散させたプリン出発物質について行うことが望
ましい。この目的のための代表的不活性液体溶剤には、
後の材料及び方法のセクションで説明されている、水、
ジメチルホルムアミド及びジメチルスルホキシドが含ま
れている。

出発プリン誘導体は単離精製した物質である必要はない
ことに注意せよ。むしろその存在は、転位ステップを通
して８−オキソ、８−チオクツ、又は８−セレノクツア
リル化合物の生成により与えられる粗反応混合物を持込
むことによるのと同様に、前駆体反応物及び最終産物の
構造から付随して推論することができる。

上記反応に有効な温度及びその維持時間は広（変化させ
ることができる。Ｘ＝０の場合の至適温度は約１００℃
、Ｘ＝Ｓ又はＸ＝Ｓｅの場合は約１３５°Ｃであるよう
である。硫黄アナログは、酸素又はセレニウムアナログ
の場合より長い反応時間を必要とした。

理論に束縛されると考えずに、ここに説明した反応は、
６員環中間物又は遷移状態を介して進行する転位である
と考えられている。この６員環は、プリン環の７位窒素
及び８位炭素原子、Ｘ　　ＣＨｚ　　ＣＲ＝　ＣＨｚ基
のＸ原子及び最初の３つの（線で描れた）炭素原子から
、出発物質の＝ＣＨ２炭素原子が、７位の窒素原子と結
合を形成することで環を閉じることで形成されると考え
られている。

本発明のこの態様の別の特徴には、この転位がテトラヒ
ドロフラン（沸点６５℃）ような比較的低い沸点の溶媒
中、二塩化パラジウム（１’ｄｃｌｚ）により触媒され
るということがある。非触媒転位の場合と同様に、−Ｃ
に、９位窒素原子に加え、糖環水酸基、６−オキソ（ヒ
ドロキシ）基及び２アミノ基のような、種々のグアノシ
ン上の反応性領域は、触媒転位の間、トリメチルシリル
基のような、適切な除去可能保護基で保護される。この
ような保護は非触媒反応には必要ない。代表的触媒転位
においては、 ９〜保護〜８−Ｘ−ＣＨ２−ＣＲ＝ＣＨ２グアノシン誘
導体出発物質を、触媒量のＰｄＣ１２と、触媒／グアノ
シンモル比を約１：１から約１：１０で混合し、ついで
この混合物を、テトラヒドロフランのような溶媒中、約
１０から約２０時間の適当な時間還流して、転位を効率
よく起こす。その後は、一般的に、反応産物を分離し、
回収する。

合成中、除去可能保護基が使った場合、一般的にこれら
の保護基を、目的とする ？−ＣＨ２−ＣＲ＝ＣＨ，−８−Ｘ−グアノシン誘導体
産物を回収する前に除去する。除去可能保護基として、
トリメチルシリル基を用いた場合、これらの基は、保護
産物を酢酸のような酸で処理することにより除去するこ
とができる。

後に示す例９の実験から分るように、この触媒反応は、
非触媒反応（３６パーセント）よりも高い収率で（４２
，５パーセント）　７　ａ　８　ＭＧｕｏを提供し、そ
れを、より短かい反応時間、すなわち１６時間対９日間
、及びより低い温度、すなわち、６５℃対１３０℃で行
うことができた。触媒反応に対しては、一般に、この転
位は約５０℃から約１００℃の温度で行なわれる。一方
、非触媒転位は、一般に約１００℃から約２００℃の温
度で行なわれる。

■結果 本発明の化合物、組成物及び方法を用いた独特の結果が
得られており、またこれらの結果はしばしば米国特許第
４，６４３．９９２号に公開されている化合物、組成物
及び方法を用いた同様の結果と比較されている。これら
の結果の大部分は、７−（２プロペニル）−８−オクソ
グアノシン（ここでは７−アリル−８−オクソグアノシ
ンとも呼ばれる）及び７−（２−プロペニル）−８−チ
オクツグアノシン〔ここでは７−アリル−８−チオクツ
グアノシンとも呼ばれる）を用いて得られている。

筒便のため、これら２つの化合物は以前に７−メチル−
８−オクソグアノシン（７ｍ　８　ｏ　Ｇｕｏ）、８−
メルカプトグアノシン（８ＭＧｕｏ）及び８−オクソグ
アノシン（８ｏ　Ｇｕｏ）に対して議論されたものと同
じ略記法を用い、各々７ａ８ｏＧｕｏ及び７ａ８ＭＧｕ
ｏと呼ばれる。比較のための化合物について用いられる
別の略記法には、８−ブロモグアノシンに対するｇ　−
ＢｒＧｕｏがある。

以下に議論されている結果は、断らない限り、本発明の
方法中で用いられる本発明の組成物中の、１つ以上の本
発明の化合物を用いて得られたものである。説明の簡潔
さ及び容易さのため、以後化合物だけでも、これら化合
物が、本発明の組成物及び方法において用いられること
の理解が必要とされる。

ここで議論され、又は比較される活性を持つ、各新規化
合物も５桁の確認番号が与えられている。

これらの数字は、化合物の合成を説明する例のタイトル
中にリストされている。５桁の数字そして、または、例
番号は、これら化合物を確認するのを助けるため、次の
表及び議論の中で用いられている。

Ａ　８位置換グアノシンの活性 先に示したように、種々の長さの千オニステルを有する
、本発明の一連の８位置換グアノシンのアジュバンティ
シティ及びマイトジエニシティーを試験した。これらの
実験結果を以下の第１表及び第２表に示した。裏全体に
わたる横線は、互いに別々の実験を区っている。

８ＭＧｕ。

第 表 ８−チオエーテルグアノシン１の 抗原特異的アジュバンテイシティ ３Ｘ１０−’ ５２７±２５　１１．０００±１４０ １、　マウス由来の白血球培養物当りの直接的プラーク
形成細胞数で測定される羊赤血球（ＳＲＢＣ）に対する
アジュバンティシティーが示されている。操作の詳細は
材料と方法のセクションに記載されている。平均値から
の標準偏差が“士数字”で示されている。

２、　ヌクレオシドはその５桁番号で確認される。

８−チオ基に結合しているラジカル及び化合物合成の例
番号はカッコ内に示しである。

３、　白血球が接触する水性媒体中の、モル濃度で表わ
されたヌクレオシドの濃度。

４、近交系マウス系列ＣＢＡ／ＣａＪ又はＣ５７ＢＬ／
６Ｊ由来のリンパ細胞を用いた。

第 （シンナミル；１１） ３Ｘ１０−’ Ｏ−３ 表 １６００±９０ １３００＝８０ １７００±２８０ １、材料と方法のセクションで議論されている条件を用
い、細胞培養物当りの、カウント７分（ｃｐｍ）を測定
することによる（’ＩＩ）　ＴｄＲ（１−リチウムラベ
ル　チミジンデオキシリボヌクレオシド）取り込みによ
り測定したマイトジェニシティー ２、．３．　　第１表の脚注２及び３参照。

（２−ブテニル；３） １０−′ ３Ｘ１０−’ ４５００±１２０ ８８００±２００ １１　、２００±２０２ ２Ｏ２８゜ コン［ロー１ｔ （ヌクレオシＦ　なし） （７リル　；９） ８ＭＧｕ。

コントロール ３Ｘ１０−’ １０づ （ヌクレオシＦ　なし） ４１．１００±３９０ ２１００±６０ ２７００±１３０ ４１００±７０ １６．４００±１１３０ ２５２００±９５０ ２４００±９０ 上記結果は、置換基の長さが増すにつれ、８位置換グア
ノシンの活性は、８−硫黄原子が水素原子のみに結合し
ている８ＭＧｕｏに対して減少することを示している。

従って、８−（２−ブテニル）誘導体（２２４３５）の
抗原特異的アジュバンティシティーは、より長い８−シ
ンナミル誘導体（２２３５９）よりも大きいが、８−メ
ルカプト化合物（８ＭＧｕｏ）よりも小さかった。８−
アリル誘導体（２２３００）は、指示されている濃度の
場合、８ＭＧｕｏのアジュバンティシティと程同じ活性
を示した。同化合物のマイドジェニシティの結果は８位
置換基がより長くなるにつれ、徐々に低活性となるとい
う傾向がより顕著になることを示した。

Ｂ・　アジュ″ンテイシテイ及び マイトジェニックィ 本発明の化合物、組成物及び方法は、マイトジェニック
及びポリクローナル応答、及び活性が第１表及び第２表
で示されている化合物のアジュバンティシティーを誘導
及び増強するのに有効である。本発明のマイトジェニッ
ク性及びアジュバント性はマイトジェニック及びポリク
ローナル応答がしばしば同期して起こる少なくとも２つ
の別々の経路から生ずると考えられている一方、アジュ
ハンティシティーの結果は、しばしば異なる。例えば、
グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）等、ジャーナル・オブ・
エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ、　Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、）、１４７，８００　（１９７８）及びマツキ
ンタイヤ−（ＭｃＩｎｔｉｒｅ）等ジャーナル・オプ・
イムノロジー〇、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　１１７　、　
６７４（１９７６）参照。同様の差異について、いくつ
かが米国特許第４，６４３．９９２号に議論されている
。

また、この活性の非共役性は、以下の第３表及び第４表
結果からも分るように、ここで議論されている化合物の
いくつかについても示されている。

第 表 第 表 コントロール （ヌクレオシＦ　なし） １６４０±５０ １、　ヒトのリンパ細胞調製物を用いること以外は、第
１表と同様の方法で実験を行った。

２．３．第１表の脚注２及び３参照。

１、　２．　３　　第２表の脚注１，２及び３参照。

第４表に示した結果は、７−メチル、７−エチル、７−
アリル及び７−ブチル−８〜オクソグアノシンは全て、
同濃度範囲に渡り゛、ネズミ系でほぼ同じマイトジェネ
シティーを示すことを表わしている。しかし、ヒト系に
おけるアジュバンティシティを試験したとき（第３表）
、本発明の化合物（７−アリル−及び７−ブチル−８−
オクソグアノシン）は７−メチル−８−オクソグアノシ
ン（７ｍ　８　ｏ　Ｇｕｏ）に比べ約１００パーセント
増のピーク値を示した。興味深いことに、本発明のグア
ノシン誘Ｆ体の存在下で増強されたアジュバンティシテ
ィを示す、第３表で用いたものと同タイプの細胞である
、ヒトの末梢Ｂ細胞はどのグアノシン誘４体の存在下で
もマイトジェニック応答を示さない。上記の結果及びア
ジュバント応答を示すヒトの細胞がマイトジエネティシ
ティを示さないということは、マイトジェニシティ及び
アジュバンティシティは必ずしも関連しておらず、かつ
異なる経路で進行しうろことを確かにしている。

Ｃ０アジュバンティシティ実験 白血球起源として、ヒト及びネズミの白血球を用い、多
数のアジュバンティシティの比較が、本発明からはずれ
る新しい化合物と同時に、本発明の化合物を用いて行な
われた。達文系ヒトの場合は別にしても、近交系マウス
由来のものでさえ、リンパ細胞応答に差があることから
、これらの結果は与えられた実験内で同実験で用いた化
合物及び各実験のコントロールに対して、最もよく比較
が行なわれた。しかし、各実験間の比較も、その傾向や
、大きな差異を示すのには有効である。後に示す第５．
第６及び第７表は、ピーク濃度の時の活性のみが各化合
物について示され、かつそのコントロールの結果を省い
た、実験の代表的データを提供している。各実験の結果
は、表を横切る水平線で区切っである。

第　　　５　　　表 ネズミ系におけるアジュハンティシティ１７ａ８ＭＧｕ
。

３Ｘ１０−” １８５０±７０ ７ｍ８ｏＧｕ。

３Ｘ１０−’ ７２３±１４３ ７ａ８ｏＧｕ。

（エチル；　６） １．２．第１表の脚注１及び２参照。

３６．与えられた実験における培養当り最も大きいプラ
ーク数を提供する濃度は、記号（＊）が上清至適濃度を
用いたことを示すのに用いられている場合以外は、報告
されている値である。

＃　示さ′れている培養当りのＰＦＣピーク数は、コン
トロールよりも小さく、それゆえ、実効的に、培養当り
のＰＦＣの増加はゼロとしている。

（デシル；　７） ８ＢｒＧｕ。

２４５０±３２５ ７ａ８ＭＧｕ。

３Ｘ１０−” ９２５±８０ 上記表の結果は、いくつかの特徴を示している。

第１に、本発明の化合物は、比較した米国特許第４．６
４３，９９２号で公開された化合物よりも活性が高い。

活性の改善は、約０．５から１対数単位（１０倍）低い
、ピークアジュバンティシティ観測時の濃度、またはそ
の特許の化合物が示すものよりも通常少なくとも約１０
０パーセント高いことで示される、有意に高い、与えら
れたピーク濃度でのアジュハンティシティに表われてい
る。

改善したアジュバンティシティは、？　ａ　８　ＭＧＬ
ＩＯ％７ｍ８ｏＧｕｏ及び７−シンナミル−８−オクソ
グアノシン（２２８２７）を比較した第５表の第１グル
ープの化合物に見ることができる。これから分るように
、７３８ＭＧｕｏは、１００倍低い濃度で７ｍ８ｏＧｕ
ｏより１００パーセント以上大きい活性を有していた。

７−シンナミル−８−オクソグアノシンは、同様のピー
ク濃度において、７ｍ８ｏＧｕｏよりも約１００パーセ
ント以上大きい活性を有していた。同様の結果は、第５
表の下の方に示されているが、ここでは３−１３ｒＧｕ
ｏと７エチルー８−オクソグアノシンを比較しており、
両化合物は培養当り同数のプラーク数を有していたが、
後者の化合物は１．５対数単位低い濃度でこの値を示し
た。後に論議される他の研究から、７エチルー８−オク
ソグアノシンで示された結果は、例外的に高いことが分
る。） ７−デシル−８−オクソグアノシン（２３８９４）の使
用により示された培養当りのＰＦＣ値の増加が実質的に
ゼロであったことは、デシルラジカルの長さ以下のＲ１
基の基準を提供している。

以下の第６表に示した結果は、第６表の免疫促進剤がリ
ボシル水酸基及びいくつかのＩＱ上部位における、さら
にいくつかの置換基を有すること以外、第５表の結果と
同様にして得られた。

第　　　６　　　表 ネズミ系における付加的リボシル置換に関するアジュハ
ンティシティーの実ｕ’７ａ８ＭＧｕ。

３Ｘ１０−’ ２１５０±２５０ １８６７±１５０ ２３３５１　　”　　（２１） ２３３１４　　ｂ　（１９） ２３３５０　　’　　（２０） １４３１±１３４ ２４３±１９ ４５±８ ８ＭＧｕ。

３Ｘ１０−’ ７４３±４８５ ５２７±２５ １．２，３．７位置換基名が、化合物上の他の置換基の
存在のため省かれており、その結果、他の表中の外見上
同様の記入事項との混乱を避けている事以外は、第５表
の脂性の１．２及び３を参照せよ。

４、実験を２回行ない、第１番目の数字は第１回目の実
験、及び第２番目の数字は第２回目の実験のものである
。

５、示されている値は、ここでの他のデータからみて例
外的に低けようである。例えば第８表参照。

ａ、　　ｂ、　　ｃ　　別個の実験で、化合物２３３５
１゜２３３１４及び２５３５０各々を７　ａ　８　ＭＧ
ｕ。

と比較した。各実験からの結果は、適当に、ａ、ｂ又は
Ｃと名付けた。

＊　至適過剰量の７ａ８ＭＧｕｏを実験すでは用いた。

第６表の結果は、先に説明したように７位及び８位に置
換を受けたグアノシンも、もしそのリボシル水酸基が置
換基を有しているならば有効となりうろことを示してい
る。したがって、イソプロピリデン環内に２′−及び３
′−水酸基が結合している７−アリル−８−チオクツグ
アノシン（２３０８３）は、約０．５対数単位高い濃度
であったが、７ａ８ｏＧｕｏと実質的に等しい活性を示
した。同様に、そのイソプロピリデン誘専体の５　′−
アセチルエステル（２３２８７）も、約０．５対数単位
高い濃度でピーク活性を示した、８−ブロモグアノシン
の約２倍のピークアジュバンティシティを示した。

その５′−アセチル（アセトキシ）基をヘンジイル（ベ
ンゾキシ）基と置換した場合（２３３５１）、同様の結
果が得られた。興味深いことに、化合物２３３５１の２
位アミノ基に、さらにベンゾイル基が付加したとき、生
成した化合物（２３３５０）は、実験に用いた濃度で実
質的に不活性であった。

リボシル基の２′−１３′−及び５′−水酸基金てをア
セチル化したとき（化合物２２３６０）、この化合物は
高い活性を維持した。後述する第８表に示した結果は、
このトリー〇−アセチル化合物は、特に低い濃度で実験
した全ての化合物の中で最も活性があることを示してい
る。

以下の第７表に示した結果はヒトのリンパ細胞を用いた
こと以外は、先に議論した結果と同様に得られた。これ
らの実験のいくつかは、１Å以上のヒトに由来するリン
パ細胞は使用しており、それゆえ多数の実験について報
告されている。

第　　　７　　　表 ヒト系におけるアジュハンティシティ実験第 表（続き） ２３６４４　（ブチル；２）　　３Ｘ１０−’３３７１
責１２０ ７ａ８ｏＧｕｏ　　　　　３Ｘ１０−’　　　　　　　
　４０７９±１０２７ｍ８ｏＧｕ。

２３６４３（エチル；６） ？ａ８ｏＧｕ。

２３６４４　（ブチル；２） ３Ｘ１０−’ ３Ｘ１０−’ ３Ｘ１０−’ ３Ｘ１０−’ ０５８ｅ ５７７５±２１４ ９０４５±３１０ １１．９３８±７６２ １２．２３８±１５０ ７ａ８ｏＧｕｏ　　　　　３ＸｌＯ−’　　　　　　　
　７０７５±２６０７ｍ８ｏＧｕｏ　　　　　　１０−
’　　　　　　　７８０土１４２１．２．３．７−置換
基名は、糖環置換基も存在する場合省略すること以外、
第５表の脚注１゜２及び３を参照せよ。

ａ、ｂ、ｃ、化合物は、ａ、ｂ及びＣと命名された三人
のヒト由来のリンパ細胞調製物を用いて比較した。それ
ゆえ、化合物の比較は所定のリンパ細胞調製物を用いて
行った。　ａ”の結果は、“ｂ”及び“Ｃ”の場合と同
様、それ自身の中で比較する。

第７表における結果は、ヒト系における７−メチル−８
−オクソグアノシンと比較した本発明の化合物の効果の
増加を示している。また、これらの結果はヘキシル基よ
りも短かい７位置換基の優先性を示している。従って、
ヘキシル基より長い７−シンナミル−８−オクソグアノ
シン（２２８２７）は、７ｍ８ｏＧｕｏと比較しては、
活性が高いが、？　ａ　８　ｏ　Ｇｏｏよりは実質的に
活性は低い。

７−位置換基がヘキシル基よりも短かく、かつ、エチル
基よりは長い、７ａ３ｏＧｕｏ、７−ブチル８−オクソ
グアノシン（２３６４４）及び７（２−ブテニル）−８
−オクソグアノシン（２３６７９）全てのアジュバンテ
ィシティの類似性も示されている。同様に、エチル基よ
りも長い７位置換基を有する化合物のアジュハンティシ
ティの増加は７エチルー８−オクソグアノシン（２３６
４３）と、７ａ３ｏＧｕｏ又は７−ブチル−８−オクソ
グアノシン（２３６４４）のアジュバンティシティを比
較することによっても分る。

Ｒ１ラジカルがエチル基よりも長＜、かつヘキシル基よ
りも短かく、かつリボシル基が未置換である本発明の特
に好ましい化合物及び７　ｍ　８　ｏＧｕ。

及び７−エチル−８−オクソグアノシンの間のアジュハ
ンティシティの差は、以下の第８表の結果から見てとれ
る。これらの結果は、ネズミリンパ細胞及び９個のグア
ノシン誘導体を用いて行ない、使用するのに望ましい比
較的低い濃度でグアノシン誘導体をリンパ細胞と接触さ
せる、より規模が大きく、単一の実験から得、られた。

これらの結果を、以下の第８表に示した。

第　　　８　　　表 ネズミ系における低濃度アブユバンティシティ実験１２
３９２４　（ヘキシル；４） ７ｍａｏＧｕ。

２３６４４　（ブチル；２） ２３６４３（エチル；６） ２３６７９　（２−ブテニル；３） ２４０６９（ブリピル；５） ７ａ８ｏＧｕ。

７ａ８ＭＧｕ。

１．２　　化合物２３３６０（７−アリル−８−チオク
ツ−２’、３’、５’−）リアセトキシグアノシンに関
すること以外、第５表の脚注１及び２参照。

３　モル濃度（Ｍ）で表わした化合物の濃度。

第８表の試験は、７−へキシル−８−オキソグアノシン
（２３９２４）は、より低い濃度で、７ｍ８ｏＧｕｏと
比較してほぼ等しい活性を示し、またより高い濃度で約
２倍の活性を示すことを明らかにしている。７−ブチル
−（２３６４４）、７−ニチルー（２３６４３）、及び
７−（２−ブテニル）−８−オクソグアノシンは全て、
低い濃度で７ｍ３ｏＧｕｏの少なくとも約２倍の活性を
示し、より高い濃度では、７−ブチル−及び７−（２−
ブテニル）−８−オクソグアノシンは、７−エチル−８
−オクソグアノシンに比べ、約１００から２００パーセ
ントのアジュバンティシティの増加を示している。

７−ブロピルー８−オクソグアノシン（２４０６９）及
び７ａ８ｏＧｕｏは、７ａ８ＭＧｕｏ及びその２’、３
’、５’−トリアセチル誘導体（２２３６０）同様に、
全て、７−エチル−８−オクソグアノシンよりも数倍の
アジュハンティシティ活性を有しており、また、７ｍ８
０ＧｕＯと比較してもなおより大きい活性を有している
。

第８表のより高い濃度での７位置換８−オクソグアノシ
ンに対する第８表のマイクロモル当りの値（ＰＦＣ−コ
ントロールＰＦＣ）データの、プロピル基よりもわずか
に長いアリル基及びブチル基よりもわずかに長い２−ブ
テニル基で見た、置換中の最も長い炭素鎖の長さに対す
るプロットを第５図に示し、アジュバンティシティと鎖
長の関係を説明している。そこに見られるように、アジ
ュバンティシティは、３個以下の炭素の置換基、すなわ
ちメチル及びエチル基によっては、実質的により低い活
性が示され、約３個から約４個の鎖長でピークを示す。

ヘキシル基置換基はメチル及びエチル基と同様の活性を
示す。

７位置換基のおよその鎖長に基づく見かけの構造活性の
関係に関するこの知見は、全く驚くべきものであった。

Ｒ，ガロ（Ｇａ１）ｏ）　（ｒ物理有機化学の進歩４１
９８３年、ニューヨーク、ジョンウィリー・アンド・サ
ンズ社、Ｒ，タフト（Ｔａｆｔ）１４巻、１１５−１６
３頁）は、定量的に構造活性関係を議論しており、かつ
、クツｌ−Ｅｓパラメーターを用いて線型の、生物学的
システムにおける、いくつかの自由エネルギー関係式を
報告した。このＥｓパラメーターは、立体効果に対し、
相対的自由エネルギーを提供すると言われている。

例えば、ガロ（Ｇａ１）ｏ）の報告は、イソニコチン酸
ヒドラジド型抗結核剤の作用同様、α−ニドモトリプシ
ンのアシル化及び脱アシル化、ウサギにおける一級アル
コールからグルクロニドへの代ＦＡＩ、マウスにおける
アンフェタミンのロコモータ活性、フェニルホスフェー
トのジエチル置換体によるコリンエステラーゼ活性阻害
、フェノキシエチルシクロプロピルアミンモノアミンオ
キシダーゼインヒビター及びジフェニルヒドラミン抗ヒ
スタミン薬に対する線型のＥｓ相関関係を他の人が報告
していると報告した。（ガロ（Ｇａ　ｌ　ｌｏ）、１２
５頁参照） 従って、同様の相関関係が、Ｅｓ又は、ファンデルワー
ルス半径に基づくと言われており、カートン（Ｃｈａｒ
ｔｏｎ）により開発されたくジャーナル・オプ・アメリ
カン・ケミカル・ソサイアティ（Ｊ、　　八ｍ、　　Ｃ
ｈｅｍ、　　Ｓｏｃ、）９どし、　　　１５５２−１５
５６（１９７５））、Ｅｓ相関的立体パラメーターｎｕ
を用い本発明の免疫促進におけるグアノシンの７位置換
基に対しても見うけられることが期待された。しかし、
プロピル、ブチル、ペンチル及びオクチルのような直鎖
７位炭化水素置換基に対するｎｕ及びＥＳの試験は、こ
れら置換基に対し、ｎｕ値はすべて０．６８であり、一
方、Ｅｓ値は各々、−０，３６、−０，３９、−０，４
０及び−０，３３であった。ｎｕあるいはＥｓに対して
ＲＦＣ／培養値をプロットしたときは、線型とはならず
、この結果とこれら立体パラメータとの間に全く相関関
係が示されないとか明白となった。

さらに、カートン（ｃｈａｒｔｏｎ）　（ジャーナル・
オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ、　Ｏｒｇ、　
Ｃｈｅｍ、）↓上、２２１７−２２２０　　（１９７６
））も直鎖Ｃｑ　、ＣＩｌ、　　Ｃ１０，Ｃ１０及びＣ
Ｉ７アルキルラジカルに対し、０．６８のｎｕ値を報告
しており、このことは、もし、ここで研究されているア
ジュバンティシティーが以前に記述されている生物学的
プロセス同様相関関係をとりうるならば、７−ブチル基
及び７−デシル基は、同様のＲＦＣ／培養値を与えなけ
ればならないことを意味することに注目せよ。しかし、
実質的にゼロのアジュバンティシティを示す７−デシル
−８−オクソグフノシン（２３８９４）を・各々ｎｕノ
ぐラメータが０．５６及び０．７３である。第５表の中
間的活性をもつ７エチルー及び７−ヘキジルー８−オキ
ソグアノシン誘導体（各々、２３６４３及び２３６４４
）と比較したときでさえ、本発明の化合物で増加したア
ジュパンティシティは、ｎｕ又はそれに相関するＥｕパ
ラメーターとは相関しなかったし、また、アジュハンテ
ィシティを、各々パラメータから予想することもできな
かった。

また、さらに、より好ましい化合物、すなわち、Ｒ１が
エチル基よりも長く、ヘキシル基よりも短かく、かつ、
リボシル基が未置換のものの予想外の性質は、その投与
一応答曲線が７ｍ８０ＧｕＯで得た同様の曲線に比べ、
ピーク濃度付近でブロードになることである。このブロ
ードの応答は、上述の単一の値をとる表からは見てとる
ことはできない。

ある場合には、その広がりが、ピーク濃度よりも低い方
に向いているように思えるし、また、他の場合には、ピ
ーク濃度よりも高い位置を占めるようにも見える。この
投与一応答曲線の見かけの歪みは本実験で用いたヌクレ
オシド濃度が０．５対数単位変化した作用によるものら
しい。

この投与一応答曲線の見かけ上の歪みの理由にかかわら
ず、相対的幅の測定は、ピーク濃度におけるＰＦＣ値／
培養を含む、ピーク濃度の１対数濃度単位内で、０．５
対数単位毎のプラーク（Ｉ’ＦＣ／培養）平均値を加算
することにより得ることができる。それから得られた総
計を、３で割って、１対数単位平均値を得る。このよう
に、この１対数単位平均値は、ピーク濃度の両側の０．
５対数単位平均値に平均ピーク値を加算すること、もし
くは、ピーク濃度よりも１対数単位高い濃度から得た平
均値と、１対数単位低いン農度から得た平均値を平均ピ
ーク値に加算することにより得ることができる。平均プ
ラーク値を選択し最大総計を得、また、５ＲＢＣのみ存
在させた場合のハックグランド値は合計する前の各値か
ら差し引かれる。各値を、培養物中に存在するヌクレオ
シドのマイクロモル数で割り、１対数単位範囲で得られ
た三個の最大値を合計し、３で割って、マイクロモル当
りの１対数単位平均値を得る。

上述の計算を行ない、特定のグアノシン誘導体を用いた
種々の無関連実験に対して平均をとったとき、本発明の
より好ましい化合物に対する、マイクロモル当りの１対
数単位平均値は、７ｍ３ｏＧｕ□の値よりも非常に大き
いことが分る。これらの値の差は、ヒト及びネズミのリ
ンパ細胞両方で試したデータから見てとれる。代表的な
値を以下の第９表に示す。

化合物２ ７ａ８ｏＧｕ。

第　　　９　　　表 １対数単位平均値 ネ　　ズ　　ミ　３ ９８．２３７±４２，０４１ ヒ　　　ト　３ ２２、６４０±４１８７ ？　ａ　８　！、Ｉ　Ｇ　ｕ　。

７ｍ８ｏＧｕ。

３２６、８４０±１７０．９０７ ２２、３５９±５１５４ ４５、６３０±２８．８０８ ８６７±２１７ ２２３６０（２２）　　５３．６９５±２８．４４４　
　３８．５０８±２６．８０２１、値は上述のようにし
て得た。

２、第１表の脚注参照。

３、ネズミ；第１．　４．　５．　６及び８表に説明さ
れているようにネズミリンパ細胞系。ヒト；第３及び７
表に説明されているように、ヒトリンパ細物系。

＊　単一実験で得た値。

投与一応答曲線は、鋭すぎて、それゆえ、特定の受容体
への適当な投与ができない。例えば、第７表に示されて
いるヒト系のデータは、３人のヒト由来のリンパ細胞調
製物を比較するとき、実験化合物のピーク濃度が３〜１
０倍（０，５〜１対数単位）程度異なることを示してい
る。もし、投与応答曲線が挟ますぎるなら、一般に受容
者に対し通常選択される投与は特定の受容体には高すぎ
るか又は低すぎる。従って、ここでは、より好ましい化
合物に対するブロードな投与一応答曲線は、７ｍ８ｏＧ
ｕｏに比べより大きい利点を提供する。

第９表のデータは、７ｍ８　ｏＧｕ　ｏよりも約２５〜
約６０倍大きい、より好ましい化合物に対する値を示す
、ヒト系における１対数栄位平均値を示している。

さらに、第５図で示されているものと形が同じである構
造活性プロフィールがいくつかの実験で得られた同じ及
び別のグアノシン３Ｍ　’Ｓ体に対するピーク時のＰＦ
Ｃ／培養データを用いて得ることができる。ここでは、
各実験の単一ピークＰＦＣ値を用いる。この値は、この
実験で得られたコントロールのハックグランドプラーク
を差引いた後、得られた培養当りのＰＦＣ１直を、ＰＦ
Ｃ値を与えた実験中に存在する、グアノシンのマイクロ
モル数で割ることにより得た。それから、所定の化合物
を用５）で各実験で得られたピーク値を平均し、先に、
生ずることを注意した、実験毎の応答のゆらぎを減少さ
せる。

不ズミ系に対する、このような平均ピーク値のプロット
を第６図に示した。この図の横軸は、第５図に再記述し
であるように決定した。第６図中に示した平均ピーク値
は、その偏差に対して使用された、いくつかの実験間で
見られる応答のゆらぎのため、第５図のもの程精密では
ない。さらに、グラフ上のいくつかの点は、広く変化す
る結果を与えた単一又は二回の実験の結果である。たと
えば、２つのたいへん異なるピーク値から得られた、７
−ブチル−８−オクソグＴノシン（２３６４４）に対す
る平均ピーク値は、ネズミ系に対する第８表のデータ及
びヒト系に対する第７表のデータから、異常に高いと思
われる。従って、最も大きいビークＰＦＣ／培養値を与
える炭化水素置換基は、第５図よりも第６図におけるｌ
から２個の炭素長のものであるようである。それにもか
かわらず、第６図のグラフに見られる構造活性関係は、
そのデータが精密でかつ、直接比較できる第５図の関係
に実質的に似ており、それにより、第６図に示されてい
る結果には信用を置くことができる。この実質的に類似
する結果は、エチル基より長いがヘキシル基よりは短か
いＲ１基は、実質的に、かつ、予想できない程、７ｍ８
ｏＧｕｏと比較して、高いアジュハンティシティーを示
す。

７　ａ　８　ｏＧｕ　ｏが低いピーク濃度で予想外に高
いアジュハンティシティを示し、かつ、よりブロードな
投与一応答曲線を示すばかりか、７ａ３ｏＧｕｏは、７
ｍ８０ＧｕＯよりもヒトの尿に予想外によく溶ける。尿
における予想外に高い溶解性は、計算によるｐｉ定数に
基づく、水における予想される溶解度に反する。本発明
の化合物はその大部分が、投与された動物の身体から、
尿を介して排泄されることから、尿を溶解度実験に用い
た。尿への不溶性は、腎臓におけるその化合物の沈殿に
導き、つづいて、その器官に損傷を起こしうる。

ｐｉ定数は、■−オクタツールと水の間の分配係数によ
り決定される両溶媒における相対的溶解度の尺度である
。このｐｉ定数は、生物学的マクロ分子への結合及び生
物学的システムを介しての輸送の両方を互いに関係づけ
るための選択パラメータであると言われている。ノーリ
ントン（Ｎｏｒｒ　ｉｎｇ　ｔｏｎ）等、ジャーナル・
オブ・メディカル・ケミストリー（Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃ
ｈｅｍ、）　１８　、　６０４（１９７５）。

ｐｉ定数パラメータは、レオ（Ｌｅｏ　）及びハンクス
（ｌ１ａｎｓｃｈ　）及びその共同研究者により開発さ
れた。例えば、レオ（Ｌｅｏ　）等、ケミカル・レヴユ
−（Ｃｈｅｍ、　Ｒｅｖ、　）、　　７１．　５２５（
１９７１）及びＣ，ハンクス（１ｌａｎｓｃｈ　）及び
Ａ、レオ（Ｌｅｏ　）、　　“化学における相関定数の
ための置換定数”、ウィリー・インターサイエンス、ニ
ューヨーク、１９７９参照。

ギリシャ文字（π）で普通示される、ｐｉ定数は、一般
式 ％式％ （式中、ＰＸは目的の化合物に対する分配係数で、ｐＨ
は、対応する未置換化合物に対する分配係数）で計算さ
れる。別の無関係な化合物の置換基群のｐｉ定数が１度
得られれば、それらに無関係な化合物の分配実験を行う
ことなしに、これらの置換基をもつ、別の無関係の化合
物についてもそれらを用いることができる。置換基とし
ての水素は：ゼロという値が与えられる。

上記の式から決定できるように、水中での溶解度がより
大きい置換基は、相対的により負のｐｉ定数値を与える
。逆に、■−オククノール溶解度が大きい置換基は、相
対的により正のｐｉ定数を与える。

上述のハンクス（ｌ１ａｎｓｃｈ　）及びレオ（Ｌｅｏ
　）の報告に見られるｐｉ定数はメチル基については０
．５６、アリル基については１．１０である。従って、
アリル基を有する化合物は、メチル基を有する同様の化
合物に比べ、■−オクタツールに対し、よりよく溶解す
ることが予想される。逆に、所定の化合物上のメチル基
の存在は、メチル基の代りにアリル基を有する同様の化
合物に比べ、より大きい水溶性を与えることが予想され
る。

上述のｐｉ定数からｌｏｇ　Ｐ・値を計算するゲムラブ
（ＣｈｅｍＬａｂ　）コンピュータプログラムのＬＳＥ
オプションを用い、７ｍ８ｏＧｕｏ及び７ａ８ｏＧｕｏ
のｐ＋定数を計算することにより、各々Ｘがメチル基又
はアリル基の場合の、ｌｏｇ　Ｐイ値は、各々−８，４
３及び７．４６である。このコンピュータプログラムは
、Ｒ，Ｆ、　　レッカー（Ｒｅｋｋｅｒ　）　（（１９
７７）　　”疎水性フラグメント定数”、ニレスピア版
、ニューヨーク）の弐ヲ利用している。このようにして
、ｐｉ定数の使用は、７ｍ８ｏＧｕｏ、７ａ３ｏＧｕｏ
に比べより大きい水？容性を予想している。

７ｍ８ｏＧｕｏ及び７ａ３ｏＧｕｏの、ヒト尿に対する
溶解実験を行うと、各々、４．８８ｍｇ／ｍｌ及び１６
．３　ｍｇ／ｍ１．であることが分った。従って、７ａ
８ｏＧｕｏは７ｍ８ｏＧｕｏよりも３倍大きい溶解度を
有していたが、ｐｉ定数解析からは、より溶解性が低い
と予想された。尿における溶解度は、水におけるよりも
尿中の方がより高い塩含量があるため、水に対するより
もより低いことが期待しつる。

７ａ８ｍＧｕｏ又はここで公開されているその他の化合
物のｐ１定数解析は行なわれていない。

ヒトの尿を用いた、上述の溶解性実験は？ａ８ｍＧｕｏ
を含んでおり、この化合物は、硫黄原子の存在から予想
されたように比較的不溶性であることが分った（０．３
０　ｍｇ／ｍｌ）。

上述の溶解性実験は、３７℃、約１８時間、ヒトの尿中
過剰量の各化合物を撹拌することにより行った。サンプ
ル容器は混合前に、アルゴンガスを吹き込んだ。各サン
プルは５ミクロンポアサイズのフィルターに通し、ＨＰ
ＬＣの移動相で必要なだけ希釈し、それからＨＰＬＣで
定量した。

Ｄ、Ｔ細胞置換活性。

抗体応答におけるＴ細胞の代りに、Ｔ依存抗原を使用し
うる、本発明の組成物の能力を第１図に示した。ここで
、モノクローナル抗Ｌｈｙ　　１．２と補体での処理に
よる、インビトロで生成したＢｉ■胞を、７ａ８ｏＧｕ
ｏの徐々に高めた濃度の各組成物の存在下、抗原として
５ＲＢＣの有無の条件下で培養した。

第１図のデータは、これらの条件下では、単離されたＢ
細胞培養物の抗原に対する応答は、７．１３ｏＧｕｏが
補なわれないかぎり乏しいことを示している。７ａ８ｏ
Ｇｕｏ調節応答は、抗原依存であると同時に、投与量依
存であった。さらに、この応答は抗原の削除が応答を著
しく減少させることから、Ｂ細胞の非特異的ポリクロー
ナル活性化に寄因させることはできない（点線）。

５ＲＢＣに対する正常な肺細胞の応答は、培養当り、約
２００から約６００　ＰＦＣの範囲であった。

第１図のデータは、インビトロでのＢ細胞の、本発明の
組成物との接触は、それら接触細胞へ、Ｔ細胞様のシグ
ナルを提供することを示している。

また、ごれらの結果は、その結果がグアノシンヌクレオ
シド誘専体に関して、抗原依存的でかつ投与量依存的で
あることを示している。

Ｅ、−人体液性免疫応答のインビトロ再構成第１図のデ
ータに用いたＢ細胞は、免疫担当細胞であり、ＣＢＡ／
ＣａＪマウス由来のものである。

ＣＢ　Ａ／Ｎマウスは、Ｘ染色体性−次Ｂ細胞免疫不全
であり、それにより、性染色体性免疫不全のネズミモデ
ルとなりうる。

ＣＢＡ／Ｎ株は、Ｌｙｂ　３　／　５　／　７抗原を有
する成ｐ３リンパ１＋１１胞の亜集団の機能活性を欠い
ていると考えられている。フーハー（１）ｏｂｅｒ）等
、ジャーナル・オフ・エクスペリメンタル・メディシン
（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、）、　　１４５．　１　　（１
９７７）　　、アーメド（八ｈｍｅｄ）等、ジャーナル
・オフ゛・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ、　Ｅ
ｘｐ、　Ｍｅｄ、）　。

１４５、Ｌｏｔ　　（１９７７）　、及びスハロ（Ｓｕ
ｂｂａｒｏ）、ジャーナル・オフ・イムノロジー（Ｊ、
　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）±２２．２２７９　　（１９７９
）参照。

雄及び雌の同型接合型ＣＢ　Ａ／Ｎ及びｘｉｄ遺伝子と
呼ばれるＣ　Ｂ　Ａ／Ｎ遺伝子に異型接合型雄マウス（
雄マウスはＸ染色体を有している）由来の胛）′ＩＵ胞
の培養物を、材料と方法のセクションに説明されている
ようにして調製した。

０．１パーセント（ν／ν）ＳＲＢＣサスペンションの
みもしくは、これに種々の量の７ａ８ｏＧｕ。

を加えたもの、０．１ミリリツトルを５ＸｌＯ’細胞／
　ｍｌの培養物に添加した。４日間の培養後、培養物当
り直接的抗５ＲＢＣプラーク形成値を検定した。

ＣＢＡ／Ｎマウス由来の細胞を、ＣＢ△／ＣａＪマウス
由来の肺細胞調製物と比較する本実験の結果を第２図に
示す。グアノシンｊＡ　’５体濃度ゼロ時の第２図のテ
スト値は、ＣＢＡ／ＣａＪ免疫（Ｕ当細胞の約２５０Ｐ
ＦＣ／培養に対して、実験的に応答は無かった。

さらに、この図のテス１−は、ＣＢＡ／ＣａＪ免疫担当
細胞及び、本来免疫担当細胞であったＣＢＡ／Ｎの両方
とも、７ａ８ｏＱｕｏの存在下で同数のＰＦＣ／培養値
を生じうろことを示している。

驚くべきことに、この同し値は、ＣＢＡ／ＣａＪ及びＣ
Ｂ　Ａ／Ｎに対し、各々、１ａ８ｏＧｕｏｉＱ度１０−
５Ｍ及び３Ｘ１０−５Ｍという、０．５対数型位異なる
７　ａ　３　ｏＧｕｏを含む組成物を細胞と接触させる
ことにより得られる。

それにより、第２図のデータは、Ｘ染色体性免疫不全肺
細胞を、本発明の組成物と接触させることはその他の免
疫不全細胞の５ＲＢＣに対する一次体液性免疫応答を再
構成することができることを示している。

他のホ乳動！Ｉ′７Ｊ同様、マウスの免疫不全性は、第
２図に関して先に議論したように遺伝子欠陥によるもの
と同（ｐに、老玲又は老衰から起こる。従って、若年又
（よ成人のように免疫性を有する動物は、それらが老年
に到達したときに免疫不全となりうる。このごとは近交
系ＣＢＡ／ＣａＪマウス株の場合である。

さらに、５ＲＢＣに対する−次体液性抗体応答の再構成
の研究は、年令により免疫不全となった、退会１５６の
老令ＣＢＡ／ＣａＪマウス由来の肺細胞を用いて行なわ
れた。プラーク形成検定における、５ＲＢＣに対する、
これら肺細胞のインビトロでの応答を、健康で成熟した
退会８のＣＢＡ／ＣａＪマウスのグループの同様の応答
と比較した。

この比較は、７ａ８ｏＧｕｏを含む組成物を、肺細胞と
接触させるのに用いて、第２図に関して先に述べた方法
で行った。この結果を、第３図に示す。

第３図のテストから分るように、５ＲＢＣは含むがグア
ノシン誘扉体は含まない、健康な成熟マウスコントロー
ルのＰＦＣ／培養は、５ＲＢ（、＆びグアノシンの非存
在下で生成した数の数倍であった。老令マウスのコント
ロールのＰＦＣ／培養は両方ともほぼ等しいという、こ
れらマウスに対しては通常のものであり、また、健康な
成熟マウスのものに比べると多かった。これらの増加及
び同様の応答は、自己抗体形成りローンの生成によるも
のと考えられている。

さらに図の実験は、３及び１０マイクロモル濃度（８Ｍ
）の両７ａ８ｏＧｕｏの存在下での５ＲＢＣに対するグ
アノシン誘導体投与関連応答を示している。この応答は
、免疫性健康成Ｗ１マウス牌細胞及び元来免疫不全であ
ったが現在は一次体液性応答が再構成された老令肺細胞
の両方について観察された。

それゆえ、第３図に示される結果は、免疫不全老令肺細
胞の、本発明の組成物との接触は、この欠失した免疫応
答を再構成することができる。第２及び第３図のデータ
は、Ｘ染色体性及び老令性免疫不全の両方での再構成を
示している。

Ｆ、インビボにおける抗体応答 ＣＢＡ／ＣａＪマウスを、ｐＨ６，９の０．２８モル濃
度カコジル酸バッファ中の２．４．６−ドリニトロヘン
ゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）及びウシ血清アルブミン（
ＢＳＡ）の反応から合成した結合体（ＴＮＰ−ＢＳＡ）
を用い、腹腔内注射（ｉ　、　ｐ　、）により免疫化し
た。各動物は、免疫化結合体５０マイクログラム（μｇ
）を含む腹腔内注射を受けた。その後、マウスの一群に
（約３０分以内）１００パーセント綿実油又は、食塩水
中２パーセント（体積）綿実油を含むものを超音波処理
した水性組成物中７ａ８ｏＧｕｏを含む別のｉ、、。

注射を行った。各動物は、７ａＢｏＧｕｏＦｆ度５■／
　ｍｌの組成物０．２　ｒｒｌ、を注射された。マウス
の第３のグループは、免疫化はされたが、本発明の組成
物は受けず、コントロールとして使った。その後、各グ
ループからの抗ＴＮＰ−ＢＳＡ抗体分泌を抗原として、
ＴＮＰ−ＢＳＡを用いた標準的酵素結合免疫吸着検定法
（ＥＬＩＳＡ）により、３７日間にわたってモニターし
た。

この実験の結果を第４図に示し、コントロール値に対す
る７ａ８ｏＧｕｏ含有組成物を用いて得られたＥＬ　Ｉ
　ＳＡ抗体値の比として表わした。第４図から分かるよ
うに、７ａ３ｏＧｕｏを含む組成物の使用は、測定した
最初の日（投与後９日目）から、実験の最後（投与後３
７日目）まで、コントロールよりも高い抗ＴＮＰ−ＢＳ
Ａ抗体値を与えた。

第４図には示されていない特徴には、コントロール抗体
値は、投与後約２週間目にピークに達し、その後減少し
はじめることである。逆に、７ａ３ｏＧｕｏを受けた動
物の抗体値は、投与後約２週間を通して増加し、その後
実験の期間中、同じ高いレベルを維持した。従って、実
験に入って２週間目に取られたデータの後、第４図のデ
ータは、７ａ８ＭＧｕｏ投与後の抗体値は比較的−定し
、かつ、コントロールは減少していく様子を示している
。

Ｇ、Ｔヘルパー細胞の活性化 外来もしくは修正した自己の主要組織適合性複合体（Ｍ
ＨＣ）決定因子で活性化したＴリンパ細胞は自己完全性
のコントロールに関連する重要なエフェクター細胞性を
示すと考えられている。つまり同種移植拒絶反応及びウ
ィルス的又は化学的に修正した自己構造の排除はこの防
御メカニズムの臨床的例である。アロ抗原存在下でのＴ
細胞増殖は、Ｔヘルパー活性及びその増加に対する相関
関係を提供することができる。ボハー（Ｐｏｂｏｒ）等
、スカンジナビアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー
（Ｓｃａｎ、Ｊ、１ｍｍｕｎｏ１．）、　　１８．２０
７−２１５（１９８３）。アロ抗原存在下、及び本発明
のグアノシン誘導体有無におけるＴ細胞増殖実験を行な
い、以下に議論している。

アロ抗原誘導の増殖に関するグアノシン誘導体の効果を
評価することにおいて、グアノシン誘導体を接触するＢ
細胞の同期的なマイトジェニック応答を最小にすること
は絶対に必要である。

ＳＪＬマウス由来の肝細胞（このＢ細胞はグアノシン誘
導体のマイトジェニック効果に対して減応答性であるが
、そのアジュバント活性についてはそうではない）を、
２つの実験における応答細胞として用いた。これらの応
答細胞を本発明のグアノシン誘導体７Ｍ８ｏＧｕ○の非
存在又は徐々に増加させた条件下、照射した同種異型の
細胞（ＣＢＡ／ＣａＪマウス由来）もしくはホジティブ
コントロールとして用いる、別のグアノシン誘導体、８
ｍＧｕｏを使用して、刺激した。

刺激化（応答）細胞として、ＣＢＡ／ＣａＪマウス由来
の胸腺細胞及び刺激化細胞として照射ＢＤＦ、マウス牌
細胞を使用して第３及び第４の実験を行った。これらの
実験には、本発明の２個のグアノシン誘導体７　ａ　８
　Ｍ　Ｇ　ｕ　ｏ及び７　ａ　８　ｏＧｕ。

を用い、そのうちの１つの実験では、ポジティフコント
ロールとして役υ１を果たす８　Ｍ　Ｇ　ｕｏを用いた
。

胸腺細胞は、同種異型細胞に著しい応答を示さない未成
熟のＴ細胞が大部分である。しかし、インターロイキン
−２（ＴＬ−２）の存在下、これらの細胞は同種異型の
刺激に対して応答を示す。

それ故、胸腺細胞を用いた本実験は、共刺激量のＩＬ−
２存在下で行った。

４回のＴ細胞増殖実験の結果を下の第１０表に示す。各
々の実験は別々の細胞群を使用しているので、その結果
は各実験内でのみ比較するのが好ましい。

第 表 第　１０　表（続き） 混合白血球培養におけるＴ細胞増殖１ ＋ ＋ １０−’（７ａ８ｏＧｕｏ）１０．０００±８００＋ ＋ １０−”（８！’ＩＧｕｏ） ３０．８００±１３００ １、　プラス記号（＋）は、培養培地中、カラムヘッド
の物質の存在を指示するのに使用されている。一方マイ
ナス記号（−）は、培養培地由来の物質の不在を示すの
に使用されている。使用されている操作及び培養培地の
詳細は材料と方法のセクションに与えられている。

２、増殖検定を受けた細胞。

３、　２５００　ｒａｄの照射後、増殖の共ｉ１Ｊ激化
に使用した同種異型細胞。

４、　ヌクレオシド濃度は、欄中の数字のモル濃度で示
されている。カッコ内の略号、７ａ８ｏＭＧｕｏ。

７ａ８ｏＧｕｏ及び８ＭＧｕｏは、他所で説明したとお
りである。

５、〔３Ｈ′ＪＴｄｒのカウント７分で表わされる取込
み量。

上記の表で示されている結果は、Ｔ細胞含有応答細胞群
を、同種異型刺激細胞の存在下、本発明の組成物と接触
させることはこれら応答細胞の増殖を増加させることを
示している。この誘導されたＴ細胞の増殖は、グアノシ
ンヌクレオシド誘導体が存在しないとき、同種異型細胞
それ自身により引き起こされる増殖効果より大きい。さ
らに、一般に、従来から知られている化合物、３ＭＧｕ
。

を用いたとき見られる効果と比べた、本発明の化合物を
用いたとき見られる効果の実験内圧１校は、本発明の化
合物を使用したとき、予期できない増加を示した。

本発明を一般的に説明してきたので、より深い理解が、
説明の目的で以下に提供される合成及び操作を参照する
ことで得ることができる。

■、　材料と方法 へ合成 例１゜ ７位炭化水素置換−８−オクソグアノシン類の合成の一
船釣摸作 １−アミノ−８−オクソゲγノシン（以後化合物Ａ〉を
２ステップ操作を用いたいくつかの合成の出発物質とし
て用いた。この物質は基本的に、リズカラ（Ｒｉｚｋａ
１）ａ）等（バイオヒム、バイオフィズ、アクタ（Ｂｉ
ｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、）、１９
５゜２８５−２９３　　（１９６９）’）により報告さ
れている方法で合成した。

ステップ　１゜ ジメチルホルム了ミド（ＤＭＦ）中の化合物Ａの溶液に
、２５０ミリリツトル（ｍｊ２）　ＤＭＦ中３３ｍＭの
ソディウムメトキサイドを添加した。

この反応混合物を、室温で（約１８〜２２℃）３０分間
撹拌した。化合物Ａよりも若干モル過剰量の、７位置換
基形成のために用いるアルキル化試薬を含む（例えば、
３３ｍＭ対３０ｍＭ）ＤＭＦ溶液（ｌｏ＋＋＋ｊｉ）を
加え、さらに、約２０〜約４０°Ｃで、約１時間攪拌す
る。

その後、溶媒を減圧下で除き、残香を、蒸留水又は脱イ
オン水（１５０ｄ）及び塩化メチレン（１５０，ｄ）で
処理した。得られた固体を濾過し、適当な溶媒から再結
晶して、■−アミノー７−置換−８−オクソグ７ノシン
を得る。これで、通常用いられている２ステップ合成操
作の“ステップｌ”を完了する。

ステップ　２゜ その後、ステップ１の産物を濃塩酸に溶かしく例えば１
５ｄＨｃＩｌ中４．６５ｍＭ）　、この中に０℃で亜硝
酸ナトリウム水溶液を加え（例えば５ｍｌ水中、４．１
９ｍＭ）、さらに約１時間攪拌する。

生成した脱アミノ産物を特に断わらない限り（票準的結
晶技術により得る。

上述の２ステツプ法又は他の方法による、独特で代表的
な化合物の合成を、その他の合成と同様に以下に公開す
る。

例２゜ ７−ブチル−８−オクソグアノシン（２３６４４）例１
の２ステップ操作に従がい、アルキル化剤としてヨウ化
ブチルを用い、表題の化合物を、ｍ、０．２３０℃以上
の白色粉末として、収率１５％で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）： δ１０．８　　（ｂｓ、ＩＨ）；６．４　　（ｂｓ、２
Ｈ）；５．６　　（ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＬＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １６８０．１６１０及び１５１０ｃｍ−’Ｃ，，０２Ｎ
５０．： 理論値Ｃ，４７，３２、Ｈ，５，９６；Ｎ、　　ｌ！１
．７１実験値Ｃ，４７，０３；ｒｒ、　　５．８６　；
Ｎ、　　１９．５６゜例３゜ ７−（２−ブテニル）−８−オクソグアノシン例１の２
ステップ操作に従がい、アルキル化剤として、臭化２−
ブテニルを用い、表題化合物を、ｍｐ１６７−１７０°
の白色粉末として、１０パーセント収率で得た。

ＮＭＲｌ：ＤＭｓｏ−ｄ、）： ６１０．７　（ｂｓ、ＩＩ（）；６．４　（ｂｓ、２Ｈ
）；５．４　５．６　（ｂｓ、　　３Ｉ−１）　　；３
．３　（ｂｓ、３Ｈ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １６９０．１６５０及び１６００ｃｍ−’Ｃｌ４Ｈ１９
ＮＳ　Ｏｈ　　Ｈｚ　Ｏ：理論値Ｃ，４５，２８；Ｈ，
５，７０、Ｎ、　　１８．８６実験値Ｃ，４５，１６；
　Ｈ，５，６１、Ｎ、　　１　Ｂ、８２゜例４゜ ７−へキシル−８−オクソグアノシン（２３９２４）例
１の２ステップ操作に従がい、アルキル化剤として、ヨ
ウ化ヘキシルを用い、表題化合物を、ｍｐ１９６−１９
９℃のヘージュ粉末として、８％収率で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−δ６）： δ１０．８　　（ｂｓ、　　１！り　　；６．５　　（
ｂｓ、　　２１１）　　；ＩＲ（ＫＢｒ）： １６８０．１６４０．１６００ｃｍ−’Ｃ＋　ｂ　Ｈｚ
　ｓ　Ｎ　ｓ　Ｏｂ　　：理論値Ｃ，５０，１２；Ｈ，
６，５７；Ｎ、　　１８．２７実験値Ｃ，４９，９３、
Ｈ，６，５２；Ｎ、１８．２４゜例５゜ ７−プロピル−８−オクソグアノシン（２４０６９）７
−了りルー８−オクソグアノシン（例８゜１．０　ｇ、
　　２．９ｍＭ）　、１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）及
びエタノール（１００ｍｌ）の混合物を室温で水素雰囲
気下、３時間撹拌した。この触媒をセライト板を通して
濾過し、エタノールで洗浄した（１００ｍ１．）。合せ
た濾液を、減圧下で濃縮した。この残香をメタノール（
２０ｒｄ）に溶解し、ついでエーテル（２００ｍｆ）で
処理した。生成した固体を濾過し、６０℃で乾燥して、
ｍｐ１５１−１５３℃、白色粉末として５５％収率で表
題化合物を得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｓ）： δＬ０．８　（ｂｓ、ＬＨ）；６．５　（ｂｓ、２Ｈ）
；５．５　　（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、ＬＨ）；０．８　
（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、３Ｈ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）：１６８０．１６４０ｃｍ−Ｃ，３Ｈ，
。Ｎ５Ｏ６： 理論値Ｃ，４５，７５；Ｈ，５，６１；Ｎ、　　２０．
５６実験値Ｃ，４５，４Ｌ　；Ｈ，５，５６；Ｎ、　　
２０．Ｇ９゜例６゜ ７−エチル−８−オクソグアノシン（２３６４３）例１
の２ステップ操作に従がい、アルキル化剤としてヨウ化
エチルを用い、表題化合物を、ｍｐ１８５−１８７℃、
白色粉末として収率１５パーセントで得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）： ６６．７　　（ｂｓ、２Ｈ）； ５．７　　（ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、１１１）；１、２　（ｔ
　、　　Ｊ　＝　６　Ｈｚ　、　　３　Ｈ）　。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １６８０．１６４０．１６１０及び １４６０ｃｍ−’ ＣＩ２８１７Ｎ５０６．１　／　２　Ｉ２０　：理論値
Ｃ，４２，８６；Ｈ，５゜３９；Ｎ、２０．８２実験値
Ｃ，４３，１７；Ｈ，５，２４；Ｎ、　　２０．４５゜
例７゜ ７−デシル−８−オクソグアノシン（２３８９４）例１
の２ステップ操作に従がい、アルキル化剤としてヨウ化
デシルを用い、ｍｐ、１７４−１７６℃、白色粉末とし
て、１０パーセントの収率で表題化合物を得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）： ６１０．８　（ｂｓ、ＩＨ）；６．４　（ｂｓ、２Ｈ）
；５．６　（ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＩＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １６９０．１５９０及び１４５０ｃｎｎＣ２゜Ｈｉ３Ｎ
ｓ　Ｏｈ　　： 理論値Ｃ，５４，６６；Ｈ，７，５７；Ｎ、　　１５．
９３実験値Ｃ，５４，１７ｉＨ，７，４４；Ｎ、１５．
９０゜例　　８゜ ７−（２−７”ロペニル）−８−オキシグアノシン（２
１７５７） （また、７−アリル−８−オクソグアノシン）ここでは
、７−アリル−８−オクソグアノシンとも呼ばれる表題
化合物の合成のため、２つの操作を使用した。

操作　１゜ 臭化アリル（３ブロモプロペン）をアルキル化剤として
用いる例１の２ステップ操作に従がい、ｍｐ２３０−２
３１”Ｃ１白色粉末として対応する１アミン化合物から
４０パーセントの収率で表題化合物を得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）： ６５．６　　（ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ｌ１１）；６．５　　
（ｂｓ、２Ｈ）；　１０．８　　（ｂｓ、ＬＨ）。

Ｉ　Ｒ（ＫＩｌｒ）　　：　１６６０　、１５９０及び
１５６０　　ｃｍ−’Ｃｌ　：ｌ　Ｈｌ　７　Ｎ　３０
　ｂ　　：理論値Ｃ，４６，０２；Ｈ，５，０５；Ｎ、
　　２０．６４実験値Ｃ，４５，６３、Ｈ，５，１０；
Ｎ、　　２０．５６゜操作　２゜ Ａ、ステップ１： ８−（２−プロペニル）オキシグアノシン８−ブロモグ
アノシン（例えばシグマケミカル社、セントルイス、Ｍ
ｏ州、１０ｇ、２９．５　ｍＭ）、水素化ナトリウム（
油中６０％、５ｆ、１２５ｍＭ）、アリルアルコール（
２０Ｔｎｌ）及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，２
００ｍ１）を窒素雰囲気下、６０゛Ｃ３３時間加熱した
。この混合物を、室温まで放冷した後、ジエチルエーテ
ル（１１）に注いで灰色の沈殿を得た。

エーテル層をデカンテーションして廃棄し、固体残香を
水（５０ｍｇ及び酢酸（１０ｍｌ）で処理した。この固
体を濾過し、逆相Ｉ−ＩＰＬＣ（Ｃ−１８）で精製し、
収率２０パーセントで白色粉末として２−プロペニルエ
ーテルヲ得り。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）： ６６．３　（ｂｓ、　　２１１）　　ｉ６．２−５．８
　（ｍ、　　ＬＨ）　　；５．６　（ｄ、Ｊ＝５）Ｉｚ
、ＩＩＩ）。

Ｂ、ステップ２ニ ツーアリル−８−オクソグアノシン 水中（５０ｍ１）　８−　（２−プロペニル）−オキシ
グアノシン＜４０ｍ１、Ｏ，１２ｍＭ）を、３時間還流
した。この反応混合物を室温まで放冷し表題化合物を、
８５パーセントの収率で逆相１−ＩＰＬｃ　（Ｃ−１８
）によって得た。

例９゜ ７−（２−プロペニル）−８−チオクツグアノシン 〔または、７−アリル−８−チオクツグアノシン）　　
（２２４４４） ここでは７−アリル−８−チオクツグアノシン及び７−
アリル−８−メルカプトグアノシン（７Ｂ８ＭＧｕｏ）
と呼ばれる表題化合物を、８（２−プロペニルメルカプ
ト）グアノシンから異なる２つの転位操作から合成した
。

Ａ、ステップ１．８−（２−プロペニルメルカプト）グ
アノシン（２２３００） 臭化アリル（８ｇ、６３．５ｍＭ）を、８−チオクツグ
アノシン（２０ｇ、　６３．５ｍＭ）及び炭酸カリウム
（１０ｇ、７２ｍＭ）ＤＭＦ溶液（３００ｍ１）の混合
物に添加し、この混合物を、攪拌しながら、４５°Ｃで
９０分間加熱した。

その後、この混合物を室温まで冷やし、ジエチルエーテ
ル（１，４／り及び酢酸（！Ｍ）の溶液に注いだ。生成
した固体を濾過し、水（２５０＋＋＋ｆ）、アセトン（
２００ｍｊり及びジエチルエーテルで洗浄後、オープン
で６０℃の乾燥を行ない、ｍｐ２２５℃（分解）の白色
粉末として、表題のチオエーテル（１４，７ｇ、６７バ
ーセン１−収率）を得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）： δ５．７０−５．９１（ｍ、２１１）；　　６．３Ｂ（
ｂｓ、２１１）。

Ｔ　Ｒ（Ｋ　Ｂ　ｒ　）　　：　１７００．１６４０　
　及び１６１０ｃｍ−’Ｃｌ５Ｈ１？ＮＳ　Ｏ５Ｓ　： 理論値Ｃ，４３，９３；Ｈ，４，８２，Ｎ、１９．７１
実験値Ｃ，４４，１０；Ｈ，４，８２；Ｎ、１９．６９
゜Ｂ、転位 ステップ２．操作１ニ マーアリル−８−チオクツグアノシン ビストリメチルシリルアセトアミド ３５４、７ｍＭ）を、クロロホルム（５００ｍｆ）中、
出発物質とし′ζ８−（２−プロペニルメルカプト）グ
アノシン（２　０　ｇ，５６．３ｍＭ）のサスペンショ
ンに加え、生成した混合物を、窒素雰囲気下、１６時間
還流した。冷却後、溶媒の大部分を減圧下で除き、残香
を減圧下、６時間、４０℃に加熱した。

油状残香を、テトラヒドロフラン（５００ｍｌ）、Ｐｄ
Ｃ＃ｚ　　（１０．３ｇ、５８．３ｍＭ）及びベンゾニ
トリル（１２．１ｇ、１　１　７　ｍＭ）と混合し、生
成した混合物を窒素雰囲気下、３時間還流した。その後
、この混合物を室温まで放冷し、ピリジン（２５ｍｆ）
と混合して、−晩（約１６時間）攪拌した。この混合物
をシリカゲルで濾過し、塩化メチレン（２Ｘ３００ｍｆ
）で洗浄した。合せた濾液を減圧下で濃縮し、その残香
を水、メタノール及び酢酸の混合物（５　０　０ｍｆ、
１０：１０：１）と混合して、さらに約１６時間撹拌し
た。

加えた溶媒の大部分を減圧下で除き、この残香をＤＭＦ
（ＩＩＪットル）に溶解してから活性炭で処理した。こ
のようにして得たサスペンションを、セライト床で濾過
し、その濾液を減圧下で濃縮した。この残香をメタノー
ルで処理し、生じた固体を濾過後、アセトンで洗浄して
から、オーブンで６０℃の乾煙を行ない、ｍｐ．２３０
℃以上、にぶい白色粉末として、７−アリル−８−チオ
クツグアノシン（８．５ｇ，４２．５パーセント収率）
を得た。

ＮＭＲ　　（ＤＭＳＯ−ｄ６）： ６５、　９　０　　（ｍ，　ＬＨ）　；６．　３　２　
（ｄ，　Ｊ＝５ｔｌｚ　、ＬＨ）；６、５　６　　（ｂ
ｓ，　２Ｈ）　；　１０、６　０　　（ｂｓ．　ＬＨ）
。

ＩＲ　（ＫＢｒ）： １７００、１６３５．１６０５及び １　４　５　０ｃｍ−’ Ｃ　、３Ｈ　１７Ｎ　Ｓ　Ｏ　ｓ　Ｓ　：理論値Ｃ，　
　４３．９３：Ｈ，　４．８２：Ｎ，　　１９．７１実
験値Ｃ，　　４３．９６　；Ｈ，　４．８７　；Ｎ，　
　１９．６２。

ステップ２：操作２ニ マーアリルー８−チオクツグアノシン Ｄ プロペニルメルカプト）−グアノシン（６　０　ｇ）を
含む溶液を、窒素雰囲気下、１３０℃の浴中９日間加熱
した。生成した反応混合物を室温まで放冷し、溶媒を減
圧下で除いた。この残香をメタノールで処理した。生じ
た固体を濾過し、アセトンで洗浄した後、６０°Ｃのオ
ーブンで乾燥して、にぶい白色粉末として、表題化合物
（２１ｇ、３６バーセント収率）を得た。

例　　１　０。

７−（２−プロペニル）−８−セレノクツグアノシン（
２　３　３　６　９） ここで７−アリル−８−セレノクツグアノシンとも呼ば
れる表題化合物は、８−セレのクツグアノシン〔チュ（
Ｃｈｕ）等、ジャーナル・オブ・メディカルケミストリ
ー（　Ｊ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．　）、　１　８５５
９−５６４　　（１９７５））及び臭化アリル（例９参
照）を反応させ、つづいて熱転位させることにより合成
した。この産物は水から再結晶し、乾燥した。ｍｐ．２
２７−２３０℃。

Ｃ＋＋Ｈ＋ｔＮｓ　Ｏｓ　Ｓｅ： 理論値；Ｃ．３８．２８；Ｈ，４、２６；Ｎ．１７．４
１実験値；Ｃ，３８．７７　；Ｈ，４．２５　；Ｎ，１
６．９２。

例　１１．　　７−（：（３−フェニル）−２−プロペ
ニルロー８−りクソゲアノシン （または、７−シンナミル−８−オフソゲアノシン）（
２２８２７） この表題化合物は、例１の一般的な２ステップ操作に従
がい、対応する１−アミノ誘導体から合成した。ステッ
プ２において、濃塩酸中（１５ｄ）、１−アミノ−？−
　Ｃ　（３−フェニル）−２−プロペニルロー８−りク
ソゲアノシン（２ｇ，４．６５ｍ　Ｍ　）溶液に、０℃
で、水中（５ｍｌ）の亜硝酸ナトリウム（０．２　９ｇ
，４．１　９ｍＭ）を加えた。この混合物を１時間撹拌
した。溶媒の大部分を減圧下で除き、淡黄色固体を得た
。この固体をメタノールで粉砕し、自己粉末として表題
化合物を得た。

ＮＭＲ　　（ＤＭＳＯ−δ６）： δ１０．８　　（ｂｓ，　　ＩＨ）　　；５、６　　（
ｄ，　　Ｊ＝５Ｈｚ，　　ＩＴ（）。

ＩＲ　　（ＫＢｒ）　　： １６８０、１６１０，及び１５３０ｃｍ−’Ｃ１ｑＴＩ
ｚ＋Ｎｓ　　Ｏｈ　　： 理論値　Ｃ，　５４．９４　　；　Ｔ（、　５．１０；
　　Ｎ，　１６．８６実験値　Ｃ，　５４．７０　　；
　Ｈ，　５．１０；　　Ｎ，　１６．９０。

例　　１　２。

８−シアノイミノ−７−（２−プロペニル）グアノシン
（２　４　３　２　８） ＤＭＳＯ　（２　０　０ｍｌ＞中の７−（２−プロペニ
ル）−８−チオクツグアノシン（例９，１０ｇ。

２８、２ｍＭ）溶液に、窒素雰囲気上室温でヨウ化メチ
ル（６ｇ、４２．３ｍＭ）を加え、生成した混合物を３
時間撹拌した。この混合物を０℃に冷却し、シアナミド
（２．４ｇ、５６．５ｍＭ）を加え、つづいて、水素化
ナトリウム（６０％才イル分散物、１．７９ｇ、４４．
８ｍＭ）を加えた。生成した混合物を室温まで温め、１
時間攪拌した。

この混合物を、ジエチルエーテル（１．１りに注ぎ、１
０分間攪拌した。この有機層をデカンテーションし、さ
らにこの残香をジエチルエーテル（Ｌ．ｉ）及び酢酸（
５０ｍｌ）で処理した。有機層をデカンテーションし、
残香を水に溶かした（５００ｒｄ）。

この水層を逆相（Ｃ−１　８）ＨＰＬＣで精製し、白色
粉末として３５％収率で表題化合物を得た。

Ｎ　Ｍ　Ｒ　（　Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ　　ｄ　６）　’δＬ
Ｌ．０　（ｂｓ，ＬＨ）： ６、５　　（ｂｓ，　　２Ｈ）　。

５、５　（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ．ＩＨ）。

ＩＲ　（ＫＢｒ）： ２１９０、１７００及び１　６　４　０ｃｍ−’Ｃ　１
　４　Ｈ　１１　Ｎ　７０ｓ　　１／２Ｈ２０：理論値
　Ｃ．　４５．１６　；Ｈ．　４．８７；　　Ｎ．　２
６．３３実験値　Ｃ，　４５．００　；Ｈ，　４．６６
；　　Ｎ，　２６．０７。

例　　１３゜ ８−（２−ブテニルメルカプト）グアノシン臭化アリル
の代りに２−ブテニルクロライドを用いる以外は、８−
（２−プロペニルメルカプト）グアノシン合成の最初の
操作に従がい、表題化合物は、ｍｐ、２１０℃（分解）
白色粉末として、４８パーセントの収率で得られた。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ＋、）： δ６，３　（ｂｓ、２Ｈ）； ５、６　（ｄ　、　　Ｊ　＝　５　Ｈｚ　、　　１１−
Ｉ　）　　；１．６　（ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、３Ｎ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １６９０．１６３０，１６００゜ １５１０及び１３６５ｃｍ−’ ＣＩ　４　）Ｉ　Ｉｑ　Ｎ　ｓ　Ｏｓ　Ｓ　：理論値　
Ｃ，４５，５２、Ｈ，５，１８；Ｎ、　１８．９６実験
値　Ｃ，４５，３Ｂ　　、　Ｈ，５，３２，Ｎ、　１８
．７９゜例　　１４゜ ８−（シンナミルメルカプト）グアノシン臭化アリルの
代りに臭化シンナミルを用いるこト以外、８−（２−プ
ロペニルメルカプト）グアノシン（例９）の合成操作に
従がい、表題化合物を、ｍｐ１７２℃（分解）にぷい白
色粉末として、３３パーセント収率で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）： δ７．２５　（ｂｒ、５Ｈ）； ６．７−６．２　（ｍ、　　４Ｈ）　　；５．７　　（
ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＬＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １６９０．１６４０及び１６００ｃｍ Ｃ＋ｑＨｚｌＮｓ　Ｏｓ　Ｓ　： 理論値　Ｃ，５２，８９；　Ｈ，２，９１ｉ　　Ｎ、　
１６．２３実験値　Ｃ，５３，２６；　Ｈ，４，９０；
　　Ｎ、　１６．０８゜例　　１５゜ ７−（２−プロペニル）−８−チオクツ２’、３’−ｏ
−イソプロピリデングアノシンへミハイドレート　（２
３０８３） ７−（２−プロペニル）−８−チオクツグアノシン（例
９．６ｇ、１６．９ｍＭ）　、２．２−ジメトキシプロ
パン（５ｍｌ、４０．７ｍＭ）、アセトン（２００ｍｌ
）及び濃硫酸（１０滴）を窒素雰囲気下、室温で５２時
間撹拌した。この混合物を０℃に冷却し、濃アンモニア
水（５ｍｊりで処理した。

溶媒の大部分を減圧下で除き、白色の固体を濾過した。

この固体を、水、さらにアセトンで洗浄し、その後、ジ
エチルエーテルで乾燥してから６０°Ｃのオーブンで乾
燥して、ｍｐ、２３７℃（分解）、淡黄色粉末として表
題化合物を収率７５％で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）： ６１．３２　　（ｓ、３１１）；　１．５２　　（ｓ、
３Ｈ）；５．９２　　（ｍ、ＩＨ）；６．５Ｂ　　（ｂ
ｓ、ＩＨ）。

６．９５　　（ｂ　ｓ、　　２　Ｈ）　　。

ＩＲ（ＫＢｒ）　　： １６９５．１６３０．１６００及び １４５０ｃｍ−’ Ｃ、６１４□１Ｎ：ｌ　　０３　３−１／２Ｈ２０：理
論値　Ｃ，４７，５１；　Ｈ，５，４８；　　Ｎ、　１
７．３２実験値　Ｃ，４７，０８ｉ　Ｈ，５，１２；　
　Ｎ、　１７．３０゜例　　１６゜ ７−シンナミル−２’、３’−イソプロピリデン−８−
オクソグアノシンヘミハイドレート７−（２−プロペニ
ル）−８−チオクツグアノシンの代りに、７−シンナミ
ル−８−オクソグアノシン（例１１）を用いる以外、例
１５の操作に従がい、表題化合物を、ｍｐ２３０’ｃ、
にふぃ白色粉末として、収率３５パーセントで得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）： ６１０．９　（ｂｓ、ＩＨ）； ７．３−７．６　　（ｍ、　　５Ｈ）　　；６、（ｉ　
（ｂｓ、２Ｈ）、６．４　（ｍ、２Ｈ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　　： １６８０．１６３０，１５９０，１４５０゜１４２０及
び１３８０ｃｍ−’ Ｃ２□１１□ｓＮｓ　０６　　１　／　２１−Ｉ２０　
：理論値　Ｃ，５６，８９；　Ｈ，５，６４；　　Ｎ、
　１５．０７実験値　Ｃ，５４，０８、旧５．５３；　
　Ｎ、　１５．１２゜例　　１７゜ ８−シアノイミノ−７−（２−プロペニル）２’、３’
−ｏ−イソプロピリデングアノシンへミハイドレート（
２４４５６） ７−（２−プロペニル）−８−チオクツグアノシンの代
りに７−（２−プロペニル）−８−チオクツ−２’、３
’−ｏ−イソプロピリデングアノシン（例１５）を用い
ること以外、例１２の操作に従がい、表題化合物を、ｍ
ｐ２２２℃（分解）明褐色粉末として、５１パーセント
収率で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）： ６７．４５　（ｂｓ、ＩＨ）； ６．９　（ｂｓ、２Ｈ）；６．２　（ｂｓ、ＬＨ）：１
．５及び１．３（両Ｓ、３１１各々）。

ＴＲ（ＫＢｒ）： ２１８５及び１５９５ｃｍ−’ Ｃ＋７Ｈｚ＋Ｎ７０ｓ　−１／２ｒ＋２ｏ　：理論値　
Ｃ，４９，５１；　Ｉ−１，５，３８；　　Ｎ、　２３
．７９実験値　Ｃ，４９，３４ｉ　Ｈ，５，２２；　　
Ｎ、　２３．０６゜例　　１８゜ ５′−アセチル−７−（２−プロペニル）２’、３’−
ｏ−イソプロピリデン−８−チオクツグアノシン（２３
２８７） ７−（２−プロペニル）−２’、３’−ｏ−イソプロピ
リデン−８−チオクツグアノシン（例１５．１．２ｇ、
３ｍＭ）、トリエチルアミン（３ｍｌ）、無水酢酸（０
，３ｇ、２．９ｍＭ）及び塩化メチレン（１００ｍｌ）
の混合物を、室温で６時間撹拌した。この混合物を水（
１００ｍｌ）に注ぎ、有機層を分離して水層を塩化メチ
レン（２Ｘ５０ｍｆ）で抽出した。

合せた有機層を乾燥しくＮａｚ　Ｓ　０４　）　、溶媒
を減圧下で除いた。残香をシリカゲルのカラムクロマト
グラフィー（１００ｇ、酢酸エチル／ヘキサン（９：　
１　ｖ／ｖ）　）で精製し、表題化合物を、ｍｐ１７９
℃（分解）、にふい白色粉末として収率７０パーセント
で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）： ６１１．１　　（ｂｓ、　　ＬＩＴ）　　；６．８５　
　（ｂｓ、　　２１１）　　；６．６　　（ｓ、　　Ｌ
Ｈ）　　；２．０１　　（ｓ、　　３Ｈ）　　；１．４
５及び１．３２（両ｓ、３１１各々）ＪＲ（ＫＢｒ）　
　： １７３０．１７１０．１６８０及び １　　Ｇ　　３　０　ｃａｎ ＣＩ１）Ｈ２３ＮＳ　　Ｃ６Ｓ　　： 理論値　Ｃ，４９，４２、Ｉ−１，５，３０；　　Ｎ、
　ＩＧ、０１実験値　Ｃ，４９，３３；　Ｈ，５，３６
；　　Ｎ、　１５．５０゜例　　１９゜ ７−（２−プロペニル）−６，５’−ジヘンヅイルー２
’、３’−０−イソプロピリデン−８チオクツグアノシ
ン（２２３１４） 無水酢酸の代りにベンゾイルクロライドを用いること以
外、例１８の一般操作に従がい、表題化合物を、ｍｐ、
９９−１０１°Ｃ黄色粉末として、収率１２パーセント
で得た。

ＮＭＲ（ＣＤＣ１ｚ　）： δ８．３−７．４　（ｍ、　　１０　Ｈ）　。

６．８５　（ｄ、Ｊ＝ＩＨｚ、ＬＨ）；１．６１及び１
．３８（両ｓ、３Ｈ各々）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １７６０．１？２０，１６４０．１６００及び１４５０
ｃｍ−’ Ｃ３ｏ１１ｚｑＮ５０７　Ｓ　： 理論値　Ｃ，５９，６９；　Ｈ，４，８４；　　Ｎ、　
１１．６０実験値　Ｃ，５９，７３、Ｈ，４，８８；　
　Ｎ、　１１．４９゜例２０゜ ７−（２−プロペニル）　−２−Ｎ、　　５’−０ジヘ
ンゾイル−２’、３’−ｏ−イソプロピリデン−８−チ
オクツグアノシンヘミハイドレート　（２３３５０） 例１９の精製に用いたシリカゲルカラムを、酢酸エチル
／ヘキサン（３ニアｖ／ν）でさらに溶出を続けると、
表題化合物が、ｍｐ１３４−１３６℃、淡黄色粉末とし
て、収率２０パーセントで得られた。

ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）： δ１０．１　　（ｂｓ、ＩＨ）； ８．２−７．３　　（ｍ、　　１０ｆ（）　　；１．６
５及び１．３４（両ｓ＋　　３ｔｒ各々）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １７１０．１６８０．１６１０及び １５８８ｃｍ−’ Ｃ３゜Ｈ２９ＮＳＯ□Ｓ　　１　／２　Ｈ２０：理論値
　Ｃ，５８，８１、Ｈ，４，９４；　　Ｎ、　１１．４
３実験値　Ｃ，５８，７？　　、Ｈ，４，８２；Ｎ、　
１１．５０゜例　　２１ ７−（２−プロペニル）−５′−ヘンジイル２’、３’
−ｏ−イソプロピリデングアノシン−８−チオクツグア
ノシン四水和物例１９及び２０で用いたシリカゲルカラ
ムを、酢酸エチル／ヘキサン（４：　ｌｖ／ｖ　）でさ
らに？吉川を続けると表題化合物が、ｍ２１４℃（分解
）淡黄色粉末として収率２１パーセントで得られた。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）： δ１１．１　　（ｂｓ、ＬＨ）； ７．９−７．３　　（ｍ、５Ｈ）； ６．７　　（ｂｓ、２ｆ（）；６．６　（ｓ、ＩＨ）；
１．６及び１．４（両Ｓ、３Ｉ−１各々）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １７−００；１６３０，１５９０及び １４５０ｃｍ− Ｃ２１Ｈ２ＳＮＳ　０６　　１　／　４　Ｈ２Ｏ：理論
値　Ｃ，５４，８０、Ｈ，５，１０；　　Ｎ、　１３．
９０実験値　Ｃ，５４，７７、Ｈ，４，９９；　　Ｎ、
　１３．８５゜例２２． ７−（２−プロペニル）−８−チオクツ２’、３’、５
’−１−リアセチルグアノシン７−（２−プロペニル）
−８−チオクツグアノシン（７ａ　８　ＭＧ　ｕ　ｏ、
Ｉｇ、２．８ｍＭ）、）リエチルアミン（２ｍｌ）、無
水酢酸（１，２ｍｌ、１３ｍＭ＞及び塩化メチレン（５
０ｍｆ）の混合物に、４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ−ピ
リジン（１０■）を加えた。生成した反応混合物を、Ｎ
２雰囲気下、室温で１６時間撹拌した。

さらに塩化メチレン（５０ｍＩｔ）を加え、この溶液を
Ｉ　Ｎ　Ｉ−Ｉ　Ｃｌ、ブライン及び水で洗浄し、その
後これを乾燥した（Ｎａ２Ｓ　０４　）。溶媒を減圧下
で除き、残香を溶出液として酢酸エチルを用いたシリカ
ゲルクロマトグラフィー（２００ｇ）で精製した。表題
化合物は、ｍｐｌｏＯ−１０２℃、淡黄色粉末として収
率５４パーセントで得られた。

ＮＭＲ（ＣＤＣｊ２ｔ　　）　　： δ２．０１　　（ｓ　　　３Ｈ）　　；２．１　０　　
（ｓ、　　６Ｈ）　　；６．７９　　（ｄ、　　Ｊ＝３
Ｈｚ、　　ＩＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）　　： １７４０、　１６９０．　１６３０．　１４５０及び１
２３０ｃｍ−’ Ｃ＋Ｊ（ｚ：＋Ｎ５　０ｎ　　Ｓ　　：理論値　Ｃ，４
７，３９ｉ　Ｈ，４，８２；　　Ｎ、　１４．５５実験
値　Ｃ，４７，２９、Ｈ，４，８４；　　Ｎ、　１４．
１９゜第２の表題化合物の大規模合成は、この化合物を
２６パーセント収率で与え、また、７−（２プロペニル
）−８−チオクツ−２ｒ、　　３　Ｚ　　５　ｊ２−Ｎ
−テトラアセチルグアノシン（２５１７７）も、ｍｐ９
０−９２°Ｃのものとして、４０パーセント収率で得ら
れた。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）： ６１２．１　　（ｂ　ｓ、　　Ｉ　Ｈ）　　；１１．４
　　（ｓ、ＬＨ）； ６．４　　（ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＩＩＩ）；２．１５，２
．００，１．９４及び１．９０（各　ｓ、３Ｈ各々）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １７５０及び１６９０ｃｍ−’ Ｃｚ　ｌＨｚ　ｓ　Ｎ　ｓ　　Ｏｑ　　Ｓ二理論値　Ｃ
，４８，１８；　Ｉ（、４，８１；　　Ｎ、　１３．３
８実験値　Ｃ，４８，２０；　Ｈ，４，６９；　　Ｎ、
　１３．３２゜例　　２３゜ ７−ベンジル−８−オフソゲアノシン（２４２３４）ベ
ンジルプロミドをアルキル化剤として用いる、例１の２
ステップ操作に従がい、表題化合物を、ｍｐ、１７５℃
、にぶい白色粉末として、収率２０％で得た。

ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）： １０．７　　（ｂｓ、ＬＨ）； ７．３　　（ｓ、５Ｈ）。

６．４　　（ｂｓ、２Ｈ）。

５．６　　（ｄ、Ｊ＝５Ｈｚ、ＬＨ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： １６８０．１６００及び１４５０ｃｍ Ｃ＋　７Ｈ１ｓ　Ｎ　ｓ　０６　　： 理論値　Ｃ，５２，４４、Ｈ，４，９２；　　Ｎ、　１
７．９９実験値　Ｃ，５２，４７；　Ｈ，５，０３；　
　Ｎ、　１７．１０゜Ｂ、投与のための代表的組成物 本発明の化合物を投与するために適した代表的固体及び
液体組成物を、代表的活性成分として、より好ましいグ
アニンヌクレオシド誘導体５種を用いて、以下に説明す
る。

錠剤 錠剤には次の成分が調合されている。

重量比 ７−７１月Ｌ　　−８−オフソゲアノシン　　　　　　
　　　　２．５ラクトース、粉末　　　　　　　３６．
４コーンスターチ、乾燥型　　　　３４．５微粉化　５
ｉＯ７５，６ ポリビニルビロリドン　　　　　　０．６ステアリン酸
マグネシウム　　　　０．４８０．０ グアノシン誘導体を、ラクトース、重量比２５．０のコ
ーンスターチ、及び重量比４．０の５ｉ０２と完全に混
合する。この混合物を５％のポリビニルピロリドンエタ
ノール溶液で均一に湿潤化させる。この湿潤物質を、１
ミリメートルメツシュのスクリーンに通し、粒状化する
。この粒状物を、乾燥チャンバー中６０℃、２４時間で
乾燥する。この乾燥化粒状物を再び１ミリメートルメソ
シュスクリーンに通ず。得られた粒状物の７０．０パー
セントを適当なミキサー中、ＳｉＯ□の残り、コーンス
ターチの残り、及びステアリン酸”７グネシウム全てを
含む、予め１ミリメートルメツシュスクリーンを通した
混合物と混合する。その後、このようにして得られた混
合物を、各々８００ミリグラムで、２５ミリグラムのグ
アノシンを含む錠剤にプレスする。

スターチカブチル カプセル内容物は、次に示す成分から調合する。

重量比 ７−ブチル　−８−才りソゲ７ノシン　　　　　　　　
１０．０ラクトース　　　　　　　　　　４５０．０コ
ーンスターチ　　　　　　　５４０．０グアノシン誘導
体を徐々にラクトースと混合する。全てのラクトースが
混合されたとき、得られた混合物をコーンスターチと混
ぜる。この混合物１．０ｇをカプセルに納める。各カプ
セルはグアノシン誘導体１０ミリグラムを含んでいる。

錠剤 各々５０ミリグラムの７−（２−ブテニル）８−オクソ
グアノシンを含む１００００個組の錠剤は次の夕・イブ
及び量の成分から調合する。

オクソグアノシン　　　　　　　　５００　ｇｌ０００
ｇ Ｕ、Ｓ、Ｐ、（１５ｃｐｓ）　　　　　　　７　５　　
ｇｌ　５０　ｇ ２５０　ｇ ５ｇ ７−（２−ブテニル）−８ リン酸二カルシウム メチルセルロース。

タルク コーンスターチ ステアリン酸マグネシウム グアノシンｕＭ　導体とリン酸二カルシウムをよく混ぜ
、メチルセルロース７．５パーセント水溶液とともに階
８スクリーン（米国標準ふるいシリーズ）を通ずことで
粒状化し、注意深く乾燥する。この乾燥した粒状物をＮ
ｔｌ１２スクリーン（米国標準ふるいシリーズ）を通し
、タルク、スターチ及びステアリン酸マグネシウムと完
全に混合し、錠剤状にプレス成形する。

注射用製剤 筋肉、皮下又は洞内注射に適し、かつ、成分１ミリリツ
トル中、５０ミリグラムの７−ベンジル８−オクソグア
ノシンを含む無菌製剤を、次に示すタイプ及び量の成分
から調合する。

７〜ペンシルー　８−才りソゲ７ノシン　　　　　　　
　　５　ｇ生理食塩水　　　　　　　　　９８ｍ１ご　
　ま　　油　　　　　　　　　　　　　　　　２ｍｌグ
アノシン３Ｒ導体及び食塩水を混合し、ついで十分超音
波処理して、実質的に均一な分散物を作る。その後、ご
ま油を加え、この混合物を同様に均一化して、エマルジ
ョンとする。エマルジョン化の後、この無菌製剤の最終
容積の５〜１５パーセントを、週に１度か２度、皮下又
は腹腔内注射して、免疫性を増加させる。

経口的使用のための水性製剤 各５ミリリツトル（ティースプーン１杯）中、７−プロ
ピル−８−オクソグアノシン２５１■を含む、経口的使
用のための水性製剤を次の成分から調合する。

７−プロピル−８−才りソゲ７ノシン　　　　　　　　
　５．０ｇメチルパラベン、Ｕ、Ｓ、Ｐ、　　　　　０
．７５　ｇプロピルパラベン、Ｕ、Ｓ、Ｐ、　　　　０
．２５ｇサンカリンナトリウム　　　　　　１．２５　
ｇチクロナｌ−リウム　　　　　　　０．２５　ｇグリ
セリン　　　　　　　３００　　　ｍｌトラガカンス粉
　　　　　　　　　１．０ｇオレンジオイルフレイバー
　　　１．０ｇＦ、　Ｄ、及びＣオレンジ色素　　　０
．７５ｇ脱イオン水　　　　　　　最終審１１／とする
。

Ｃ０方法 リンパ細胞培養： 血清含有培養培地を１β当り、次のものを含むよう調整
する；　９１．９ミリリットルＲＰＭ１１６４０　　（
フローラボラトリー社、ＭＤ州コロツクビル　、０．１
ミリリツトル１００×グルタミン、［、Ｏミリリットル
１００Ｘピルビン酸ナトリウム、１．０ミリリツトル５
０×非必須アミノ酸、１．０ミＩＪ　＋Ｊットルの１０
４ユニツトヘニシリン（Ｊび１０’マイクロダラムスト
レプトマイシン水溶液、及び５．０　ミＩＪ　ＩＪット
ルの認定ウシ胎児血清（ＦＣ３）。これらの成分を見か
け上均−になるまで混合する。脛細胞サスペンション及
び牌［Ｂ細胞濃縮集団をグツドマン（Ｇｏｏｄ＋ｎａｎ
）等（ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、　１ｍｍ
ｕｎｏｌ、）、１２１．１９０５　　（１９７８））の
方法で調製した。

羊赤血球（ＳＲＢＣ）に対する一次体液性免疫応答の評
価のため、５Ｘ１０６〜１０７個のネズミ牌細胞を、免
疫原の有無条件下、４又は５日間５九ＦＣ５含存培地１
．０ミリリットル中で培養した。細胞は、毎分７回振盪
する組織培養箱（ＣＢＳサイエンティフインク、ＣＡ州
デルマー）を用い、１０％ＣＯ２−空気の加湿雰囲気下
、３７°Ｃで培養１−シー（コスタ−社、ＭＡ州、ゲン
ブリッジ）中でインキュベートシた。プールした５ＲＢ
Ｃは、ＣＯ州デンバー、コロラドセラム社から市販され
ている。

ヒトの末梢血液リンパ細胞（ＰＢＬ）は、フィコール・
ジアドリゾエート密度勾配遠心により、正常なヘパリン
化静脈血液から調製した。ＰＢＬは、ヒスタミン・タイ
プ２レセプター保有サプレツサーＴ細胞をヒスタミン−
ウサギ血清アルブミンコート化プラスチソクペトリ皿（
セレクト（Ｃｅ１）−ｅｃｔ）　Ｎａ　２キツト、セラ
ゲン社、ＭＡ州、ボストン）の表面に粘着すること、及
びウィソキー（Ｗｙｓｏｃｋｉ）及びサトー（Ｓａｔｏ
）　　（プロシーディング・イン・ナショナル・アカデ
ミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃ
ａｄ、　５ｃｉ）ＵＳＡ、７５．２８４４　（１９７８
））により報され、及びカハグナロ（Ｃａｖａｇｎａｒ
ｏ）及びオスバンド（Ｏｓｂａｎｄ）　（ハイオテクニ
ソクス（Ｒｉｏｔｅｃｈｎ　ｉｇｕｅｓ）、１月／２月
、３０（１９８３））により修正されたように、パニン
グにより非粘着性細胞を回収することにより、それらを
取り除いた。

ヒ１−のリンパ細胞に対する、これらの実験で使用する
組織培養培地は、以下のように調製した。

１００ミリリ・７トル（ｍりには、８７．９　ｎｆＲＰ
Ｍ［１６４０（フローラボラトリーズ社、ＭＤ州コロツ
クビル、０．１ｍｊ！ＬＯＯＸグルタミン、１、０　ｍ
ｌ　　１．０　Ｍ　　ＨＥ　Ｐ　Ｅ　Ｓ　ハ’７フア　
（マイクロバイオロジ力ルアソシエイト社、ＭＤ州、ヘ
セスダ）、１．０−の１０’ＵペニシリンＧ及び１０４
マイクログラムストレプトマイシン水溶液及び１０ｍ１
の新鮮なオートロガス（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）熱失活
化血湘を含んでいた。５ＲＢＣに対する一次体液性免疫
応答の評価のため、上述のように調製したリンパ細胞を
、ＩＬ−２（インターフェロン−γ活性を持たないヒト
ｒＬ−２の部分精製調製物は、ＭＤ州クシルバースプリ
ングエレクトローヌクレオニクス社から入手される）及
びグアニンヌクレオチド誘遵体とともに、抗原として５
Ｘ１０６ＳＲＢＣを含むｌ　ｍｌ培地（Ｃｏ州、デンハ
ーコロラトセラム社）１．０ｍｌ中、２Ｘ１０”／ｍｌ
の密度で培養した。

プラーク形成細胞（ＲＦ　Ｃ）検定 ５ＲＩ３Ｃに対する抗体を分泌するＲＦＣは、ジアーン
（Ｊｅｒｎｅ）及びノーデイン（Ｎｏｒｄｉｎ）　（サ
イエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、１４０，４０５　　（
１９６３））の溶唾プラーク検定法の修正法を用いて、
４又は５日後に評価した。この細胞をプラーク化する前
に、完全培地中生育させた。それらは、標阜低Ｍｒアガ
ロース（バイオラドラボラトリーズ社、ＣＡ州、リッチ
モンド）中でプラーク化させ、そして、補体なしの条件
で１．５時間インキユヘーションした後、５ＲＢＣ吸着
モルモット補体中、１時間インキユヘーションした。

Ｔ細胞置換活性 ５Ｘ１０６生存ＣＢＡ／ＣａＪマウスＢ細胞を培養した
。以後により詳細に議論しているように、これらの細胞
は、順に、まず肺細胞を、Ｔ細胞のｔｈｙｌ、２抗原に
対する補体固定モノクローナル抗体で処理し、第２に存
在するＴ細胞を溶解するための補体にューイングランド
ニュクリアー社、ＭＡ州、ボストン）で処理して作った
。そのように処理した細胞をその後、Ｏから１０−４モ
ル濃度の範囲の種々の量のグアノシン誘導体を含む、血
清培地中、免疫原として、Ｑ、ｌ　ｍｌ、の０．１パー
セント（ｖ／ｖ）Ｓ　ＲＢ　Ｃの有無の条件下で生育さ
せた。

５ＲＢＣに対する直接的ＲＦＣがその４日後に測定した
。

マウス。

退会８〜１６のＣＢＡ／ＣａＪマウスを、ＭＥ州、ハー
バ−バーのジャクマンラボラトリーから購入した。ＣＢ
　Ａ／Ｎの育種核は、ＭＤ州、ヘセスダ、ナショナル・
インスチチュート・オプ・ヘルス、アニマル・プロダク
ション・セクションかう提供された。退会８〜１６のＳ
ＪＬ、ＢＤＦ、及びＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスは、ＣＡ州
、ラジョラ、スクリプス、クリニック・アンド・リサー
チ・ファンデーションのマウス・ブリーディング・ファ
シリティから得た。全てのマウスは、ウニイン・ラブ・
ブロックスＦ６ペレツト　（ＩＬ州、シカゴ、アライド
ミルズ社）及びＨ（ｌでｐＨ値３．０で酸性化した塩素
化水で維持した。

細胞調製物。

膵臓及び胸腺細胞サスペンションは、 グツドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）等（ジャーナル・オブ・
イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　　１２１．
　　ｌ　９０５（１９７８））により報告されている方
法により調製した。Ｂ細胞濃縮集団は、１０８個の肺細
胞を、４℃、３０分、モノクローナル抗ｔｈｙＬ、２抗
体（ＭＡ州、ボストン、ニューイングランドニュークリ
ア）の１０００倍希釈物で処理することによって調製し
た。処理細胞を、１０分間２８０×重力で遠心して抗体
を除き、この細胞を３７℃、４５分間、ＣＢＡＲＢＣ吸
着モルモット補体の６倍希釈物に再懸濁した。その後、
細胞を洗浄し、先に説明したように培養した。

往−」も マウスに５０μｇ　”ＰＮ　Ｐ　−Ｂ　Ｓ　Ａを含む溶
液を、ｉ、　　り、注射した。免疫注射約３０分後、６
匹のマウス２グループも、１００パーセントゴマ油中の
７ａ８ＭＧｕｏＱ、２ｍｆ、又は、７２８ＭＧｕ。

５ｍｇ／ｍβを含む、生理食塩中で超音波処理した２％
（ｖ／ｖ）ゴマ油０．２　ｍｌのｉ、ｐ、注射を受けた
。６匹のマウスの第３のグループは、グアノシンｊＭ　
’４体は除いた免疫環作を受けた。抗ＴＮＰ−ＵＳＡ抗
体値を、標準技術を用いて測定した。

工仝西アニ１曙掃駐ビ片 １．５Ｘ１０’個の生存するＳＪＬマウス由来の肺細胞
又はＣＢＡ／ＣａＪマウス胸腺リンパ球を段階的濃度の
代表的７．８位二置換グアニン誘専体存在下でＱ、２ｍ
ｌ培養培地中、各々、同数のＣＢＡ／ＣａＪ又はＢＤＦ
、マウス由来の照射した（　２５００　ｒａｄ　）肺細
胞有無の条件で培養した。使用したリンパ球培養培地は
、先に説明したものであり、またさらに、最１冬濃度５
０μＭになるように２−メルカプトエタノールを補った
。また、胸腺リンパ球培養物は、コラボラティプリサー
チにより、ラットＴ細胞モノクローンという名称で売ら
れている１０パーセント（ν／Ｖ　）のコンカ子細胞ン
Ａシソ１−牌細胞ならし培地を含んでいた。

９０時間の培養後、培養当り、■マイクロキューリーの
（３Ｈ）ＴｄＲを混合し、この培養物をさらに６時間維
持した。

この培養物をプランデルセルバーへスターを用い（ＭＤ
州、ロックビル、バイオロジカルリサーチアンドディベ
ロップメントラボラ１−リーズ、Ｍ２４■）グラスファ
イバーフィルターディスク上に収穫した。フィルターデ
ィスクをプラスチックシンチレーションバイアルに移し
、液体シンチレーションカクテルでカバーし、そして、
ヘソクマンのＬＳ５７００液体シンチレーションカウン
ターで計数した。

本発明は好ましい態様に関して説明してきた。

この公開された事柄の修正そして、または変化は、これ
まで述べてきた本発明の範囲を逸脱することなしに行う
ことができることは、当業者にとって明白なことであろ
う。

本発明はいくつかの長所及び利点を有している。

本発明の１つの利点には、この化合物が一般的により効
果的である、つまり、従来のグアノシン免疫促進剤より
も、より低い投与量で同様の応答を、または、所定の投
与量でより大きい応答を提供するということがある。

本発明の長所には、その組成物の１つを使用すると、第
１　（抗原性）メツセージに応答して、Ｂリンパ球の活
性化及び分化に必要な第２のメソセージを提供しうると
いうことである。

本発明の別の利点には、この増加した免疫応答は、Ｔヘ
ルパー細胞活性の存在下又は非存在下の両方で効果を発
揮できることがある。従って、増加した免疫応答は、Ｔ
細胞依存及びＴ細胞非依存の両システムにおいて、注目
される。

本発明の別の長所には、特定の免疫抑制及び免疫不全条
件及び病気症状が本発明の使用で改善及び軽減できるこ
とがある。

さらに本発明の利点及び長所は、前後の議論から当業者
には明白であろう。

化学物質及び細胞による及びそれらへのメソセージの授
受のような擬人的記述は、観察された現象の理解を助け
る、説明を目的とした手段として用いている。

【図面の簡単な説明】

図は本発明の公開の一部を形成している。 第１図は、Ｔ細胞は除かれているが特異的抗原として、
羊の赤血球細胞（Ｓ　ＲＢ　Ｃ）を含む、ＣＢＡ／Ｃａ
ＪマウスＢ細胞培養物に接触させるのに用いた７−アリ
ル−８−オクソグアノシン（７ａ８ｏＧｕｏ）を含む水
性組成物のＴ細胞置換活性を示している。実線の点は、
培養物中に含まれる一定量の５ＲＢＣを用いた、？ａａ
ｏＧｕ。 量を変化させた場合のプラーク形成を示している。 点線は、５ＲＢＣなしの場合の結果を示している。 縦軸は培養当り、直接的抗−３ＲＢＣプラーク形成細胞
（Ｐ　Ｆ　Ｃ）単位Ｘｌ０−２で表わされている。 横軸は、接触組成物中に存在する７ａ８ｏＧｕ。 の濃度単位（モル濃度、Ｍ）を表わしている。詳細は先
に述べられている。 第２図は、より多い５ＲＢＣ存在下で ７ａ８ｏＧｕｏを含む水性組成物に、培養した免疫不全
Ｃｌ５Ａ／Ｎマウス牌細胞を接触させることにより得ら
れるこれら細胞（点線）における特定の抗原、５ＲＢＣ
に対する一次体液性免疫応答のインビ１−ロ再構成を示
している。免疫能を持つＣＩ３Δ／ＣａＪマウス由来の
肺細胞を用いた同様の実験（実線）も、比較のためグラ
フに示した。各線のポイントは、指示される量の７ａ８
ｏＧｕ。 及び５ＲＢＣ存在下で得られたＰＦＣ値を表わしている
。縦軸及び横軸は第１図と同様である。この実験の詳細
は先に説明しである。 第３図は、７ａ８ｏＧｕｏを含む組成物と接触させるこ
とにより得られた、免疫能を有する（退会８）ＣＢＡ／
ＣａＪマウスと比較した免疫不全老令（退会１５６）Ｃ
ＢＡ／ＣａＪマウス牌細胞における、５ＲＢＣに対する
一次体液性免疫応答のインビトロでの再構成を示してい
る。左部分は細胞を入手したマウスの退会（ｗｋｓ）、
５ＲＢＣの存在（＋）、非存在（−）及び７ａ８ｏＧｕ
ｏのマイクロモル濃度（μＭ）を示している。パーの長
すは、第１図及び第２図の縦軸と同じ単位である。 この実験の詳細は先に説明しである。 第４図は、７−アリル−８−メルカプトグアノシン（７
ａ８ＭＧｕｏ）を含む組成物と、インビボで白証球を接
触させることにより引き出された、増加した抗トリニト
ロフェニル・ウシ血清アルブミン（ＴＮＰ−ＢＳＡ）抗
体応答の、インビボでの速度論を示した多くのプロン１
−を含むグラフである。ここで、−グアノシン誘導体く
５■／　ｍｌの７　ａ　８ＭＧｕ　ｏ　０．２−）は、
動物体内ニ導入すレるとき、ｌＯＯパーセントゴマ油（
実線）又は、２パ一セントゴマ油食塩水のビヒクル中に
存在した。 ＣＢＡ／ＣａＪマウス３グループを使用した。各グルー
プをＴＮＰ−ＢＳＡ結合体で免疫化した。 １つのグループは１００パーセントゴマ油−グアノシン
誘導体を受け、第２のグループは、２パーセントゴマ油
−グアノシン誘導体を受け、そして第３のグループは（
点線）はグアノシン誘導体を受けずコントロールとした
。 ＴＮＰ−ＢＳＡに対する抗体値は、抗原としてＴＮＰ−
ＢＳＡを用いた標準的酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩ
ＳＡ）の操作を用い、３７日間にわたって測定した。デ
ータは、コントロール値に対する各グアノシン誘導体含
有３■成物を用いて得られた値の比として表わされてい
る。このように、免疫後３７日目には、１００パーセン
トゴマ油ビヒクルからの７ａ８ｏＧｕｏを受けた動物は
、コントロール動物の約５倍の値を示した。一方、２パ
ーセントゴマ油ビビクルから７ａ８ｏＧｕｏを受けた動
物は、コントロール動物の約４倍の値を示した。これら
の実験の詳細は先に説明した。 第５図は、７位炭化水素置換８−オクソグアノシンの７
位置換基の長さと、インビトロでの５ＲＢＣに対するネ
ズミリンパ球の抗原特異的ＰＦＣ応答との構造機能関係
を示すグラフである。 ＰＦＣ値は、ｌＸｌ０−５モル濃度（Ｍ）のグアノシン
の場合の第８表によるものである。データポイントは、
７　ｍ　８　ｏ　Ｇ　ｕ　ｏ、７−エチル（２３６４３
）、７−アリル（２１７５７）、７−プロピル（２４０
６９）、７ブチル（２３６４４）、７−（２−ブテニル
）（２３６７９）及び７−ヘキシル（２３９２４）　Ｂ
＜　Ｂ体に対するものである。コントロール値を引いた
直接的抗５ＲＢＣＰＦＣ／培養値に対する各値は、１ｄ
培養物中に存在するグアノシン誘導体のマイクロモル数
（（Ｉ　Ｘ　１０−５Ｍ）／　（１０−３リツトル）〕
で割って、縦軸の値を得た。横軸は、７位置換基の最も
長い炭素鎖中に存在する炭素原子数に対応している。ア
リル鎖はプロピルよりわずかに長いとされ、また２−ブ
テニルは、ブチルよりもわずかに長いとされた。このグ
ラフに関する詳細は先に説明した。 第６図は、第５図と同様のもう１つのグラフである。こ
のグラフのデータポイントは、数匹のマウス由来のリン
パ球を用い、何回かの実験から経時的に得たものである
。平均した（ピーク時の直接的抗５ＲＢＣＰＦＣ値）−
（コントロールＰＦＣ値）を７位置換基の最長炭素鎖に
存在する炭素数に対してプロットしたものである。ピー
ク値は“正味”のＰＦＣ値を得るため、種々のグアノシ
ンＨＡ　Ｒ濃度度で得られた各データから、まずコンｌ
−ロールＰＦＣ／培養の値を引いて得た。それからこの
ようにして得た各正味ＰＦＣ値を、その正味値を生じた
実験に用いたグアノシンのマイクロモル数で割ってマイ
クロモル当りのピークＰＦＣ値を得た。特定の誘導体を
用いた実験から、各グアノシン誘導体に対して得た、マ
イクロモル当りのピークＰＦＣ値を平均した。これらの
平均値がグラフ上に示されている。 グアノシン誘導体を確認するために、ここで用いている
カッコ内の５桁の数字も、この図で用いられており、そ
れらは第５図のものと同じである。 さらに、７−ヘンシル（２４２３４）、７−シンナミル
（２２Ｂ２７）、及び７−デシル（２３８９４）に対す
るデータも第６図に示した。 第５図中でも現われている、グアノシンｉＭ　Ｌ？Ｌ体
に対する横軸は、この図でも繰り返えされている。 さらに、７−ベンジル誘導体は、ペンチルよりもわずか
に小さい横軸の座標に割当てられており、また７−シン
ナミル誘導体は、ヘプチルよりもわずかに小さい横軸座
標に割当てられている。この図に関するより詳細は先に
説明した。 ＦＩＧ、　２ ｍｙａ８ｏＧｕ。 度（＼１） ＴＮＰ／ＢＳＡ持異的抗体／マウス （処理／コノトロール） 最長炭素鎖中の炭素数 ＦＩＧ、　５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＮＣＮであり、Ｒ＾１は
   、エチル基より長く、かつデシル基よりも短かい直鎖、
   環状又は分枝ヒドロカルビル基であり、 Ｒ＾２及びＲ＾３は、水素原子、水酸基、低級アルコキ
   シ基、低級アルカノイロキシ基及びベンゾキシ基からな
   る群から選ばれる同一又は異なる基であるか、もしくは
   Ｒ＾２及びＲ＾３が合せて低級アルキリデンジオキシ基
   を構成し、 Ｒ＾４は、水素原子、低級アルカノイル基及びベンゾイ
   ル基からなる群から選ばれる基である）で表わされる、
   置換グアニンヌクレオシド誘導体及びその医薬的に許容
   される非毒性塩基付加塩。 （２）前記Ｒ＾１基がＣ＿３−Ｃ＿６の直鎖アルキル基
   、Ｃ＿３−Ｃ＿６の直鎖β−アルケニル基及びベンジル
   基からなる群から選ばれる直鎖基である、請求項（１）
   記載の置換グアニンヌクレオシド誘導体。 （３）前記Ｒ＾１基がプロピル基、ブチル基、アリル基
   、２−ブテニル基及びベンジル基からなる群から選ばれ
   、かつＸがＯである、請求項（１）記載の置換グアニン
   ヌクレオシド誘導体。 （４）前記Ｒ＾２及びＲ＾３が水酸基であり、かつ前記
   Ｒ＾４が水素である請求項（１）記載の置換グアニンヌ
   クレオシド誘導体。 （５）前記Ｒ＾１がアリル基であり、前記Ｒ＾２及びＲ
   ＾３が各々アセトキシ基であり、かつ、ＸがＯ又はＳで
   ある請求項（１）記載の置換グアニンヌクレオシド誘導
   体。 （６）前記Ｒ＾２及びＲ＾３が水酸基であり、前記Ｒ＾
   ４が水素原子であり、かつＸがＯ又はＳである請求項（
   １）記載の置換グアニンヌクレオシド誘導体。 （７）７−アリル−８−チオキソ−２′，３′，５′−
   トリアセチルグアノシン、７−アリル−８−オキソグア
   ノシン、７−ブチル−８−オキソグアノシン、７−（２
   −ブテニル）−８−オキソグアノシン、７−アリル−８
   −チオキソグアノシン、７−ベンジル−８−オキソグア
   ノシン、及び７−プロピル−８−オキソグアノシンから
   なる群から選ばれる、請求項（１）記載の置換グアニン
   ヌクレオシド誘導体。 （８）免疫促進に効果的量の請求項（１）記載の免疫応
   答促進性置換グアニンヌクレオシド誘導体と混合された
   希釈量の生理的に許容し得るキャリヤーを含む組成物。 （９）前記ヒドロカルビル基がＣ＿３−Ｃ＿６の直鎖ア
   ルキル基、Ｃ＿３−Ｃ＿６の直鎖β−アルケニル基及び
   ベンジル基からなる群から選ばれる直鎖基であり、かつ
   ＸがＯ又はＳである請求項（８）記載の組成物。 （１０）前記Ｒ＾１基がプロピル基、ブチル基、アリル
   基、２−ブテニル基及びベンジル基からなる群から選ば
   れ、かつＸがＯである請求項（８）記載の組成物。 （１１）水性媒体中の白血球を、免疫促進に効果的な量
   の置換グアニジンヌクレオシド誘導体と混合された生理
   学的に許容し得るキャリヤーを含む組成物と接触する免
   疫応答を促進させる方法であって、前記置換グアニジン
   ヌクレオシド誘導体が、一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＸはＯ、Ｓ、ＳｅまたはＮＣＮであり、Ｒ＾１
   は、エチル基より長く、かつデシル基よりも短かい直鎖
   、環状もしくは分枝ヒドロカルビル基であり、 Ｒ＾２及びＲ＾３は、水素原子、水酸基、低級アルコキ
   シ基、低級アルカノイロキシ基及びベンゾキシ基からな
   る群から選ばれる、同一もしくは異なる基であるか、も
   しくはＲ＾２及びＲ＾３がいっしょになって、低級アル
   キリデンジオキシ基を構成し、 Ｒ＾４は、水素原子、低級アルカノイル基及びベンゾイ
   ル基からなる群から選ばれるものである） で表わされる置換グアニンヌクレオシド誘導体又はその
   医薬的に許容し得る非毒性塩基付加塩である方法。 （１２）前記白血球を培養媒体中、インビトロで接触さ
   せる請求項（１１）記載の方法。（１３）前記白血球が
   Ｂ細胞、Ｔ細胞または好中球である請求項（１１）記載
   の方法。 （１４）単位投与量の前記組成物をホ乳類に投与するこ
   とにより上記接触をインビボで行なう請求項（１１）記
   載の方法。 （１５）プリン誘導体を調製する方法であって、以下の
   工程： （ａ）８位で−Ｘ−ＣＨ＿２ＣＲ＝ＣＨ＿２基（ただし
   、ＸがＳ、Ｏ及びＳｅからなる群から選ばれ、かつＲが
   水素原子又低級アルキル基又はベンジル基である）によ
   り置換され、かつさらに９位の窒素原子に結合した保護
   基を含むプリン原料を調製し、 （ｂ）前記プリン原料を約５０℃〜２００℃の温度に加
   熱し、 （ｃ）（ｉ）８位において基＝Ｘ（ただし、Ｘは前記プ
   リン出発原料中のＸと同じである）で置換され、かつ（
   ｉｉ）７位において −ＣＨ＿２−ＣＲ＝ＣＨ＿２基で置換された、転位プリ
   ン生成物を生成するのに十分な期間、前記加熱温度を維
   持する、 ことを含むプリン誘導体の方法。 （１６）さらに、上記プリン生成物を単離する工程を含
   む請求項（１５）記載の方法。 （１７）さらに前記液体溶剤媒体が触媒量のＰｄＣｌ＿
   ２を含み、かつ、前記プリン出発原料を、約５０℃〜１
   ００℃に加熱する請求項（１５）記載の方法。 （１８）前記９位の窒素原子が上記保護基としてリボシ
   ル基またはデオキシリボシル基と９−１′−β結合して
   いる請求項（１５）記載の方法。 （１９）上記プリン出発原料が８−（２−プロペニル）
   オキシグアノシンである請求項（１５）記載の方法。