JPH0286789A - 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法 - Google Patents
微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法Info
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- JPH0286789A JPH0286789A JP63237531A JP23753188A JPH0286789A JP H0286789 A JPH0286789 A JP H0286789A JP 63237531 A JP63237531 A JP 63237531A JP 23753188 A JP23753188 A JP 23753188A JP H0286789 A JPH0286789 A JP H0286789A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、生体内で重要な調節因子であるプロスタグラ
ンジン類及びロイコトリエン類の前駆体として注目され
ているアラキドン酸を、微生物を用い、迅速かつ安価に
大量生産させる方法に関するものである。
ンジン類及びロイコトリエン類の前駆体として注目され
ているアラキドン酸を、微生物を用い、迅速かつ安価に
大量生産させる方法に関するものである。
（従来の技術）
通常アラキドン酸は生体内で細胞膜のリン脂質のβ位に
組み込まれているが、物理的、化学的、または免疫学的
刺激により、ホスホリパーゼＡ２で切り出される。次い
で、リポキシゲナーゼ、シクロオキシゲナーゼあるいは
プロスタグランジンシンテターゼにより、順次プロスタ
グランジン類あるいはロイコトリエン類に変換され、各
々の生理活性を発揮する。
組み込まれているが、物理的、化学的、または免疫学的
刺激により、ホスホリパーゼＡ２で切り出される。次い
で、リポキシゲナーゼ、シクロオキシゲナーゼあるいは
プロスタグランジンシンテターゼにより、順次プロスタ
グランジン類あるいはロイコトリエン類に変換され、各
々の生理活性を発揮する。
これらプロスタグランジン類及びロイコトリエン類は、
現代病として社会問題になっているアレルギー、ウィル
ス疾病及び老人性痴呆症などの治療薬として大いに期待
され、急激に研究が進展している。従って、プロスタグ
ランジン類及びロイコトリエン類の前駆体であるアラキ
ドン酸は、生体に必須なメツセンジャーであり、その重
要性は測り知れない。
現代病として社会問題になっているアレルギー、ウィル
ス疾病及び老人性痴呆症などの治療薬として大いに期待
され、急激に研究が進展している。従って、プロスタグ
ランジン類及びロイコトリエン類の前駆体であるアラキ
ドン酸は、生体に必須なメツセンジャーであり、その重
要性は測り知れない。
以上のような、生体内で重要な役割を担っているプロス
タグランジン類の前駆体であるアラキドン酸は、生体内
では、例えば、肺、脳、心臓及び血液もしくは卵黄中に
含有されている。ここから、抽出し、カラムクロマトグ
ラフィーあるいは、蒸留などにより分離精製が試みられ
た。また、いくつか全化学合成方法も試みられている。
タグランジン類の前駆体であるアラキドン酸は、生体内
では、例えば、肺、脳、心臓及び血液もしくは卵黄中に
含有されている。ここから、抽出し、カラムクロマトグ
ラフィーあるいは、蒸留などにより分離精製が試みられ
た。また、いくつか全化学合成方法も試みられている。
（発明が解決しようとする課題）
アラキドン酸の含有されている物質は、脳、肺あるいは
血液などといった特定部位に存在するのみであり、また
１１食品中の卵黄中にも含有されているが、いずれも極
微量含有されているにすぎない。
血液などといった特定部位に存在するのみであり、また
１１食品中の卵黄中にも含有されているが、いずれも極
微量含有されているにすぎない。
しかも、上記の物質では、サンプル収集にきわめて制限
を受ける上に、物質自体が非常に腐敗し易く大量生産は
困難であった。また、合成においてもアラキドン酸の構
造上きわめて困難であるので、いずれも工業的に応用す
るには至っていないのが現状である。
を受ける上に、物質自体が非常に腐敗し易く大量生産は
困難であった。また、合成においてもアラキドン酸の構
造上きわめて困難であるので、いずれも工業的に応用す
るには至っていないのが現状である。
本発明は、微生物を利用し、アラキドン酸を高濃度含有
する油脂を安価に製造する方法を提供することを目的と
する。
する油脂を安価に製造する方法を提供することを目的と
する。
（課題を解決するための手段）
本発明は、エントモフトラ属（Ｅｎｔｏｍｏ ｈｔｈｏ
ｒａｓｐ、）糸状菌を、有機多塩基酸を添加した培地中
で培養することにより、アラキドン酸を菌体内に高濃度
で蓄積させ、これを採取することを特徴とするアラキド
ン酸含有油脂の製造方法である。
ｒａｓｐ、）糸状菌を、有機多塩基酸を添加した培地中
で培養することにより、アラキドン酸を菌体内に高濃度
で蓄積させ、これを採取することを特徴とするアラキド
ン酸含有油脂の製造方法である。
はえかび属微生物の一種であるエントモフトラ属は、菌
体中にアラキドン酸を蓄積することが知られており、こ
のときアラキドン酸は少量蓄積される。
体中にアラキドン酸を蓄積することが知られており、こ
のときアラキドン酸は少量蓄積される。
これに対して、本発明は、エントモフトラ属の菌体中に
多量のアラキドン酸を含有した油脂を蓄積させるもので
ある。
多量のアラキドン酸を含有した油脂を蓄積させるもので
ある。
本発明の使用菌株は、エントモフトラ属のエキスタリス
ｒＡＴｃｃ１４２９０．３２８９０Ｊであり、いずれも
ＡＴＣＣカタログ（菌株目録）に記載されている糸状菌
である。
ｒＡＴｃｃ１４２９０．３２８９０Ｊであり、いずれも
ＡＴＣＣカタログ（菌株目録）に記載されている糸状菌
である。
上記糸状菌は、炭素源として、グルコース、シュクロー
ス、フラクトース、マルトース、グリセリン、廃糖蜜、
澱粉、コーンスチープリカー、オリーブ油、やし油など
、窒素源として、イーストエキストラクト、ペプトン、
肉エキス、大豆粉、脱脂大豆粉、グルテン、ゼラチンな
どの有機体窒素中で生育する。この時、炭素源は、３〜
２０％にして用いるが、好ましくは、５〜１５％が良い
。
ス、フラクトース、マルトース、グリセリン、廃糖蜜、
澱粉、コーンスチープリカー、オリーブ油、やし油など
、窒素源として、イーストエキストラクト、ペプトン、
肉エキス、大豆粉、脱脂大豆粉、グルテン、ゼラチンな
どの有機体窒素中で生育する。この時、炭素源は、３〜
２０％にして用いるが、好ましくは、５〜１５％が良い
。
本発明において、培地中に添加する有機多塩基酸は、例
えばクエン酸、イソクエン酸、コハク酸、フマル酸、リ
ンゴ酸などがあり、添加量は０．０１〜１％好ましくは
０６３〜１％である。他に無基塩として、例えば、硫酸
鉄、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、塩化カリウム、燐酸
−カリウム、燐酸二カリウムなどが用いられる。そのほ
か必要に応じ、微量要素を添加してもよい。
えばクエン酸、イソクエン酸、コハク酸、フマル酸、リ
ンゴ酸などがあり、添加量は０．０１〜１％好ましくは
０６３〜１％である。他に無基塩として、例えば、硫酸
鉄、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、塩化カリウム、燐酸
−カリウム、燐酸二カリウムなどが用いられる。そのほ
か必要に応じ、微量要素を添加してもよい。
上記糸状菌の培養は、通常、通気攪拌で液体培養が行わ
れる。攪拌速度は、３００〜９００ ｒｐｍ 、通気量
は０．５〜２νｖｍで、通気を充分行う（ｋｌａ ＝６
００〜１０００ｈｒ−’ ）ことが必要であり、空気あ
るいは純酸素を用いてもよい。培養温度は、２０〜３３
℃で培養期間は３〜７日間である。この時ｐＨは弱酸性
がよく、好ましくは５〜６に調節する。培養終了後、濾
過もしくは遠心分離などで菌体を分離し、十分菌体を洗
浄した後、クロロホルム、メタノール、エタノール、プ
ロパツール、ブタノール、ヘキサン、アセトン及びそれ
らの混液で菌体から油脂を抽出する。さらに、フォルテ
（Ｆｏｌｃｈ）等の分配法などで、粗脂質を分離した後
、メチルエステル化し、ガスクロマド付質量分析計（Ｇ
Ｃ−ＭＳ）などで分析した。
れる。攪拌速度は、３００〜９００ ｒｐｍ 、通気量
は０．５〜２νｖｍで、通気を充分行う（ｋｌａ ＝６
００〜１０００ｈｒ−’ ）ことが必要であり、空気あ
るいは純酸素を用いてもよい。培養温度は、２０〜３３
℃で培養期間は３〜７日間である。この時ｐＨは弱酸性
がよく、好ましくは５〜６に調節する。培養終了後、濾
過もしくは遠心分離などで菌体を分離し、十分菌体を洗
浄した後、クロロホルム、メタノール、エタノール、プ
ロパツール、ブタノール、ヘキサン、アセトン及びそれ
らの混液で菌体から油脂を抽出する。さらに、フォルテ
（Ｆｏｌｃｈ）等の分配法などで、粗脂質を分離した後
、メチルエステル化し、ガスクロマド付質量分析計（Ｇ
Ｃ−ＭＳ）などで分析した。
本発明によれば、例えば、菌体４０ｇ／ １、脂質１６
ｇ１ｌｌ？：！、７−７−Ｆ−）’ン酸は４．８ｇ／
ｌ！ （３０％アラキドン酸／総脂質）にも達した。
ｇ１ｌｌ？：！、７−７−Ｆ−）’ン酸は４．８ｇ／
ｌ！ （３０％アラキドン酸／総脂質）にも達した。
含有脂肪酸は、分枝脂肪酸はまったく含有されておらず
、不飽和脂肪酸として、アラキドン酸以外にＣｌ６１１
％ Ｃｌ１ｌｌ＋が主として含有されていた。
、不飽和脂肪酸として、アラキドン酸以外にＣｌ６１１
％ Ｃｌ１ｌｌ＋が主として含有されていた。
（発明の効果）
本発明によれば、微生物を用いるので、アラキドン酸を
高濃度に含有する油脂が容易に得られ、医薬品、健康食
品、化粧品などの原料として、工業的に安価にしかも大
量に供給することが可能である。
高濃度に含有する油脂が容易に得られ、医薬品、健康食
品、化粧品などの原料として、工業的に安価にしかも大
量に供給することが可能である。
（実施例）
以下実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれに限定されるものではない。
発明はこれに限定されるものではない。
実施例１
グルコース５ｇ、酵母エキス２．４ｇ、硫酸鉄０．０５
ｇ、硫酸マグネシウム０．０１ｇ、塩化カリウム０．１
ｇ、燐酸−カリウム０．１ｇ、コハク酸０．５ｇを１０
０−の脱塩水にとかし、液体培地とした。これを５００
−坂ロコルベンに仕込み、１２０℃、２０分間加圧蒸気
滅菌し、ｐＨを５．４に調節した。あらかじめ、ポテト
寒天培地で培養したエントモフトラ・エキスタリス（Ｅ
ｎｔｏｍｏ ｈｔｈｏｒａ ｅｘｉｔａｌｉｓ） Ａ
Ｔ ＣＣ１４２９０の胞子のみを殺菌水に懸濁し、これ
をグルコースを５ｇに変えた前述の液体培地１００−入
りの坂ロコルベンに植菌し、２８°Ｃで３日間振盪培養
したものを種菌とした。新たに前述の液体培地１００１
ｎ１入りの坂ロコルベンにこの種菌を植菌し、２８℃で
４日間振盪培養した。
ｇ、硫酸マグネシウム０．０１ｇ、塩化カリウム０．１
ｇ、燐酸−カリウム０．１ｇ、コハク酸０．５ｇを１０
０−の脱塩水にとかし、液体培地とした。これを５００
−坂ロコルベンに仕込み、１２０℃、２０分間加圧蒸気
滅菌し、ｐＨを５．４に調節した。あらかじめ、ポテト
寒天培地で培養したエントモフトラ・エキスタリス（Ｅ
ｎｔｏｍｏ ｈｔｈｏｒａ ｅｘｉｔａｌｉｓ） Ａ
Ｔ ＣＣ１４２９０の胞子のみを殺菌水に懸濁し、これ
をグルコースを５ｇに変えた前述の液体培地１００−入
りの坂ロコルベンに植菌し、２８°Ｃで３日間振盪培養
したものを種菌とした。新たに前述の液体培地１００１
ｎ１入りの坂ロコルベンにこの種菌を植菌し、２８℃で
４日間振盪培養した。
培養終了後、集菌して、クロロホルム−メタノール（１
： ２）系の溶媒で攪拌しながら脂質を２回抽出した。
： ２）系の溶媒で攪拌しながら脂質を２回抽出した。
抽出液を併せてフォルテの方法で水溶性物質を除き、ク
ロロホルム層を濃縮して総脂質を得た。この時の乾燥菌
体量は３０ｇ／ ／ｌであり、総脂質量は乾燥菌体の約
３０％である９ｇ／βであつた。この総脂質の一部をと
りメタノール−ＢＦ３を加え、メチル化して、ガスクロ
マトグラフで分析した。その結果、目的とするアラキド
ン酸は、総脂質量の約２０％含有されていた。
ロロホルム層を濃縮して総脂質を得た。この時の乾燥菌
体量は３０ｇ／ ／ｌであり、総脂質量は乾燥菌体の約
３０％である９ｇ／βであつた。この総脂質の一部をと
りメタノール−ＢＦ３を加え、メチル化して、ガスクロ
マトグラフで分析した。その結果、目的とするアラキド
ン酸は、総脂質量の約２０％含有されていた。
実施例２
オリーブ油６ｇ、脱脂大豆粉３．６ｇ、硫化鉄０．０５
ｇ、硫酸マグネシウム０．０１ｇ、塩化カリウムＯ，Ｉ
ｇ、燐酸−カリウムＯ，Ｉｇ、イソクエン酸０．２ｇを
、５Ｑｍｌの脱塩水にとかし、液体培地とした。これを
５００ｍ１坂ロコルベンに仕込み、以下実施例１に基づ
いて培養し分析を行った。この時の乾燥菌体は３５ｇ／
ｌであり、総脂質は乾燥菌体の約３０％である１０．５
ｇ／ｌであった。この総脂質の一部をとりメタノール−
ＢＦ、を加え、煮沸しながらメチル化して、ガスクロマ
トグラフで分析した。その結果、目的とするアラキドン
酸は、総脂質量の約３０％含有されていた。
ｇ、硫酸マグネシウム０．０１ｇ、塩化カリウムＯ，Ｉ
ｇ、燐酸−カリウムＯ，Ｉｇ、イソクエン酸０．２ｇを
、５Ｑｍｌの脱塩水にとかし、液体培地とした。これを
５００ｍ１坂ロコルベンに仕込み、以下実施例１に基づ
いて培養し分析を行った。この時の乾燥菌体は３５ｇ／
ｌであり、総脂質は乾燥菌体の約３０％である１０．５
ｇ／ｌであった。この総脂質の一部をとりメタノール−
ＢＦ、を加え、煮沸しながらメチル化して、ガスクロマ
トグラフで分析した。その結果、目的とするアラキドン
酸は、総脂質量の約３０％含有されていた。
実施例３
グルコース３００ｇ、脱脂大豆粉２１６ｇ、硫酸鉄３ｇ
、硫酸マグネシウム０．６ｇ、塩化カリウム３ｇ、燐酸
−カリウム６ｇ、クエン酸２０ｇを６βの脱塩水にとか
し、液体培地とした。これを１０１ジャーファーメンタ
−に仕込み、１２０℃、２０分間加圧蒸気滅菌し、ｐｎ
を５．４に調節した。あらかじめ、ポテト寒天培地で培
養したエントモフトラ・エキスタリス（Ｅｎｔｏｍｏ
ｈｔｈｏｒａ ｅｘｉｔａｌｉｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３２
８９０の胞子のみを殺菌水に懸濁し、これを実施例１の
液体培地１００−入りの坂ロコルベンに植菌し、２８℃
で３日間振盪培養したものを種菌とした。新たに前述の
液体培地１０ｊ２ジャーファーメンタ−にこの種菌を植
菌し、２８℃、６００ｒｐｍ、 １ ｖｖｍで４日間培
養した。この間グルコース濃度は一定に保ち、最終的に
は、グルコース濃度は１２０ｇ／ ｌにも達した。
、硫酸マグネシウム０．６ｇ、塩化カリウム３ｇ、燐酸
−カリウム６ｇ、クエン酸２０ｇを６βの脱塩水にとか
し、液体培地とした。これを１０１ジャーファーメンタ
−に仕込み、１２０℃、２０分間加圧蒸気滅菌し、ｐｎ
を５．４に調節した。あらかじめ、ポテト寒天培地で培
養したエントモフトラ・エキスタリス（Ｅｎｔｏｍｏ
ｈｔｈｏｒａ ｅｘｉｔａｌｉｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３２
８９０の胞子のみを殺菌水に懸濁し、これを実施例１の
液体培地１００−入りの坂ロコルベンに植菌し、２８℃
で３日間振盪培養したものを種菌とした。新たに前述の
液体培地１０ｊ２ジャーファーメンタ−にこの種菌を植
菌し、２８℃、６００ｒｐｍ、 １ ｖｖｍで４日間培
養した。この間グルコース濃度は一定に保ち、最終的に
は、グルコース濃度は１２０ｇ／ ｌにも達した。
培養終了後、集菌して、ヘキサン及びクロロホルムで脂
質を２回抽出した。抽出液を併せて濃縮、水洗した後、
クロロホルム層を濃縮して総脂質を得た。この時の乾燥
菌体量は４０ｇ／ ｌであり、総脂質量は乾燥菌体の約
３５％である１４ｇ／ １であった。
質を２回抽出した。抽出液を併せて濃縮、水洗した後、
クロロホルム層を濃縮して総脂質を得た。この時の乾燥
菌体量は４０ｇ／ ｌであり、総脂質量は乾燥菌体の約
３５％である１４ｇ／ １であった。
この総脂質の一部をとりメタノール−ＢＦｆｆを加え、
煮沸しながらメチル化して、ガスクロマトグラフで分析
した。その結果、目的とするアラキドン酸は、総脂質量
の約２５％含有されていた。
煮沸しながらメチル化して、ガスクロマトグラフで分析
した。その結果、目的とするアラキドン酸は、総脂質量
の約２５％含有されていた。
実施例４
実施例３の中で、回転数を６０Ｏｒｐｍ 、空気を純酸
素に変え、通気量を１シシｍで４日間培養した。
素に変え、通気量を１シシｍで４日間培養した。
培養終了後、上記の方法で脂質を抽出した。この時の乾
燥菌体量は５０ｇ／ ｌであり、総脂質量は乾燥菌体の
約４０％である２０ｇ／ ｌであった。脂質分析をした
ところ、目的とするアラキドン酸は、総脂質量の約３０
％含有されており、空気のみに比べて乾燥菌体、脂質含
量及びアラキドン酸生産量が増加した。
燥菌体量は５０ｇ／ ｌであり、総脂質量は乾燥菌体の
約４０％である２０ｇ／ ｌであった。脂質分析をした
ところ、目的とするアラキドン酸は、総脂質量の約３０
％含有されており、空気のみに比べて乾燥菌体、脂質含
量及びアラキドン酸生産量が増加した。
実施例５
実施例４の中で、クエン酸を０．５％に増加して３日間
培養した。培養終了後、上記の方法で脂質を抽出した。
培養した。培養終了後、上記の方法で脂質を抽出した。
この時の乾燥菌体量は５０ｇ／ ｌであり、総脂質量は
乾燥菌体の約４０％である２０ｇ／βであった。脂質分
析をしたところ、目的とするアラキドン酸は、総脂質量
の約３５％含有されており、菌体の成長が著しく良く、
アラキドン酸生産量が増加した。
乾燥菌体の約４０％である２０ｇ／βであった。脂質分
析をしたところ、目的とするアラキドン酸は、総脂質量
の約３５％含有されており、菌体の成長が著しく良く、
アラキドン酸生産量が増加した。
比較例
実施例１においてクエン酸を添加せずに同様に行った。
このとき得られた乾燥菌体量は２５ｇ／ ｌであり、総
脂質量は乾燥菌体の約２０％である５ｇ／ｌであった。
脂質量は乾燥菌体の約２０％である５ｇ／ｌであった。
脂質分析をしたところ、目的とするアラキドン酸総脂質
の約１５％であり、全体のアラキドン酸収量が著しく低
下した。
の約１５％であり、全体のアラキドン酸収量が著しく低
下した。
Claims (1)
- エントモフトラ属（￥Ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａ￥ｓ
ｐ．）糸状菌を、有機多塩基酸を添加した培地中で培養
することにより、アラキドン酸を菌体内に高濃度で蓄積
させ、これを採取することを特徴とするアラキドン酸含
有油脂の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63237531A JP2730081B2 (ja) | 1988-09-24 | 1988-09-24 | 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63237531A JP2730081B2 (ja) | 1988-09-24 | 1988-09-24 | 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0286789A true JPH0286789A (ja) | 1990-03-27 |
| JP2730081B2 JP2730081B2 (ja) | 1998-03-25 |
Family
ID=17016716
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63237531A Expired - Fee Related JP2730081B2 (ja) | 1988-09-24 | 1988-09-24 | 微生物によるアラキドン酸含有油脂の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2730081B2 (ja) |
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| JPH10139673A (ja) * | 1996-11-06 | 1998-05-26 | F Hoffmann La Roche Ag | 製 剤 |
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| US7863024B2 (en) | 2002-04-26 | 2011-01-04 | Suntory Holdings Limited | Process for producing highly unsaturated fatty acid-containing lipid |
-
1988
- 1988-09-24 JP JP63237531A patent/JP2730081B2/ja not_active Expired - Fee Related
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