JPH0223878A - 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 - Google Patents
高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は醗酵法による高度不飽和脂肪酸及びそれらを含
有する脂質の製造方法に関する。
有する脂質の製造方法に関する。
微生物を利用する高度不飽和脂肪酸の製造方法として、
様々な菌の利用が種々提案されているが、エキノスポラ
ンジウム（ｋ…ｑ並訂叩）属による高度不飽和脂肪酸の
製造方法は知られていない。
様々な菌の利用が種々提案されているが、エキノスポラ
ンジウム（ｋ…ｑ並訂叩）属による高度不飽和脂肪酸の
製造方法は知られていない。
従って本発明は、高度不飽和脂肪酸を生産する能力を有
することが知られていなかったエキノスボランジウム属
微生物を利用して、安価な常用の培地を用いて効率よく
高度不飽和脂肪酸を製造する方法を提供しようとするも
のである。
することが知られていなかったエキノスボランジウム属
微生物を利用して、安価な常用の培地を用いて効率よく
高度不飽和脂肪酸を製造する方法を提供しようとするも
のである。
本発明者等は、上記の目的を達成するため種々研究した
結果、エキノスボランジウム属に属する微生物が高度不
飽和脂肪酸を生産する能力を有するという全く新しい知
見を得た。従って本発明は、エキノスポランジウム属に
属し、高度不飽和脂肪酸生産能を有する微生物を培養し
て高度不飽和脂肪酸又は高度不飽和脂肪酸を含有する脂
質を生成せしめ、そして高度不飽和脂肪酸を採取するこ
とを特徴とする高度不飽和脂肪酸の製造方法；及びエキ
ノスボランジウム属に属し、高度不飽和脂肪酸生産能を
有する微生物を培養し、そして高度不飽和脂肪酸を含有
する脂質を採取することを特徴とする高度不飽和脂肪酸
を含有する脂質の製造方法を提供する。
結果、エキノスボランジウム属に属する微生物が高度不
飽和脂肪酸を生産する能力を有するという全く新しい知
見を得た。従って本発明は、エキノスポランジウム属に
属し、高度不飽和脂肪酸生産能を有する微生物を培養し
て高度不飽和脂肪酸又は高度不飽和脂肪酸を含有する脂
質を生成せしめ、そして高度不飽和脂肪酸を採取するこ
とを特徴とする高度不飽和脂肪酸の製造方法；及びエキ
ノスボランジウム属に属し、高度不飽和脂肪酸生産能を
有する微生物を培養し、そして高度不飽和脂肪酸を含有
する脂質を採取することを特徴とする高度不飽和脂肪酸
を含有する脂質の製造方法を提供する。
本発明において、高度不飽和脂肪酸とは、３個以上の二
重結合を炭素鎖中に有する脂肪酸を意味し、好ましくは
炭素原子数１８〜２２個を有する。このような高度不飽
和脂肪酸として、例えば、Ｔリルン酸、ビスホモ−Ｔ−
リルン酸、アラキドン酸等を挙げることができる。
重結合を炭素鎖中に有する脂肪酸を意味し、好ましくは
炭素原子数１８〜２２個を有する。このような高度不飽
和脂肪酸として、例えば、Ｔリルン酸、ビスホモ−Ｔ−
リルン酸、アラキドン酸等を挙げることができる。
本発明においては、エキノスポランジウム属に属し、高
度不飽和脂肪酸生産能を有する微生物であればすべて使
用することができる。例えばエキノスボランジウム・ト
ランスパーサリス（Ｅｃｈｉｎｏｓ ｏｒａｎ ｉｕｍ
ｔｒａｎｓｖｅｒｓａ目５）ＡＴＣＣ１６９６０（
Ｎｌ？ＲＬ ３１１６）、ＡＴＣＣ１８０３６（ＮＲＲ
Ｌ ５５２５）等を挙げることができる。これらの菌株
はいずれも、米国アメリカン・タイプ・カルチャー・コ
レクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ；＾ＴＣＣ）からなんら制
限なく入手することができる。
度不飽和脂肪酸生産能を有する微生物であればすべて使
用することができる。例えばエキノスボランジウム・ト
ランスパーサリス（Ｅｃｈｉｎｏｓ ｏｒａｎ ｉｕｍ
ｔｒａｎｓｖｅｒｓａ目５）ＡＴＣＣ１６９６０（
Ｎｌ？ＲＬ ３１１６）、ＡＴＣＣ１８０３６（ＮＲＲ
Ｌ ５５２５）等を挙げることができる。これらの菌株
はいずれも、米国アメリカン・タイプ・カルチャー・コ
レクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ；＾ＴＣＣ）からなんら制
限なく入手することができる。
エキノスボランジウム属に属し高度不飽和脂肪酸生産能
を有する微生物を培養して得られる高度不飽和脂肪酸は
、例えばγ−リルン酸、ビスホモ−Ｔ−リルン酸、アラ
キドン酸等を挙げることができる。
を有する微生物を培養して得られる高度不飽和脂肪酸は
、例えばγ−リルン酸、ビスホモ−Ｔ−リルン酸、アラ
キドン酸等を挙げることができる。
本発明に使用される菌株を培養する為には、その菌株の
胞子、菌子、又は予め培養して得られた前培養液を、液
体培地又は固体培地に接種し培養する。液体培地の場合
に、炭素源としてはグルコース、フラクトース、キシロ
ース、サッカロースマルトース、可溶性デンプン、糖蜜
、グリセロール、マンニトール等の一般的に使用されて
いるものが、いずれも使用できるが、これらに限られる
ものではない。窒素源としてはペプトン、酵母エキス、
麦芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンステイブリ
カー等の天然窒素源の他に、尿素等の有機窒素源、なら
びに硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム等の無機窒素源を用いることができる。この他必要
に応じリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅等
の無機塩及びビタミン等も微量栄養源として使用できる
。これらの培地成分は微生物の成育を害しない濃度であ
れば特に制限はない。実用上一般に、炭素源は０、１〜
３０重看％、好ましくは１〜１０重景％、窒素源は０．
０１〜５重量％、好ましくは０．１〜２重看％の濃度と
するのが良い。
胞子、菌子、又は予め培養して得られた前培養液を、液
体培地又は固体培地に接種し培養する。液体培地の場合
に、炭素源としてはグルコース、フラクトース、キシロ
ース、サッカロースマルトース、可溶性デンプン、糖蜜
、グリセロール、マンニトール等の一般的に使用されて
いるものが、いずれも使用できるが、これらに限られる
ものではない。窒素源としてはペプトン、酵母エキス、
麦芽エキス、肉エキス、カザミノ酸、コーンステイブリ
カー等の天然窒素源の他に、尿素等の有機窒素源、なら
びに硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム等の無機窒素源を用いることができる。この他必要
に応じリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅等
の無機塩及びビタミン等も微量栄養源として使用できる
。これらの培地成分は微生物の成育を害しない濃度であ
れば特に制限はない。実用上一般に、炭素源は０、１〜
３０重看％、好ましくは１〜１０重景％、窒素源は０．
０１〜５重量％、好ましくは０．１〜２重看％の濃度と
するのが良い。
固体培地で培養する場合は、固形物重量に対して５０〜
１００重量％の水を加えたふすま、もみがら、米ぬか等
を用い。５〜４０’Ｃ１好ましくは２０〜３０℃の温度
において、３〜１４日間培養を行う。この場合に必要に
応じて培地中に窒素源、無機塩類、微量栄養源を加える
ことができる。
１００重量％の水を加えたふすま、もみがら、米ぬか等
を用い。５〜４０’Ｃ１好ましくは２０〜３０℃の温度
において、３〜１４日間培養を行う。この場合に必要に
応じて培地中に窒素源、無機塩類、微量栄養源を加える
ことができる。
また、高度不飽和脂肪酸の生産量を増加せしめるために
は、モルティエレラ属微生物等を利用する場合と同様、
培地中にヘキサデカンもしくはオクタデカンのごとき炭
化水素；オレイン酸もしくはリノール酸のごとき脂肪酸
又はその塩、例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩；
又はオリーブ油、綿実油もしくはヤシ油のごとき油脂類
を単独で、又は組み合わせて存在せしめるのが好ましい
。
は、モルティエレラ属微生物等を利用する場合と同様、
培地中にヘキサデカンもしくはオクタデカンのごとき炭
化水素；オレイン酸もしくはリノール酸のごとき脂肪酸
又はその塩、例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩；
又はオリーブ油、綿実油もしくはヤシ油のごとき油脂類
を単独で、又は組み合わせて存在せしめるのが好ましい
。
これらの添加物は培養開始前の培地又は培養中の培養液
に添加することができる。これらの添加物は一度に添加
することもでき、又は連続的に、もしくは複数回に分け
て経時的に添加するこ２もできる。培養開始前において
は炭化水素、脂肪酸もしくはその塩、又は油脂類の添加
が好ましく、培養中においては脂肪酸もしくはその塩、
又は油脂類の添加が好ましいく特開昭６３−１４６９５
、６３−１４６９６６３−１４６９７ 、６３−４４
８９１）。
に添加することができる。これらの添加物は一度に添加
することもでき、又は連続的に、もしくは複数回に分け
て経時的に添加するこ２もできる。培養開始前において
は炭化水素、脂肪酸もしくはその塩、又は油脂類の添加
が好ましく、培養中においては脂肪酸もしくはその塩、
又は油脂類の添加が好ましいく特開昭６３−１４６９５
、６３−１４６９６６３−１４６９７ 、６３−４４
８９１）。
またさらに、ビスホモ−Ｔ−リルン酸の生産量を増加せ
しめるためには、アラキドン酸生産能を有するエキノス
ポランジウム属微生物を胡麻油又は落花生油、あるいは
胡麻油又は落花生油中に含まれる有効性分の存在下で培
養するのが好ましぃ。この場合の胡麻油及び落花生油は
粗製品でも精製品でもよい。本発明においては、ビスホ
モ−γ−リルン酸の蓄積を促進する物質として胡麻油の
抽出物を使用することができ、この場合、胡麻油とは実
質的に非混和性であり且つ有効成分を抽出・溶解するこ
とができる種々の有機溶剤を用いて抽出を行うことがで
きる。このような有機溶剤として、例えばアセトン、メ
チルエチルケトン、ジエチルケトン、メタノール、エタ
ノール等を挙げることができる。有効成分を含存する抽
出物を得るには、例えば胡麻油と上記の溶剤のいずれか
とを均一に混合した後、低温において静置し、遠心分離
等の常法に従って相分離を行い、溶剤画分から溶剤を蒸
発除去することにより得られる。本発明において使用す
る添加物はまた、胡麻種子からの抽出物であってもよい
。この場合、胡麻種子を必要により破砕した後、任意の
溶剤、例えば胡麻油からの抽出について前記した溶剤を
用いて常法により抽出することができる。抽出残渣を分
離した後、抽出液から蒸発等により溶剤を除去すること
により抽出物が得られる。
しめるためには、アラキドン酸生産能を有するエキノス
ポランジウム属微生物を胡麻油又は落花生油、あるいは
胡麻油又は落花生油中に含まれる有効性分の存在下で培
養するのが好ましぃ。この場合の胡麻油及び落花生油は
粗製品でも精製品でもよい。本発明においては、ビスホ
モ−γ−リルン酸の蓄積を促進する物質として胡麻油の
抽出物を使用することができ、この場合、胡麻油とは実
質的に非混和性であり且つ有効成分を抽出・溶解するこ
とができる種々の有機溶剤を用いて抽出を行うことがで
きる。このような有機溶剤として、例えばアセトン、メ
チルエチルケトン、ジエチルケトン、メタノール、エタ
ノール等を挙げることができる。有効成分を含存する抽
出物を得るには、例えば胡麻油と上記の溶剤のいずれか
とを均一に混合した後、低温において静置し、遠心分離
等の常法に従って相分離を行い、溶剤画分から溶剤を蒸
発除去することにより得られる。本発明において使用す
る添加物はまた、胡麻種子からの抽出物であってもよい
。この場合、胡麻種子を必要により破砕した後、任意の
溶剤、例えば胡麻油からの抽出について前記した溶剤を
用いて常法により抽出することができる。抽出残渣を分
離した後、抽出液から蒸発等により溶剤を除去すること
により抽出物が得られる。
本発明によれば、この様にして調製される抽出物中に含
まれるセサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセ
サミノール、セサモリン、２（３，４−メチレンジオキ
シフェニル）−６（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェ
ニル）−３゜７−シオキサビシクロ〔３゜３．０〕オク
タン、２．６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシ
フェニル）−３，７−シオキサビシクロ（３，３゜０〕
オクタン、又は１−（３，４−メチレンジオキシフェニ
ル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ
）−３，７−シオキサビシクロ（３，３，０）オクタン
等のリグナン類化合物を単独で、又はいずれか２種類以
上を組み合わせて使用することもできる。これらはいず
れも既知化合物であり商業的に入手することができる。
まれるセサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセ
サミノール、セサモリン、２（３，４−メチレンジオキ
シフェニル）−６（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェ
ニル）−３゜７−シオキサビシクロ〔３゜３．０〕オク
タン、２．６−ビス−（３−メトキシ−４−ヒドロキシ
フェニル）−３，７−シオキサビシクロ（３，３゜０〕
オクタン、又は１−（３，４−メチレンジオキシフェニ
ル）−６−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェノキシ
）−３，７−シオキサビシクロ（３，３，０）オクタン
等のリグナン類化合物を単独で、又はいずれか２種類以
上を組み合わせて使用することもできる。これらはいず
れも既知化合物であり商業的に入手することができる。
また、これらの化合物を胡麻油抽出物から得るためには
、前記のようにして得られる抽出物をカラムクロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィー、再結晶、蒸留
等の常法に従って処理することにより目的とする化合物
を単離すればよい。
、前記のようにして得られる抽出物をカラムクロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィー、再結晶、蒸留
等の常法に従って処理することにより目的とする化合物
を単離すればよい。
この発明の添加物としてはさらに、各種の植物、例えば
香辛性植物、例えばタラボン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）、イ
ノンド種子（Ｄｉｌｌ ５ｅｅｄ） 、パセリ（Ｐａｒ
ｓ Ｉｅｙ）、ウコン（７ｕｒｍｅｒｉｃ）、ナツメグ
（Ｎｕ ｔｍｅｇ）等からの抽出物、又はこれらから製
造された香辛料からの抽出物を使用することができる。
香辛性植物、例えばタラボン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）、イ
ノンド種子（Ｄｉｌｌ ５ｅｅｄ） 、パセリ（Ｐａｒ
ｓ Ｉｅｙ）、ウコン（７ｕｒｍｅｒｉｃ）、ナツメグ
（Ｎｕ ｔｍｅｇ）等からの抽出物、又はこれらから製
造された香辛料からの抽出物を使用することができる。
これらの抽出物は常用の溶剤、例えばジクロロメタン、
エタノール、メタノール、エチルエーテル等を用いて調
製することができる。
エタノール、メタノール、エチルエーテル等を用いて調
製することができる。
添加物の量はおよそ次の通りである。胡麻油又は落花生
油、あるいはこの両者の総添加量は培地に対して０．０
０１〜１０重足％、好ましくは０．５〜１０重量％であ
る。胡麻油の抽出物を添加する場合、その添加量は培地
に対して３Ｘ１０−’〜３Ｘ１０−’重量％である。ま
た、セサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセサ
ミノール等のリグナン類化合物を添加する場合その量（
これらの２種類以上を組み合わせて使用する場合はその
合計量）は、培地に対してｔｘｔｏ”’〜ｌＸｌ０−’
重量％である。
油、あるいはこの両者の総添加量は培地に対して０．０
０１〜１０重足％、好ましくは０．５〜１０重量％であ
る。胡麻油の抽出物を添加する場合、その添加量は培地
に対して３Ｘ１０−’〜３Ｘ１０−’重量％である。ま
た、セサミン、セサミノール、エピセサミン、エピセサ
ミノール等のリグナン類化合物を添加する場合その量（
これらの２種類以上を組み合わせて使用する場合はその
合計量）は、培地に対してｔｘｔｏ”’〜ｌＸｌ０−’
重量％である。
これらの添加物類は生産微生物を接種する前又はその直
後の培地に加えてもよく、又は培養を開始した後に加え
てもよく、あるいは両時点で加えてもよい。培養開始後
の添加は１回でもよく、又は複数回に分けて間欠的に添
加してもよい。あるいは、連続的に添加することもでき
る。なお、上記の各種の添加物のほかに、さらにアラキ
ドン酸の生産を上げる油脂、例えば、オリブ油、大豆油
、綿実油、ヤシ油等を使用することもできる（特願昭６
３−５３６４２）。
後の培地に加えてもよく、又は培養を開始した後に加え
てもよく、あるいは両時点で加えてもよい。培養開始後
の添加は１回でもよく、又は複数回に分けて間欠的に添
加してもよい。あるいは、連続的に添加することもでき
る。なお、上記の各種の添加物のほかに、さらにアラキ
ドン酸の生産を上げる油脂、例えば、オリブ油、大豆油
、綿実油、ヤシ油等を使用することもできる（特願昭６
３−５３６４２）。
培養温度は５〜４０°Ｃ１好ましくは２０〜３０°Ｃと
し、培地のｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９として通
気攪拌培養、振盪培養、又は静置培養を行う。
し、培地のｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９として通
気攪拌培養、振盪培養、又は静置培養を行う。
培養は通常２〜１０日間行う。
このように培養して、菌体内に高度不飽和脂肪酸を含有
する脂質が生成蓄積される。液体培地を使用した場合に
は培養菌体から、次のようにして高度不飽和脂肪酸の採
取を行う。
する脂質が生成蓄積される。液体培地を使用した場合に
は培養菌体から、次のようにして高度不飽和脂肪酸の採
取を行う。
培養終了後、培養液より遠心分離及び濾過等の常用の固
液分離手段により培養菌体を得る。菌体は十分水洗し、
好ましくは乾燥する。乾燥は凍結乾燥、風乾等によって
行うことができる。乾燥菌体は、好ましくは窒素気流下
で有機溶媒によって抽出処理する。有機溶媒としてはエ
ーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、石油エーテル等を用いることが
でき、またメタノールと石油エーテルの交互抽出やクロ
ロホルム−メタノール−水の一層系の溶媒を用いた抽出
によっても良好な結果を得ることができる。抽出物から
減圧下で有機溶媒を留去することにより、高濃度の高度
不飽和脂肪酸を含有した脂質が得られる。
液分離手段により培養菌体を得る。菌体は十分水洗し、
好ましくは乾燥する。乾燥は凍結乾燥、風乾等によって
行うことができる。乾燥菌体は、好ましくは窒素気流下
で有機溶媒によって抽出処理する。有機溶媒としてはエ
ーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホ
ルム、ジクロロメタン、石油エーテル等を用いることが
でき、またメタノールと石油エーテルの交互抽出やクロ
ロホルム−メタノール−水の一層系の溶媒を用いた抽出
によっても良好な結果を得ることができる。抽出物から
減圧下で有機溶媒を留去することにより、高濃度の高度
不飽和脂肪酸を含有した脂質が得られる。
また、上記の方法に代えて湿菌体を用いて抽出を行うこ
とができる。メタノール、エタノール等の水に対して相
溶性の溶媒、又はこれらと水及び／または他の溶媒とか
ら成る水に対して相溶性の混合溶媒を使用する。その他
の手順は上記と同様である。
とができる。メタノール、エタノール等の水に対して相
溶性の溶媒、又はこれらと水及び／または他の溶媒とか
ら成る水に対して相溶性の混合溶媒を使用する。その他
の手順は上記と同様である。
上記のようにして得られた脂質中には、各種高度不飽和
脂肪酸が脂質化合物、例えば脂肪の構成成分として含ま
れている。これらを直接分離することもできるが、低級
アルコールとのエステル、例えばγ−リルン酸メチル、
ビスホモ−γ−リルン酸メチル、アラキドン酸メチルと
して分離するのが好ましい。このようなエステルにする
ことにより、他の脂質成分から容易に分離することがで
き、また、培養中に生成する他の脂肪酸、例えばパルミ
チン酸、オレイン酸、リノール酸等（これらも、高度不
飽和脂肪酸のエステル化に際してエステル化される）か
ら容易に分離することができる。例えば、高度不飽和脂
肪酸のメチルエステルを得るには、前記の抽出脂質を無
水メタノール−塩酸５〜１０％、ＢＦ３−メタノール１
０〜５０％等により、室温にて１〜２４時間処理するの
が好ましい。
脂肪酸が脂質化合物、例えば脂肪の構成成分として含ま
れている。これらを直接分離することもできるが、低級
アルコールとのエステル、例えばγ−リルン酸メチル、
ビスホモ−γ−リルン酸メチル、アラキドン酸メチルと
して分離するのが好ましい。このようなエステルにする
ことにより、他の脂質成分から容易に分離することがで
き、また、培養中に生成する他の脂肪酸、例えばパルミ
チン酸、オレイン酸、リノール酸等（これらも、高度不
飽和脂肪酸のエステル化に際してエステル化される）か
ら容易に分離することができる。例えば、高度不飽和脂
肪酸のメチルエステルを得るには、前記の抽出脂質を無
水メタノール−塩酸５〜１０％、ＢＦ３−メタノール１
０〜５０％等により、室温にて１〜２４時間処理するの
が好ましい。
前記の処理液から高度不飽和脂肪酸メチルエステルを回
収するにはヘキサン、エーテル、酢酸エチル等の有機溶
媒で抽出するのが好ましい。次に、この抽出液を無水硫
酸ナトリウム等により乾燥し、有機溶媒を好ましくは減
圧下で留去することにより主として脂肪酸エステルから
なる混合物が得られる。この混合物中には、目的とする
高度不飽和脂肪酸メチルエステルの他に、パルミチン酸
メチルエステル、ステアリン酸メチルエステル、オレイ
ン酸メチルエステル等の脂肪酸メチルエステルが含まれ
ている。これらの脂肪酸メチルエステル混合物から高度
不飽和脂肪酸メチルエステルを単離するには、カラムク
ロマトグラフィー、低温結晶化法、尿素包接法、液々交
流分配クロマトグラフィー等を単独で、又は組み合わせ
て使用することができる。
収するにはヘキサン、エーテル、酢酸エチル等の有機溶
媒で抽出するのが好ましい。次に、この抽出液を無水硫
酸ナトリウム等により乾燥し、有機溶媒を好ましくは減
圧下で留去することにより主として脂肪酸エステルから
なる混合物が得られる。この混合物中には、目的とする
高度不飽和脂肪酸メチルエステルの他に、パルミチン酸
メチルエステル、ステアリン酸メチルエステル、オレイ
ン酸メチルエステル等の脂肪酸メチルエステルが含まれ
ている。これらの脂肪酸メチルエステル混合物から高度
不飽和脂肪酸メチルエステルを単離するには、カラムク
ロマトグラフィー、低温結晶化法、尿素包接法、液々交
流分配クロマトグラフィー等を単独で、又は組み合わせ
て使用することができる。
こうして単離された各種高度不飽和脂肪酸メチルから高
度不飽和脂肪酸を得るには、アルカリで加水分解した後
、エーテル、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出すればよい
。
度不飽和脂肪酸を得るには、アルカリで加水分解した後
、エーテル、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出すればよい
。
又、高度不飽和脂肪酸をそのメチルエステルを経ないで
採取するには、前記の抽出脂質をアルカリ分解（例えば
５％水酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）した
後、この分解液から、脂肪酸の抽出・精製に常用されて
いる方法により抽出・精製することができる。
採取するには、前記の抽出脂質をアルカリ分解（例えば
５％水酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）した
後、この分解液から、脂肪酸の抽出・精製に常用されて
いる方法により抽出・精製することができる。
次に、実施例により、この発明をさらに具体的に説明す
る。
る。
Ｉｆ！ＩＪＬＬ
グルコース２％及び酵母エキス１％を含む培地（ｐＨ６
，０） １００−を５００ｍ１エルレンマイヤーフラ
スコに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した。エキノスボ
ランジウム・トランスパーサリス（Ｅｃｈｉｎｏｓ−７
ｔｒａｎｓｖｅｒｓａｌｉｓ）ＮＲＲＬ３１１６（八Ｔ
ＣＣ１６９６０）及びＮＲＲＬ ５５２５（ＡＴＣＣ１
８０３６）を別々に培地に１白金耳を接種し、レシプロ
シーニーカー（１１０ｒｐｍ）により２８゛Ｃで８日間
振力培養した。培養後、濾過により菌体を回収し、十分
水洗した後、凍結乾燥し、それぞれ８０９■、及び７８
４■の乾燥菌体を得た。この菌体より、クロロホルム−
メタノール水の一層系の？容媒を用いるＢ ｌ ｉｇｈ
＆Ｄｙｅｒの抽出法によって油脂を抽出した所、それ
ぞれ１９４．５■、及び１６１．３■の油脂が得られた
。この油脂を無水メタノール−塩酸（１０％）を用いて
５０℃にて３時間処理することによってメチルエステル
化し、エーテルで抽出して、それぞれ４８５■、及び４
２０曙の脂肪酸メチルを得た。この脂肪酸メチルの組成
はガスクロマトグラフィーによる分析で、それぞれパル
ミチン酸メチル１１，９％、及び１２．２％、ステアリ
ン酸メチル４．９％、及び４．２％、オレイン酸メチル
３８．４％、及び４０．１％、リノール酸メチル１３．
１％、及び１４．３％、γ−リルン酸メチル５．５％、
及び５．１％、ビスホモ−Ｔ−リルン酸メチル５．０％
、及び４．７％、アラキドン酸メチル２１．２％、及び
１９．４％であることが認められた。ＮＲＲＬ３１１６
株より得た、この混合物脂肪酸メチルについて、さらに
カラムクロマトグラフィーによって分離し、Ｔ−リルン
酸メチル、ビスホモ−γ−リルン酸メチル及びアラキド
ン酸メチル画分をそれぞれ分取し、ロータリーエバポレ
ーターによって溶媒を留去した結果精製されたγ−リル
ン酸メチル、ビスホモ−γ−リルン酸メチル及びアラキ
ドン酸メチルをそれぞれ１３．３ 、１２．１、及び５
１．４■得た。本標品と市販のＴ−リルン酸メチル、ビ
スホモ−γ−リルン酸メチル及びアラキドン酸メチル標
〈許サンプルについて、ガスクロマトグラフィー分析、
高速液体クロマトグラフィー分析、質量分析、及びＮＭ
Ｒ分析によって肚較を行ったところ、両者はいずれの分
析においても一致した。
，０） １００−を５００ｍ１エルレンマイヤーフラ
スコに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した。エキノスボ
ランジウム・トランスパーサリス（Ｅｃｈｉｎｏｓ−７
ｔｒａｎｓｖｅｒｓａｌｉｓ）ＮＲＲＬ３１１６（八Ｔ
ＣＣ１６９６０）及びＮＲＲＬ ５５２５（ＡＴＣＣ１
８０３６）を別々に培地に１白金耳を接種し、レシプロ
シーニーカー（１１０ｒｐｍ）により２８゛Ｃで８日間
振力培養した。培養後、濾過により菌体を回収し、十分
水洗した後、凍結乾燥し、それぞれ８０９■、及び７８
４■の乾燥菌体を得た。この菌体より、クロロホルム−
メタノール水の一層系の？容媒を用いるＢ ｌ ｉｇｈ
＆Ｄｙｅｒの抽出法によって油脂を抽出した所、それ
ぞれ１９４．５■、及び１６１．３■の油脂が得られた
。この油脂を無水メタノール−塩酸（１０％）を用いて
５０℃にて３時間処理することによってメチルエステル
化し、エーテルで抽出して、それぞれ４８５■、及び４
２０曙の脂肪酸メチルを得た。この脂肪酸メチルの組成
はガスクロマトグラフィーによる分析で、それぞれパル
ミチン酸メチル１１，９％、及び１２．２％、ステアリ
ン酸メチル４．９％、及び４．２％、オレイン酸メチル
３８．４％、及び４０．１％、リノール酸メチル１３．
１％、及び１４．３％、γ−リルン酸メチル５．５％、
及び５．１％、ビスホモ−Ｔ−リルン酸メチル５．０％
、及び４．７％、アラキドン酸メチル２１．２％、及び
１９．４％であることが認められた。ＮＲＲＬ３１１６
株より得た、この混合物脂肪酸メチルについて、さらに
カラムクロマトグラフィーによって分離し、Ｔ−リルン
酸メチル、ビスホモ−γ−リルン酸メチル及びアラキド
ン酸メチル画分をそれぞれ分取し、ロータリーエバポレ
ーターによって溶媒を留去した結果精製されたγ−リル
ン酸メチル、ビスホモ−γ−リルン酸メチル及びアラキ
ドン酸メチルをそれぞれ１３．３ 、１２．１、及び５
１．４■得た。本標品と市販のＴ−リルン酸メチル、ビ
スホモ−γ−リルン酸メチル及びアラキドン酸メチル標
〈許サンプルについて、ガスクロマトグラフィー分析、
高速液体クロマトグラフィー分析、質量分析、及びＮＭ
Ｒ分析によって肚較を行ったところ、両者はいずれの分
析においても一致した。
尖籐尉蛮
グルコース２％及び酵母エキス１％、並びに種々の炭化
水素、脂肪酸ナトリウム又は油脂０．５％を含む培地（
ｐＨ６，０） ２ ｍｌを１０−のエルレンマイヤーフ
ラスコに入れ、１２０°Ｃで２０分間殺菌した。エキノ
スポランジウム・トランスパーサリスＮＲＲＬ ３１１
６ （ＡＴＣＣ１６９６０）をそれぞれの培地に１白金
耳を接種し、レシプロシェーカー（１１０ｒｐ＋＋）
ニより２８℃で７日間振優培養した。培養後、濾過によ
り菌体を回収し、十分水洗した後遠心エバポレーター（
６０℃、２時間）で乾燥させ、そして、塩化メチレン２
−１無水メタノール−塩酸（１０％）２ｍｌ加え、５０
℃で３時間処理することによってメチルエステル化し、
ｎ−ヘキサン４ ｍｌ水１ ｍｌを加え、２回抽出し溶
媒を遠心エバポレーター（４０℃、１時間）で留去した
後、得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラ
フィーで分析した。第１表にその結果を示す。
水素、脂肪酸ナトリウム又は油脂０．５％を含む培地（
ｐＨ６，０） ２ ｍｌを１０−のエルレンマイヤーフ
ラスコに入れ、１２０°Ｃで２０分間殺菌した。エキノ
スポランジウム・トランスパーサリスＮＲＲＬ ３１１
６ （ＡＴＣＣ１６９６０）をそれぞれの培地に１白金
耳を接種し、レシプロシェーカー（１１０ｒｐ＋＋）
ニより２８℃で７日間振優培養した。培養後、濾過によ
り菌体を回収し、十分水洗した後遠心エバポレーター（
６０℃、２時間）で乾燥させ、そして、塩化メチレン２
−１無水メタノール−塩酸（１０％）２ｍｌ加え、５０
℃で３時間処理することによってメチルエステル化し、
ｎ−ヘキサン４ ｍｌ水１ ｍｌを加え、２回抽出し溶
媒を遠心エバポレーター（４０℃、１時間）で留去した
後、得られた脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラ
フィーで分析した。第１表にその結果を示す。
標準培地に炭化水素、脂肪酸ナトリウム又は油脂類を添
加した場合、高度不飽和脂肪酸の生成量は無添加にくら
べ、１〜２０％向上した。
加した場合、高度不飽和脂肪酸の生成量は無添加にくら
べ、１〜２０％向上した。
実ｌｌ」走
グルコース４％、酵母エキス１％及び胡麻油２％を含む
培地（ｐＨ６，０）；グルコース４％、酵母エキス１％
及び落花生油２％を含む培地（ｐｌ＋ ６．０ ） ニ
ゲルコース４％、酵母エキス１％及びオリブ油２％を含
む培地（ｐ）１６．０）；並びにグルコース４％及び酵
母エキス１％を含む培地（ｐＨ６，０） ２ ｍｌを１
０−のエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０℃で２
０分間殺菌した。エキノスポランジウム・トランスパー
サリスＮＲＲＬ ３１１６（ＡＴＣＣ１６９６０）をそ
れぞれの培地に１白金耳を接種し、レシプロシェーカー
（１１０ｒｐ１ｍ）により２８°Ｃで７日間振盪培養し
た。培養後、実施例２と同様に濾過、水洗、乾燥、加水
分解、メチルエステル化、及び抽出を行い、得られた脂
肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィーで分析し
た。第２表にその結果を示す。
培地（ｐＨ６，０）；グルコース４％、酵母エキス１％
及び落花生油２％を含む培地（ｐｌ＋ ６．０ ） ニ
ゲルコース４％、酵母エキス１％及びオリブ油２％を含
む培地（ｐ）１６．０）；並びにグルコース４％及び酵
母エキス１％を含む培地（ｐＨ６，０） ２ ｍｌを１
０−のエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０℃で２
０分間殺菌した。エキノスポランジウム・トランスパー
サリスＮＲＲＬ ３１１６（ＡＴＣＣ１６９６０）をそ
れぞれの培地に１白金耳を接種し、レシプロシェーカー
（１１０ｒｐ１ｍ）により２８°Ｃで７日間振盪培養し
た。培養後、実施例２と同様に濾過、水洗、乾燥、加水
分解、メチルエステル化、及び抽出を行い、得られた脂
肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィーで分析し
た。第２表にその結果を示す。
男−」Ｌ−表
第３表から明らかなように、胡麻油又は落花生油を培地
に添加することにより、アラキドン酸の生産が押さえら
れ、ビスホモ−γ−リルン酸が大量に生産された。又、
胡麻油又は落花生油以外の油の一例としてオリブ油を添
加したが、ビスホモ−γ−リルン酸の大量生産は認めら
れなかった。
に添加することにより、アラキドン酸の生産が押さえら
れ、ビスホモ−γ−リルン酸が大量に生産された。又、
胡麻油又は落花生油以外の油の一例としてオリブ油を添
加したが、ビスホモ−γ−リルン酸の大量生産は認めら
れなかった。
この結果から、胡麻油及び落花生油以外に、胡麻油の有
機溶剤抽出物、あるいは該抽出物中の有効成分であるセ
サミン（２，６−ビス−（３，４メチレンジオキシフエ
ニル）−シス−３，７ジオキサビシクロ（３，３，０）
オクタン）、セサミノール（２−（３，４−メチレンジ
オキシ６−ヒドロキシフェニル）−６−（３，４−メチ
レンジオキシフェニル）−シス−３，７−シオキサビシ
クロＣ３，３，０）オクタン）、エピセサミン、エピセ
サミノール、さらに、胡麻油の粗製品からセサモリン、
又胡麻種子のアセトン抽出物から得た２−（３，４−メ
チレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−
ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ（３
，３，０）オクタン、２，６−ビス−（３−メトキシ−
４ヒドロキシフエニル）−３，７−ジオキサビシクロ（
３，３，０）オクタン、２−（３，４−メチレンジオキ
シフェニル）−６−（３−メトキシ４−ヒドロキシフェ
ノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ（３，３，０）オ
クタンの添加により、ビスホモ−γ−リルン酸の生産が
増加するのは明らかである（特願昭６３−５３６４２）
。
機溶剤抽出物、あるいは該抽出物中の有効成分であるセ
サミン（２，６−ビス−（３，４メチレンジオキシフエ
ニル）−シス−３，７ジオキサビシクロ（３，３，０）
オクタン）、セサミノール（２−（３，４−メチレンジ
オキシ６−ヒドロキシフェニル）−６−（３，４−メチ
レンジオキシフェニル）−シス−３，７−シオキサビシ
クロＣ３，３，０）オクタン）、エピセサミン、エピセ
サミノール、さらに、胡麻油の粗製品からセサモリン、
又胡麻種子のアセトン抽出物から得た２−（３，４−メ
チレンジオキシフェニル）−６−（３−メトキシ−４−
ヒドロキシフェニル）−３，７−ジオキサビシクロ（３
，３，０）オクタン、２，６−ビス−（３−メトキシ−
４ヒドロキシフエニル）−３，７−ジオキサビシクロ（
３，３，０）オクタン、２−（３，４−メチレンジオキ
シフェニル）−６−（３−メトキシ４−ヒドロキシフェ
ノキシ）−３，７−ジオキサビシクロ（３，３，０）オ
クタンの添加により、ビスホモ−γ−リルン酸の生産が
増加するのは明らかである（特願昭６３−５３６４２）
。
尖施貫（
グルコース４％、酵母エキス１％及びセサミン又はエピ
セサミン０．０１％を含む培地（ｐＨ６，０）２ｍ１を
１０ｍ１のエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０°
Ｃで２０分間殺菌した。エキノスポランジウム゛トラン
スパーヅリスＮＲＩ？Ｌ ３１１６（八ＴＣＣ１６９６
０）をそれぞれの培地に１白金耳を接種し、レシプロシ
ェーカー（１１０ｒｐｍ）により２８℃で７日間振盪培
養した。培養後、実施例２と同様に濾過、水洗、乾燥、
加水分解、メチルエステル化及び抽出を行い、得られた
脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィーで分析
した。セサミン、エピセサミンの添加によりビスホモ−
γ−リルン酸が大量に生産することが認められ、培地当
りの生産量はそれぞれ４０１．３＋ｎｇ／ ｌ、及び３
８３．５ｍｇ／ ｌであった。
セサミン０．０１％を含む培地（ｐＨ６，０）２ｍ１を
１０ｍ１のエルレンマイヤーフラスコに入れ、１２０°
Ｃで２０分間殺菌した。エキノスポランジウム゛トラン
スパーヅリスＮＲＩ？Ｌ ３１１６（八ＴＣＣ１６９６
０）をそれぞれの培地に１白金耳を接種し、レシプロシ
ェーカー（１１０ｒｐｍ）により２８℃で７日間振盪培
養した。培養後、実施例２と同様に濾過、水洗、乾燥、
加水分解、メチルエステル化及び抽出を行い、得られた
脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィーで分析
した。セサミン、エピセサミンの添加によりビスホモ−
γ−リルン酸が大量に生産することが認められ、培地当
りの生産量はそれぞれ４０１．３＋ｎｇ／ ｌ、及び３
８３．５ｍｇ／ ｌであった。
実画Ｉ狐に
グルコース４％及び酵母エキス１％を含む培地（ｐＨ６
，０） ４ ｍｌを２０ｍ１のエルレンマイヤーフラ
スコに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した。エキノスポ
ランジウム・トランスパーサリスＮＲＲＬ ３１１６（
ＡＴＣＣ１６９６０）を培地に１白金耳を接種し、レシ
プロシェーカー（ｌｌＯｒｍｐ）により２８℃で２日間
振侵培養した後、胡麻油８０■（２％）又はセサミン０
．４■（０，０１％）を加え、さらに６日間培養した。
，０） ４ ｍｌを２０ｍ１のエルレンマイヤーフラ
スコに入れ、１２０℃で２０分間殺菌した。エキノスポ
ランジウム・トランスパーサリスＮＲＲＬ ３１１６（
ＡＴＣＣ１６９６０）を培地に１白金耳を接種し、レシ
プロシェーカー（ｌｌＯｒｍｐ）により２８℃で２日間
振侵培養した後、胡麻油８０■（２％）又はセサミン０
．４■（０，０１％）を加え、さらに６日間培養した。
実施例２と同様に濾過、水洗、乾燥、加水分解、メチル
エステル化及び抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエス
テルをガスクロマトグラフィーで分析した。培養中に胡
麻油、又はセサミンを添加してもビスホモ−γ−リルン
酸が大量に生産することが認められ、培地当りの生産量
はそれぞれ４４０．３ｎｗｒ／ ７！、及び４１２．７
ｎｗ／ ｌ−であった。
エステル化及び抽出を行い、得られた脂肪酸メチルエス
テルをガスクロマトグラフィーで分析した。培養中に胡
麻油、又はセサミンを添加してもビスホモ−γ−リルン
酸が大量に生産することが認められ、培地当りの生産量
はそれぞれ４４０．３ｎｗｒ／ ７！、及び４１２．７
ｎｗ／ ｌ−であった。
夫施開■
香辛料であるタラボン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）、イノンド
種子（Ｄｉｌｌ ５ｅｅｄ） 、パセリ（Ｐａｒｓｌｅ
ｙ） 、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）、及びナツメグ（
Ｎｕｔｍｅｇ）各々０．５ｇに別々に５ ｍｌのジクロ
ロメタンを添加し、乳汁材中で磨砕、抽出を行った後、
遠心分離にかけて、上清を集め、溶媒をエバポレーター
で留去し、それぞれの香辛料について抽出物を得た。
種子（Ｄｉｌｌ ５ｅｅｄ） 、パセリ（Ｐａｒｓｌｅ
ｙ） 、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）、及びナツメグ（
Ｎｕｔｍｅｇ）各々０．５ｇに別々に５ ｍｌのジクロ
ロメタンを添加し、乳汁材中で磨砕、抽出を行った後、
遠心分離にかけて、上清を集め、溶媒をエバポレーター
で留去し、それぞれの香辛料について抽出物を得た。
上記の抽出物を４−のエタノールに溶解した溶液、ある
いは、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニン、ヒポ
キサンチンの各４■／ ｍｌ水溶液を、基本培地（グル
コース４％、酵母エキス１％、ｐｎ６．０）１０ｄ（試
験管中）にそれぞれ滅菌濾過後５０Ｊずつ添加し、これ
にエキノスポランジウム・トランスハーサリスＮＲＲＬ
３１１６（ＡＴＣＣ１６９６０）を１白金耳を接種し
、２８℃で６日間振盪培養（３００ｒｍｐ）して得られ
た菌体について実施例２に従ってそれぞれの培地当りの
ビスホモ−Ｔ−リルン酸生産量を求めたところ、タラボ
ン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）抽出物添加では０．３２ｇ／１
２．イノンド種子（Ｄｉｌｌ ５ｅｅｄ）抽出物添加で
は０．２８ｇ／！ｌ、パセリ（Ｐａｒｓｌｅｙ）抽出物
添加では０．２６ｇ／ｌ、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）
抽出物添加では０．４０ｇ／ｌ、ナツメグ（Ｎｕｔｍｅ
ｇ） 抽出物添加では０．３０ｇ／６、ウラシル添加
では０．２２ｇ／１１シトシン添加では０．２０ｇ／ｘ
、アデニン添加では０．２５ｇｚｌ、グアニン添加では
０．２３ｇ／ｌヒボキサンチン添加物では０．２１ｇ／
ｌであった。
いは、ウラシル、シトシン、アデニン、グアニン、ヒポ
キサンチンの各４■／ ｍｌ水溶液を、基本培地（グル
コース４％、酵母エキス１％、ｐｎ６．０）１０ｄ（試
験管中）にそれぞれ滅菌濾過後５０Ｊずつ添加し、これ
にエキノスポランジウム・トランスハーサリスＮＲＲＬ
３１１６（ＡＴＣＣ１６９６０）を１白金耳を接種し
、２８℃で６日間振盪培養（３００ｒｍｐ）して得られ
た菌体について実施例２に従ってそれぞれの培地当りの
ビスホモ−Ｔ−リルン酸生産量を求めたところ、タラボ
ン（Ｔａｒｒａｇｏｎ）抽出物添加では０．３２ｇ／１
２．イノンド種子（Ｄｉｌｌ ５ｅｅｄ）抽出物添加で
は０．２８ｇ／！ｌ、パセリ（Ｐａｒｓｌｅｙ）抽出物
添加では０．２６ｇ／ｌ、ウコン（Ｔｕｒｍｅｒｉｃ）
抽出物添加では０．４０ｇ／ｌ、ナツメグ（Ｎｕｔｍｅ
ｇ） 抽出物添加では０．３０ｇ／６、ウラシル添加
では０．２２ｇ／１１シトシン添加では０．２０ｇ／ｘ
、アデニン添加では０．２５ｇｚｌ、グアニン添加では
０．２３ｇ／ｌヒボキサンチン添加物では０．２１ｇ／
ｌであった。
又、同時に比較のために、これら添加物を加えなかった
対照区の培地当りのビスホモ−γ−リルン酸生産量は０
．１４ｇ／ｌであった。
対照区の培地当りのビスホモ−γ−リルン酸生産量は０
．１４ｇ／ｌであった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、エキノスポランジウム（￥Ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ
ｎｇｉｕｍ￥）属に属し、高度不飽和脂肪酸生産能を有
する微生物を培養して、高度不飽和脂肪酸、又は高度不
飽和脂肪酸を含有する脂質を生成せしめ、そして高度不
飽和脂肪酸を採取することを特徴とする高度不飽和脂肪
酸の製造方法。 ２、エキノスポランジウム（￥Ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ
ｎｇｉｕｍ￥）属に属し、高度不飽和脂肪酸生産能を有
する微生物を培養して、高度不飽和脂肪酸を含有する脂
質を採取することを特徴とする高度不飽和脂肪酸を含有
する脂質の製造方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63172589A JP2710344B2 (ja) | 1988-07-13 | 1988-07-13 | 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
| ES89307062T ES2062001T3 (es) | 1988-07-13 | 1989-07-12 | Procedimiento para la produccion de acidos grasos que tienen un alto grado de insaturacion. |
| EP89307062A EP0355972B1 (en) | 1988-07-13 | 1989-07-12 | Process for production of fatty acids having high degree of unsaturation |
| DE89307062T DE68912236T2 (de) | 1988-07-13 | 1989-07-12 | Verfahren zur Herstellung von hochgradig ungesättigten Fettsäuren. |
| AT89307062T ATE100148T1 (de) | 1988-07-13 | 1989-07-12 | Verfahren zur herstellung von hochgradig ungesaettigten fettsaeuren. |
| US07/649,144 US5314812A (en) | 1988-07-13 | 1991-02-01 | Microbiological process for production of fatty acids having high degree of unsaturation with echinosporangium |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63172589A JP2710344B2 (ja) | 1988-07-13 | 1988-07-13 | 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0223878A true JPH0223878A (ja) | 1990-01-26 |
| JP2710344B2 JP2710344B2 (ja) | 1998-02-10 |
Family
ID=15944649
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63172589A Expired - Fee Related JP2710344B2 (ja) | 1988-07-13 | 1988-07-13 | 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5314812A (ja) |
| EP (1) | EP0355972B1 (ja) |
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