JPH0297394A - 酵素触媒の処理方法 - Google Patents
酵素触媒の処理方法Info
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- JPH0297394A JPH0297394A JP24977088A JP24977088A JPH0297394A JP H0297394 A JPH0297394 A JP H0297394A JP 24977088 A JP24977088 A JP 24977088A JP 24977088 A JP24977088 A JP 24977088A JP H0297394 A JPH0297394 A JP H0297394A
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- glucose
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、酵素反応によるし一バリンの製造法に関する
ものである。
ものである。
本発明によれば、高収量で効率よくＬ−バリンを製造す
ることができる。
ることができる。
■、−バリンは、必須アミノ酸の一つとして人間及び動
物の栄養上重要な役割をするもので、医薬、食品、飼料
添加物等の需要が近年急激に増加している。
物の栄養上重要な役割をするもので、医薬、食品、飼料
添加物等の需要が近年急激に増加している。
（従来の技術と課題）
Ｌ−バリンの工業的製法としては、他のアミノ酸の場合
と同様に立体異性体が存在するので、化学合成法ではＬ
一体のみの製造は困難となり、主として醗酵法によって
いる。
と同様に立体異性体が存在するので、化学合成法ではＬ
一体のみの製造は困難となり、主として醗酵法によって
いる。
しかしながら、公知の醗酵法によるし一バリンの製造で
は、Ｌ−バリンの蓄積に附界があり、新たな観点で■、
−バリンを蓄積生成させる方法の提供が求められている
。
は、Ｌ−バリンの蓄積に附界があり、新たな観点で■、
−バリンを蓄積生成させる方法の提供が求められている
。
本発明者らは先に、グルコースを含有する水溶液中で、
ビオチン要求性のコリネ型細菌に属する微生物菌体を酵
素源として用いて酵素反応させ、該水溶液中にＬ−バリ
ンを収率良く製造する方法（特願昭６２−１０１６７７
号公報）を提案している。
ビオチン要求性のコリネ型細菌に属する微生物菌体を酵
素源として用いて酵素反応させ、該水溶液中にＬ−バリ
ンを収率良く製造する方法（特願昭６２−１０１６７７
号公報）を提案している。
（発明の構成及び効果）
本発明者らは、ビオチン要求性のコリネ型細菌に属する
微生物菌体を、グルコースを含有する水溶液にて酵素反
応させて該溶液中にＬ−バリンを生成せしめるに際し、
予め該微生物菌体を、１〜２０容量％のエタノール含有
水溶液中に浸漬させることにより、高収量でＬ−バリン
を製造できることを見出し、本発明に到達するに至った
。 本発明によれば、グルコースを含有する水／８液中
で、ビオチン要求性のコリネ型細菌に属する微生物菌体
を酵素源として用いて、酵素反応させＬ−バリンを製造
するに際し、予め該微生物を、１〜２０容量％のエタノ
ール含有水溶液中に浸漬させることにより、グルコース
消費量を大幅に低減化出来、その結果Ｌ−バリンの対グ
ルコース収率を大幅に向」ニさせることが可能となった
。従って本発明の方法によれば、■、−バリンを工業的
に効率良く製造できる。
微生物菌体を、グルコースを含有する水溶液にて酵素反
応させて該溶液中にＬ−バリンを生成せしめるに際し、
予め該微生物菌体を、１〜２０容量％のエタノール含有
水溶液中に浸漬させることにより、高収量でＬ−バリン
を製造できることを見出し、本発明に到達するに至った
。 本発明によれば、グルコースを含有する水／８液中
で、ビオチン要求性のコリネ型細菌に属する微生物菌体
を酵素源として用いて、酵素反応させＬ−バリンを製造
するに際し、予め該微生物を、１〜２０容量％のエタノ
ール含有水溶液中に浸漬させることにより、グルコース
消費量を大幅に低減化出来、その結果Ｌ−バリンの対グ
ルコース収率を大幅に向」ニさせることが可能となった
。従って本発明の方法によれば、■、−バリンを工業的
に効率良く製造できる。
（発明の詳細な説明）
本発明の方法は、微生物菌体の増殖を全く伴わない条件
下にＬ−バリンを製造する、酵素反応のみによるＬ−バ
リンの製造法を提供するものである。
下にＬ−バリンを製造する、酵素反応のみによるＬ−バ
リンの製造法を提供するものである。
本発明に使用される微生物は、ビオチン要求性のコリネ
型細菌に属するものである。このなかにはＬ−イソロイ
シン生産菌が含まれる。本発明に使用される微生物菌体
としては例えば、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ）ＭＪ−２
３３（微工研条寄 第１４９７号）、ブレビバクテリウ
ム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖ
ｕｍ） Ｍ、Ｊ−２３３−ＡＢ−４１（微工研条寄 第
１４９８号）、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅ
ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ） ＭＪ
２３３ＡＢＴ−１１（微工研条寄 第１５００号）及び
ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ） ＭＪ−２３３−ＡＢＤ−２１
，（微工研条寄 第１４９９号）等であり、これらの菌
が本発明に好適に用いられる。
型細菌に属するものである。このなかにはＬ−イソロイ
シン生産菌が含まれる。本発明に使用される微生物菌体
としては例えば、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ）ＭＪ−２
３３（微工研条寄 第１４９７号）、ブレビバクテリウ
ム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖ
ｕｍ） Ｍ、Ｊ−２３３−ＡＢ−４１（微工研条寄 第
１４９８号）、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅ
ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ） ＭＪ
２３３ＡＢＴ−１１（微工研条寄 第１５００号）及び
ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ） ＭＪ−２３３−ＡＢＤ−２１
，（微工研条寄 第１４９９号）等であり、これらの菌
が本発明に好適に用いられる。
なお、上記の（微工研条寄 第１４９８号（微工研菌寄
第３８１２号））は、（微工研条寄第１４９７号（微
工研菌寄 第３０６８号））を親株としてＤＬ−α−ア
ミノ酪酸耐性を積極的に付与されたエタノール資化性微
生物である（特公昭５９−２８３９８号公報３〜４欄参
照）。微工研条寄 第１５００号（微工研菌寄 第８４
２３号）は、（微工研条寄 第１４９７号）を親株とし
たＩ、−α−アミノ酪酸トランスアミナーゼ高活性変異
株である（特開昭６２−５１９９８９号公報参照）。ま
た、微工研条寄 第１４９９号（微工研菌寄 第８０５
５号）は（微工研条寄 第１４９７号）を親株としたＤ
−α−アミノ酪酸デアミナーゼ高活性変異株である（特
開昭６０−１７７９９３号公報参照）。
第３８１２号））は、（微工研条寄第１４９７号（微
工研菌寄 第３０６８号））を親株としてＤＬ−α−ア
ミノ酪酸耐性を積極的に付与されたエタノール資化性微
生物である（特公昭５９−２８３９８号公報３〜４欄参
照）。微工研条寄 第１５００号（微工研菌寄 第８４
２３号）は、（微工研条寄 第１４９７号）を親株とし
たＩ、−α−アミノ酪酸トランスアミナーゼ高活性変異
株である（特開昭６２−５１９９８９号公報参照）。ま
た、微工研条寄 第１４９９号（微工研菌寄 第８０５
５号）は（微工研条寄 第１４９７号）を親株としたＤ
−α−アミノ酪酸デアミナーゼ高活性変異株である（特
開昭６０−１７７９９３号公報参照）。
これらの微生物菌体の他にブレビバクテリウム・アンモ
ニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏ
ｎｉａｇｅｎｅｓ＞ＡＴＣＣ６８７１、同ＡＴＣＣ１３
７４５、同ＡＴＣＣ１３７４６、ブレビバクテリウム・
デバリカタム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｖ
ａｒｉｃａｔｕｍ） ＡＴＣＣ１４０２０等を用いる
こともできる。
ニアゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏ
ｎｉａｇｅｎｅｓ＞ＡＴＣＣ６８７１、同ＡＴＣＣ１３
７４５、同ＡＴＣＣ１３７４６、ブレビバクテリウム・
デバリカタム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｖ
ａｒｉｃａｔｕｍ） ＡＴＣＣ１４０２０等を用いる
こともできる。
本発明に見られるビオチン要求性のコリネ型細菌に属す
る微生物菌体は、微生物菌体そのままで用いることもで
きるし、又これらを公知の手法で固定化した固定化物を
使用することもできる。この固定化手法としては、菌体
をアクリルアミド等の重合性モノマーを用いたり、アル
ギン酸塩あるいはカラギーナン等の適当な担体に不溶化
させる等の方法がある。
る微生物菌体は、微生物菌体そのままで用いることもで
きるし、又これらを公知の手法で固定化した固定化物を
使用することもできる。この固定化手法としては、菌体
をアクリルアミド等の重合性モノマーを用いたり、アル
ギン酸塩あるいはカラギーナン等の適当な担体に不溶化
させる等の方法がある。
本発明の方法に使用される上記のビオチン要求性のコリ
ネ型細菌に属する微生物菌体の調製に使用する培地は、
特に限定されるものではなく一般の微生物に使用される
ものでよい。
ネ型細菌に属する微生物菌体の調製に使用する培地は、
特に限定されるものではなく一般の微生物に使用される
ものでよい。
本発明に使用する微生物菌体のｍ製に使用する培地の炭
素源としては、グルコース等が使用される。窒素源とし
ては、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、尿素等を単独若しくは混合して
用いることが出来る無機塩としては、リン酸−水素カリ
ウム、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム等が用
いられる。この他に菌の生育及びＬ−イソロイシン生育
に必要であれば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コ
ーンステイブリカー、カザミノ酸、各種ビタミン等の栄
養素を培地に添加し用いる。
素源としては、グルコース等が使用される。窒素源とし
ては、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、尿素等を単独若しくは混合して
用いることが出来る無機塩としては、リン酸−水素カリ
ウム、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム等が用
いられる。この他に菌の生育及びＬ−イソロイシン生育
に必要であれば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コ
ーンステイブリカー、カザミノ酸、各種ビタミン等の栄
養素を培地に添加し用いる。
培養は通気攪拌、振盪等の好気的条件下で行い、培＃温
度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃で行う。培
養途中のｐ Ｈは５〜１０、好ましくは７〜８付近にて
行い、培養中のｐ Ｈの調整には酸、アルカリを添加し
て行う。
度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃で行う。培
養途中のｐ Ｈは５〜１０、好ましくは７〜８付近にて
行い、培養中のｐ Ｈの調整には酸、アルカリを添加し
て行う。
培養開始時のグルコース濃度は好ましくは１〜５重量％
、更に好ましくは２〜３重量％が適する。培養期間は０
．５〜３日間、最適期間は１〜２日間である。
、更に好ましくは２〜３重量％が適する。培養期間は０
．５〜３日間、最適期間は１〜２日間である。
このようにして得られた培養物から菌体を集めて、水又
は適当な緩衝液で洗浄し、該洗浄菌体を本発明の方法に
使用する。
は適当な緩衝液で洗浄し、該洗浄菌体を本発明の方法に
使用する。
本発明の方法においては、上記でｍ製された微生物菌体
を、エタノールを含有する溶液中に浸漬処理した後、該
処理菌体の存在下、少なくともグルコースを含有する水
溶液にて酵素反応させ、Ｌバリンを生成せしめる。
を、エタノールを含有する溶液中に浸漬処理した後、該
処理菌体の存在下、少なくともグルコースを含有する水
溶液にて酵素反応させ、Ｌバリンを生成せしめる。
微生物菌体の処理に使用するエタノールの濃度は、１〜
２０容量％、好ましくは５〜１５容量％が好適に使用さ
れる。
２０容量％、好ましくは５〜１５容量％が好適に使用さ
れる。
菌体の処理に用いる溶液としては、水又は適当な緩衝液
を用いることが出来、さらに必要に応じて窒素源、無機
塩、ビタミン等を添加することが出来る。
を用いることが出来、さらに必要に応じて窒素源、無機
塩、ビタミン等を添加することが出来る。
また、微生物菌体の処理時の濃度は、０．５〜５０重量
％、好ましくは１〜３０重量％である。
％、好ましくは１〜３０重量％である。
処理時の温度は、１０〜６０℃、好ましくは、３０〜４
０℃である。処理液のｐＨは、５〜１０、好ましくは７
〜８が好適に用いられる。処理時間は、１〜３０時間、
好ましくは３〜２５時間である。
０℃である。処理液のｐＨは、５〜１０、好ましくは７
〜８が好適に用いられる。処理時間は、１〜３０時間、
好ましくは３〜２５時間である。
以」二のようにして調製した処理菌体は酵素反応に使用
されるが、該菌体の固定化物も反応に供することができ
る。
されるが、該菌体の固定化物も反応に供することができ
る。
本発明の菌体の固定化物は、公知の固定化法例えばアク
リルアミド、アルギン酸塩、カラギーナン等による包括
法、ＤＥＡＥ−セファデックス、ＤＥＡＥ−セルロース
等によるイオン結合法などから適宜選択して調製できる
。
リルアミド、アルギン酸塩、カラギーナン等による包括
法、ＤＥＡＥ−セファデックス、ＤＥＡＥ−セルロース
等によるイオン結合法などから適宜選択して調製できる
。
該反応液は、通常完全合成培地が好適に用いられるが、
ここで完全合成培地とは、化学構造が公知の無機窒素源
及び／又は無機塩を含有する水溶液である。本発明に用
いられる完全合成培地の無機窒素源としては、アンモニ
ア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、リン酸アンモニウム等が例示でき、また無機塩
としては、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素カリウ
ム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、硫酸鉄等が例示
される。これらの無機窒素源、無機塩は、単独でも２種
以上混合して用いることもできる。
ここで完全合成培地とは、化学構造が公知の無機窒素源
及び／又は無機塩を含有する水溶液である。本発明に用
いられる完全合成培地の無機窒素源としては、アンモニ
ア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、リン酸アンモニウム等が例示でき、また無機塩
としては、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素カリウ
ム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、硫酸鉄等が例示
される。これらの無機窒素源、無機塩は、単独でも２種
以上混合して用いることもできる。
完全合成培地の一例を示すと、（ＮＨ，）、３０．２３
ｇ／ｊ２、ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ／ｌ、ＫＨＰＯ４０，
５ｇ／ｊ！、、Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，５ｇ／＊、、
ＦｅＳＯ４’ ７Ｈ２０２０１）ｐｍＸＭｎＳＯ４・４
〜６Ｈ２０２０ｐＩ）ｍ含有するＰＨ７，６の水溶液が
ある。
ｇ／ｊ２、ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ／ｌ、ＫＨＰＯ４０，
５ｇ／ｊ！、、Ｍｇ５Ｏ，・７Ｈ２００，５ｇ／＊、、
ＦｅＳＯ４’ ７Ｈ２０２０１）ｐｍＸＭｎＳＯ４・４
〜６Ｈ２０２０ｐＩ）ｍ含有するＰＨ７，６の水溶液が
ある。
上述の様に、本発明に使用される完全合成培地には、ビ
オチン又はビオチンを含む天然物は含有されない。ビオ
チンの含有されないことの明らかな化学構造公知のアミ
ノ酸、ビタミン、糖類等は添加することはできる。
オチン又はビオチンを含む天然物は含有されない。ビオ
チンの含有されないことの明らかな化学構造公知のアミ
ノ酸、ビタミン、糖類等は添加することはできる。
本発明の方法において使用される、上記の様にｍ製され
た微生物菌体の使用量は、特に制限されるものではない
が、一般に１〜５０％（ｗ ｔ ／ ｖｏｌ）の濃度で
使用することができる。
た微生物菌体の使用量は、特に制限されるものではない
が、一般に１〜５０％（ｗ ｔ ／ ｖｏｌ）の濃度で
使用することができる。
本発明において、酵素反応は、約２０〜約５０℃、好ま
しくは約３０〜約４０℃の温度で、通常約１０〜約７２
時間行われる。
しくは約３０〜約４０℃の温度で、通常約１０〜約７２
時間行われる。
」１記酵素反応は、反応に用いられるグルコースを含有
する水溶液、好ましくは上述のグルコースを含有する完
全合成培地中の溶存酸素濃度が０゜Ｏ５ｐｐｍ以上、８
ｐｐｍ以下となる様に、反応系中に空気もしくは酸素を
、連続又は間歇的に供給して行うのが好ましい。
する水溶液、好ましくは上述のグルコースを含有する完
全合成培地中の溶存酸素濃度が０゜Ｏ５ｐｐｍ以上、８
ｐｐｍ以下となる様に、反応系中に空気もしくは酸素を
、連続又は間歇的に供給して行うのが好ましい。
上記のような反応方法によって得られる反応液中に生成
したし一バリンの分離・精製は、醗酵法によるアミノ酸
の分離・精製と同様に行え、例えば公知のイオン交換樹
脂処理法あるいは、沈澱法等により行うことができる。
したし一バリンの分離・精製は、醗酵法によるアミノ酸
の分離・精製と同様に行え、例えば公知のイオン交換樹
脂処理法あるいは、沈澱法等により行うことができる。
実１」帆
以下の実験例において、Ｌ−バリンの定性は、ペーパー
クロマトグラフのＲｆ値、電気泳動法の易動度、微生物
定量法による生物活性値により確認した。
クロマトグラフのＲｆ値、電気泳動法の易動度、微生物
定量法による生物活性値により確認した。
定量はロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃ
ｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ） Ａ
Ｔ ＣＣ８０４２を用いるマイクロバイオアッセイ法と
高速液体クロマトグラフィー（島原ＬＣ−５Ａ）とを併
用して行った。グルコース残存量の定量は、グルコース
定量用キット（和光紬薬工業製 グルコースＣ−テスト
ワコー）により行った。また、下記の実験例において
％と表したのは重量％を意味する実施例−１ 培地（尿素０．４％、硫酸アンモニウム１．４％、ＫＨ
２Ｐｏ、０．０５％、Ｋ２ ＨＰ ０４０ 。
ｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ） Ａ
Ｔ ＣＣ８０４２を用いるマイクロバイオアッセイ法と
高速液体クロマトグラフィー（島原ＬＣ−５Ａ）とを併
用して行った。グルコース残存量の定量は、グルコース
定量用キット（和光紬薬工業製 グルコースＣ−テスト
ワコー）により行った。また、下記の実験例において
％と表したのは重量％を意味する実施例−１ 培地（尿素０．４％、硫酸アンモニウム１．４％、ＫＨ
２Ｐｏ、０．０５％、Ｋ２ ＨＰ ０４０ 。
０５％、ＭｇＳＯ４・ＴＩ（２００，０５％、ＣａＣｊ
ｌ！２ Ｈ２Ｈ２０２ｐｐｍ、、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２
０２ｐｐｍ＝ ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２Ｏ２ｐｐｍ、Ｚ
ｎＳＯ４・７Ｈ２０２ｐｐｍＮａＣＩｌ ２ｐｐｍ、ビ
オチン２００μｇ／β、チアミン・Ｈ（１！１００μｇ
／ ｊ２、カザミノ酸０．１％、酵母エキス０．１％
）１００ｒｒ＋ｊ！を５００ｍ１！容三角フラスコに分
注、滅菌（滅菌後ｐＨ７，０）した後ブレビバクテリウ
ム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌ
ａｖｕｍ） Ｍ Ｊ −２３３（微工研条寄 第１４９
７号）を植菌し、無菌的にグルコースを５ｇ／βの濃度
になるように加え、３０℃にて２Ｂ間振盪培養を行った
。
ｌ！２ Ｈ２Ｈ２０２ｐｐｍ、、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２
０２ｐｐｍ＝ ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２Ｏ２ｐｐｍ、Ｚ
ｎＳＯ４・７Ｈ２０２ｐｐｍＮａＣＩｌ ２ｐｐｍ、ビ
オチン２００μｇ／β、チアミン・Ｈ（１！１００μｇ
／ ｊ２、カザミノ酸０．１％、酵母エキス０．１％
）１００ｒｒ＋ｊ！を５００ｍ１！容三角フラスコに分
注、滅菌（滅菌後ｐＨ７，０）した後ブレビバクテリウ
ム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌ
ａｖｕｍ） Ｍ Ｊ −２３３（微工研条寄 第１４９
７号）を植菌し、無菌的にグルコースを５ｇ／βの濃度
になるように加え、３０℃にて２Ｂ間振盪培養を行った
。
次に、本培養培地（グルコース５％、硫酸アンモニウム
２．３％、ＫＨ２ＰＯ４０，０５％、ＫＨＰ○４０．０
５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０５％、ＦｅＳＯ４・
７Ｈ２０２０ｐｐｍ、ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２０２０ｐ
ｐｍ、ビオチン２００．ｊｉｇ／ｆｉ、チアミン−−Ｈ
Ｃ１１ｌ００ｐ／Ｒ，カザミノ酸０，３％、酵母エキス
０．３％）の１０００ｍＩＬを２１容通気攪拌槽に仕込
み、滅菌（１２０℃、２０分間）後、前記前培養物の２
０ｍｊ２を添加して、回転数１１０００ｒｐ。
２．３％、ＫＨ２ＰＯ４０，０５％、ＫＨＰ○４０．０
５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０５％、ＦｅＳＯ４・
７Ｈ２０２０ｐｐｍ、ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２０２０ｐ
ｐｍ、ビオチン２００．ｊｉｇ／ｆｉ、チアミン−−Ｈ
Ｃ１１ｌ００ｐ／Ｒ，カザミノ酸０，３％、酵母エキス
０．３％）の１０００ｍＩＬを２１容通気攪拌槽に仕込
み、滅菌（１２０℃、２０分間）後、前記前培養物の２
０ｍｊ２を添加して、回転数１１０００ｒｐ。
通気量１ｖｖｍ、温度３３℃、ｐ）（７，６にて２４時
間培養を行った。
間培養を行った。
培養終了後、培養物１００ｒｎｊ！から遠心分離にて集
菌した。これを脱塩蒸留水にて２度洗浄して得た菌体を
、第１表に示した各エタノール含有水溶液１００ｍｎ
（（ＮＨ，） ２Ｓｏ、０．２ｇ。
菌した。これを脱塩蒸留水にて２度洗浄して得た菌体を
、第１表に示した各エタノール含有水溶液１００ｍｎ
（（ＮＨ，） ２Ｓｏ、０．２ｇ。
ＫＨ２ＰＯ４０，０５ｇ−Ｍｇ ＳＯ４・７Ｈ２００，
０５ｇを含有〕に懸濁し、３３℃にて３時間浸漬させた
。該浸漬処理菌体は遠心分離にて集菌後、脱塩蒸留水に
て洗浄し、該処理菌体を反応液〔グルコース１００ ｇ
／ｌ−ＫＨ２ＰＯ４０゜５ｇ、に２ ＨＰＯ４０，５ｇ
／β、ＭｇＳＯ４７Ｈ２００，５ｇ／ｎ＝ Ｆｅ３Ｏ４
Ｈ７Ｈ２０２ｏｐｐｍ、チアミン−ＨＣｌ塩１００μｇ
／Ｉｔ （ｐＨ８，０））５０ｍ７！に懸濁した。また
ｐＨ調整の為、乾熱滅菌（１５０℃、５時間加熱）した
炭酸カルシウムを５０ｇ／βの濃度で添加した。反応は
、５００ｍｌｍｌ用フラスコを用い、３３℃、回転数２
２Ｏｒｐｍにて４０時間振盪反応を行った。反応終了後
〜遠心分離（４０００ｒｐｍ、１５分間、４℃）にて除
菌した上清液中のし一バリン量およびグルコース残量を
定量した。
０５ｇを含有〕に懸濁し、３３℃にて３時間浸漬させた
。該浸漬処理菌体は遠心分離にて集菌後、脱塩蒸留水に
て洗浄し、該処理菌体を反応液〔グルコース１００ ｇ
／ｌ−ＫＨ２ＰＯ４０゜５ｇ、に２ ＨＰＯ４０，５ｇ
／β、ＭｇＳＯ４７Ｈ２００，５ｇ／ｎ＝ Ｆｅ３Ｏ４
Ｈ７Ｈ２０２ｏｐｐｍ、チアミン−ＨＣｌ塩１００μｇ
／Ｉｔ （ｐＨ８，０））５０ｍ７！に懸濁した。また
ｐＨ調整の為、乾熱滅菌（１５０℃、５時間加熱）した
炭酸カルシウムを５０ｇ／βの濃度で添加した。反応は
、５００ｍｌｍｌ用フラスコを用い、３３℃、回転数２
２Ｏｒｐｍにて４０時間振盪反応を行った。反応終了後
〜遠心分離（４０００ｒｐｍ、１５分間、４℃）にて除
菌した上清液中のし一バリン量およびグルコース残量を
定量した。
結果は第１表に示した。
第
表
残量を帽し六−
バリン生慮
×１００
１００ｇ／ｊ２
グルコース残存濃度
バリン件弁δ幣隻
ヌ彷河列−２
月何列−１と同様の条件にてフ゛レビバクテリウム・フ
ラバム （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆ ｌａ
ｖｕｍ）ＭＪ−２３３−ＡＢ ４１ （ａσ珂条寄
第１４９８号）を培養し、また沃防河列−１と巨ｍカ闘
牛にて反応させた後上清液中のＬ−バリンとグルコース
１００ｇ／ｊ！ グルコース残存濃度 ×１００ 実於仲１−３ 鋳方河列−１とド相り塁ν牛にてフ゛レビバクテリウム
・フラバム （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒＩ
ａｖｕｍ）ＭＪ−２３３−ＡＢＴ−１１（ＩｋＨ５ｆ’
Ｊ寄第１５００号）を第 表 ソ彷筒列−４ メ防甑列−１と巨鮪隙×闘牛にてフ゛レビバクテリウム
・フラバム （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆ
ｌａｖｕｍ）ＭＪ−２３３−ＡＢＤ ２１ 轍猶務寄第
１４９９号）を培養し、また実兇伊Ｊ−１と同約ｍ牛に
て反応させた後上清液中のし一バリンとグルコース彩潰
Ｉ畝ヒレした好占？Ｈ君４表に示した。
ラバム （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆ ｌａ
ｖｕｍ）ＭＪ−２３３−ＡＢ ４１ （ａσ珂条寄
第１４９８号）を培養し、また沃防河列−１と巨ｍカ闘
牛にて反応させた後上清液中のＬ−バリンとグルコース
１００ｇ／ｊ！ グルコース残存濃度 ×１００ 実於仲１−３ 鋳方河列−１とド相り塁ν牛にてフ゛レビバクテリウム
・フラバム （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒＩ
ａｖｕｍ）ＭＪ−２３３−ＡＢＴ−１１（ＩｋＨ５ｆ’
Ｊ寄第１５００号）を第 表 ソ彷筒列−４ メ防甑列−１と巨鮪隙×闘牛にてフ゛レビバクテリウム
・フラバム （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆ
ｌａｖｕｍ）ＭＪ−２３３−ＡＢＤ ２１ 轍猶務寄第
１４９９号）を培養し、また実兇伊Ｊ−１と同約ｍ牛に
て反応させた後上清液中のし一バリンとグルコース彩潰
Ｉ畝ヒレした好占？Ｈ君４表に示した。
第 ４ 表
バリンｄ児δ整斐
バリン牛慮
×１００
１００ｇ／７！
グルコース残存濃度
Claims (2)
- （１）ビオチン要求性のコリネ型細菌に属する微生物菌
体の存在下、グルコースを含有する水溶液にて酵素反応
させて該溶液中にＬ−バリンを生成せしめるに際し、該
微生物菌体を予め、１〜２０容量％のエタノール含有水
溶液中に浸漬させることを特徴とする酵素触媒の処理方
法。 - （２）酵素触媒の存在下グルコースを含有する水溶液に
て酵素反応させて該水溶液中にＬ−バリンを生成させ、
これからＬ−バリンを採取するＬ−バリンの製造法にお
いて、該酵素触媒に使用するビオチン要求性のコリネ型
細菌に属する微生物菌体を予め１〜２０容量％のエタノ
ール含有水溶液中に浸漬させることを特徴とする、Ｌ−
バリンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24977088A JPH0297394A (ja) | 1988-10-05 | 1988-10-05 | 酵素触媒の処理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24977088A JPH0297394A (ja) | 1988-10-05 | 1988-10-05 | 酵素触媒の処理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0297394A true JPH0297394A (ja) | 1990-04-09 |
Family
ID=17197970
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24977088A Pending JPH0297394A (ja) | 1988-10-05 | 1988-10-05 | 酵素触媒の処理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0297394A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000005340A1 (fr) * | 1998-07-21 | 2000-02-03 | Kansai Chemical Engineering Co., Ltd. | Methode pour ameliorer l'activite catalytique de cellules |
| WO2024048019A1 (ja) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | 株式会社カネカ | 電力供給システム |
-
1988
- 1988-10-05 JP JP24977088A patent/JPH0297394A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000005340A1 (fr) * | 1998-07-21 | 2000-02-03 | Kansai Chemical Engineering Co., Ltd. | Methode pour ameliorer l'activite catalytique de cellules |
| AU755592B2 (en) * | 1998-07-21 | 2002-12-19 | Kansai Chemical Engineering Co., Ltd. | Method for enhancing catalytic activity of cells |
| US6524839B1 (en) | 1998-07-21 | 2003-02-25 | Kansai Chemical Engineering Co., Ltd. | Method for enhancing catalytic activity of cells |
| WO2024048019A1 (ja) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | 株式会社カネカ | 電力供給システム |
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