JPH03108496A - 抗フォスファチジルコリンモノクローナル抗体および該抗体の製造方法 - Google Patents
抗フォスファチジルコリンモノクローナル抗体および該抗体の製造方法Info
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- JPH03108496A JPH03108496A JP1245307A JP24530789A JPH03108496A JP H03108496 A JPH03108496 A JP H03108496A JP 1245307 A JP1245307 A JP 1245307A JP 24530789 A JP24530789 A JP 24530789A JP H03108496 A JPH03108496 A JP H03108496A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、フォスファチジルコリン（Ｐ Ｃ）を認識す
るモノクローナル抗体およびその製造方法に関する。
るモノクローナル抗体およびその製造方法に関する。
（発明の背景）
フォスファチジルコリンは細胞膜を構成する主成分であ
り、血管などの組織表面に存在するリン脂質であり、生
体内で非常に重要な位置を占めている。フォスファチジ
ルコリンに代表されるリン脂質は抗原性が低いため、正
常時にはその抗体の産生は認められない。一方、ＳＬＥ
（全身性エリテマトーデス） 、 Ａ Ｉ Ｄ Ｓ
（ａｃｑｕｒｅｄ ｌａａ＋ｕｎｏｄｅＮｃｌｃｎｃｙ
ｓｙｏ＋ｄｒｏｌｌｅ）、血栓症、血管炎等の疾病に
おいては有意に生体内に類リン脂質抗体が産生されてい
ることが認められるが、その産生メカニズムは解明され
ていない。これら疾病と抗リン脂質抗体の関係を解明す
るに当たり、抗リン脂質モノクローナル抗体の開発が望
まれている。
り、血管などの組織表面に存在するリン脂質であり、生
体内で非常に重要な位置を占めている。フォスファチジ
ルコリンに代表されるリン脂質は抗原性が低いため、正
常時にはその抗体の産生は認められない。一方、ＳＬＥ
（全身性エリテマトーデス） 、 Ａ Ｉ Ｄ Ｓ
（ａｃｑｕｒｅｄ ｌａａ＋ｕｎｏｄｅＮｃｌｃｎｃｙ
ｓｙｏ＋ｄｒｏｌｌｅ）、血栓症、血管炎等の疾病に
おいては有意に生体内に類リン脂質抗体が産生されてい
ることが認められるが、その産生メカニズムは解明され
ていない。これら疾病と抗リン脂質抗体の関係を解明す
るに当たり、抗リン脂質モノクローナル抗体の開発が望
まれている。
現在知られている抗リン脂質抗体としては、前記した各
疾病時に検出される抗体等があり、各種リン脂質と交叉
反応性を有することが知られているが、詳細な解析は行
われていない。また、モノクローナル抗体として知られ
ている抗リン脂質抗体としては、事故免疫疾患のモデル
マウスであるＭＲＰ／ ｌ ｐｒから得られるモノクロ
ーナル抗体が知られているが、該抗体も各種リン脂質と
交叉反応性を有し、さらに正常マウスから得られたもの
でないためｉｎ ＶＩＶＯにおける研究等には用いるこ
とができず、利用範囲は狭いものである。
疾病時に検出される抗体等があり、各種リン脂質と交叉
反応性を有することが知られているが、詳細な解析は行
われていない。また、モノクローナル抗体として知られ
ている抗リン脂質抗体としては、事故免疫疾患のモデル
マウスであるＭＲＰ／ ｌ ｐｒから得られるモノクロ
ーナル抗体が知られているが、該抗体も各種リン脂質と
交叉反応性を有し、さらに正常マウスから得られたもの
でないためｉｎ ＶＩＶＯにおける研究等には用いるこ
とができず、利用範囲は狭いものである。
従来、ＰＣの利用、またはそれに関した研究開発におい
てＰＣの役割の解明に必要とされるモノクローナル抗体
については同等報告されておらず、ＰＣに代表されるリ
ン脂質は抗原性が低いことにより、リン脂質を動物に免
疫しモノクローナル抗体を得ることは困難とされてきた
。
てＰＣの役割の解明に必要とされるモノクローナル抗体
については同等報告されておらず、ＰＣに代表されるリ
ン脂質は抗原性が低いことにより、リン脂質を動物に免
疫しモノクローナル抗体を得ることは困難とされてきた
。
（発明の概要）
この様な状況の中で、本発明者らは上記のような研究開
発分野における要望を解犬する目的で研究を行った。そ
の結果、ＰＣを認識するモノクローナル抗体およびその
製造方法を完成させた。すなわち本発明は、少なくとも
鶏の卵黄に由来するＰＣを認識し、免疫グロブリンクラ
スＭに属するモノクローナル抗体および鶏の卵黄由来の
ＰＣをニトロセルロース紙上に固定化Ｌ 、Ｐ Ｂ Ｓ
（ｐｈｏｓｈａｔｅ ｂｕｔｔｅｒ ５ａｌｉｎｅ）
中にてホモジネートしたものを抗原とし、Ｂ Ａ Ｌ
Ｂ ／ ｃマウス脾臓に直接免疫し、追加免疫として前
記ＰＣを酸処理したサルモネラミネソタ菌にコートした
ものを尾部静脈より免疫し、最終免疫後にこの脾細胞と
ミエローマ細胞株Ｐ３−Ｘ８３−Ａｇ８．６５３とを細
胞融合することによりハイブリドーマを確立し、この培
養液よりモノクローナル抗体を得ることを特徴とする抗
ＰＣ抗体の製造方法である。以下本発明の詳細な説明す
る。
発分野における要望を解犬する目的で研究を行った。そ
の結果、ＰＣを認識するモノクローナル抗体およびその
製造方法を完成させた。すなわち本発明は、少なくとも
鶏の卵黄に由来するＰＣを認識し、免疫グロブリンクラ
スＭに属するモノクローナル抗体および鶏の卵黄由来の
ＰＣをニトロセルロース紙上に固定化Ｌ 、Ｐ Ｂ Ｓ
（ｐｈｏｓｈａｔｅ ｂｕｔｔｅｒ ５ａｌｉｎｅ）
中にてホモジネートしたものを抗原とし、Ｂ Ａ Ｌ
Ｂ ／ ｃマウス脾臓に直接免疫し、追加免疫として前
記ＰＣを酸処理したサルモネラミネソタ菌にコートした
ものを尾部静脈より免疫し、最終免疫後にこの脾細胞と
ミエローマ細胞株Ｐ３−Ｘ８３−Ａｇ８．６５３とを細
胞融合することによりハイブリドーマを確立し、この培
養液よりモノクローナル抗体を得ることを特徴とする抗
ＰＣ抗体の製造方法である。以下本発明の詳細な説明す
る。
（１）ＰＣの調製。
ＰＣは、卵黄等から調製することが可能であるが、他の
試料から調製しても良い。ＰＣの調製法自体は公知であ
り、何ら限定はない。
試料から調製しても良い。ＰＣの調製法自体は公知であ
り、何ら限定はない。
（２）ハイブリドーマの確立。
ハイブリドーマは、適当な動物を前記抗原で免疫した後
、脾細胞を摘出し公知の方法にしたがって、調製するこ
とができる。
、脾細胞を摘出し公知の方法にしたがって、調製するこ
とができる。
本発明においては、卵黄から調製したＰＣをニトロセル
ロース紙上に固定化し、ＰＢＳ中にホモジネートしたも
のを抗原としてマウス（ＢＡＬＢ／ ｃ ）の脾臓に直
接免疫（実験医学第６巻。
ロース紙上に固定化し、ＰＢＳ中にホモジネートしたも
のを抗原としてマウス（ＢＡＬＢ／ ｃ ）の脾臓に直
接免疫（実験医学第６巻。
第９１５〜９１９頁、羊上社 １９８８年）し、２週間
後に前記ＰＣを酸処理したサルモネラミネソタ菌にコー
トしたものを尾部静脈より追加免疫し、最終免疫３日後
にこの脾臓をマウスより抽出し、抗体産生細胞を調製し
た。調製した脾細胞を従来の細胞融合技術（Ｎａｔｕｒ
ｅ、２５６．４９５−４９７．１９７５）を用いて、ミ
エローマ細胞株Ｐ３−ＸＧ３−Ａｇ６５３とＤＭＥＭ
（ダベルコ変性槁地）培地中にて、約５０％ポリエチレ
ングリコール存在下で細胞融合を行いハイブリドーマを
調製した。
後に前記ＰＣを酸処理したサルモネラミネソタ菌にコー
トしたものを尾部静脈より追加免疫し、最終免疫３日後
にこの脾臓をマウスより抽出し、抗体産生細胞を調製し
た。調製した脾細胞を従来の細胞融合技術（Ｎａｔｕｒ
ｅ、２５６．４９５−４９７．１９７５）を用いて、ミ
エローマ細胞株Ｐ３−ＸＧ３−Ａｇ６５３とＤＭＥＭ
（ダベルコ変性槁地）培地中にて、約５０％ポリエチレ
ングリコール存在下で細胞融合を行いハイブリドーマを
調製した。
（３）ハイブリドーマの選択。
目的とするハイブリドーマは、ＥＬＩＳＡ法（Ｍｃｔｈ
、Ｅｎｚｙａ＋ｏ１．７０，４１９−４３９．１９８０
）を用いてハイプリドーマ培養上清の分析を行い、ＰＣ
のみに特異的に反応する抗体を産生じているノ１イブリ
ドアマを選択し、限界希釈法を２回行うことにより確立
できる。
、Ｅｎｚｙａ＋ｏ１．７０，４１９−４３９．１９８０
）を用いてハイプリドーマ培養上清の分析を行い、ＰＣ
のみに特異的に反応する抗体を産生じているノ１イブリ
ドアマを選択し、限界希釈法を２回行うことにより確立
できる。
（４）抗体の回収および精製。
常法にしたがって、生育培地中で培養するか、あるいは
、ハイブリドーマをこの細胞が増殖可能な実験動物（マ
ウス、ラット等）の腹坑内に投与し生体内で培養するこ
とにより抗体の産生を行う−１４ができる。抗体は生育
培地で７１イブリドーマの増殖を行った場合には培養上
清より、実験動物の股抗内で増殖を行った場合にはその
動物の腹水より、常法（例えば硫安分画法）により回収
することが可能である。さらに、ゲルが過性、アフィニ
ティークロマトグラフィー等を用い、あるいはこれらを
組み合わせることにより高抗体価の精製品を得ることが
可能である。
、ハイブリドーマをこの細胞が増殖可能な実験動物（マ
ウス、ラット等）の腹坑内に投与し生体内で培養するこ
とにより抗体の産生を行う−１４ができる。抗体は生育
培地で７１イブリドーマの増殖を行った場合には培養上
清より、実験動物の股抗内で増殖を行った場合にはその
動物の腹水より、常法（例えば硫安分画法）により回収
することが可能である。さらに、ゲルが過性、アフィニ
ティークロマトグラフィー等を用い、あるいはこれらを
組み合わせることにより高抗体価の精製品を得ることが
可能である。
（５）抗体の特異性
作製したモノクローナル抗体の特異性の確認は、各種リ
ン脂質を固定化した系を用い、前記ＥＬＩＳＡ法を用い
て行うことが可能である。詳細は実施例にて示す。
ン脂質を固定化した系を用い、前記ＥＬＩＳＡ法を用い
て行うことが可能である。詳細は実施例にて示す。
［発明の効果］
本発明によれば、ＰＣを認識するモノクローナル抗体が
提供される。この抗体はＰＣに特異的であり、他の代表
的なリン脂質として知られているＰＳ、ＰＡ、ＰＥ、Ｃ
Ｌ、ＰＩ、ＰＧとの交叉反応性を有していない。従って
、本発明により提供される抗フォスファチジルコリンモ
ノクローナル抗体は、細胞膜にあって重要な役割を担っ
ていると考えられるＰＣの研究に多大の効果を有し、強
いては例えば人口膜の研究、医療用人口材料等の研究、
開発に貢献するものである。
提供される。この抗体はＰＣに特異的であり、他の代表
的なリン脂質として知られているＰＳ、ＰＡ、ＰＥ、Ｃ
Ｌ、ＰＩ、ＰＧとの交叉反応性を有していない。従って
、本発明により提供される抗フォスファチジルコリンモ
ノクローナル抗体は、細胞膜にあって重要な役割を担っ
ていると考えられるＰＣの研究に多大の効果を有し、強
いては例えば人口膜の研究、医療用人口材料等の研究、
開発に貢献するものである。
本発明が提供する抗フォスファチジルコリンモノクロー
ナル抗体の製造方法に従えば、前記のごとき、ＰＣを特
異的に認識するモノクローナル抗体を製造することか可
能である。
ナル抗体の製造方法に従えば、前記のごとき、ＰＣを特
異的に認識するモノクローナル抗体を製造することか可
能である。
［実施例］
以下、本願発明の実施例を記載し、本願発明の効果を具
体的に説明する。なお、本願発明は下記実施例に限定さ
れるものではない。なお、以下の実施例で使用したＰＣ
は鶏の卵黄から、ＰＳは牛脳から、ＰＥ及びＰＧは大腸
菌から、ＰＡは前記ＰＣからフォスフォリバーゼＤを用
いて、ＣＬは牛心臓から、ＰＩはイースト菌から調製し
た。
体的に説明する。なお、本願発明は下記実施例に限定さ
れるものではない。なお、以下の実施例で使用したＰＣ
は鶏の卵黄から、ＰＳは牛脳から、ＰＥ及びＰＧは大腸
菌から、ＰＡは前記ＰＣからフォスフォリバーゼＤを用
いて、ＣＬは牛心臓から、ＰＩはイースト菌から調製し
た。
実施例１
卵黄由来のＰＣ（フナコシ薬品■製、メーカーコードＡ
−３１）を初期免疫の抗原としてマウス（Ｂａｌｂ／ｃ
）を免疫し、更にＰＣを用いて追加免疫した。
−３１）を初期免疫の抗原としてマウス（Ｂａｌｂ／ｃ
）を免疫し、更にＰＣを用いて追加免疫した。
まずＰＣをニトロセルロース紙上に固定化し、ＰＢＳ中
にてホモジネートしたものを抗原としてマウス（Ｂ Ａ
ＣＢ ／ ｃ ）の脾臓に直接免疫（実験医学第６巻
、第９１５〜９１９頁、羊上社 １９８８年）し、２週
間後に前記ＰＣを酸処理したサルモネラミネソタ菌にコ
ートしたものを尾部静脈より追加免疫し、最終免疫３０
後にこの脾臓をマウスより抽出し、抗体産生細胞を調製
した。
にてホモジネートしたものを抗原としてマウス（Ｂ Ａ
ＣＢ ／ ｃ ）の脾臓に直接免疫（実験医学第６巻
、第９１５〜９１９頁、羊上社 １９８８年）し、２週
間後に前記ＰＣを酸処理したサルモネラミネソタ菌にコ
ートしたものを尾部静脈より追加免疫し、最終免疫３０
後にこの脾臓をマウスより抽出し、抗体産生細胞を調製
した。
上記で調製した脾細胞を従来の細胞融合技術（Ｎａｔｕ
ｒｅ、２５８．４９５−４９７．１９７５）を用いて、
ミエローマ細胞株Ｐ３−Ｘ６３−＾ｇ６５３とＤＭＥＭ
（ダベルコ変性培地）培地中にて、約５０％ポリエチ
レングリコール存注下にて細胞融合を行いハイブリドー
マを調製した。
ｒｅ、２５８．４９５−４９７．１９７５）を用いて、
ミエローマ細胞株Ｐ３−Ｘ６３−＾ｇ６５３とＤＭＥＭ
（ダベルコ変性培地）培地中にて、約５０％ポリエチ
レングリコール存注下にて細胞融合を行いハイブリドー
マを調製した。
目的とするハイブリドーマの選択は、ＥＬＩＳＡ法（Ｍ
ｅｔｈ、Ｅｎｚｙａ＋ｏ１．７０．４１９−４３９．１
９８０）を用いてハイブリドーマ培養上清の分析を行い
、ＰＣのみに特異的に反応する抗体を産生じているハイ
ブリドーマを選択し、限界希釈法を２回行うことにより
ハイブリドーマを確立した。得られたハイブリドーマ細
胞は９６ｖｅｌｌマイクロタイタブレート中で常法に従
い培養を行ない、培養１週間後培養上清の抗体価、特異
性をＥＬ Ｉ ＳＡ法により評価し、ハイブリドーマ細
胞の選択を行った。
ｅｔｈ、Ｅｎｚｙａ＋ｏ１．７０．４１９−４３９．１
９８０）を用いてハイブリドーマ培養上清の分析を行い
、ＰＣのみに特異的に反応する抗体を産生じているハイ
ブリドーマを選択し、限界希釈法を２回行うことにより
ハイブリドーマを確立した。得られたハイブリドーマ細
胞は９６ｖｅｌｌマイクロタイタブレート中で常法に従
い培養を行ない、培養１週間後培養上清の抗体価、特異
性をＥＬ Ｉ ＳＡ法により評価し、ハイブリドーマ細
胞の選択を行った。
ＥＬ Ｉ ＳＡ法はマイクロタイタープレイドに各種リ
ン脂質（ＰＳ、ＰＡ、ＰＥ、ＰＣ，ＣＬ。
ン脂質（ＰＳ、ＰＡ、ＰＥ、ＰＣ，ＣＬ。
ＰＩ、ＰＣ）を０ 、 ５ ｎｍｏｌ／ｗｅｌｌでコー
トを行い、つづいて３％−ＢＳＡ （牛血清アルブミン
）にて２時間室温でプロキングを行い、１ｏ■Ｍ−Ｔｒ
ｌｓ。
トを行い、つづいて３％−ＢＳＡ （牛血清アルブミン
）にて２時間室温でプロキングを行い、１ｏ■Ｍ−Ｔｒ
ｌｓ。
１５０ ｍＭ−ＮａＣ１，ｐＨ＝ ７ 、 ４にて洗浄
後、培養上清５０μｌ／νｅｌｆで加え、２時間室温で
放置し、洗浄後、ビオチン標識抗体（２ＺＭＥＤ社製。
後、培養上清５０μｌ／νｅｌｆで加え、２時間室温で
放置し、洗浄後、ビオチン標識抗体（２ＺＭＥＤ社製。
６２Ｊ４４０ Ｂｉｏｔｈｉｎ−Ｇｔｘ Ｍｏｕｓｅ
Ｉ ｇ Ｍ ＋ Ｉ ｇ Ａ ＋ＩｇＭ（Ｍ＋Ｌ）及
びワサビペルオキシダーゼアビジンＤ（フナコシ薬品■
製、Ａ−２００４，Ｖ Ｅ Ｃ４１０１２００４）を添
加して抗体価陽性のνｅｌｌを選択し、ＰＣにのみ反応
性を示す抗体（以下この抗体をＪＥ−１とする）を得た
。なお、本実施例においては西洋ワサビペルオキシダー
ゼの基質とて、オルトフェニレンジアミンを使用した。
Ｉ ｇ Ｍ ＋ Ｉ ｇ Ａ ＋ＩｇＭ（Ｍ＋Ｌ）及
びワサビペルオキシダーゼアビジンＤ（フナコシ薬品■
製、Ａ−２００４，Ｖ Ｅ Ｃ４１０１２００４）を添
加して抗体価陽性のνｅｌｌを選択し、ＰＣにのみ反応
性を示す抗体（以下この抗体をＪＥ−１とする）を得た
。なお、本実施例においては西洋ワサビペルオキシダー
ゼの基質とて、オルトフェニレンジアミンを使用した。
結果を図１に示す。
実施例２
抗ＰＣ抗体の生成は、培養上清を４０〜５０％硫酸アン
モニウムにて抗体を沈澱として回収した後、Ｐｒｏｔｅ
ｉ Ａ ５ｅｐｈａｒｏｓｅ （ファルマシア社製）カ
ラムに吸着させた後、１００ｗＭ−クエン酸溶液により
溶出させることにより単一ピークとして回収した。
モニウムにて抗体を沈澱として回収した後、Ｐｒｏｔｅ
ｉ Ａ ５ｅｐｈａｒｏｓｅ （ファルマシア社製）カ
ラムに吸着させた後、１００ｗＭ−クエン酸溶液により
溶出させることにより単一ピークとして回収した。
実施例３
ＤＭＰ Ｃ（ｄｌｓｙｒｉｓｔｏｙｌ Ｐ Ｃ）
０． ５ 、ｃｚｍｏｌ 。
０． ５ 、ｃｚｍｏｌ 。
ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｏ、６μｍｏｌ 、Ｄ
ＯＰ （ｄｌｃｅｔｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）０． １
１ μｍｏｌ 、ＰＣ０，０１２１ｇｗ。
ＯＰ （ｄｌｃｅｔｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）０． １
１ μｍｏｌ 、ＰＣ０，０１２１ｇｗ。
１よりなるＩ Ｉ ｐｏｓ ｐｍｅ内部に４− ｍｅｔ
ｈｙｌｕｂｅｌｌｉｆｅｒｙｐｈｏｓｐｈａｔｏを封入
した人工膜を用い、先に得られたＪＥ−１抗体の補体依
存的なＬｉｐｏｓｏｍθの崩壊反応を調べた。結果を図
２に示す。図２からは、ＪＥ−１が補体依存的にＩｌｐ
ｏｓｏｗｅを崩壊することにより人工膜上のＰＣを認識
可能な抗体であることがわかる。なお、補体としてはモ
ルモットの血清を、ＬｉｐＯＳＯＩＯの調製は［生体の
科学Ｊ （３ｇ（５）巻。
ｈｙｌｕｂｅｌｌｉｆｅｒｙｐｈｏｓｐｈａｔｏを封入
した人工膜を用い、先に得られたＪＥ−１抗体の補体依
存的なＬｉｐｏｓｏｍθの崩壊反応を調べた。結果を図
２に示す。図２からは、ＪＥ−１が補体依存的にＩｌｐ
ｏｓｏｗｅを崩壊することにより人工膜上のＰＣを認識
可能な抗体であることがわかる。なお、補体としてはモ
ルモットの血清を、ＬｉｐＯＳＯＩＯの調製は［生体の
科学Ｊ （３ｇ（５）巻。
第３９９−４０１頁、 １９８７年、医学書院）によっ
た。
た。
実施例４
フォスフォリパーゼＡ ２（Ｐｏｒｅｌｎｃ ｐａｎｃ
ｒｅａｔｉｃ）活性の阻害反応をみる目的で、２−ｐａ
ｌｍｉｔｏｙｌ−１−１４Ｃ−Ｐ Ｃ（ＮＥＮ Ｒｅ５
ｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）を用いて検討した
。２−ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−１−１４Ｃ−Ｐ Ｃ１０ｒ
＋ｍｏｌに対し、各濃度の抗体と混合し４５分間室温で
放置後、フォスフォリパーゼＡ２を加え、ＰＣの分解の
阻害反応の割合を調べた結果、図３に示すように３μｇ
の抗体量で約６０％のＰＣの分解の阻害が見られた。な
お、本実施例においては、酵素反応後の反応液を薄層ク
ロマトグラフィーで展開後、画分を抽出し、それぞれの
両分中のｃＬ４を定量して阻害率を測定した。
ｒｅａｔｉｃ）活性の阻害反応をみる目的で、２−ｐａ
ｌｍｉｔｏｙｌ−１−１４Ｃ−Ｐ Ｃ（ＮＥＮ Ｒｅ５
ｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）を用いて検討した
。２−ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−１−１４Ｃ−Ｐ Ｃ１０ｒ
＋ｍｏｌに対し、各濃度の抗体と混合し４５分間室温で
放置後、フォスフォリパーゼＡ２を加え、ＰＣの分解の
阻害反応の割合を調べた結果、図３に示すように３μｇ
の抗体量で約６０％のＰＣの分解の阻害が見られた。な
お、本実施例においては、酵素反応後の反応液を薄層ク
ロマトグラフィーで展開後、画分を抽出し、それぞれの
両分中のｃＬ４を定量して阻害率を測定した。
実施例５
フオスフォリパーゼＣ（Ｂａｃｌｌｌｕｓ ｃｏｒｅｕ
ｓ）活性の阻害反応をみる目的で、２−Ｐａ１ａｌｔｏ
ｙｌ−１−１４Ｃ−ＰＣを用いて実施例４と同様に検討
した結果、フォスフォリパーゼを加え、ＰＣの分解の阻
害反応の割合を調べた結果、図４に示すように３μｇの
抗体量で約７０％のＰＣの分解の阻害が見られた。
ｓ）活性の阻害反応をみる目的で、２−Ｐａ１ａｌｔｏ
ｙｌ−１−１４Ｃ−ＰＣを用いて実施例４と同様に検討
した結果、フォスフォリパーゼを加え、ＰＣの分解の阻
害反応の割合を調べた結果、図４に示すように３μｇの
抗体量で約７０％のＰＣの分解の阻害が見られた。
実施例６
マウスの血液より赤血球を調製し、シアリダーゼ理を行
ったもの、行わないものに対し抗体依存的な赤血球の崩
壊反応を調べた。その結果、ＪＥ−１はマウス赤血球に
対し補体依存的に溶血をおこし、さらにシアリダーゼ処
理によりその反応はさらに強められた。結果を図５に示
す。
ったもの、行わないものに対し抗体依存的な赤血球の崩
壊反応を調べた。その結果、ＪＥ−１はマウス赤血球に
対し補体依存的に溶血をおこし、さらにシアリダーゼ処
理によりその反応はさらに強められた。結果を図５に示
す。
また、赤血球膜表面にＰＣを持たないヤギ赤血球につい
て同様の実験を行ったところ、赤血球の崩壊は観察され
なかった。
て同様の実験を行ったところ、赤血球の崩壊は観察され
なかった。
実施例７
ＪＥ−１抗体のＰＣ類似物質に対する交叉反応性を調査
する目的で、以下の実験を行った。
する目的で、以下の実験を行った。
まず、マイクロタイタープレイドをＰＣ，ＰＥ（Ｐｈｏ
ｓｈａｔｌｄｙｌｅｔｈａｉｏｌａｓｌｎｅ） 、
Ｄ Ｍ Ｐ Ｅ （ＤＩＩｌｅｔｈｙｌ ＰＥ） 、
ＭＭＰＥ （Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ＰＥ）各０
、 ５ ｎａ＋ｏｌ／ｗｅｌｌでコートし、３％−ＢＳ
Ａでブロッキングした。 １０ ｍＭ−Ｔｒｌｓ 、
１５０ ＩＩＭ−ＮａＣ１（１１１１７，４）にて
各ウェルを洗浄した後、ＪＥ−１抗体を産生ずるハイブ
リドーマの培養上清を５０μｉ／νｅｌｌの割合で各ウ
ェルに添加した。２時間室温で放置し、洗浄後、実施例
１と同様にしてＪＥ−１と前記類似物質の交叉反応性を
調査した。なお、本実施例においても西洋ワサビペルオ
キシダーゼの基質として、オルトフェニレンジアミンを
使用した。結果を図６に示す。図６によれば、ＪＥ−１
抗体はＰＣに対して特異的に反応することがわかる。
ｓｈａｔｌｄｙｌｅｔｈａｉｏｌａｓｌｎｅ） 、
Ｄ Ｍ Ｐ Ｅ （ＤＩＩｌｅｔｈｙｌ ＰＥ） 、
ＭＭＰＥ （Ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ ＰＥ）各０
、 ５ ｎａ＋ｏｌ／ｗｅｌｌでコートし、３％−ＢＳ
Ａでブロッキングした。 １０ ｍＭ−Ｔｒｌｓ 、
１５０ ＩＩＭ−ＮａＣ１（１１１１７，４）にて
各ウェルを洗浄した後、ＪＥ−１抗体を産生ずるハイブ
リドーマの培養上清を５０μｉ／νｅｌｌの割合で各ウ
ェルに添加した。２時間室温で放置し、洗浄後、実施例
１と同様にしてＪＥ−１と前記類似物質の交叉反応性を
調査した。なお、本実施例においても西洋ワサビペルオ
キシダーゼの基質として、オルトフェニレンジアミンを
使用した。結果を図６に示す。図６によれば、ＪＥ−１
抗体はＰＣに対して特異的に反応することがわかる。
実施例８
ＪＥ−１抗体のＰＣ類似物質に対する交叉反応性を調査
する目的で以下の実験を行った。
する目的で以下の実験を行った。
まず、マイクロタイタープレイドを０．５ｎｍｏｌのＰ
Ｃでコートし、３％−ＢＳＡでブロッキングした後、１
０ ｍＭ−ＴＲＩＳ 、 １５０ ｍＭ−ＮａＣ１（
ｐＨ７，４）で洗浄した。
Ｃでコートし、３％−ＢＳＡでブロッキングした後、１
０ ｍＭ−ＴＲＩＳ 、 １５０ ｍＭ−ＮａＣ１（
ｐＨ７，４）で洗浄した。
次に、ＪＥ−１抗体を産生ずるハイブリドーマの培養上
清５０μｍに対し、それぞれＰＣ，Ｃｈｏｌｉｎｏ−Ｃ
１，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｌｎｏ 、 Ｇｒｙ
ｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｌｎｏ 、 Ｌｙｓ
ｏ −Ｐ Ｃ、Ｓｐｈｌｎｇｏｍｙｃｌｌｎｅを添加し
、室温で２時間放置した後、ＰＣでコートしたウェルに
添加した。室ｌＨで２時間放置した後、実施例１と同様
にしてＪＥ−１とＰＣ類似物質の交叉反応性を調査した
。結果を図７に示す。図７によれば、ＪＥ−１抗体はＰ
Ｃに対して特異的に反応することかわかる。
清５０μｍに対し、それぞれＰＣ，Ｃｈｏｌｉｎｏ−Ｃ
１，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｌｎｏ 、 Ｇｒｙ
ｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｌｎｏ 、 Ｌｙｓ
ｏ −Ｐ Ｃ、Ｓｐｈｌｎｇｏｍｙｃｌｌｎｅを添加し
、室温で２時間放置した後、ＰＣでコートしたウェルに
添加した。室ｌＨで２時間放置した後、実施例１と同様
にしてＪＥ−１とＰＣ類似物質の交叉反応性を調査した
。結果を図７に示す。図７によれば、ＪＥ−１抗体はＰ
Ｃに対して特異的に反応することかわかる。
実施例９
実施例１と同様にして、ＰＣのみ反応性を示し、ＰＳ、
ＰＡ、ＰＥ、ＣＬ、ＰＩ及びＰＧには反応性を示さない
抗体（以下この抗体をＪＥ−８とする）を得た。Ｊ Ｅ
−８抗体の反応性について図８に結果を示す。
ＰＡ、ＰＥ、ＣＬ、ＰＩ及びＰＧには反応性を示さない
抗体（以下この抗体をＪＥ−８とする）を得た。Ｊ Ｅ
−８抗体の反応性について図８に結果を示す。
実施例１０
抗ＰＣ抗体の精製は、培養上清を４０〜５０％硫酸アン
モニウムにて抗体を沈澱として回収した後、Ｐｒｏｔｅ
ｌ Ａ ５ｃｐｈａｒｏｓａ （ファルマシア社製）カ
ラムに吸着させた後、１０１００ａクエン酸溶液により
溶出させることにより単一ピークとして回収した。
モニウムにて抗体を沈澱として回収した後、Ｐｒｏｔｅ
ｌ Ａ ５ｃｐｈａｒｏｓａ （ファルマシア社製）カ
ラムに吸着させた後、１０１００ａクエン酸溶液により
溶出させることにより単一ピークとして回収した。
実施例１１
フすスフオリバーゼＡ ２（Ｐｏｒｃｌｎｅ ｐａｎｃ
ｒｅａｔｉｃ）およびフォスフォリパーゼＣ（１３ａｃ
１１１ｕｓ ｅｅｒｅｕｓ）活性の阻害反応をみる目的
で、２−ｐａｌｌｔｏｙｌ−１−１４０−Ｐ Ｃ（ＮＥ
Ｎ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）を用い
て検討した。２−ｐａｌｍｌｔｏｙｌ−１−１４Ｃ−Ｐ
Ｃ１０ｎｍｏｌに対し、各濃度の抗体と混合し４５分
間室温で放置後、フォスフォリバーゼＡ２又はフォスフ
ォリパーゼＣを加え、ＰＣの分解の阻害反応の割合を調
べた結果、図９に示すようにフォスフォリパーゼＣに対
しては４μｇの抗体量で約５０％のＰＣの分解の阻害が
見られたが、フォスフォリバーゼＡ２に対しては活性の
阻害はみられなかった。なお、本実施例においては、酵
素反応後の反応液を薄層クロマトグラフィーで展開後、
両分を抽出し、それぞれの両分中のｃ１４を定量して阻
害率を測定した。
ｒｅａｔｉｃ）およびフォスフォリパーゼＣ（１３ａｃ
１１１ｕｓ ｅｅｒｅｕｓ）活性の阻害反応をみる目的
で、２−ｐａｌｌｔｏｙｌ−１−１４０−Ｐ Ｃ（ＮＥ
Ｎ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）を用い
て検討した。２−ｐａｌｍｌｔｏｙｌ−１−１４Ｃ−Ｐ
Ｃ１０ｎｍｏｌに対し、各濃度の抗体と混合し４５分
間室温で放置後、フォスフォリバーゼＡ２又はフォスフ
ォリパーゼＣを加え、ＰＣの分解の阻害反応の割合を調
べた結果、図９に示すようにフォスフォリパーゼＣに対
しては４μｇの抗体量で約５０％のＰＣの分解の阻害が
見られたが、フォスフォリバーゼＡ２に対しては活性の
阻害はみられなかった。なお、本実施例においては、酵
素反応後の反応液を薄層クロマトグラフィーで展開後、
両分を抽出し、それぞれの両分中のｃ１４を定量して阻
害率を測定した。
実施例１２
ＪＥ−８抗体のＰＣ類似物質に対する交叉反応性を調査
する目的で、以下の実験を行った。
する目的で、以下の実験を行った。
まず、マイクロタイタープレイドをＰＣ，ＰＥ（Ｐｈｏ
ｓｈａｔｌｄｙｌｅｔｈａｍｏｌａｍｌｎｅ） 、 Ｄ
Ｍ Ｐ Ｅ （Ｄｌｍｃｔｈｙｌ ＰＥ） 、 ＭＭ
ＰＥ （Ｍｏｎｏｍｅｔｈ）’ｌ ＰＥ）各０ 、 ５
ｎｆｆ１ｏｌ／ｗｅｌｌ でコートし、３９６ＢＳＡ
でブロッキングした。 １０ ＩＩＭ−Ｔｒｌｓ 、
１５０ ｍＭ−ＮａＣ１（ｐＨ７，４）にて各ウェ
ルを洗浄した後、ＪＥ−８抗体を産生ずるハイブリドー
マの培養上清を５０μｊｌ／ｗｅｌｌの割合で各ウェル
に添加した。２時間室温で放置し、洗浄後、実施例１と
同様にしてＪＥ−８と前記類似物質の交叉反応性を調査
した。なお、本実施例においても西洋ワサビペルオキシ
ダーゼの基質として、オルトフェニレンジアミンを使用
した。結果を図１０に示す。図３によれば、ＪＥ−８抗
体はＰＣに対して特異的に反応することがわかる。
ｓｈａｔｌｄｙｌｅｔｈａｍｏｌａｍｌｎｅ） 、 Ｄ
Ｍ Ｐ Ｅ （Ｄｌｍｃｔｈｙｌ ＰＥ） 、 ＭＭ
ＰＥ （Ｍｏｎｏｍｅｔｈ）’ｌ ＰＥ）各０ 、 ５
ｎｆｆ１ｏｌ／ｗｅｌｌ でコートし、３９６ＢＳＡ
でブロッキングした。 １０ ＩＩＭ−Ｔｒｌｓ 、
１５０ ｍＭ−ＮａＣ１（ｐＨ７，４）にて各ウェ
ルを洗浄した後、ＪＥ−８抗体を産生ずるハイブリドー
マの培養上清を５０μｊｌ／ｗｅｌｌの割合で各ウェル
に添加した。２時間室温で放置し、洗浄後、実施例１と
同様にしてＪＥ−８と前記類似物質の交叉反応性を調査
した。なお、本実施例においても西洋ワサビペルオキシ
ダーゼの基質として、オルトフェニレンジアミンを使用
した。結果を図１０に示す。図３によれば、ＪＥ−８抗
体はＰＣに対して特異的に反応することがわかる。
図１は本発明の実施例１において調製されたＪＥ−１抗
体のリン脂質に対する反応性を示すものである。図中、
・ＰＣとの、ＯはＰＳとの、△はＰＩとの、ムはＰＡと
の、口はＰＥとの、口はＣＬとの、ＸはＰＧとのＪＥ−
１の反応をそれぞれ示す。横軸はＪＥ−１抗体を産生ず
るハイブリドーマ培養上清の希釈率を、縦軸は各リン脂
質とＪＥ−１の免疫反応によって生じる反応複合体量を
、ＥＬ Ｉ ＳＡを実施して測定したた結果、即ち分解
されたオルトフェニレンジアミン量を４９２ｎ厘の吸光
を測定して定量した結果を示すものである。 図２は本発明の実施例３の結果を示すものである。図中
、・はＪＥ−１と補体共存下での、Ｏは標識マウスＩＧ
Ｍと補体共存下での、ムはＪＥ１単独での結果を示す。 横軸は添加した抗体の計、縦軸はそれぞれの場合に破壊
された赤血球の割合を示す。 図３は本発明の実施例４におけるＪＥ−１のフォスフォ
リパーゼＡ２活性に対する影響を示すものである。 ・はＪＥ−１の、○は標準マウスＩｇＭの結果を示すも
のであり、横軸は添加した抗体の量、縦軸は抗体を添加
していない場合のホスフォリパーゼＡ２の活性を阻害率
をＯとした場合の阻害率を示すものである。 図４は本発明の実施例５における、ＪＥ−１のフォスフ
ォリパーゼＣ活性に対する影響を示すものである。 ・はＪＥ−１の、○は標準マウスＩｇＭの結果を示すも
のであり、横軸は添加した抗体の量、縦軸は抗体を添加
していない場合のホスフォリパーゼＣの活性を阻害率を
０とした場合の阻害率を示すものである。 図５は、本発明の実施例６の結果を示すものである。○
はシアリダーゼ処理マウス赤血球に対する補体共存下で
の、・はシアリダーゼ処理マウス赤血球に対する補体非
共存下での、Δはシアリダーゼ未処理の場合の補体共存
下での、ムはシアリダーゼ未処理の場合の補体非共存下
での結果を示す。横軸は添加した抗体の量を、縦軸はそ
れぞれの場合に破壊された赤血球の割合を示す。 図６は本発明の実施例７の結果を示すものである。横軸
は、ＪＥ−１と図中のＰＣ類似物質との免疫反応によっ
て生じる反応複合体量を、ＥＬＩＳＡを実施してＭ１定
した結果、即ち分解されたオルトフェニレンジアミン量
を４９２ｎｏ＋の吸光を測定して定量した結果を示すも
のである。図中の略号は類似物質を示す。 図７は本発明の実施例８の結果を示すものである。縦軸
は、類似物質で処理していないＪＥ−１を添加した場合
の測定値を０とした場合の、各類似物質を添加した場合
の測定値をＪＥ−１のＰＣへの反応阻害率として示し、
横軸はＪＥ−１と反応させた類似性物質量を示すもので
ある。 図８は本発明の実施例９において調製されたＪＥ−１３
抗体のリン脂質に対する反応性を示すものである。図中
、・ＰＣとの、０はＰＳとの、ΔはＰＩとの、ムはＰＡ
との、口はＰＥとの、口はＣＬとの、×はＰＧとのＪＥ
−８抗体の反応をそれぞれ示す。横軸はＪＥ−１抗体を
産生ずるハイブリドーマ培養上清の希釈率を、縦軸は各
リン脂質とＪＥ−８の免疫反応によって生じる反応１夏
合体ｍを、ＥＬＩＳＡを実施してΔ−１定した結果、即
ち分解されたオルトフェニレンジアミン量を４９２ｎｍ
の吸光を測定して定量した結果を示すものである。 図９は本発明の実施例１１における、ＪＥ−８のフォス
フォリパーゼＣ活性に対する影響を示すものである。 ムはＪＥ−８抗体の、○は標準マウスＩｇＭの結果を示
すものであり、横軸は添加した抗体の量、縦軸は抗体を
添加していない場合のホスフォリパーゼＣの活性を阻害
率を０とした場合の阻害率を示すものである。 図１０は本発明の実施例１２の結果を示すものである。 横軸は、ＪＥ−８と図中のＰＣ類似物質との免疫反応に
よって生じる反応複合体量を、ＥＬＩＳＡを実施して測
定した結果、即ち分解されたオルトフェニレンジアミン
量を４９２ｎｍの吸光を測定して定量した結果を示すも
のである。図中の略号は類似物質を示す。
体のリン脂質に対する反応性を示すものである。図中、
・ＰＣとの、ＯはＰＳとの、△はＰＩとの、ムはＰＡと
の、口はＰＥとの、口はＣＬとの、ＸはＰＧとのＪＥ−
１の反応をそれぞれ示す。横軸はＪＥ−１抗体を産生ず
るハイブリドーマ培養上清の希釈率を、縦軸は各リン脂
質とＪＥ−１の免疫反応によって生じる反応複合体量を
、ＥＬ Ｉ ＳＡを実施して測定したた結果、即ち分解
されたオルトフェニレンジアミン量を４９２ｎ厘の吸光
を測定して定量した結果を示すものである。 図２は本発明の実施例３の結果を示すものである。図中
、・はＪＥ−１と補体共存下での、Ｏは標識マウスＩＧ
Ｍと補体共存下での、ムはＪＥ１単独での結果を示す。 横軸は添加した抗体の計、縦軸はそれぞれの場合に破壊
された赤血球の割合を示す。 図３は本発明の実施例４におけるＪＥ−１のフォスフォ
リパーゼＡ２活性に対する影響を示すものである。 ・はＪＥ−１の、○は標準マウスＩｇＭの結果を示すも
のであり、横軸は添加した抗体の量、縦軸は抗体を添加
していない場合のホスフォリパーゼＡ２の活性を阻害率
をＯとした場合の阻害率を示すものである。 図４は本発明の実施例５における、ＪＥ−１のフォスフ
ォリパーゼＣ活性に対する影響を示すものである。 ・はＪＥ−１の、○は標準マウスＩｇＭの結果を示すも
のであり、横軸は添加した抗体の量、縦軸は抗体を添加
していない場合のホスフォリパーゼＣの活性を阻害率を
０とした場合の阻害率を示すものである。 図５は、本発明の実施例６の結果を示すものである。○
はシアリダーゼ処理マウス赤血球に対する補体共存下で
の、・はシアリダーゼ処理マウス赤血球に対する補体非
共存下での、Δはシアリダーゼ未処理の場合の補体共存
下での、ムはシアリダーゼ未処理の場合の補体非共存下
での結果を示す。横軸は添加した抗体の量を、縦軸はそ
れぞれの場合に破壊された赤血球の割合を示す。 図６は本発明の実施例７の結果を示すものである。横軸
は、ＪＥ−１と図中のＰＣ類似物質との免疫反応によっ
て生じる反応複合体量を、ＥＬＩＳＡを実施してＭ１定
した結果、即ち分解されたオルトフェニレンジアミン量
を４９２ｎｏ＋の吸光を測定して定量した結果を示すも
のである。図中の略号は類似物質を示す。 図７は本発明の実施例８の結果を示すものである。縦軸
は、類似物質で処理していないＪＥ−１を添加した場合
の測定値を０とした場合の、各類似物質を添加した場合
の測定値をＪＥ−１のＰＣへの反応阻害率として示し、
横軸はＪＥ−１と反応させた類似性物質量を示すもので
ある。 図８は本発明の実施例９において調製されたＪＥ−１３
抗体のリン脂質に対する反応性を示すものである。図中
、・ＰＣとの、０はＰＳとの、ΔはＰＩとの、ムはＰＡ
との、口はＰＥとの、口はＣＬとの、×はＰＧとのＪＥ
−８抗体の反応をそれぞれ示す。横軸はＪＥ−１抗体を
産生ずるハイブリドーマ培養上清の希釈率を、縦軸は各
リン脂質とＪＥ−８の免疫反応によって生じる反応１夏
合体ｍを、ＥＬＩＳＡを実施してΔ−１定した結果、即
ち分解されたオルトフェニレンジアミン量を４９２ｎｍ
の吸光を測定して定量した結果を示すものである。 図９は本発明の実施例１１における、ＪＥ−８のフォス
フォリパーゼＣ活性に対する影響を示すものである。 ムはＪＥ−８抗体の、○は標準マウスＩｇＭの結果を示
すものであり、横軸は添加した抗体の量、縦軸は抗体を
添加していない場合のホスフォリパーゼＣの活性を阻害
率を０とした場合の阻害率を示すものである。 図１０は本発明の実施例１２の結果を示すものである。 横軸は、ＪＥ−８と図中のＰＣ類似物質との免疫反応に
よって生じる反応複合体量を、ＥＬＩＳＡを実施して測
定した結果、即ち分解されたオルトフェニレンジアミン
量を４９２ｎｍの吸光を測定して定量した結果を示すも
のである。図中の略号は類似物質を示す。
Claims (8)
- （１）少なくとも鶏の卵黄に由来するフォスファチジル
コリン（ＰＣ）を認識し、免疫グロブリンクラスＭに属
するモノクローナル抗体。 - （２）ＰＣを特異的に認識し、フォスファチジルセリン
（ＰＳ）、フォスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）
、フォスファチジル酸（ＰＡ）、カルジオリピン（ＣＬ
）、フォスファチジルイノシトール（ＰＩ）又は、フォ
スファチジルグリセロール（ＰＧ）とは交叉反応性を示
さない特許請求の範囲第（１）項記載のモノクローナル
抗体。 - （３）ＰＣが鶏の卵黄に由来する物であり、ＰＳが牛脳
に由来する物であり、ＰＥが大腸菌に由来する物であり
、ＰＡが前記ＰＣよりフォスファリパーゼＤを用いて調
製した物であり、ＣＬが牛心臓に由来する物であり、Ｐ
Ｉがイースト菌に由来するものであり、ＰＧが大腸菌に
由来する物である特許請求の範囲第（２）項記載のモノ
クローナル抗体。 - （４）フォスフォリパーゼＡ＿２（Ｐｏｒｃｉｎｅｐａ
ｎｃｒｅ−ａｔｉｃ）及びフォスフォリパーゼＣ（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）によるＰＣの分解を阻害す
る性質を有する特許請求の範囲第（１）〜（３）項いず
れかに記載のモノクローナル抗体。 - （５）フォスフォリパーゼＣ（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒ
ｅｕｓ）によるＰＣの分解を阻害する性質を有するが、
フォスフォリパーゼＡ＿２（Ｐｏｒｃｉｎｅｐａｎｃｒ
ｅａｔｉｃ）によるＰＣの分解を阻害しない特許請求の
範囲第（１）〜第（３）項いずれかに記載のモノクロー
ナル抗体。 - （６）ＰＣのコリン極性頭部のアミノ基の数の比例して
反応性を有することを特徴とする特許請求の範囲第（１
）〜（５）項いずれかに記載のモノクローナル抗体。 - （７）ＰＣの類似物質である、コリン、フォスフォコリ
ン、グリセロフォスフォコリン、リゾＰＣ、スフィンゴ
ミエリンと交叉反応性を有さない特許請求の範囲第（１
）〜（６）項いずれかに記載のモノクローナル抗体。 - （８）鶏の卵黄由来のＰＣをニトロセルロース紙上に固
定化し、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｈａｔｅｂｕｔｔｅｒｓａｌ
ｉｎｅ）中にてホモジネートしたものを抗原とし、ＢＡ
ＬＢ／ｃマウス脾臓に直接免疫し、追加免疫として前記
ＰＣを酸処理したサルモネラミネソタ菌にコートしたも
のを尾部静脈より免疫し、最終免疫後にこの脾細胞とミ
エローマ細胞株Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８．６５３とを細胞
融合することによりハイブリドーマを確立し、この培養
液よりモノクローナル抗体を得ることを特徴とする特許
請求の範囲第（１）〜（７）項いずれかに記載のモノク
ローナル抗体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1245307A JP3009159B2 (ja) | 1989-09-22 | 1989-09-22 | 抗フォスファチジルコリンモノクローナル抗体および該抗体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1245307A JP3009159B2 (ja) | 1989-09-22 | 1989-09-22 | 抗フォスファチジルコリンモノクローナル抗体および該抗体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03108496A true JPH03108496A (ja) | 1991-05-08 |
| JP3009159B2 JP3009159B2 (ja) | 2000-02-14 |
Family
ID=17131730
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1245307A Expired - Fee Related JP3009159B2 (ja) | 1989-09-22 | 1989-09-22 | 抗フォスファチジルコリンモノクローナル抗体および該抗体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3009159B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107383187A (zh) * | 2017-07-10 | 2017-11-24 | 华中农业大学 | 一种从鸡蛋黄中联合提取IgY、卵黄高磷蛋白、卵磷脂、蛋黄油及脱脂蛋黄粉的方法 |
| EP4220174A1 (en) * | 2022-02-01 | 2023-08-02 | Trustees of Tufts College | Antiphospholipid antibodies for the diagnosis of lyme disease |
-
1989
- 1989-09-22 JP JP1245307A patent/JP3009159B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107383187A (zh) * | 2017-07-10 | 2017-11-24 | 华中农业大学 | 一种从鸡蛋黄中联合提取IgY、卵黄高磷蛋白、卵磷脂、蛋黄油及脱脂蛋黄粉的方法 |
| EP4220174A1 (en) * | 2022-02-01 | 2023-08-02 | Trustees of Tufts College | Antiphospholipid antibodies for the diagnosis of lyme disease |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3009159B2 (ja) | 2000-02-14 |
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