JPH03128347A - ２―アミノペンタン酸化合物およびその免疫抑制剤としての用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、医薬、特に免疫抑制剤として有用な２−アミ
ノペンクン酸化合物類に関する。

〔従来技術〕

近年、臓器移植の際に生ずる拒否反応を抑制するために
シクロスポリンが使用されている。開発中の化合物も含
めて、いわゆる免疫抑制剤は、さらに関節リウマチ等の
治療薬としても期待されてきている。前記シクロスポリ
ンは、しかしながら、腎障害などの副作用を生起すると
いう問題点を有している。

一方、特開平１−１０４．０８７号公報には、冬虫夏草
菌（Ｉｓａｒｉａ　５ｉｎｅｌａｉｒｉｉ）の液体培養
物から免疫抑制物質が採取されることが記載され、当該
物質は米国特許第３９２８５７２号明細書に開示された
式 ％式％ により表わされる（２Ｓ、３Ｒ，４１？）　−（Ｅ）　
−２−アミノ−３，４−ジヒドロキソ−２−ヒドロキ／
メチル１４−オキソエイコサ−６−エン酸であることが
確認されている。

〔発明が解決しようとする課題］ 本発明の目的は優れた免疫抑制作用を示し、かつ副作用
の少ない新規な２−アミノペンクン酸化合物類を提供す
ることである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は一般式 ％式％ 〔式中、Ｒはアルキル、ヒドロキシアルキル、式−ＣＨ
＝ＣＨ１（ＣＨ２）、ＣＨ＝ＣＨ−ＣＩ（ＯＨ）−（Ｃ
Ｈ２）、Ｃｆｌ３（ここで、ｎ、ｍはそれぞれ１〜１０
の整数を示す。

−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨｚ）−−Ｃ（・χ）−（ＣＨ２）　
−ＣＨ３Ｓ （ここで、＞Ｃ＝Ｘ基は＞Ｃ＜＞Ａ（Ａはアルキレンを
示す。）　、＞Ｃ＝Ｎ−ＯＢ　（Ｂは水素またはアルキ
ルを示す。）もしくは＞　ＣＨＮ　Ｈ□を示す、ｐ、ｑ
はそれぞれ１−１０の整数を示す。））または−ＣＨ＝
ＣＨ−Ｙ　（Ｙはアルキルを示す、）により表わされる
基を示す、］ により表わされる２−アミノペンクン酸化合物、その塩
、そのＴ−ラクトン化合物またはその保護基により保護
された化合物に関する。

本明細書中のＲに関し、アルキルとしてはメチル、エチ
ル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第
３級ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、
ヘキシル、オクチル、２エチルヘキシル、デシル、ドデ
シル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、エ
イコシル、） トコシルなどの炭素数ｌ〜３０個の直鎮または分枝鎖状
のアルキルが例示され、ヒドロキソアルキルとしてはヒ
ドロキシメチル、２−ヒドロキソエチル、３−ヒドロキ
シプロピル、ｌ−ヒドロキンメチルエチル、４−ヒドロ
キシブチル、６−ヒドロキンヘキシルなどの炭素数１〜
６個のヒドロキシアルキル（アルキル部は分枝鎖状でも
よい）が例示される。

本明細書中の置換基＝Ｘに関し、Ａで表わされるアルキ
レンとしては、メチレン、エチレン、トリメチレン、プ
ロピリデン、テトラメチレンなどの炭素数１〜４個のア
ルキレンが例示され、Ｂで表わされるアルキルとしては
、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、
第３級ブチルなどの炭素数１〜４個の直鎖または分枝鎖
状のアルキルが例示される。

本明細書中のＹに関し、アルキルとはＲにおいて説明し
たアルキルと同義である。

一般式（１）の化合物のγ−ラクトン化合物としては式 （） （式中、Ｒは前記と同義である。） により表わされる化合物である。

また、一般式（Ｈの化合物において、保護基により保護
された化合物の保護基とは、水酸基またはアミノ基に対
し、有機化学上広く用いられるものであって、アセチル
、ベンゾイルなどのアシル、第３級ブトキシカルボニル
などのオキノカルボニル、テトラヒドロピラニルなどが
あげられる。

一般式（１）の化合物の塩としては、ナトリウム塩、カ
リウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、アルミニウム塩など
の金属塩、トリエチルアミンなどのアミンとの塩、リジ
ン、オルニチンなどのア朶ノ酸との塩などの薬理学的に
許容される塩があげられる。また、水和物またはその他
の溶媒和物も包含され、さらに個々の光学異性体、ジア
ステレオ異性体、ラセミ体も包含される。

一般式（］）の化合物の好ましい化合物は次の通りであ
る。

ＣＯ□■ Ｈ Ｈ ＣＯ□Ｈ ０１（ ５ Ｕ−） ｃｏ’、ｎ Ｈ 本発明の一般式（１） の化合物は醗酵法などに よって製造されうる（２５，３Ｒ，４Ｒ）　−（Ｅ）−
２−アミノ−３，４−ジヒドロキシ−２−ヒドロキシメ
チル−１４−オキソエイコサ−６−エン酸（以下、ｌ５
Ｐ−１という）を出発物質として用いることにより製造
されうる。またたとえば化合物（ａ）は醗酵法により生
産することができるが化合物（ａ）を生産しうる微生物
としては子のう菌類や不完全菌類に属するもの、具体的
には、不完全菌に属するイザリア属、マイセリア属、子
のう菌に属するマイリオコッカム属（チェラビア属）な
どが挙げられ、それぞれアメリカン・タイプ・カルチュ
ア・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ
１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）にイザリア・シン
クレイリー（Ｉｓａｒｉａ　５ｉｎｃｌａｉｒｉｉ）Ａ
ＴＣＣＮｏ、　２４４００．マイリオコッカム・アルボ
マイセス（Ｍｙｒｉｏｃｏｃｃｕｍ　ａｌｂｏｍｙｃｅ
ｓ）ＡＴＣＣＮｏ、　１６４２５、マイセリア・ステリ
リア（Ｍｙｃｅｌｉａ　５ｔｅｒｉｌｉａ）ＡＴＣＣＮ
ｏ、　２０３４９として寄託されている。また、マイリ
オコッカム・アルボマイセス＾ＴＣＣＮｏ、　１６４２
５は（財）醗酵研究所（大阪）に［ＦＯ３２２９２とし
て寄託されている。

化合物（ａ）は、また上記菌株をたとえば、常用される
紫外線、高周波放射線、薬品などによる人工変異手段で
変更した変異株にて製造することもできる。

化合物（ａ）生産菌は、通常のかび用栄養源を含む種々
の培養基で培養されうる。たとえば、炭素源としてグル
コース、澱粉、グリセリン、糖水あめ、デキストリン、
糖蜜、マルトース、キシロースなど、および窒素源とし
てコーンステイープリカーペプトン、イーストエキス、
ジャガイモ煎汁、肉汁、大豆粉、小麦胚芽、硝酸カリウ
ム、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、カゼイン、グ
ルテンミール、綿実粉、羽毛粉などの無機または有機の
窒素化合物があげられ、その他通常の無機塩および菌の
発育を助け、化合物（ａ）の生産を促進する有機および
無機物や消泡剤などの培養に常用される添加剤を適当に
加えることができる。

培養法は特に限定されるものではないが、好気的な深部
培養法が適している。培養に適当な温度はイザリア属に
属する菌の場合には２０〜３５’Ｃ。

好適には２５〜３０°Ｃであり、マイリオコノカム属ま
たはマイセリア属に属する菌の場合には３０〜５０°Ｃ
１好適には３５〜４５°Ｃである。

培養物中に生産された化合物（ａ）は抽出、吸着など常
用される操作を必要に応して適宜組み合わせ、培養物中
より取り出される。たとえば、イザリア・シンクレイリ
ー等のイザリア属に属する菌の場合は培養液から菌体な
どの不溶物を濾過、遠心分離などの方法で分離し、培養
濾液をアンバーライ１−ＸＡＤ−２に通液させ、化合物
（ａ）を吸着させることによって取り出される。かくし
て得られた化合物（ａ）をさらに、たとえば、メタノー
ルで溶出させ、）容出部を更に逆相クロマトグラフィー
にかけて、分画することによって化合物（ａｌの高度精
製物が得られる。また、マイリオコンカム・アルボマイ
セス、マイセリア・ステツリア等のマイリオコノカム属
またはマイセリア属に属する菌の場合は、培養液から菌
体をａ過、遠心分離などの方法で分離し、培養濾液はイ
ザリア属と同様に操作する。

方、分離した菌体からは、メタノールを用いて化合物（
ａ）を抽出し、抽出液を濾液と同様アンバ−ライトＸＡ
Ｄ−２で処理し、クロマトグラフィーや再結晶により精
製し、化合物（ａ）を得る。

化合物（ｂ）はｌ５Ｐ−１由来のγ−ラクトン体（保護
基により保護されている）、たとえば式（式中、Ａｃは
アセチル基を示す。） により表わされる化合物に３７フ化ホウ素の存在下アル
カンジチオールを反応させて、一般式（式中、Ａｃは前
記と同意義であり、Ａはアルキレンを示す。） により表わされる化合物を得、次いでラネーニフケル、
パラジウム炭素などを用いる還元反応に付すことにより
、式 （式中、Ａｃは前記と同意義） により表わされる化合物とし、ついでアルカリ加水分解
によりラクトン環を開裂することにより製造される。

化合物（Ｃ）は一般式（［［ｌ）の化合物（但し、Ａは
エチレンを示す。）をアルカリ加水分解反応に付すこと
により、化合物（ｄ）はｌ５Ｐ−１にヒドロキシルアミ
ンを反応させることにより製造される。

なお、化合物（ｄ）に対応するアルコキシム体は、ｌ５
Ｐ−１に○−アルキルヒドロキンルアミンを反応させる
か、ヒドロキシム体にジアルキル硫酸、ヨウ化アルキル
等を反応させることによっても得られる。また、ヒドロ
キシム体は常法によりアジン化合物に導くことができる
。化合物（ｄ）または対応するアルコキシム体にはアン
チ−、シン−の幾何異性体が存在するが、本発明はこれ
ら個々の異性体およびそれらの混合物も包含する。

化合物（ｅ）は化合物（ＩＩ）を例えば水素化ホウ素ナ
トリウム、水素化リチウムアルミニウム等の金属水素錯
化合物によって１４位をヒドロキシに還元した後、反応
に付してアルコール体とした後、これを１，１−チオカ
ルポニルジイミダヅールと反応させ、１４位を１−イミ
ダゾリルチオカルボニルオキシ置換体とし、たとえば、
水素化トリブチル錫にてラジカル還元することにより、
当該置換基を脱離させ、ついでアルカリ加水分解反応に
付すことにより製造される。また別法として二級水酸基
をトリフルオロメタンスルホネート化し、水素化ホウ素
ナトリウムなどによる脱酸素反応を適用することもでき
る。

化合物（ｆ）はｌ５Ｐ−１のＴ−ラクトン体、即ち化合
物■をオゾン分解反応に付すか、または酸化オスミウム
による１、２−ジオール形成反応、次いで過ヨウ素酸ナ
トリウムと反応させ、次いで水素化ホウ素ナトリウムな
どを用いて還元することにより得られる。

一般式（１）の化合物において、Ｒが−ＣＨ＝ＣＨ−Ｙ
である化合物は、ｌ５Ｐｉをオゾン分解反応に付し、次
いでウィツテイヒ試薬と反応させることにより製造され
る。

このようにして得られる化合物は、塩酸、酢酸などの酸
または第３級ペンチルアルコールなどの第３級アルコー
ルで処理することにより対応するｒ−ラクトン体とする
ことができる。

上記反応は無溶媒下または反応に不活性な溶媒の存在下
、冷却下、室温下または加熱下に５分から５０時間程度
で進行する。

本発明の一般式（１）の化合物、即ち一般式（１）の化
合物、即ちカルボン酸化合物については、常法により上
述した塩とすることができる。また、各種異性体につい
ては、ラセ狗体、ジアステレオ異性体を光学分割するか
、光学活性な原料を用いることによって製造することも
できる。

〔作用・効果〕

本発明の２−アミノペンクン酸化合物類は優れた免疫抑
制作用を示し、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ。

マウス、ラットなどの哺乳動物に対して、たとえば臓器
や骨髄移植の際の拒絶反応の抑制剤や関節リウマチ、全
身性エリテマトーデス、シューグレン病、多発性硬化症
、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、内分泌性成障害、原発性
胆汁性肝硬変、クローン病、糸球体腎炎、サルコイド−
シス、乾廚、天庖瘉、再生不良性貧血、特発性血小板減
少性紫斑病、アレルギーなどの自己免疫疾患などにおけ
る予防または治療剤として、あるいは医学、薬学におけ
る試薬として用いることができる。

これらの化合物類は担体、賦形剤、希釈剤などと混合し
て散剤、カプセル剤、錠剤、注射剤などに製剤化して患
者に投与することができる。また自体既知手段にて凍結
乾燥製剤としてもよい。

これらの化合物類の投与量は疾患、症状、体重性別、年
令などによって変わりうるが、たとえば腎移植における
拒絶反応の抑制には、通常成人１日当たり０．０１−０
１−１Ｏ力価）をＩ日１〜数回に分けて投与される。

〔実験例・実施例］ 以下に実験例等を挙げて本発明の作用、効果をさらに詳
細に説明する。なお、免疫抑制の活性測定は、下記の方
法で行なった。

当該活性測定法としては、マウス、ラットあるいはヒト
のリンパ球を用いた種々の免疫反応を用いることができ
るが、たとえば、免疫抑制活性は、マウス、ラット、ヒ
トの同種リンパ球混合反応（同種ＭＬＲ）を用いること
により、感度よく測定できる。同種ＭＬＲとは、同種で
しかも主要組織適合性抗原が異なる２個体由来のリンパ
球、たとえば、牌細胞、リンパ節細胞、末梢血リンパ球
などを混合培養することによって誘導されるリンパ球の
幼若化反応である。この同種ＭＬＲは、リンパ球の供与
者間の主要組織適合性抗原の違いを反映し、誘導される
現象であり、たとえば、−卵性双生児のリンパ球の混合
培養によるリンパ球の幼若化現象は認められない。そこ
で同種ＭＬＲは、たとえば臓器移植における供与者−受
容者の選択に広く用いられている方法である。

通常、同種ＭＬＲを行なう場合には、一方のリンパ球を
Ｘ線照射あるいはマイトマイシンＣ処理などを行なうこ
とによって、分裂増殖を阻止した状態で刺激細胞として
用い、他方のリンパ球（反応細胞）の幼若化反応を測定
する方法（ｏｎｅ　ｗａｙＭＬＲ）を用いることができ
る。

さらに免疫抑制活性は、同種ＭＬＲの際に誘導される主
要組織適合性抗原拘束性を有する細胞障害性Ｔ細胞の誘
導を抑制する活性としても測定することができる。

また、免疫抑制活性は、同種ＭＬＲの他に、種々のマイ
ト−ジエン（コンカナバリンＡ５フイトヘムアグルチニ
ン、ポークライードマイト−ジエンなど）の刺激により
誘導されるリンパ球の幼若化反応を抑制する活性、また
は、Ｔ細胞、Ｂ細胞などのリンパ球の分裂増殖を増強も
しくは分化を促進する活性を有するような、サイトカイ
ン（インターロイキン１．２．３．４．５．６など）に
より誘導されるリンパ球の分裂増殖反応、または機能の
発現を抑制する活性としても評価することができる。さ
らに、これらサイト力インのＴ＄ｌｌＩ胞、マクロファ
ージ箋からの産生を抑制する活性としても評価すること
が可能である。

さらに化合物をマウス等に腹腔内、経口、静脈内、皮肉
、皮下または筋肉内投与をすることによって、たとえば
、同種細胞等であらかしめ免疫されたマウスの肺細胞中
に誘導される同種細胞特異的細胞障害性Ｔ細胞の誘導を
抑制する活性、ならびに同種細胞等で免疫したマウスの
血清中に産生される同種細胞特異抗体の産生を抑制する
活性、または同種マウスの臓器移植の際の拒絶反応、あ
るいは移植片対宿主反応、あるいは遅延型アレルギー、
アジュバント関節炎等を抑制する活性としても評価する
ことができる。

また、自己免疫疾患のモデル動物であるＭＲＬ／ｌｐｒ
マウス、Ｎ　Ｚ　Ｂ　／　Ｗ　Ｆ　＋　マウス、ＢＸＳ
Ｂマウス、ＮＯＤマウス等に化合物を投与することによ
る、たとえば抗ＤＮＡ抗体の産生、リウマチ因子の産生
、腎炎、リンパ球の増殖異常、尿タンパク等の抑制活性
あるいは延命効果としても評価することができる。

実験例１（免疫抑制物質の免疫抑制作用）化合物の免疫
抑制活性の測定は、マウス同種リンパ球混合反応（以下
、ＭＬＲと称することもある。）を用いて行った。マウ
ス同種ＭＬＲは、反応細胞としてＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　
ｃ　７ウス（Ｈ−２’　）　（７）肺細胞を、刺激細胞
としてＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｈ２”）の肺細胞をマイ
トマイシンＣ処理したものを用い、等比で混合培養する
ことによって行なった。

反応細胞の調製法としては、以下の方法で行なった。５
〜６週齢のＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスより肺臓を摘
出し、熱不活化牛胎児血清（以下、Ｆｅ２と称すること
もある。）を５％添加したＲＰＭ１１６４０培地（ｇ酸
カナマイシン６０　ｕ　ｇ／ｍＬ　Ｌ−グルタξン２ｍ
Ｍ５Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−
エタンスルホネート（ＨＥＰＥＳ）１０ｍＭ、０．１％
炭酸水素ナトリウム含有）を用いて、肺細胞の単細胞浮
遊液を得た。

溶血処理後、１０−’Ｍ　　２−メルカプトエタノール
および２０％ＦＣ３を含むＲＰＭ１１６４０培地を用い
て、１０７個／ｄに調製し、反応細胞浮遊液として用い
た。

刺激細胞の調製法は以下の方法で行なった。５〜６週齢
の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスより肺臓を摘出し、ＲＰＭ
１１６４０培地を用いて肺細胞の単細胞浮遊液を得た。

冷血処理後、４０μｇ　／　ｒｎ１マイトマイシンＣで
３７゛Ｃ５６０分間の処理を行なった。３回洗浄後、ｔ
ｏ−’Ｍ　　２−メルカプトエタノールおよび２０％Ｆ
Ｃ３を含むＲＰＭ１１６４０培地を用いて、１０’個／
　ｍｉに調製し、刺激細胞浮遊液として用いた。

上述した方法により調製した反応細胞浮遊液５０μｉと
刺激細胞浮遊液５０μＥおよび被検体１００μｌとを、
９６穴平底マイクロテストプレートに加え、３７°Ｃで
５％炭酸ガス９５％空気の条件下で４日間培養を行なっ
た。

リンパ球の幼若化反応の測定法としては、３Ｈ−チ、珈
ジンの取り込みを指標とする方法を用いた。

すなわち、培養終了後に、３Ｈ−チミジン１８，５ＫＢ
ｑ／ウエルを添加し、４時間培養後、セルハーベスタ−
にて細胞を収集し、細胞内に取り込まれた放射活性を液
体シンチレーションカウンターにて測定し、マウス同種
ＭＬＲのリンパ球幼若化の指標とした。マウス同種ＭＬ
Ｒの抑制は、以下の弐により抑制率を算出し、評価した
。その結果を第１Ａ表に示した。

抑制率＝ （以下余白） 被検体はメタノールに溶解した後、ＲＰＭＩＩ６４０培
地で希釈して用いた。なおメタノールは、０．０１％以
下で用い、この場合には同種ＭＬＲに全く影響は認めら
れなかった。

実施例１〜６の化合物について、１ｔＩｇ／！Ｍｌから
０．０００１μｇ／ｍｌの範囲の最終濃度で、マウス同
種ＭＬＲにおけるリンパ球幼若化反応活性を測定した結
果、第１Ａ表に示すように、これらの化合物は濃度依存
的にマウス同種ＭＬＲに対し、抑制効果を示した。

実施例１〜６の化合物のマウス同種ＭＬＲを５０％抑制
する濃度（ＩＣ，。）は、それぞれ１．３Ｘ１０−”ｔ
ｔ　ｇ／　ｄ、　１．６　Ｘ　１０−”ｔｔ　ｇ／　ｒ
ａ、２．５Ｘ１０−’μｇｏｄ、２−５ＸＩＱ−ｚμｇ
／ｌｒｉ、２．５ＸｌＯ−’μｇ／ｄおよび４．５Ｘ１
０−”μｇ／−であることが明らかとなった。また、第
１Ｂ表の結果から明らかなように、実施例５の化合物の
ナトリウム塩も実施例５の化合物とほぼ同程度のマウス
同種ＭＬＲ抑制効果を示した。

リンパ球幼若化反応の測定方法としては、さらに次のよ
うな３−（４，５−ジメチルチアヅール２−　（ル）−
２５−ジフェニルテトラゾリウＪ、ブロマイド（ＭＴＴ
）を用いる色素定量法を用いることもできる。

培養註了後、各ウェルの上清を１ｏＯｕｆｆ除去し、５
　ｍｇ／　ｍ　Ｍ　Ｔ　Ｔ　７容ｌ夜を２０〃２ずつ各
ウェルに添加し、４時間、３７゛Ｃで培養する。その後
、１０％ドデシル硫酸ナトリウムを含む０．０１１Ａ定
塩酸冷液１００μｌを加え、−晩３７°Ｃで放置し、形
成された紫色のホルマザンの結晶を溶解させ、マイクロ
プレート吸光光度計（イムノリーダー）を用いて５７Ｑ
ｎｍにおける咬光度を測定し、マウス同種Ｍ　Ｌ　Ｒの
リンパ球幼若化の指標とする。マウス同種ＭＬＲの抑制
は以下の式により抑制率をＣγ出することにより評価す
ることができる。

（抑制率（％）− 実験例２（ヒト同種ＭＬＲに対する抑制効果）ヒト同種
Ｍ　Ｌ　Ｒに対する印判効果の試験は以下の方法で行な
った。

正常ヒト末梢血をフイコールパ、り密度勾配遠心法によ
り分離して得たヒト末梢血リンパ球を１０％ＦＣ３添加
ＲＰＭ１１６４０培地に悲濁し、プラスヂノクディノン
ユにまき、５％炭酸ガス９５％空気の条件下、３７゛Ｃ
で２時間培養した。培養終了後、軽くピペッティングし
た後、上清を回収し遠心（１０００ｒｐｍ　、　５分間
）することによってプラスチック非付着性細胞を得た。

プラスチック非付着性細胞は、さらにナイロンウールカ
ラム通過法によりナイロン非付着性細胞とした後、１０
％ＦＣ３添加ＲＰＭ１１６４０培地にて４Ｘ１０６個／
ｄに調製し、反応細胞浮遊液として用いた。

また、プラスチック付着性細胞は、５％ＦＣ３および０
．０２％エチレンジアミン４酢酸２ナトリウム（ＥＤＴ
Ａ）添加リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を加え激しく
ピペッティングし、剥離することによって得た。さらに
、プラス千ツク付着性細胞はマイトマイノンＣ４０μｇ
　／　ｍｌで、３７°Ｃにて６０分間の処理を行った後
、３回洗浄後、１０％ＦＣ３添加ＲＰＭ１１６４０培地
を用いて４×１０’個／　ｍｌに調製し、刺激細胞浮遊
液として用いた。上述した方法により調製した供与者Ａ
あるいはＣ由来の反応細胞浮遊液５０μｌと供与者Ｂあ
るいはＤ由来の刺激細胞浮遊液５０μｌとをそれぞれ混
合し、さらに被検体１００μｌを添加し３７°Ｃで５％
炭酸ガス９５％空気の条件下で５日間培養を行なった。

培養終了後に、３Ｈ−チ暑ジン３７ＫＢｑ／ウェルを添
カロし、１８時間培養後、セルバーヘスターにて細胞を
収集し、細胞に取り込まれた放射活性を液体シンチレー
ションカウンターにて測定し、ヒト同種ＭＬＲのリンパ
球幼若化の指標とした。

ヒト同種ＭＬＲの抑制は、以下の式により抑制率を算出
し評価した。その結果を第２Ａ表および第２Ｂ表２こ示
した。

（以下余白） 抑制率（％） （以下余白） 実施例１．２．３および５の化合物について、ｌμｇ　
／　ｍｌから０．０００１　ｕ　ｇ／ｒｄの範囲ノ最終
濃度でヒト同種Ｍ　Ｌ　Ｒにおけるリンパｆ、Ｌ幼若化
反応の印判活性を測定した。その結果、第２Ａおよび第
２Ｂ表に示すように、これらの化合物は、濃度依存的に
ヒト同種Ｍ１、Ｒに対して印判効果を示した。

実験例３（マウス同種リンパ球混合培養（Ｍ＋−Ｃ：１
により誘導される同種細胞障害外Ｔｆ１胞に対する印判
効果） 実験例１と同様の方法にて調製したＢ　Ａ　ｌ　１３　
／Ｃ７ウス（Ｈ−２’　）胛細胞浮ｍ？夜（２ＸｌＯ’
個／　ｍｉ　）　０．５　ｍｌとマイトマイシンＣ処理
したＣ　５７ＢＬ／６マウス（Ｈ−２１）肺細胞浮遊液
（２×１０’個／ｍＮ）０．５−および被検体］、　Ｏ
ｍｔ！を２・１穴マルチデイツシユに加え、３７°Ｃで
５％炭酸ガス、９５％空気の条件下で６日間培養を行っ
た。

培養終了後、遠心により細胞を回収し、１０％ＦＣ３を
含むＲＰＭ１１６４０培地にて５ＸｌＯ’〜６．２５Ｘ
１０’個／ｄに調製し、エフェクター細胞として用いた
。

標的細胞としては、刺激細胞と同系（Ｈ−２ｂ）のＣ５
７ＢＬ／６マウス由来白血病細胞、Ｅｌ、４を用いた。

ＥＬ４細胞１０６個を３７０ＭＢｑのＮ　ａ　Ｚ”　Ｃ
ｒ　Ｏａを用いて、３７°Ｃで１時間インキエベートす
ることによりＳ　Ｉ　Ｃｒを細胞質内に取り込ませた後
、洗浄し、１０“個／　ｍＱに調製し、標的細胞として
用いた。

細胞障害活性の１ｉｌｌｌ定は、エフェクター細胞浮遊
液１００μｌと、標的細胞浮遊液１００μｌを、９６穴
平底マイクロテストプレートに加え、３７°Ｃにて４時
間培養した後、上清中に放出される”Ｃｒ１ｌを測定し
、以下の弐により細胞障害活性を算出した。その結果を
第３Ａ表に示した。

細胞障害活性− （余白） なお、上記方法により誘導された細胞障害性Ｔ細胞は、
刺激細胞（Ｈ−２’）と同系のＥＬ４細胞（Ｈ−２″″
）に対しては強い細胞障害活性を示したが、異系のＭｅ
ｔｈ　Ａ細胞（Ｈ−２’　）　、Ｐ８１５細胞（Ｈ−２
’　）、ＢＷ５１４７細胞（Ｈ２”）に対しては全く細
胞障害活性を示さなかったことから、Ｈ−２’拘束性の
同種細胞障害性Ｔ細胞であることが示唆された。細胞障
害性Ｔ細胞の活性はｌ＋７Ｌｉｃ　ｕｎｉｔにて表示し
た。Ｌｙｔｉｃ　ｕｎｉｔ（ＬＵ）は標的細胞５Ｘ１０
３個を２５％破壊するのに必要なエフェクター細胞数を
ＩＬＵとしたときのエフェクター細胞１０’個あたりの
ＬＵで示した。

第３Ａ表に示すように、実施例２および５の化合物の添
加により、同種細胞障害性Ｔ細胞の誘導は著しく抑制さ
れることが明らかとなった。

また、Ｃ３Ｈ／　Ｈｅ　Ｎ　マウス（Ｈ−２’）肺細胞
浮遊液を反応細胞とし、マイトマイシンＣ処理したＣ５
７ＢＬ／６マウス（Ｈ−２５）肺細胞浮遊液を刺激細胞
とした際に、誘導される同種細胞障害性Ｔ細胞の誘導も
、実施例５の化合物の添加により抑制された （第３Ｂ表）。

（以下余白） 実験例４（マイト−ジエン刺激マウス牌細胞におけるイ
ンターロイキン２　（ＩＬ−２）およびＩ　Ｌ−３産生
に対する抑制効果）マイト−ジエン刺激マウス牌細胞に
よるＩＬ２およびＩ　Ｌ−３の産生に対する効果の試験
は以下の方法で行なった。

５〜８週齢の雄性Ｃ３Ｈ／　Ｈｅ　Ｎマウスより肺臓を
摘出し、ＲＰＭ１１６４０培地を用いて牌細胞の単細胞
浮遊液を得た。溶血処理後、２０％ＦＣＳを含むＲＰＭ
Ｉ１６４０培地を用いて１０″個／　ａｒｌに調製し、
マイト−ジエンとしてフィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ
）１０ｔＩｇ／ｄを添加した。この細胞浮遊液１ｄと、
被検体１戚とを２４穴マルチデインシユに加え、３７°
Ｃ，５％炭酸ガス９５％空気の条件下で２４時間培養し
た。培養終了後、上清を回収し、ＰＨＡ刺激マウス牌細
胞培養上清とした。

ＰＨＡ刺激マウス牌細胞培養土清中の［Ｌ−２活性は次
のようにして測定した。ＩＬ−２依存性マウス細胞株Ｃ
ＴＬＬ−２を３０％ＦＣ３を含むＲＰＭ１１６４０培地
を用いて２Ｘ１０’個／Ｉｄに調製した。その細胞浮遊
液ｌＯＯμｌと上記ＰＨＡ刺激マウス牌細胞培養上清を
２倍系列希釈したちの１００μｌとを９６穴平底マイク
ロテストプレートに加えた。３７°Ｃ１５％炭酸ガス、
９５％空気の条件下で４４時間培養した後、実験例１と
同様の方法によるＭＴＴを用いる色素定量法により吸光
度を測定し、Ｉ　Ｌ−２依存性細胞増殖の指標とした。

ＩＬ−２活性は、ＭＴＴ法による吸光度の最大値の５０
％を与える希釈濃度からＵ／絨で表示した。

！Ｌ−３活性は次のようにして測定した。

Ｉ　Ｌ−３依存性マウス細胞株ＦＤＣ−Ｐ２を１０％Ｆ
Ｃ３を含むＲＰＭ１１６４０培地を用いて２Ｘ　１０’
個／ｄに調製した。その細胞浮遊液１００μｌと上記Ｐ
ＨＡ刺激マウス牌細胞培養上清を２倍系列希釈したちの
１００μ２とを９６穴平底マイクロテストプレートに加
え、３７″Ｃ１５％炭酸ガス９５％空気の条件下で４４
時間培養した。培養終了後、上述の方法と同様にＭＴＴ
を用いる色素定星法により、吸光度を測定し、Ｉ　Ｌ、
　−３依存性細胞増殖の指標とした。ＩＩ、−３活性は
ＭＴＴ法による吸光度の最大値の５０％を与える希釈濃
度からＵ　／　ｒｄで表示した。

（以下余白） 第４Ａ表 よ式 ％式％ （） （） （１ 第４ＡおよびＢ表に示したように、本発明の化合物は、
Ｐ　ＨＡ刺激マウス牌細胞におけるＩＬ−２およびＩ　
Ｌ−３の産生を抑制することが示唆された。

実験例５（マウス同種リンパ球ｌ昆合培養（ＭＬＣ）に
おけるｌ　Ｌ−２およびＩ　Ｌ−３産生に対する抑制効
果） マウス同種ＭＬＣは次のように行なった。

すなわち、実験例１と同様に調製された反応細胞浮ｔｒ
液および刺激細胞浮遊液をそれぞれ０．５　ｍｌずつ、
あらかしめ被検体ｌ−を入れておいた２４穴マルチデイ
ツシユに加え、３７°Ｃ５５％炭酸ガスの条件下で２日
間培養した。培養終了後、上清を回収してマウス同種Ｍ
ＬＣの上清とした。

マウス同種ＭＬＣの上清中のＩ　Ｌ−２およびＩＬ−３
活性は、実験例４と同様の方法で測定した。

（以下余白） 第５Ａ表 試 料 ＩＬ−２活性 抑制率 ＣＵ／ｍ乏） （χ） 反応細胞のみの培養上清 く１ ＬＣ の上清 ４．５ 第５Ｂ表 試 料 ｒＬ−３活性 抑制率 （Ｕ＃＋４り （χ） 反応細胞のみの培養上清 ｌ０００ ＬＣ の上清 ４９．２ 第５Ａおよび８表に示したように、本発明の化合物は、
マウス同種ＭＬＣにおけるＩ　Ｌ−２およびＩＬ−３の
産生を抑制することが示唆された。

実験例６（インターロイキン２　（ｒＬ−２）により誘
導される１Ｌ−２依存性マウス細 胞株ＣＴＬＬ−２の増殖に対する抑制 効果） Ｉ　Ｌ−２依存性マウス細胞株、ＣＴＬＬ−２を３０％
ＦＣ５を含むＲＰＭ１１６４０培地にて４ＸＩＯ’個／
　ｍＲに調製した。この細胞浮ｉ液５０μｌと、リコン
ビナントヒトＩＬ−２（ｒｈｌＬ２）２００Ｕ／−を５
０μｉ、および被検体１００μｌとを９６穴平底マイク
ロテストプレートに加えた。３７°Ｃ１５％炭酸ガス９
５％空気の条件下で、６８時間培養した後、実験例１と
同様の方法によるＭＴＴを用いる色素定量法により、吸
光度を測定し、ＩＬ〜２依存性細胞増殖の指標とした。

抑制率（％）は以下の式により算出した。

（以下余白） 抑制率（％）＝ 結果を第６Ａ表、第６Ｂ表にまとめた。

（以下余白） 第６Ａ表 ＩＬ−２ 被検体 用量 吸光度 抑制率 （５０Ｌｌ／ｍＱ） （μｇ　／　ｍｌ　） （００５７゜） （％） 実施例１のｆｏ、ｏｏｌ 化合物　　（０，０１ ０，１ 自、０ 実施例２の、　ｏ、ｏｏｔ 化合物　　　０．０１ ０．１ （１，０ ０，００１ ０，５８６ ０，５０８ ０，５５６ ０，００９ ０，００５ ０，５５５ ０，５４３ ０，５５８ ０，１６１ １３，３ ５，１ ９８，６ ９９，３ ５，３ ７，４ ４，８ ７２，６ ＋ ＋ １０、Ｉ ［１，。

０．４７１ ■９．７ ０．１５２ ７４．２ 第６Ｂ表 ０．０２６ ＋ ０．９６１ 第６ＡおよびＢ表から明らかなように、本発明化合物は
、リコンビナントヒトＩＬ−２により誘導されるＣＴＬ
Ｌ−２細胞の分裂増殖を強く抑制することが示唆された
。

実験例７（マウス胸腺細胞のＩＬ−１、Ｉ　Ｌ−２およ
びＩＬ−４応答に対する抑制効果）雄性６週齢Ｃ３Ｈ／
　Ｈｅ　Ｎマウスより胸腺を摘出し、無血清ＲＰＭ１１
６４０培地を用いて単細胞浮ｉｉｔ液を得た。３回洗浄
後、１０−’Ｍ　　２−メルカプトエタノールおよび２
０％ＦＣ３を含むＲＰＭ１１６４０培地を用いて、１．
５Ｘ１０’個／ｍ１の細胞濃度に調製し、この細胞浮遊
！１００μｌと被検体１００μｌとを９６穴平底マイク
ロテストプレートに加え、フィトヘムアグルチニン（Ｐ
Ｉ−ＩＡ）１μｇ／ｄおよびリコンビナントヒトＩＬ４
−１α、リコンビナントヒトＩＬ−２、アルイはりコン
ビナンドマウスＩ　Ｌ−４存在下にて、３７°Ｃ１５％
炭酸ガス９５％空気の条件下で５４時間培養した。培養
終了後に、３Ｈ−チミジン１８．５ＫＢｑ／ウエルを添
加し、１８時間培養後、セルバーヘスターにて細胞を収
集し、細胞内に取り込まれた放射活性を液体ンンチレー
ションカウンターにて測定し、ＩＬ−１、Ｉ　Ｌ−２あ
るいはＩＬ〜４応答の指標とした。ＩＬ−１、Ｉ　Ｌ　
−２あるいはｌ　Ｌ−４応答の抑制は以下の式により抑
制率を算出し、評価した。

（余白） 結果を第７Ａ、ＢおよびＣ表に示した。

これらの表から明らかなように、本発明の化合物はＩＬ
−１、Ｉ　Ｌ−２あるいはｌ　Ｌ−４により誘導される
マウス胸腺細胞の分裂増殖を強く抑制することが示唆さ
れた。

第７Ａ表 １７２±　　１８ ＋ １１６１７± ２０ 第７Ｂ表 ＩＬ−２ 被検体 用量 ３■ チミジン 抑制率 （０７ｍ１） （μｇ／ｍＩ） 取り込み（ｃｐｍ） （χ） ６０ ０ ８００ ０ ０１８３ 第７Ｃ表 ＩＬ−４ 被検体 用量 ｊＩ＋ チミジン 抑制率 （Ｕ／ｍ１） （μｇ／ｍ＋） 取り込み（ｃｐｍ） （χ） ２２ ０ １８２ ５０ ２７６１ 実験例８（マウスの抗ヒツジ赤血球抗体産生に対する抑
制効果） ５〜７週齢の雄性Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスをヒツ
ジ赤血球（５Ｘ１０’個／マウス、静脈内投与）で免疫
し、被検体を３〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で免疫当日より４
日間連日腹腔内投与した。免疫４日後に肺臓を摘出し、
ヒツジ赤血球とモルモノｌ−ｊ＋ｉ体を用いる直接プラ
ーク法により、プラーク形成細胞（ＰＦＣ）数を測定す
ることにより、抗ヒツジ赤血球抗体産生に対する抑制効
果を検討した。また、この際１、マウスの体重、胸腺お
よび肺臓の湿重量、牌細胞数についても併せて測定した
。結果を第８表に示した。

（以下余白） 第８表に示したように、実施例２の化合物は抗ヒツジ赤
血球抗体産生に対する抑制効果すなわち単位牌細胞数当
たりのＰＦＣ数並びに全牌細胞数当たりのＰＦＣ数（Ｉ
ＸＩＯ’個）を減少させる効果を有することが明らかで
ある。

実験例９（マウスの同種細胞免疫による同種細胞障害性
Ｔ細胞の誘導に対する抑制効果）５〜７週齢の雄性Ｂ　
Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウス（Ｈ−２’）を、Ｃ５７ＢＬ
／６マウス（Ｈ−２ｂ）由来の白血病細胞ＥＬ４（１０
’個／マウス、腹腔内投！−ｊ）で免疫し、免疫当日か
ら被検体を０．００１〜３ｍｇ／ｋｇ／日の用量で５回
腹腔内あるいは０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で経
口投与した。免疫９〜ＩＯ目後にマウスより肺臓を摘出
して単細胞浮遊液とした後、エフェクター細胞として用
いた。実験例３と同様に、ＥＬ４細胞を標的細胞とした
５１Ｃｒ放出試験を行ない細胞障害活性を測定した。

同種細胞障害性Ｔ細胞の活性は、１ｙｒｉｃ　ｕｎｉｔ
にて表示した。Ｌｙｔｉｃ　ｕｎｉｔ　（Ｌ　Ｕ）は標
的細胞５×１０３個を２５％破壊するのに必要なエフェ
クター細胞数をＩＬＵとし、肺臓あたりのＬＵで示した
。また、この際、マウスの体重および牌細胞数について
も併せて測定した。

結果は第９ＡおよびＢ表に示す。

（以下余白） 第９ＡおよびＢ表に示したように、実施例２の化合物は
、ｌ内あるいは経口の５回投写により、同種細胞免疫マ
ウスの牌細胞中の同種細胞障害外Ｔ細胞の読唇を強く抑
制することが明らかである。

方この際、体重増加の抑制あるいは牌細胞数のイ丁σな
減少は認められなかった。

また、実施例５の化合物およびそのナトリウム塩も、第
９Ｃ−Ｆ表の結果から明らかなように、腹腔内あるいは
経［」の５回投与により、同種細胞免疫マウス牌細胞中
の同種細胞障害性Ｔａ１ｌ胞の読唇を強く抑制し、経口
１０回投与によって、０．０３ｍ＜　／　ｋｇの用量ま
で有意な抑制効果が認められた。

第９Ｆ表に示したように、実施例５のナトリウム塩は同
種細胞免疫マウスのＨ１１ｍ細胞の同種細胞障害性′ｒ
細胞誘導に対し、腹腔内投与により実施例５のナトリウ
ム塩以外の化合物とほぼ同等の印判作用を有する。また
、静脈内投与により０．０３ｍｇ／ｋｇの用量まで有意
な抑制作用が認められた。

実験例１０（マウスの同種細胞免疫による同種細胞障害
性特異抗体産生に対する抑制 効果） ５〜７週齢の雄性ＢＡＩ、Ｂ　／　ｃマウスを、実験例
７と同様にＣ５７ＢＬ／６マウス由来白血病細胞ＥＬ４
　（１０７個／マウス、腹腔内設Ｆ−ｊ）で免疫し、免
疫当日から被検体を０．００１〜３ｍｇ／ｋｇ／日の用
量で、腹腔内あるいは経口投与を行ない、免疫９〜１０
日後にマウスより血清を採取した。

得られた血清を２倍系列希釈したちの５０μＲと、モル
モント補体５０μｌおよび標的ｆ′ｌ！Ｉ胞としてのＳ
ＩＣ，で標識したＥＬ４細胞浮５ｉ’ｔ（１（５ｘ　１
０　’個／ｍＬ　　１ＯＯｔｔＲ）とを９６穴マイクロ
テストプレートに加え、３７°Ｃにて１時間インキユヘ
ートした後、上清中に放出されるｓ＋Ｃｒ９を測定し、
以下の弐より補体依存性の細胞障害活性を算出した。

細胞障害活性（％）− なお上記方法により測定した、 血清中の同種細 胞障害性特異抗体価は、５ＩＣｒ標識標的細胞を０゜Ｉ
Ｎ　　ＨＣ１処理した場合の８１（：、放出量の５０％
を与える希釈濃度から、力価（ｔｉｔｅｒ）を算出する
ことにより表示した。

（以下余白） 第１ＯＡ−Ｅ表に示したように、本発明の化合物の腹腔
内または経口投与により、間柱細胞免疫マウスの血清中
の同種細胞障害性特異ｔＡ体の産生は強く抑制されるこ
とが明らかとなった。

第１０Ｅ表に示したように、実施例５のナトリウム塩は
同種細胞免疫マウスの血清中における同種細胞障害性特
異抗体産生に対し、腹腔内投与により実施例５のナトリ
ウム塩以外の化合物とほぼ同等の抑制作用を有する。ま
た、静脈内投与により０．０１ｍｇ／ｋｇの用量まで有
意な抑制作用が誌められた。

実験例１１（マウス急性移植片対宿主反応（ＧＶＨＲ）
に対する抑制効果） ５〜７週齢の雌性ＢＤＦ、マウスの右足諺にＣ５７Ｂ　
Ｌ／６マウス牌細胞浮′ｉｉ液（２ＸＩＯ’個／マウス
）を惹起注射し、注射７日後に、右膝曙リンパ節を摘出
し、重量を測定し、対ｐ、＠　（生理食塩水注射）の左
膝喝リンパ節重量と比較することにより、急性移植片対
宿主反応（ＧＶＨＲ）の指標とした。惹起注射当日より
、実施例５の化合物を６日間０．３ｍｇ／ｋｇの腹腔内
投与、１ｍｇ／ｋｇの経口投与、および０．３．１ｍｇ
／ｋｇの筋肉内投与を行い、７日日に右膝唱リンパ節重
量を測定した。

その結果、第１ｔ表に示したように、実施例５の化合物
の腹腔内、経口あるいは筋肉内投与により、マウス急性
移植片対宿主反応（ＧＶＨＲ）は、強く抑制されること
が明らかとなった。

（以下余白） 実験例１２（種々の培養腫瘍細胞株に対する細胞毒性の
検討） 種々のヒト由来の培養腫瘍細胞株に対する細胞毒性の検
討を以下のように行なった。

ヒト由来の培養腫瘍細胞株に５６２、ＭＯＬＴ４、Ｕ９
３７およびＨＬ６０をそれぞれ２０％ＦＣ３を含むＲＰ
Ｍ１１６４０培地にて／ｌＸｌ０’個／ｄに調製した。

この細胞浮遊ｌ夜５０μｌを、あらかしめ被検液５０ｕ
ｌを入れておいた９Ｇ穴マイクロテストプレートの各ウ
ェルに加えた。、３７°Ｃ１５％炭酸ガス条件下で７２
時間培養した後、実験例１のＭＴＴを用いる色素定量法
と同様の方法により、５７０ｎｍにおける吸光度を７ｊ
１１定した。

以下の式により抑制率を算出し、細胞毒性の指標とした
。

その結果を示した第１２Ａ−Ｃ表より明らかなように、
本発明の化合物の種々のヒト由来の培養ａｍ細胞株に対
する細胞毒性は弱く、５０％の抑制を与える濃度（ＩＣ
ｓｏ） は１０μｇ／−以上であ った。

第１２Ａ表 実施例２の化合物 ０ １．０８６±０．０４５ ４．４ ０ １．０４５±０．０４１ ９．４ ０ ０．６７３±０．１１１ １．３ 第１２Ｂ表 実施例４の化合物 第１２Ｃ表 実施例５の化合物 ０ １．０８３±０．０３３ ４．７ ０ ０．６８４±０．０３８ 実施例１ （ｉ）アルボマイセス菌のジャー培養 ＣＣＹｉ＠ｉｆ！！（ｉｐ、あたり、グリコース２０ｇ
、コーンステイープリカー５ｇ、酵母エキス３ｇ、Ｍｇ
５Ｏａ　・７ＨｚＯＯ−５ｇ　、ｐＨ６）を５００　ｍ
Ｒ容頚畏振盪フラスコ２木に１００　ｍｌずつ分注し、
１２１°Ｃ５２０分間オートクレーブで滅Ｉ￥ｊ後、ポ
テトデキストロース寒天培地上で成育したマイリオコノ
カム・アルボマイセスＡＴＣＣＮｏ、　１６４２５の菌
糸体の約１ｃＪを各フラスコに接種し、４０“Ｃ１３目
間往復振盪培養（１３５ｒｐｍ、振復１＋　３　ｃｍ　
）を行なった。得られた培養液を種母として上記のＧＣ
Ｙ培地と消泡剤（ダウコーニング社製Ｆ−１８）Ｉｇを
仕込んだｌＯ１容ジャーファーメンタ−に接種し、４０
’Ｃ１７日間、通気攪拌培養（０，５ＶＶＭ、３００ｒ
ｐｍ）を行なった。

（１１）アルボマイセス菌の培養液からの化合物（８）
のＩ果敢 （ｉ）で得られた培養液４．５２を濾過により菌体と培
養濾液に分離した。培養ａ液（４１）はアンバーライト
ＸＡＤ−２（φ４０ｍｍＸ　ｈ　７５０ｍｍ）に通液し
、化合物（ａ）を吸着後、さらに水１ｅを通液し洗浄し
た。次に３０％０％メタノ−ルミｉｐ、５０％メタノー
ル？容／夜１２．８０％メタノール）容／ｆｉ、３ｆを
順次通液し、化合物（ａ）を含む８０％メタノール溶出
画分を採取した。

一方、菌体はその湿重量の約５倍量のメタノールにて３
回抽出後、その抽出液に水を加え、３０％メタノール７
容２＆とし、アンバーライトＸＡＤ２（φ４０ｍｍＸ　
ｈ　７５０ｍｍ）に通液して化合物（ａ）を吸着させ、
３０％メタノール溶７１！ｌ　１２．５０％メタノール
ン容液ＩＬ８０％メタノール７容液３之を順次通液し、
化合物（ａ）を含む８０％メタノール溶出画分を採取し
た。

上記のようにして得られた培養濾液および菌体からの８
０％メタノール溶出画分を合し、減圧濃縮後、凍結乾燥
して化合物（ａ）を含む粉末０．５　ｇを得た。

（ｉｉｉ）化合物（ａｌの精製 （ｉｉ　）で得られた粉末０．５ｇをメタノールに溶解
し、メタノールと同量の水を加えて５０％メタノール溶
液とする。この溶液をアンバーライ）ＸＡＤ−２（φ２
５ｍｎ＋Ｘ　ｈ　３００ｍｍ）に通７夜し、３０％、５
０％、６０％、７０％および７５％メタノール各５００
ｄを順次通板し、化合物（ａ）を含む７０〜７５％メタ
ノール溶液画分を採取した。この溶出画分に水を加え、
５０％メタノール溶液とし、再度アンバーライトＸＡＤ
−２のカラムクロマトグラフィーを行い精製し、化合物
（ｉｌ）　２８　ｍｇを行た。

ｍ、ｐ、　　１４５〜１４７°Ｃ ’Ｈ−ＮＭＲδ（ｐｐｍ　ＣＤ、Ｏｎ）：　　５．５５
　（ｍ）、　５．４０　（ｍ）３．８７　（ｌ１１）、
　２．３０　（ｔ）ＩＲｐ　（ＫＢｒ）　：　　３３０
０　１６２５　９７０　ｃｖｎ実施例２ 化合物（２−ｉ）１５０９．５ｍｇを乾燥ンクロロメタ
ン１２．５　ｄにン容かし、１．２−エチレンジチオー
ル３６７μｌ、３フツ化ホウ素・ニーテレ−）　１２．
５μｌを加えて、室湛で４７時間撹拌した。

反応液を５％重曹、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸
マグネシウム乾燥後、減圧濃縮して油状残渣を得た。こ
れをシリカゲル（５０ｇ）カラム（展開溶媒：酢酸エチ
ル：ｎ−ヘキサン−６：４）で分離し、薄層クロマトグ
ラフィー（展開溶媒：酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−７：
３）でＲｆ値０．４を示すフラクションを減圧濃縮して
無色透明油状の化合物（２−ｉｉ）１５３８．９■を得
た。

ＩＲシ二′：呉”（ｃｍ−’）：　３４００．２９５０
．２８５０．２７００１７８０、１７５０．１６８０．
１５００．１３７０．１２３０．１０５０’ＨＮＭＲ（
２００ＭＨｚ、　ｉｎ　ＣＤＣ１ｚ、　Ｒｅｆ、　ＴＭ
Ｓ）　　δ：ＩＨ，６，１（ｂｒ、ｓ、、　−Ｎ）ＩＡ
ｃ）、　ＩＨ，５，８（ｄ。

Ｊ＝４．６４　３−１ｔ）、　　ＩＨ，５，６（ｄＬ−
ｔ、　　１ｉｋｅ。

Ｊ＝１５．３８　６．４７　７−１１）、　　ＩＩＩ、
５．４　　（ｄｔ−ｔ、　　１ｉｋｅＪ＝１５．３８　
６．６０．　６−１１）　　　ＩＩＩ　　４．７　　（
ｄｄｄＪ＝８．１８，５．３７　４．６４．４−１１）
、２ｔｌ、４．５　　（ｓ。

２１）１ｚ）、　　４Ｈ，３，３（ｓ、、　　１’、２
′−１１□）、　　ｉＩｉ、　　２．４（ｄｄｄ、　　
Ｊ＝１４．８９，８．１８，６．６０．５−１１）、　
　ＩＨ。

２．３　　（ｄｄｄ、　　Ｊ＝　　１４．８９．６．６
０，５，３７．５−１１）３１１、　２．１　　（ｓ、
、　　Ａｃ）、　　３１１．　２．０５　　（ｓ、　　
八ｃ）、３１１（ｓ、　　２．０３）　　２１１．　２
．０　　（ｍ、、　　８１１ｚ）、　　４１１．　１．
９（ｍ、、１３．１５−Ｈ＝）、　　１６Ｈ，１，５５
（ｍ）、　　１．３０（ｂｒ、ｓ、）、１．２９　　（
ｂｒ、ｓ、）　　（９−１２，１６１９−ｔｌｚ）３Ｈ
，０，９（ｔ、、　　Ｊ工Ｇ、４７．　２０−ｆｉｚ）
Ｅｌ−ＭＳ　ｍＨｚ　　：　　５８５，５００．４４０
　３９８．　１８９．　１６０．４３（２）　　　　化
合物（２−ｉｉ　） ↓ 化合物（２−ｉｉ） １４２２．０■を乾燥エタノ− ル４０ｍ１に７容かし、 う不一ニソケル２２ｇを加え た後、９０分間加熱還流した。反応液を室温に冷却した
後、ラネー二ンケルを濾去した。このラネニッケルをエ
タノール２００　ｍｌで洗浄し、洗７夜を濾液と併せ、
減圧濃縮し、固体状残漬１０６２．７ｆｆ１ｇを得た。

これに無水酢酸５．０　ｍｌ、ピリジン５．０　ｍｌを
加え、−夜室温で撹拌した。反応液を水で希釈し、酢酸
エチルで抽出した。酢酸エチル層をｌ規定塩酸、５％重
曹、飽和塩化す）　ＩＪウムで順次洗浄し、硫酸マグネ
シウム上乾燥した。減圧４′４ｖ１シて得られた白色泡
状残漬９４６．１　ｍｇをシリカゲル（３３ｇ）カラム
で分離した。展開溶媒：酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−７
＝３で？容出し、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒：
酢酸エチル：ｎ−ヘキサン−７：３）でＲｆ値０．４を
示すフラクションを集め、減圧濃縮して目的とする化合
物（２−ｉＩｉ）８６２．２ｍｇを白色泡状物質として
得た。

［Ｒν：：旦”（ｃｎ＋−’）：　３４００．３０１０
．２９１０．２８５０１７７５、１７５０．１６８０．
１５００．１４６０．１３７０　１２７０１２５０、１
１９０．１０３０ ’ＨＮＭＲ（２００ＭＨｚ、　ｉｎ　ＣＤＣｌ３．　Ｒ
ｅｆ、　ＴＭＳ）　　δ：１Ｈ，６，０（ｂｒ、ｓ、、
　　−ＮＨＡｃ）、　　ＩＨ，５，８（ｄ、。

Ｊ・４．３９．　３−Ｈ）、　　ＩＩＩ、　　４．７　
　（ｄｔ、、　　Ｊ・９．０３．　４．４０゜４−Ｈ）
、　　２）１．　４．５３　　（ｓ、、　　２ｌ−Ｈｚ
）、　　３Ｌ　　２．１０　　（ｓ、。

Ａｃ）、　　３ｔｌ、　　２．０５　　（ｓ、　　Ａｃ
）＋　　３Ｈ１２，０３Ｃｓ−＋　　Ａｃ）４Ｈ，１，
６５（ｍ、、　５．６−Ｈり、　２６Ｈ，１，２６（ｂ
ｒ、ｓ、。

７−１９−Ｈ）、　　３１１．　０．８８　　（Ｌ、、
　　Ｊ・６．４７．　２０−）１）ＭＳ（Ｅｌ−ＭＳ）
、　　ｍＨｚ　　：　　４９７．　４５４．　３６５．
　３２２．　１２９．　４３（３）化合物（２−ｉｉｉ
　）→化合物（ｂ）の工程化合物（２−ｉｉｉ　）　８
１．９■をメタノール４．０　ｍｌに溶かし、ｌ規定水
酸化ナトリウム水溶液０．９９−を加えた後、窒素気温
下に一夜還疏した６反応液を１規定塩酸水で中和し、析
出した白色不溶物を吸引濾過し、メタノールおよび水で
洗浄する。

乾燥後、メタノールから再結晶すると、白色結晶として
化合物（ｂ）　１６．１■を得た。

ｍ、ｐ、　　１５９．０〜１６１．０℃ＩＲシ二２’、
　（ｃ「’）　：　３３８０．３２００．２９１０．１
６２０゜１４６０、１１００．１０６０．９６０）ＩＮ
ＭＲ（２００ＭＨｚ、　ｉｎ　ＣＤｚＯＤ）　　δ：　
１）１．４．０　（ｄ。

Ｊ＝１１．１２．２ｌ−）１）、　ＩＨ，３，９（ｄ、
、　Ｊ・１１．１２゜２ｌ−Ｈ）、　　１）１．　３．
８　　（ｂｒ、ｔ、、　　Ｊ＝７．０８．　４−Ｈ）、
　　１８゜３．７　　（ｄ、、　　Ｊ＝１．２２．　３
−Ｈ）、　　４）１．　１．６　　（ｍ）、　　２６Ｈ
。

１．３　　（ｂｒ、ｓ、、　　５−１９−Ｈ）、　　３
Ｈ，０，９（ｔ、、　　Ｊ＝６．４７゜２０−Ｈ） ＭＳ（ＦＡＢ）、　　ｍＨｚ　：　３９０．　３７２．
　２９１．　２７７、　１６５．　１０４化合物（２−
ｉ）は次のようにして製造される。

ｌ５Ｐ−１８，１０ｇに室温中ピリジン６５ｍ１を加え
、激しく撹拌しながら無水酢酸１０ｍ１を加えた。約１
時間撹拌を続け、ｌ５Ｐ−１が完全に溶けた後、撹拌を
止め、−夜装置した。反応液に氷水を加え、酢酸エチル
で抽出後、ＩＮ塩酸、５％炭酸水素ナトリウム、飽和塩
化ナトリウム水で順次洗浄し、有機層を乾燥した。溶媒
を留去して得た油状残渣１０．０８　ｇを酢酸エチル：
へキサン＝７：３を展開溶媒としてシリカゲルカラム（
３００ｇ）で分離した。９００〜１７００ｍ溶出分を併
せて減圧濃縮すると化合物（２−ｉ）９．２９ｇを無色
透明油状物質として得た（収率９１．４％）。

ＩＲｙ□、　（ＣＨＣｈ）（ｃｍ−’）　：　２９３０
．１７６０．１６９０゜１３８０、１２２０ １１ＮＭＲ（２００ＭＩＩｚ、ｉｎ　　ＣＤＣ１ｚ、Ｒ
ｅｆ：ＴＭＳ）、　　δ：　　６．０５　　（１８ｂｒ
、ｓ、、−Ｎｉｌ八ｃへ、　　５．７９　　（１８，ｄ
、　　Ｊ、４．４１１ｚ　　　３−１１）５．５７　　
（ＩＨ，ｄｔ、　　ｔｌｉｋｅ、　　Ｊ＝１５．４．　
６．３Ｈｚ、　　７−ｔｌ）５．３８　　（Ｉｌｌ、　
　ｄＬ、　　ｔ−１ｉｋｅ、　　Ｊ−１５，４，６，４
Ｈｚ、　　６−Ｈ）４．７２　　（ＩＩＩ、　　ｄｄｄ
、　　Ｊ＝７．６．　５．１．　４．６１１ｚ　　４−
Ｈ）４．５１　　（２Ｌ　　ｓ、　　２ｌ−Ｈ２）、　
　２．５〜２．２　　（２）１．　　ｍ、　　５−Ｌ）
２．３８　　（４Ｈ，ｔ＋　　−１’７．５１１ｚ＋　
　１３−．１５−Ｈ２）、　　２．１０３１１、　　ｓ
、　　−Ａｃ）、　　２．０５　　（３Ｈ，ｓ、　　−
Ａｃ）、　　２．０３　　（３１１゜ｓ、−Ａｃ、）、
２．１〜１．９　　（２Ｌ　　ｍ、　　８−１１２）、
　　１．５５（４１１，ｑｕｉ、、　　Ｊ＝６．８１１
ｚ、　　１２．１６−１１ｚ）、　　１．２７　　（１
２１１ｂｒ、ｓ、　　９　〜１１．１７　〜１９−１１
ｚ）、　　０．８８　　（３ｔｌ、　　ｔ。

Ｊ＝６．５１１ｚ、２Ｏ−１１１） ’ＣＮＭＲ（１００Ｍ）Ｉｚ、ｉｎ　ＣＤＣ１ｚ、　　
Ｒｅｆ：ＴＭＳ）、δ：　　２１１．３７（ｓ、ｌ４−
Ｃ）、１７２．３２　　（ｓ　　＞Ｃ＝Ｏ）、１７０．
０８　　（ｓ＞Ｃ＝Ｏ）、１６９．２７　　（ｓ、＞Ｃ
＝Ｏ）、１６８．７５　　（ｓ　　＞Ｃ＝Ｏ）１３５．
０４　　（ｄ、６−Ｃ）、　　１２３．１６　　（ｄ、
７、Ｃ）　　８１．６２（ａ、　　４−Ｃ）、　　７２
．０１　　（ｄ、　　３−Ｃ）、　　６２．７５　　（
ｔ、　　２ｌ−Ｃ）６２．７３　　（ｓ、　　２−Ｃ）
、　　４２．８５．　４２．７７　　（ｅａｃｈ　　ｔ
、　　１３゜ｌ５−Ｃ）、３２．４６，３２．２０，３
１．６３　　（ｅａｃｈ　　ｔ、ｓ−ｇ−１８−Ｃ）、
　　２９．１＋、　　２９．００　２８．９７　２８．
９１２３．９Ｌ　　２３．８５　　（ｅａｃｈ　　ｔ＋
　　９〜１２．　１６．　１７−Ｃ）２２．７６　　（
ｑ、　　−ＣＯＭｅ）、　　２２．５０　　＜ｔ、　　
ｌ９−Ｃ）、　　２０．５．５（ｑ、　　−ＣＯＭｅ）
、　　２０．３１　　（ｑ、　　−ＧＯ？Ｉｅ）、　　
１４．００　　（ｑ２０−Ｃ） Ｅｌ−ＭＳ　　ｍＨｚ：　　５０９．４９Ｌ　　３８２
，３４８，２７９．　１２９．４３ＨＲＥＩ−ＭＳ：　
ＣｚｙｌｌａＪＯｎとして、計算値：５０９．２９９０
、実測値＝５０９゜２９９８ 実施例３　化合物（Ｃ）の合成 化合物（２−ｉｉ　）　７２．６　ｍｇをメタノール２
．８　ｍｌに）容かし、ＩＮ水酸化ナトリウム０．７５
．刀２を１川えた後、窒素気流下−夜還流した。反応、
夜をＩＮ塩酸で中和し、減圧下溶媒を留去した。これ乙
こ水を加え、不溶物を吸引濾取した。これを水洗し、風
乾後、デシケータ−中減圧で乾燥した。こうして得られ
た白色物質（２３，３■）をメタノールに加温しながら
溶かし、不溶物を濾去後、濾液の溶媒を留去した。得ら
れた白色残渣に酢酸エチルを加え、不溶物を吸引濾取、
乾燥して白色物質として化合物（Ｃ１１２，８■を得た
。

ｍ、ｐ、　　１６７．０〜１７０．０°Ｃ’ＩＩＮＭＲ
（２００ＭＨｚ、ｉｎ　ＣＤ３０Ｄ）　　δ：　　ＩＨ
，５，５（ｄｔ−Ｌ。

１ｉｋｅ、、Ｌ＝１５゜１４．　　ＪＬ＝６．２７．　
７−Ｈ）、　　１１（、５，４（ｄｔ−ｔ、　　１ｉｋ
ｅ、、Ｌ＝１４．８９．ＪｔＪ、６０．６−１４）Ｉｌ
ｌ　　４．０　　（ｄ、　　Ｊ＝１０．９９．　２ｌ−
ＩＩ）、　　ＩＬ　　３．９　　（ｄ。

Ｊ＝ＩＯ，９９，２ｌ−Ｈ）、　　１８．　３．８４　
　（ｂｒ、ｔ、、　　Ｊ＝７．００４−Ｈ）、　　ＩＩ
Ｉ、　　３．７９　　（ｄ、、　　Ｊ・０．９７．　３
−Ｈ）、　　４１（、３，３（ｓ、　　１’、２’−１
０，２Ｈ，２，３（ｂｒ、ｔ、、　Ｊ＝６．４７．５−
Ｈ）２１１　　　２．０　　　（ｄｔ、、　　　Ｊａ・
６．３５．　　　Ｊｔ・６．３５．　　８−）１ン４Ｎ
　　１．９　　（ｍ、、　　１３．　１５−Ｈ）、　　
４Ｈ，１，５（＋ａ、、　　１２１６−Ｉｔ）、　　１
２ｔｌ、　　１．３　　（ｍ、、　　９−１１．　１７
−１９−Ｈ）、　　３Ｈ０，９（ｔ−＋　　Ｊ、６．６
０．　２Ｏ−Ｈ）実施例４　化合物（ｄ）の合成 炭酸ナトリウム２６．９　ｆｆ１ｇを水１．５　ｍｌに
ン容かし、塩酸ヒドロキシルアミン３５．０■、次いで
エタノル３．５　ｔｒｔｌを加えた。この混合液を７０
°Ｃの水浴中で加温し、ｌ５Ｐ−１２００，９ｔｌ１ｇ
を加え、溶解するまで振り混ぜた。ｌ５Ｉ−１を完全に
溶解させたのち、さらにこれを６時間、同温度で加温し
た０反応液のｐＨが７であることを確認後、そのまま減
圧ａ縮乾固した。この残渣に水を加え、不７容物を吸引
濾取する。得られた白色物質１８３．６　ｍｇをメタノ
ール９　ｍｌに加点しなからｌ容かし、室温に戻して一
夜静置する。析出した白色不溶物（未反応のｌ５Ｐ−１
）を濾去した後、ｉｆ！液から得られた残渣を再結晶し
て白色物質化合物（ｄ）（８７，８ｍｇ）を得た。

閑、ｐ、　　１７９．５〜ｌ　８０．５°ＣＣ（ｒ　）
”Ｅ　＝−５，７８°　（ｃｍ０．５０９．　　）タノ
ール）ＩＲｖＡ２’、　（ｃｍ−’）　：　３２００　
２９１０．１６２０．１４６０１３２０、１１００．１
０５０．９６５ＭＳ（Ｅｌ−ＭＳ）　ｍＨｚ　：　３９
Ｂ、　３２８．２５６．１２８．１０４．１８実施例５ １１ 化合物（２−ｉ）５８９．４■をジオキサ７２６−に溶
かし、水１０ｍ１を加えた。室温で撹拌しながらドライ
アイス小片数個加え、固体が消失した後、水素化ホウ素
ナトリウム１１６ｍｇを加えた。

同し操作をもう一度行い、２０分後、ＩＮ塩酸を加えて
酸性（ｐＨ２以下）にした。１０分撹！牢後、ＩＮ水酸
化ナトリウムで弱酸から中性にした後、減圧ｅＡ縮し、
ジオキサンを除去した。残漬に水を加え、酢酸エチルで
抽出し、酢酸エチル層を５％重昔、飽和塩化ナトリウム
で順次洗浄後、硫酸マグネシウム上乾燥した。減圧４縮
して得た残１５８９．６■をシリカゲル（３０ｇ）カラ
ムで分離した。クロロホルム＝メクノール＝９８：２で
？容出し、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒　クロロ
ホルム二メタノール＝９：ｌ）でＲｒＯ，４を示すフラ
クションを集め、減圧ａ１ｉｉｉシて目的とする化合物
（５ｉ）３８６．３■を無色透明油状物質として得、一
方、目的物質を含む前後のフラクションについては各々
クロロホルム：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：ｎ
−へキサン＝８＝２を展開溶媒としてプレバラティブ薄
層クロマトグラフィーに付し、Ｒｆ　Ｏ，４のバンドよ
り目的物？？３０．２■を無色透明油状物質として得た
。

ＩＲｖｇ：ｇ”　　（ｃｍ−’）　　：　　２９１０．
　２８５０．　１７７５．　１７５０１６８５．１５０
０，１３７０．　１２２０．　１０３０　７４５ＨＮＭ
Ｒ（２００ＭＩＩｚ、　　ｉｎ　　ＣＤＣｌ３．Ｒｅｆ
　　ＴＭＳ）　　δｕｎ。

６．１　　（ｂｒ、ｓ、、　　−ＮＩＩＡｃ）、　　Ｉ
Ｈ，５，８（ｄ、、　　Ｊ＝４．６４゜３−Ｈ）、　　
ｌｔｌ、　　５．６　　（ｄｔ−ｔ、　　１ｉｋｅ、　
　Ｊ＝１５．３８．　６．４７’。

７−Ｈ）、　　ｉｌｌ、　　５．４　　（ｄｔ−ｔ、　
　１ｉｋｅ　　Ｊ＝１５．３８　６．５９６−Ｈ）、　
　ＩＩＩ、　　４．７　　（ｄｄｄ、、　　Ｊ・７．５
６．　５．３７．　４．６４．　４１１）２１＋、　　
４．５　　（Ｓ、、　　２ｌ−１１２）、　　Ｉｌｌ、
　　３．６　　（ｍ、　　１４−Ｉｔ）Ｉｌｌ、　　２
．５　　（ｄｄｄ、、　　Ｊ−１４，７７、７，５６，
６，５９，５−１１）Ｉｌｌ、　　２．４　　（ｄｄｄ
、、　　Ｊ・＋４．７７．６．５９，５．３７．５−１
＋）３ｆｔ、　　２．１０　　（ｓ、、　　Ａｃ）、　
　３ｔｌ、　　２．０５　　（ｓ、、　　Ａｃ）３Ｈ，
２，０３（ｓ、、　　Ａｃ）、　　２Ｈ，１，９９Ｃｍ
、　　８−Ｈ）２０Ｌ　　１．３　　（ｍ、９−１３．
　１５−１９−Ｈ）、３ＨＯ，９（ｔ。

Ｊ・６．４２．２Ｏ−１（＊） ＥトＭＳ　ｍ／ｚ　：　５１１．４９３．４２６．３６
６、３３２．２６３゜１２９．４３ （以下余白） （２） 化合物（５−ｉ） 化合物（５−ｉ）３８６．６■を乾燥１．２−ジクロロ
エタン２．１ｍｌに溶かし、１．１’−チオカルポニル
ジイミダソ゛−／し２７３．７■をカロえた。このン容
液を７０゛Ｃの油浴中２時間加塩し、次いで氷水浴中１
０分間冷却した。黄色透明の反応液に１．　２ジクロロ
エタン２０Ｗ１を加え、水１０ｍｆｆ１．ＩＮ、塩＃１
０ｄ（２回）、５％重曹１０ａｅ、水ＬＯｍｌで順次洗
浄し、１．２−ジクロロエタン層を硫酸マグネシウム上
乾燥した。減圧濃縮して得た残漬４５１．９■をシリカ
ゲル（１８ｇ）カラムで分離した。クロロホルム：メタ
ノール＝９８：２で溶出し、薄層クロマトグラフィー（
展開溶媒　クロロホルム：メタノール−９：１）でＲｆ
　０．６を示すフラクションを集め、減圧ａ縮して目的
とする化合物（５−ｉｉ）２６５．７ｍｇを無色透明油
状物質として得、一方、目的物質を含む前後のフラクシ
ョンについては各々クロロホルム：メタノール＝９５＝
５を展開溶媒としてプレパラティブ薄層クロマトグラフ
ィーに付し、Ｒｆ　０．４のハンドより目的物質（５−
ｉｉ）　１２１．０■を無色透明油状物質として得た。

ＵＶλＬ：’Ａ”　：　２７４ｎｍ　（ε＝１２８００
）ＴＲ＋ｚ：：旦”（ｃｍ−’）　：　２９１０．１７
８０．１？６０．１６８０゜１４６０、１３８０．１２
９０．１２３０．１１００．１０４０．９７０’ＨＮＭ
Ｒ（２００ＭＨｚ、　ｉｎ　ＣＤＣｌ３．　Ｒｅｆ、　
ＴＭＳ）δ：ｌＨ８，４Ｃｂｒ−ｓ、＋　　イミダゾー
ル環）、　１）１．７．６（ｂｒ、　ｓ、　＋　イミダ
ゾール環）、　ＩＨ，７，０（ｄ、。

Ｊ＝０．７４．イミダゾール環）＋　ＬＨ，６，３（ｂ
ｒ、ｓ。

ＮＨＡｃ）、　１８．５．８　（ｄ、、　Ｊ＝４．６４
．３−Ｈ）、　ｌ１１５．６２　（ｑｕｉ、、　Ｊ−５
，９４，１４−ｔｌ）、　ＩＨ，５，５６（ｂｒ、ｄｔ
、、　Ｊ−１５，３８，６，３５，７−Ｈ）、　ＩＨ，
５，４（ｄｔ、　１ｉｋｅ、　Ｊ＝１５．３８．６．６
６、６−Ｈ）、　Ｉｌｌ、　４．７（ｄｔ、、　Ｊ＝８
．０６．４．９５．４−Ｈ）、　２Ｂ、　４．５　（ｓ
、。

２ｌ−１１ｚ）、　　２Ｈ，２，４（ｍ、、　　５１１
２）、３＋１．　２．１０　　（５，。

Ａｃ）、　　３１１　２．０５　　（ｓ、、　　Ａｃ）
、　　３１Ｌ　　２．０３　　（ｓＡｃ）、　　２８．
　２．００　　（ｍ、　　８−Ｈｚ）、　　４）１．　
１．５５　　（ｍ、。

１３．１５−Ｈｚ）、１６Ｈ，１，３１（ｂｒ、ｓ、、
９−１２．！６１９−ｔｌｚ）、　　３Ｈ，０，８８（
Ｌ、、　　Ｊ・６．４８．２Ｏ−１ｈ）Ｅｌ−門Ｓ　　
ｍ／ｚ　　：　　４９３１，１３３，３７４，３３２．
２６３．　１４１１２９．４３ （３）　　　　　　　　　化合物（５−ｉｉ　）化合物
（５−ｉｉ　）　６０．０　ｍｇを乾光ヘンゼン４５ｄ
に溶かし、水素化トリブチル錫４１μ２、更に２．２゛
−アゾ（イソブチロニトリル）　５．０　＋ｎｇを加え
、−反還流した。減圧′ａ縮して得られた黄色油状残渣
をｎ−ヘキサン−アセトニトリル間で分配し、アセトニ
トリル層を減圧４縮した。この残ａ５８．６■をプレバ
ラティプ薄層クロマトグラフィー（展開溶媒　ジエチル
エーテル二〇−ヘキＪ＋７＝９：１、二重展開）で分離
し、Ｒｒ　Ｏ，４のハントより目的とする化合物（５−
ｉｉｉ）　２１．２ｎ＋ｇを無色透明油状物質として得
た。

［α）ｏ＝＋６３．８°　（Ｃ＝０．９９４．ＣＨ（１
３）ＩＲｖ：；ｊ、”　（ｃｍ−’）　：　２９１０．
２８４０．１７８０．１７５５１６８５、１５００．１
３７０．１２２０．１０３６’ＩＩＮＭＲ（２００ＭＩ
ＩＺ、　　ｉｎ　　ＣＤＣｌ□　Ｒｅｆ、　　丁ＭＳ）
　δ：１１１６．０　（ｂｒ、ｓ、＋　−ＮＨＡｃ）、
　ｉｌｌ、　５．８　（ｄ、、　Ｊ＝４．３９３−Ｈ）
、　ＩＨ，５，６（ｄｔ−ｔ、　１ｉｋｅ、　Ｊ＝１５
．２６　６．５９７−１ｔ）、　ＩＨ，５，４（ｄｔ−
ｔ、　１ｉｋｅ、　Ｊ＝１５．２６　７．０８６−Ｈ）
、　ＩＩＬ　４．７　（ｄｄｄ、、　Ｊ・７．０８．５
．６２．４．４１０４−Ｈ）、　２Ｎ、　４．５　（ｂ
ｒ、ｓ、、　２ＬＬ）、　２１１．２．４（ｍ、、　５
−１１ｚ）、　３Ｈ，２，１０（ｓ、、　Ａｃ）、　３
１Ｌ　２．０５（ｓ、、　Ａｃ）、　３８．２．０３　
（ｓ、、　Ａｃ）、　２ｔｌ、　２．０１（ｍ、　８−
Ｈり、　２２８．　１．３　（ｂｒ、ｓ、、　９−１９
−ｔｌｚ）、　３ＨＯ，９（ｔ、、　Ｊ・６．３５．２
Ｏ−）１．）Ｅｌ−ＭＳ　ｍ／ｚ　：　４９５．４３６
　３７６　３３４　２６５　１５１１２９、４３ （４）化合物（５−ｉｉｉ　）→化合物（ｅ）化合’ｊ
ｊｈ　（５−ｉｉｉ　）・４０．４　ｍｇをメタノール
２　ｍｌに溶かし、ＩＮ水酸化ナトリウム０．５０　ｄ
を加えて、窒素気流下−反還流した。ＩＮ塩酸で中和し
、析出した白色物質を吸引濾取して水洗した。一方、母
１夜は減圧′ａ縮、乾固し、水を加えて不溶物を吸引濾
取後、水洗し、メタノールから再結晶した。

両不溶物を合わせ、白色粉末物質として化合物（ｅ）１
９．４■を得た。

ｍ、ｐ、　　１８６°Ｃ 〔α］ｏ＋３．２°　［Ｃ＝ｌＯＯ，ＭｅＯＩＩ−０，
２Ｎ　：１ａＯＨ（１：１））ＩＲｖ令Ｓ　（ｃｍ−’
）　：　３４００．３２００．３１００．２９００１６
６０、１６０５．　＋５６５．１５２５．１，１６５．
１４０５．１３６０゜１２６０　１２００　１１００　
１０７０　１０３０　９６０　７２０’ＩＩＮＭＲ（２
００ＭＨｚ　　ｉｎ　ＣＩｌ、００．　Ｒｅｆ、　ＴＭ
Ｓ）δ：１１１５．５　（ｄｔ−ｔ、　１ｉｋｅ、　Ｊ
＝１５．３８．５．８６．７−１１）、　ＩＨ。

５．４　（ｄｔ−ｔ、　１ｉｋｅ、　Ｊ＝１５．３８．
６．１０．６−１１）、　ＩＨ４，０（ｄ、、　Ｊ・１
０．９８．２ｌ−Ｈ）、　ＩＨ，３，９（ｄ。

Ｊ＝１０．９９．２１）１）、　ＬＨ，３，８３（ｂｒ
、ｔ、、　Ｊ＝７．３３４−Ｈ）、　　１８．３．７８
　（ｂｒ、ｓ、、　３−１１）、　２Ｈ，２，３（ｂｒ
、ｔ、、　Ｊ＝６．８４．５−Ｈｚ）、　２Ｈ，２，０
（ｍ、　８−）１ｚ）。

２２Ｈ１，３（ｂｒ、ｓ、、　９−１９−Ｈ□）、　３
１Ｌ　Ｏ，９（ｔ。

Ｊ・６．４７．２０−）１） ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／ｚ　　：　　３８８，１０４　５７
，４５．２９化合物（ｅ）のナトリウム塩の物性値は次
の通りである。

ｍ、ｐ、　　１８２〜１８５°Ｃ ＩＲｖ二：Ｓ　（ｃｍ−’）　　：　３４００　２９０
０．２８５０．１５８０１４７０、１４０５．１０４０
．９７０．７２０ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、　　ｉｎ　
ＣＤｘＯＤ、　Ｒｅｆ、　ＴＭＳ）δ；２１１５．５　
（ｍ、　６−Ｈ，７−Ｈ）、　ＩＨ，３，８（ｂｒ、　
　ｔ、　Ｊ＝６．４４−Ｈ）、　ＩＨ，３，７５（ｂｒ
、　ｓ、　３−Ｈ）、　ＩＨ，３，７（ｄ。

Ｊ＝１０．６．２ｌ−Ｈ）、　ＩＨ，３，６（ｄ、　Ｊ
＝１０．６．２ｌ−Ｈ）２８、２．３　（ｂｒ、、　５
−Ｈｚ）、　２Ｈ，２，０（ｍ、　８−ｔｌｚ）。

２２８、１．３　（ｂｒ、　ｓ、、　９〜１９−ｆｉｚ
）、　３ｔｌ、　０．９　（ｔＪ＝６．４７．２Ｏ−Ｌ
） ＨＰＬＣ保持時間：１９．５分 測定条件； カラム：　Ｙ？ＩＣパックＡＱ−３１２（ＯＤＳ）　６
ｆｆ＋ｆｆｉ径Ｘｌ５０ｍｍ溶出液ニアセトニトリル−
０，０５門過塩素酸緩衝液（ｐＨ２，５）　（６：４） 流速　：１ｍ１／分；カラム温度＝４０°Ｃ実施例６　
化合物（ｆｌの合戒 （１） 化合物（２ ｉ） 化合物（２−ｉ）３５１．３■をジクロロメタン２５ｍ
２に溶かし、−６０°Ｃで６分間、オゾンを通した。過
剰のオゾンを酸素吹き込みで追い出し、反応液を室温水
浴中で減圧濃縮した。得られた無色透明油状残渣にジオ
キサン２１．２　ｍｌを加えて溶かし、更に水８　ｍｌ
を加えた。室温で撹拌しながらドライアイス小片を数個
加えて、固体が消失したところで、水素化ホウ素ナトリ
ウム８０．０■を加えた。３０分後、反応液をＩＮ塩酸
で酸性（ｐＨ２以下）とし、更に１０分後、ＩＮ水酸化
ナトリウムで弱酸性から中性にして５０’Ｃ水浴中、減
圧下′ａ縮乾固した。アスピレータ−で吸引して水分を
完全に無くしてから、一部白色固体残渣にクロロホルム
を約しＯｍｆｌ加え、加塩した後、不溶物を吸引濾去し
た。濾液を減圧濃縮して得られた残渣約３５０ｍｇをプ
レパラティプ薄層クロマトグラフィーに付し、展開溶媒
　クロロホルム：メタノール＝９：１でＲｆ　０．３の
バンドより目的とする化合物（６）１０６．０■を白色
泡状物質として得た。

ＩＲｙ”ｊ旦”　（Ｃｍ−’）　：　３４００．３００
０．２９００．１７８０１７５５、１６８０．１５００
．１３７０．１２２５．１０５０’ＨＮＭＲ（２００Ｍ
Ｈｚ、　ｉｎ　ＣＤＣｌ３．　Ｒｅｆ、　ＴＭＳ）δ：
１■６．３　（ｂｒ、ｓ、、　−ＮＨＡｃ）、　ＩＬ　
５．８　（ｄ、、　Ｊ＝４．６４゜３−１１）、　１Ｂ
、　５．１　（ｄｄｄ、、　Ｊ・９．０３．４．６４．
４．３９４−８）　　２１１．４．５　（ｂｒ、ｓ、、
　７−Ｈｚ）、　３１１．２．１１　（ｓ。

Ａｃ）、　３Ｈ，２，０７（ｓ、、　Ａｃ）、　３１１
．２．０　（ｓ、、　Ａｃ）４Ｈ，２，１−１，８（ｍ
、　５．６−Ｈ２）Ｅｌ−ＭＳ　ｍＨｚ　：　３１７．
２７４．１８５．１６７、４３（２）化合物（６）→化
合物（「） 化合物（６）７０．０ｍｇをメタノール１．３３ｄに溶
かし、これに水３．９９ｄ、更にＩＮ水酸化ナトリウム
１．３３−を加えた後、窒素気流下１０５°Ｃの油浴中
で一夜還流した。冷却後、Ｉ　ＲＣ−５０（Ｈ’型）６
＃＋１！を充填したカラムにチャージし、水−メタノー
ル（８：２）で溶出した。溶出液（３０ｍ０を５０°Ｃ
水浴中減圧濃縮し、得られた黄褐色残渣を水酸化ナトリ
ウム上デシケーク−中で吸引して酢酸を除去した。水を
２　ｍ１弱加え、僅かに生した不溶物を濾去し、母液を
威圧ａ縮して水を加え、全量を２　ｍ１弱にした。室温
でメタノールを、液が僅かに白眉するまで加えた後３時
間放置し、無色透明鱗片状の化合物（ｆ）　ｌ　４．０
■を得た。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは炭素数１〜３０個のアルキル、炭素数１〜
   ６個のヒドロキシアルキル、 式−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ＿２）＿ｎＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（Ｏ
   Ｈ）−（ＣＨ＿２）＿ｍＣＨ＿３（ここで、ｎ、ｍはそ
   れぞれ１〜１０の整数を示す。）、−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ
   ＿２）＿ｐ−Ｃ（＝Ｘ）−（ＣＨ＿２）＿ｑＣＨ＿３（
   ここで、＞Ｃ＝Ｘ基は＞Ｃ＜　＞Ａ（Ａは炭素数１〜４
   個のアルキレンを示す。）、＞Ｃ＝Ｎ−ＯＢ（Ｂは水素
   または炭素数１〜４個のアルキルを示す。）もしくは＞
   ＣＨＮＨ＿２を示す。（ｐ、ｑはそれぞれ１〜１０の整
   数を示す。））または−ＣＨ＝ＣＨ−Ｙ（Ｙは炭素数１
   〜３０個のアルキルを示す。）により表わされる基を示
   す。〕により表わされる２−アミノペンタン酸化合物、
   その塩、そのγ−ラクトン化合物またはその保護基によ
   り保護された化合物。
2. （２）次式（ａ）〜（ｆ）から選ばれる請求項（１）記
   載の化合物、その光学異性体またはその薬理学的に許容
   されうる塩。 （ａ）▲数式、化学式、表等があります▼ （ｂ）▲数式、化学式、表等があります▼ （ｃ）▲数式、化学式、表等があります▼ （ｄ）▲数式、化学式、表等があります▼ （ｅ）▲数式、化学式、表等があります▼ （ｆ）▲数式、化学式、表等があります▼
3. （３）請求項（１）または（２）記載の化合物を含有し
   てなる免疫抑制剤。