JPH031309B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、以下の発見、即ち、化合物 〔ＸはOH、NH₂、またはSHを；R¹はＨまたは
炭素数１〜８のアルキルを；R²はＨまたはメチ
チルを；Ｙは次式で表わされるアミン （ただしR³およびR⁴は低級アルキル、たとえば
炭素数１〜４のもの；ｎは２〜４の整数）とｐ−
アセトアミド安息香酸との塩を；Ｚは１〜10の数
値を表わす〕 が免疫調節剤、抗ウイルス剤として有用であり、
特別の場合には抗腫瘍活性を有するという発見に
基づく。上記塩を含む本願化合物は新規物質であ
る。 R²がＨの場合、Ｙの存在によつて免疫調節作
用および抗ウイルス作用が昂進される。Ｘが
NH₂の場合、免疫抑制作用を示すが、免疫促進
作用は示さない。 免疫調節作用は、R¹の炭素数が多くなるにつ
れて顕著になり、少くともメチルからヘキシルま
ではその傾向がある。R¹は、好ましくは、ｎ−
アルキルであり、たとえばメチル、エチル、ｎ−
プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−アミル、ｎ−ヘキシ
ル、ｎ−ヘプチルまたはｎ−オクチルである。
R²は、好ましくはメチルである。Ｒとしてはメ
チル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ
プロピルなどがあげられる。ＸがNH₂の場合、
本化合物は、遊離の塩基の形あるいは非毒性の
酸、即ち薬剤学的に許容される酸、たとえば塩
酸、臭化水素酸塩、硫酸、リン酸、クエン酸、乳
酸、酒石酸、サリチル酸、アセチルサリチル酸、
酢酸、プロピオン酸、パラトルエンスルホン酸、
メタンスルホン酸、マレイン酸、コハク酸、マロ
ン酸、アジピン酸等との塩として存在する。 パラアセトアミド安息香酸と塩を形成するアミ
ンの好ましい例は、式 （式中、R⁵およびR⁶は低級アルキル、たとえば、
メチル、エチル、プロピル、イソプロピルまたは
ブチルを表わし、ｎは２〜４の整数を表わす）の
化合物である。かかるアミンの代表例としてジメ
チルアミノエタノール、ジメチルアミノイソプロ
パノール、ジエチルアミノエタノール、ジエチル
アミノイソブタノール、ジエチルアミノイソプロ
パノール、メチルエチルアミノエタノール、ジイ
ソブチルアミノ−１−ブタノール、ジメチルアミ
ノプロパノール、ジメチルアミノ−１−ブタノー
ル、ジイソブチルアミノエタノール、ジメチルア
ミノブタノール、ジブチルアミノ−１−ブタノー
ル、ジブチルアミノエタノール、ジプロピルアミ
ノエタノールおよびジイソプロピルアミノエタノ
ールがあげられる。好ましいアミンはジメチルア
ミノイソプロパノールである。Ｙが存在する場
合、即ちｚが１〜10の場合、Ｚは好ましくは３で
ある。しかしながら、もちろん、Ｚは１、２、
４、５、６、７、８、９または10の場合もありう
る。 以下、本願における化合物を述べるにあたつ
て、１，１−ジメチルアミノ−２−プロパノール
−ｐ−アセトアミド安息香酸塩をDIP.PAcBAと
略記する。この略記号の後に括弧でくくつた数
字、たとえば（10）など、が示されていない場合
には、Ｙが３のものを示す。略記号DIP・
PAcBAの後に括弧でくくつた数字が続く場合、
その数字は１モルの９−（ヒドロキシアルキル）
プリンに対するＹのモル数を表示する。 下記の表１において、化合物は、化合物番号
15443のものを除いてすべて純粋なものである。
ただし化合物15443の場合には、本発明化合物以
外に塩も含有している。 免疫調節剤とは、免疫応答を調節するような化
合物をいう。従つて、これには、免疫促進と免疫
抑制との両者を包含するものである。免疫促進
は、もちろん、免疫性を増強するのに有用であ
る。免疫抑制は多くの分野において有用性を有す
る。たとえば、臓器移植（腎臓、心臓移植）にお
ける拒絶反応の防止に有用である。 化合物の免疫促進性を示す表において、(十)ある
いは（−）はそれぞれ免疫促進性おび免疫抑制性
を示す。数字「０」はその化合物が免疫促進作用
も免疫抑制作用も有しないことをしめす。 表のあるものには、Ｘが特許請求の範囲に入ら
ない化合物も含まれているが、かかる特許請求の
範囲に含まれない化合物は、原則的には低活性で
あり、Ｘが化合物の特性に重大な影響を与えるこ
とを示すために表中に入れたものである。 幼若化促進物質は細胞の増殖を誘起する物質で
あり、この現象は通常免疫との関連を有する。 第１表は（化合物15427及び15423を除いて）本
発明において有用な化合物を示す。 第１表における合成法Ａ〜Ｌの詳細については
後述する。 本発明の組成物は、人間、ブタ、犬、ネコ、
牛、馬、羊、やぎ、マウス、うさぎ、ラツト、モ
ルモツト等を含む哺乳類の治療に有用である。 別段の言及をしない限り、「部」「パーセント」
は重量部、重量パーセントを示す。 また、別段の言及をしない限り、温度は摂氏を
しめす。 組成物は、そこに述べられた物質を包含する態
様、基本的にそれら物質より成る態様、および、
それら物質のみより成る態様がありうる。また方
法については、そこで述べられた物質についての
工程を包含する態様、基本的にそれら工程より成
る態様、およびそれら工程のみより成る態様があ
りうる。 組成物は哺乳類に対して常套手段、たとえば、
経口的、経鼻的、経直腸、経膣、経腸、非経口的
に投与される。剤型としては、注射剤（たとえ
ば、水溶液）、錠剤、丸剤、カプセルなどが使用
される。

【表】

【表】

【表】

【表】 本発明に含まれる他の化合物を下記表1aに示
す。基本構造式は表１のものと同じである。表１
および1aにおいて、アルキル基R¹はすべて直鎖
アルキルである。

【表】

【表】

【表】

【表】 好ましい態様についての説明 方法 Ａ ９−（２−ヒドロキシ−プロピル）ヒポキサン
チン（NPT15446） ９−（２−ヒドロキシ−プロピル）アデニン
（Ｉ、4.0g、20.7mmol）を50％酢酸（20ml）中に
懸濁し、亜硝酸ナトリウム（4g、58mmol）をゆ
つくり加えた。混合物を25゜、３時間撹拌し、得
られた溶液を蒸発乾固し、イソプロパノールを加
えた。この操作をもう一度くり返した。固体の残
渣をイソプロパノール中で煮沸し、過した。
液を蒸発させ、アセトンを加えて結晶化した。再
結晶はイソプロパノール／メタノール（98：２）
で行つた。無色結晶の生成物を得た。収量3.3g
（82％）、融点244−250゜、UV（水；PH5.5）λ_nax
250nm。 方法 Ｂ ９−（２−ヒドロキシ−プロピル）−６−クロロプ
リン シエーフアー、ボーゲル、ビンス（Schaeffer、
H.J.Vogel、D.及びVince、Ｒ）のジヤーナル・
オブ・メデイシナル・ケミストリー８巻、502頁
（1965年）；およびシエーフアー・ビンス
（Schaeffer、H.J及びVince、R.）のジヤーナ
ル・オブ・メデイシナル・ケミストリー、10巻、
689頁（1967年）に記載の方法を採用した。 イソプロパノールアミンの11％エタノール溶液
（200ml）中５−アミノ−４，６−ジクロロピリミ
ジン（Ｉ，20g、0.12mol）を８時間加熱還流し
た。反応液をシロツプ状になるまで蒸発し、エタ
ノールを加え再度蒸発した。この操作をさらに一
度くり返した。得られたシロツプを水300ml中に
そそぎ結晶を得た。これを取し、水洗後乾燥し
て、19gの粗４−（２−ヒドロキシ−プロピルア
ミノ）−５−アミノ−６−クロロピリミジン（）
を得た。 この粗化合物（）をオルトギ酸トリエチル
（120ml）中に懸濁し、これにエタンスルホン酸
（５滴）を加えた。15分後、全固形物を溶解し、
その溶液を25゜で一夜放置した。真空蒸発によつ
て濃シロツプを得、これを高真空蒸発して過剰の
イソプロパノールアミンを除去した。キシレンで
結晶化することによつて5gの粗生成物を得た。 方法 Ｂ ９−（２−ヒドロキシ−プロピル）アデニン
（NPT15431） ９−（２−ヒドロキシ−プロピル）−６−クロロ
プリン（Ｉ，9g、42.4mol）を飽和メタノール性
アンモニアおよび塩化アンモニウム（50mg）中に
溶解した。混合物をガスボンベ中、130゜で６時間
加熱した。得られた溶液を蒸発乾固し、エタノー
ル／アセトンから再結晶した。無色結晶6.68g（収
率81％）を得た。融点193〜194゜UV（水；PH5.5）
λ_nax260nmクロロホルム：メタノール（５：１）
を溶媒とする薄層クロマトグラフイーRf0.44 元素分析値 計算値C₈H₁₁N₅O：Ｃ，49.73；
Ｈ，5.74；Ｎ，36.25として；実測値：Ｃ，
49.56；Ｈ，5.62；Ｎ，36.22。 方法 Ｃ ９−（２−ヒドロキシエチル）−６−メルカプト
プリン（NPT15435） シエーフアー・バールガバ（Schaefferおよび
Bhargava）のバイオケミストリー
（Biochemistry）、４巻、71頁（1965年）に記載
の方法を採用した。 ９−（２−ヒドロキシエチル）−６−クロロプリ
ン（Ｉ、2g、0.01mol）およびチオ尿素（0.76g：
0.01mol）をエタノール（15ml）中に溶解し、30
分間加熱還流した。得られた沈殿を取し、水に
懸濁してスラリー状とした。酢酸ナトリウムで中
和して無色結晶を得た。収量1.5g（76％）。 融点276−280゜；UV（水、PH5.5）λ_nax320、
230nm 方法 Ｄ ９−（２−ヒドロキシエチル）ヒポキサンチン
（NPT15425） シエーフア、バールガバ（Schaeffer、H.J.お
よびBhargava、P.S.）のバイオケミストリ、４
巻、71頁（1965年）に記載の方法を採用した。 ６−クロロ−９−（２−ヒドロキシエチル）プ
リン、（4g）を、ゆつくり温１規定カセイソ
ーダー（30ml）に加え２時間加熱還流した。反応
混合物は氷冷し、氷酢酸で中和した。過後、未
反応のを除去した。生成物をメタノールから再
結晶しアセトンで洗浄した。無色結晶。収量1g
（28％）；融点274゜；UV（水、PH5.5）、λ_nax250nm。 方法 Ｅ ９−（１−ヒドロキシメチルエチル）−６−ヨー
ドプリン（NPT15427） ９−（１−ヒドロキシメチルエチル）−６−クロ
ロプリン（Ｉ、1.5g、7mmol）をヨウ化水素酸
（15ml）に−10゜で撹拌しながら45分間で加えた。
沈澱を去し、5゜で無水酢酸ナトリウムで中和
し、少量の冷水で洗浄（３回）した。エタノー
ル／H₂Oから再結晶して、無色結晶を得た。収
量0.9g（42％）融点193−194゜UVλ_nax276nm（水、
PH5.5）。 元素分析値 計算値C₈H₉N₄OIとして（分子量
304.1）Ｃ，31.60；Ｈ，2.98；Ｎ，18.43；Ｉ，
41.73.実測値：Ｃ，31.53；Ｈ，2.96；Ｎ，18.18；
Ｉ，41.70. 方法 Ｆ ９−（１−ヒドロキシメチルエチル）−６−クロロ
プリン（NPT15423） シエーフアー、シユベンダー（Schaeffer、H.
J.およびSchwender、C.F.）のジヤーナル・オ
ブ・メデイシナル・ケミストリー、17巻、６頁
（1974年）に記載の方法を採用した。 ５−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン
（Ｉ、6.56g、40mmol）及び２−アミノ−１−プ
ロパノール（、3.3g、44mmol）をｎ−ペンタ
ノール（288ml）および３級−ブチルアミン（96
ml）中で、窒素気流中45時間加熱還流した。溶液
を蒸発させてシロツプ状とし、エタノールを４回
加えて蒸発させた。得られたシロツプをオルトギ
酸トリエチル（150ml）およびエタンスルホン酸
（10滴）中に懸濁した。懸濁液を一夜はげしく撹
拌し、蒸発乾固しエタノールを加えた。この操作
を３回くり返した。蒸発の間に無色生成物の結晶
化が起こる。結晶を過し、液を蒸発し、エタ
ノールを加えるこの操作を３回くり返して粗生成
物（3.6g）を得た。 98％水性エタノールから再結晶した。 UV（水、PH5.5）λ_nax265n；融点201〜203゜；収量
2.79g（32％） 元素分析値 C₈H₉N₄OCl 計算値：Ｃ，45.20；Ｈ，4.26；Ｎ，26.36； Cl，16.68 実測値：Ｃ，45.11；Ｈ，4.27；Ｎ，26.25； Cl，16.71 方法 Ｇ ９−（１−ヒドロキシメチルエチル）−アデニン
（NPT15433） シエーフアー、シユベンダー（Schaffer、H.
およびSchwender、C.）のジヤーナル・オブ・フ
アルマシユーテイカル・イエンス（J.Pharm.
Sci.）、60巻、1204頁（1971年）、シエーフアー等
（Schaeffer et al）のジヤーナル・オブ・メデイ
シナル・ケミストリー、15巻、456頁（1972年）
に記載の方法を採用した。 ９−（１−ヒドロキシメチルエチル）−６−クロ
ロプリン（Ｉ、2.0g、9.4mmol）をメタノール／
アンモニア（30ml）に懸濁し、触媒として塩化ア
ンモニウム（50mg）を加えた。混合物を130゜で
4.5時間加熱した；この溶液を蒸発乾固した。得
られた粗生成物をエタノールから再結晶して、無
色針状晶を得た。収量、1.15g（63％）、融点215〜
216゜UV（水、PH5.5）λ_nax260nm. 方法 Ｈ ９−（１−ヒドロキシメチルエチル）−ヒポキサ
ンチン（NPT15443） ９−（１−ヒドロキシメチルエチル）−アデニン
（Ｉ、4g、21mmol）を50％酢酸（20ml）中に溶
かし、亜硝酸ナトリウム（4g、58mmol）を加
え、25゜で3.5時間撹拌した。得られた溶液を蒸発
乾固し、さらにイソプロパノールを加えて蒸発乾
固する操作を２度行つた。残渣をイソプロパノー
ルに懸濁し、過して、沈澱を捨てた。液をゲ
ル状になるまで蒸発し、アセトンを加えて固化し
た。収量3.65（90％）、イソプロパノール／メタノ
ール（98：２）から再結晶した。 融点202−207゜、クロロホルム：メタノール
（５：１）を溶媒とする薄層クロマトグラフイ
ー／スポツトR_f−0.30 UV（水、PH5.5）λ_nax250nm 方法 Ｉ 化合物 NPT 15417 シエーフアー等（Schaeffer et al）のジヤー
ナル・オブ・フアーマシユテイカル・サイエン
ス、16巻、1204〜1210頁の方法Ｆを採用した。 第表中の化合物XLはシエーフアー等のもの
である。 方法 Ｊ エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕ヒポキサンチン（NPT15392） エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕ヒポキサンチン（ノニルヒポキサンチ
ン、）の合成経路の概要は、フローチヤート１
および２に示した。シエーフアー、シユベンダー
（H.J.SchaefferおよびC.F.Schwender）のジヤー
ナル・オブ・メデイシナル・ケミストリー、17
巻、６頁（1974年）に記載の方法〔エリスロ−９
−〔１−（１−ヒドロキシエチル）ヘプチル〕−６
−クロロプリン（）に至る反応過程における〕
の改良方法が示されている。ノニルヒポキサンチ
ン（）を得るための最終工程、即ち６−クロロ
プリン誘導体（）の加水分解は、ハロゲノプリ
ンの加水分解についてのギナー、ソロラ、グリ
テ、ベンデイヒ、ブラウン（A.Giner−Sorolla、
C.Gryte、A.BendichおよびG.B.Brown）のジヤ
ーナル・オブ・オーガニツク・ケミストリー（J.
Org.Chem.）34巻、2157頁（1969年）に記載の方
法を採用した。別法のルート、即ちノニルヒポキ
サンチン（）を得るためのエリスロ−９−〔１
−（１−ヒドロキシエチル）ヘプチル〕−アデニン
（EHNA）（）のニトロソ化（フローチヤート
２）は、まずクロル誘導体（）をアンモノリシ
スによつてアミノプリン（、EHNA）に変換
しその後、ニトロソ化してノニルヒポキサンチン
（）を得る。 フロー・チヤート１ エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−ヒポキサンチン（）の合成の概要 〔第１工程〕アセトアミドノナン−２−オン
（） ２−アミノオクタン酸のアシル化 〔第２工程〕アセトアミドノナン−２−オンヒド
ロクロリド（） アセトアミドノナン−２−オン−ヒドロクロリ
ドの生成 〔第３工程〕エリスロ−３−アミノ−２−ノナノ
ール（） アセトアミドノナン−２−オン−ヒドロクロリ
ドの還元 （矢印の下の数字は収量％をしめす） 〔第４工程〕エリスロ−５−アミノ−４−クロロ
−６−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチルアミノ〕ピリミジン（） エリスロ−３−アミノ−２−ノナノールと５−
アミノ−４，６−ジクロロピリミジンとの縮合 〔第５工程）エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキ
シエチル）ヘプチル〕−６−クロロプ
リン（） エリスロ−５−アミノ−４−クロロ−６−〔１
−（１−ヒドロキシエチル）ヘプチルアミノ〕、ピ
リミジン（Ｖ）の閉環 〔第６工程〕エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキ
シエチルヘプチル〕−ヒポキサンチン
（） （６−クロロプリン誘導体の加水分解） フロー・チヤート２ エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−ヒポキサンチン（）の製造ついて
の別法 〔工程1a〕エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキ
シエチル）ヘプチル〕−アデニン（） エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−６−クロロプリン（）のアンモノ
リシス 〔工程2b〕エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキ
シエチル）ヘプチル〕−ヒポキサンチ
ン（） エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−アデニン（）のニトロ化 ３−アセトアミドノナン−２−オン（） ２−アミノ−１−オクタン酸（Ｉ、200g、
1.26mol）の無水酢酸（960ml）溶液とピリジン
（640ml）との混合物を沸とう水浴上で４時間加熱
した。反応混合物を真空中で蒸発し、残渣を５％
水性炭酸水素ナトリウム（400ml）及びエーテル
（400ml）の間で６〜８回分液した。エーテル抽出
分を合し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発
乾固して粗３−アセトアミドノナン−２−オン、
154g（70％）を得た。 ３−アミノ−２−ノナノンヒドロクロリド（） 先の工程で得た粗生成物（）（154g）を濃塩
酸（1540ml）中に溶解し、２時間加熱還流し、真
空中で蒸発乾固した。得られた固形物をエタノー
ル（200ml）の温溶液から再結晶して25゜に冷却し
た。この溶液にエーテル（600ml）を加えた。白
色結晶状沈澱物が析出し、この懸濁液を5゜で一夜
放置した。この沈殿を集め、エーテル（１回100
ml）で洗浄して125g（67％）の白色結晶が得られ
た。融点112゜（分解）。 もし、この結晶物質が白色でなかつたり、融点
が低い場合には、テトラヒドロフランから、活性
炭をもつて再結晶すべきである。この処理１回あ
たり、粗塩酸塩（）100gに対して150mlのテト
ラヒドロフランが使用される。 エリスロ−３−アミノ−２−ノナノール（） ３−アミノ−２−ノナノール塩酸塩（43.8g、
0.226モル）を無水メタノール（150ml）中に溶解
し、氷−食塩浴中で−10゜に冷却した。 (1)水素化ホウ素カリウム（24.4g、0.45mol）(2)を
少量づつ２−３時間で加える。この混合物を３時
間−10゜〜−15゜に保ち、３，４）ゆつくり室温
（22゜）にもどす。そして一夜（20時間）室温で撹
拌する。混合物を真空蒸発乾燥（シロツプ状）
し、H₂O（150ml）およびクロロホルム（150ml）
の間で分液した。水層をさらに３回クロロホルム
（100mlづつ）で再抽出した。クロロホルム層を硫
酸マグネシウムで乾燥し、真空蒸発すると淡黄色
油状物が得られる。この液体を真空下に95゜−
100゜（0.15mmHg）で蒸留して純粋エリスロ−３−
アミノ−２−ノナノール、26.4g（75％収量）を得
た。 融点81゜−86゜ １ の溶液を冷却すると沈殿が生ずるが、これ
は本反応の成果には何の影響も与えない。 ２ 次の点において、本方法はシエーフアー等
（Schaeffer et al）の方法と異なる。即ち、シ
エーフアー等（Schaeffer）の方法では、
KBH₄と同時に酢酸を加えてPH５−６に保つて
いる。中和すればWBH₄の損失をともなうし、
また５を超えるPHというのは大目にみてもよ
い。さらに重要なことは、酢酸とKBHとの同
時添加シエーフアー〔（Schaeffer）の提案のよ
うに〕すると、反応の調整が極めて困難とな
る。温度が非常に上昇し、収量の低下および／
または生成物の純度の低下がおこる。 ３ うまく反応がすすむよう、はげしく撹拌する
ことをすすめる。すなわち、水素化ホウ素カリ
ウムの小さなかたまりがない方が反応がよく進
行するのである。 ４ シエーフアー（Schaeffer）らが述べている
ように0゜に冷却すること（方法Ｄ）では不十分
である。反応を0゜未満で行う点が改良点であ
る。常に−10゜に保つことが最も好ましい。も
し−10゜を超えるようになれば、著るしく収量
が低下する。 エリスロ−５−アミノ−４−クロロ−６−〔１−
（１−ヒドロキシエチル）ヘプチルアミノ〕ピリ
ジン（） ４，６−ジクロロ−５−アミノピリミジン
（Ｖ、24.6g、0.15mol）と、エリスロ−３−アミ
ノ−２−ノナノール（、26.2g、0.164mol）と
を１−ペンタノール（1080ml）及びトリブチルア
ミン（350ml）中に懸濁させた液を、25゜で撹拌す
ることによつて調製した。この懸濁液を28時間ち
つ素気流中で加熱還流した（１／２時間で溶液状
態となる）。その時点における反応生成物の
UVλ_nax267および297nm（水、PH5.5）。 得られた溶液を温浴中、10mm圧で濃縮してシロ
ツプ状となし、さらに0.1mm圧、100゜の油浴中で
蒸発して、粘着性液を得、これにｎ−ヘキサン
（450ml）を加えた。この混合物を１時間加熱還流
し、この液から、黄色のヘキサン上澄液を円型底
フラスコに取つた。 かかるヘキサン溶液を真空蒸発させて得られた
淡褐色油状物質をクロロホルム（150ml）中に溶
解した。このクロロホルム溶液を炭酸水素ナトリ
ウムの飽和溶液（各回250ml）で８回抽出した。
クロロホルム層を分離し、硫酸ナトリウムまたは
硫酸マグネシウムで乾燥後、40゜（水浴）で真空
（0.1mm）蒸発することによつて淡褐色油を得、こ
れを冷却することにより固形物を得た。この物質
は、直接次の反応工程に使用できるが、次の方法
で精製してもよい：即ち、得られた油状物を75〜
100mlのクロロホルムに溶解し、ｎ−ヘキサン
（約300ml）を加えて白色結晶を沈殿させる。液を
冷却し該沈殿物を取した。（抽出は、炭酸ガス
が出なくなるまで、４−８回行つた。この操作を
さらに２回くり返した。 収量：23.3g（54％）UVλ_nax267、297（水、PH5.5）
融点113−116゜ エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−６−ヒドロキシプリン（） 先の工程で得たエリスロ−５−アミノ−４−ク
ロロ−６−〔１−（１−ヒドロキシエチル）ヘプチ
ルアミノ〕ピリミジン（11.48g、40mmol）より
成る粗シロツプをオルトギ酸トリエチル（106ml）
およびクロロホルム（34ml）に溶かし、エタンス
ルホン酸（10滴）を加えた。25゜で１夜放置した
後、真空下に蒸発させ、シロツプを得た。収量
11.7g（定量的）この粗エリスロ−９−〔１−（１−
ヒドロキシエチル）ヘプチル〕−６−ヒドロキシ
プリン（）は次の工程に使用する。λ_nax264nm エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−ヒポキサンチン（） （６−クロロプリン誘導体の加水分解による） 0.5Nカセイソーダ（40ml）中のエリスロ−６
−クロロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）ヘ
プチル〕−プリン（、4.0g、13.4mmol）の懸濁
液を２時間加熱還流し、冷却した。氷酢酸で中和
し、冷却するとエリスロ−９−〔１−（１−ヒドロ
キシエチル）ヘプチル〕−ヒポキサンチン（）
の結晶状沈殿が得られ、これを取し乾燥した。
収量：3.8g（定量的）、融点196゜、UVλ_nax（PH5.5）
251nm。 かくして得られた粗生成物（）を、ペーパー
クロマトグラフイ（３溶媒）では単一物質であ、
Cl^-についてのテスト〔銅線による炎色反応ナト
リウム溶融、酸性化、硝酸銀反応〕は陰性となつ
た。 粗生成物を水性エタノールから３回再結晶して
（精製を参照）、無色結晶を得た。 融点202゜：計算値C₁₄H₂₂N₄O₂（）としてＣ，
60.41；Ｈ，7.97；Ｎ，20.13 実測値：Ｃ，
60.47；Ｈ，7.86；Ｎ，20.08 エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−ヒポキサンチン（）の精製 粗ノニルヒポキサンチン（）を再結晶によつ
て精製する。粗生成物は、加熱によつて、その重
量の６−10倍がエチルアルコールに溶解し同量の
水を加える。この溶液をエーレンマイヤーフラス
コ中で活性炭処理し、温かいうちにはセライトに
よつて過する。この溶液を撹拌をつづけなが
ら、熱板上で蒸発させる。これに、水を少量づつ
加え、蒸発した量を回復させると多量の沈殿物が
出てくる。溶媒の蒸発をつづけ、全エタノールを
除去し、他方くり返しH₂Oを生成物の８−12倍
（重量）になるまで加える。それぞれの再結晶に
当つて減少する生成物は約10％である。２回の再
結晶で融点は202゜まで上昇し無色結晶状態のもの
が得られる。一方粗生成物はいくぶん黄色または
ピンク気味であり、融点は192゜であつた。 エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−アデニン・HCl（） 先の工程で得られた粗油状エリスロ−９−〔１
−（１−ヒドロキシエチル）ヘプチル〕−６−クロ
ロプリン（）（6.15g）を飽和メタノール性アン
モニア（300ml）および塩化アンモニウム（1g）
に80−100゜、１時間で、ステンレススチール製ガ
スボンベ（Parr Instrument）中で、溶解させ
る。冷却後、溶液を真空下蒸発乾固した。メタノ
ールを加え、再度蒸発を行い（３回）過剰のアン
モニアを除去した。 シロツプ状の残渣を無水メチルアルコール中に
溶解し、温度を20゜以下に保ちながら（氷浴で）
乾燥塩酸ガスを通した。１／２時間塩化水素を通
じた後、混合物を5゜に冷やし、沈殿物をガラスフ
イルターロートで集めた。これを冷メチルアルコ
ールで洗浄し空気中で乾燥した。収量6.0g（92％）
融点173−175゜（分解）UVλ_nax260nm（水、PH5.5） エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−ヒポキサンチン（）を製造する
ための別法 亜硝酸ナトリウム（5.6g、71mmol）をエリスロ
−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）ヘプチル〕
−アデニン（、4.0g、14mmol）の50％酢酸
（20ml）及び１規定塩酸（3.2ml）溶液中に、25゜
で撹拌しながら、ゆつくり加えた。この混合物を
25゜で２時間撹拌をつづけた。その後、UVスペク
トラムを監視し、UVmaxが250nmに達した時、
溶液を２規定カセイソーダーで中和した。得られ
た沈殿を取し、H₂Oで洗浄した。 収量3.03g（75％）融点195゜ 分析用サンプルを３回水から再結晶して、融点
202゜の生成物を得た。 元素分析値 C₁₄H₂₂N₄O₂として、計算値：Ｃ，
60.40；Ｈ，7.96；Ｎ，20.13 実測値：Ｃ，
60.40；Ｈ，7.90；Ｎ，20.12 方法 Ｋ 化合物NPT15426 シエーフアー、シユベンダー（H.J.Schaeffer
及びS.F.Schwender）のジヤーナル・オブ・メデ
イシナル・ケミストリー、17巻、６頁（11974年）
に記載の方法を用いた。 方法 Ｌ NPT1540の製造 0.1mmolの９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−６−ヒドロキシプリン、NPT15392
（27.9mg）および0.3mmolの２−ヒドロキシプロ
ピル、ジメチルアミノ）−２−プロパノール−４
−（アセチルアミノ）安息香酸塩（DIP.PAcBA）
（77.1mg）を正確に秤量し、0.25％の炭酸ナトリ
ウム（Na₂CO₃）105ml中に溶解して、
NPT15410（NPT15392とDIP・PAcBAとの１：
３モル割合によつて形成された化合物）を得た。 複合物が形成されている証明 NPT15392およびDIP・PAcBAについての相
溶解性試験によつて一定のPH状態においてDIP・
PAcBAの濃度の増大につれて、NPT15392の溶
解性が増大することが証明された。このことは、
溶液中で、複合体が生成するような相互反応が起
つていることを示している。 NPT15392とDIP・PAcBAとのモル比の代り
に１：１および１：10のモル比を使用することに
よつて別の複合体が形成する。 抗ウイルス作用は、第２表および第３表に示し
た。

【表】

【表】 生物学的活性 方 法 抗インフルエンザ活性−（血球吸着試験） インフルエンザウイルスが、組織培養胞の単層
に感染すると、モルモツトの赤血球は、その細胞
表面に吸着されるという細胞表面の変化がおこ
る。吸着細胞の病巣数（血球吸着病巣形成単位
HAFFU）は、感染性を定量するもである。その
方法は次の通りである。 単一層は次の方法で二次培養した：培地を流し
出し、PH7.2のカルシウム、マグネシウムを含ま
ないリン酸緩衝食塩水（PBS）、（GIBCO＃419）
を洗浄液として約50mlで単一層を２回洗浄した。
修飾したPuckの生理食塩水A1あたりトリプシ
ン（１：250）0.5gとEDTA2.0gを含有するトリ
プシン−EDTA溶液（GIBCO＃530L）１mlを37゜
で名フラスコに添加し、静かに撹拌しながら、単
一層を分散させた。それから細胞を取り出すのに
必要な時間に従い、約３〜５分の間37゜培養器に
いれておいた。時々撹拌する必要がある。移植培
地10mlを各フラスコに添加し、ヒペツトで浮遊液
を吸いこんだり、放出したりして細胞を分散し
た。一連のフラスコの内容物はプールし、浮遊液
中の細胞を、移植培地で７〜8.5×10⁴細胞／mlに
希釈した。移殖培地は、次の組成から成り立つて
いる；アール（Earle）塩とヘルペス（HEPES）
緩衝剤（GIBO＃236）を含有するイーグル
（Eagle）の最小必須培地（MEM）に次の物質を
添加して87mlのMEMした。 ・仔牛胎児血清 10ml（FCS−GIBCO＃614HI） ・Ｌ−グルタミン １ml（200Molar−GIBCO
＃503） ・クロルテトラサイクリン １ml（5000μg／ml
GIBCO＃528） ・ペニシリン 10000単位、ストレプトマイシン
10000μgおよびネオマイシン
10000μgの混合物１ml（PSN−
GIBCO＃564） 細胞は、リンブロ（Linbro）組織培養トレイ
の中で二次培養した。そのトレイは各々３mlの容
量の底の平らな管24本から成つている；細胞培養
浮遊液（１ml）を各管に添加した。 翌日その培地を除去し、新鮮な移植培地ととり
かえた。単一層がほぼ合流するような条件に到達
したとき（約３〜４日）、実験に用いた。 リンブロ（Linbro）トレイのヘラ（HeLa）細
胞培養液が（細胞を見て）、実験できる段階に至
つたら、培地を静かに注ぎだし、与えられた濃度
のテスト化合物を含有する保存培地（３％に減少
したFCSを含有するMEM）１mlを１トレイ中の
４管の培養液に添加した。 2.3〜150g／mlの範囲の種々の薬物濃度のもの
を使用した。対照培養液としては保存培地のみの
ものを用いた。薬物および対照培地を投与して
後、実験群と感染した対照培養液に希釈したウイ
ルス浮遊液0.1mlを添加した。非感染対照培養液
には生理食塩水のみを添加した。リンブロ
（Linbro）トレイを37℃で18時間培養し、後に全
群における培地を吸引した。各培養液をPBSで
１回洗浄した。生理食塩水を吸引し、PBS中の
0.4％Ｖ／Ｖモルモツト赤血球浮遊液（0.5ml）を
各培養管に添加した。培養液は30分間室温に維持
し、その後培地を静かにそそぎ、特異的に結合し
ている赤血球を除き、他のすべての赤血球を取り
去るために、培養液をPBSで２回洗浄した。３
回目の洗浄の後、保存培地を全培養液に添加し
た。 ハワード（Howard）ミクロメーター接眼レン
ズ（C8385）をニコン（Nikon）倒立位相差顕微
鏡の接眼レンズにさしこんだ。各培養液を４倍と
いう低倍率の対物レンズで入念に調べ、視野目標
（field marker）として接眼レンズのグツドを使
つて、赤血球吸着細胞の数を直接数えた。感染さ
せた対照培養液で生じた血球吸着細胞の数と密度
に応じて、実験群について部分的な視野あるいは
視野すべてについて数えた。血球吸着細胞を数え
るのに最も望ましい状態を得るためには、60倍か
150倍の拡大であつた。60倍と150倍での血球吸着
を測定するため視野係数を計算した。60倍では、
55.5という乗数で、全視野数をかぞえた。150倍
では、乗数は273であつた。乗数55.5と273は、
各々60倍と150倍での全視野数を表わす。数えた
視野数は、一管あたり３〜５の範囲で使用した一
処理群あたり、３−４管用いた（試験した視野数
に関する結果の部分の生のデータ表を見つ）。平
均と標準誤差を計算し、スチユーデントｔ検定法
を使つてデーターを評価した。 生物学的活性 抗ヘルパス活性−（プラーク試験） 組織培養細胞がヘルペスウイルスに感染する
と、細胞の溶解が生じる。ある期間を経ると、こ
れら溶解細胞は、細胞の層に小さな透明な領域
（プラーク）となつて目にみうるようになる。培
地に、テスト物質を混入した場合、もしそれがウ
イルスの増殖を防ぐことができるなら、プラーク
の数は減少するであろう。方法は次の通りであ
る。 物質と方法 ウイルス アメリカン タイプ カルチユアコレクシヨン
（ATCC）から分譲をうけたヘルペス ホミニス
２型（ベセスダ、マリランド、ATCC＃VR540、
Lot3D）を使用した。凍結乾燥ウイルスは滅菌蒸
留水１mlを用いて懸濁した。ウイルスは、ヘラ
（HeLa）細胞単一層を２回通過させた。組織培
養上清をプールし、１mlの部分標本に分配し、−
70℃で貯蔵した。この試験に用いる貯蔵懸濁液の
力価は（２日間の培養で）10^-4TCID50／0.1mlで
あることがわかつた。 ヘルペスウイルスプラーク試験 対数増殖期のベロ（Vero）細胞を10％仔牛胎
児血清（FCS）と抗生物質を補足したイーグル
（Eagle）の最小必須培地（MEM）を用いて、50
mlのフアルコン（Falcon）フラスコ内１×10⁵細
胞／mlの濃度で二次培養した。培地は移植の翌日
交換した。ベロ（Vero）細胞単一層は、２日目
までには対数増殖期の細胞により、完成され、こ
れがプラーク試験の為に用いられた。 培地を流し出し、単一層をリン酸緩衝食塩水
（PBS）で１回洗浄した。実用に供される貯蔵ウ
イルス懸濁液の数種の希釈液を用意し、FCSを含
まない培地に添加した。このウイルス希釈液の１
つから0.5mlを用いて、各培養フラスコを感染さ
せた。この培地には薬物が、150μg／mlの濃度で
含まれていた。対照には薬物の含まれていない培
地を用意した。 ウイルスの吸着は37℃で２時間の間おこなつた
が、その間15分毎に、培養液を静かに撹拌した。
それから、培地を流し出し、単一層をPBS10ml
で１回洗浄した。 PBS50ml中６％Ｗ／Ｖという濃度のアガロー
スを調整した。２％FCSを添加したMEMの貯蔵
培地を用意した。薬物は、150μg／mlづつ貯蔵培
地のいくつかに添加した。３つの培液を47℃に保
つた。更にプールしたヒト抗ヘルペス血清の１：
10希釈液を用意した。処理開始直前にアガロース
溶液15mlを培地85mlに添加した。別にアガロース
15mlを薬物−培地85mlに添加した。 実験の一群において、洗浄した単一層の各々を
アガロース−培地５mlかアガロース−薬物−培地
５mlのいずれかで処理した。他の実験群では、各
単一層は、貯蔵培地５ml中抗ヘルペス血清0.2ml
か薬物−培地５ml中抗ヘルペス血清0.2mlのどち
らかで処理した。抗ヘルペス血清が、培地中の遊
離のウイルスを中和することによつてプラークを
局部に制限するために、アガロースの代りに用い
た。フラスコを５分間室温に維持したのち、37℃
で２日間培養した。大部分の処理群は、１群につ
き、３重複した培地で行つた。 その後、PBS10mlを各フラスコに添加した。
上層を静かに振盪し、フラスコから注ぎ出した。
0.5％Ｗ／Ｖクリスタルバイオレツトの50％メタ
ノール溶液を３回蒸留した水で希釈したもので、
単一層を染色した。 プラークは、螢光透過光によつて肉眼で直接
か、微小プラークに対しては、鏡検によるかのい
ずれかで数えた。微小プラークは、倍率150倍で
実験群あたり、３視野を平均して計算した。 他の抗ウイルス活性試験から次の結果を得た。

【表】 化合物NPT15410の追加の抗ウイルス活性試験
の結果を表3aに示す。

【表】 免疫調節活性を表４に示す

【表】

【表】

【表】

【表】 いくつかの化合物を幼若化促進物質惹起による
ネズミリンパ球の増殖に対して試験した。その結
果を次に示す。

【表】 生物学的活性 免疫調節試験 被験物質が免疫系のいくつかの細胞種の活性を
調節する能力を評価するのに次の３つの試験方法
を使用した。これらの方法では、（試験されたパ
ラメーターの抑制によつて証明される）免疫抑制
活性のみならず（試験されたパラメーターの促進
によつて証明される）免疫促進活性をも確認する
ことができる。 １ 幼若化促進物質誘導によるマウス脾細胞試験 Ｂ−及びＴ−リンパ球を含むマウス脾細胞は多
くの異物（例えばConAのような植物性幼若化促
進物質）によつて刺激され、増殖することが可能
である。 この増殖を促進することは、細胞性免疫を促進
することを示唆するものである。 以下の方法は被験物質の免疫促進作用を評価す
るために用いられるものである。 物 質 コンカナバリンＡ（Calbiochem，La Jolla，
California）、Lot＃210073、食塩を含む凍結乾燥
品、をまず最初に１％溶液として調整し、２倍に
希釈してそれぞれの希釈液（0.5、10、2.5μg／
ml）を作製した。 動 物 ６〜８週令のバルブ／シー（Balb／Ｃ）およ
びC₃H系雄性マウスを次の所から入手した：フロ
ー・レサーチ・アニマルス・インコーポレーテツ
ド・ダブリン・バージニア；チヤールスリバーブ
リーデイング．ラボラトリーズ．ウイルミント
ン．マサチユーセツト；ラボラトリー．サプラ
イ．カンパニー．インデイアナポリス・インデイ
アナ及びライオネル、ストロング．フアンデーシ
ヨン．サンデイエゴ，カリフオルニヤ（Flow
research Animals，Inc.，Dublin，Virginia；
Charles River Breeding Laboratories，
Wilmington，Massachusetts；Laboratory
Supply Company，Ind ianapolis，Indiana；お
よびLionel Strong Foundation，San Diego，
California）。 細 胞 ３〜５匹のマウスを頚部脱白によつて殺し、脾
臓を無菌的に取り出した。プールした脾臓を細か
く切りきざみ殺菌したピンセツトで抓き裂いた；
それから、二重のナイロンメツシユでこした。細
胞懸濁液を５％仔牛胎児血清と抗生物質を補足し
たRPMI1640の15mlで１回洗浄した。細胞は、マ
イクロプレートで10⁶細胞／0.1ml／管の濃度で培
養した。培養液は５％CO₂を含有する湿つた空気
中で幼若化促進物質の存在下、あるいは不存在下
において48時間培養した。被験化合物は、幼若化
促進物質といつしよに種々の濃度で培養液に添加
した。 増 殖 18時間の培養期間中における〔³H〕チミジン
1.0Ciの取りこみによつて増殖の試験を行つた。
培養液をマツシユ（MASH）装置〔オツトー、
ヒラーカンパニー、マジソン、ウイスコンシン
（Otto Hiller Oo.，Madison，Wisccnsin）〕に
より細胞をろ集し、チミジン取りこみ量を液体シ
ンチレーシヨン）計数計で分析をした。試験は一
群につき３重複でおこない、データを平均値±実
験平均値の標準誤差で表わした。対照値に対する
薬物の促進率も計算しグラフに表わした。 ２ 幼若化促進物質誘導によるヒト末稍血液リン
パ球 ウイルス性疾患や癌にみられるような免疫状態
が不足あるいは弱められた状態にある患者におい
て、免疫反応を増強するような治療剤が臨床的に
必要である。異物に応じてヒト末稍血液リンパ球
の増殖を高めるような薬物の能力を研究すること
によつてヒトにおいて免疫促進活性をもつ薬剤を
認識することができる。その方法は、今述べた方
法あるいは、ヘイドン（Hadden，Ｊ，Ｗ）、イ
ンフエクシヨン・アンド・イムニイテイ、２月
（1976年）382−387、特に382−383頁にも記述さ
れている。 ３ マクロフアージは、白血球の亜集団であり、
細胞性および液性免疫の両方をコントロールする
免疫系における重要な細胞である。以下に述べる
試験方法は、マクロフアージの機能の促進作用物
質として研究されている物質を評価するものであ
る。 植物性血球凝集素（PHA）（HA−17）は、バ
ローズ、ウエルカム（Burroughs Wellcome）よ
り入手した。マクロフアージ幼若化因子
（MMF）とマクロフアージ活性化因子（MAF）
は、ヘイドン（Hadden et al）、ネーチヤー、第
257巻、第483〜483頁（1975年）中に記載されて
いるように（モルモツトの）抗原−刺激されたリ
ンパ腺のリンパ球から調製した。この標本を真空
透析とセフアデツクスＧ−100カラムクロマトグ
ラフイーによつて部分的精製を行うと、幼若化促
進作用と活性化の性質の両方もつ活性部分が35〜
70000ダルトンの範囲に得られた。その活性部分
を、増殖と活性化試験の両方に用いた。 方 法 フイコル−ハイパツク（Ficoll−hypaque）に
より精製したヒト末梢血液リンパ球を調整し、
PHA誘導リンパ球の増殖をヘイドン（Hadden
etal）らにより、セルラー、イミノロジー（Cell.
Immunol.）、第20巻、第98〜103頁（1975年）に
述べられている方法により、三重水素化チミジン
の取りこみによつて試験した。最適以下、最適、
最適以上の各濃度（各々、0.001、0.01、0.1単
位／ml）のPHAの存在下で、各化合物を試験し
た。パラフイン油誘導モルモツト腹膜マクロフア
ージを調製し、単一層培養として培養した（＞98
％の純粋なマクロフアージ）。リンフオカイン
（MMF）誘導による増殖は、ヘイドン（Hadden
et al）、ネイーチヤー、第257巻、第483〜485頁
（1975年）に記載されている方法により、培養３
日目と５日目に三重水素化したチミジンの取りこ
みによつて試験した。MAFの存在する場合、あ
るいは存在しない場合において、５日間の培養
後、グラム陽性桿菌を殺すリンパ液（MAF）誘
導マクロフアージの活性化を、ヘイドン・イング
ランド（HaddenおよびEngland）、イミノフアル
マコロジー（Immunopharmacology）、第87〜
100頁（Plenum Prees、1977年）で述べられて
いる方法により、６時間の間行つた。食作用は、
グラム陽性桿菌に20分間接触させている間、ラブ
テク（Labtek）チエンバー内のグラム染色した
単一層におけるバクテリア含有マクロフアージの
数と一食細胞あたりのバクテリアの数を数えるこ
とによつて定量した。細胞内のバクテリアの殺滅
は、最初の20分間接触し、６時間後の、バクテリ
アを含有する細胞の数と１細胞あたりのバクテリ
アの数を数えることによつて評価した。マクロフ
アージを溶解し、細胞内バクテリアを培養すると
いう実験を平行して行つて、この系における方法
によつて定量したバクテリアの活性の効力を確認
した。薬物は、幼若化促進物質あるいはリンフオ
カインの存在する場合と、存在しない場合におい
て、３種類の一連の対数濃度範囲で各群につき３
重複した試験で用いた。どの実験も少なくとも３
回は行つた。先の実験結果によると増殖および活
性化試験における反応は薬理学的調整と類似性が
みられることを示している。 生物学的活性 抗白血病活性（Ｌ−1210発育阻害） Ｌ−1210腫瘍担癌マウスから摘出した白血病細
胞を試験管内で培養し、期間中、培養液中の細胞
数を数えることによつて、その発育を測定でき
る。抗白血病剤として有効な被験物質を培地に混
入すると白血病細胞の発育は妨げられるが、Ｌ−
1210の発育を50％阻害する薬物の濃度I₅₀を次に
示す： 化合物 濃度（μg／ml） 15392 28 15410 54 15417 47 15418 70 使用した試験方法を以下に述べる。 白血病細胞（Ｌ−1210）の発育阻害測定法 貯蔵培養液中で細胞が充分発育していることを
詳細に観察する。移植後48〜72時間の細胞を使用
する。 所望の目的濃度の50倍の薬物を秤量し、連続的
に希釈する。 Mccoyの5A培地500ml、15％仔牛胎児血清、ペ
ニシリン−ストレプトマイシン溶液５mlおよび抗
生−抗真菌性溶液５mlを用いて目的培地をつく
り、室温で維持する。 薬物希釈液0.1mlを、無菌的に各管に添加する。
適量の細胞を、調製した培養液に添加して、混合
した後、その液を0.5mlをとつて、生理食塩水9.5
mlを含むガラスビンに入れ、クールター
（Coulter）計数管で数える。40倍希釈を補正する
ために、その数を40倍する（生理食塩水0.5ml中
に0.5mlおよび接種材料を記録する）。 細胞懸濁液５mlを各管に添加する。細胞のより
均一な分布を確実にするために、４管ごとに渦ま
き状によく混ぜた。 ふたをしつかり閉めて、96時間、36〜38℃で、
CO₂恒温器中に入れておく。 96時間後、恒温器から管を取り出し、クールタ
ー（Coulter）計数管で、各々の細胞数を数える。
すべての値に40をかけ、各々の薬物希釈液に対し
て、４回の測定値を平均する。もしその値が、接
種した細胞数より小さければ、100％抑制を示す。
その値が８つの対照値の平均よりも大きければ、
０％の抑制を示す。他のすべての値には、次の式
を使用する。 処理培養液中の平均（細胞／ml）−接種細胞数（細
胞／ml）／対照培養液中の平均（細胞／ml）−接種細胞
数（細胞／ml）×100＝生存％ 100％−生存％＝処理による発育抑制 本発明の対照化合物は、標準組織培養法を使つ
て、代表的なRNAおよびDNAウイルスの両方の
複製を阻害することがわかつている。RNAウイ
ルスの場合、Ａ及びＢ特殊型の両方に属するイン
フルエンザウイルスのいくつかの菌株が、血球吸
養法により阻害されることがわかつた（第節
Ｂ）。インフルエンザウイルス（Ａ型／USSR90）
の複製を阻害することがわかつた化合物を表Ｉに
示す。この一連の化合物の中のいくつか、例えば
NPT15392、NPT15410、NPT15417および
NPT15418は、１〜150g／mlの濃度範囲でインフ
ルエンザウイルスの少なくとも４種類の菌株の複
製を阻害することがわかつた。 更に、その系統の中のいくつか、NPT15410と
15392とは、DNAウイルスであり、致命的なヘル
ペス脳炎の他にヒトに重症の粘膜皮膚障害を招く
ウイルスである単純ヘルペスウイルスの複製を阻
害することが示された。この種のウイルスの他の
ものは、ブタや牛の口蹄疫、ネコの伝染性の鼻気
管炎をまた犬のケンネルカフ（Kennel cough）
を招来する。NPT15392および15410は、100μg／
mlの濃度以下でも、単純ヘルペスウイルスによつ
て生じるプラーク形成を90％以上の程度まで減少
させることがわかつた。他のRNAおよびDNAウ
イルスを表５に示したが、これらは、そこに記載
された疾患を招来する。世の中の全疾患のうち少
なくとも25％はウイルスによるものであることが
わかつている。さらに、腫瘍を誘発する多くのウ
イルスが分離されている。この様に、抗ウイルス
剤というのは、それ自体、かなりの抗腫瘍性をも
つていることが期待される。 ウイルス〔インフルエンザウイルス、HSV、
フレンド（Friend）白血病ウイルス〕、バクテリ
ア、および真菌類のような、多くの感染源は、感
染に対する宿主の防御を弱めて、宿主に免疫抑制
状態をひきおこすという既定の事実がある。アラ
Ｃ（Ara−Ｃ）のような他の抗ウイルス性代謝拮
抗物質のほとんどは、宿主の免疫防御機構を抑制
し、それによつて生物体自身の自然防御機構を減
少させ、二次感染を高める可能性が出てくる。 免疫促進作用物質や免疫調節物質は、抑制され
た免疫機能をもとにもどすか、正常な免疫機能を
高めるかどちらか、あるいはその両方を行う物質
である。免疫機能とは、液性（抗体が媒介してい
る）免疫、細胞性（胸腺細胞が媒介している）免
疫、あるいはマクロフアジーと顆粒球が媒介して
いる抵抗力の展開およびその表現として定義され
る。従つて、そのような薬物としては、必然的
に、免疫反応の表現に必要な細胞に直接作用を有
する物質、及び、細胞あるいは分子機構に作用し
て、その結果として免疫反応の表現に必要な細胞
の機能が、修飾されるような物質などがあげられ
る。免疫機能の増強は、免疫系に対する内因性あ
るいは外因性の負のフイードバツクの影響によつ
て生じる抑制機構をとりのぞくように物質が作用
することによつてももたらされるかもしれない。
このように免疫促進作用物質には、いくつかの作
用機序がある。免疫促進物質が作用する細胞側の
多様性あるいは生化学的機構の多様性という点が
あるもかかわらず、それらの適用は、本質的には
同じである：すなわち、宿主の抵抗性を増大する
ということである。 免疫促進作用物質の適用 (1) 免疫系の主な防御機能は、ウイルス、リケツ
チア、マイコプラズマ、バクテリア、真菌類、
そしてあらゆるタイプの寄生中のような病原体
の侵入に対する抵抗性に関する。このように、
免疫反応の改善、、特に抑制されている場合の
改善は、上述の病原体による感染あるいは浸蝕
に対する抵抗性を適切に改善するものである。
免疫促進作用物質を単独、あるいは抗感染療法
と併合した場合、あるゆる伝染病に適用可能で
ある。 (2) 第２の免疫防御機能は、胎児−母の関係にお
けるような自然な、あるいは医師によつて行わ
れるような移植のような不自然な、異質組織の
移植に対する抵抗性であると考えられる。免疫
促進作用物質は、胎児あるいは胎盤組織に対す
る拒否反応を促進したり、移植片に対する耐性
を緩和したり誘導したりするのにも使用でき
る。 (3) 第３の免疫防御機能は、癌のような悪性細胞
の増殖に対する抵抗性であると考えられる。免
疫促進作用物質は、腫瘍をはねつける力を増大
したり、あるいは他の形態の治療方法をうけた
のちに再発する腫瘍を阻害するといつた癌療法
に用いることができる。 (4) 第４の防御機能は、正の抑制機構により、自
己に対して、異質でないことを認識し、反応せ
ずにいるという能力を意味する。自己免疫およ
びこれに関連した障害においては、自己の抗原
による免疫反応あるいは、異常に高められた反
応は明らかに自己を破壊するものである。免疫
促進作用物質は、正常な抑制機構を回復させ、
耐性を導き、あるいはその逆に正常な免疫反応
を促進するのに使用することができる。 免疫系におけるそれぞれの防御機能は、免疫促
進剤単独、あるいは抵抗性を改善したり、侵蝕し
ている病原体を殺したりするのに使用される他の
薬剤とを組合せる非特異的な療法によつて種々修
飾することができる。さらに、たとえばウイルス
や腫瘍細胞等を使つたワクチンのような、ある種
の抗原といつしよに免疫促進剤を使用することに
よつて、特異的な抵抗性を増大させることができ
る。このような使用法によつて、特異的な免疫か
耐性のどちらかを誘導することができる。後者と
しては、アレルギーや自己免疫疾患において抗原
とともに使用する場合があげられる。免疫促進剤
は、治療、予防の両者に用いることができる：後
者については、特に老化現象の場に用いられる
が、そのような場では感染、自己免疫病及び、癌
などがより一般的なものになつている。投与時期
とか形態はさまざまの態様をとり、正の応答を得
るのか、負の応答を得るのかを決定するような重
要なフアクターである。免疫反応を増強させる薬
剤は、その投与時、投与量によつては、阻害作用
を呈する；このように、ある条件下では、免疫促
進剤が、アレルギー、自己免疫、移植において使
用される免疫抑制剤として使用されうる。 前記第４表には、本発明の対象化合物について
免疫反応における促進剤として評価した結果を示
した。ここでは３種類の試験方法が使用されてい
る。第一番目は被験化合物の植物性幼若化促進物
質（ConA）により誘起されたマウスリンパ球の
増殖を高る能力の測定である。第２番目は、別の
植物性幼若化促進物質（PHA）により誘起され
たヒトリンパ球の増殖能力を高めるという被験化
合物の能力の測定である。第三番目は、自然のリ
ンフオカイン（MMF、マクロフアージ．幼若化
因子）により誘起されたマクロフアージの増殖を
高めるというこれら被験化合物の能力を測定する
ものである。この後者の反応、即ちマクロフアー
ジの増殖と活性化は、この種の白血球によるバク
テリア、ウイルスおよび腫瘍細胞の殺滅に関係し
ていることがわかつている。 15392、15410および15418に、免疫反応の顕著
な促進作用が認められた。 最後に、NPT15392および15410の異常リンパ
球の発育阻害剤としての活性を測定した。両化合
物は、組織培養したマウス白血病リンパ球（Ｌ−
1210株細胞）の増殖を著るしく阻害する。
NPT15392は28μg／mlで、またNPT15410は
54μg／mlでＬ−1210細胞を50％阻害した。正常
リンパ球を刺激する濃度で、白血病リンパ球を阻
害できるという能力は、他のいかなる種類の物質
にも知られていない独特の特性である。 本発明に係る物質は、RNAおよびDNAウイル
スの複製を特に阻害し、免疫反応を調節（促進）
し、かつ白血病リンパ球の発育を阻止するもので
ある。試験管内での実験によれば、0.01〜
150μg／mlの濃度範囲で活性を示し、哺乳動物に
対して有効な投与量は、0.05〜500mg／Kgである。
一連の化合物の特定のものについて、マウスにお
いて、1500mg／Kgのレベルで毒性がみられなかつ
た。 本発明に係る免疫促進剤は、たとえば、第５表
に示した、ウイルスに対する抵抗性を付与するた
めに使用される。

【表】

【表】 DIP・PAcBAによる生物活性の促進作用 第１表中に示した物質中、NPT15392および
15446は、本願と同日出願の発明者アルフレドジ
ナー・ソローラの特許出願において請求されてい
る新規化合物である。次表に示されたDIP・
PAcBA塩、即ち15428、15437、15447、15432、
15434、15444、15418および15410も新規である。
NPT15392、NPT15417、NPT15426がそれ自体
抗インフルエンザ作用を有することはすでに示し
た。NPT15392にDIP.PAcBAを加えて得た
15410は抗インフルエンザ作用を増強しない。
NPT15417の場合には、DIP・PAcBA塩を加え
て得られた15418は、抗インフルエンザ作用を増
強する。DIP・PAcBAの生物活性の増強性の概
要は次表に示す通りである。

【表】 投 与 本発明の化合物は、哺乳類に対して、１〜1000
mg／Kg投与することができるが、0.05mg／Kgで活
性があると思われる。NPT15410についてマウス
で調べたLD₅₀は、非経口的投与の場合には、
4300mg／Kgであり、皮下注射の場合には4900mg／
Kgであつた。NPT15392をマウスに1000mg／Kgで
投与したが、投薬によつて死亡したものはなかつ
た。 本化合物は、錠剤あるいはカプセルの形で人間
に投与することができ、また溶解性がよければ、
シロツプあるいは注射液の形で、難溶性であれ
ば、懸濁液として投与することができる。代表的
な医薬処方は次の通りである： カプセル： NPT15392 50−500mg アビセルPH101全量800mgになるに相当する量 （微結晶セルローズ） 懸濁液： 懸濁液は、医薬活性物質を含んだ懸濁剤によつ
て調製することができる。懸濁剤としては、たと
えばカルボキシメチルセルローズナトリウム塩、
アルギン酸ナトリウム、トラガカント、アビセル
RC−591（微結晶セルローズ）、メチルセルロー
ズ、ビーガム、キサンタンガムなどがあげられ
る。懸濁剤の他に、たとえば甘味剤、香味料、着
色剤、保存剤、保護コロイド、分散剤を添加して
もよい。 錠剤処方 NPT15392 50−500mg アビセルPH101 130mg 変性デンプン 20mg ステアリン酸マグネシウム（USP） 5.5mg ポリビニルピロリドン 22mg ステアリン酸（USP） 30mg シロツプ処方 NPT15392
25−125mg（あるいは溶解可能な最大量） コーンシユガー 3.25g 蒸留水 0.05g FDおよびＣレツド40 0.00175g サツカリンナトリウム 0.00250g アルコール（USP） 0.08g メチルパラベン（USP） 0.005g プロピルパラベン（USP） 0.001g グリセリン 0.31225g チエリーフレーバー 0.00825g フルーツフレーバー 0.00825g 蒸留水 適量添加 ５ml NPT15392、NPT15410を用いたマウスの生体内
処理：コンカナバリンＡによる脾細胞増殖の試験
管内刺激に及ぼす効果 本実験の目的は、化合物NPT−15392及び
NPT15410をマウスに投与し、これら動物から取
りだした脾臓細胞の幼若化促進物質、コンカナバ
リンＡによつて誘導される増殖に対する効果を試
験管内で評価することによつてこれら化合物の生
体内投与の影響を測定することにある。 方 法 生体内処理 ８〜９週令、体重18〜20gの９匹のバルブ／シ
ー（Balb／Ｃ）系雄性マウスを３群に分けた。
第１群には、日に２回（１日間）、午前と午后に
NPT15392、10mg／Kgを経口投与した。第２群は
NPT15410 20mg／Kgで同様に処理した。第３群
には、対照群には偽薬として生理食塩水を投与し
た。 試験管内脾臓細胞試験：細胞標本 翌日、各群を殺して脾臓を取り出しプールし
た。その脾臓を細かく切りきざみ、細胞を２mmの
グルタミンおよび抗生物質を補足したRPMI−
1640培地（グランド・アイランド・バイオロジカ
ルス）（Grand Island Biologicals）で洗浄した。
各標本の細胞濃度は、クールター（Coulter）計
数管で測定し、RPMI培地で５×10⁶細胞／mlに
調整した。 ミクロタイタープレート試験 ミクロタイター試験は、５×10⁵個の細胞と所
定濃度のConAとを含有、あるいはConAと化合
物とを含有する培養液（0.2ml）中で行われた。
すべての試験は１群につき６重複で行われ、細胞
のみを含むブランク試験と比較した。試験プレー
トを37℃、５％CO₂中で４日間培養した。培養の
最後の18〜20時間の間、³HTdR（10μCi／ml、
6Ci／mmol）0.5mlを各培養液に添加した。培養
液を複式自動細胞ろ集装置〔multiple
automatic sample harvester（MASH）〕により
細胞をろ集し、取りこまれた³HTdRをベツクマ
ン（Beckman）LS8000液体シンチレーシヨン計
数管で測定して、細胞の増殖を検定した。その結
果を、ConAあるいはConAと化合物とで処理し
た培養液の測定値をブランク培養液の測定値に対
する比として表にした。 化合物15392あるいは15410のいずれかで生体内
投与すると、試験管内での、最適以下の幼若化促
進物質濃度（5μg／ml）におけるConA刺激によ
る脾細胞の反応は増大する。このように、化合物
15410は、偽薬投与群の刺激率が55：１であるの
に対して、100：１にまで増大した。ConAを最
適な濃度（10μg／ml）にして、細胞を刺激して
も、化合物15392あるいは15410処理のいずれにお
いても有意差はみられなかつた。1μg／mlの
NPT15392および15410を用いて、ConA刺激細胞
に及ぼす影響を試験管内で試験した。両化合物
は、顕著なConA刺激を増大させる能力を有し、
特に最適以下の幼若化促進物質濃度（5μg／ml）
のときそれが著るしく、10μg／mlではこれより
小さかつた。ConA5μg／mlでは、NPT15392に
よる刺激は、ConAのみの場合の2.8倍であり、他
方、NPT15410による刺激は3.3倍である。 これらの結果は、脾細胞の増殖に及ぼすこれら
化合物の免疫調節効果を示す。これらの化合物を
動物に前投与すると、細胞の幼若化刺激に対する
感受性は昂進され、一方試験管内で化合物を細胞
と接触させ、ひきつづき幼若化刺激をおこなうと
細胞の増殖反応は、特に幼若化促進物質自体に対
する反応性が低いような場合に顕著に昂進され
る。 製造例 エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−６−アルコキシプリン（）の合成 化合物Ｉ（10mM）およびメタノール（50ml）
中のナトリウムメトキサイド（11mM）を６時間
加熱還流した。反応フラスコを冷却し、氷酢酸で
PH５に調整し、減圧下に蒸発乾固した。残渣を極
く少量の冷却水で取り出し、取後、真空乾燥し
た。 エリスロ−９−〔１−（１−ヒドロキシエチル）
ヘプチル〕−６−メチルカプトプリン（）の合
成 工程(1) 化合物Ｉ→化合物 エタノール（25ml）中の化合物Ｉ（10mM）お
よびチオ尿素（10mM）および無水酢酸ナトリウ
ム（11mM）を１時間還流した。冷却後、生成物
を取し、極く少量の水中に懸濁し、稀酢酸（20
％）でPH５に調整した。生成物を極少量の冷水で
洗滌した後過し、沈殿物を真空中で乾燥した。 工程(2) 化合物→化合物 2N NaoH（20ml）の化合物（10mM）溶液
を5゜に冷却した。ヨウ化メチル（20mM）を加
え、その混合物を、密栓したフラスコ中に入れ
て、15分間、5゜ではげしくふつた。この混合物を
機械的に室温（25゜）で３時間撹拌し、氷酢酸で
PH５に調整した。残渣を取し、冷水（15ml）で
２回洗滌した後、乾燥した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 〔ただし、ＸはOH、NH₂、またはSH基、R¹は
   水素原子、または１ないし８個の炭素原子のアル
   キル基、R²は水素原子またはメチル基、Ｙは （ここにR³およびR⁴は低級アルキル基、ｎは２
   ないし４の整数）なるアミンとｐ−アセトアミド
   安息香酸との塩を、またＺは１ないし10の数をし
   めす〕を有することを特徴とする化合物。 ２ R¹が水素、または１ないし８個の炭素原子
   のｎ−アルキル基であり、R³およびR⁴が１ない
   し４個の炭素原子のアルキル基である特許請求の
   範囲第１項記載の化合物。 ３ R¹が水素、または１ないし７個の炭素原子
   のｎ−アルキル基である特許請求の範囲第２項記
   載の化合物。 ４ R¹が水素、または１ないし６個の炭素原子
   のｎ−アルキル基である特許請求の範囲第３項記
   載の化合物。 ５ R¹がｎ−ヘキシル基である特許請求の範囲
   第４項記載の化合物。 ６ ＸがOH基である特許請求の範囲第１項記載
   の化合物。 ７ ＸがNH₂基である特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。 ８ ＸがSH基である特許請求の範囲第１項記載
   の化合物。 ９ R²が水素原子である特許請求の範囲第１項
   記載の化合物。 １０ ＸがOH基である特許請求の範囲第９項記
   載の化合物。 １１ ＸがNH₂基である特許請求の範囲第９項
   記載の化合物。 １２ ＸがSH基である特許請求の範囲第９項記
   載の化合物。 １３ R²がメチル基である特許請求の範囲第１
   項記載の化合物。 １４ ＸがOH基である特許請求の範囲第１３項
   記載の化合物。 １５ ＸがNH₂基である特許請求の範囲第１３
   項記載の化合物。 １６ ＸがSH基である特許請求の範囲第１３項
   記載の化合物。 １７ ＸがOH、NH₂、またはSH基であり、Ｙ
   がジメチルアミノイソプロパノールとｐ−アセト
   アミド安息香酸との塩である特許請求の範囲第２
   項記載の化合物。 １８ ＸがOH基である特許請求の範囲第１７項
   記載の化合物。 １９ R²が水素原子である特許請求の範囲第１
   ７項記載の化合物。 ２０ R₁がｎ−ヘキシル基である特許請求の範
   囲第１７項記載の化合物。 ２１ R¹がメチル基である特許請求の範囲第１
   ７項記載の化合物。 ２２ R²がメチル基である特許請求の範囲第１
   ７項記載の化合物。 ２３ R¹がｎ−ヘキシル基である特許請求の範
   囲第２２項記載の化合物。 ２４ R¹がメチル基である特許請求の範囲第２
   ２項記載の化合物。 ２５ ＸがOH、NH₂、またはSH基であり、R¹
   が水素原子である特許請求の範囲第２項記載の化
   合物。