JPH0313873B2 - - Google Patents
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- JPH0313873B2 JPH0313873B2 JP18392385A JP18392385A JPH0313873B2 JP H0313873 B2 JPH0313873 B2 JP H0313873B2 JP 18392385 A JP18392385 A JP 18392385A JP 18392385 A JP18392385 A JP 18392385A JP H0313873 B2 JPH0313873 B2 JP H0313873B2
- Authority
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- Japan
- Prior art keywords
- threonine
- pyruvate kinase
- strain
- isoleucine
- kinase activity
- Prior art date
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は、発酵法によるL−スレオニンの製造
方法に関するものである。 〔従来の技術〕 プロビデンシア属に属する微生物を用いる発酵
法によるL−スレオニンの製造法はまだ知られて
いない。ただし、バージーのマニユアル・オブ・
システマテイツクバクテリオロジー第1巻(1984
年)で、一部プロビデンシア属に分類変更された
旧ブロテウス属に属する微生物を用いた発酵法に
よるL−スレオニンの製造方法としてはL−イソ
ロイシン要求株を用いる方法(特公昭43−4440号
公報)やα−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸に耐
性を有しかつL−イソロイシン要求性を有する微
生物を用いる方法(日本農芸化学会講演要旨集
P.9(1970年))が知られている。 〔発明が解決しようとする問題点〕 しかしながら、従来の微生物を培養してL−ス
レオニンを生成せしめる方法は多量のアラニン及
びバリンを副生するため、L−スレオニンの生成
収率が低下し、また高純度のL−スレオニンを得
るためには、煩雑な精製工程を要し、工業的に実
用化するには不利であつた。 〔問題点を解決するための手段及び作用〕 本発明者らは、L−スレオニンの高い生産性を
維持すると同時に、アラニンおよび/またはバリ
ンの副生を制御する方法について鋭意検討した結
果、プロビデンシア属に属し、L−スレオニン生
産能を有する微生物のピルベートキナーゼ
(EC2.7.1.40)の活性を低下させることによりア
ラニンおよび/またはバリンの副生が効果的に制
御されることを見いだし本発明に到達した。 すなわち、本発明は、プロビデンシア
(Providencia)属に属し、L−スレオニン生産
能を有し、かつピルベートキナーゼ
(EC2.7.1.40)の活性が、その親株よりも低い変
異株を培養して、培養液中にL−スレオニンを生
成蓄積せしめ、前記培養液よりL−スレオニンを
採取することを特徴とする発酵法によるL−スレ
オニンの製造方法である。 プロビデンシア属に属する微生物のピルベート
キナーゼの活性が低下した変異株はこれまで分離
されたことがない。また、ブレビバクテリウム属
に属し、ピルベートキナーゼ欠損の変異株を用い
てL−リジンを製造することは公知(H.Ozaki
and I.Shiio;Agric.Biol.Chem.Vol.47,P.1569
−1576(1983))であるが、本発明のごとく、ピル
ベートキナーゼの活性が親株よりも低下した変異
株を用いることにより、L−スレオニンを著量生
成蓄積せしめ、かつ、アラニン、バリンの副生が
制御されることはまつたく知られていなかつた。 本発明において使用するピルベートキナーゼの
活性が親株よりも低い菌株としては、親株を基準
としてその70%以下、好ましくは50%以下にピル
ベートキナーゼ活性が低下したものが望ましく用
いられる。 たとえ、親株を基準としてその70%以下にピル
ベートキナーゼの活性が低下していなくとも、そ
の菌株の誘導されたもととなる野生株を基準とし
てその70%以下にピルベートキナーゼ活性が低下
していれば、本発明と同様な効果が達成されるも
のであるので、そのような菌株を用いることは本
発明の範囲内に包含される。 本発明で用いられる微生物はプロビデンシア属
(バージーのマニユアル・オブ・システマテイク
バクテリオロジー第1巻(1984)、第495〜496頁
に従う)に属する微生物である。また、L−スレ
オニン生成能向上に有効な形質、たとえばL−イ
ソロイシン、L−ロイシンに対する栄養要求性、
α−アミノ−β−ハイドロキシ吉草酸等スレオニ
ンアナログに対する耐性およびエチオニン等メチ
オニンアナログに対する耐性等のうち少なくとも
一つを既に付与された変異株であつてもよい。こ
れらの形質は通常の変異誘導操作により付与する
ことが可能である。ここでいう栄養要求性とは広
義の意味であり、不完全欠失型(いわゆるLeaky
型)も含むものである。さらにその要求物質の生
合成前駆物質で要求性が満足される場合も含むも
のである。 本発明で用いられる変異株の代表的なものとし
ては、例えば以下のものがある。 プロビデンシア・レトゲリFPSS25(FERMP−
8227)、(α−アミノ−β−ハイドロキシ吉草酸耐
性、エチオニン耐性、L−イソロイシン要求性な
いしleaky、L−ロイシン要求性、ピルベートキ
ナーゼweak)。この変異株はプロビデンシア・レ
トゲリTP3−105(α−アミノ−β−ハイドロキシ
吉草酸耐性、エチオニン耐性、L−イソロイシン
要求性ないしleaky、L−ロイシン要求性)から
誘導されたものである。 変異株の誘導は通常の変異処理法によつて比較
的容易に取得できる。すなわち、ピルベートキナ
ーゼ活性低下変異株を得るには、親株を紫外線照
射するかあるいは変異誘発剤(例えばN−メチル
−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン、エチ
ルメタンスルホン酸等)で処理した後、通常の最
少培地(例えばデイビスの最少培地)にごく微量
(例えば1μg/ml)のβ−フルオロピルビン酸を
含む平板培地にて30℃で3〜4日培養して生じた
小さなコロニーを釣菌分離する。そしてこれらの
菌株のうち、唯一炭素源をグルコースとした場合
には増殖不良で、唯一炭素源をピルビン酸あるい
はクエン酸にした場合には増殖良好な菌株を選定
すればよい。 本発明におけるL−スレオニン生産用の培地
は、炭素源、窒素源、無機イオンおよび必要に応
じてその他の有機微量成分を含有する通常の培地
である。 炭素源としては、グルコース、フラクトース、
でん粉およびセルロースの加水分解物、糖蜜等の
糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸等の如き
有機酸、グリセロールの如きアルコール類等を2
〜15%、窒素源として、酢酸アンモニウムの如き
有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウム、塩化ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウムの如き無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を0.5〜4.0%、有機微
量栄養素としては、L−イソロイシン等の被要求
物質が0.001〜0.4%、または必要に応じてコーン
ステイープリカー、ペプトン、酵母エキス等0〜
4%をそれぞれ適当量含有する培地が好適に用い
られる。これらの他にリン酸カリウム、硫酸マグ
ネシウム、硫酸第1鉄7水和物、硫酸マンガン4
−6水和物等が微量成分として少量添加される。 培養は、好気的条件で行なう。培養の間、培地
のPHは5から9に、温度は24〜37℃に調節し、48
〜120時間振とうまたは通気培養すれば好ましい
結果が得られる。 培養液よりL−スレオニンを採取するには、例
えば菌体を除去した培養液をPH2に塩酸で調製
したのち、強酸性カチオンイオン交換樹脂に通液
後、希アンモニア水で吸着成分を溶出し、脱アン
モニア後、濃縮する。これにアルコールを添加
し、冷却保存下で生成した結晶を集め、L−スレ
オニンを得ることができる。 〔実施例〕 以下、実施例によつて本発明を具体的に説明す
る。 実施例 1 (ピルベートキナーゼ活性低下変異株の分離) プロビデンシア・レトゲリTP3−105(α−アミ
ノ−β−ハイドロキシ吉草酸耐性、L−エチオニ
ン耐性、L−イソロイシン要求性ないしleaky.L
−ロイシン要求性)の菌体を通常の方法でN−メ
チル−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン処
理し、この細胞をβ−フルオロピルビン酸ナトリ
ウム1μg/ml添加した寒天平板培地(グルコー
ス0.5%、硫安0.1%、リン酸第1カリウム0.3%、
リン酸第2カリウム0.7%、硫酸マグネシウム7
水和物0.01%、L−イソロイシン0.005%、L−
ロイシン0.005%、寒天2%)に塗布した。次に、
30℃にて4〜5日培養し、生じたコロニーのうち
小さなコロニーを釣菌分離した。分離された変異
株の中でピルベートキナーゼ活性低下変異株と思
われるものを選定するため、以下の方法で検定し
た。 グルコース、ピルビン酸ナトリウム、クエン酸
三ナトリウム二水和物のいづれか一種を0.5%含
有する寒天平板培地(硫安0.1%、リン酸第1カ
リウム0.3%、リン酸第2カリウム0.7%、硫酸マ
グネシウム7水和物0.01%、L−イソロイシン
0.005%、L−ロイシン0.005%、寒天2%)にう
すく塗布し、30℃にて3〜4日培養してその生育
の有無を観察した。グルコース含有寒天平板培地
で生育が不良でピルビ酸ナトリウムあるいはクエ
ン酸三ナトリウム二水和物含有寒天培地で生育の
良好な変異株をピルベートキナーゼ活性低下変異
株であると予想し、実施例2に示すようにピルベ
ートキナーゼの活性測定を行つた。 実施例 2 (ピルベートキナーゼ活性測定) 実施例1で得た変異株(FPSS25)とその親株
(TP3−105)について活性測定を行つた。粗酵素
液の調整は以下の方法で行つた。上記菌株をそれ
ぞれ液体ブイヨン培地で30℃、16時間振とうして
前培養したのち、あらかじめ115℃、10分間蒸気
減菌した下記に示す主発酵用培地40mlを含む1
容三角フラスコに植継ぎ30℃、150rpm、振幅30
cmの条件下で90時間培養した。培養終了後、低速
遠心し炭酸カルシウムを除去し、上清を遠心分離
して菌体を得た。この菌体を生理食塩水で2度洗
浄した後、30%グリセロール含有50mMトリスー
塩酸緩衝液に懸濁し、超音波破壊後その遠心上清
を粗酵素液とした。 酵素活性測定法はGutmann et al.の方法(メ
ソード・イン・エンザイマテイクアナリシス第2
版第3巻第774−778頁(1974年))によつた。そ
の結果を第1表に示す。 発酵用培地(酵素活性測定用) グルコース(別減菌) 8% (NH4)2SO4 2.5% KH2PO4 0.1% MgSO4・7H2O 0.04% Fe 2ppm Mn 2ppm L−イソロイシン 0.0025% L−ロイシン 0.08% 酵母エキス 0.1% CaCO3(別減菌) 4% PH 7.0(KOHで中和)
方法に関するものである。 〔従来の技術〕 プロビデンシア属に属する微生物を用いる発酵
法によるL−スレオニンの製造法はまだ知られて
いない。ただし、バージーのマニユアル・オブ・
システマテイツクバクテリオロジー第1巻(1984
年)で、一部プロビデンシア属に分類変更された
旧ブロテウス属に属する微生物を用いた発酵法に
よるL−スレオニンの製造方法としてはL−イソ
ロイシン要求株を用いる方法(特公昭43−4440号
公報)やα−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸に耐
性を有しかつL−イソロイシン要求性を有する微
生物を用いる方法(日本農芸化学会講演要旨集
P.9(1970年))が知られている。 〔発明が解決しようとする問題点〕 しかしながら、従来の微生物を培養してL−ス
レオニンを生成せしめる方法は多量のアラニン及
びバリンを副生するため、L−スレオニンの生成
収率が低下し、また高純度のL−スレオニンを得
るためには、煩雑な精製工程を要し、工業的に実
用化するには不利であつた。 〔問題点を解決するための手段及び作用〕 本発明者らは、L−スレオニンの高い生産性を
維持すると同時に、アラニンおよび/またはバリ
ンの副生を制御する方法について鋭意検討した結
果、プロビデンシア属に属し、L−スレオニン生
産能を有する微生物のピルベートキナーゼ
(EC2.7.1.40)の活性を低下させることによりア
ラニンおよび/またはバリンの副生が効果的に制
御されることを見いだし本発明に到達した。 すなわち、本発明は、プロビデンシア
(Providencia)属に属し、L−スレオニン生産
能を有し、かつピルベートキナーゼ
(EC2.7.1.40)の活性が、その親株よりも低い変
異株を培養して、培養液中にL−スレオニンを生
成蓄積せしめ、前記培養液よりL−スレオニンを
採取することを特徴とする発酵法によるL−スレ
オニンの製造方法である。 プロビデンシア属に属する微生物のピルベート
キナーゼの活性が低下した変異株はこれまで分離
されたことがない。また、ブレビバクテリウム属
に属し、ピルベートキナーゼ欠損の変異株を用い
てL−リジンを製造することは公知(H.Ozaki
and I.Shiio;Agric.Biol.Chem.Vol.47,P.1569
−1576(1983))であるが、本発明のごとく、ピル
ベートキナーゼの活性が親株よりも低下した変異
株を用いることにより、L−スレオニンを著量生
成蓄積せしめ、かつ、アラニン、バリンの副生が
制御されることはまつたく知られていなかつた。 本発明において使用するピルベートキナーゼの
活性が親株よりも低い菌株としては、親株を基準
としてその70%以下、好ましくは50%以下にピル
ベートキナーゼ活性が低下したものが望ましく用
いられる。 たとえ、親株を基準としてその70%以下にピル
ベートキナーゼの活性が低下していなくとも、そ
の菌株の誘導されたもととなる野生株を基準とし
てその70%以下にピルベートキナーゼ活性が低下
していれば、本発明と同様な効果が達成されるも
のであるので、そのような菌株を用いることは本
発明の範囲内に包含される。 本発明で用いられる微生物はプロビデンシア属
(バージーのマニユアル・オブ・システマテイク
バクテリオロジー第1巻(1984)、第495〜496頁
に従う)に属する微生物である。また、L−スレ
オニン生成能向上に有効な形質、たとえばL−イ
ソロイシン、L−ロイシンに対する栄養要求性、
α−アミノ−β−ハイドロキシ吉草酸等スレオニ
ンアナログに対する耐性およびエチオニン等メチ
オニンアナログに対する耐性等のうち少なくとも
一つを既に付与された変異株であつてもよい。こ
れらの形質は通常の変異誘導操作により付与する
ことが可能である。ここでいう栄養要求性とは広
義の意味であり、不完全欠失型(いわゆるLeaky
型)も含むものである。さらにその要求物質の生
合成前駆物質で要求性が満足される場合も含むも
のである。 本発明で用いられる変異株の代表的なものとし
ては、例えば以下のものがある。 プロビデンシア・レトゲリFPSS25(FERMP−
8227)、(α−アミノ−β−ハイドロキシ吉草酸耐
性、エチオニン耐性、L−イソロイシン要求性な
いしleaky、L−ロイシン要求性、ピルベートキ
ナーゼweak)。この変異株はプロビデンシア・レ
トゲリTP3−105(α−アミノ−β−ハイドロキシ
吉草酸耐性、エチオニン耐性、L−イソロイシン
要求性ないしleaky、L−ロイシン要求性)から
誘導されたものである。 変異株の誘導は通常の変異処理法によつて比較
的容易に取得できる。すなわち、ピルベートキナ
ーゼ活性低下変異株を得るには、親株を紫外線照
射するかあるいは変異誘発剤(例えばN−メチル
−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン、エチ
ルメタンスルホン酸等)で処理した後、通常の最
少培地(例えばデイビスの最少培地)にごく微量
(例えば1μg/ml)のβ−フルオロピルビン酸を
含む平板培地にて30℃で3〜4日培養して生じた
小さなコロニーを釣菌分離する。そしてこれらの
菌株のうち、唯一炭素源をグルコースとした場合
には増殖不良で、唯一炭素源をピルビン酸あるい
はクエン酸にした場合には増殖良好な菌株を選定
すればよい。 本発明におけるL−スレオニン生産用の培地
は、炭素源、窒素源、無機イオンおよび必要に応
じてその他の有機微量成分を含有する通常の培地
である。 炭素源としては、グルコース、フラクトース、
でん粉およびセルロースの加水分解物、糖蜜等の
糖類、フマール酸、クエン酸、コハク酸等の如き
有機酸、グリセロールの如きアルコール類等を2
〜15%、窒素源として、酢酸アンモニウムの如き
有機アンモニウム塩、硫酸アンモニウム、塩化ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウムの如き無機アンモニウム塩、アンモニアガ
ス、アンモニア水、尿素等を0.5〜4.0%、有機微
量栄養素としては、L−イソロイシン等の被要求
物質が0.001〜0.4%、または必要に応じてコーン
ステイープリカー、ペプトン、酵母エキス等0〜
4%をそれぞれ適当量含有する培地が好適に用い
られる。これらの他にリン酸カリウム、硫酸マグ
ネシウム、硫酸第1鉄7水和物、硫酸マンガン4
−6水和物等が微量成分として少量添加される。 培養は、好気的条件で行なう。培養の間、培地
のPHは5から9に、温度は24〜37℃に調節し、48
〜120時間振とうまたは通気培養すれば好ましい
結果が得られる。 培養液よりL−スレオニンを採取するには、例
えば菌体を除去した培養液をPH2に塩酸で調製
したのち、強酸性カチオンイオン交換樹脂に通液
後、希アンモニア水で吸着成分を溶出し、脱アン
モニア後、濃縮する。これにアルコールを添加
し、冷却保存下で生成した結晶を集め、L−スレ
オニンを得ることができる。 〔実施例〕 以下、実施例によつて本発明を具体的に説明す
る。 実施例 1 (ピルベートキナーゼ活性低下変異株の分離) プロビデンシア・レトゲリTP3−105(α−アミ
ノ−β−ハイドロキシ吉草酸耐性、L−エチオニ
ン耐性、L−イソロイシン要求性ないしleaky.L
−ロイシン要求性)の菌体を通常の方法でN−メ
チル−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン処
理し、この細胞をβ−フルオロピルビン酸ナトリ
ウム1μg/ml添加した寒天平板培地(グルコー
ス0.5%、硫安0.1%、リン酸第1カリウム0.3%、
リン酸第2カリウム0.7%、硫酸マグネシウム7
水和物0.01%、L−イソロイシン0.005%、L−
ロイシン0.005%、寒天2%)に塗布した。次に、
30℃にて4〜5日培養し、生じたコロニーのうち
小さなコロニーを釣菌分離した。分離された変異
株の中でピルベートキナーゼ活性低下変異株と思
われるものを選定するため、以下の方法で検定し
た。 グルコース、ピルビン酸ナトリウム、クエン酸
三ナトリウム二水和物のいづれか一種を0.5%含
有する寒天平板培地(硫安0.1%、リン酸第1カ
リウム0.3%、リン酸第2カリウム0.7%、硫酸マ
グネシウム7水和物0.01%、L−イソロイシン
0.005%、L−ロイシン0.005%、寒天2%)にう
すく塗布し、30℃にて3〜4日培養してその生育
の有無を観察した。グルコース含有寒天平板培地
で生育が不良でピルビ酸ナトリウムあるいはクエ
ン酸三ナトリウム二水和物含有寒天培地で生育の
良好な変異株をピルベートキナーゼ活性低下変異
株であると予想し、実施例2に示すようにピルベ
ートキナーゼの活性測定を行つた。 実施例 2 (ピルベートキナーゼ活性測定) 実施例1で得た変異株(FPSS25)とその親株
(TP3−105)について活性測定を行つた。粗酵素
液の調整は以下の方法で行つた。上記菌株をそれ
ぞれ液体ブイヨン培地で30℃、16時間振とうして
前培養したのち、あらかじめ115℃、10分間蒸気
減菌した下記に示す主発酵用培地40mlを含む1
容三角フラスコに植継ぎ30℃、150rpm、振幅30
cmの条件下で90時間培養した。培養終了後、低速
遠心し炭酸カルシウムを除去し、上清を遠心分離
して菌体を得た。この菌体を生理食塩水で2度洗
浄した後、30%グリセロール含有50mMトリスー
塩酸緩衝液に懸濁し、超音波破壊後その遠心上清
を粗酵素液とした。 酵素活性測定法はGutmann et al.の方法(メ
ソード・イン・エンザイマテイクアナリシス第2
版第3巻第774−778頁(1974年))によつた。そ
の結果を第1表に示す。 発酵用培地(酵素活性測定用) グルコース(別減菌) 8% (NH4)2SO4 2.5% KH2PO4 0.1% MgSO4・7H2O 0.04% Fe 2ppm Mn 2ppm L−イソロイシン 0.0025% L−ロイシン 0.08% 酵母エキス 0.1% CaCO3(別減菌) 4% PH 7.0(KOHで中和)
【表】
実施例 3
第2表に示す各菌株をそれぞれ液体ブイヨン培
地で30℃、16時間振とうして前培養したのち、あ
らかじめ115℃、10分間蒸気減菌した下記組成の
主発酵用培地40mlを含む1容三角フラスコに植
継ぎ30℃、150rpm、振幅3cmの条件下でTP3−
105は90時間、FPSS25は120時間培養した。 発酵用培地(スレオニン発酵用) グルコース(別減菌) 8% (NH4)2SO4 2.5% KH2PO4 0.1% MgSO4・7H2O 0.04% Fe 2ppm Mn 2ppm L−イソロイシン 0.0025% L−ロイシン 0.08% CaCO3(別減菌) 4% PH 7.0(KOHで中和) 培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去した
液中の生成アミノ酸濃度を自動アミノ酸分析計
(日本電子JLC200A)で定量したところ第2表に
示すような結果を得た。
地で30℃、16時間振とうして前培養したのち、あ
らかじめ115℃、10分間蒸気減菌した下記組成の
主発酵用培地40mlを含む1容三角フラスコに植
継ぎ30℃、150rpm、振幅3cmの条件下でTP3−
105は90時間、FPSS25は120時間培養した。 発酵用培地(スレオニン発酵用) グルコース(別減菌) 8% (NH4)2SO4 2.5% KH2PO4 0.1% MgSO4・7H2O 0.04% Fe 2ppm Mn 2ppm L−イソロイシン 0.0025% L−ロイシン 0.08% CaCO3(別減菌) 4% PH 7.0(KOHで中和) 培養終了後、菌体、炭酸カルシウムを除去した
液中の生成アミノ酸濃度を自動アミノ酸分析計
(日本電子JLC200A)で定量したところ第2表に
示すような結果を得た。
本発明法によりアラニンおよび/またはバリン
の副生を制御し、高純度のL−スレオニンの生産
が可能となつた。煩雑な精製工程を要しないの
で、工業的に実用化するのに有利である。
の副生を制御し、高純度のL−スレオニンの生産
が可能となつた。煩雑な精製工程を要しないの
で、工業的に実用化するのに有利である。
Claims (1)
- 1 プロビデンシア(Providencia)属に属し、
L−スレオニン生産能を有し、かつピルベートキ
ナーゼ(EC2.7.1.40)の活性が、その親株よりも
低い変異株を培養して、培養液中にL−スレオニ
ンを生成蓄積せしめ、前記培養液よりL−スレオ
ニンを採取することを特徴とする発酵法によるL
−スレオニンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18392385A JPS6244191A (ja) | 1985-08-23 | 1985-08-23 | 発酵法によるl−スレオニンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18392385A JPS6244191A (ja) | 1985-08-23 | 1985-08-23 | 発酵法によるl−スレオニンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6244191A JPS6244191A (ja) | 1987-02-26 |
| JPH0313873B2 true JPH0313873B2 (ja) | 1991-02-25 |
Family
ID=16144175
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18392385A Granted JPS6244191A (ja) | 1985-08-23 | 1985-08-23 | 発酵法によるl−スレオニンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6244191A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1053181C (zh) * | 1996-10-18 | 2000-06-07 | 天津大学 | 从味精生产的离子交换洗脱液中回收丙氨酸的方法 |
-
1985
- 1985-08-23 JP JP18392385A patent/JPS6244191A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6244191A (ja) | 1987-02-26 |
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