JPH03161441A - メイラード反応阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野】

本発明はメイラード反応として知られたブドウ？等によ
，るタンパク質の劣化の防止に関し、詳しくはブドウ糖
がタンパク質に非酵素的に結合して生ずるアマドリ転移
生成物の生成阻害剤に関する。 〔従来の技術】 タンパク質がブドウ糖等の還元糖と非酵素的に反応（以
下「グリコシル化」という。）して褐色化する反応はメ
イラードによって１９１２年に報告［Ｍａｉｌｌａｒｄ
，　Ｌ．Ｃ．，　Ｃｏｍｐｔ．　Ｒｅｎｄ．　Ｓｏｃ．
　Ｂｉｏｌ．，７２：　５９９（１９１２）］　されて
以来、食品化学の分野においてはメイラード反応の名で
広く知られてきた。 すなわち、貯蔵又は加熱処理を受けた食品中でタンパク
質とブドウ糖とが反応して褐色化し、ついにはタンパク
質分子間に交差結合が生じることによりタンパク質の変
成が起こることが知られていた。その後、赤血球中にお
いてヘモグロビンの小成分であるＨｂｏ，。が糖尿病患
者において増加しているとのラーバーの報告（Ｒａｈｂ
ａｒ，　Ｓ．，　ＣＩｉｎ．Ｃｈｉｍ．　Ａｃｔａ，　
２２：　２９６（１９６８））を機に、生体内における
ブドウ糖とタンパク質との反応が注目され、Ｈｂ■。の
構造の解析を通じて、メイラード反応が生体内において
も起こっていることが確認されるに至った。 生体中でのメイラード反応の機構はブラウンリー等によ
って報告されている［Ｂｒｏｗｎｌｅｅ，　Ｍ．　ｅｔ
ａｌ．，　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　２３２：１６２９（１９
８６）コ。即ち、先ずブドウ糖の開環構造において存す
るアルデヒド基が蛋白質分子中のアミ７基と反応してシ
ソフ塩基を形成する。このシップ塩基は不安定であるた
め速やかに分子内転移反応を起こして非酵素的にアマド
リ転移生成物に変換される。タンパク質が長期間体内に
保持された場合、アマドリ転移生戊物は徐々に脱水反応
を起こして新たなブドウ糖誘導体へと変化し、これがタ
ンパク質分子等の種々の分子と不司逆的に交差結合して
架橋を形成することにより、主としてタンパク質の重合
体を形戊する。 このような進行したグリコシル化生成物は通常Ａ　Ｇ　
Ｅ　（Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｇｌｙｃｏｓｉｌａｔｉｏｎ
　Ｅｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｔ）と略称されるが、ＡＧＥの
生成に伴い、タンパク質の生物学的適応性が減弱し溶解
度が低下し、プロテアーゼの作用を受け難くなり、多く
は黄褐色化し蛍光を発するに至る。 メイラード反応は健常人においても認められる現象であ
るが、血糖上昇を特徴とする糖尿病に特に顕著に認めら
れる。また、メイラード反応は代謝回転の比較的緩徐な
タンパク質において顕著であり、例えばコラーゲンや水
晶体の構造タンパク質であるクリスタリン等において特
に著しい。また、糖尿病においては神経障害、白内障、
腎障害、網膜症、関節硬化症、アテローム性動脈硬化症
等種々の合併症が認められるが、これら糖尿病合併症は
老年期に多い疾病と酷似しており、正常な血糖値にあっ
ても、ブドウ糖が代謝回転の緩徐なタンパク質をグリコ
シル化して徐々にＡＧＥを形成するものと考えられてい
る。 この様な背景のもとで、生体内におけるメイラード反応
を阻害する物質の探索が行なわれつつあり、例えば、前
記ブラウンリー等によりアミ／グアニジンがインビトロ
（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）でメイラード反応を阻止すること
及び同物質の投与が糖尿病ラ．Ｌ．／７’ｌｍｈｎＦ＆
Ｎ令１−．七Ｆ士ＸＡｒ：ｃｍＢ＝ａメ：．ｆｌＴｌ？
ｔｌｌ−Ｊ−ス、１ｆτを発表している。また特開昭６
２−１４２１１４号明細書においてアミノグアニジン、
α−ヒドラジノヒスチジン及びリジンがアマドリ転移生
成物中の活性カルボニル基と反応してこれを封鎖し、Ａ
ＧＥ生戊を阻害することが示唆されており、特開昭６４
−５６６１４号明細書において、例えばチオセミカルバ
ジド類、１、３−ジアミノグアニジン、ペンゾイルヒド
ラジン等、及び特開昭６４８３０５９号明細書において
各種グアニジン誘導体がメイラード反応を抑制すること
が開示されている。

【発明が解決しようとする課題】

上記各特開昭明細書においては、メイラード反応の最終
生戊物であるＡＧＥの生戊量を指標としてメイラード反
応の阻害剤の検討を行なっているが、本発明者はメイラ
ード反応におけるタンパク質の重合の段階における直接
的原因物質であるアマドリ転移生成物の生成自体を阻害
することにより極めて効果的なメイラード反応の阻害が
期待で鳥　ス　Ｊ−　小卸占１１＼　こ　　　７　フ　
Ｖ　　Ｕ　粛二搾ノト津物ハル能「ｎ害を実験上の指標
とした。　タンパク質のりジン残基のε−アミノ基の非
酵素的グリコシル化によって生戊するアマドリ転移生成
物である　ε一Ｎ−（ｆｕｒｏｎｙｌ−ｍｅｔｈｙｌ）
−Ｌ−１ｙｓｉｎｅ　　（以下「フロシン」という。）
の測定値をタンパク質の非酵素的グリコシル化の指標と
なし得ることは、　Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ等［Ｊ．　Ｂ
ｒｕｇｇｅｍａｎｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｌｅｂｅｎｓｍ
．　Ｉｎｔｅｒｓ．　Ｆｏｒｓｃｈ．，　１３７：　ｐ
．１３７−１４３　（１９６８）］およびＦｉｎｏｔ等
［Ｐ．Ａ．　Ｆｉｎｏｔ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｅｘｐｅｒ
ｉｅｎｔｊａ，　２４：　ｐ．１０９７−＋０９９　（
１９６ｇ）］によって報告されている。本発明者はブド
ウ糖含有タンパク質水溶液を用いてフロンンを生戊させ
ることを試み、適当な生成条件を求めて検討を重ね、そ
れにより確立した条件に従って種々の物質のフロシン生
成阻害効果の有無および強さについて検討した。その結
果本発明者は、キノリンキノン類化合物に強力な効果を
有するものがあることを発見し、更に検索を重ねて、各
種の置換基を有するキノリンキノン類化合物及びその還
元型化合物に同等のフロンン生成阻害効果があることを
見いだすとともに、更にキノン又はキノワンキノン類か
ら誘導し得るその他の化合物にも同様に強力な効果があ
ることを発見して、メイラード反応阻害剤としての本発
明を完成した。

【問題点を解決するための手段】

すなわち本発明は、一般式（１） Ｘ ｔ ［式中、Ｘは　ヒドロキシル基、：Ｏ、・Ｎ−Ｒ３　又
は・Ｎ（＝Ｏ）−Ｒ３を表わし、 ＹはＸがヒドロキシル基又は＝０の場合には水素原子又
はヒドロキシル基を表わし、その他の場合には一〇−Ｒ
，　（ただし、−Ｒ３　とーＲ４とはヒドロキンル基を
有していてもよい同一の芳香６員環の隣接する２個の炭
素原子上の各結合手を表わす。）を表わし、 Ｚは、Ｘが　ヒドロキシル基の場合にはヒドロキシル基
を表わし、その他の場合にはＩＩＯを表わし、Ｗは水素
原子又はヒドロキシル基を表わし、・・・・・・は全体
で３個の共役二重結合を表わすか又は環形成炭素原子間
における２個の共役二重結合を表わし、 Ｒ，、Ｒ２は同一又は異なって水素原子、ヒドロキシル
基を有していてもよい低級アルキル基又は低級ゾルケニ
ル基、低級アルキル基又は低級アルケニξ′） ル基を有していてもよいアミ７基又はイミ７基、又は低
級アシル基を表わすか、あるいはＲ，，　Ｒ２は環形戊
炭素原子１及び２と共に含窒素５乃至６員環を形戊し、
該５乃至６員環は環形成炭素原子に低級アルキル基、ト
リフルオロメチル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基
又は低級アルフキシカルボニル基を有していてもよい。 コで示される化合物又はその医薬として許容し得る塩を
含有することを特徴とする、メイラード反応阻害剤であ
る。ここに、低級アルキルとしては炭素数１乃至５のも
のが適当であり、該アルキル基は直鎖型、分岐型または
環型を問わず用いられる。 一般式（１）で示される化合物としては、例えば後記表
ｌに示す各化合物が特に好ましいものとして挙げられる
。一般式（Ｉ）で示される化合物の医薬として許容し得
る塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等の
アルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のア
ルカリ土類金属塩、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機
酸の塩、又は酢酸、マレイン酸、等の有機酸の塩が特に
適すが、これらのものに限定されず、通常、医薬として
許容されている各種の塩が用いられる。 本発明のメイラード反応阻害剤はメイラード反応を原因
として生ずると考えられる前述の諸疾患の治療又は予防
に用いることができる。当該目的に供する場合、本発明
のメイラード反応阻害剤は経口的に又は非経口的に投与
することができる。 また、非経口的投与の場合には注射剤として全身的に又
は例えば点眼剤等として局所的に投与することもできる
。本発明のメイラード反応阻害剤の投与量は、一般式（
１）で示される化合物として、経口投与の場合には通常
、１日量１　ｍ　ｇ〜１００Ｏｍｇの範囲、より好まし
くは１日量５　ｍ　ｇ〜２０　０ｍｇの範囲で、注射の
場合には通常、１日全０．１ｍｇ−１００ｍｇの範囲、
より好ましくは１日量１　ｍ　ｇ〜５　０ｍｇの範囲で
、また点眼液剤の場合には通常、０．０５ｗ／ｖ％〜５
Ｗ／ｖ％の範囲、より好ましくは０，ｌｗ／ｖ％〜２，
　　ＯＷ　／　Ｖ％の範囲の液として、投与が行なわれ
るが、投与量はこれに必ずしも限定されるものではなく
、疾患の種類、重篤度及び治療計画等により適宜設定さ
れ得る。 本発明のメイラード反応阻害剤は、経口投与のための例
えば錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤若しくはカプセル剤等、
注射のための例えば水性若しくは非水性の注射用溶液剤
、注射用懸濁剤若しくは注射用乳濁剤等、又は点眼のた
めの例えば点眼液剤、もしくは点眼軟膏剤等の適宜の形
態にすることができる。 本発明のメイラード反応阻害剤を経口投与用錠剤の形態
とするには、例えばヒドロキンプ口ビルセルロース、結
晶セルロース、コーンスターチ、ボリビニルピロリドン
、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の希釈剤、ステア
リン酸マグネシウム等の滑沢剤、繊維素グルコン酸カル
シウム等の崩壊剤、グルタミン酸又はアスパラギン酸等
の溶解補助剤その他錠剤の製造に通常使用される成分を
加えることができる。本発明のメイラード反応阻害剤を
水性注射剤とするには例えばリン酸塩等の緩衝剤、クロ
ロブタノール等の保存剤、亜硫酸ナトリウム等の安定化
剤、塩化ナトリウム等の等張化剤その他注射剤の製造に
通常使用される戊分を加えることができる。本発明のメ
イラード反応阻害剤を点眼剤の形態とするには、例えば
、リン酸塩、ほう酸塩、酢酸塩等の緩衝剤、クロロブタ
ノール、塩化ペンザルコニウム等の保存剤、亜硫酸ナト
リウム又はエデト酸二ナトリウム等の安定化剤、塩化ナ
トリウム、塩化カリウム及びグリセリン等の等張化剤、
又はポリソルベート８０、シクロデキストリン等の溶解
補助剤、その他点眼剤の製造に通常使用される戊分を加
えることができる。

【作用】

一般式（１）で示される化合物又はその医薬として許容
し得る塩は、メイラード反応におけるタンパク質分子間
架橋形成の直接の原因物質たるアマドリ転移生戊物の生
戊自体を阻害するので、種々の糖尿病合併症、例えば冠
動脈性心疾患、抹消循環障害、脳血管障害、神経症、腎
症、動脈硬化、関節硬化症、白内障及び網膜症又は老化
により引き起こされる同種の疾患例えばアテローム性動
脈硬化症、冠動脈性心疾患、脳血管障害、老人性白内障
等の治療又は予防に用いられる。 （実験例） 本発明のメイラード反応阻害剤の効果は下記の通りの実
験により表１に記載した被験物質Ｔ−１〜Ｔ−１１につ
いて確認した。各被験物質はいずれも既知物質であり、
次の通りの方法にて入手した。 Ｔ−１：　特公昭３５−２２６９号の記載に従って４．
５，６．８−テトラヒドロキシキノリンー２−カルボン
酸を得、アルカリ性水溶ｌ夜中過酸化水素により酸化し
て得た。 Ｔ−２、　Ｔ　−　９　　：　　　Ｇ．Ｓ．Ｂａｊｗａ
　　ｅｔ　　ａｔ．．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｍｅｄｉｃ
ｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　１６：　ｐ．１３４
　（１９７３）に準じて２，５−ジメトキシアニリンよ
り合成。 Ｔ−３：　　Ｔ−２を常法により酸化して得た。 Ｔ−４、Ｔ−５及びＴ　−　６　：　　Ｌ．　Ｂａｘｔ
ｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｃ．Ｓ．　Ｐｅｒｋｉｎ　Ｉ
：　ｐ．２３７４　−　９　（１９７３）に準じて２，
５−ジメトキシアニリンより４．５．８−トリヒドロキ
シー２−メトキシカルボニルキノリンを合成し、常法に
より酸化、加水分解又は加水分解後酸化することにより
、それぞれ目的物を得た。 Ｔ−７、Ｔ　−　８　：　　Ｈ．　Ｌｉｎｋ　ｅｔ　ａ
ｌ．，　ＨｅｌｖｅｔｉｃａＣｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ
，　６５：　ｐ．２６４５　（１９８２）に準じて合或
して得た。 Ｔ−１０：　　市販試薬（レザズリン：　Ｎｏ．　１９
．９３０３：アルドリノチ社） Ｔ−１１：　　Ｔ−ｔ及び。−アミノフェノールより、
特公昭３６−１７８２号の記載に従って製した。 （実験方広） 牛血清アルブミン（Ｎｏ．　Ａ〜８０２２：シグマ社）
（以下ｒＢｓＡＪと略記する。）及びｐＨ７．３の５０
ｍＭ’Ｊン酸緩衝液及び表ｌに示す各被験物質及びアミ
ノグアニジンを用いて下記の通りのサンプル溶液を無閑
的に調製し、３７℃で４週間保存し、非酵素的グリコシ
ル化の進行に伴って生成するフロシンをＳｃｈｌｅｉｃ
ｈｅｒ等の方法［　Ｅ．　Ｓｃｈｌｅｉ−ｃｈｅｒ　ｅ
ｔ　ａｌ．，　Ｊ．　ＣＩｉｎ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，
　１９：　ｐ．８１−８７（１９８１）］に準じて高速
液体クロマトグラフィーにより定量した。すなわち、反
応後のサンプルを透析後、各１ｍｌを凍結乾燥し、６Ｎ
塩酸１ｍｌを加えて１００℃で２０時間加水分解を行い
、塩酸を留去した後、水１ｍｌを加えて０．４５μｍの
フィルターにて濾過し、高速液体クロマトグラフィー用
の試料とした。カラムにはＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソー）
を、濱離液には７ｍＭのリン酸溶液を用い、検出波長２
８０ｎｍ及び２５４ｎｍにての吸収ピークの比が３．９
：ｌであるピークをフロンンのピークとした。 （リン酸緩衝液中の組成） （正常群）：　ＢＳＡ　　２０ｍｇ／ｍｌ（対照群）：
　ＢＳＡ　　２０ｍｇ／ｍｌ＋ブドウ糖５０ｍＭ （被験群）：　ＢＳＡ　　２０ｍｇ／ｍｌ＋ブドウ糖５
０ｍＭ＋被験物質５ｍＭ 各群のサンプルのフロシン定量結果より、次の式を用い
て各被験物質のフロシン生戊阻害率を算出した。 阻害率（％）一（Ｃ−ｄ）÷（ｃ−ｎ）ＸＩＯＯ但し、
Ｃ：対照群のフロシンのピーク面積ｄ：彼験群のフロシ
ンのピーク面積 ｎ：正常群のフロシンのピーク面積 （結果） 次の表１に示すとおり、Ｔ−１〜Ｔ−１１の各被験物質
において、メイラード反応の公知の阻害剤たるアミ／グ
アニジンに較べて、それぞれ著しく強い阻害効果が認め
られた。 表１

【実施例】

本発明のメイラード反応阻害剤の製剤実施例を示す。但
し、戊分記載における略号は上記表１に記載の各化合物
を示す。 （実施例１）　内服錠 下記戊分を１錠分として常法により製造する。 必要に応じ糖衣を施す。 Ｔ−１１００ｍｇ 乳糖　　　　　　　　　　　８０ｍｇ コーンスターチ　　　　　　　１　７ｍｇステアリン酸
マグネシウム　　３ｍ （実施例２）　内服錠 下記成分を１錠分として常法により製造する。 必要に応じ糖衣を施す。 Ｔ−２５０ｍｇ コーンスターチ　　　　　　　９　０ｍｇ乳糖　　　　
　　　　　　　３　０ｍｇヒト゛ロキシフ゜０ヒ゜ルセ
ルロース　　　　　　　　　　２５ｍｇステアリン酸マ
グネシウム　　５ｍ （実施例３）　カプセル剤 下記成分を常法に従って混和し、顆粒状としたものをカ
プセルに各１個１００ｍｇ充填する。 Ｔ−５１０ｍｇ コーンスターチ　　　　　　４　５ｍｇ乳糖　　　　　
　　　　　　２　０ｍｇ結晶セルロース　　　　　　２
４ｍｇ 夕，，ク　　　　　　　　　　　０．５ｍｇステアリン
酸マグネシウム　０．５ｍ （実施例４）　注射剤 下記戊分を常法により混合して溶液とし、濾過した後バ
イアルに充填しオートクレープにて滅菌して製する。 Ｔ−７２０ｍｇ クロロブタノール　　　　　　５ｍｇ 注　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１ｍｌ（実
施例５）　点眼剤 下記の成分を常法により混合して溶液とし、漉過滅菌し
て製する。 Ｔ−１０　　　　　　　　　　０．５ｇほう酸　　　　
　　　　　１，Ｏｇ ほう砂　　　　　　　　　適ｆｆｉ（ｐ｝１７．０）塩
化ナトリウム　　　　　　０．２５ｇエデト酸二ナトリ
ウム　　　０．０２ｇクロロブタノール　　　　　０．
２ｇ ポリソルベート８０　　　　０．２ｇ 亜硫酸ナトリウム　　　　　０．２ｇ １００ｍｌ （実施例６）　眼軟膏剤 下記成分を常法により混和して眼軟膏剤を製する。 Ｔ−１１　　　　　　　　　　　　０．５ｇ白色ワセリ
ン　　　　　　　　１００

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｘはヒドロキシル基、＝Ｏ、＝Ｎ−Ｒ＿３又は
   ＝Ｎ（→Ｏ）−Ｒ＿３を表わし、 ＹはＸがヒドロキシル基又は＝Ｏの場合には水素原子又
   はヒドロキシル基を表わし、その他の場合には−Ｏ−Ｒ
   ＿４（ただし、−Ｒ＿３と−Ｒ＿４とはヒドロキシル基
   を有していてもよい同一の芳香６員環の隣接する２個の
   炭素原子上の各結合手を表わす。）を表わし、 Ｚは、Ｘがヒドロキシル基の場合にはヒドロキシル基を
   表わし、その他の場合には＝Ｏを表わし、Ｗは水素原子
   又はヒドロキシル基を表わし、￥……￥は全体で３個の
   共役二重結合を表わすか又は環形成炭素原子間における
   ２個の共役二重結合を表わし、 Ｒ＿１、Ｒ＿２は同一又は異なって水素原子、ヒドロキ
   シル基を有していてもよい低級アルキル基又は低級アル
   ケニル基、低級アルキル基又は低級アルケニル基を有し
   ていてもよいアミノ基又はイミノ基、又は低級アシル基
   を表わすか、あるいはＲ＿１、Ｒ＿２は環形成炭素原子
   １及び２と共に含窒素５乃至６員環を形成し、該５乃至
   ６員環は環形成炭素原子に低級アルキル基、トリフルオ
   ロメチル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基又は低級
   アルコキシカルボニル基を有していてもよい。］で示さ
   れる化合物又はその医薬として許容し得る塩を含有する
   ことを特徴とする、メイラード反応阻害剤。