JPH03170843A - 白血球の計測装置 - Google Patents
白血球の計測装置Info
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- JPH03170843A JPH03170843A JP2293503A JP29350390A JPH03170843A JP H03170843 A JPH03170843 A JP H03170843A JP 2293503 A JP2293503 A JP 2293503A JP 29350390 A JP29350390 A JP 29350390A JP H03170843 A JPH03170843 A JP H03170843A
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- Japan
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- tank
- measuring
- orifice
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- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/1031—Investigating individual particles by measuring electrical or magnetic effects
- G01N15/12—Investigating individual particles by measuring electrical or magnetic effects by observing changes in resistance or impedance across apertures when traversed by individual particles, e.g. by using the Coulter principle
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/34—Processes using foam culture
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- G01N2015/016—White blood cells
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- G01N2015/1019—Associating Coulter-counter and optical flow cytometer [OFC]
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- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1024—Counting particles by non-optical means
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- G—PHYSICS
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- G01N15/1404—Handling flow, e.g. hydrodynamic focusing
- G01N2015/1413—Hydrodynamic focussing
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、少なくとも一種の白血球の構成集団をカウン
トする計測装置に関する。より詳細には、光学的及び電
子的測定装置によるカウントを行なうための装置に関す
る。
トする計測装置に関する。より詳細には、光学的及び電
子的測定装置によるカウントを行なうための装置に関す
る。
従来技術及びその問題点
白血球の構成集団を分析及びカウントするための方法に
は、スライド上に拡げられ、必要ならば染色された血液
サンプルを顕微鏡により観察するという人手による方法
とは別に、現在、同時に数種のタイプの血液構成集団を
分類するのにより好ましく且つより正確である自動的方
法が存する。
は、スライド上に拡げられ、必要ならば染色された血液
サンプルを顕微鏡により観察するという人手による方法
とは別に、現在、同時に数種のタイプの血液構成集団を
分類するのにより好ましく且つより正確である自動的方
法が存する。
この自動的方法において、抵抗値の大きさの分析方法、
及び光学的分析方法の二種頽の方法がよく知られている
。
及び光学的分析方法の二種頽の方法がよく知られている
。
抵抗値による分析及び自動的カウント計数は、一定電流
が流され続けている電界を通過する細胞の特性に基づく
ものである。細胞が電界において抗する抵抗値により、
オームの法則に従う電流を一定値に維持するのに必要な
電圧が増加する。細胞の通過により発生するこのパルス
的な電圧は、抗する抵抗値、すなわち、形状と関係なし
に前記細胞の体積に比例する。この特性を利用した白血
球の構成集団を決定するためには、血液サンプルは、特
別の細胞化学的な薬品により処理される必要がある。該
薬品により、確実に一部の細胞が破壊され、前記処理が
特殊であるほど大きさの識別が正確に得られる。
が流され続けている電界を通過する細胞の特性に基づく
ものである。細胞が電界において抗する抵抗値により、
オームの法則に従う電流を一定値に維持するのに必要な
電圧が増加する。細胞の通過により発生するこのパルス
的な電圧は、抗する抵抗値、すなわち、形状と関係なし
に前記細胞の体積に比例する。この特性を利用した白血
球の構成集団を決定するためには、血液サンプルは、特
別の細胞化学的な薬品により処理される必要がある。該
薬品により、確実に一部の細胞が破壊され、前記処理が
特殊であるほど大きさの識別が正確に得られる。
前記特性を極通常に使用した識別方法は、“白血球スク
リーニング（ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）”と呼ばれ、リン
パ球、単核白血球（Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｔｅｓ）及び
顆粒性白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）という３個
の構成集団についての血液方式の概算値を得るための方
法である。
リーニング（ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）”と呼ばれ、リン
パ球、単核白血球（Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｔｅｓ）及び
顆粒性白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）という３個
の構成集団についての血液方式の概算値を得るための方
法である。
前記分析の実質的な部分は、識別作用を有する細胞溶解
試薬（Ｌｙｔｉｃ ｒｅａｇｅｎｔ）の使用に基づく。
試薬（Ｌｙｔｉｃ ｒｅａｇｅｎｔ）の使用に基づく。
この試薬のために、白血球膜は細胞質の形を保持できな
い。前記細胞は、その細胞質内に微粒を有しないので、
細胞核を覆っている細胞膜を備えている。顆粒性白血球
は、ゾル性細胞質（ｃｙｔｏｓｏｌ）の一部を保持する
。その微粒は、部分的にその形が崩れることを防止する
。
い。前記細胞は、その細胞質内に微粒を有しないので、
細胞核を覆っている細胞膜を備えている。顆粒性白血球
は、ゾル性細胞質（ｃｙｔｏｓｏｌ）の一部を保持する
。その微粒は、部分的にその形が崩れることを防止する
。
前記方法の主な欠点は、白血球はその構戊集団の最終の
形により区別されるのみであり、或る細胞、特に好酸球
及び好塩基球における前記細胞溶解試薬の作用が完全に
は制御されないことである。
形により区別されるのみであり、或る細胞、特に好酸球
及び好塩基球における前記細胞溶解試薬の作用が完全に
は制御されないことである。
その結果、部分的な又は全体的な重なりを生じ、識別を
不可能又は非常に困難なものとする。
不可能又は非常に困難なものとする。
更に、白血球の構成集団の分析及びカウントは、光学的
回折の測定原理、若しくは細胞の光学的な密度の測定原
理、又はこれら二つの原理に基づいている。
回折の測定原理、若しくは細胞の光学的な密度の測定原
理、又はこれら二つの原理に基づいている。
前者の場合、光線を通過する細胞は、入射光線の回折を
発生する。異なる角度における該光線の密度は、細胞の
大きさ、及び細胞によって吸収される光線の量によって
決まる。黒色の背景を有するディスクを中心に備えてい
るオプティカルコレクタ（ｏｐｔｉｃａｌ ｃｏｌｌｅ
ｃｔｏｒ）は、光学的通路と一直線上に設けられている
。伝達された光線は、前記ディスクにより停止され、回
折された光線は、細胞の回折に比例して応答する光感知
センサに集められる。
発生する。異なる角度における該光線の密度は、細胞の
大きさ、及び細胞によって吸収される光線の量によって
決まる。黒色の背景を有するディスクを中心に備えてい
るオプティカルコレクタ（ｏｐｔｉｃａｌ ｃｏｌｌｅ
ｃｔｏｒ）は、光学的通路と一直線上に設けられている
。伝達された光線は、前記ディスクにより停止され、回
折された光線は、細胞の回折に比例して応答する光感知
センサに集められる。
後者の場合、光線を通過する細胞が入射光線の吸収を生
じる。伝達された光線は、細胞の着色に応じた波長にお
いて濾過され、特別の波長において吸収された光線に比
例して応答する光感知センサにより集められる。
じる。伝達された光線は、細胞の着色に応じた波長にお
いて濾過され、特別の波長において吸収された光線に比
例して応答する光感知センサにより集められる。
細胞の回折は、細胞の吸収に関係し、また細胞の形状に
関係する。しかしながら、体積の測定が、特に白血球に
関して不正確であるため、細胞を人為的に球体として測
定させることが必要である。
関係する。しかしながら、体積の測定が、特に白血球に
関して不正確であるため、細胞を人為的に球体として測
定させることが必要である。
更に、非常に鮮明に着色された大きな細胞は、その実際
の大きさより小さく観察されるのは重要なことである。
の大きさより小さく観察されるのは重要なことである。
これら原理の組合せは、同じ細胞に対する、回折の値及
び着色濃度、異なる波長での回折の値又は異なる角度で
の回折の値を得るために使用される。特別の細胞化学的
な手段により、細胞の識別が得られる。
び着色濃度、異なる波長での回折の値又は異なる角度で
の回折の値を得るために使用される。特別の細胞化学的
な手段により、細胞の識別が得られる。
これらの原理を使用する装置は、光学的回折の測定は相
対的な安定性のみを有するという意味での光学的直線性
が大きい感度を被る。数多くの要因が、前記測定を特に
、読取り用タンクの損傷のように、雰囲気中の塵埃及び
前記装置内の温度及び湿度に対する光学的部品の感度の
ように破壊され易いものにしている。更に、良好に作動
する光学的装置に必要な高度の技術を装置に使用するこ
とにより、該装置は高コストとなる。
対的な安定性のみを有するという意味での光学的直線性
が大きい感度を被る。数多くの要因が、前記測定を特に
、読取り用タンクの損傷のように、雰囲気中の塵埃及び
前記装置内の温度及び湿度に対する光学的部品の感度の
ように破壊され易いものにしている。更に、良好に作動
する光学的装置に必要な高度の技術を装置に使用するこ
とにより、該装置は高コストとなる。
本発明によれば、前記方法を使用する装置において、こ
こに挙げた欠点を解消した装置、少なくとも一種の白血
球の構成集団、特に、多核性の好酸球についての確認、
カウント及び／又は分析を可能とする装置が提供される
。
こに挙げた欠点を解消した装置、少なくとも一種の白血
球の構成集団、特に、多核性の好酸球についての確認、
カウント及び／又は分析を可能とする装置が提供される
。
発明の概要
本発明の目的は、一定電流が維持され、電界を通過する
細胞の体積についての情報を得るための信号を送り出し
ている前記電界を通過する細胞の特性に基づいた抵抗値
による分析及びカウント方法を少なくとも部分的に使用
し、また、細胞を光照射域に通過させ、且つ細胞の吸収
についての情報を得るための信号を有するように前記細
胞に吸収される光線を光学的な読取装置に収集する装置
を倫えた光学的方法を少なくとも部分的に使用して、少
なくとも一種の白血球の構成集団をカウントする計測装
置であって、センサにより収集された光線が通過するｆ
ｆｌｌ１定タンクに、分析されるべきサンプルの流れを
噴射させるためのケースを備え、サンプルの流れが、少
なくとも二個の別の供給ダクトから前記測定タンク内に
、少なくとも２個のスリーブ作用をなす与圧された流体
により前記タンク内で流体力学的なスリーブ作用を受け
、第二のスリーブ流れが第一のスリーブ流れを覆うこと
、白血球の構成集団の抵抗値測定のための電極が前記噴
射ケースの構成部品であること、並びに、前記サンプル
の流れを準備し供給する回路、及びスリーブ作用をなす
流体が前記噴射ケースの上流側に設けられ、光学的セン
サ及び前記電極により送り出される信号を収集し処理す
るためのユニット装置が前記噴射ケースの下流側に設け
られ、これらの情報がコンピュータにより処理され、グ
ラフ及び／又はデジタル的に表示される計測装置を提供
することにある。
細胞の体積についての情報を得るための信号を送り出し
ている前記電界を通過する細胞の特性に基づいた抵抗値
による分析及びカウント方法を少なくとも部分的に使用
し、また、細胞を光照射域に通過させ、且つ細胞の吸収
についての情報を得るための信号を有するように前記細
胞に吸収される光線を光学的な読取装置に収集する装置
を倫えた光学的方法を少なくとも部分的に使用して、少
なくとも一種の白血球の構成集団をカウントする計測装
置であって、センサにより収集された光線が通過するｆ
ｆｌｌ１定タンクに、分析されるべきサンプルの流れを
噴射させるためのケースを備え、サンプルの流れが、少
なくとも二個の別の供給ダクトから前記測定タンク内に
、少なくとも２個のスリーブ作用をなす与圧された流体
により前記タンク内で流体力学的なスリーブ作用を受け
、第二のスリーブ流れが第一のスリーブ流れを覆うこと
、白血球の構成集団の抵抗値測定のための電極が前記噴
射ケースの構成部品であること、並びに、前記サンプル
の流れを準備し供給する回路、及びスリーブ作用をなす
流体が前記噴射ケースの上流側に設けられ、光学的セン
サ及び前記電極により送り出される信号を収集し処理す
るためのユニット装置が前記噴射ケースの下流側に設け
られ、これらの情報がコンピュータにより処理され、グ
ラフ及び／又はデジタル的に表示される計測装置を提供
することにある。
本発明の装置の特徴によれば、調整されたオリフィスを
その端部に形成している外側の噴射ノズルが、前記ケー
ス内側に装着され、前記第一のスリーブ作用をなす流体
を放射するために前記ノズルの内方室と前記測定タンク
とを連通させ得る。
その端部に形成している外側の噴射ノズルが、前記ケー
ス内側に装着され、前記第一のスリーブ作用をなす流体
を放射するために前記ノズルの内方室と前記測定タンク
とを連通させ得る。
有利には、前記外側の噴射ノズルの円錐状部分と前記ケ
ースの内側面との間に環状チャンバが形成され、該環状
チャンバは、前記測定タンクと連通し、少なくとも一つ
のダクトを経て与圧された流体が供給され得る。
ースの内側面との間に環状チャンバが形成され、該環状
チャンバは、前記測定タンクと連通し、少なくとも一つ
のダクトを経て与圧された流体が供給され得る。
本発明の装置の特徴によれば、前記外側の噴射ノズル内
に取付けられた内側の噴射ノズルが、ダクトから供給さ
れる与圧された流体の噴射のためのオリフィスを有し、
該オリフィスは、前記調整されたオリフィスと一直線上
となる位置において前記外側の噴射ノズル内側の内方室
に開口させることができる。
に取付けられた内側の噴射ノズルが、ダクトから供給さ
れる与圧された流体の噴射のためのオリフィスを有し、
該オリフィスは、前記調整されたオリフィスと一直線上
となる位置において前記外側の噴射ノズル内側の内方室
に開口させることができる。
本発明は、更に、一方にランプを設け、他方に該ランプ
により発せられ且つ光学的装置により焦点を合わされる
光線を受け取るセンサを設けた測定タンクの両サイドの
ガラス壁を備えることにより、前記光線は、分析される
血液溶液のスリーブ作用を受けた流れを通過し、前記測
定タンクを通過することができる。
により発せられ且つ光学的装置により焦点を合わされる
光線を受け取るセンサを設けた測定タンクの両サイドの
ガラス壁を備えることにより、前記光線は、分析される
血液溶液のスリーブ作用を受けた流れを通過し、前記測
定タンクを通過することができる。
更に、前記抵抗値を測定するための電極は、方において
、前記測定タンクを出る溶戒のスリーブ作用をなされた
流れのための前記排出ダクトの端部に形成され、他方に
おいて、分析されるべき溶液の噴射のための内側のノズ
ルに形成され得る。
、前記測定タンクを出る溶戒のスリーブ作用をなされた
流れのための前記排出ダクトの端部に形成され、他方に
おいて、分析されるべき溶液の噴射のための内側のノズ
ルに形成され得る。
本発明に従って有利に得られる分析結果によれば、前記
抵抗値の測定装置から送られる情報が、赤血球の基質、
血小板及び非常に大きな微小片を分離することにより、
少なくとも一つの低い閾値と高い閾値との間に亘って、
主な白血球の構戊集団を特徴づける大きさの分布曲線に
再現される。
抵抗値の測定装置から送られる情報が、赤血球の基質、
血小板及び非常に大きな微小片を分離することにより、
少なくとも一つの低い閾値と高い閾値との間に亘って、
主な白血球の構戊集団を特徴づける大きさの分布曲線に
再現される。
同様に、前記光学的測定装置から送られる情報が、吸収
の特に少ない細胞集団及び吸収の特に激しい細胞集団を
排除することにより、白血球の吸収特性を低い閾値と高
い閾値との間で位置付ける吸収分布曲線により再現され
得る。
の特に少ない細胞集団及び吸収の特に激しい細胞集団を
排除することにより、白血球の吸収特性を低い閾値と高
い閾値との間で位置付ける吸収分布曲線により再現され
得る。
更に、前記抵抗値のｍｌ定装置及び光学的測定装置から
送られる情報が、集団の分布についての代表的形状を表
示するため、マトリックス形式のグラフにより再現され
得る。
送られる情報が、集団の分布についての代表的形状を表
示するため、マトリックス形式のグラフにより再現され
得る。
実施例
以下、本発明の実施例につき添付図面を参照しつつ説明
する。
する。
第１図に示す装置は、その上部が円錘形状（２）をなし
全体が円筒形状の噴射注入型のケース（１）を備えてい
る。該ケース（１）のオリフィス（３）は、少なくとも
２つの対向する面においてガラス壁（４）で覆われてい
る。このガラス壁（４）間には、ノズルにより前記噴射
注入型ケースと連通し、且つ排出ダクト（６）にその上
部が開口している測定タンク（５）が設けられている。
全体が円筒形状の噴射注入型のケース（１）を備えてい
る。該ケース（１）のオリフィス（３）は、少なくとも
２つの対向する面においてガラス壁（４）で覆われてい
る。このガラス壁（４）間には、ノズルにより前記噴射
注入型ケースと連通し、且つ排出ダクト（６）にその上
部が開口している測定タンク（５）が設けられている。
ガラス壁（４）に取り付けられたプラグ（７）は、測定
タンク（５）を保持し、更に、前記排出ダクト（６）の
端部分（８）を支持するために設けられている。
タンク（５）を保持し、更に、前記排出ダクト（６）の
端部分（８）を支持するために設けられている。
噴射注入型ケース（１）の内部には、外側の噴射ノズル
（１０）がＯリング（９）により気密性を有して装着さ
れ、前記ノズル（１０）の円錘形をなす上端部（１１）
が測定タンク（５）の底部において開口している。ノズ
ル（１０）の端は、１調整されたオリフィス（１２）、
例えば孔の開いた宝石製とされ、ノズル（１０）の内方
室（１８）がタンク（５）と連通している。前記噴射注
入型ケースとノズル（１０）の円錘形の上端部（１１）
の外面との間において、環状チャンバ（１３）が形成さ
れ、該チャンバ（１３）は、測定タンク（５）と連通し
ている。該チャンバ（１３）には、ダクト（１４）を経
て与圧された流体が供給される。
（１０）がＯリング（９）により気密性を有して装着さ
れ、前記ノズル（１０）の円錘形をなす上端部（１１）
が測定タンク（５）の底部において開口している。ノズ
ル（１０）の端は、１調整されたオリフィス（１２）、
例えば孔の開いた宝石製とされ、ノズル（１０）の内方
室（１８）がタンク（５）と連通している。前記噴射注
入型ケースとノズル（１０）の円錘形の上端部（１１）
の外面との間において、環状チャンバ（１３）が形成さ
れ、該チャンバ（１３）は、測定タンク（５）と連通し
ている。該チャンバ（１３）には、ダクト（１４）を経
て与圧された流体が供給される。
外側の噴射ノズル（１０）の内部において、内側の噴射
ノズル（１６）が、Ｏ形リンク（１５）により気密を有
するように装着されている。該ノズル（１６）の上端部
（１７）は、円錘形状をなし、調節されたオリフィス（
１２）の下方に、外側ノズル（１０）の内方室（１８）
へ延びている。
ノズル（１６）が、Ｏ形リンク（１５）により気密を有
するように装着されている。該ノズル（１６）の上端部
（１７）は、円錘形状をなし、調節されたオリフィス（
１２）の下方に、外側ノズル（１０）の内方室（１８）
へ延びている。
内方室（１８）へは、ダクト（１つ）を経て与圧された
流体が供給される。同様にして、内側の噴射ノズル（１
６）は、前記調整されたノズル（１２）と一直線上に位
置する該ノズル（１６）のオリフィス（２１）を経て、
与圧された流体を噴射するためのダクト（１２）を備え
ている。２個のガラス壁（４）は、一方がランプ（２２
）により且つ他方がセンサ（２３）により包囲されてい
る。
流体が供給される。同様にして、内側の噴射ノズル（１
６）は、前記調整されたノズル（１２）と一直線上に位
置する該ノズル（１６）のオリフィス（２１）を経て、
与圧された流体を噴射するためのダクト（１２）を備え
ている。２個のガラス壁（４）は、一方がランプ（２２
）により且つ他方がセンサ（２３）により包囲されてい
る。
これより、ランプ（２２）により発せられ適切な光プロ
ジエクタ装置（２５）により焦点を合わせられた光線（
２４）は、ガラス壁（４）及び測定タンク（５）を通過
し、且つ他の光学システム（２６）を通過した後、セン
サにより集められ得る。
ジエクタ装置（２５）により焦点を合わせられた光線（
２４）は、ガラス壁（４）及び測定タンク（５）を通過
し、且つ他の光学システム（２６）を通過した後、セン
サにより集められ得る。
分析されるべき白血球を含んだ液は、中央部のダクト（
２０）から注入され、オリフィス（２１）を通過して内
方室（１８）に至る。同時に、“スリーブをなす流体（
ｓｌｅｅｖ１ｎｇ ｌｉｑｕｉｄ）”と呼ばれる与圧さ
れた流体が、ダクト（１９）から注入され、この流体は
、調整されたオリフィス（１２）の液を流体力学的に被
覆する作用をなす。この第一のスリーブからのスリーブ
作用をなす流れは、調整されたオフィス（１２）を通過
し、更ニ、ダクト（１４）から与圧された流体が注入さ
れることにより第二のスリーブ作用がなされ、前記環状
チャンバ（１３）の内側に向けられる。このようなスリ
ーブ作用は、オリフィス（１３）から測定タンク（５）
まで行なわれる。測定タンク（５）を通過する際におい
て、前記流れに垂直な方向に、白血球含有液の流れに集
中され焦点を合わせられる光線（２４）が通過する。測
定装置のこの流れの循環は、発生し得る気泡により停滞
しないように、垂直方向の軸に沿って底部から上部まで
行なわれる。このように二度に亘るスリーブ作用が行な
われることは、多くの点で有利である。
２０）から注入され、オリフィス（２１）を通過して内
方室（１８）に至る。同時に、“スリーブをなす流体（
ｓｌｅｅｖ１ｎｇ ｌｉｑｕｉｄ）”と呼ばれる与圧さ
れた流体が、ダクト（１９）から注入され、この流体は
、調整されたオリフィス（１２）の液を流体力学的に被
覆する作用をなす。この第一のスリーブからのスリーブ
作用をなす流れは、調整されたオフィス（１２）を通過
し、更ニ、ダクト（１４）から与圧された流体が注入さ
れることにより第二のスリーブ作用がなされ、前記環状
チャンバ（１３）の内側に向けられる。このようなスリ
ーブ作用は、オリフィス（１３）から測定タンク（５）
まで行なわれる。測定タンク（５）を通過する際におい
て、前記流れに垂直な方向に、白血球含有液の流れに集
中され焦点を合わせられる光線（２４）が通過する。測
定装置のこの流れの循環は、発生し得る気泡により停滞
しないように、垂直方向の軸に沿って底部から上部まで
行なわれる。このように二度に亘るスリーブ作用が行な
われることは、多くの点で有利である。
第一のスリーブ作用は、形成された流れの細かさ及び希
釈割合のために、カウント計測のためのオリフィスを通
過する細胞の流れを完全に集中させ、数個の細胞が一緒
に通過することを防止する。更に、カウント計測用オリ
フィスの感知領域における細胞のバウンシング、及びエ
ッジ効果による細胞変形の現象が解消される。
釈割合のために、カウント計測のためのオリフィスを通
過する細胞の流れを完全に集中させ、数個の細胞が一緒
に通過することを防止する。更に、カウント計測用オリ
フィスの感知領域における細胞のバウンシング、及びエ
ッジ効果による細胞変形の現象が解消される。
第二のスリーブ作用は、オリフィスを離れる流れを包囲
し、光の通過するタンク内の経路全体に亘って該流れを
集中させ安定した状態に保持する。
し、光の通過するタンク内の経路全体に亘って該流れを
集中させ安定した状態に保持する。
このようにして、異なる角度及び異なるレベルで読取り
を数回行なうことができる。
を数回行なうことができる。
第二のスリーブ作用は、流れを不安定にし且つ光学的な
品質を低下するエッジ効果による乱れ及び損傷の危険を
解消している幅鷹の内部通過路を有する、光学的な読取
り用のタンクを使用することを可能にしている。
品質を低下するエッジ効果による乱れ及び損傷の危険を
解消している幅鷹の内部通過路を有する、光学的な読取
り用のタンクを使用することを可能にしている。
大型のタンクの使用は、ガラス壁（４）上の流れの速度
についての問題を解消する。すなわち、流れの速度が遅
いことによる前記ガラス壁の浸食、前記スリーブの速度
が流れの速度と等しくなければならないキャピラリイ形
の光学的な読取り用タンクにおいて長期間に亘って観測
され得るような浸食の問題が減少する。カウント用オリ
フィスを位置決めすることにより形成される流れの位置
決めに対し、これら特性が付加されることは、前記流れ
に対し光線の直進性を非常に安定したものとする。タン
クを除去しても、再組み立て後の光学的な調整は全く必
要とされない。
についての問題を解消する。すなわち、流れの速度が遅
いことによる前記ガラス壁の浸食、前記スリーブの速度
が流れの速度と等しくなければならないキャピラリイ形
の光学的な読取り用タンクにおいて長期間に亘って観測
され得るような浸食の問題が減少する。カウント用オリ
フィスを位置決めすることにより形成される流れの位置
決めに対し、これら特性が付加されることは、前記流れ
に対し光線の直進性を非常に安定したものとする。タン
クを除去しても、再組み立て後の光学的な調整は全く必
要とされない。
体積のカウント及び調査は抵抗値を測定することにより
行なわれる。このためには、オリフィス（１２）の両側
に設けられた２個の電極、すなわち、排出ダクトの端部
（８）より形成されたアノード、及び内側噴射ノズル（
１６）から形成されたカソードの端子間に電流が印加さ
れる。白血球のカウントは、調整されたオ−リフィス（
１２）を液が通過する間に行なわれ、該オリフィスを通
過する各細胞は、前記電極とされる端部（８）及び噴射
ノズル（１６）間に位置する媒体の抵抗値の増加を生じ
させ、前記白血球の体積に比例した電圧パルスを発生さ
せる。光学的な測定、すなわち、白血球の吸収度の測定
は、分析されるべき流れに垂直にタンク（５）を通過す
る光線（２４）により測定される。光線（２４）は、ラ
ンプ（２２）により与えられ、該ランプのエネルギーは
、細胞の吸収に対応した波長のフィルタを通過する。窓
は、ダイヤフラムに集中され、該ダイヤフラムの後部に
光プロジエクタ装置（２５）が設けられ、白血球含有液
の流れに焦点が合わされている。岐の流れが通過する光
線の窓のイメージは、コリメー夕を通過し、更に他の集
光装置（２６）により、増幅回路に接続されている端子
を有する光ダイオード（２３）に伝えられる。
行なわれる。このためには、オリフィス（１２）の両側
に設けられた２個の電極、すなわち、排出ダクトの端部
（８）より形成されたアノード、及び内側噴射ノズル（
１６）から形成されたカソードの端子間に電流が印加さ
れる。白血球のカウントは、調整されたオ−リフィス（
１２）を液が通過する間に行なわれ、該オリフィスを通
過する各細胞は、前記電極とされる端部（８）及び噴射
ノズル（１６）間に位置する媒体の抵抗値の増加を生じ
させ、前記白血球の体積に比例した電圧パルスを発生さ
せる。光学的な測定、すなわち、白血球の吸収度の測定
は、分析されるべき流れに垂直にタンク（５）を通過す
る光線（２４）により測定される。光線（２４）は、ラ
ンプ（２２）により与えられ、該ランプのエネルギーは
、細胞の吸収に対応した波長のフィルタを通過する。窓
は、ダイヤフラムに集中され、該ダイヤフラムの後部に
光プロジエクタ装置（２５）が設けられ、白血球含有液
の流れに焦点が合わされている。岐の流れが通過する光
線の窓のイメージは、コリメー夕を通過し、更に他の集
光装置（２６）により、増幅回路に接続されている端子
を有する光ダイオード（２３）に伝えられる。
光線が通過する各白血球は、光線を吸収する度合いに比
例して前記光ダイオードに測定される光線の強度を減少
させる。このことにより、白血球の光学的な密度に比例
した増幅が行なわれ、前記増幅回路の端子間に電気的パ
ルスを発生させる。
例して前記光ダイオードに測定される光線の強度を減少
させる。このことにより、白血球の光学的な密度に比例
した増幅が行なわれ、前記増幅回路の端子間に電気的パ
ルスを発生させる。
第１図示す凋整されたオリフィス（１２）は、前記タン
クを通過する光線（２４）から若干間隔をおいて設けら
れている。このように、光学的な測定のため焦点が合わ
せられるポイントからオリフィス（１２）を離している
間隔が、前記抵抗値及び光学的パルスの時間的ずれを発
生させることは重要である。この時間的ずれを一定に制
御し、この時間的ずれにより、流体素子工学の実用面に
おいて示される誤差を最少とすることを可能にしている
。
クを通過する光線（２４）から若干間隔をおいて設けら
れている。このように、光学的な測定のため焦点が合わ
せられるポイントからオリフィス（１２）を離している
間隔が、前記抵抗値及び光学的パルスの時間的ずれを発
生させることは重要である。この時間的ずれを一定に制
御し、この時間的ずれにより、流体素子工学の実用面に
おいて示される誤差を最少とすることを可能にしている
。
微細な気泡は、気泡が対向し、細胞により発生する標準
的な時間的ずれより大きい前記抵抗値および光学的カウ
ントにおける時間的ずれを生じる垂直方向の流れに対す
る抵抗値によりカウントから当然除外されている。
的な時間的ずれより大きい前記抵抗値および光学的カウ
ントにおける時間的ずれを生じる垂直方向の流れに対す
る抵抗値によりカウントから当然除外されている。
光学的測定の前に、血球は、調整されたオリフィス（１
２）を通過することにより抵抗値を利用してｉｌｌ定さ
れなければならない。噴射される液体により構成された
スリーブが有し得る微小片は、抵抗値によるパルスを発
生しないため、カウント用のオリフィスにより計測され
得ない。
２）を通過することにより抵抗値を利用してｉｌｌ定さ
れなければならない。噴射される液体により構成された
スリーブが有し得る微小片は、抵抗値によるパルスを発
生しないため、カウント用のオリフィスにより計測され
得ない。
前述された装置に血液を噴射する前に、最も自然に有り
得る状態に白血球を主として含んでいる液とするように
、分析されるべき血液サンプルを準備するのが望ましい
。必要ならば、細胞化学的な手段を与えることにより、
細胞は特別に染色され得る。
得る状態に白血球を主として含んでいる液とするように
、分析されるべき血液サンプルを準備するのが望ましい
。必要ならば、細胞化学的な手段を与えることにより、
細胞は特別に染色され得る。
第２図は、第１図の装置と組み合わせて示されたｉｆｌ
ｌ定プロセスの回路図である。ケース（１）が略図的に
示され、ランプ（２２）、光プロジエクタ装置（２５）
、集光システム（２６）および受光用ダイオード（２３
）を備えている、ケース（１）と協働する光学的アツセ
ンブリイが示されている。血液は、ダクト（２０）によ
りケース（１）に供給され、スリーブ作用をなす流体は
、準備された後、流体の配分用アツセンブリ（２７）か
ら供給されてダクト（１４）および（１つ）により供給
される。流体自身は、混合加熱ユニット（２８）から送
られる血液サンプルとともに供給？れる。ケース（１）
に設けられた電極は、アナログ抵抗値測定回路（２つ）
において受け取った白血球の体積に比例した信号を送り
出す。この信号はデジタルデータ進行ユニット（３０）
においてデジタル値に変換される。光ダイオード（２３
）は、アナログ吸収測定回路（３１）において受け取ら
れた白血球の光学的密度に比例した信号を送り出す。こ
の信号は、前記ユニット（３０）に進行し、そしてグラ
フ（３２）又はデジタル（３３）の結果を送り出す。同
じサンプルから得■れた信号は、コンピュータにより処
理され、予め決められた一定時間内にカウント計測され
た白血球の数、該白血球各々の体積及び光学的密度の比
較値を測定する。
ｌ定プロセスの回路図である。ケース（１）が略図的に
示され、ランプ（２２）、光プロジエクタ装置（２５）
、集光システム（２６）および受光用ダイオード（２３
）を備えている、ケース（１）と協働する光学的アツセ
ンブリイが示されている。血液は、ダクト（２０）によ
りケース（１）に供給され、スリーブ作用をなす流体は
、準備された後、流体の配分用アツセンブリ（２７）か
ら供給されてダクト（１４）および（１つ）により供給
される。流体自身は、混合加熱ユニット（２８）から送
られる血液サンプルとともに供給？れる。ケース（１）
に設けられた電極は、アナログ抵抗値測定回路（２つ）
において受け取った白血球の体積に比例した信号を送り
出す。この信号はデジタルデータ進行ユニット（３０）
においてデジタル値に変換される。光ダイオード（２３
）は、アナログ吸収測定回路（３１）において受け取ら
れた白血球の光学的密度に比例した信号を送り出す。こ
の信号は、前記ユニット（３０）に進行し、そしてグラ
フ（３２）又はデジタル（３３）の結果を送り出す。同
じサンプルから得■れた信号は、コンピュータにより処
理され、予め決められた一定時間内にカウント計測され
た白血球の数、該白血球各々の体積及び光学的密度の比
較値を測定する。
処理された血液の溶液が測定装置（１）を通過する場合
、調整されたオリフィス（１２）を通過する際に各細胞
は、交互にその大きさに比例したパルスを発生し、そし
て、光線（２４）が通過する間にその吸収に比例したパ
ルスを発生する。同一の細胞につき、体積値及び吸収値
が貯えられ、体積及び吸収を合わせた結果がヒストグラ
ムの形に分配される。
、調整されたオリフィス（１２）を通過する際に各細胞
は、交互にその大きさに比例したパルスを発生し、そし
て、光線（２４）が通過する間にその吸収に比例したパ
ルスを発生する。同一の細胞につき、体積値及び吸収値
が貯えられ、体積及び吸収を合わせた結果がヒストグラ
ムの形に分配される。
例えば、第３図のように、縦軸に数量、横軸に体積を表
す大きさの分布曲線において、３個の顕著な構戊集団が
示されている。最も左側の構成集団は、小さな微小片に
関するものであり、赤血球の基質、赤血球からのヘモグ
ロビンの遊離によるもの及び血小板から主として形或さ
れた背景における外乱であると推定される。
す大きさの分布曲線において、３個の顕著な構戊集団が
示されている。最も左側の構成集団は、小さな微小片に
関するものであり、赤血球の基質、赤血球からのヘモグ
ロビンの遊離によるもの及び血小板から主として形或さ
れた背景における外乱であると推定される。
図中、他の２個の右側の構成集団は、分析されたサンプ
ルの白血球の全体であると推定される。
ルの白血球の全体であると推定される。
更に、例えば、第４図に示す吸収の分布四線において、
第一の構成集団は、小さな又は若干吸収された細胞から
形成され左側において得られ、第二の構成集団は平均的
な吸収を有した細胞から形成され中央において得られ、
第三の構成集団は吸収が大きい細胞から形成され右側に
おいて得られる。
第一の構成集団は、小さな又は若干吸収された細胞から
形成され左側において得られ、第二の構成集団は平均的
な吸収を有した細胞から形成され中央において得られ、
第三の構成集団は吸収が大きい細胞から形成され右側に
おいて得られる。
例えば、第５図に示すマトリックスグラフにより示され
たものにおいて、構成集団の分布は、Ｘ軸で大きさを表
し、Ｙ軸で吸収を示している。この表示は、生物分類学
的な手法による白血球の調査を可能にし、少なくとも一
種類の白血球の構成集団の分離を可能にする手掛かりと
し得る。Ｂｄｆはａｌｌ定の背景における外乱（赤血球
の基質及び血小板）、Ｌはリンパ球、Ｍは単球（ Ｍｏ
ｎｏｃｙｔｅｓ）、ＰＮは多核性の好中球（ｎｅｕｔｒ
ｏｐｈｆ ！ｓ）、ＰＥは、多核性の好酸球（ｅｏｓｉ
ｎｏｐｈｉ Ｉｓ）、ＰＢは、多核性の好塩基球（ ｂ
ａｓｏｐｈｉ Ｉｓ）を表している。
たものにおいて、構成集団の分布は、Ｘ軸で大きさを表
し、Ｙ軸で吸収を示している。この表示は、生物分類学
的な手法による白血球の調査を可能にし、少なくとも一
種類の白血球の構成集団の分離を可能にする手掛かりと
し得る。Ｂｄｆはａｌｌ定の背景における外乱（赤血球
の基質及び血小板）、Ｌはリンパ球、Ｍは単球（ Ｍｏ
ｎｏｃｙｔｅｓ）、ＰＮは多核性の好中球（ｎｅｕｔｒ
ｏｐｈｆ ！ｓ）、ＰＥは、多核性の好酸球（ｅｏｓｉ
ｎｏｐｈｉ Ｉｓ）、ＰＢは、多核性の好塩基球（ ｂ
ａｓｏｐｈｉ Ｉｓ）を表している。
本発明は、前記実施例及び前記分析方法に限定されるも
のではない。特に、光学的フィルタをフィルタホイール
と置換することにより、他の細胞のタイプを分析するた
めの多くの色付けを読み取ることが可能となる。
のではない。特に、光学的フィルタをフィルタホイール
と置換することにより、他の細胞のタイプを分析するた
めの多くの色付けを読み取ることが可能となる。
更に、光学的測定用タンクにつき説明が前述されたが、
種々の構造においてこのタンクを通過する細胞の光線の
回折を測定することが可能である。
種々の構造においてこのタンクを通過する細胞の光線の
回折を測定することが可能である。
前記タンクを通過する光線と一直線をなす位置に単数又
は複数のセンサが設けられ前記タンクに焦点が合わされ
る。数段階の角度において回折及び総合的な回折が測定
され、これにより収集された情報により、細胞の相対的
な大きさ、又は異なる角度において２つの回折が測定さ
れた場合は大きさ及び相対的な光学的な密度のいずれか
を測定することが可能にされる。
は複数のセンサが設けられ前記タンクに焦点が合わされ
る。数段階の角度において回折及び総合的な回折が測定
され、これにより収集された情報により、細胞の相対的
な大きさ、又は異なる角度において２つの回折が測定さ
れた場合は大きさ及び相対的な光学的な密度のいずれか
を測定することが可能にされる。
他の例では、通過するレーサー光線と９０゜をなす位置
において測定タンクに焦点を合わせられたセンサアッセ
ンブリを設けることにより細胞の発する螢光を測定する
ことができる。サンプルを準備するためのアツセンブリ
は、所望の細胞の螢光を得るように採用されなければな
らない。こうして得られた測定値は、抵抗値及びその螢
光の強度により細胞の体積を測定することが可能である
。
において測定タンクに焦点を合わせられたセンサアッセ
ンブリを設けることにより細胞の発する螢光を測定する
ことができる。サンプルを準備するためのアツセンブリ
は、所望の細胞の螢光を得るように採用されなければな
らない。こうして得られた測定値は、抵抗値及びその螢
光の強度により細胞の体積を測定することが可能である
。
更に、他の例では、同じ原理の測定装置により、電極に
印加されカウント用のオリフィスを通過して流れる電流
は、高周波電流として得られる。この電流は、細胞の内
部構成と同じもの、すなわち、細胞の外部の被Ｎ（細胞
質）に対し密度のより濃い細胞核の相対的な大きさの情
報が収集されたパルスの形に応じて得られる。
印加されカウント用のオリフィスを通過して流れる電流
は、高周波電流として得られる。この電流は、細胞の内
部構成と同じもの、すなわち、細胞の外部の被Ｎ（細胞
質）に対し密度のより濃い細胞核の相対的な大きさの情
報が収集されたパルスの形に応じて得られる。
前記実施例の組合せにより、測定タンクを通過する細胞
の流れに対し、光学的な密度と組み合わされた各細胞の
体積全体及び／又は螢光の強度を得ることが可能とされ
る。また、この組合せにより、細胞の内部構造について
の情報、すなわち、細胞核の相対的な大きさ、及び／又
はその相対的な形又はその一定不変の大きさを得ること
が可能とされる。
の流れに対し、光学的な密度と組み合わされた各細胞の
体積全体及び／又は螢光の強度を得ることが可能とされ
る。また、この組合せにより、細胞の内部構造について
の情報、すなわち、細胞核の相対的な大きさ、及び／又
はその相対的な形又はその一定不変の大きさを得ること
が可能とされる。
図は、いずれも本発明の実施例に関するものであり、第
１図は噴射ケースの断面図、第２図は本発明による装置
及び該装置と協働する情報処理回路を図式的に示す説明
図、第３図は分析された白血球の大きさを示す分布曲線
のグラフ、第４図は分析された白血球の吸収を示す分布
曲線のグラフ、第５図は分布領域を示すマトリックスグ
ラフである。 （１）・・・・・・噴射ケース、（３）・・・・・・オ
リフィス（４）・・・・・・・・・ガラス壁、（５）・
・・・・・測定タンク（６）・・・・・・・・・排出ダ
クト （１０）・・・・・・外側の噴射ノズル（１２）・・・
・・・調整されたオリフィス（１４）、（１９）、（２
０）・・・ダクト（１５）・・・・・・０リンク （２２）・・・・・・ランプ （２５）・・・・・・光プロジェクタ装置（２６）・・
・・・・集光装置 （以 上） ＦＩＧ．１
１図は噴射ケースの断面図、第２図は本発明による装置
及び該装置と協働する情報処理回路を図式的に示す説明
図、第３図は分析された白血球の大きさを示す分布曲線
のグラフ、第４図は分析された白血球の吸収を示す分布
曲線のグラフ、第５図は分布領域を示すマトリックスグ
ラフである。 （１）・・・・・・噴射ケース、（３）・・・・・・オ
リフィス（４）・・・・・・・・・ガラス壁、（５）・
・・・・・測定タンク（６）・・・・・・・・・排出ダ
クト （１０）・・・・・・外側の噴射ノズル（１２）・・・
・・・調整されたオリフィス（１４）、（１９）、（２
０）・・・ダクト（１５）・・・・・・０リンク （２２）・・・・・・ランプ （２５）・・・・・・光プロジェクタ装置（２６）・・
・・・・集光装置 （以 上） ＦＩＧ．１
Claims (12)
- （１）一定電流が維持され、電界を通過する細胞の体積
についての情報を得るための信号を送り出している前記
電界を通過する細胞の特性に基づいた抵抗値による分析
及びカウント方法を少なくとも部分的に使用し、また、
細胞を光照射域に通過させ、且つ細胞の吸収についての
情報を得るための信号を有するように前記細胞に吸収さ
れる光線を光学的な読取装置に収集する装置を備えた光
学的方法を少なくとも部分的に使用して、少なくとも一
種の白血球の構成集団をカウントする計測装置であって
、センサにより収集された光線が通過する測定タンクに
、分析されるべきサンプルの流れを噴射させるためのケ
ースを備え、サンプルの流れが、少なくとも二個の別の
供給ダクトから前記測定タンク内に、少なくとも２個の
スリーブ作用をなす与圧された流体により前記タンク内
で流体力学的なスリーブ作用を受け、第二のスリーブ流
れが第一のスリーブ流れを覆うこと、白血球の構成集団
の抵抗値測定のための電極が前記噴射ケースの構成部品
であること、並びに、前記サンプルの流れを準備し供給
する回路、及びスリーブ作用をなす流体が前記噴射ケー
スの上流側に設けられ、光学的センサ及び前記電極によ
り送り出される信号を収集し処理するためのユニット装
置が前記噴射ケースの下流側に設けられ、これらの情報
がコンピュータにより処理され、グラフ及び／又はデジ
タル的に表示されることを特徴とする計測装置。 - （２）調整されたオリフィスをその端部に形成している
外側の噴射ノズルが、前記ケース内側に装着され、前記
第一のスリーブ作用をなす流体を放射するために前記ノ
ズルの内方室と前記測定タンクとを連通させていること
を特徴とする前記請求項１に記載の計測装置。 - （３）前記調整されたオリフィスが、前記測定タンクを
通過する光線とオフセットの位置にあることを特徴とす
る請求項２に記載の計測装置。 - （４）前記外側の噴射ノズルの円錐状部分と前記ケース
の内側面との間に環状チャンバが形成され、該環状チャ
ンバは、前記測定タンクと連通し、前記第二のスリーブ
作用をなす流体を放射するために、与圧された流体がダ
クトを経て供給されることを特徴とする請求項２に記載
の計測装置。 - （５）前記外側の噴射ノズル内に取付けられた内側の噴
射ノズルが、ダクトから供給される与圧された流体の噴
射のためのオリフィスを有し、該オリフィスは、前記調
整されたオリフィスと一直線上となる位置において前記
外側の噴射ノズル内側の内方室に開口していることを特
徴とする請求項１又は２に記載の計測装置。 - （６）前記第一及び第二の二重のスリーブ作用をなす流
れが、前記測定タンクを全て通過する間、集中且つ安定
状態とされるために、前記測定タンクが幅広の内部通路
を有することを特徴とし、一方にランプを設け、他方に
該ランプにより発せられ且つ光学的装置により焦点を合
わされる光線を受け取るセンサを設けた測定タンクを使
用している請求項１に記載の装置。 - （７）細胞の発する螢光を利用した測定のために、セン
サ装置が、前記測定タンクに焦点を合わせ、該測定タン
クを通過するレーザ光線と９０°の角度をなす位置に設
けられていることを特徴とする請求項１に記載の計測装
置。 - （８）前記抵抗値を測定するための電極は、一方におい
て、前記測定タンクを出る溶液のスリーブ作用をなされ
た流れのための前記排出ダクトの端部によりアノード極
が形成され、他方において、分析されるべき溶液の噴射
のための内側のノズルによりカソード極が形成されてい
ることを特徴とする請求項１に記載の計測装置。 - （９）分析されるべき溶液及びスリーブ作用をなす流体
が、混合及び加熱ユニットからのサンプルにより供給さ
れる流体の配給装置から送り出されることを特徴とする
請求項１に記載の計測装置。 - （１０）前記抵抗値の測定装置から送られる情報が、赤
血球の基質、血小板及び非常に大きな微小片を分離する
ことにより、少なくとも一つの低い閾値と高い閾値との
間に亘って、主な白血球の構成集団を特徴づける体積の
分布曲線に再現されることを特徴とする請求項１に記載
の計測装置。 - （１１）前記光学的測定装置から送られる情報が、吸収
の特に少ない細胞集団及び吸収の特に激しい細胞集団を
排除することにより、白血球の吸収特性を低い閾値と高
い閾値との間で位置付けする吸収曲線により再現される
ことを特徴とする請求項１に記載の装置。 - （１２）前記抵抗値の測定装置及び光学的測定装置から
送られる情報が、集団の分布についての代表的形状を表
示するため、マトリックス形式のグラフにより再現され
ることを特徴とする請求項１、１０及び１１のいずれか
に記載の計測装置。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8914120A FR2653885B1 (fr) | 1989-10-27 | 1989-10-27 | Appareil pour le comptage et la determination d'au moins une sous-population leucocytaire. |
| FR8914120 | 1989-10-27 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03170843A true JPH03170843A (ja) | 1991-07-24 |
| JP3069795B2 JP3069795B2 (ja) | 2000-07-24 |
Family
ID=9386856
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2293503A Expired - Fee Related JP3069795B2 (ja) | 1989-10-27 | 1990-10-29 | 白血球の計測装置 |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5138181A (ja) |
| EP (1) | EP0425381B1 (ja) |
| JP (1) | JP3069795B2 (ja) |
| KR (1) | KR0164208B1 (ja) |
| AT (1) | ATE118888T1 (ja) |
| AU (1) | AU628679B2 (ja) |
| CA (1) | CA2028474C (ja) |
| DE (1) | DE69017144T2 (ja) |
| DK (1) | DK0425381T3 (ja) |
| ES (1) | ES2071061T3 (ja) |
| FI (1) | FI102324B1 (ja) |
| FR (1) | FR2653885B1 (ja) |
| HK (1) | HK53796A (ja) |
| IE (1) | IE67378B1 (ja) |
| NO (1) | NO312487B1 (ja) |
| PT (1) | PT95709B (ja) |
| ZA (1) | ZA908601B (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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