JPH03172172A - 動物細胞の培養方法 - Google Patents
動物細胞の培養方法Info
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- JPH03172172A JPH03172172A JP1312652A JP31265289A JPH03172172A JP H03172172 A JPH03172172 A JP H03172172A JP 1312652 A JP1312652 A JP 1312652A JP 31265289 A JP31265289 A JP 31265289A JP H03172172 A JPH03172172 A JP H03172172A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、動物細胞の培養方法に関する。さらに詳しく
は、本発明は、生理活性物質などの有用物質を産生ずる
動物細胞の内、細胞の増殖にともなって有用物質を生産
する細胞を、浮遊状態もしくは固定化状態で高い生産性
を保持しつつ、長期間連続的に培養する方法に関する。
は、本発明は、生理活性物質などの有用物質を産生ずる
動物細胞の内、細胞の増殖にともなって有用物質を生産
する細胞を、浮遊状態もしくは固定化状態で高い生産性
を保持しつつ、長期間連続的に培養する方法に関する。
従来の技術
動物細胞の培養は、ワクチン，インターフェロン．増殖
因子，モノクローナル抗体などの有用物質の製造にとっ
て重要な技術である。特にモノクローナル抗体生産のた
めには、ハイプリドーマ大量培養技術が必須の要件であ
る。
因子，モノクローナル抗体などの有用物質の製造にとっ
て重要な技術である。特にモノクローナル抗体生産のた
めには、ハイプリドーマ大量培養技術が必須の要件であ
る。
動物細胞の培養方法は、浮遊培養法と固定化培養法に大
別されるが，いずれの場合も培責液中に蓄積してくる増
殖阻害物質を除去し、細胞に必要な栄養物質を供給する
目的で、細胞を含まない培養上溝液を培養槽外に排出し
、新鮮培地を培養槽に供給しながら培養する、いわゆる
潅流培養法が実施され、高い細胞密度を維持しつつ動物
細胞を培養することによって、有用物質を生産する細胞
の生産性を高い状態で保持できることが知られている。
別されるが，いずれの場合も培責液中に蓄積してくる増
殖阻害物質を除去し、細胞に必要な栄養物質を供給する
目的で、細胞を含まない培養上溝液を培養槽外に排出し
、新鮮培地を培養槽に供給しながら培養する、いわゆる
潅流培養法が実施され、高い細胞密度を維持しつつ動物
細胞を培養することによって、有用物質を生産する細胞
の生産性を高い状態で保持できることが知られている。
発明が解決しようとする課題
多くの細胞では、上述のような培地交換を行う潅流培養
法によって細胞の外部環境条件が良好に維持された場合
、細胞あたりの物質生産性は長期間良好に持続すること
が知られている。
法によって細胞の外部環境条件が良好に維持された場合
、細胞あたりの物質生産性は長期間良好に持続すること
が知られている。
しかし、ヒト−ヒトハイブリドーマの親株として用いら
れるＷＥ−Ｌ２株などでは、細胞の増殖が定常期に達し
た後、抗体産土能が急速に低下することが報告されてお
り［ Ｓｃｉｅｎｃｅ． ｌ ６ ４ ．１５２４（＋
９６９））、またヒト型モノクローナル抗体の生産に用
いるヒト−ヒトハイブリドーマの培養の場合等では、細
胞の増殖が定常期に達し、培養液中の細胞密度が一定と
なった後、細胞あたりの物質生産能が急速に低下し、そ
のＩこめに生産性が著しく低くなることが本発明者らに
よって見い出されている［後述の実施例ｌ〜２参照］。
れるＷＥ−Ｌ２株などでは、細胞の増殖が定常期に達し
た後、抗体産土能が急速に低下することが報告されてお
り［ Ｓｃｉｅｎｃｅ． ｌ ６ ４ ．１５２４（＋
９６９））、またヒト型モノクローナル抗体の生産に用
いるヒト−ヒトハイブリドーマの培養の場合等では、細
胞の増殖が定常期に達し、培養液中の細胞密度が一定と
なった後、細胞あたりの物質生産能が急速に低下し、そ
のＩこめに生産性が著しく低くなることが本発明者らに
よって見い出されている［後述の実施例ｌ〜２参照］。
この様な細胞を長期間、物質産生状態で維持できれば、
生産性の著しい向上が期待される。
生産性の著しい向上が期待される。
浮遊培養において、細胞を増殖活性の高い状態で培養す
る方法としては、微生物の培養で行われる連続培養法ま
たは半連続培養法が知られている。
る方法としては、微生物の培養で行われる連続培養法ま
たは半連続培養法が知られている。
すなわち、細胞を含む培養液を一定の速度で連続的にま
たは半連続的に排出し、同じ速度で新鮮な培地を連続的
にまたは半連続的に供給する培養法である。しかし、動
物細胞の場合には、その増殖速度が遅いために、培養液
の交換速度を高めることが出来ず、その結果増殖阻害物
質（老瘉物）等が蓄積することが予想される。さらにこ
れらの方法で維持できる細胞密度は低く、そのために生
産性も著しく低くなる。
たは半連続的に排出し、同じ速度で新鮮な培地を連続的
にまたは半連続的に供給する培養法である。しかし、動
物細胞の場合には、その増殖速度が遅いために、培養液
の交換速度を高めることが出来ず、その結果増殖阻害物
質（老瘉物）等が蓄積することが予想される。さらにこ
れらの方法で維持できる細胞密度は低く、そのために生
産性も著しく低くなる。
課題を解決するための手段
上記事情に鑑み、本発明者らは細胞を浮遊状態または固
定化状態で培養する方法において、細胞を高密度に、か
つ長期間増殖活性を維持させつつ培養する方法について
種々検討を重ねた結果、本発明を完或するに至った。
定化状態で培養する方法において、細胞を高密度に、か
つ長期間増殖活性を維持させつつ培養する方法について
種々検討を重ねた結果、本発明を完或するに至った。
すなわち、本発明は、細胞の増殖にともなって有用物質
を生産する細胞を潅流培養する方法において、培養の途
中で間欠的にあるいは連続的に当該細胞の一部を培養系
外に除去して、系内細胞を増殖状態に維持することを特
徴とする動物細胞の培養方法である。
を生産する細胞を潅流培養する方法において、培養の途
中で間欠的にあるいは連続的に当該細胞の一部を培養系
外に除去して、系内細胞を増殖状態に維持することを特
徴とする動物細胞の培養方法である。
動物細胞の潅流培養法は、固定化潅流培養法と浮遊潅流
培養法に大別される［ Ｔｒｅｎｄ．Ｂｉｏｉｅｃｈｎ
ｏ＋．， ５， ２３０ （１９８７） ］ ｏ前者に
は固定化床，培養液循環手段，酸素供給手段．温調手段
，ｐＨ制御ならびに溶存酸素（Ｄｏ）制御手段等を具備
した公知の固定化培養システム、例えばセラミックコア
ー・リアクター［Ｂ Ｉ Ｏ／ＴＥＣＨＮＯＬｏｃｙ．
６ ３，ＪＡＮＵＡＲＹ １ ９ ８ ５］．ホローフ
ァイバー・リアクター，フラーゲン被覆不織布，担体リ
アクターなどが用いられる。また、後者には通気手段．
撹拌手段．温調手段，ｐＨ制御ならびに溶存酸素（ＤＯ
）制御手段等培養に必要な部材が、必要に応じて具備さ
れた当該分野で公知の浮遊培養槽［ Ａｐｐｌ．Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．． ２ ４
． ２ ８ ２（１９８６）］が用いられる。潅流培養
においては新鮮な培地を連続的にまたは間欠的に供給し
、同量の培養上清を連続的にまたは間欠的に排出するこ
とにより、細胞を生存状態で高密度に保ちつつ長期間維
持することが可能である。本発明では、高密度の細胞の
一部を、連続的にまたは間欠的に培養系外へ除くことに
より、常に細胞を高密度に、かつ増殖状態に維持しつつ
培養される。
培養法に大別される［ Ｔｒｅｎｄ．Ｂｉｏｉｅｃｈｎ
ｏ＋．， ５， ２３０ （１９８７） ］ ｏ前者に
は固定化床，培養液循環手段，酸素供給手段．温調手段
，ｐＨ制御ならびに溶存酸素（Ｄｏ）制御手段等を具備
した公知の固定化培養システム、例えばセラミックコア
ー・リアクター［Ｂ Ｉ Ｏ／ＴＥＣＨＮＯＬｏｃｙ．
６ ３，ＪＡＮＵＡＲＹ １ ９ ８ ５］．ホローフ
ァイバー・リアクター，フラーゲン被覆不織布，担体リ
アクターなどが用いられる。また、後者には通気手段．
撹拌手段．温調手段，ｐＨ制御ならびに溶存酸素（ＤＯ
）制御手段等培養に必要な部材が、必要に応じて具備さ
れた当該分野で公知の浮遊培養槽［ Ａｐｐｌ．Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．． ２ ４
． ２ ８ ２（１９８６）］が用いられる。潅流培養
においては新鮮な培地を連続的にまたは間欠的に供給し
、同量の培養上清を連続的にまたは間欠的に排出するこ
とにより、細胞を生存状態で高密度に保ちつつ長期間維
持することが可能である。本発明では、高密度の細胞の
一部を、連続的にまたは間欠的に培養系外へ除くことに
より、常に細胞を高密度に、かつ増殖状態に維持しつつ
培養される。
固定化培養槽を用いて本発明を実施するには、細胞が固
定化床に固定化されているので、細胞と培養上清との分
離手段は必要なく、培養液がそのまま排出される。固定
化された細胞の一部を連続的に、または半連続的に（定
期的に）培養系外に除去するためには、物理的手段もし
くは化学的手段（例、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液処理等
）で固定化床を処理することにより、細胞の一部を剥が
す方法がとられるが、なかでも化学的手段で処理する方
法が好ましく、具体的にはトリプシンを約０．２ −
３ ． ０ ｍｇ／一好ましくは約０．８〜１．５ｍｇ
／一、ＥＤＴＡを約０．０５〜５ｍｇ／１ｌＩ２好まし
く約０．２〜Ｉ．．Ｏｍｇ／一含有する溶液で処理する
方法が好ましい例として挙げられる。
定化床に固定化されているので、細胞と培養上清との分
離手段は必要なく、培養液がそのまま排出される。固定
化された細胞の一部を連続的に、または半連続的に（定
期的に）培養系外に除去するためには、物理的手段もし
くは化学的手段（例、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液処理等
）で固定化床を処理することにより、細胞の一部を剥が
す方法がとられるが、なかでも化学的手段で処理する方
法が好ましく、具体的にはトリプシンを約０．２ −
３ ． ０ ｍｇ／一好ましくは約０．８〜１．５ｍｇ
／一、ＥＤＴＡを約０．０５〜５ｍｇ／１ｌＩ２好まし
く約０．２〜Ｉ．．Ｏｍｇ／一含有する溶液で処理する
方法が好ましい例として挙げられる。
浮遊培養槽を用いて本発明を実施するには、培養槽に、
培養液の排出手段，培養液中の細胞と培養上溝液との分
離手段、培養上溝液の排出手段，および新鮮培地の供給
手段が施される。
培養液の排出手段，培養液中の細胞と培養上溝液との分
離手段、培養上溝液の排出手段，および新鮮培地の供給
手段が施される。
培養液を間欠的にまたは連続的に排出することによって
培養細胞の一部が培養系外に除去され、培養系内の細胞
は増殖状態に維持されるが、培養液の排出は通常培養開
始後約２〜ｌ５日め好ましく約６〜ＩＯ日めから行われ
、排出する培養液，排出する培養上溝液ならびに供給す
る新鮮培地の量的な割合は、供給する培地を１とした場
合、排出する培養液を約０．０５〜０．８とし、排出す
る培養上溝液を約０．９５〜０．２とするのが好ましく
、さらに排出する培養液を約０．１〜０．５とし、排出
する培養上溝液を約０．９〜０．５とするのが好ましい
。
培養細胞の一部が培養系外に除去され、培養系内の細胞
は増殖状態に維持されるが、培養液の排出は通常培養開
始後約２〜ｌ５日め好ましく約６〜ＩＯ日めから行われ
、排出する培養液，排出する培養上溝液ならびに供給す
る新鮮培地の量的な割合は、供給する培地を１とした場
合、排出する培養液を約０．０５〜０．８とし、排出す
る培養上溝液を約０．９５〜０．２とするのが好ましく
、さらに排出する培養液を約０．１〜０．５とし、排出
する培養上溝液を約０．９〜０．５とするのが好ましい
。
また、培養系内の細胞を増殖状態に維持するために、固
定化慣流培養の場合には、培養系内の細胞数を該細胞の
増殖定常期における細胞数の約ｌＯ〜９０％なかでも約
５０〜８０％とするのが好ましく、浮遊潅流培養の場合
には、培養系内の細胞数を該細胞の増殖定常期における
細胞数の約ｌＯ〜９０％なかでも約４０〜７０％とする
のが好ましい。
定化慣流培養の場合には、培養系内の細胞数を該細胞の
増殖定常期における細胞数の約ｌＯ〜９０％なかでも約
５０〜８０％とするのが好ましく、浮遊潅流培養の場合
には、培養系内の細胞数を該細胞の増殖定常期における
細胞数の約ｌＯ〜９０％なかでも約４０〜７０％とする
のが好ましい。
培地は、通常用いられる血清含有培地，血清代替物質含
有培地もしくは無血清培地が利用できる。
有培地もしくは無血清培地が利用できる。
血清培地としては、１０％牛胎児血清を添加した培地が
、また血清代替物質含有培地としては、血ｔ＃山米増殖
促進因子画分（ＧＦＳ）［第２回次他代産業基盤技術シ
ンポジウムーバイオテクノロジー予講集１［ｉ１頁，１
９８４午］を３ ｍｇ／一添加した培地などが例示でき
るが、モノクローナル抗体などの有用物質生産用培地と
しては、精製が容易であること、培地が安価であること
等の理由から無血１８培地が望ましい。無血清培地とし
ては、基本合成培地に、インシュリン．トランス７エリ
ン．エタノールアミン．セレニウム，ホリエチレングリ
コール等の因子を添加した培地が用いられる。基本合成
培地としては、イスコフ培地［ １ｓｃｏｖｅ， Ｎ．
Ｎ ．＆ Ｍｅｌｃｈｅｒｓ． Ｆ．， Ｊ． Ｅｘｐ
． Ｍｅｄ． ｌ ４．７ ． ９２ ３（１ ９
７ ｇ）］． ハムＦｌ２培地［ Ｒ− Ｇ− Ｈａｍ
，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．，５
３ ．２ ８ ８（１ ９ ６ ５）］，Ｌｌ５培地［
Ａ． Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ， Ａｍｅｒ． Ｊ． Ｈｙ
ｇ．， ７８，１７３ （１９６３）］，Ｔ培地［特開
昭６０−１４５０８８号］ ，ＴＬ−２培地（イスコ７
培地，ハムＦＩ２培地及びＬ１５培地の１：１：２混金
物）等が用いられるが、好ましくはＴ培地もしくは Ｔ
Ｌ−２培地が用いられる。
、また血清代替物質含有培地としては、血ｔ＃山米増殖
促進因子画分（ＧＦＳ）［第２回次他代産業基盤技術シ
ンポジウムーバイオテクノロジー予講集１［ｉ１頁，１
９８４午］を３ ｍｇ／一添加した培地などが例示でき
るが、モノクローナル抗体などの有用物質生産用培地と
しては、精製が容易であること、培地が安価であること
等の理由から無血１８培地が望ましい。無血清培地とし
ては、基本合成培地に、インシュリン．トランス７エリ
ン．エタノールアミン．セレニウム，ホリエチレングリ
コール等の因子を添加した培地が用いられる。基本合成
培地としては、イスコフ培地［ １ｓｃｏｖｅ， Ｎ．
Ｎ ．＆ Ｍｅｌｃｈｅｒｓ． Ｆ．， Ｊ． Ｅｘｐ
． Ｍｅｄ． ｌ ４．７ ． ９２ ３（１ ９
７ ｇ）］． ハムＦｌ２培地［ Ｒ− Ｇ− Ｈａｍ
，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．，５
３ ．２ ８ ８（１ ９ ６ ５）］，Ｌｌ５培地［
Ａ． Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ， Ａｍｅｒ． Ｊ． Ｈｙ
ｇ．， ７８，１７３ （１９６３）］，Ｔ培地［特開
昭６０−１４５０８８号］ ，ＴＬ−２培地（イスコ７
培地，ハムＦＩ２培地及びＬ１５培地の１：１：２混金
物）等が用いられるが、好ましくはＴ培地もしくは Ｔ
Ｌ−２培地が用いられる。
動物細胞株としては、物質生産が細胞増殖にともなう挙
動を示す細胞株であれば、いずれにも適用することがで
きる。その様な株の例として、Ｂ型肝炎ウィルス表面抗
原（ＨＢｓＡｇ）に対するヒト型モノクローナル抗体（
ｈ−ＭｏＡｂ）を産生ずるヒトーヒトハイプリドーマＨ
ＢＷ−４．１ ６．ＨＢＷ６．２０，Ｗ４７１−７．２
４ ［バイオテクノロジー７巻３７４頁（１９８９）
］などが挙げられる。
動を示す細胞株であれば、いずれにも適用することがで
きる。その様な株の例として、Ｂ型肝炎ウィルス表面抗
原（ＨＢｓＡｇ）に対するヒト型モノクローナル抗体（
ｈ−ＭｏＡｂ）を産生ずるヒトーヒトハイプリドーマＨ
ＢＷ−４．１ ６．ＨＢＷ６．２０，Ｗ４７１−７．２
４ ［バイオテクノロジー７巻３７４頁（１９８９）
］などが挙げられる。
実施例
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが
、本発明はこれらに限定されるものではない。
、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例ｌ
細胞としては、Ｂ型肝炎ウィルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ
）に対するヒト型モノクローナル抗体（ｈＭｏＡｂ）を
産土するヒト−ヒトハイブリドーマ＋１８Ｗ−４．１
６［Ｂ １０／ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ，７，３ ７ ４
（１ ９ ８ ９）］より誘導された高度生株を用い、
培養装置としては第１図に示す２Ｑ容の浮遊連続潅流培
養システムを使用して、無血清培地Ｐ Ｅ Ｇ − ３
５ − ｌ ［Ａｐｐｌ． Ｍｊｃｒｏｂｉｏｌ．
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，Ｚヱ，５ ３ ３（１ ９
８ ８）］で培養した。第１図において、新鮮培地供給
手段は、新鮮培地を貯留する培地貯槽ｌと該貯槽に開口
し、ベリスターボンブＰ１を介して培養槽２の蓋体３に
接続され、培養槽内の上部空間に開口する培地供給管路
４とからｌｆｆｌされている。培養液中の細胞と上清液
との分離手段には、培養槽内の培養液中に開口して蓋体
３に取り付けられた細胞沈澱管５が用いられ、該沈澱管
上部から上溝液がベリスターポングＰ２を介して上溝液
回収槽６に集められる。培養液排出手段は、排出液を貯
留する培養液回収槽７と該回収槽に開口し、ペリスター
ポンプＰ３を介して培養槽の蓋体３に接続され、培養槽
内の培養液中に開口する培養液排出管路８から構威され
る。２Ｑ容丸底培養槽２に培地を８００ｌｌｇ入れ、細
胞を約ＩＸＩＯ’／ｍなるよう播種して培養を開始し、
５日目より培養上溝液の排出と新鮮培地の供給をそれぞ
れ４００ｍ／日の速度で開始した。８日目からは培養液
の排出も同時に行い、培養上溝液の排出（Ｐ）、培養液
の排出（Ｄ）、新鮮培地の供給（Ｆ）をそれぞれＰ：６
４０ｓｍ／日，［）；１５０ｍ／日，Ｆ；８００ｍ／日
の速度で、Ｉ１日目からはＰ：５６０ｄ／日，Ｄ：２４
０ｄ／日，Ｆ：８００ｍ／日の速度で、２０日目からは
Ｐ：８００ｍ／日，Ｄ：２４０ｉｅｆｆ／日，Ｆ：ｌ０
４０一／日の速度で行ったところ１ケ月間の長期培養が
可能となり、一日あたり平均３ ． ３ ｍｇ／ Ｑ／
日のｈ−ＭｏＡｂの生産性が得られた。すなわちバッチ
培養（約７日培養）に比べて４倍の期間、抗体を連続的
に生産させることができ、しかも一日あたりの抗体生産
性も高くなった。
）に対するヒト型モノクローナル抗体（ｈＭｏＡｂ）を
産土するヒト−ヒトハイブリドーマ＋１８Ｗ−４．１
６［Ｂ １０／ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ，７，３ ７ ４
（１ ９ ８ ９）］より誘導された高度生株を用い、
培養装置としては第１図に示す２Ｑ容の浮遊連続潅流培
養システムを使用して、無血清培地Ｐ Ｅ Ｇ − ３
５ − ｌ ［Ａｐｐｌ． Ｍｊｃｒｏｂｉｏｌ．
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，Ｚヱ，５ ３ ３（１ ９
８ ８）］で培養した。第１図において、新鮮培地供給
手段は、新鮮培地を貯留する培地貯槽ｌと該貯槽に開口
し、ベリスターボンブＰ１を介して培養槽２の蓋体３に
接続され、培養槽内の上部空間に開口する培地供給管路
４とからｌｆｆｌされている。培養液中の細胞と上清液
との分離手段には、培養槽内の培養液中に開口して蓋体
３に取り付けられた細胞沈澱管５が用いられ、該沈澱管
上部から上溝液がベリスターポングＰ２を介して上溝液
回収槽６に集められる。培養液排出手段は、排出液を貯
留する培養液回収槽７と該回収槽に開口し、ペリスター
ポンプＰ３を介して培養槽の蓋体３に接続され、培養槽
内の培養液中に開口する培養液排出管路８から構威され
る。２Ｑ容丸底培養槽２に培地を８００ｌｌｇ入れ、細
胞を約ＩＸＩＯ’／ｍなるよう播種して培養を開始し、
５日目より培養上溝液の排出と新鮮培地の供給をそれぞ
れ４００ｍ／日の速度で開始した。８日目からは培養液
の排出も同時に行い、培養上溝液の排出（Ｐ）、培養液
の排出（Ｄ）、新鮮培地の供給（Ｆ）をそれぞれＰ：６
４０ｓｍ／日，［）；１５０ｍ／日，Ｆ；８００ｍ／日
の速度で、Ｉ１日目からはＰ：５６０ｄ／日，Ｄ：２４
０ｄ／日，Ｆ：８００ｍ／日の速度で、２０日目からは
Ｐ：８００ｍ／日，Ｄ：２４０ｉｅｆｆ／日，Ｆ：ｌ０
４０一／日の速度で行ったところ１ケ月間の長期培養が
可能となり、一日あたり平均３ ． ３ ｍｇ／ Ｑ／
日のｈ−ＭｏＡｂの生産性が得られた。すなわちバッチ
培養（約７日培養）に比べて４倍の期間、抗体を連続的
に生産させることができ、しかも一日あたりの抗体生産
性も高くなった。
実施例２
細胞と培地は、実施例ｌと同じものを使用した。
培養装置としては、第２図に示す公知のセラミックコア
ー・リアクターを使用した。第２図において、細胞は、
セラミックマトリックス［バイオテクノロジー，６ ３
（１ ９ ８ ５）］からなるオプチコア−Ａ（２ ０
０ＩＩＩ２）に固定化される。培地は、培地貯槽Ｂに
貯留され、循環ポンプＣＰによって、オプヂコアーＡを
通って循環される。培地中への酸素の供給はパーミエー
ターＣで行われる。新鮮な培地の供給は培地貯槽ｌから
７イードポングＦＰにより、培地の排出は回収槽２ヘハ
ーベストポンプ１１Ｐにより行われる。オプチコアーＡ
から細胞の一部を剥がす場合は、トリプシンーＥＤＴＡ
溶液（トリプンン１．２ｍｇ／一．ＥＤＴＡ０．５ｍｇ
／ｄ）を酵素貯留瓶３からオーキシアリーポンプＡＰで
循環させることにより目的を達せられる。
ー・リアクターを使用した。第２図において、細胞は、
セラミックマトリックス［バイオテクノロジー，６ ３
（１ ９ ８ ５）］からなるオプチコア−Ａ（２ ０
０ＩＩＩ２）に固定化される。培地は、培地貯槽Ｂに
貯留され、循環ポンプＣＰによって、オプヂコアーＡを
通って循環される。培地中への酸素の供給はパーミエー
ターＣで行われる。新鮮な培地の供給は培地貯槽ｌから
７イードポングＦＰにより、培地の排出は回収槽２ヘハ
ーベストポンプ１１Ｐにより行われる。オプチコアーＡ
から細胞の一部を剥がす場合は、トリプシンーＥＤＴＡ
溶液（トリプンン１．２ｍｇ／一．ＥＤＴＡ０．５ｍｇ
／ｄ）を酵素貯留瓶３からオーキシアリーポンプＡＰで
循環させることにより目的を達せられる。
３Ｑ容培地貯槽Ｂに培地を３Ｑ入れ、約ＩＸＩＯ”の細
胞をオプチコアーＡ（２００ｍ）に固定化させることに
よって培養を開始した。新鮮な培地の供給と培地の排出
は、培養５日目より２ ． ４ Ｍ日の速度で開始し、
細胞の増殖につれて４．８０／日まで増加させた。細胞
の増殖は、オプチコア一人口Ｄと出口Ｅの溶存酸素（Ｄ
Ｏ）を測定し、このＤｏの値と培地の循環速度とから酸
素消費速度（ＯＣＲ）を算出することによりモニターし
た。細胞が、ＯＣＲの値として８ 〜１ ０ ｐ ｍｏ
ｌｅｓ Ｏ！／ ｗｉｎまで増殖した時点で、オプチコ
アーに固定化されている細胞の５０〜８０％を剥がした
のち、残存している細胞を再び増殖させた。このよう６
二、固定化床の細胞を定期的（約１週間ごと）に剥がし
つつ培養することによって、約２ケ月間抗体の生産を続
けることが出来、しかも固定化床１１２あたり、１日あ
たり平均６２ｍｇ／Ｍ日の高い生産性を得ることが出来
た。
胞をオプチコアーＡ（２００ｍ）に固定化させることに
よって培養を開始した。新鮮な培地の供給と培地の排出
は、培養５日目より２ ． ４ Ｍ日の速度で開始し、
細胞の増殖につれて４．８０／日まで増加させた。細胞
の増殖は、オプチコア一人口Ｄと出口Ｅの溶存酸素（Ｄ
Ｏ）を測定し、このＤｏの値と培地の循環速度とから酸
素消費速度（ＯＣＲ）を算出することによりモニターし
た。細胞が、ＯＣＲの値として８ 〜１ ０ ｐ ｍｏ
ｌｅｓ Ｏ！／ ｗｉｎまで増殖した時点で、オプチコ
アーに固定化されている細胞の５０〜８０％を剥がした
のち、残存している細胞を再び増殖させた。このよう６
二、固定化床の細胞を定期的（約１週間ごと）に剥がし
つつ培養することによって、約２ケ月間抗体の生産を続
けることが出来、しかも固定化床１１２あたり、１日あ
たり平均６２ｍｇ／Ｍ日の高い生産性を得ることが出来
た。
細胞を固定化床から剥がすことなく、通常の潅流培養を
行った場合、約ｌ５日間でｈ−ＭｏＡｂ生産性が著しく
低下した。
行った場合、約ｌ５日間でｈ−ＭｏＡｂ生産性が著しく
低下した。
したがって、上記細胞の定期的な剥離操作を繰り返すこ
とにより、長期間にわたって安定した培養が可能である
ことが分かる。
とにより、長期間にわたって安定した培養が可能である
ことが分かる。
発明の効果
本発明の培養方法によれば、細胞の増殖にともなって有
用物質を生産する動物細胞であっても、有用物質の生産
性を高く保持しつつ長期間連続的に大量培養できるので
、該細胞の生産性を著しく向上させることができ、有用
物質の工業的な生産上有利である。
用物質を生産する動物細胞であっても、有用物質の生産
性を高く保持しつつ長期間連続的に大量培養できるので
、該細胞の生産性を著しく向上させることができ、有用
物質の工業的な生産上有利である。
第１図は、浮遊潅流培養において本発明を実施するため
の装置のフローを示す。（実施例ｌ参照）第２図は、固
定化潅流培養において本発明を実施するための装置のフ
ローを示す。（実施例２参照）
の装置のフローを示す。（実施例ｌ参照）第２図は、固
定化潅流培養において本発明を実施するための装置のフ
ローを示す。（実施例２参照）
Claims (3)
- （１）細胞の増殖にともなって有用物質を生産する動物
細胞を潅流培養する方法において、培養の途中で間欠的
にあるいは連続的に当該細胞の一部を培養系外に除去し
て系内細胞を増殖状態に維持することを特徴とする動物
細胞の培養方法。 - （２）有用物質がモノクローナル抗体である請求項１記
載の培養方法。 - （３）動物細胞がヒト−ヒトハイブリドーマである請求
項１記載の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1312652A JPH03172172A (ja) | 1989-11-30 | 1989-11-30 | 動物細胞の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1312652A JPH03172172A (ja) | 1989-11-30 | 1989-11-30 | 動物細胞の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03172172A true JPH03172172A (ja) | 1991-07-25 |
Family
ID=18031790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1312652A Pending JPH03172172A (ja) | 1989-11-30 | 1989-11-30 | 動物細胞の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03172172A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2017521080A (ja) * | 2014-07-25 | 2017-08-03 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 懸濁培養の方法及びシステム |
| CN118086050A (zh) * | 2024-04-10 | 2024-05-28 | 安及义实业（上海）有限公司 | 细胞连续培养系统及方法 |
-
1989
- 1989-11-30 JP JP1312652A patent/JPH03172172A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2017521080A (ja) * | 2014-07-25 | 2017-08-03 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 懸濁培養の方法及びシステム |
| US11254903B2 (en) | 2014-07-25 | 2022-02-22 | Cytiva Sweden Ab | Method and system for suspension culture |
| CN118086050A (zh) * | 2024-04-10 | 2024-05-28 | 安及义实业（上海）有限公司 | 细胞连续培养系统及方法 |
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