JPH03172176A - 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 - Google Patents
菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法Info
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- JPH03172176A JPH03172176A JP1279920A JP27992089A JPH03172176A JP H03172176 A JPH03172176 A JP H03172176A JP 1279920 A JP1279920 A JP 1279920A JP 27992089 A JP27992089 A JP 27992089A JP H03172176 A JPH03172176 A JP H03172176A
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- Japan
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- serine
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- treatment
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業．Ｅの利用分野〕
本発明は、セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ
活性を有する微生物細胞、もしくは細胞処理物の菌体を
、６０℃以下の温度で溶存酸素濃度がｌ Ｉ）Ｉ）ｌｍ
以上存在する条件下、処理することにより、菌体内に含
まれるセリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ活性
を低下させることなく、セリン分解Ｍ素活性だけを抑制
する方法に関する．〔従来の技術〕 Ｌ−セリンは医薬品、化粧品、化学原料等に利用される
アごノ酸であり、現在は化学的合成法またはグリシンを
６；１駆体とする発酵法により製造されている． しかしながら、化学合成法の場合はＤＬ体が合成される
ためにＩ，体のみを得るには光学分割しなければならな
いという欠点があり、又、グリシンを前駆体とずる発醇
法にはＭ禎祉、収率、精製、廃水処理等に難点があり、
これらの方法は実用上有利な方法とは言い鑓い． これらの方法に代わって最近は、セリンヒドロキシメチ
ルトランスフェラーゼ（ＥＣ ２．ｌ．２．ｌ．以下１
’ｓＩＩＭＴＪと称する）を利用し、グリシンとホルム
アルデヒドからし−セリンを酵素的に合威する方法が注
目されている。
活性を有する微生物細胞、もしくは細胞処理物の菌体を
、６０℃以下の温度で溶存酸素濃度がｌ Ｉ）Ｉ）ｌｍ
以上存在する条件下、処理することにより、菌体内に含
まれるセリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ活性
を低下させることなく、セリン分解Ｍ素活性だけを抑制
する方法に関する．〔従来の技術〕 Ｌ−セリンは医薬品、化粧品、化学原料等に利用される
アごノ酸であり、現在は化学的合成法またはグリシンを
６；１駆体とする発酵法により製造されている． しかしながら、化学合成法の場合はＤＬ体が合成される
ためにＩ，体のみを得るには光学分割しなければならな
いという欠点があり、又、グリシンを前駆体とずる発醇
法にはＭ禎祉、収率、精製、廃水処理等に難点があり、
これらの方法は実用上有利な方法とは言い鑓い． これらの方法に代わって最近は、セリンヒドロキシメチ
ルトランスフェラーゼ（ＥＣ ２．ｌ．２．ｌ．以下１
’ｓＩＩＭＴＪと称する）を利用し、グリシンとホルム
アルデヒドからし−セリンを酵素的に合威する方法が注
目されている。
史には、遺伝子繰作により微生物のＳＨＭＴ活性を向上
させる方法も知られている（Ｇｅｎｅ， １４．Ｐ６３
−７２ （１９８１）．Ｇｅｎｅ．２７，Ｐ４７−５４
（１９８４） ）ので、工業的には微生物の生産する
ＳＨｎＴを利用する方法は、将来一層有利であると期持
されている． ＳＩＩＭ↑を利用して酵素法によりグリシンとホルムア
ルデヒドからし−セリンを工業的に有利に製造する方法
としては、ＳＡＩＰＩＴ活性を有する微生物または、微
生物の細胞を、グリシン溶液と接触させた後］一一セリ
ン反応に使用する方法が知られている．（特開昭６１−
９２９４） Ｌかしながら、微生物にはセリン分解酵素
活性（以下ＳＯ活ｔ’ｋと称する）の在在も知られてい
る。〔例えば１，−セリンデヒドラターゼ（■Ｓｈｉｚ
ｕＬａ ’ｌ． ａｎｄ ＴｏｋｕｓｈｉＨｅ Ｍ．Ｍ
ｅＬｈｏｄｓｎ ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １７ｎ
ｐ５７５〜ｐ５８０， ＾ｃａｄｅ＊ｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓＩｎｃ．ＮＬＩｗ Ｙｏｒｋ （１９７１）■Ｒ
ｕｒｎｓ． Ｒ．Ｏ．ＭｅＬｈｏｄｓ ｉｎ ｅｎｚｙ
ｎｏｌｏｇｙ １７Ｂ＾ｃａｄｅ＋＋ｉｃ Ｐｒｅｓｓ
Ｎｅｗ Ｗｏｒｋ （１９７１）■Ｋｕｂｏｔａ．ｋ．
ｅｔａｌ．Ｊ．ＦｅｒｓｅｎｔａＬｉｏｎａｌ Ｂｉ
ｏｅｎｚｙｉｃ６７，（６） ｐ３９１〜ρ３９４ （
１９８９）））該ＳＤ活性は醇素法Ｌ−セリンの製造法
において次のような問題点を生じる． ■生成したし−セリンが分解され反応収率（対原料グリ
シン収率）が低下する． ■Ｌ−セリン分解生成物によりＬ−セリン生威反応が抑
制されセリン蓄ＭＲｌが低下する．このため、Ｓロ活性
の低下した微生物変異株を用いて１，−セリンを効率よ
く製造する方法が知られている。〔文献（■ＫｕｂｏＬ
ａ， Ｋ， Ａｇｒｉｃ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｗ４９Ｐ７
〜ｌ’＋２ （＋９８５）） ） ！，かしながら、Ｓ
Ｄ失活変異株を造威することは容易なことではなく、復
元株の出ＴＩＪといった間湖があり、−「業的規模での
方法としてＩｔ問題があった。
させる方法も知られている（Ｇｅｎｅ， １４．Ｐ６３
−７２ （１９８１）．Ｇｅｎｅ．２７，Ｐ４７−５４
（１９８４） ）ので、工業的には微生物の生産する
ＳＨｎＴを利用する方法は、将来一層有利であると期持
されている． ＳＩＩＭ↑を利用して酵素法によりグリシンとホルムア
ルデヒドからし−セリンを工業的に有利に製造する方法
としては、ＳＡＩＰＩＴ活性を有する微生物または、微
生物の細胞を、グリシン溶液と接触させた後］一一セリ
ン反応に使用する方法が知られている．（特開昭６１−
９２９４） Ｌかしながら、微生物にはセリン分解酵素
活性（以下ＳＯ活ｔ’ｋと称する）の在在も知られてい
る。〔例えば１，−セリンデヒドラターゼ（■Ｓｈｉｚ
ｕＬａ ’ｌ． ａｎｄ ＴｏｋｕｓｈｉＨｅ Ｍ．Ｍ
ｅＬｈｏｄｓｎ ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １７ｎ
ｐ５７５〜ｐ５８０， ＾ｃａｄｅ＊ｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓＩｎｃ．ＮＬＩｗ Ｙｏｒｋ （１９７１）■Ｒ
ｕｒｎｓ． Ｒ．Ｏ．ＭｅＬｈｏｄｓ ｉｎ ｅｎｚｙ
ｎｏｌｏｇｙ １７Ｂ＾ｃａｄｅ＋＋ｉｃ Ｐｒｅｓｓ
Ｎｅｗ Ｗｏｒｋ （１９７１）■Ｋｕｂｏｔａ．ｋ．
ｅｔａｌ．Ｊ．ＦｅｒｓｅｎｔａＬｉｏｎａｌ Ｂｉ
ｏｅｎｚｙｉｃ６７，（６） ｐ３９１〜ρ３９４ （
１９８９）））該ＳＤ活性は醇素法Ｌ−セリンの製造法
において次のような問題点を生じる． ■生成したし−セリンが分解され反応収率（対原料グリ
シン収率）が低下する． ■Ｌ−セリン分解生成物によりＬ−セリン生威反応が抑
制されセリン蓄ＭＲｌが低下する．このため、Ｓロ活性
の低下した微生物変異株を用いて１，−セリンを効率よ
く製造する方法が知られている。〔文献（■ＫｕｂｏＬ
ａ， Ｋ， Ａｇｒｉｃ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｗ４９Ｐ７
〜ｌ’＋２ （＋９８５）） ） ！，かしながら、Ｓ
Ｄ失活変異株を造威することは容易なことではなく、復
元株の出ＴＩＪといった間湖があり、−「業的規模での
方法としてＩｔ問題があった。
また、セゾン分解活性の抑制法については、特開昭５Ｆ
ｌ− １２９９７２号公報、特開昭５８− １２９９７
５弓公報に開示されているが、いずれも菌体を４０〜６
０℃の特定温度条件下、１０〜３０分間の短時間処理す
るもので、処理時間が長くなるとセリンヒドロキシメチ
ルトランスフェラーゼも失活する問題がある。
ｌ− １２９９７２号公報、特開昭５８− １２９９７
５弓公報に開示されているが、いずれも菌体を４０〜６
０℃の特定温度条件下、１０〜３０分間の短時間処理す
るもので、処理時間が長くなるとセリンヒドロキシメチ
ルトランスフェラーゼも失活する問題がある。
このような状況のもとに本発明者らは、ＳＨＭＴ活性を
存ずると同一．？にＳＤ活性も有している微生物の培養
液、菌体もしくは菌体処理物を用いて、グリシンとホル
ムアルデヒドよりＬ−セリンを製造するに当たり、その
細胞、もしくは細胞処理物中に存在するＳＤ活性を、Ｓ
ＩＩＭＴ活性の低下は極力抑えながら、選択的に低下さ
せ、更に長時間熱処理を受けてもＳＩＩＭＴ活性が低下
しない方法を確立することを目的とし、鋭意検討した． その結果、ＳＩＩＭ↑活性を有すると同時にＳＤ活性も
有している微生物の細胞懸濁液もしくは細胞処理物溶液
を６０゛Ｃ以下の温度で溶在酸素が＋ｐρ一以上／ｆ
／ＪＸする条件で処理すると選択的にＳＯ活性を低下さ
せることを見い出し、以上の処理を施した該微生物の細
胞もしくは細胞処理物を用い、グリシンとホルムアルデ
ヒドよりし−セリンを効率よく製造する方法を完威した
． 即ち、本発明は酵素セリンヒドロキシメチルトランスフ
ェラーゼ活性を有する、微生物の細胞もしくは細胞処理
物の菌体を６０℃以下の温度で溶存酸素濃度が１ｐｐｍ
以上に保たれるように懸濁液または細胞処理溶液に酸素
又は空気を熔解し、処理する事を特徴とする、ＳＯ活性
の抑制方法である．〔課題を解決するための手段〕 本発明において用いられる微生物は、ＳＨＭＴ活性を存
するものであればよく、このような微生物の例としては
、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌ
ｉ）ＭＴ−１０３．５０ （微工研菌寄第７４３７号）
、エシエリヒア・コリＭ？−１０３５１ （微工研菌寄
第７４３８号）をあげることができる． 本発明において用いられる微生物の培養に当たっては、
使用菌株の利用しうる炭素源、窒素源、無機塩類、有機
栄養物などを含有するものであれば合戒培地、天然培地
のいずれも使用できる．培養は好気的条件、培養温度２
５〜４０゜Ｃ、培養液のｐｌ１６〜８で行われる。
存ずると同一．？にＳＤ活性も有している微生物の培養
液、菌体もしくは菌体処理物を用いて、グリシンとホル
ムアルデヒドよりＬ−セリンを製造するに当たり、その
細胞、もしくは細胞処理物中に存在するＳＤ活性を、Ｓ
ＩＩＭＴ活性の低下は極力抑えながら、選択的に低下さ
せ、更に長時間熱処理を受けてもＳＩＩＭＴ活性が低下
しない方法を確立することを目的とし、鋭意検討した． その結果、ＳＩＩＭ↑活性を有すると同時にＳＤ活性も
有している微生物の細胞懸濁液もしくは細胞処理物溶液
を６０゛Ｃ以下の温度で溶在酸素が＋ｐρ一以上／ｆ
／ＪＸする条件で処理すると選択的にＳＯ活性を低下さ
せることを見い出し、以上の処理を施した該微生物の細
胞もしくは細胞処理物を用い、グリシンとホルムアルデ
ヒドよりし−セリンを効率よく製造する方法を完威した
． 即ち、本発明は酵素セリンヒドロキシメチルトランスフ
ェラーゼ活性を有する、微生物の細胞もしくは細胞処理
物の菌体を６０℃以下の温度で溶存酸素濃度が１ｐｐｍ
以上に保たれるように懸濁液または細胞処理溶液に酸素
又は空気を熔解し、処理する事を特徴とする、ＳＯ活性
の抑制方法である．〔課題を解決するための手段〕 本発明において用いられる微生物は、ＳＨＭＴ活性を存
するものであればよく、このような微生物の例としては
、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌ
ｉ）ＭＴ−１０３．５０ （微工研菌寄第７４３７号）
、エシエリヒア・コリＭ？−１０３５１ （微工研菌寄
第７４３８号）をあげることができる． 本発明において用いられる微生物の培養に当たっては、
使用菌株の利用しうる炭素源、窒素源、無機塩類、有機
栄養物などを含有するものであれば合戒培地、天然培地
のいずれも使用できる．培養は好気的条件、培養温度２
５〜４０゜Ｃ、培養液のｐｌ１６〜８で行われる。
本発明に於いては、このようにして得られた培養液はそ
のまま遠心分離、濾過等により集菌した細胞又は細胞処
理物を酵素源として用いる。細胞処理物としては、細胞
を機械的破壊、超音波処理、凍結融解処理、乾燥処理、
溶媒処理、化学的処理、浸透圧処理、自己消化、界面活
性剤処理、酵素処理等により細胞壁の一部もしくは全部
を破砕したもの、これらより得られる酵素両分、細胞及
び細胞抽出物の固定化物などがある． 培養液から細胞を集菌する場合、培養液中の炭素源、た
とえばグルコース等が消費された培養液から集菌される
のが好ましい。
のまま遠心分離、濾過等により集菌した細胞又は細胞処
理物を酵素源として用いる。細胞処理物としては、細胞
を機械的破壊、超音波処理、凍結融解処理、乾燥処理、
溶媒処理、化学的処理、浸透圧処理、自己消化、界面活
性剤処理、酵素処理等により細胞壁の一部もしくは全部
を破砕したもの、これらより得られる酵素両分、細胞及
び細胞抽出物の固定化物などがある． 培養液から細胞を集菌する場合、培養液中の炭素源、た
とえばグルコース等が消費された培養液から集菌される
のが好ましい。
本発明においては、本発明に用いる細胞又は細胞処理物
を６０゜Ｃ以下、好ましくは３０〜５０℃に保ちつつ、
酸素または空気を通気、あるいは撹拌により、処｝１１
ｊ液中の溶在酸素濃度を常に１ρｐａ以上となるように
溶解、保持することにより、細胞内又は、細胞処理物中
に在在ずるＳＯ活性のみを選沢的に低下さげることが出
来る． 処理４度は３０“Ｃ未満ではＳＯ活性の低下を効率よく
実施できない。又、６０”Ｃを越せばＳＤ活性と共にＳ
ｉｌｌ’ＩＴ活性も低下するので好ましくない．処ＰＰ
液中の溶存酸素量は溶媒、溶質によって変化するが常に
処理液中に１ρρ一以上の熔η酸素があれば十分である
．処理液のｐｌ＋は６〜９、処理時間は２〜１０時間、
好ましくは４〜８時間である．５１１活性失活処理にお
いて発泡防止のため通常使用される消泡剤を添加しても
よい．処理液中にグリシンを添加して処理することは史
に好ましい態様である．以上の前処理を施した５ １１
Ｍ Ｔ活性を有する細胞又は、細胞処理物を用いてし
−セリンの合成を実施することが出来る． 〔発明の効果〕 本発明の方注によれば菌体内に含まれるＳＩＩＩＩ？酵
素活性を紙下させることな＜、ＳＯ活性のみを低下さ＋
ｉ１｝るので、Ｌ−セリン工業的製造に大いに貢献し得
る． 〔実施例〕 以下、実施例及び参考実験例により本発明を詳細に説明
する． 勿論、実施例は本発明を具体的に例証するものであり、
本発明がこの実施例の範囲に限定されるものではない． 実施例１ Ｉ シｒ− ’Ｊ Ｔ＝ ７ ・：］ ’） ＭＴ−１
０３５０ （Ｌｉｔ工ｕｆ菌寄第７４３７号）の菌株を
後述のＬＢ−＾１１′Ｍ天平板培地に植菌し、３５゜Ｃ
にて一夜墳養を行ない、生育したコロニーから２白金耳
を１５０ ｄのＬＢ−ＡＰ液体培地の入った綿栓付き５
０〇一坂ロフラスコに接種した．接種した坂口フラスコ
は３５゜Ｃにて２０時間振盪培養（ｌ２０ｒｐｓ ）を
行ない、所定時間培＃後、ＰＴＭ小培地を２０Ｎ什込ん
だ３０ｌジャーファーメンターに移液して３５゜Ｃ、通
気ｉｉｔｌｖｖ−、撹拌回転数６００ｒｐ−にてｐｌ１
６．８にｐｌ＋コントローラーによりアンモニア水の添
加により制御を行いつつ、殺菌済み４０％グルコース水
溶液を遂時添加しながら４０時間培養を行った．所定時
間培養後、培地中のグルコースが消費されるのを確認し
て、直ちに遠心分離機にて集菌を行い、湿菌体を得た．
得られた集菌湿菌体０．４６ｋｇを１．４３ｋｇの水及
び０．４１ｋｇのグリシン溶液中に加えた。
を６０゜Ｃ以下、好ましくは３０〜５０℃に保ちつつ、
酸素または空気を通気、あるいは撹拌により、処｝１１
ｊ液中の溶在酸素濃度を常に１ρｐａ以上となるように
溶解、保持することにより、細胞内又は、細胞処理物中
に在在ずるＳＯ活性のみを選沢的に低下さげることが出
来る． 処理４度は３０“Ｃ未満ではＳＯ活性の低下を効率よく
実施できない。又、６０”Ｃを越せばＳＤ活性と共にＳ
ｉｌｌ’ＩＴ活性も低下するので好ましくない．処ＰＰ
液中の溶存酸素量は溶媒、溶質によって変化するが常に
処理液中に１ρρ一以上の熔η酸素があれば十分である
．処理液のｐｌ＋は６〜９、処理時間は２〜１０時間、
好ましくは４〜８時間である．５１１活性失活処理にお
いて発泡防止のため通常使用される消泡剤を添加しても
よい．処理液中にグリシンを添加して処理することは史
に好ましい態様である．以上の前処理を施した５ １１
Ｍ Ｔ活性を有する細胞又は、細胞処理物を用いてし
−セリンの合成を実施することが出来る． 〔発明の効果〕 本発明の方注によれば菌体内に含まれるＳＩＩＩＩ？酵
素活性を紙下させることな＜、ＳＯ活性のみを低下さ＋
ｉ１｝るので、Ｌ−セリン工業的製造に大いに貢献し得
る． 〔実施例〕 以下、実施例及び参考実験例により本発明を詳細に説明
する． 勿論、実施例は本発明を具体的に例証するものであり、
本発明がこの実施例の範囲に限定されるものではない． 実施例１ Ｉ シｒ− ’Ｊ Ｔ＝ ７ ・：］ ’） ＭＴ−１
０３５０ （Ｌｉｔ工ｕｆ菌寄第７４３７号）の菌株を
後述のＬＢ−＾１１′Ｍ天平板培地に植菌し、３５゜Ｃ
にて一夜墳養を行ない、生育したコロニーから２白金耳
を１５０ ｄのＬＢ−ＡＰ液体培地の入った綿栓付き５
０〇一坂ロフラスコに接種した．接種した坂口フラスコ
は３５゜Ｃにて２０時間振盪培養（ｌ２０ｒｐｓ ）を
行ない、所定時間培＃後、ＰＴＭ小培地を２０Ｎ什込ん
だ３０ｌジャーファーメンターに移液して３５゜Ｃ、通
気ｉｉｔｌｖｖ−、撹拌回転数６００ｒｐ−にてｐｌ１
６．８にｐｌ＋コントローラーによりアンモニア水の添
加により制御を行いつつ、殺菌済み４０％グルコース水
溶液を遂時添加しながら４０時間培養を行った．所定時
間培養後、培地中のグルコースが消費されるのを確認し
て、直ちに遠心分離機にて集菌を行い、湿菌体を得た．
得られた集菌湿菌体０．４６ｋｇを１．４３ｋｇの水及
び０．４１ｋｇのグリシン溶液中に加えた。
ｐｌｌをＮａＯＨにて調製し、７．５に合わせ、攪拌し
なから４０゜Ｃに１６時間保った． 所定時間反応後ＳＤ活性を測定し、次いで消泡剤（アデ
カノール＠ ＬＧ− １０９旭電化製）を０．１％園度
に添加し、表−１に示す各溶存酸素濃度に保たれるよう
に通気撤を調製し、通気後、２時間，４時間目の残在Ｓ
Ｄ活性及びＳＨＭＴ活性を測定した．（以下余白） 表 ｌ ＳＤ活性失活処理時溶／ｆ＃Ｉ濃度とＳＯ活性及びＳＩ
ＩＭ？活性の残存率−唸拍．！ｌＬ城 ＬＦタ−八１） 東大１′板培地 １１ａｃＬｏ ＠ ｌリブトン（Ｄｉｒｃｏ社製） Ｉ
Ｏ．ＯｇｎｒＩ（：Ｌｏ ＧＤｌ％｛ＩＱ：−Ｔ−キス
（Ｄｉｆｃｏ社！！！） ５．０ｇＮａＣ ｌ
１０．０ ｇ７ｌｃｊＪ／水
ｔｏｏｏ Ｈｌ１＋ｌｌ＝７．５にＮａＯｌ
ｌにて調整ρ１１調撃後、非天１５ｇを加えてオートク
レープ殺菌（１２０’ｃ，ＩＯ分間）シ６０℃以ドに冷
却後、アンピシリンを濃度２５μｇ／１になるように声
κ閑フィルターを通して添加．シャーレに分注し固化さ
吐寒天平板を作製した． ２． Ｉ．Ｂ−Ａｒ’ ｆｉ体培地ＢａｃＬｏ ＠
トリブトン（Ｄｉｒｃｏ社製） ＩＯ．ｏｇＩｔｄｃ
Ｌｏ ＠醇母エキス（旧ｆｃｏ社製） ５．０ｇＮａ
Ｃｆｆｉ ＩＯ．Ｏｇ仄留水
１０００ ｄｐｌ＋＝７．５にＮａＯ
ｌｌにて調整 ρ１１調幣後、１−トクレープ殺菌（１２０’ｃ．ＩＯ
分間）し、６０゜Ｃ以下に冷却後、アンピシリンを濃度
２５μｇ／ｉになるように無菌フィルターを通して添加
した． ３．ＰＴｊｉ少培地 リン酸！カリウム ２．０ ｇリン酸２カリ
ウム ２．０ｇＭｇＳＯａ ・７１ｌｔＯ
２．Ｏ ｇ（ＮＩＩ．）ｒｓＯ．
１．５ ｇＬ−フエニルアラニン
２，５ｇＣａＣｌ ｚ ・２１１ｇ０
８０ ｍｇＣｕＣｌｚ ・２ＨｘＯ
８ ｍｇＣｏＣｌｚ ・６１ｌＪ
８ ｍｇＡＩＣＩ！２ ・６１１ｚ０
２０ ｍｇ８３ＢＯ，
Ｉ ｍ＊ＭｎｓｏＪ・５ｕ．ｏ
２０ ｓｇＺｎＳＯ４・７８．０
４ ｍｇＮａＪｏＯａ・２ＬＯ ４
ｍｇＦｅＳＯｎ７｝１ｔｏ
８０ ｅｇｇ菖留水
１０００ ｄを混合し、１２０゜Ｃで３０分間殺菌後、
０．２μ一の無菌フィルターにて無菌濾過した塩酸チア
ミン水溶液をチアミン濃度がＳｏｎｇ／ ｌとなるよう
に添加した。
なから４０゜Ｃに１６時間保った． 所定時間反応後ＳＤ活性を測定し、次いで消泡剤（アデ
カノール＠ ＬＧ− １０９旭電化製）を０．１％園度
に添加し、表−１に示す各溶存酸素濃度に保たれるよう
に通気撤を調製し、通気後、２時間，４時間目の残在Ｓ
Ｄ活性及びＳＨＭＴ活性を測定した．（以下余白） 表 ｌ ＳＤ活性失活処理時溶／ｆ＃Ｉ濃度とＳＯ活性及びＳＩ
ＩＭ？活性の残存率−唸拍．！ｌＬ城 ＬＦタ−八１） 東大１′板培地 １１ａｃＬｏ ＠ ｌリブトン（Ｄｉｒｃｏ社製） Ｉ
Ｏ．ＯｇｎｒＩ（：Ｌｏ ＧＤｌ％｛ＩＱ：−Ｔ−キス
（Ｄｉｆｃｏ社！！！） ５．０ｇＮａＣ ｌ
１０．０ ｇ７ｌｃｊＪ／水
ｔｏｏｏ Ｈｌ１＋ｌｌ＝７．５にＮａＯｌ
ｌにて調整ρ１１調撃後、非天１５ｇを加えてオートク
レープ殺菌（１２０’ｃ，ＩＯ分間）シ６０℃以ドに冷
却後、アンピシリンを濃度２５μｇ／１になるように声
κ閑フィルターを通して添加．シャーレに分注し固化さ
吐寒天平板を作製した． ２． Ｉ．Ｂ−Ａｒ’ ｆｉ体培地ＢａｃＬｏ ＠
トリブトン（Ｄｉｒｃｏ社製） ＩＯ．ｏｇＩｔｄｃ
Ｌｏ ＠醇母エキス（旧ｆｃｏ社製） ５．０ｇＮａ
Ｃｆｆｉ ＩＯ．Ｏｇ仄留水
１０００ ｄｐｌ＋＝７．５にＮａＯ
ｌｌにて調整 ρ１１調幣後、１−トクレープ殺菌（１２０’ｃ．ＩＯ
分間）し、６０゜Ｃ以下に冷却後、アンピシリンを濃度
２５μｇ／ｉになるように無菌フィルターを通して添加
した． ３．ＰＴｊｉ少培地 リン酸！カリウム ２．０ ｇリン酸２カリ
ウム ２．０ｇＭｇＳＯａ ・７１ｌｔＯ
２．Ｏ ｇ（ＮＩＩ．）ｒｓＯ．
１．５ ｇＬ−フエニルアラニン
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２０ ｍｇ８３ＢＯ，
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ｍｇＦｅＳＯｎ７｝１ｔｏ
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１０００ ｄを混合し、１２０゜Ｃで３０分間殺菌後、
０．２μ一の無菌フィルターにて無菌濾過した塩酸チア
ミン水溶液をチアミン濃度がＳｏｎｇ／ ｌとなるよう
に添加した。
５ｏ活七ｊしび−Ｓｊ１哩括性一Ｑ揮定一亙決Ｓ旧占性
ｌ則定力法 ２．２ ｄのエンペンドルフチューブ中へ、０．ｌｄの
５０（）一門リン酸緩衝液（ｐｌ＋７．５）と０．６
ａ！の３３一ｌ、一セリン水？８＄．と０．１−の０．
ｌｍＭピリドキサノレリン酸（５０ｓＭ’Ｊン酸緩衝液
（ρ１１７．５） ） と０．１ 一のｚｇ留水を加え
、３０゜Ｃで５分間プレインキュベーシジンを行った。
ｌ則定力法 ２．２ ｄのエンペンドルフチューブ中へ、０．ｌｄの
５０（）一門リン酸緩衝液（ｐｌ＋７．５）と０．６
ａ！の３３一ｌ、一セリン水？８＄．と０．１−の０．
ｌｍＭピリドキサノレリン酸（５０ｓＭ’Ｊン酸緩衝液
（ρ１１７．５） ） と０．１ 一のｚｇ留水を加え
、３０゜Ｃで５分間プレインキュベーシジンを行った。
次に、その溶液へ、０．４ ｄの菌体処ｆ’ｉ！ｉｆを
加え撹拌した後、３０℃で２特開反応した．所定Ｅ￥間
終了後、０．２ ｉｄのトリクロロ酢酸（１５％水？８
液）を加えて反応を停止した．反応液は遠心分離を行い
、−Ｌ清液を１０倍に希釈し、液体クロマトグラフィ−
（以下、ＩＩＰＬｃと略する）にて１，−セリンの分析
を行った．対照として、プレインキユベーションした後
、反応液にトリクロ口酢酸を加え、次に、菌体処理液を
加えた．所定時間３０℃で反応を行い、上記と同様に遠
心分鰭を行い−Ｅ清液中のし−セリン濃度を分析しこれ
を標準とした．１１ＰＬｃでの１、一七リンの分析条件
は、下記の通りである． １１ＰＬｃ分析条件（Ｌ−セリン、グリシンの定Ｉ）ボ
ストラヘル法にて分析を行った．すなわち、移動相は脱
気水を用い、流速を１．Ｏ ＩＩ１／ｗｉｎに設定した
． 発色剤は、０−フタルアルデヒド溶液を流速０．４ｄ／
ｓｉｎでｉｆｆｌ液した。検出器は蛍光検出器を用いて
、照１・１波長３６５ｎｓ 、放射波長４５５ｎ一にて
行った．分離力ラムは、Ｓｈｏｄｅｘ Ｄ門−６１４（
昭和電工製）を２本直列につないで使用した． ２． ５ＩＩＭＴ活性測定方法 ２．２ ｍのエッペンドルフチューブ中へ、０．１ ｄ
の５００ｍＭ リンｆｉＢｕｆｆｅｒ （ｐ１１＝７．
３）と０、５−のｌ．ＯＭグリンン水溶液と０．３ ｄ
の０．４５％テトラヒドロ葉酸熔液（０．０８％ホルマ
リンを含む５００ｍＭ リン酸緩衝液（ｐｌｌ＝７．３
））と０．２ ｍｌ！の蒸留水を加え、５０゜Ｃで５分
間プレインキュベーシッンを行った．次に、その溶液へ
０．１ｄの菌体処理液（５０ｍＭ’Ｊン＃緩衝液にて５
０倍に希釈処理液）を加え撹拌した後、５０℃で１０分
間反応した．所定時間終了後、０，３−のトリクｍｌ
Ｌｌ酢酸（１５％水溶？６Ｉ．）を加えて反応を停止し
た。反応液は遠心分離を行い、上清液を５倍に希釈し、
ＩＩＩＩＬｃにてＬ−セリンの分析を行った。ｌｌＩｌ
ｌ．ｃでの１一一セリンの分析条件は、上記の通りであ
る。
加え撹拌した後、３０℃で２特開反応した．所定Ｅ￥間
終了後、０．２ ｉｄのトリクロロ酢酸（１５％水？８
液）を加えて反応を停止した．反応液は遠心分離を行い
、−Ｌ清液を１０倍に希釈し、液体クロマトグラフィ−
（以下、ＩＩＰＬｃと略する）にて１，−セリンの分析
を行った．対照として、プレインキユベーションした後
、反応液にトリクロ口酢酸を加え、次に、菌体処理液を
加えた．所定時間３０℃で反応を行い、上記と同様に遠
心分鰭を行い−Ｅ清液中のし−セリン濃度を分析しこれ
を標準とした．１１ＰＬｃでの１、一七リンの分析条件
は、下記の通りである． １１ＰＬｃ分析条件（Ｌ−セリン、グリシンの定Ｉ）ボ
ストラヘル法にて分析を行った．すなわち、移動相は脱
気水を用い、流速を１．Ｏ ＩＩ１／ｗｉｎに設定した
． 発色剤は、０−フタルアルデヒド溶液を流速０．４ｄ／
ｓｉｎでｉｆｆｌ液した。検出器は蛍光検出器を用いて
、照１・１波長３６５ｎｓ 、放射波長４５５ｎ一にて
行った．分離力ラムは、Ｓｈｏｄｅｘ Ｄ門−６１４（
昭和電工製）を２本直列につないで使用した． ２． ５ＩＩＭＴ活性測定方法 ２．２ ｍのエッペンドルフチューブ中へ、０．１ ｄ
の５００ｍＭ リンｆｉＢｕｆｆｅｒ （ｐ１１＝７．
３）と０、５−のｌ．ＯＭグリンン水溶液と０．３ ｄ
の０．４５％テトラヒドロ葉酸熔液（０．０８％ホルマ
リンを含む５００ｍＭ リン酸緩衝液（ｐｌｌ＝７．３
））と０．２ ｍｌ！の蒸留水を加え、５０゜Ｃで５分
間プレインキュベーシッンを行った．次に、その溶液へ
０．１ｄの菌体処理液（５０ｍＭ’Ｊン＃緩衝液にて５
０倍に希釈処理液）を加え撹拌した後、５０℃で１０分
間反応した．所定時間終了後、０，３−のトリクｍｌ
Ｌｌ酢酸（１５％水溶？６Ｉ．）を加えて反応を停止し
た。反応液は遠心分離を行い、上清液を５倍に希釈し、
ＩＩＩＩＬｃにてＬ−セリンの分析を行った。ｌｌＩｌ
ｌ．ｃでの１一一セリンの分析条件は、上記の通りであ
る。
実施例２
エシェリヒア・コリＭＴ−１０３５０の菌株を、実施例
１と同様の操作で培養を行い、培養液から遠心分翻し湿
菌体を得た。得られた湿菌体を培養液の１７３景の０，
８５％ＮａＣ ｌ水溶液で洗浄後、再度遠心により集菌
し洗浄菌休を得た。８８．８ｇの洗浄湿菌体をｂ″Ｃに
冷却したＯ．ＩＭ｝リス・塩Ｍ緩衝液（ｐＨ７．５）を
加え８００ バとした。該懸濁液を２分割し、一方のｇ
濁液は超音波破砕ｊａ （ＢＦＩＡＮｓＯＮ社製）にて
、氷１二で破砕処狸を行い、破砕液を更に２分割し、各
々の破砕液を溶春酸素濃度計（東亜電波製）通気ノズル
、撹拌装２゛及び温度調節装置をイｆする容器に注入し
、消泡のためアデカノールＬ（，−１０９（旭電化製）
を０．０５％になるように添加し、４０℃にて、表−２
に示す溶存酸素濃度になるように通気量を調整し、開始
時のＳＩＩ？ｌＴ活性およびＳＤ活性を測定した． また、通気後４時間目の各々の活性を測定し、残存率を
表−２に示す。該悲濁液の残りは超音波処理を行なわず
、更に、これを２分割し、熔在酸素濃度計（東亜電波製
）、通気ノズル、攪拌装置及び温度調節装置を有する容
器に注入し、消泡のためアデカノール■ＬＧ−１０９（
旭電化製）を０．０５％になるように添加し、４０℃に
て、表−２に示す溶存酸素濃度になるように通気量を調
撃し処理を行った．処理４時間後、懸濁液に等量のＯ．
ＩＭ＋・リス・塩酸Ｉ１衝液（ｐＩ＋＝７．５）を加え
、超音波破砕機（ＢＲｎＮＳＯＮ社製）にて氷上で破砕
処理を行い、破砕液のＳＩＩＭＴ活性およびＳＤ活性を
測定した。
１と同様の操作で培養を行い、培養液から遠心分翻し湿
菌体を得た。得られた湿菌体を培養液の１７３景の０，
８５％ＮａＣ ｌ水溶液で洗浄後、再度遠心により集菌
し洗浄菌休を得た。８８．８ｇの洗浄湿菌体をｂ″Ｃに
冷却したＯ．ＩＭ｝リス・塩Ｍ緩衝液（ｐＨ７．５）を
加え８００ バとした。該懸濁液を２分割し、一方のｇ
濁液は超音波破砕ｊａ （ＢＦＩＡＮｓＯＮ社製）にて
、氷１二で破砕処狸を行い、破砕液を更に２分割し、各
々の破砕液を溶春酸素濃度計（東亜電波製）通気ノズル
、撹拌装２゛及び温度調節装置をイｆする容器に注入し
、消泡のためアデカノールＬ（，−１０９（旭電化製）
を０．０５％になるように添加し、４０℃にて、表−２
に示す溶存酸素濃度になるように通気量を調整し、開始
時のＳＩＩ？ｌＴ活性およびＳＤ活性を測定した． また、通気後４時間目の各々の活性を測定し、残存率を
表−２に示す。該悲濁液の残りは超音波処理を行なわず
、更に、これを２分割し、熔在酸素濃度計（東亜電波製
）、通気ノズル、攪拌装置及び温度調節装置を有する容
器に注入し、消泡のためアデカノール■ＬＧ−１０９（
旭電化製）を０．０５％になるように添加し、４０℃に
て、表−２に示す溶存酸素濃度になるように通気量を調
撃し処理を行った．処理４時間後、懸濁液に等量のＯ．
ＩＭ＋・リス・塩酸Ｉ１衝液（ｐＩ＋＝７．５）を加え
、超音波破砕機（ＢＲｎＮＳＯＮ社製）にて氷上で破砕
処理を行い、破砕液のＳＩＩＭＴ活性およびＳＤ活性を
測定した。
（以下余白）
実施例３
エシェリヒア・コリＭＴ−１０３５０の菌株を、実験例
ｌと同様の操作で培養を行い、培養液から遠心分鮒し湿
菌体を得た。得られた湿菌体を培養液の１／３ Ｊｉｔ
の０．８５％ＮａＣ ｅ水溶液で洗浄後、再度遠心分離
により集菌し洗浄菌体を得た。１００ｇの洗浄湿菌体を
５゜Ｃに冷却した０、神トリス・塩酸緩衝液（ｐｌｌ＝
７．５）を加え１０００ ｇとした．該悲濁液を５分割
し各々の悲濁液を？８７？．酸素濃度計、通気ノズル、
攪Ｍ装評及び温度調節装政を有する容器に注入し、ｔｒ
）泡のためアデカノール■Ｌ（，−１０９（旭電化製）
を０，０５％になるように添加し、表一・３に示す溶存
酸素濃度になるように通気量又は撹拌を調整し、２０〜
６０゜Ｃの淘度条件下で４時間攪拌処理を行った。
ｌと同様の操作で培養を行い、培養液から遠心分鮒し湿
菌体を得た。得られた湿菌体を培養液の１／３ Ｊｉｔ
の０．８５％ＮａＣ ｅ水溶液で洗浄後、再度遠心分離
により集菌し洗浄菌体を得た。１００ｇの洗浄湿菌体を
５゜Ｃに冷却した０、神トリス・塩酸緩衝液（ｐｌｌ＝
７．５）を加え１０００ ｇとした．該悲濁液を５分割
し各々の悲濁液を？８７？．酸素濃度計、通気ノズル、
攪Ｍ装評及び温度調節装政を有する容器に注入し、ｔｒ
）泡のためアデカノール■Ｌ（，−１０９（旭電化製）
を０，０５％になるように添加し、表一・３に示す溶存
酸素濃度になるように通気量又は撹拌を調整し、２０〜
６０゜Ｃの淘度条件下で４時間攪拌処理を行った。
処理前及び４時間処理後の各ルのＳ１団Ｔ活性及びＳＤ
活性を測定し、残７Ｙ率を表−３に示す。
活性を測定し、残７Ｙ率を表−３に示す。
（以下余白）
表
２
酵素活性残在率
表
３
処理時の溶存酵素はすべて５ ｐｐｍに制御した．参考
実験例ｌ 実施例ｌに示した方法でエシエリヒア・コリＭＴ− １
０３５０の菌株を培養した菌体を、遠心分離により集閑
した。得られた菌体４０ｇは、熔在酸素濃度８１、ｐｌ
１計、撹拌機、スーパージャー付通気ノズルおよび温度
調整機の付いた１ｌフラスコに１２５ｇの蒸留水に３６
ｇグリシンを溶解し、ｐｌ＋を７．５に調整した溶液中
へ加えた。４０゜Ｃで１６時間無通気のまま緩やかに撹
拌を行ない、次に、溶存酸素濃度がＩ ｐｐｍ以上に保
たれるように、４０℃で４時間通気を行った。
実験例ｌ 実施例ｌに示した方法でエシエリヒア・コリＭＴ− １
０３５０の菌株を培養した菌体を、遠心分離により集閑
した。得られた菌体４０ｇは、熔在酸素濃度８１、ｐｌ
１計、撹拌機、スーパージャー付通気ノズルおよび温度
調整機の付いた１ｌフラスコに１２５ｇの蒸留水に３６
ｇグリシンを溶解し、ｐｌ＋を７．５に調整した溶液中
へ加えた。４０゜Ｃで１６時間無通気のまま緩やかに撹
拌を行ない、次に、溶存酸素濃度がＩ ｐｐｍ以上に保
たれるように、４０℃で４時間通気を行った。
このようにして得られた通気処理液２００ｇはホルマリ
ンフィード用ポンプおよびｐｌ１計、攪拌機、温度調整
機の付いた２Ｐ．反応器に、前もって調整した７００ｇ
の草留水に３４０ ｇのグリシン、１．０ｇのテ１・ラ
ヒド［１葉酸及び２０町のピリドキサルリン酸を混合し
た反応溶液に加えた． 通気処理液を加えた後、反応溶液を５０℃に加温して、
ｐｌ＋を６、７にＮａＯＩＩで調整した。次に、反応液
中のホルマリン濃度を分析しながら、反応液中のホルマ
リン濃度を次式を満たす許容範囲；｛（ホルマリン濃度
置Ｍ） ＝（２０ｍＭ）＋（１０＠Ｍ）＊（反応経過時
間）｝以下になるように制御して反応を行った．一方、
反応液のｐｌｌをＩ Ｎ−ＮａＯＨの添加にてｐｌ１６
．６に保った。反応は３５特間行った，所定特開反応後
反応液中のし−セリン及びグリシン濃度をＩＩＰＬｃに
て分析を行い、４２５ｇのＬ−セリンの生成を認めた。
ンフィード用ポンプおよびｐｌ１計、攪拌機、温度調整
機の付いた２Ｐ．反応器に、前もって調整した７００ｇ
の草留水に３４０ ｇのグリシン、１．０ｇのテ１・ラ
ヒド［１葉酸及び２０町のピリドキサルリン酸を混合し
た反応溶液に加えた． 通気処理液を加えた後、反応溶液を５０℃に加温して、
ｐｌ＋を６、７にＮａＯＩＩで調整した。次に、反応液
中のホルマリン濃度を分析しながら、反応液中のホルマ
リン濃度を次式を満たす許容範囲；｛（ホルマリン濃度
置Ｍ） ＝（２０ｍＭ）＋（１０＠Ｍ）＊（反応経過時
間）｝以下になるように制御して反応を行った．一方、
反応液のｐｌｌをＩ Ｎ−ＮａＯＨの添加にてｐｌ１６
．６に保った。反応は３５特間行った，所定特開反応後
反応液中のし−セリン及びグリシン濃度をＩＩＰＬｃに
て分析を行い、４２５ｇのＬ−セリンの生成を認めた。
反応終了後、反応液に硫酸を加えｐｌ１を４．０とし、
活性炭２１．３ｇ （ＰＭＳＸ＠三井製薬製）を加え
９０’Ｃニて１時間加熱後、熱濾過を行い、濾液を反応
液の半分量まで減圧濃縮し、冷却晶析後、濾過した．濾
別した結晶を乾燥後、１２７．５ ｇのＬ−セリンを得
た．Ｌ−セリンは純度９９．４％、旋光度＋１５．２で
あった． エシエリヒア・コリ（？ｌＴ− １０３５１）も同様の
操作を行い表−４の結果を得た． （以下余白） 表 ４ 反応成績 参考実験例２ エシヱリヒア・コリＭＴ− １０３５０を実施例！と同
様に培養集菌後、湿菌体を蒸留水に菌体濃度が２．５％
（乾燥菌体のｉｌｊ星％）になるように悲濁し、ｐｌ１
を７．５にＮａＯＩＩにて調整後、４０゜Ｃにて、溶存
酸素濃度をｌ〜４ ｐｐｍに保ち、４時間、通気攪拌を
行なった。次に、超音波破砕機にて菌休を破砕処理し、
処ｒ９後のＳＩＩＭＴ活性を測定した結果、ＳＨＭ↑活
性は２００ＩＪ／ｔｎｌ−（：あった．３１５ｇ（Ｄグ
リシン、１．ＯＯ［ノ７−｝ラヒドロ葉酸及び２０ｍｇ
のピリドキサルリン酸を７００ｇの蒸留水に加えｐｌ１
を６．７にＮ ａ Ｏ ＩＩで調整し、５０゜Ｃに加温
した基質ｉ′８液を、ｐ｝ｌ計、攪拌機、Ｎ８ガス吹き
込みノズル、ホルマリンフィード川ポンプおよび温度調
整機のついた遮光２ｅフラスコに入れた．更に、菌体破
砕通気処理液２５０ ｇ加えた後、ホルマリンフィード
用ポンプにより、ホルマリン水溶液を断続的に添加した
．ホルマリンの添加速度は反応液中のホルマリン濃度を
分析しながら該ホルマリン濃度を実施例１と同様に制御
して行った．また、反応液のρ１１を２Ｎ−ＮａＯＩｌ
水溶液の添加にて行い、ｐ！１６．６に保った．反応は
３５時間行い、所定時間反応後、反応液中のＬ−セリン
濃度およびグリシン濃度の分析をＩＩＰＬｃにて行った
． ４１０．０ ｇのＬ−セリンの生威を認め、表−５
に示す反応成績を得た． エシェリヒア・コリＭＴ−１０３５１も同様の操作を行
い表−５の結果を得た． （以下余白）
活性炭２１．３ｇ （ＰＭＳＸ＠三井製薬製）を加え
９０’Ｃニて１時間加熱後、熱濾過を行い、濾液を反応
液の半分量まで減圧濃縮し、冷却晶析後、濾過した．濾
別した結晶を乾燥後、１２７．５ ｇのＬ−セリンを得
た．Ｌ−セリンは純度９９．４％、旋光度＋１５．２で
あった． エシエリヒア・コリ（？ｌＴ− １０３５１）も同様の
操作を行い表−４の結果を得た． （以下余白） 表 ４ 反応成績 参考実験例２ エシヱリヒア・コリＭＴ− １０３５０を実施例！と同
様に培養集菌後、湿菌体を蒸留水に菌体濃度が２．５％
（乾燥菌体のｉｌｊ星％）になるように悲濁し、ｐｌ１
を７．５にＮａＯＩＩにて調整後、４０゜Ｃにて、溶存
酸素濃度をｌ〜４ ｐｐｍに保ち、４時間、通気攪拌を
行なった。次に、超音波破砕機にて菌休を破砕処理し、
処ｒ９後のＳＩＩＭＴ活性を測定した結果、ＳＨＭ↑活
性は２００ＩＪ／ｔｎｌ−（：あった．３１５ｇ（Ｄグ
リシン、１．ＯＯ［ノ７−｝ラヒドロ葉酸及び２０ｍｇ
のピリドキサルリン酸を７００ｇの蒸留水に加えｐｌ１
を６．７にＮ ａ Ｏ ＩＩで調整し、５０゜Ｃに加温
した基質ｉ′８液を、ｐ｝ｌ計、攪拌機、Ｎ８ガス吹き
込みノズル、ホルマリンフィード川ポンプおよび温度調
整機のついた遮光２ｅフラスコに入れた．更に、菌体破
砕通気処理液２５０ ｇ加えた後、ホルマリンフィード
用ポンプにより、ホルマリン水溶液を断続的に添加した
．ホルマリンの添加速度は反応液中のホルマリン濃度を
分析しながら該ホルマリン濃度を実施例１と同様に制御
して行った．また、反応液のρ１１を２Ｎ−ＮａＯＩｌ
水溶液の添加にて行い、ｐ！１６．６に保った．反応は
３５時間行い、所定時間反応後、反応液中のＬ−セリン
濃度およびグリシン濃度の分析をＩＩＰＬｃにて行った
． ４１０．０ ｇのＬ−セリンの生威を認め、表−５
に示す反応成績を得た． エシェリヒア・コリＭＴ−１０３５１も同様の操作を行
い表−５の結果を得た． （以下余白）
Claims (1)
- 酵素セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ活性を
有する、微生物の細胞もしくは、細胞処理物の菌体を、
６０℃以下の温度で溶存酸素濃度が１ｐｐｍ以上存在す
る条件下、処理することを特徴とする、菌体内セリン分
解酵素活性の抑制方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1279920A JP2801689B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1279920A JP2801689B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03172176A true JPH03172176A (ja) | 1991-07-25 |
| JP2801689B2 JP2801689B2 (ja) | 1998-09-21 |
Family
ID=17617755
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1279920A Expired - Lifetime JP2801689B2 (ja) | 1989-10-30 | 1989-10-30 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2801689B2 (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58129975A (ja) * | 1982-01-28 | 1983-08-03 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
| JPS58129972A (ja) * | 1982-01-28 | 1983-08-03 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制法 |
| JPH01269497A (ja) * | 1988-04-22 | 1989-10-26 | Nippon Zeon Co Ltd | Ｌ−セリンの製造方法、およびそれに用いる粗酵素 |
-
1989
- 1989-10-30 JP JP1279920A patent/JP2801689B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58129975A (ja) * | 1982-01-28 | 1983-08-03 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
| JPS58129972A (ja) * | 1982-01-28 | 1983-08-03 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制法 |
| JPH01269497A (ja) * | 1988-04-22 | 1989-10-26 | Nippon Zeon Co Ltd | Ｌ−セリンの製造方法、およびそれに用いる粗酵素 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2801689B2 (ja) | 1998-09-21 |
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Legal Events
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