JPS58129975A - 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 - Google Patents
菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法Info
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- JPS58129975A JPS58129975A JP57010913A JP1091382A JPS58129975A JP S58129975 A JPS58129975 A JP S58129975A JP 57010913 A JP57010913 A JP 57010913A JP 1091382 A JP1091382 A JP 1091382A JP S58129975 A JPS58129975 A JP S58129975A
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- Japan
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- serine
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- tryptophan
- racemase
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、セリンをラセミ化する酵素であるセリン・ラ
セマーゼを含有するシュードモナス、プチダ（Ｐｂｔｕ
ｄ−ｎｖ礼αＩμ叔、ゐ）マタはアエロモナス・プンク
タータ・サブスピーシーズ・キャ分間処理することによ
って菌体内に含まれるセリン・ラセマーゼの活性を低下
させることなく副反応であるセリン分解酵素活性だけを
抑制する菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法に関す近
年、Ｌ−セリンは医薬用のみならず、Ｌ −）リブトフ
ァン合成の原料として世の注目を１１４めろに至り、工
業的親嘩による＃ｆ曲ｔｃ生］来の四侍が高まって穴て
いる。Ｌ−セリンを生産する方法として、いわゆる発酵
法による方法が知られているが、蓄積骨、収率、゛晴製
、廃液机伸などに問題があり、安価な工業的生命方法に
は至っていない。これに伏＼・つて、有機合線的にＤＬ
−セリンな合成し、Ｌ−トリプトファンの酵素的生産方
法の原料としてインドールとＬ−セリンの代りにＤＬ−
セリンを使用し、ｒ孝素としてトリプトファン・シンセ
ターゼとセリン・ラセマーゼとを用いる方法があるが、
この場合は残ったＤ−セリンを順次ラセミ化して号終的
には全てＩ４−セリンに変える必要がある。このように
Ｄ−またはＬ−セリンをラセミ化する酵素がセリン・ラ
セマーゼであり、シュードモナス嘱ま六−はアエロモナ
スｔ・くに居、する微生ｌ勿の人体内に大借ｊ１に生＃
きれる。木ｒ￥般は菌体内に生産されるθ）で菌体その
ものを酵素γＩヤとして利手するのがＴ層的卵地から有
−８：、１１であるが、該菌体はセ−ゼｔ［どのセリン
を分解する酵素をも含んでいるので、トリプトファン合
Ｗ反応中に原料であるセリンが同時に分解され、対セリ
ン反応収率が低下するという大きな問題があった。
セマーゼを含有するシュードモナス、プチダ（Ｐｂｔｕ
ｄ−ｎｖ礼αＩμ叔、ゐ）マタはアエロモナス・プンク
タータ・サブスピーシーズ・キャ分間処理することによ
って菌体内に含まれるセリン・ラセマーゼの活性を低下
させることなく副反応であるセリン分解酵素活性だけを
抑制する菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法に関す近
年、Ｌ−セリンは医薬用のみならず、Ｌ −）リブトフ
ァン合成の原料として世の注目を１１４めろに至り、工
業的親嘩による＃ｆ曲ｔｃ生］来の四侍が高まって穴て
いる。Ｌ−セリンを生産する方法として、いわゆる発酵
法による方法が知られているが、蓄積骨、収率、゛晴製
、廃液机伸などに問題があり、安価な工業的生命方法に
は至っていない。これに伏＼・つて、有機合線的にＤＬ
−セリンな合成し、Ｌ−トリプトファンの酵素的生産方
法の原料としてインドールとＬ−セリンの代りにＤＬ−
セリンを使用し、ｒ孝素としてトリプトファン・シンセ
ターゼとセリン・ラセマーゼとを用いる方法があるが、
この場合は残ったＤ−セリンを順次ラセミ化して号終的
には全てＩ４−セリンに変える必要がある。このように
Ｄ−またはＬ−セリンをラセミ化する酵素がセリン・ラ
セマーゼであり、シュードモナス嘱ま六−はアエロモナ
スｔ・くに居、する微生ｌ勿の人体内に大借ｊ１に生＃
きれる。木ｒ￥般は菌体内に生産されるθ）で菌体その
ものを酵素γＩヤとして利手するのがＴ層的卵地から有
−８：、１１であるが、該菌体はセ−ゼｔ［どのセリン
を分解する酵素をも含んでいるので、トリプトファン合
Ｗ反応中に原料であるセリンが同時に分解され、対セリ
ン反応収率が低下するという大きな問題があった。
従来、トリプトファン合成反応中のセリンの分解を抑制
する方法として核反応液にアンモニウムイオンを添加す
る方法が知られているが、この方法は反応終了後の精製
工程に負荷がかかるという欠点を有しており、実用的に
より有利な方法が望まねていた。
する方法として核反応液にアンモニウムイオンを添加す
る方法が知られているが、この方法は反応終了後の精製
工程に負荷がかかるという欠点を有しており、実用的に
より有利な方法が望まねていた。
本発明者らは、反応液中に化学物質を添加することなく
、セリン・ラセマーゼ含有菌体を物理的に処理すること
により、その酵素活性の低下がなくて、セリン分解酵素
活性のみを低下させる方法を種々検討した結果、該菌体
培養液または集菌して得られた湿菌体を４０°〜６０℃
で加熱処理した場合、セリン・ラセマーゼの活性を保持
したまま、セリン分解酵素活性を著しく低下させ得るこ
とを卵１出し、本発明を完成した。
、セリン・ラセマーゼ含有菌体を物理的に処理すること
により、その酵素活性の低下がなくて、セリン分解酵素
活性のみを低下させる方法を種々検討した結果、該菌体
培養液または集菌して得られた湿菌体を４０°〜６０℃
で加熱処理した場合、セリン・ラセマーゼの活性を保持
したまま、セリン分解酵素活性を著しく低下させ得るこ
とを卵１出し、本発明を完成した。
本発明に使用するセリン・ラセマーゼを菌体内に多肴に
生産する微生物としては、シュードモナス・プチダおよ
びアエロモナスＯプンクターターサブスビーシーズ・キ
ャビエが用いられる。加熱処理に供する菌体は、菌体培
養液でも向いし、集菌して得られる湿菌体を緩衝液に懸
濁させたものでも白いし、更に湿菌体そのものでも良い
。
生産する微生物としては、シュードモナス・プチダおよ
びアエロモナスＯプンクターターサブスビーシーズ・キ
ャビエが用いられる。加熱処理に供する菌体は、菌体培
養液でも向いし、集菌して得られる湿菌体を緩衝液に懸
濁させたものでも白いし、更に湿菌体そのものでも良い
。
加熱処理時のＰＨは特に制限はないが、４〜１０の範囲
が好ましい。加熱時間はそれぞれ４０〜６０℃で通常５
〜３０分間、好ましくは１０〜３０分間、更に好ましく
は５０〜６０℃で５〜１５分間程度である。加熱処理温
度と時間の関係は、処理温麻が高ければ短時間で処理し
、逆に処理温昨が低くければ長時間処理することが好ま
し℃・。
が好ましい。加熱時間はそれぞれ４０〜６０℃で通常５
〜３０分間、好ましくは１０〜３０分間、更に好ましく
は５０〜６０℃で５〜１５分間程度である。加熱処理温
度と時間の関係は、処理温麻が高ければ短時間で処理し
、逆に処理温昨が低くければ長時間処理することが好ま
し℃・。
は
何故ならば、セリン分解酵素活性叫処理温度が高ければ
高いほど、処理時間が長ければ墜い１．）ど失活し易い
が、セリン・ラセマーゼもまた、同様の傾向を示すから
である。
高いほど、処理時間が長ければ墜い１．）ど失活し易い
が、セリン・ラセマーゼもまた、同様の傾向を示すから
である。
本発明の方法によ、れば、菌体内に含まれるセリ
１ン・ラセマーゼの活性を低下させることなく、
セリン分解酵素活性のみを低下させ得るので、本発明の
方法による菌体をトリプトファンの合成に使１旧寸＋１
ｎ、！ブ応跨中に化学′勿質を帆加することｔ【くセ
リンに対する反応収率を１１τ１−ヒさせることがでＮ
４ので、本発明はＬ −トＩＪブトファンの酵素的工業
生ｒ牟に大いに貢献し得ろ。
１ン・ラセマーゼの活性を低下させることなく、
セリン分解酵素活性のみを低下させ得るので、本発明の
方法による菌体をトリプトファンの合成に使１旧寸＋１
ｎ、！ブ応跨中に化学′勿質を帆加することｔ【くセ
リンに対する反応収率を１１τ１−ヒさせることがでＮ
４ので、本発明はＬ −トＩＪブトファンの酵素的工業
生ｒ牟に大いに貢献し得ろ。
Ｉソ下、実施”ｉｌｌ Ｋより本発明を更に鮮明に饅明
′する。
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実施例１
セリン・ラセマーゼ生産菌で枳るシュードモナスｌｌプ
チダＩＦＯ１２９９６を５ ｎ Ｑ ｍｌの坂ロフラス
コ中の筺１表に示す凹成の培地１００−に接種し、３０
℃で２４時間態盪しｆｒがら培養した。培養終了後、遠
心分離“：寝で集菌し、乾燥菌体製Ｆ＋ｆが４０ ’ｌ
／ｅになるように、培養Ｐ液で希釈した。
チダＩＦＯ１２９９６を５ ｎ Ｑ ｍｌの坂ロフラス
コ中の筺１表に示す凹成の培地１００−に接種し、３０
℃で２４時間態盪しｆｒがら培養した。培養終了後、遠
心分離“：寝で集菌し、乾燥菌体製Ｆ＋ｆが４０ ’ｌ
／ｅになるように、培養Ｐ液で希釈した。
この菌体＠濁液を、坑４喪に示す処理、処理時間で加執
処理した後遠心焦菌して核加熱処理菌体のセリン分解能
およびセリン・ラセマーゼ活性を劇中した。セリン分Ｎ
能は埴２表に示した反応組成液４０−を３０°Ｃ２４時
間垢盪させた後の残セリン惜シ４川宋することによって
求め、セリン・ラセマーゼ活性は芭３表に示した活性側
安中反応液を３５°Ｃで２時間ヴ１志させ、生成したＬ
−トリプトファンの畦を液体クロマトグラフィーで測宋
し、酵素活性は単位時間、単酢菌体叶当りのＬ−） リ
プトファン生成号で表示した。得られた博巣をａ４表に
示した。
処理した後遠心焦菌して核加熱処理菌体のセリン分解能
およびセリン・ラセマーゼ活性を劇中した。セリン分Ｎ
能は埴２表に示した反応組成液４０−を３０°Ｃ２４時
間垢盪させた後の残セリン惜シ４川宋することによって
求め、セリン・ラセマーゼ活性は芭３表に示した活性側
安中反応液を３５°Ｃで２時間ヴ１志させ、生成したＬ
−トリプトファンの畦を液体クロマトグラフィーで測宋
し、酵素活性は単位時間、単酢菌体叶当りのＬ−） リ
プトファン生成号で表示した。得られた博巣をａ４表に
示した。
第１表
エールリッヒ１匁エキス １０ ９ポリペプトン
１０ ９ ＮａＣ１５９ 蒸溜水で１１に希釈して仲…（ＰＨ６，８）第２表 ＤＬ−セリン ６０ クピリドキサー
ルリンや ０．０１９菌体量（乾燥菌体換算）
８゜５ り蒸蒲水でＩＩＫ令釈して閘用（Ｐ１
４ｓ 、 ５ ）［）−セリン ｌ・８
％ト リ ト ン Ｘ−１００５％ ピリドキサールリン酸 ０．Ｏｎ１％シ＼−ト
モナス・プチダ Ｉ ＦＯ１２９９ｆｉ菌体夛（ヴ；、
、ｌ；ｉ／Ｘ’ｒＪイ体罹筑） Ｏ，ｎ２ ％
エツシエリヒア・コリ ＭＴ １０２４２（ｒ＝”［
（Ｍ ＢＰ−７０） 閑体埼（乾燥菌体劣算）註） ０゜２ ％ＰＨ８，５ ｎ ） ’１幸活性ｋｔ、 ５ 、０ （ｑ”ｒ４．ｐ
、１０−ｃ＜１１−相第４表 〔拌〕ト喪中の暮印は比較ｌ１１１を示す。
１０ ９ ＮａＣ１５９ 蒸溜水で１１に希釈して仲…（ＰＨ６，８）第２表 ＤＬ−セリン ６０ クピリドキサー
ルリンや ０．０１９菌体量（乾燥菌体換算）
８゜５ り蒸蒲水でＩＩＫ令釈して閘用（Ｐ１
４ｓ 、 ５ ）［）−セリン ｌ・８
％ト リ ト ン Ｘ−１００５％ ピリドキサールリン酸 ０．Ｏｎ１％シ＼−ト
モナス・プチダ Ｉ ＦＯ１２９９ｆｉ菌体夛（ヴ；、
、ｌ；ｉ／Ｘ’ｒＪイ体罹筑） Ｏ，ｎ２ ％
エツシエリヒア・コリ ＭＴ １０２４２（ｒ＝”［
（Ｍ ＢＰ−７０） 閑体埼（乾燥菌体劣算）註） ０゜２ ％ＰＨ８，５ ｎ ） ’１幸活性ｋｔ、 ５ 、０ （ｑ”ｒ４．ｐ
、１０−ｃ＜１１−相第４表 〔拌〕ト喪中の暮印は比較ｌ１１１を示す。
実施例２
セリン・ラセマーゼ生産頃であるアエロモ＋ス・プンク
タータ・サブスピーシーズ・キャビエＭＴ−１０２４３
（ＦＥＲＭ ＲＰ−２１）を甲いて、実ｆｒｆａ ’
！；Ｉｔ ｌと同様の操作を行ｔ「つだ。得られた結果
を第５表に示した。
タータ・サブスピーシーズ・キャビエＭＴ−１０２４３
（ＦＥＲＭ ＲＰ−２１）を甲いて、実ｆｒｆａ ’
！；Ｉｔ ｌと同様の操作を行ｔ「つだ。得られた結果
を第５表に示した。
第 ５ 表
Claims (1)
- セリン・ラセマーゼを含有するシュードモナス・プチダ
またはアエロモナス拳ブンクタータ・サブスピーシーズ
・キャピエに属する微生物菌体を４０〜６０℃で加熱処
即することを特徴とする菌体内セリン分解酵素活性の抑
制方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57010913A JPS58129975A (ja) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57010913A JPS58129975A (ja) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58129975A true JPS58129975A (ja) | 1983-08-03 |
| JPH0143554B2 JPH0143554B2 (ja) | 1989-09-21 |
Family
ID=11763504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57010913A Granted JPS58129975A (ja) | 1982-01-28 | 1982-01-28 | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58129975A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03172176A (ja) * | 1989-10-30 | 1991-07-25 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0621165U (ja) * | 1991-12-13 | 1994-03-18 | 橋本 幸夫 | 端子接続装置 |
-
1982
- 1982-01-28 JP JP57010913A patent/JPS58129975A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03172176A (ja) * | 1989-10-30 | 1991-07-25 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 菌体内セリン分解酵素活性の抑制方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0143554B2 (ja) | 1989-09-21 |
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