JPH03181482A - Ｂｕ―４１４６ｔ抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 （１）発明の分野 本発明はＢＵ−４１４６７と称される新抗生物質および
実質的に純粋な形態におけるＢＵ−４１４６Ｔの微生物
学的製造、分離および精製のための方法に関する。ＢＵ
−４１４６Ｔは抗真菌および抗腫瘍物質として有用であ
る。

（２）従来技術の説明 ケトン　からなることを示す。

グルタルイミド抗生物質の中で、ＢＵ−４１４６Ｔは非
環状不飽和ケトン側鎖を有するストレプテミドン（プロ
トマイシン）および９−メチルストレブテ　ミドンと構
造的に類似する。

ストレブトイ旦トンは構造、 を有し、アンチバイオティックス・アンド・ケモセラピ
ー（Ａｎｔｉｂｉｏｔ、　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ
、）　、上皇：９〜１６．１９６０およびジャーナル・
オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティ−（Ｊ
。

Ａｍ、　Ｃｈｅｒａ、　Ｓｏｃ、）　、８２　：　５５
００〜５５０６．１９５９中に開示されている。

９−メチルストレプナ　ミドンは構造、を有し、 ジャーナル・オブ・アンチバイオティックス（Ｊ、　Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）　、２７　（３）　：　　２０
６〜側鎖およびその強力な抗腫瘍活性により前記グルタ
ルイミド抗生物質と明らかに区別される。

発明の概要 本発明はＢＵ−４１４６Ｔと称される新規抗生物質およ
びこ＼にストレプトマイセス・アンフィビオスボルス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｍｐｈｉｂｉｏｓｐｏｒ
ｕｓ）株Ｒ３１０−１０４（ＡＴＣＣ−５３９６４）　
と称される新放線菌を用いるＢＵ−４１４６７を製造す
る発酵法に関する。本発明はまたＢＵ−４１４６Ｔの発
酵生産に用いる新機生物、抗腫瘍および抗真菌剤として
のＢＵ−４１４６７の使用、並びに抗腫瘍または抗真菌
使用に適合させたＢ　Ｕ　−４１４６Ｔの薬学的組成物
に関する。

発明の詳細な説明 微生曳 ＢｔＪ−４１４６Ｔはストレプトマイセス・アンフイビ
オスボルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｍｐｈｉｂ
ｉｏｓｐｏｒｕｓ）株Ｒ３１０−１０４あるいはＢＵ−
４１４６Ｔ産生変異体または突然変異体の発酵により製
造することができる。

Ｒ３１０−１０４と称される好ましい産生株は秋田市（
日本〉で採取した土壌試料から分離された。

株Ｒ３１０−１０４の培養および生理学的特性はシアー
リングはか（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｇｏｔｔｌｉ
ｅｂ）、〔インタナショナル・ジャーナル・オフ・シス
テマチック・バタテリオロジ−（Ｉｎｂ、　Ｊ、　５ｙ
ｓｔ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、）　、１６　：　３１３〜３４０
．１９６６）およびゴートン（Ｇｏｒｄｏｎ）はか〔ジ
ャーナル・オフ・ゼネラル・ミクロバイオロジー（Ｊ、
　Ｇｅｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）　、１０９　：　６９〜７８．
１９７８）の方法により試験した。全細胞および精製細
胞壁中の診断成分（アミノ酸および塘）はそれぞれレジ
エバリール（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ）　（ジャーナル
・オフ・ラボラトリ−・アンド・クリニカル・メディシ
ン（Ｊ、　Ｌａｂ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｅｄ、）　、Ｔ上
？　９３４〜９４４．１９６８）およびベラカー（Ｂｅ
ｃｋｅｒ）ほか、〔アプライド・ミクロバイオロジー（
Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）、土主＝２３６〜
２４３．１９６５）の方法により分析した。リン脂質は
レジユバリール（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ）ほか〔バイ
オケミカル・システマチックス・アンド・エコロジー（
Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５ｙｓｔ、　Ｅｃｏｌ、）　、５　
：２４９〜２６０，１９７７）の方法により確認した。

メナキノン試料はコーワン（Ｃｏｌｌｉｎｅ）ほか、〔
ジャーナル・オフ・ゼネラル・ミクロバイオロジー（Ｊ
、　Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）　、１００　：
　２２１〜２３０．１９７７）の操作により調製し、質
量分析計で分析した。グリコラート試験およびミコラー
ドの検出はそれぞれウチダほか（Ｕｃｈｉｄａ　ａｎｄ
Ａｉｄａ）　　（ジャーナル・オフ・ゼララル・アンド
・アプライド・ミクロバイオロジー（Ｊ、　Ｇｅｎ、　
／１ｐｐｌ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）　、２５　：　１６９〜１８３
．１９７９）およびミニキン（Ｍｉｎｎｉｋｉｎ）ほか
〔ジャーナル・オフ・ゼネラル・ミクロバイオロジー（
Ｊ、　Ｇｅｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）　、８８　：　２００〜２０４
．１９７５）の方法により行なった。

藍果 形態： 基質および気中菌糸は長く、よく枝分れし、環体または
球状細胞に分裂しない。基質および気中菌糸はともにフ
ック、ループまたは長・いら旋状菌糸を形成する。気中
および基質菌糸中のこれらのの胞子は球形または卵形（
０，６〜０．８　Ｘ　Ｏ，７〜１．２μｍ）、非運動性
であり、滑らかな表面を有する。厚膜顆粒が場合により
観察される。胞子嚢およびら旋部が形成されない。

培養および生理学的特性： 増殖はツアペック（Ｃｚａｐｅｋ）のスクロース−ナイ
トレート寒天上の貧弱な増殖を除いて診断培地上で並で
ある。気中菌糸は環中に形成されたときに白色である。

基質菌糸は帯黄〜黄褐色である。

帯褐色拡散性色素が有機培地およびチロシン寒天中に生
成され力＼゛　　、チロシナーゼ反応は陰性である（表
１および２）。

自然突然変異体の発生： 株Ｒ３１０−１０４の最初の培養株は気中菌糸を形成す
る能力を失なった突然変異体を包含した。

突然変異体株磁１０１は株Ｒ３１０−１０４とほぼ同水
準の抗生物質ＢＵ−４１４６Ｔを生威し、れた。突然変
異体は細胞化学に関して株Ｒ３１０−１０４とは区別さ
れなかった。ストレプトマイセス・アンフイビオスボル
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｍｐｈｉｂｉｏｓｐｏ
ｒｕｓ）株Ｒ３１０−１０４−１０１と称されるこの突
然変異体の生物学的に純粋な培養株はアメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクショ　ン　（八ｍｅｒｉｃａｎ
　　Ｔｙｐｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　Ｃｏ１１ｅｃｔｉ
ｏｎ＋Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　Ｍａｒｙｌａｎｄ）　　
受託番号Ａ　Ｔ　ＣＣ−５３９６５のもとで寄託された
。

細胞化学： 全細胞氷解物は主成分としてＬＬ−ジアミノピメリン酸
、ガラクトース、マズロースおよびリボ−スををみ１己
少量のマンノースおよびグルコースを含む、精製した細
胞壁はＬＬ−シアミノピメリン酸、グリシン、グルタミ
ン酸、アラニン、および少量のアスパラギン酸を含み、
中性糖を含まない。リン脂質はホスファチジルエタノ−
ルア逅ン、ホスファチジルグリセロールおよびホスファ
チジルイノシトールを含む。従って、株Ｒ３１０−１０
４は細胞壁型■、糖型Ｂ、およびリン脂質型Ｐ−■に属
する。主メナキノンはＭ　Ｋ　−９（Ｈａ）である。ミ
コラードは含まれない。グリコラート試験は陰性である
。

株Ｒ３１０−１０４の分類学位置： 株Ｒ３１０−１０４の次の特性は該株およびストレプト
マイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）に共通である：
（１）気中菌糸中の胞子鎖形態、（２）精製細胞壁：型
Ｉ　　（ＬＬ−シア累ノビメリン酸、グリシンを含み、
中性糖を含まない）　、（３１ホスフアチジルエタノー
ルアミンを含むリン脂質型Ｐ−Ｉ［、および（４）主メ
ブキノン：　　ＭＫ−９（Ｈｌり、一方、株Ｒ３１０−
１０４は次の特性：（１）鎖中に部分的に胞子形成する
フックまたはら旋状基質菌糸の形成、および（２） セス （Ｓ　ｔｒｅｐ　ｔｏｍｙｃｅｓ　） と区別できる。

表 ２゜ 〇− ０４の （Ｗ） 、弱陽性 略号 ＡＭ：気中菌糸、ＳＭ：基質菌糸、ＤＡＰ　：　２゜６
−ジアくノピメリン酸、ＬＬ　：　ＬＬ−異性体、Ｍｅ
ｓｏ　：メソー異性体、Ｍａｄ　　：マズロース、Ｇｏ
ｌ　　ニガラクトース、Ａｒａ　　：アラビノース、ｘ
ｙｔ　　：キシロース、Ｖ：可変（＋または−） 株Ｒ３１０−１０４の前記特性は該株が放線菌類のこれ
まで記載されていない種であることを示す。株Ｒ３１０
−１０４はストレプトマイセス・アンフイビオスポルス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｍｐｈｉｂｉｏｓｐｏ
ｒｕｓ）と称された。株Ｒ３１０−１０４の生物学的に
純粋な培養液はアメリカン・タイプ・カルチャー・とし
て寄託された。

きである。それは殊に常法例えばＸ線、紫外線、ナイト
ロジェンマスタードによる処理、ファージするものとす
る。

抗！厭 ＢＵ−４１４６７はストレプトマイセス・アンフィビオ
スボルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｍｐｈｉｂｉ
ｏｓｐｏｒｕｓ）株Ｒ３１０−１０４（ＡＴＣＣ−５３
９６４）あ炭素源例えばＤ−アラビノース、デキストリ
ン、増殖される。普通培地はまた事化性窒素源例えば魚
粉、ペプトン、大豆粉、落花生釉、綿実粕、コーンステ
イープリカー、酵母エキスまたはアンモニウム塩を含む
べきである。無機塩例えば塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸塩など
が、必要であれば添加される。微量元素例えば銅、マン
ガン、鉄、亜ことができる。

ＢＵ−４１４６７の製造は生！ｔ１１ｉ勾の良好な増殖
が行なわれる温度、例えば１９〜３９℃で行なうことが
できるが、しかし、発酵は好ましくは２５〜３５℃で、
最も好ましくは２７〜３２℃で行なわれる。抗生物質の
生成は一般に約４〜７日の開存なわれる。

発酵はフラスコ中、あるいは種々の容量の実験室または
工業的発酵槽中で行なうことができる。

タンク発酵を拮Ｇうとき、生物体の普通培養または土壌
培養あるいは凍結乾燥培養株中に増殖形接種物を生成さ
せることが望ましい。この方法で活性接種物を得た後、
それをＢＵ−４１４６Ｔの大規模製造のための発酵タン
ク培地に無菌的に移す。

増殖形接種物が生成される培地は、それが生＆幻生Ｐ！
つ序良好艮生島づ３むのＺ゛あ　　°ればタンク中に利
用されるものと同じかまたは異なる乙のＣ″あ、乙ｔ４
い。発酵中のかくはんは機械的Ｉ覚１千Ｈ１によりｆｒ
ＵＪつことができ、また普通８漬　　剤例えばラード油
またはシリコーン油を、必要であれば添加できる。

発酵培地中のＢＵ−４１４６Ｔの生成は生物学的検定に
より発酵の過程中に容易に追跡することができる。

発酵培地からのＢＵ−４１４６Ｔ抗生物質の分離および
ＢＵ−４１４６Ｔの精製は普通の溶媒抽出およびクロマ
トグラフィー操作により達成することができる。好まし
い分離および精製操作は実施例２中に示される。

ＢＵ−４１４６７の ＢＵ−４１４６Ｔは淡黄色固体として分離された。それ
はアセトニトリル、ｎ−ブタノール、メタノール、酢酸
エチル、クロロホルムおよびジメチルスルホキシド中に
易溶性、しかしｎ−ヘキサンおよび水中に実質的に不溶
である。それはヨウンおよびアントロン試薬に対し陰ｄ
し　を与えた。

ＢＵ−４１４６Ｔの物理化学的性質は表４中に総括され
る。

表４゜ 性質 Ｍ、Ｐ。

〔α〕２４・Ｓ 元素分析 ６Ｔの物理化学的性質 ＢＵ−４１４ ：淡黄色固体 １２１−１２５℃ ニー２０±１’　　（Ｃ０，５，ＤＮＳＯ）計算値（Ｃ
ｚａｌｌｆｆｓＮＯ６・１／４Ｈ！０）　　：　Ｃ６７
，５８、Ｈ７，７４、Ｎ　３．０３ 測定値　　：　Ｃ６７，４７、Ｈ８，０６、Ｎ　２．８
７Ｍ５　ｐ−３ＩＭＳ　　　　：　ｍＨｚ　４５８（Ｍ
＋Ｈ）”　、４８０（Ｍ＋Ｎａ）”　、４９６（Ｍ＋Ｋ
）’Ｎ−Ｎ−５Ｉ　　　　：　ｍＨｚ　４５６（Ｍ−Ｈ
）−ＩＲｖ”’　　ｃｍ−’　：　３４５０．３２３０
．３１００．２９６０．２９３０．１７００．１６４０
．１３８０．１２６０．１１９０．１１４０．１１００
０ＴＬＣ（Ｓｔｏ、メルクＦ２５４）　：Ｃ）ｌｚｃＩ
ｚ−ＭｅＯＩＩ　　　　（９５：５）　　Ｒｆ　Ｏ，３
６ＥｔＯＡｃ−ｎ−ヘキサン（１０：１）　　　０．２
７表５゜ ＢＵ−４１４６Ｔの１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲデータ
ａ）、ｂ）帰属は交換で゛之３ 量スペクトル研究を基にしてＣｔｂＨｘｓＮＯｂである
と決定され。ＫＢｒ中のｒＲスペクトル（図１）は３２
３０およびｆ７００ｃｍ−’に強い吸収を示し、イミド
基の存在を示唆した。３１ＭＳスペクトルはｍＨｚ　４
５８　（Ｍ＋Ｈ）″、ｍ／ｚ４８０　（Ｍ＋Ｎａ）＋お
よび４９６　　（Ｍ＋Ｋ）　”に擬似分子イオンピーク
を示した。グルタルイミド群抗生物質に対して通常観察
されるｍ／　ｚ　１８０　（ＣＪ＋Ｊ（ｈ）における強
いフラグメントイオンピークがＢＵ−４１４６ＴのＥＩ
ＭＳスペクトル中に認められた。

ボニル炭素を含む２６個の炭素を示した。プロトンと炭
素との相関はＩＨＩ）ｌおよび１３０　ＩＨｃｏｓｙス
ペクトルにより表５に示すように２ｉされ、次の部分構
造の帰属を可能にした。

３フラグメントの連結は’　”　Ｃ’　ＨＤ：／７Ｌ＞
’７ＣＯＳＹ実験により行なわれ、ＢＵ−４１４６７の
　最終構造が であると決定された。

メタノール（５１Ｒ１）中に熔解したＢＵ−４１４６Ｔ
（１６■）を２０％パラジウム／炭素（１６■）上で１
６時間水素化した。触媒を濾過により除去し、反応混合
物を減圧で蒸発させた。残留物をセファデックス（Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ）　　Ｌ　Ｈ−２０のカラム上でクロマト
グラフにかけ、メタノールで展開するとヘキサヒドロ−
ＢＵ−４１４６７（１０■）が得られた。

この誘導体は弱い細胞毒性を示し、その活性はＢＵ−４
１４６Ｔより約１００倍弱かった。ＥＩＭＳスペクトル
はｍ／ｚ　　４６３　（Ｍ）”に分子イオンピーク、ｍ
／　ｚ　　１８０　　（Ｃ９ＨＩＯＮＯ３）　、ｍ／　
ｚ２６５　（Ｍ”　　ＣＪ＋ＪＯ４）およびｍ／ｚ　　
３０８（Ｍ”　　ＣＪ＋ｏＮＯ＊）に多量のフラグメン
トビークを示し、ＢＵ−４１４６７の帰属構造を支持し
た。

生豊ヱ性這性 ＢＵ−４１４６Ｔの最小阻止濃度（Ｍ　Ｉ　Ｃ）を系列
寒天希釈法により種々の細菌および真菌に対して測定し
た。普通寒天〔蒙　るη　　　〕を細菌に対し、サブロ
ー（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ）デキストロース寒天〔デイフ
コ（Ｄｉｆｃｏ）　）を真菌に対して用いた。接種高量
；は細菌に対して１０”〜１０“ｃｆｕ　／−に、真菌
に対して１０３ｃｆｕ　／ｄに調装した。

ＢＵ−４１４６Ｔは１００ｍｃｇ／−でダラム陽性菌お
よびダラム陰性菌に対して阻止活性を示さなかった。表
６に総括したように、該化合物はクリプト　コツカス・
ネオフォルマンス （Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）
、アスペルギルス０フ５Ｆｆ−クス（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、フザリウム・モニリフ
ォルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）
およびムコール・スピノテス（Ｍｕｃｏｒ　５ｐｉｎｏ
ｓｕｓ）に対して強力な活性を示した。しかし、カンジ
ダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｔｓａ　ａｌｂｉｃａｎｓ
）およびトリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉ
ｃｈｏｐｈｙｔｏｎｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）は
該抗生物質に対し感受性がわイミド群抗生物質、のそれ
より３０〜１００倍強力であった。

ＢＵ−４１４６Ｔをマウスおよびヒト細胞系に対する試
験管内細胞毒性、およびマウス中の生体内抗腫瘍活性に
ついて試験した。マイトマイシンＣを試験管内および生
体内実験の両方に太１照化合物として用いた。

Ｂ１０−ＦＩＯ（マウス黒色腫）およびモザー（Ｍｏｓ
ｅｒ）　（ヒト結腸直腸癌）細胞はウシ胎児血清（ＦＣ
Ｓ、１０％）およびカナマイシン（６０ｍｃｇ／−）を
補足した製線イーグル（Ｅａｇｌｅ）最少必須培地中で
対数期に増殖させ、ＨＣＴ−１１６（ヒト結腸癌＞ｍ胞
はＦＣＳ（１０％）、ペニシリン（１００Ｕ／ｄ）およ
びストレプトマイシン（１００ｍｃｇ　／ｄ）を補足し
たマツコイ　（Ｍａｃｃｏｙ）の５Ａ培地中で増殖させ
た。Ｂ１６−ＦＩＯ、モザーおよびＨＣＴ−１１６細胞
を採取し、９６ウエルミクロタイタープレートのウェル
中へそれぞれ３Ｘ１０’　、６Ｘ１０’および６Ｘ１０
’細胞／−の接種動量　で試験物質とともに移植・した
。

それらを５％二酸化炭素および９５％空気の力０湿気！
丸中で３７℃で７２時間　埼湊　　　した。

腫瘍細胞に対する細胞毒性は、生存細胞乙染色後５４０
ｒ＋ｍにおいて比色分析法で測定した。結果は表７中に
総括される。ＢＵ−４１４６Ｔは前記腫瘍細胞系に対し
て非常に活性であり、化合物のＩＣ１゜イ直はマイトマ
イシンＣのそれより約２０〜６０倍すぐれていた。

表７．　マウスおよびヒト腫瘍細胞に対するＢＵ−４１
４６Ｔ　　　　　Ｏ，０３０，０４７０，０１４マイト
マイシン　ＣＯ，５０１，２０，８０高分子（ＤＮＡ、
ＲＮＡおよびタンパク質）台底に対するＢＵ−４１４６
７の阻止効果を培養したＢ１６−ＦＩＯ黒色腫細胞中で
測定した。Ｂ１６−ＦＩＯＩＩＩ胞（ｌ　ＱＳ細胞／ｄ
）を化合物とともに３７℃で３．５時間（ＤＮＡ合戒台
底し）または４時間（ＲＮＡおよびタンパク質台底に対
し）え、さらに３０分（ＤＮＡに対し）または６０分腫
瘍細胞の酸不溶画分中に取込まれた放射能を液体シンチ
レーションカウンターにより測定した。

表８に示すように、ＢＵ−４１４６７はＤＮＡおよびタ
ンパク質台底の両方を同程度に阻止し、効力はＩＣ５゜
に関してＲＮＡ合戒台底けるよりは＼”２００倍）曳か
った。

ＢＵ−４１４６Ｔ マイトマイシン　Ｃ ０，０２３ １，６ ４，２ １ ０，０２４ ０ ＢＵ−４１４６７の生体内活性は実験マウス腫瘍系で試
験した。めすＣＤＦ、マウスに１０ｈすンバ性白血病Ｐ
３８８細胞を含む希腹水液０．４−を腹腔内に接種し、
おすＢｐＦ、マウスに１０％メラニン性黒色種Ｂ１６ブ
ライ０．５−を腹腔内に接種した。試験化合物は次のＨ
ａ）スケジュール：第１日のみ（ＱＩＤＸ３）、第１．
５および９日に（Ｑ４ＤＸ３）または第１〜９日（ＱＩ
ＤＸ９）に１回、によりマウスに腹腔内投与した。Ｐ３
８８実験においてＱＩＤＸ９スケジュールにより投与し
たときにＢＵ−４１４６Ｔは最小有効量に関してマイト
マイシンＣと同様に活性であり（表９）、一方それはＢ
Ｉ３黒色腫に対して　　　　　最大表９゜ Ｐ３８８白血病（ｉｐ）に対する ビヒクル ４Ｄ ×３ １１．０ ＋０．８ マ関生存時間 円は有意抗腫瘍効果 （Ｔ／Ｃ−≧−１２５％） を示す。

表１０゜ Ｂ１６ＩＩＡ色Ｍｌ（ｉｐ） に対するＢＵ− ピ【クル Ｑ４［１ ×３ １４．５ ＋０．３ ６？間生存時間 円は有意抗腫瘍効果 を示す。

（Ｔ／Ｃ＞１２５％） 上に示したように、 ＢＵ−４１４６Ｔは抗真菌 および抗腫瘍再活性を示す。

従って、１観点において、本発明はＢ　Ｕ　−４１４６
Ｔまたはその薬学的組成物の有効抗真菌量を宿主に投与
することを含む、真菌感染により冒された動物宿主を治
療する方法を提供する。

なお他の観点において、本発明はＢ　Ｕ　−４１４６Ｔ
の有効抗真菌量を不活性な、薬学的に許容できる担体ま
たは希釈剤と組合せて含む薬学的組成物を提供する。

本発明の他の観点によれば、ＢＵ−４１４６Ｔまたはそ
の薬学的組成物の有効腫瘍阻止量を宿主に投与すること
を含む、ＢＵ−４１４６７に感受性の悪性腫瘍により冒
された哺乳動物宿主を治療的に処置する方法が提供され
る。

最後に、本発明はＢＵ−４１４６Ｔの有効腫瘍阻止量を
不活性な、薬学的に許容できる担体または希釈剤と組合
せて含む薬学的組成物を提供する。

本発明により提供される薬学的組成物は他の活性成分例
えば他の抗真菌または抗腫瘍物質を含むことができ、投
与の所望経路に適する形態に調製することができる。そ
のような組成物の例には経口投与のための固体組成物例
えばカプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤、経口
投与のための液体組成物例えば溶液、懸濁液、シロップ
剤またはエリキシル剤、並びに非経口投与のための調製
物例えば無菌の溶液、懸濁液または乳濁液が包含とがで
きる。もちろん、使用されるＢ　Ｕ　−４１４６Ｔの実
際の用量は配合された個々の組成物、適用の方式並びに
処置される個々の位置、宿主および疾患により変動する
ことが理解されよう。薬物の作用＋＝！？ｌ！する多く
の因子が年令、性、体重、食事、投与の時間、投与の経
路、排出の速さ、宿主の状態、薬物組合せ、反応感受性
および疾患の重さを含めて考慮されよう。

次の特定態様は単に例示として意図され、発明の範囲を
限定するためではない。

実施例Ｉ ＢＵ−４１４６７の 、芦トレブトマイセス・アンフィビオフポルス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｍｐｈｉｂｉｏｓｐｏｒｕｓ）
株！１ｋＬＲ３１０−〕　２％、ファルマメディア （Ｐｈａｒｍａｍｅｄｉａ）　（）レイダーズプロテイ
ン（Ｔｒａｄｅｒ’ｓ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）　）　　１％
、ＺｎＳＯ４・７　Ｈ２Ｏ０，００３％およびＣａＣ０
，０，４％からなるシード培地（ｐＨ７，０、オートク
レーブ処理前）１００−を入れた５００ｄ三角フラスコ
中に接種した。シード培地を３２℃で７日間、回転振と
う機（２００ｒｐｍ）上で　よを４　　　し、生じた培
養株５−を、プロティン−８■〔ヰ。束　　　　　　　
　　〕３％、グルコース３％、ファルマメディア０．５
％、酵母エキス〔オリエンタル・イースト（Ｏｒｉｅｎ
ｔａｌＹｅａｓｔ　Ｃｏ、））　０．１％およびＣａＣ
０３ｏ、　３％からなる生産培地（ｐＨ７，０、滅菌前
）１００−を含む５００−三角フラスコ中へ移巳た。発
酵を２８℃で７日間、回転振とう機（２００ｒｐｍ）上
で行なった０発酵ブロス中の抗生物質生産はＢＩ３黒色
腫細胞に対する試験管内細胞毒活性によりモニターした
。

実施例２ ＢＵ−４１４６Ｔの　　および 実施例１の操作により得られたストレプトマイロス（１
８１，ｐＨ７，４）をブタノール（１８ｌ）とともに１
時間かくはんした。溶媒層をシャープレス（Ｓｈａｒｐ
ｌｅｓ）型遠心分離機で分離し、減圧で蒸発させた。残
留物（３０ｇ）を水（１０中懸ヘキサン（６００ｍｆ）
中へ滴加するとＢ　Ｕ　−４１４６Ｔの粗固体（２，６
５ｇ）が沈澱した。それをシリカゲルのカラム〔ワコー
（１４ａｋｏ）ゲルＣ−２００、φ２．Ｏｘ５０ｃｍ）
上に亀壕し、それを塩化メチレン−メタノール混合物（
１００：Ｏ〜９０：１０゜ｖ　／　ｖ比）で展開した。

熔出：参よ濾紙円板検定を用いるクリプトコンハス・ネ
オフオルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆ
ｏｒｍａｎｓ）　Ｉ　Ａ　Ｍ　４５１４に対する抗真菌
活性およびＢＩ３黒色腫細胞に対する細胞毒性によりモ
ニターした。活性画分を合せて減圧で蒸発させると淡黄
色固体とうえ、それを、酢酸エチル−ｎ−ヘキサン（１
：１、ｖ　／　ｖ　）で予め平衡させたシリカゲルのカ
ラム（φ２．０×３５ａｍ）上で再びクロマトグラフィ
ーにかけた。

溶離を同じ溶媒で行ない、生物活性画分をプールし、濃
縮乾固した。得られた固体をさらにメタノールを用いて
セファデックスＬＨ−２０クロマトグラフィー（φ２．
２Ｘ６０ｃｍ）により精製した。

活性画分を合わせ、減圧で蒸発させるとＢＵ−４１４６
７の純粋な固体（４５■）が得られた。

【図面の簡単な説明】

１１、ＡよりＵ−４１４６Ｔ　（ＫＢｒペレット）の赤
外吸収スペクトルを示す。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するＢＵ−４１４６Ｔと称される抗生物質化合物。
2. （２）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するＢＵ−４１４６Ｔの製造法であって、ストレプ
   トマイセス・アンフィビオスポルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
   ｙｃｅｓ　ａｍｐｈｉｂｉｏｓｐｏｒｕｓ）株Ｒ３１０
   −１０４（ＡＴＣＣ−５３９６４）あるいはそのＢＵ−
   ４１４６Ｔ産生突然変異体または変異体を、炭素および
   窒素の資化性源を含む水性普通倍地中で、液体好気性条
   件下に実質量のＢＵ−４１４６Ｔが前記培地中に前記微
   生物体により生産されるまで培養し、次いで培地からＢ
   Ｕ−４１４６Ｔ抗生物質を回収することを含む方法。
3. （３）抗生物質ＢＵ−４１４６Ｔを普通培地中の培養で
   回収可能量生成できるストレプトマイセス・アンフィビ
   オスポルス（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｍｐｈｉｂｉ
   ｏｓｐｏｒｕｓ）株Ｒ３１０−１０４（ＡＴＣＣ−−５
   ３９６４）の生物学的に純粋な培養株。
4. （４）ＢＵ−４１４６Ｔの治療有効量および薬学的に許
   容できる担体または希釈剤を含む、真菌感染により冒さ
   れた動物宿主の治療的処置に使用する薬学的組成物。
5. （５）ＢＵ−４１４６Ｔの腫瘍阻止量および薬学的に許
   容できる担体または希釈剤を含む、ＢＵ−４１４６Ｔに
   感受性の腫瘍により冒された哺乳動物宿主の治療的処置
   に使用する薬学的組成物。
6. （６）ＢＵ−４１４６Ｔの抗腫瘍有効量を宿主に投与す
   ることを含む、真菌感染により冒された動物宿主を治療
   的に処置する方法。
7. （７）ＢＵ−４１４６Ｔの腫瘍の阻止に有効な量を宿主
   に投与することを含む、ＢＵ−４１４６Ｔに感受性の悪
   性腫瘍を哺乳動物中で阻止する方法。