JPH03183492A - ２―Ｏ―α―Ｄ―グルコピラノシル―Ｌ―アスコルビン酸高含有物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸高金高含有物業的製造方法に関する。

［従来の技術］ Ｌ−アスコルビン酸は、 式［Ｉ］： ＣＨ２−ＯＨ で示される化学構造を有しており、ヒト、サル、モルモ
ットにとっては、生体内で合成できず、必須栄養素、ビ
タミンＣとなっている。

Ｌ−アスコルビン酸は、生体内で、例えハ、生体結合組
織の主成分であるコラーゲンの合成に必要なプロリンや
リジンのヒドロキシル化反応に関与し、また、例えば、
チトクロームＣのＦｅ”＋“を還元してＦｅ″″＋にす
るなどの酸化還元反応に関与し、更には、白血球増加に
よる免疫増強作用に関与するなどが知られており、生体
の健康維持、増進に重要な役割をなしている。壊血病は
、Ｌ−アスコルビン酸の欠乏症として古くから知られ、
皮膚の虚弱化、点状出血、斑状出血、歯肉や骨髄下出血
などを呈する。これを予防し、健康を維持するために、
Ｌ−アスコルビン酸の推奨１日所要量（ＲＤＡ）が定め
られ、それによれば、我国では成人男子６０ａｇ１成人
女子５０■ｇとされている。

Ｌ−アスコルビン酸の用途は、単に必須栄養素としての
ビタミンＣ強化剤にとどまらず、その理化学的性質、生
理作用から、例えば、酸味剤、還元剤、酸化防止剤、漂
白剤、安定剤などとして各種化学反応基材、飲食物など
に、また、ウィルス性疾患、細菌性疾患、悪性腫瘍など
感受性疾患の予防剤、治療剤すなわち抗感受性疾患剤に
、更には、還元剤、紫外線吸収剤、メラニン生成抑制剤
などの美肌剤、色白剤などとして化粧品にまで及び、そ
の範囲は極めて広い。

Ｌ−アスコルビン酸の最大の欠点は、それが直接還元性
を示すため、極めて不安定で、酸化分解を受は易く、容
易にその生理活性を失うことである。

Ｌ−アスコルビン酸を安定化させる方法として、Ｌ−ア
スコルビン酸の糖誘導体が提案されている。

例えば、先に本発明者等が、「ビタミン」第４３巻、第
２０５乃至２０９頁（１９７１年）、「ビタミン」第４
７巻、第２５９乃至２６７頁（１９７３年）および特公
昭４８−３８１５８号公報で、生化学的手法によるＬ−
アスコルビン酸グルコシドの合成法を開示している。

しかしながら、これらに開示されているアスコルビン酸
グルコシドは、いずれも同様の方法で調製され、得られ
たアスコルビン酸については、例えば、該公報第２１１
第１４乃至１６行で、「得た誘導体はアスコルビン酸の
６番の炭素の第１アルコール基がエーテル結合によりグ
ルコシドを形成したもの」と記載され、また、その生成
がマルトースからα−グルコシル基の糖転移反応である
こと、更には、直接還元性を示す性質を有するなどから
、その化学構造が、 式［ＴＩＥ で示されるものであると考えられ、その安定化の程度に
ついても、該公報実施例１の表の結果から明らかなよう
に、Ｌ−アスコルビン酸よりは優れているものの、なお
不安定であり、未だ実用化されるに至っていない。

また、有声等が特公昭５ｇ−５９２０号公報で、有機化
学的手法によるＬ−アスコルビン酸糖誘導体の合成法を
開示している。

しかしながら、このアスコルビン酸糖誘導体は、該公報
第７＠第６行乃至第８ｆｉ第１１行で、２．３−ジ−０
−（β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスコルビン酸
など２１種類ものβ−Ｄ−グルコピラノシル型のＬ−ア
スコルビン酸糖誘導体を掲げて説明していることからも
明らかなように、すべてのＤ−グルコースがβ結合して
いるＬ−アスコルビン酸糖誘導体である。

また、数本等が特開昭５８−１９８４９８号公報で有機
化学的手法によるＬ−アスコルビン酸糖誘導体の合成法
を開示しているが、これもβ−グルコシル型のＬ−アス
コルビン酸糖誘導体である。

また、これらβ−Ｄ−グルコピラノシル型のＬ−アスコ
ルビン酸糖誘導体について、本発明者等が検討したとこ
ろ、生体、とりわけ、ヒトにおいて、生理活性を充分発
揮させることの困難なことが判明した。更に、その有機
化学的手法による合成法は、反応が複雑で収率も低く、
それ故に、経済性が劣り、加えて、その誘導体の無毒性
、安全性を確保する上において、相当の困難が伴う欠点
のあることも判明した。

叙上のように、従来知られているＬ−アスコルビン酸糖
誘導体の提案は、安定性、安全性、生理活性、経済性な
どの点で、いずれも不充分であり、その実現を見るに至
っていない。

そこで、本発明者等は、従来のＬ−アスコルビン酸糖誘
導体の欠点を解消するために生化学的手法による糖転移
反応を利用し、新しいＬ−アスコルビン酸糖誘導体を目
指して鋭意研究を続けてきた。

その結果、先に特許出願した特願平１−１２７０７２号
明細書に記載したように、直接還元性を示さず、安定性
に優れ、しかも生体内で容易に加水分解され、生理活性
の点でも申し分のない新規物質、α−グリコシルーＬ−
アスコルビン酸、とりわけ、２−０−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−し一アルコルビン酸を見出し、更に、その製
造方法並びに飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品などへの
用途を確立した。

併せて、この２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸は、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシ
ル糖化合物とを経口摂取することにより、生体内で生成
され、代謝される物質であって、本来、生体物質であっ
て、安全性の上からも理想的なＬ−アスコルビン酸の新
規糖誘導体であることも見い出した。

しかしながら、糖転移反応を利用して得られた反応水溶
液には、目的とする安定な２−０−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸の含有率が低く、通常、純
度４０％（固形物当りＶ／Ｗ％）未満であり、他に夾雑
物として、例えば、Ｌ−アスコルビン酸、Ｄ−グルコー
ス、α−グルコシル糖化合物などを６０％以上も含有し
ている。

このような水溶液をそのまま濃縮した濃縮液は、比較的
褐変、変質しやすく、その保存、取扱いの困難なことが
判明した。また、その水溶液を、そのまま濃縮、粉末化
して得られる粉末は、吸湿性の強い非晶質粉末であって
、大気中で容易に吸湿し、潮解、固結を起こし易い欠点
を有していることが判明した。

［発明が解決しようとする課題］ 糖転移反応により得られた２−０−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸低含有物の欠点を解消する
ためのものであって、とりわけ、その低含有物から安定
な２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸を分離精製し、その高含有物を工業的に大量生産す
る方法の確立が望まれている。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、糖転移反応により得られた２−〇−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸低含有物の
欠点を解消し、安定な２−０−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸高金高含有物業的製造方法の確
立を目指して鋭意研究した。

その結果、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合
物とを含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグ
ルコアミラーゼとを作用させて得られる２−０−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ
以外の夾雑物を含有する溶液を、原料溶液として、これ
を強酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムにかけ、次
いで水で溶出し、この溶出液の２−０−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取する
ことにより、安定な２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸高金高含有物易に高収率で得られ
、それの工業的製造方法として好適であることを見い出
し、加えて、その２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸高含有物が流動性良好で安定な無水
型の結晶を析出することを見い出し、その工業的大量生
産も容易であることを見出して本発明を完成した。

本発明において、２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸は、Ｌ−アスコルビン酸とα−グル
コシル糖化合物とを含有する溶液に糖転移酵素または糖
転移酵素とグルコアミラーゼとを作用させて生成させれ
ばよい。

本明細書でいう直接還元性を示さないとは、Ｌ−アスコ
ルビン酸の場合とは違って、そのままで、２゜６−シク
ロルフエノールインドフエノールを還元脱色しないこと
を意味する。

本明細書でいうＬ−アスコルビン酸とは、特に不都合が
生じない限り、遊離のＬ−アスコルビン酸のみならず、
Ｌ−アスコルビン酸のアルカリ金属塩若しくはアルカリ
土類金属塩などのＬ−アスコルビン酸塩、または、それ
らの混合物を意味する。従って、本発明の糖転移反応に
用いるＬ−アスコルビン酸としては、通常、遊離のＬ−
アスコルビン酸だけでなく、必要に応じて、Ｌ−アスコ
ルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウムな
どが適宜用いられる。

また、同様に、本明細書でいうα−グリコシルーＬ−ア
スコルビン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸などについても、特に不都合が生じな
い限り、遊離の酸のみならず、それらの塩をも意味する
。

本発明で用いるα−グルコシル糖化合物は、同時に用い
る糖転移酵素によってＬ−アスコルビン酸にα−Ｄ−グ
ルコシル残基を等モル以上結合したα−グリコシルーＬ
−アスコルビン酸を生成できるものであればよく、例え
ば、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオー
ス、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルト
ヘプタオース、マルトオクタオースなどのマルトオリゴ
糖、デキストリン、シクロデキストリン、アミロースな
どの澱粉部分加水分解物、更には、液化澱粉、糊化澱粉
、溶性澱粉などが適宜選択できる。

従って、α−グリコシルーＬ−アスコルビン酸の生成を
容易にするためには、糖転移酵素に好適なα−グルコシ
ル糖化合物が選ばれる。

例えば、糖転移酵素として、α−グルコシダーゼ（Ｅ　
Ｃ３，２，１，２０）を用いる際には、マルトース、マ
ルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオ
ース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、マル
トオクタオースなどのマルトオリゴ糖、または、ＤＥ約
５乃至６０のデキストリン、澱粉部分加水分解物などが
好適であり、シクロマルトデキストリン・グルカノトラ
ンスフェラーゼ（Ｅ　Ｃ２，４，１，１９）を用いる際
には、シクロデキストリンまたはＤＥ１未満の澱粉糊化
物からＤＥ約６０のデキストリンまでの澱粉部分加水分
解物などが好適であり、α−アミラーゼ（ＥＣ３，２，
１，１）を用いる際には、ＤＥ１未満の糊化澱粉からＤ
Ｅ約３０のデキストリンまでの澱粉部分加水分解物など
が好適である。

反応時のＬ−アスコルビン酸の濃度は、通常、ＩＶ／Ｖ
％以上、望ましくは、約２乃至３０Ｖ／Ｖ％含有してお
ればよく、α−グルコシル糖化合物の濃度は、Ｌ−アス
コルビン酸に対して、通常、約０．５乃至３０倍の範囲
が好適である。

本発明に用いる糖転移酵素は、Ｌ−アスコルビン酸とこ
の酵素に好適なα−グルコシル糖化合物とを含有する溶
液に作用させる時、Ｌ−アスコルビン酸を分解せずに、
Ｌ−アスコルビン酸の２位の炭素のアルコール基にα−
グルコシル基を１乃至数個転移してα−グリコシルーＬ
−アスコルビン酸を生成するものであればよい。

例えば、α−グルコシダーゼは、マウスの腎臓、ラット
の腸粘膜、イヌ、ブタの小腸など動物由来の酵素、イネ
種子、トウモロコシ種子など植物由来の酵素、更には、
ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｕ■）属などに属するカビ、またはサツカロミ
セス（Ｓａｃｃｈａｒｏ■ｙｃｅｓ　）属などに属する
酵母などの微生物を栄養培地で培養し得られる培養物由
来の酵素が、シクロマルトデキストリン・グルカノトラ
ンスフェラーゼは、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、
クレブシーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属などに属する
細菌培養物由来の酵素が、α−アミラーゼは、バチルス
属などに属する細菌培養物由来の酵素などが適宜選択で
きる。

これらの糖転移酵素は、前記の条件を満足しさえすれば
、必ずしも精製して使用する必要はなく、通常は、粗酵
素で本発明の目的を達成することができる。必要ならば
、公知の各種方法で精製して使用してもよい。また、市
販の糖転移酵素を利用することもできる。反応時のＰＨ
と温度は、糖転移酵素が作用してα−グリコシルーＬ−
アスコルビン酸が生成すればよく、通常、ｐＨ３乃至９
、温度約２０乃至８０℃から選ばれる。使用酵素量と反
応時間とは、密接な関係があり、通常は、経済性の点か
ら約３乃至８０時間で反応を終了するように酵素量が選
ばれる。

また、固定化された糖転移酵素をバッチ式で繰り返し、
または連続式で反応に利用することも有利に実施できる
。

また、反応中にＬ−アスコルビン酸が酸化分解を受は易
いので、できるだけ嫌気または還元状態で遮光下に維持
するのが望ましく、必要ならば、チオ尿素、亜硫酸塩な
どを共存させて反応させることも有利に実施できる。

また、必要ならば、糖転移反応能を有する微生物の増殖
中に、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物と
を共存させて、その目的物質を生成させることも有利に
実施できる。

２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸を生成させるに際して、糖転移酵素とグルコアミラー
ゼとを同時に作用させることもできる。一般的には、糖
転移反応の効率を高めるため、予め、糖転移酵素を作用
させて、Ｌ−アスコルビン酸にグルコシル残基を等モル
以上転移させたα−グリコシルーＬ−アスコルビン酸を
生成せしめ、次いでグルコアミラーゼを作用させて２−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を
蓄積生成させるのが望ましい。

グルコアミラーゼとしては、微生物、植物など各種起源
のものが利用できる。通常、アスペルギルス（Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ）属、リゾーデス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）
属に属する微生物起源の市販のグルコアミラーゼが有利
に利用できる。また、グルコアミラーゼとともにβ−ア
ミラーゼ（Ｅ　Ｃ３，２，１，２）を併用する、ことも
随意である。

糖転移酵素の作用により生成するα−グリコシルーＬ−
アスコルビン酸について述べると、Ｌ−アスコルビン酸
の２位の炭素のアルコール基にα−Ｄ−グルコシル基が
結合し、その結合数は、１乃至７個程度のグルコシル基
がα−１，４結合しており、その餌々の物質としては、
例えば、２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸、２−〇−α−Ｄ−マルトシルーＬ−アスコ
ルビン酸、２−０−α−Ｄ−マルトトリオシル−Ｌ−ア
スコルビン酸、２−０−α−Ｄ−マルトテトラオシルー
Ｌ−アスコルビン酸、２−〇−α−Ｄ−マルトペンタオ
シルーＬ−アスコルビン酸、２−〇−α−Ｄ−マルトヘ
キサオシルーＬ−アスコルビン酸、２−０−α−Ｄ−マ
ルトヘプタオシルーＬ−アスコルビン酸などである。α
−グルコシダーゼによって生成させる場合には、通常、
２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸だけを生成させることができるし、必要により、２−
０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸に
、２−０−α−〇−マルトシルーＬ−アスコルビン酸、
２−Ｏ−α−Ｄ−マルトトリオシルーＬ−アスコルビン
酸などを混在して生成させることもできる。

シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラー
ゼやα−アミラーゼによって生成させる場合には、一般
に、α−グルコシダーゼの場合よりもα−Ｄ−グルコシ
ル基の結合数の大きいものまで混在生成させることがで
き、使用するα−グルコシル糖化合物によっても変動す
るが、一般的には、シクロマルトデキストリン・グルカ
ノトランスフェラーゼの場合には、α−Ｄ−グルコシル
基の数が１乃至７程度まで分布し、α−アミラーゼの場
合には、これよりその分布がやや狭い程度である。

このようにして糖転移酵素により生成せしめたα−グリ
コシルーＬ−アスコルビン酸の混合物から２−０−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高金高含有
物取するためには、これをそのまま分離精製することも
できるが、−殻内には、糖転移酵素により生成せしめた
α−グリコシルーＬ−アスコルビン酸の混合物に、更に
、グルコアミラーゼ（Ｅ　ＣＵ、２．１．３）を作用さ
せ、２−〇−α−Ｄ−マルトシルーＬ−アスコルビン酸
以上の高分子物を加水分解し、２−０−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を蓄積生成させた後、
それを分離精製するのが望ましい。

以上述べたように、各種方法により生成せしめた２−０
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸含有
溶液は、通常、２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸のみならず、未反応のＬ−アスコルビ
ン酸、Ｄ−グルコース、α−グルコシル糖化合物などを
含有している。

これから、２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸高含有物を製造する場合には、２−０−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と未反応
のＬ−アスコルビン酸、Ｄ−グルコース、α−グルコシ
ル糖化合物など夾雑物との分子量、親和性などの違いを
利用する分離手段、例えば、膜分離、カラムクロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィー、ゲル濾過クロ
マトグラフィー、イオン交換りａマドグラフィーなどの
方法で分離精製することもできるが、とりわけ、本発明
者等が特開昭５８−２３７Ｈ号公報、特公昭６２−５０
４７７号公報で開示した強酸性カチオン交換樹脂を用い
るカラムクロマトグラフィーの採用は、高速液体クロマ
トグラフィー、ゲル濾過りａマドグラフィーなどと比較
して、目的の２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高金高含有物濃度、高収率に大量採取で
き、その工業実施の実現も容易であることが判明した。

この際、分離されるＬ−アスコルビン酸、α−グルコシ
ル糖化合物などを、再度、糖転移反応の原料として用い
ることも有利に実施できる。また、糖転移反応終了後、
クロマトグラフィーにかけるまでの間に、必要ならば、
例えば、反応液を加熱して生じる不溶物を濾過して除去
したり、活性炭などで処理して反応液中の蛋白性物質、
着色物質などを吸着除去したり、陽イオン交換樹脂（Ｈ
”型）で脱ミネラルしたり、陰イオン交換樹脂（ＯＨ−
型）に吸着させて水洗し、Ｄ−グルコース、α−グルコ
シル糖化合物などを除去後、アニオン若しくは塩類溶液
などで脱着処理するなどの精製方法を組合せて利用する
ことも随意である。

以下、本発明で採用される強酸性カチオン交換樹脂を用
いるカラムクロマトグラフィーについて、より具体的に
説明する。強酸性カチオン交換樹脂は、公知の、例えば
、スルホン基を結合したスチレン−ジビニルベンゼン架
橋共重合体樹脂のＮａ“型、Ｋ＋型などのアルカリ金属
塩型、または、Ｃａ−型、Ｍｇ−型などのアルカリ土類
金属塩型、またはＨ″″型などが適宜使用され、市販品
としては、例えば、ダウケミカル社製造の商品名ダウエ
ックス５０Ｗｘ８、ローム＆ハース社製造の商品名アン
バーライト　ＣＧ−１２０、東京有機化学工業社製造の
商品名Ｘ　Ｔ　−１０２２Ｅ　、三菱化成工業社製造の
商品名ダイオイオン　５Ｋ１０４などがある。

これら樹脂は、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸高金高含有画分画に優れているだけで
なく、耐熱性、耐摩耗性にも優れ、２−０−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の工業的
大量生産に極めて有利である。

原料溶液として、例えば、目的とする２−０−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにＬ−ア
スコルビン酸、Ｄ−グルコースなどの夾雑物を含有する
溶液を用いる場合には、強酸性カチオン交換樹脂を充填
したカラムに原料溶液を流し、次いで水で溶出し、２−
〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高
含有画分、２−○−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸・Ｌ−アスコルビン酸高含有画分、Ｌ−ア
スコルビン酸高含有画分、Ｌ−アスコルビン酸・Ｄ−グ
ルコース高含有画分、Ｄ−グルコース高含有画分などの
順に複数の画分に分画して、この２−０−α−Ｄ−グル
コース高含有画分を採取することにより、容易に２−〇
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含
有物が製造される。

また、原料溶液をカラムに流して分画するに際し、既に
得られている２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸・Ｌ−アスコルビン酸高含有画分などの
２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸含有画分を原料溶液の前後に、または原料溶液ととも
に流すことにより、分画に要する水の使用量を減少させ
、原料溶液から２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸高金高含有物濃度、高収率で採取する
ことも有利に実施できる。

本発明で使用される分画方式は固促床方式、移動床方式
、擬似移動床方式のいずれであってもよいＯ このようにして得られた本発明の２−０−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物、望ましく
は、純度６５％以上の高含有物は、溶液状であっても、
また濃縮してシラツブ状にあっても、はるかに安定であ
り、その取扱いは、容易である。

次に、２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸高金高含有物れの結晶２−０−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の製造方法について述
べる。本発明で使用する晶出用２−０−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高金高含有物２−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の過飽
和溶液であって、結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸が析出すればよく、通常、過飽
和度が、１．０５乃至１．５程度で、具体的に述べれば
、純度６５％以上の２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸高金高含有物望ましくは、濃度約
６５乃至９５ν／Ｗ％水溶液とし、その溶液温度は、溶
液が凍結せず、また、製造工程上熱損失の比較的少ない
０乃至９５℃の範囲が望ましい。溶液の過飽和度、粘度
をＷ整するために、例えば、メタノール、エタノール、
アセトンなどを共存させることも随意である。また、晶
出方法は、通常２０乃至６０℃の比較的高温の過飽和２
−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
を助晶缶にとり、これに種晶を望ましくは、０．１乃至
１０Ｍ／Ｗ％共存せしめて、ゆっくり撹拌しつつ徐冷し
、晶出を促してマスキットにすればよい。このように、
本発明の結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸は、過飽和２−０−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸溶液に結晶２−〇−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を種晶として
加えることにより容易に晶出させることができる。晶出
したマスキットから結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸を製造する方法は、結晶２−
０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が
採取できればよく、例えば、分蜜方法、ブロック粉砕方
法、流動造粒方法、噴霧乾燥方法などの公知方法を利用
すればよい。

例えば分蜜方法は、通常、マスキットをバスケット型遠
心分離機にかけ、結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸と母液（Ｗ）とを分離する方法
で、必要により、該結晶に少量の冷水をスプレーして洗
浄することも容易であり、より高純度の非吸湿性結晶２
−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
を製造するのに好適である。また、母液を精製、濃縮し
て、同様にマスキットとし、２番晶、更には３番晶など
を採取して結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸の増収を図ることも有利に実施できる
。

他の３つの方法は、蜜を分離しないので、得られる結晶
粉末に２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸純度の向上は見られないが、製品収量の多い特
長を有している。従って、本製品の場合には、通常、結
晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸とともに、音成分として、例えば、Ｌ−アスコルビ
ン酸、２−〇−α−Ｄ−マルトシル−Ｌ−アスコルビン
酸以上の高分子α−グリコシルーＬ−アスコルビン酸、
グルコース、α−グルコシル糖化物などが含まれる。

噴霧乾燥の場合には、通常、濃度７０乃至８５Ｖ／Ｖ％
晶出率２５乃至６０Ｖ／Ｗ％程度のマスキットを高圧ポ
ンプでノズルから噴霧し、結晶粉末が溶融しない温度、
例えば、６０乃至１００℃の熱風で乾燥し、次いで３０
乃至６０℃の温風で約Ｉ乃至２０時間熟成すれば非吸湿
性またＬｔＭ吸湿性の結晶粉末が容易に製造できる。ま
た、ブロック粉砕方法は、通常、水分５乃至１５１／／
Ｗ％、晶出率１０乃至６０１／／Ｗ％程度のマスキット
を０．５乃至５日間静置して全体をブロック状に晶出同
化させ、これを粉砕または切削などの方法によって破砕
し乾燥すれば、非吸湿性または難吸湿性の結晶粉末が容
易に製造できる。また、２−○−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物溶液を、水分５ｗ１
ｖ％未膚に加熱、濃縮して溶融様状態とした過飽和２−
０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸溶
液とし、この過飽和溶液に種晶を結晶２−０−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の融点以下の温
度で混捏し、これを各種形状、例えば粉体、顆粒、棒状
、板状、立方体などに成形して、非吸湿性または難吸湿
性の結晶固体を得ることも随意である。

このようにして得られる結晶２−０−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、その純度、晶出率に
よって多少変動するものの、実質的に非吸湿性また難吸
湿性であり、流動性であり、固着の懸念もなく、その優
れた特長は次の通りである。

（１）直接還元性を示さず、きわめて安定である。

Ｌ−アスコルビン酸とは違って、メイラード反応を起こ
しにくい。従って、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、脂質
、糖質、生理活性物質などと共存しても無用の反応を起
さず、むしろ、これら物質を安定化する。

（２）加水分解を受けてＬ−アスコルビン酸を生成し、
Ｌ−アスコルビン酸と同様の還元作用、抗酸化作用を示
す。

（３）体内の酵素により、Ｌ−アスコルビン酸とＤ−グ
ルコースとに容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸
本来の生理活性を示す。また、ビタミンＥ１ビタミンＰ
などとの併用により、その生理活性を増強することがで
きる。

（４）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物な
どとを経口摂取することにより、生体内で生成され、代
謝される物質であることから、その安全性は極めて高い
。

（５）実質的に非吸湿性、難吸湿性であるにもかかわら
ず、水に対して大きな溶解速度、溶解度を有しており、
粉末、顆粒、錠剤などのビタミン剤、サンドクリーム、
チョコレート、チューインガム、即席ジュース、即席調
味料などの飲食物のビタミンＣ強化剤、呈味改善剤、酸
味剤、安定剤などとして有利に利用できる。

（６）実質的に非吸湿性または難吸湿性であり、固結し
ないことから流動性であり、その取扱いは容易で非晶質
の場合と比較して、その包装、輸送、貯蔵に要する物的
、人的経費が大幅に削減できる。

これらの特長から、結晶２−〇−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸は安全性の高いビタミンＣ強
化剤としてばかりでなく、単独で、または他の１種若し
くは２種以上の成分と併用して、呈味改善剤、酸味剤、
安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、ウィルス性疾患、細菌
性疾患、循環器疾患、悪性腫瘍など感受性疾患の予防剤
、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食物、嗜好物、
飼料、餌料、抗感受性疾患剤、美肌剤、色白剤など化粧
品、更には、プラスチック製品などに配合して、望まし
くは０．００１Ｗ／Ｗ％以上配合して、有利に利用する
ことができる。この際、結晶２−０−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともに、Ｌ−アスコル
ビン酸、ビタミンＥ１ルチン、α−グリコジル　ルチン
、ヘスベリジンなどのビタミンＰなどから選ばれるＩＩ
Ｉ若しくは２種以上と併用することも有利に実施できる
。

また結晶・２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味な
どの呈味を有する各種物質ともよく調和し、耐酸性、耐
熱性も大きいので、普通一般の飲食物、嗜好物、例えば
、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、
ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、
粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、ケチ
ャツプ、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スー
プの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テ
ーブルシュガー、コーヒーシュガーなどの各種調味料、
せんべい、あられ、おこし、カリントウ、求肥、餠類、
まんじゅう、ういろう、あん類、羊舜、水羊舞、錦玉、
ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、パン、ビス
ケット、クラッカー、クツキー、パイ、プリン、シュー
クリーム、ワツフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョ
コレート、チューインガム、キャラメル、キャンデーな
どの各種洋菓子、アイスクリーム、シャーベットなどの
氷菓、果実のシロップ漬、水蜜などのシロップ類、バタ
ークリーム、カスタードクリーム、フラワーペースト、
ビーナツツペースト、フラーペーストなどのスプレッド
、ペースト類、ジャム、マーマレード、シロップ漬、糖
果などの果実、野菜の加工食品類、パン類、麺類、米飯
類、人造肉などの穀類加工食品類、サラダオイル、マー
ガリンなどの油脂食品類、福神漬、べったら潰、千枚漬
、らっきょう潰などの漬物類、たくあん潰の素、白菜漬
の素などの漬物の索類、ハム、ソーセージなどの畜肉製
品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、カマボコ、チクワ、
パンペンなどの魚肉製品、ウニ、イカの塩辛、酢コンブ
、さきするめ、ふぐのみりん干しなどの各種珍味類、の
り、山菜、するめ、小魚、貝などで製造されるつくだ魚
類、煮豆、ポテトサラダ、コンブ巻、天ぷらなどのそう
菜食品、錦糸卵、乳飲料、パター、チーズなどの卵、乳
製品、魚肉、畜肉、果実、野菜などのビン詰、缶詰類、
合成酒、増醸酒、果実酒、洋酒などの酒類、コーヒー、
ココア、ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料な
どの清涼飲料水、プリンミックス、ホットケーキミック
ス、即席ジュース、即席コーヒー、即席しるこ、即席ス
ープなど即席飲食品などに、ビタミンＣ強化剤、呈味改
善剤、酸味剤、品質改良剤、安定剤、抗酸化剤などの目
的で有利に利用することができる。また、家畜、家禽、
蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のための飼料、餌料などに
ビタミンＣ強化剤、呈味改善剤、抗酸化剤、嗜好性向上
などの目的で配合して利用することも好都合である。

その他、タバコ、トローチ、肝油ドロップ、複合ビタミ
ン剤、口中清涼剤、口中香錠、うがい薬、経営栄養剤、
内服薬、注射剤、練肉みがき、口紅、アイシャドウ、乳
液、化粧水、クリーム、ファウンデーション、日焼は止
め、洗顔石鹸、シャンプー　リンスなど各種固状、ペー
スト状、液状の嗜好物、感受性疾患の予防剤、治療剤す
なわち抗感受性疾患剤、美肌剤、色白剤などの化粧品な
どに配合して利用することも有利に実施でき、更には、
紫外線吸収剤、劣化防止剤などとしてプラスチック製品
などに配合して利用することも、α−グリコシド加水分
解酵素の測定用基質、細胞培養用培地成分などに利用す
ることも有利に実施できる。

また、本発明でいう感受性疾患とは、結晶２−○−α−
Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその
溶解溶液によって予防され、若しくは治療される疾患で
あり、それが、例えばウィルス性疾患、細菌性疾患、外
傷性疾患、リューマチ、免疫疾患、アレルギー疾患、糖
尿病、白内障、循環器疾患、悪性腫瘍などであってもよ
い。２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
ビン酸の感受性疾患予防剤、治療剤は、その目的に応じ
てその形状を自由に選択できる。例えば、噴霧剤、点眼
剤、点鼻剤、うがい剤、注射剤などの液剤、軟膏、はっ
ぷ剤、クリームのようなペースト剤、粉剤、顆粒、カプ
セル剤、錠剤などの固剤などである。製剤に当たっては
、必要に応じて、他の成分、例えば、治療剤、生理活性
物質、抗生物質、補助剤、増量剤、安定剤、着色剤、着
香剤などの１種若しくは２種以上と併用することも随意
である。

投与量は、含量、投与経路、投与頻度などによって適宜
調節することができる。通常、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸として、成人１日当り
、約０．００１乃至１００ｇの範囲が好適である。

また、化粧品の場合も、大体、前述の予防剤、治療剤に
準じて利用することができる。

本発明の結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸を含有せしめる方法としては、それらの
製品が完成するまでの工程で、例えば、混和、混捏、溶
解、溶融、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入
、晶出、固化なと公知の方法が適宜選ばれる。

また、本発明の結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸は、実質的に無水であり、また、
完全無水にすることも軽く熱風乾燥するだけで達成でき
るので、非水系での化学反応用原料としても好都合であ
る。従って、結晶２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸から非水系での公知の反応により、
極めて容易に、例えば、エーテル誘導体、エステル誘導
体などが製造できる。これら誘導体は、その特性に応じ
て、例えば、界面活性剤、乳化剤、安定剤または親油性
ビタミンＣなどとして有利に利用できる。

また、本発明の結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸が、遊離の酸の場合には、必要に
より、これを水酸化金属、炭酸金属などの水溶液と反応
させて、２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸の塩、例えば、ナトリウム塩、カルシウム塩
、マグネシム塩、鉄塩、銅塩、亜鉛塩などにして、ｐＨ
調整するとともにビタミンＣ作用とミネラルとを併せ持
つ物質を調製し、これを栄養強化剤、化学薬品などとし
て利用することも有利に実施できる。

以下、本発明の２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸高含有物とそれの結晶の代表例を実験
を用いて詳細に説明する。

実　験　１　　２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸高含有物 とそれの結晶の調製 デキストリン（ＤＥ約６）９重量部を水１５重量部に加
熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸３重量
部を加え、ｐｏｓ、ｓ、６０℃に維持しつつ、これにシ
クロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ
（株式会社林原生物化学研究所販売）をデキストリング
ラム当り４００単位加えて２４時間反応させた。反応液
を高速液体クロマトグラフィー（島津製作所製、ＬＣ−
６Ａ　ｉカラム、　ＹＭＣ＾０３０３０ＤＳ；溶＃液、
０．１ＭにＨ２ＰＯ４Ｈ３ＰＯ４（ＰＨ２，０）　ｉ流
速、０．５ｍＬ／＋＊ｉｎｉ検出２日本分光工業（株）
　ＭＯＬＴ−３４０）で分析したところ、Ｌ−アスコル
ビン酸が９．５分の位置に現れたのに対し、新たに生成
したα−Ｄ−グルコシルーＬ−アスコルビン酸が１１．
２分、α−Ｄ−マルトシルーＬ−アスコルビン酸が１５
．７分、α−Ｄ−マルトトリオシル−Ｌ−アスコルビン
酸が２０．６分、α−Ｄ−マルトテトラオシルーＬ−ア
スコルビン酸が２４．９分、α−Ｄ−マルトペンタオシ
ルーＬ−アスコルビン酸が２８．１分、α−Ｄ−マルト
ヘキサオシルーＬ−アスコルビン酸が３２．１分および
α−Ｄ−マルトヘプタオシルーＬ−アスコルビン酸が３
８．６分の位置に現れた。Ｌ−アスコルビン酸の約６０
％がこれらα−グリコシルーＬ−アスコルビン酸へ変換
していた。本反応液をＵＦ膜で濾過して酵素を回収、除
去した後、５５℃、ＰＨ５，０に調整し、これにグルコ
アミラーゼ（ＥＣ３，２，１゜３、生化学工業株式会社
販売）をデキストリングラム当り１０単位加えて、２４
時間反応させた。反応液を高速液体クロマトグラフィー
で分析したところ、α−Ｄ−マルトシルーＬ−アスコル
ビン酸以上の高分子α−グリコシルーＬ−アスコルビン
酸は加水分解され、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸に変換していた。

本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過
し、濾液を約５０Ｗ／Ｖ％に濃縮した。

この濃縮液を原料溶液として、特開昭５８−２３７９９
号公報に開示されているカラムクロマトグラフィーの方
法に準じて、強酸性カチオン交換樹脂（東京有機化学工
業製造、商品名Ｘ　Ｔ−１０１６、Ｎａ＋型）を充填し
たカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、
この溶出液の２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高含有画分く純度約９４％〉を採取し、
２−０−α−Ｄ−グルコビラノシルーＬ−アスコルビン
酸高含有物を得た。次いで、これをカチオン交換樹脂（
Ｈ＋型）で脱ミネラルして精製し、濃度的８０Ｗ／Ｗ％
に濃縮し、ガラス製容器に入れ、２０乃至３５℃に約１
カ月間保ったところ、結晶が析出した。この結晶を種晶
として、前記２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高含有画分の精製、濃縮液に加え、ゆっ
くり撹拌しながら助晶し、得られるマスキットを分蜜し
、結晶に少量の冷水をスプレーして、洗浄し、高純度の
結晶を得、この結晶を水に溶解し、再結晶化させ、より
高純度（純度９９．９％以上）の結晶を採取した。

実　験　２　　　結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸の理化 学的性質 実験１の方法で再結晶きせて得た結晶の理化学的性質を
調べたところ、従来全く知られていない無水型の結晶２
−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
であることを見出した。

以下、本発明の結晶の諸性質について述べる。

（１） 元素分析 Ｃｌ２Ｈ１ｌｌＯ１１として 理論値　　Ｃ＝４２．６％　　Ｈ＝５．３６％実測値　
　Ｃ＝４２．４％　　Ｈ＝５．３７％Ｎ＜０．０１％ （２） （３） （４） （５） （６） 分子量 質量分析装置（日立製作新製、Ｍ−８０Ｂ）を用いてＦ
Ｄマススペクトルを測定した結果、（Ｍ＋Ｈ）”（ＣＩ
２ＨＩ８０１１　　ＭＷ＝３３８）として３３９が観ｍ
された。

融点 １５８．５乃至１５９．５℃ 融解熱 ｇ当り２７　、２ｋｃａ　ｌの吸熱を示す。

比旋光度 ［α］２０　＝　＋　１８９．６°（Ｈ２Ｏ，ｐＨ１，
９８）［αコ２０＝　＋２４６．３°　（Ｈ２Ｏ，ｐＨ
７，１０）紫外線吸収スペクトル 濃度５０μＭに溶解した溶液の紫外線吸収スペクトルを
測定した。ｐＨ２，０でのスペクトルを第１図に、ｐＨ
７，０でのスペクトルを第２図に示す。

λｍａｘ＝２３８ｒｖ、Ｅ　＝０．９３Ｘ１０’　（ｐ
）１２．０）λｍａｘ＝２６０ｎｍ、ε＝　１．５０ｘ
ｌＯ’　（ｐＨ７，０）（７〉赤外線吸収スペクトル ＫＢｒ錠剤法で測定した。結晶の赤外線吸収スペクトル
を、第３図に示し、非晶質物の赤外線吸収スペクトルを
第４図に示す。

（８）溶解度 ２５℃で水１００ｇに１２５ｇ溶ける。

（９）溶剤に対する溶解性 水、０．１Ｎ−カセイソーダ、０．ＩＮ−酢酸に易溶。

メタノール、エタノールに黴溶。エーテル、ベンゼン、
クロロホルム、酢酸エチルに不溶。

（１０）解離定数 ｐＫａ＝３．０ この値を、ゼイ・ゼルノウ（Ｊ、　Ｊｅｒｎｏｖ）等、
テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　）第３５巻
・第１４８３乃至１４８６頁（１９７９年）の第１表お
よびパオーウェン・ルー（Ｐａｏ−Ｍｅｎ　Ｌｕ）等、
ジャーナル・アグリカルチュラル・フード・ケミストリ
ー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）第３２巻、第２１乃
至２８頁（１９８４年）の第２表に示される各種アスコ
ルビン酸誘導体の解離定数（ｐＫａ）を参照すると、本
結晶の場合には、そのアスコルビン酸部分の２位のアル
コール基がα−Ｄ−グルコシル結合に関与し、３位のア
ルコール基は遊離のままであると判断される。

（１１）メチル化分析 前述のパオーウエン・ルー（Ｐａｏ−Ｍｅｎ　Ｌｕ）等
の文献に記載されているＬ−アスコルビン酸をジアゾメ
タンによりメチル化して主に３−〇−メチルーＬ−アス
コルビン酸を生成するメチル化反応の方法により、本結
晶物質をメチル化し、次いで、得られるメチル化物を加
水分解して分析したところ、主として、３−〇−メチル
ーＬ−アスコルビン酸とＤ−グルコースとを生成した。

（１２）物性、物質の色 無色透明な結晶。微結晶は白色粉末で酸味を有し、臭は
ない。吸湿性はなく、潮解しない。

また、１３０℃、２時間の条件で乾燥減量を測定すると
０．５Ｗ／Ｗ％未満である。

過飽和水溶液から晶出中の結晶例を顕微鏡写真で第５図
に示す。

（１３）呈色反応 直接還元性を示さず、２．６−シクロルフエノールイン
ドフエノールを還元脱色しない。

２．４−ジニトロフェニルヒドラジン反応を示さない。

アントロン硫酸反応で緑色を呈する。

（１４）構成成分 α−グルコシダーゼ作用またはＩＮ−塩酸、１００℃、
５分間処理により加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸と
Ｄ−グルコースとをモル比で１：１生成する。

（１５）粉末Ｘ線回折 結晶粉末の粉末Ｘ線回折装置（理学電機株式会社製造、
商品名ガイガーフレックスＲＡＤ−１１８１ＣｕＫａ線
使用）による主な回折角（２θ）は、１０．３°、１４
．８°、１６．２°、１８．４°、２４．５゜である。

（１６）単結晶Ｘ線解析 過飽和水溶液から晶出した単結晶をＸ線回折法で解析し
たところ、本結晶は斜方晶系で、空間群がＰ　２　Ｉ２
　＋　２１であり、格子定数がａ＝１１．９２９ＡＳｂ
　＝２４．３５１ＡＳｃ　＝４．８６４Ａで、α＝β＝
ｔ＝９０°であった。

これらの結果から、本結晶の化学構造は、Ｌ−アスコル
ビン酸の２位のアルコール基がＤ−グルコースの１位の
アルコール基との間でα−グルコシル結合していること
が明らかである。

本結晶の０ＲＴＥＰ図を第６図に示す。

以上の事実から、本結晶は、 式１１１： ％式％ で示される新規な結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸である。

従って、α−グリコシルーＬ−アスコルビン酸は、 式■： ＣＨ２−ＯＨ 選ばれる整数 で示される化学構造でＬ−アスコルビン酸にα−Ｄ−グ
ルコース残基が等モル以上結合しているものと判断され
る。

実　験　３　　　結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸の溶解溶 液の安定性 実験１の方法で調製した結晶２−０−α−Ｄ−グルコピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸と、特公昭４８−３８１
５８号公報で開示されている６−０−α−Ｄ−グルコシ
ルーＬ−アスコルビン酸およびＬ−アスコルビン酸との
水溶液中での安定性を比較した。すなわち、それぞれの
試料を濃度７０μＭ、ＰＨ７，０またはＰｌ（２，０に
ｇｌｌＵ＋、て吸光光度計用セルに採り、これを４５℃
に維持して経時的に吸光光度計によりＰＨ７，０の場合
２６０ｎｍで、ｐＨ２，０の場合２４５ｎｍで吸光度を
測定し、その残存率（％）を測定し比較した。

結果は表に示す。

害 （注）　２ＧＡｓＡは、本発明の結晶２−Ｏ−ａ−Ｄ−
グルコピラノシル−し−アスコルビン酸を意味し、６Ｇ
ＡｓＡは、対照の６−０−α−Ｄ−グルコシル−Ｌ−ア
スコルビン酸を、ＡｓＡは、対照のＬ−アスコルビン酸
を意味する。

表の結果からも明らかなように、結晶２−０−α−Ｄ−
グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の溶解溶液は、
６−０−α−Ｄ−グルコシルーＬ−アスコルビン酸、Ｌ
−アスコルビン酸のいずれの場合とも違って、極めて安
定である。

実　験　４急性毒性テスト ７週齢のｄｄ系マウスを使用して、実験１の方法で調製
した結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸標品を経口投与して急性毒性テストをしたと
ころ、５ｇまで死亡例は見られず、これ以上の投与は困
難であった。

従って、本物質の毒性は極めて低い。

以下、本発明の実施例として、２−０−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高金高含有物の結晶の
製造例を述べる。

実施例　１ α−シクロデキストリン９重量部を水２０重量部に加熱
溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸３重量部
を加え、ｐＨ５，５，６５℃に維持しつつ、これに、シ
クロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ
（株式会社林原生物化学研究所販売）をα−シクロデキ
ストリングラム当り１００単位加えて４００時間反応せ
た。反応液を高速液体クロマトグラフィーで分析したと
ころ、Ｌ−アスコルビン酸の約５０％が実験１の場合と
同様にα−グリコシルーＬ−アスコルビン酸へ変換して
いた。

本反応液を加熱して酵素を失活させた後、５５℃、Ｐ）
１４．５にｇＩＩＭシ、これにグルコアミラーゼをα−
シクロデキストリングラム当り５０単位加えて、２４時
間反応させた。反応液を高速液体クロマトグラフィーで
分析したところ、α−マルトシル−Ｌ−アスコルビン酸
以上の高分子α−グリコシルーＬ−アスコルビン酸は、
加水分解され、２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸に変換していた。

本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過
し、濾液をカチオン交換樹脂（Ｈ＋型）のカラムにかけ
脱ミネラルし、次いで、アニオン交換樹脂（ＯＨ−型）
のカラムにかけアニオンを樹脂に吸着させ、水洗してＤ
−グルコースなどを除去後、０．５Ｎ−塩酸溶液で溶出
、濃縮し、この濃縮液を原料溶液として、実験１に示す
カラムクロマトグラフィーの方法に準じて、強酸性カチ
オン交換樹脂（Ｈ＋型）を充填したカラムを用いてカラ
ムクロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−〇−
α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有
画分を採取した。

次いで、これを濃度的７６％に減圧濃縮して助晶缶にと
り、結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸を種晶としてＩＶ／ＩＪ％加えて４０℃とし
、ゆっくり撹拌しつつ徐冷して２日間を要して２５℃ま
で下げ、バスケット型遠心分離機で分蜜し、結晶を少量
のエタノール水でスプレーし洗浄して結晶を採取した。

純度約９９％の結晶２−〇−α−Ｄ−グルコピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸を原料のＬ−アスコルビン酸に対
して収率約４２ｖ／ＩＪ％で得た。

水晶の理化学的性質は、融点、比旋光度などの点で若干
異なるものの、本質的に実験１の方法で得た再結晶と同
一である。

水晶は、実質的に吸湿性を示さず、取扱い容易であり、
また、直接還元性を示さず、安定性、生理活性も充分で
、ビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、呈味改善剤、
酸味剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、
紫外線吸収剤、医薬原料、化学品などとして飲食物、抗
感受性疾患剤、化粧品、試薬などに有利に利用できる。

実施例　２ デキストリン（ＤＥ約６）３０重量部を水４０Ｍ量部に
加熱溶解し、還元下に保って、Ｌ−アスコルビン酸７重
量部を加え、　ｐｏｓ、ａ、６０℃に維持しつつ、これ
に、シクロマルトデキストリン　グルカノトランスフェ
ラーゼをデキストリングラム当り２５０単位加えて、４
００時間反応せた。反応液を、高速液体クロマトグラフ
ィーで分析したところ、Ｌ−アスコルビン酸の約６５％
が、実験１と同様に、α−グリコシルーＬ−アスコルビ
ン酸に変換していた。

本反応液をＵＦＩＩで濾過して酵素を回収除去した後、
５０℃、ｐＨ５，０に調整し、これにグルコアミラーゼ
をデキストリングラム当り１００単位加えて６時間反応
させた。反応液を高速液体クロマトグラフィーで分析し
たところ、α−Ｄ−マルトシルーＬ−アスコルビン酸以
上の高分子α−グリコシルーＬ−アスコルビン酸は、加
水分解され、２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸に変換していた。

本反応液を加熱して酵素を失活させ、活性炭で脱色濾過
し、濾液を濃縮し、次いで、この濃縮液を原料溶液とし
て、実験ｌに示すカラムクロマトグラフィーの方法に準
じて、強酸性カチオン交換樹脂（ダウケミカル社製造、
商品名ダウエックス５０ＷＸ４、Ｃａ”＋型）を充填し
たカラムを用いてカラムクロマトグラフィーを行ない、
この溶出液の２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸高含有画分を採取した。

次いで、これをカチオン交換樹脂（Ｈ”型）で脱ミネラ
ルして精製し、濃度約７７１Ｊ／Ｗ％に減圧濃縮して助
晶缶にとり、種晶２Ｗ／１１％加えて、４５℃とし、ゆ
っくり撹拌しつつ、徐冷して２日間を要して２８℃まで
下げ、以下、実施例１と同様に分蜜して、純度的９８％
の結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸を原料のＬ−アスコルビン酸に対して収車的４
５Ｗ／Ｗ％で得た。

水晶は、実施例１の場合と同様に、実質的に吸湿性を示
さず、取扱い容易であり、また、直接還元性を示さず、
安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤としてば
かりでなく、呈味改善剤、酸味剤、保湿剤、安定剤、品
質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬
原料、化学品などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化
粧品などに有利に利用できる。

実施例　３ 実施例２の方法に従って、シクロマルトデキストリン・
グルカノトランスフェラーゼとグルコアミラーゼとを作
用させて２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸含有反応液を調製し、これを加熱して酵素を
失活させ、活性炭で脱色濾過し、濾液をカチオン交換樹
脂（Ｈ＋型）で脱ミネラルし、次いで、実験ｌに示すカ
ラムクロマトグラフィーの方法に準じて、強酸性カチオ
ン交換樹脂（Ｈ＋型）を充填したカラムを用いてカラム
クロマトグラフィーを行ない、この溶出液の２−０−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の高含有
画分を採取した。

次いで、これを濃度約９０Ｗ／Ｖ％に濃縮して助晶缶に
とり、種晶約２Ｖ／Ｗ％加えて５０℃とし、ゆっくり撹
拌しながら３０分間保った後、バットにとり、２５℃で
３日間静置して晶出同化させ、次いでバットから取り出
し切削型粉砕機で粉砕し、乾燥して純度的９５％の結晶
２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸を原料のＬ−アスコルビン酸ニ対して収車的７０１１
／Ｖ％で得た。

水晶は、実施例１の場合と同様に、実質的に吸湿性を示
さず、取扱い容易であり、また、直接還元性を示さず、
安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤としてば
かりでなく、呈味改善剤、酸味剤、安定剤、品質改良剤
、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化
学品などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品、試
薬などに有利に利用できる。

実施例　４ 実施例３の方法で調製した２−０−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸高金高含有物度約８０Ｗ／
ＩＪ％に濃縮して助晶缶にとり、種晶約２ｖ／ｖ％を加
えて５０℃からゆっくり撹拌しつつ徐冷し、晶出率的３
５％のマスキットを得、これを高圧ポンプにて１５０ｋ
ｇ／ｃ■２の圧にて１．５■口径ノズルより乾燥塔上よ
り噴霧した。

これと同時に８５℃の熱風を乾燥塔の上部より送風して
底部に設けた移送金網コンベア上に捕集し、コンベアの
下より４０℃の温風を送りつつ移動金網コンベア上に捕
集した結晶粉末を乾燥塔外に徐々に移動させ、約３０分
を要して取り出した。

この取り出した結晶粉末を熟成塔に充填して１０時間熟
成させ、結晶化と乾燥を完了させ、純度約９５％の結晶
２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸を原料のＬ−アスコルビン酸に対して収率的７０Ｗ／
ＩＪ％で得た。

氷晶は、実施例１の場合と同様に、実質的に吸湿性を示
さず、取扱い容易であり、また、直接還元性を示さず、
安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤としてば
かりでなく、呈味改善剤、酸味剤、安定剤、品質改良剤
、抗酸化剤、生理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化
学品などとして、飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品など
に有利に利用できる。

実施例　５ （１）α−グルコシダーゼ標品 マルトース４Ｍ／Ｖ％、リン酸１カリウム０．１１１／
Ｖ％、硝酸アンモニウム０．１Ｖ／Ｖ％、硫酸マグネシ
ウム０．０５１／／Ｖ％、塩化力！ｊ　ラム０．０５Ｖ
／Ｖ％、ポリペプトン０．２Ｖ／Ｖ％、炭酸カルシウム
ＩＷ／Ｖ％（別に乾熱滅菌して植菌時に無菌的に添加）
および水からなる液体培地にムコール　ジャバニカス（
Ｍｕｃｏｒｊａｖａｎｉｃｕｓ）　ＩＦＯ４５７０を温
度３０℃で４４時間振盪培養した。培養終了後、菌糸体
を採取し、固定化α−グルコシダーゼ標品とした。

（２）２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸高金高含有物の結晶 マルトース（林原株式会社　登録商標サンマルト）４０
重量部を水７０重量部に加熱溶解し、還元下に保って、
これにＬ−アスコルビン酸１０重量部と（１）の方法で
調製した固定化α−グルコシダーゼ標品をマルトースグ
ラム当り１０単位加え、遮光下、ｐＨ５，５，５０℃で
３時間反応させた。

ここでいう活性１単位とは、１．３５■Ｍ　　ＥＤＴＡ
を含ｔｒＯ，ＩＭ酢酸塩ＩｉＩ？ｆｉ液（ｐＨ６，０）
７５０　ｕ　Ｌ　ト４Ｗ／Ｖ％マルトース２５０μＬの
混液に、適当に希釈した酵素液１００μＬを加え、３７
℃で３０分間反応させた後、沸騰水に３分間保って反応
を停止させ、これを遠心分離し、その上清２０μＬを採
り、これに発色試薬（グルコースオキシダーゼ法、和光
純薬社製、商品名グルコースＢテスト）１■Ｌを加えて
、３７℃に２０分間保って発色させ、次いで５０５ｎｍ
における吸光度を測定する条件で、３７℃、１分間に１
μ５ｏｌｅのグルコースを遊離する酵素量をいう。

この反応液を濾過し、固定化α−グルコシダーゼを回収
し、再利用に回した。得られる濾液を実施例２の方法に
従って、活性炭で脱色、強酸性カチオン交換樹脂を充填
したカラムによるカラムクロマトグラフィーを行ない２
−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
高含有画分を採取した。

次いで、これをカチオン交換樹脂（Ｈ＋型）で脱ミネラ
ルして精製し、以後、実施例３の方法に従って、濃度約
９０Ｖ／Ｗ％に減圧濃縮して助晶缶にとり、種晶を加え
て助晶し、バットで晶出固化させ、これを切削型粉砕機
で粉砕し、乾燥して純度約８８％の結晶２−０−α−Ｄ
−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を原料のＬ−
アスコルビン酸に対して収率的２０ｖ／ＩＪ％で得た。

氷晶は、実施例１の場合と比較すると、その性質はやや
劣るものの実質的に吸湿性を示さず、取扱い容易であり
、また、直接還元性を示ざす、安定性、生理活性も充分
でビタミンＣ強化剤としてばかりでなく、呈味改善剤、
酸味剤、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性剤、
紫外線吸収剤、医薬原料、化学品などとして飲食物、杭
感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。

［発明の効果］ 本文で述べたごとく、本発明において、Ｌ−アスコルビ
ン酸とα−グルコシル糖化合物とを含有する溶液に糖転
移酵素または糖転移酵素とグルコアミラーゼとを作用さ
せて得られる２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸とともにそれ以外の夾雑物を含有する溶
液の分離精製に際し、その溶液を原料溶液とし、強酸性
カチオン交換樹脂を使用するカラムクロマトグラフィー
を採用して、その溶出液の２−〇−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取すること
により、２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸高金高含有物収率で製造でき、加えて、この
２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸高金高含有物飽和溶液にして安定な無水型結晶が容易
に製造できることより、本発明の２−０−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸高含有物の製造方法
は、経済性に優れ、その工業実施も容易である。

この製造方法で得られる２−０−α−Ｄ−グルコピラノ
シル−Ｌ−アスコルビン酸高金高含有物安定で取扱い容
易であり、とりわけ、それを晶出させた結晶２−０−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸は、実質
的に吸湿性を示さず、潮解、固着もなく取扱い容易で、
また、直接還元性を示さず、安定性に優れている。しか
も、生体内で容易に加水分解され、Ｌ−アスコルビン酸
本来の抗酸化性、生理活性を発揮する。その上、２−〇
−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸が、
生体内で生成され、代謝される物質でもあることが判明
したことより、その安全性も極めて高い物質である。

更に、この実質的に吸湿性を示さず、取扱い容易な結晶
２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸は、安定性、生理活性も充分で、ビタミンＣ強化剤と
してばかりでなく、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生
理活性剤、紫外線吸収剤、医薬原料、化学品などとして
、飲料、加工食品、嗜好物などの飲食物、感受性疾患の
予防剤、治療剤、更には美肌剤、色白剤など化粧品など
に含有せしめて有利に利用できる。従って、本発明の２
−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
高金高含有物範な用途を有し、これら産業界に与える工
業的意義は極めて大きい。

【図面の簡単な説明】

第１図は、結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸をｐ）１２．０に溶解したものの紫外
線吸収スペクトル図を示す。 第２図は、結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸をＰＨ７，０に溶解したものの紫外線
吸収スペクトル図を示す。 第３図は、結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸の赤外線吸収スペクトル図を示す。 第４図は、非晶質２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸の赤外線吸収スペクトル図を示す。 第５図は、過飽和水溶液から晶出中の結晶写真（４０倍
に拡大）の−例を示す。 第６図は、結晶２−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸の０ＲＴＥＰ図を示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物と
   を含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコ
   アミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グ
   ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外
   の夾雑物を含有する溶液を原料溶液として、強酸性カチ
   オン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行な
   い、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
   Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取することを特徴と
   する２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコル
   ビン酸高含有物の製造方法。
2. （２）Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル糖化合物と
   を含有する溶液に糖転移酵素または糖転移酵素とグルコ
   アミラーゼとを作用させて得られる２−Ｏ−α−Ｄ−グ
   ルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸とともにそれ以外
   の夾雑物を含有する溶液を原料溶液として、強酸性カチ
   オン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行な
   い、この溶出液の２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
   Ｌ−アスコルビン酸高含有画分を採取し、これを濃縮、
   過飽和にし、結晶２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−
   Ｌ−アスコルビン酸を析出せしめることを特徴とする２
   −Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
   高含有物の製造方法。