JPH0319240B2 - - Google Patents

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【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ビタミンＤ様活性で特徴づけられる
化合物の調整に有用な化合物に関する。 （従来の技術及び発明が解決しようとする課題） ビタミンD₃は、カルシウム及びリンのホメオ
スタシスの制御剤として周知である。正常な動物
又は人間に対し、この化合物が腸内カルシウム輸
送及び骨−カルシウム流通を刺激することが知ら
れており、くる病の予防に有効である。 また、有効であるためには、ビタミンD₃が生
体内でそのヒドロキシル化型に転換されなければ
ならないことも周知である。例えば、そのビタミ
ンは最初肝臓中でヒドロキシル化されて25−ヒド
ロキシビタミンD₃を形成し、さらに腎臓中にお
いてヒドロキシル化され、1α，25−ジヒドロキ
シビタミンD₃又は２４，２５−ジヒドロキシビ
タミンD₃を生成する。そのビタミンの1α−ヒド
ロキシル化型は一般に生理学的に活性又はホルモ
ン型のビタミンであり、ビタミンＤ様活性、たと
えば、腸内のカルシウム及びリン酸塩の吸収増
加、骨ミネラルの流通化及び腎臓中におけるカル
シウムの維持のようなビタミンＤ様活性といわれ
るものに対してレスポンシブルであると考えられ
る。 特許及び他の文献中に種々のビタミンＤ誘導体
についての言及がある。例えば米国特許第
3565924号（25−ヒドロキシコレカルシフエロー
ルについて）、同3697559号（１，25−ジヒドロキ
シ−コレカルシフエロールについて）、同第
3741996号（1α−ヒドロキシコレカルシフエロー
ルについて）、同3907843号（1α−ヒドロキシエ
ルゴカルシフエロールについて）、同3715374号
（24，25−ジヒドロキシ−コレカルシフエロール
について）、同3739991号（25，26−ジヒドロキシ
−コレカルシフエロールについて）、同3786062号
（22−ジヒドロ−25−ヒドロキシコレカルシフエ
ロールについて）、同3847955号（１，24，25−ト
リヒドロキシコレカルシフエロールについて）、
同3906014号（３−デオキシ−1α−ヒドロキシコ
レカルシフエロールについて）、同3069321号
（種々の側鎖フツ素化ビタミンD₃誘導体及び側鎖
フツ素化ジヒドロタキステロール₃類似体につい
て）を参照。 ビタミンD₃誘導体については、活性の高い新
規なものの開発が望まれている。 （課題を解決するための手段） すぐれたビタミンＤ様活性を現わす新規なビタ
ミンＤ誘導体が見出され、それゆえそれは、その
種々の公知の適用例についてビタミンD₃の代替
物質として役立ち、骨軟化症、変形性骨異栄養症
及び副甲状腺機能低下症のような種々の病気の治
療に有用であろう。 この誘導体は、1α−ヒドロキシ−25−オキシ
−27−ノル−コレカルシフエロール（1α−ヒド
ロキシ−25−ケト−27−ノル−ビタミンD₃）で
ある。本発明の1α，3β−ジヒドロキシ−27−ノ
ル−コレスト−５−エン−25−オン及びそのアシ
ル化物（ただしアシルは炭素原子数１〜４の脂肪
族アシル又はベンゾイルである）は、この誘導体
の調製に有用な化合物である。 本発明の化合物を用いるビタミンD₃誘導体の
合成は次式に従つて行うことができる。 この方法は、27−ノル−コレスト−５−エン−
25−オン（構造１，Ｒ＝Ｈ）を対応の25−ケター
ル誘導体（２）に転換することを含む。27−ノル
−コレスト−５−エン−25−オンの３−アシル誘
導体（例えば構造１においてＲ＝アセチル又はベ
ンゾイル基）は、またこの反応段階に適当な出発
物質であり、そのアシル基は、25−ケタールの形
成後塩基中の加水分解により除去される。ケター
ル２は、脱水素に付されてトリエノン３を生じ、
これは塩基中でH₂O₂でエポキシ化されて1α，2α
−エポキシ−４，６−ジエン−３−オン誘導体４
を与える。後者を、金属／アンモニア溶液中で還
元して（バートンら、J.Am.Chem.Soc.95．2748
（1973）、25，25−エチレンジオキシ−27−ノル−
コレスト−５−エン−1α，3β−ジオールが得ら
れ、それから酸性条件中での加水分解によりケタ
ール保護基が除去され、27−ノル−５−コレステ
ン−1α，3β−ジオール−25−オン（化合物５，
Ｒ＝Ｈ）を生じる。引き続いてこの中間体をアシ
ル化して（アセチル化、ベンゾイル化など）その
１，３−ジアシル誘導体（化合物５、そこでＲ＝
アシル基）を与え、それは、いくつかの既知の方
法によつて、例えばハンツイカー及びミユールナ
ーの方法（Helv.Chim.Acta 61，70（1958）又は
７−ケト及び７−トシルヒドラゾン中間体を経て
（オニスコら、Bioorganic Chem.６，203（1977）
によつて５，７−ジエン誘導体（６，Ｒ＝アシル
基）に転換される。もし所望ならアシル基は、こ
の段階で温和な塩基性加水分解により（例えば10
％アルコール性KOH）、除去されて、対応の１，
３−ジヒドロキシ誘導体を生じる。その５，７−
ジエン６（Ｒ＝アシル基）の溶液の紫外線照射に
より、27−ノル−25−ケトー1α−ヒドロキシ−
プレビタミンD₃ジアシレートを生じ、それは、
加熱によつて対応のビタミンD₃類似体に異性化
され、次いで温和な塩基性加水分解でアシル基を
除いたのち目的の27−ノル−25−ケト−1α−ヒ
ドロキシ−ビタミンD₃（化合物７）を生じる。 また、1α−ヒドロキシ−25−ケト−ビタミン
類似体７の別の調製経路は次の図式によつて説明
される。 この方法は、同様の出発物質（化合物１、そこ
でＲはアシル基、例えばアセチル又はベンゾイル
基）の既知の27−ノル−25−ケトビタミンD₃生
成物（化合物８）への転換を、例えばブラント及
びデルーカの手順（Biochemistry，８ 671
（1969））を用いて行うことを包含する。このビタ
ミン類似体はその３−トシル誘導体に転換され、
次いでそれはソルボリシスに付されて３，５−シ
クロビタミン誘導体（９）（そこでＺは、ソルボ
リシスで用いられたアルコール溶剤のアルキル部
に対応する。つまり、Ｚはメチル又はエチル基が
典型的であるが、もしソルボリシスが水性媒体中
で行われたならばＺはまた水素である）となる。
この中間体は、順に、パーレンらの方法（Proc.
Nat.Acad.Sci.75 2080（1978））を使用して、二
酸化セレンによつて酸化されてその1α−ヒドロ
キシ−シクロビタミン誘導体（10）となる。10の
直接ソルボリシスを行い、精製するとその1α−
ヒドロキシ−３−Ｏ−アシル生成物11（そこで、
アシル基Ｒはソルボリシスに使用した有機カルボ
ン酸のアシル部分に相当する。つまり、Ｒがアセ
チル又はホルミル基であるのが典型的である）そ
してこのアシル化中間体は、それから温和な塩基
で容易に1α−ヒドロキシ−25−ケト−27−ノル
−ビタミンD₃（化合物７）に加水分解される。 （実施例） 次の各例中、個々の生成物を特定する数字は前
記の図式の方法において同様に番号付けした化合
物を言う。 参考例 １ 25，25−エチレンジオキシ−27−ノル−コレス
ト−５−エン−3β−オール エチレングリコール（18ml）を含むドライ・ベ
ンゼン（150ml）に溶解した3β−ヒドロキシ−27
−ノル−コレスト−５−エン−25−オン３−アセ
テート（１，Ｒ＝アシル基）（1.0ｇ，2.33mmol）
及びｐ−トルエンスルホン酸（100mg）の溶液を
ゆつくりと8.5時間蒸留させた。薄層クロマトグ
ラフイー（TLC）（20％アセトン／ヘキサン）に
よれば単一の生成物のスポツトを示し（Rf
0.55）、なんら出発物質が残留していないことを
示した。反応を冷却し、ベンゼン及び水を加え
た。相を分離し、水性相をさらにベンゼンで抽出
した。有機相を一緒にし水で２回、食塩水で１回
洗浄した。溶剤を除去すると25，25−エチレンジ
オキシ−27−ノルコレスト−５−エン−3β−オ
ール３−アセテートが得られた。NMR（270M
Hz）δ0.67（ｓ，18−CH₃）0.93（ｄ，Ｊ＝CH₃，21
−CH₃），1.01（ｓ，19−CH₃），1.28（ｓ，26−
CH₃），2.03（アセテート−CH₃），2.91（エチレン
ケタール）4.52（ブロードｍ，3α−Ｈ），5.27（ｍ，
6H）。 生成物をエーテル（５ml）と1M KOH／メタ
ノール（４ml）液中に溶解し、取巻温度で２時間
放置した。TLC（20％アセトン／ヘキサン）によ
れば、反応生成物（Rf 0.23）を示した。エーテ
ルと水を加え、相分離を行つた。水性相をエーテ
ルで抽出した。集めた有機相を水で２回、食塩水
で１回洗浄し、K₂CO₃で乾燥した。溶剤を除き、
残留物をエーテルから再結晶させて、25，25−エ
チレンジオキシ−27−ノルコレスト−５−エン−
3β−オール、化合物（２）（0.7ｇ）を得る。
mp135〜136℃。TLC分析で単一のスポツトを示
す。（２）がさらに270mg母液から回収された。
NMR（270MHz）0.67（ｓ，18.CH₃），0.93（ｄ，Ｊ
＝6.2H，21−CH₃），1.01（ｓ，19−CH₃），1.31
（ｓ，26−CH₃），3.93（エチレンケタール），3.52
（ブロードm.3α−Ｈ），5.35（ｍ，６−Ｈ）。 参考例 ２ 25，25−エチレンジオキシ−27−ノル−コレス
タ−１，４，６−トリエン−３，25−ジオン(3) ジオキサン（１ml）中の（２）（0.046ｇ、
0.11mmol）と２，３−ジクロロ−５，６−ジシ
アノ−１，４−ベンゾ−キノン（0.08ｇ，
0.35mmol）の混合物を22時間還流した。反応混
合物を冷却し、ろ過した。溶剤を蒸発後得られた
残留物をメチレンクロリドで溶離する中性アルミ
ナ・カラム（0.5×７cm）でろ過した。得られた
物質を15％アセトン／ヘキサンで２回展開する分
離用プレート上のクロマトグラフイーにかけ、２
種の生成物を得た。Rf0.21の生成物が目的の化合
物（３）（10mg）である。NMR（60MHz）0.78
（ｓ，18−CH₃），0.93（ｄ，Ｊ＝６Hz，21−
CH₃），1.18（ｓ，19−CH₃），1.30（ｓ，26−CH），
3.93（エチレンケタール），5.90，6.05，6.22（３個
のｍ、トリエンプロトン）：6.98（ｄ，Ｊ＝10Hz，
トリエンプロトン）。 Rfが0.15の生成物は、27−ノル−コレスト−
１，４，６−トリエン−３，25−ジオン（9.3mg）
であることが確認された。NMR（60MHz）0.78
（ｓ，18−CH₃），0.93（ｄ，Ｊ＝６Hz，21−
CH₃），1.18（ｓ，19−CH₃），2.1（ｓ，26−CH₃），
5.90，6.03，6.22（３個の多重線、トリエンプロト
ン），6.95（ｄ，Ｊ＝10Hz，トリエンＨ）。 参考例 ３ 25，25−エチレンジオキシ−1α，2α−オキシ
ド−27−ノル−コレスト−４，6.ジエン−３，
25−ジオン（４） メタノール（５ml）とベンゼン（４ml）中の
（３）（0.14ｇ、0.33mmol）の溶液に10％メタノ
ール性NaOH（0.04ml）と30％H₂O₂（0.24ml）を添
加した。取巻温度で16時間後、反応混合物を−５
℃に冷却し氷の上に注いだ。水性相をメチレンジ
クロリドで抽出後得られた物質を、30％アセト
ン／ヘキサンで３回展開する分離用層でクロマト
グラフイーを行い0.09ｇの1α，2α−エポキシド４
（Rf0.66）を得た。UV（ヘキサンλmax279，
288nm（肩）；NMR（60MHz）δ0.78（ｓ，18−
CH₃），0.93（ｄ，Ｊ＝５Hz，21−CH₃），1.14（ｓ，
19−CH₃），1.25（ｓ，26−CH₃），3.87（エチレン
ケタール），3.35（dd，Ｊ＝4.5Hz，２Hz，エポキ
シＨ），3.52（ｄ，Ｊ＝4.5Hz，エポキシＨ），5.54
（ｄ，Ｊ＝1.8Hz），5.97（ｓ）。 実施例 １ 1α，3β−ジヒドロキシ−27−ノルコレスト−
５−エン−25−オン−１，３−ジアセテート
（５，Ｒ＝アセチル基） 蒸留液体アンモニア（７ml）中のNa（0.1ｇ）
の溶液に−33℃で一気にTHF（７ml）中の化合物
４（0.09ｇ，0.2mmol）を加えた。５分後、
NH₄Cl（0.7ｇ）を0.75時間かけて少量ずつ加え
た。NH₃を蒸発させエーテルで置き換えた。エ
ーテル相を水、1NHCl、水、食塩水で洗浄し、
乾燥した（Na₂SO₄）。エーテルを蒸発させたの
ち得られた残留物を30％アセトン／ヘキサンで２
回展開する分離用層上でクロマトグラフイーを行
い、25，25−エチレン−ジオキシ−27−ノルコレ
スト−５−エン−1α，3β−ジオールを得た。
（0.0125ｇ，Rf0.22）NMR（270MHz）δ0.68（ｓ，
18−CH₃），0.93（ｄ，Ｊ＝6.9Hz，21−CH₃），
1.03（ｓ，19−CH₃），1.31（ｓ，26−CH₃），3.85
（ｍ，１ β−Ｈ），3.93（エチレンケタール），
3.97（７重線，Ｊ＝5.4Hz，3α−Ｈ），5.58（ｍ，６
−Ｈ）。 エタノール（２ml）中のこの生成物（12.5mg
0.028mmol）と触媒量のｐ−トルエンスルホン酸
の溶液を室温で５時間かきまぜた。TLC（50％ア
セトン／ヘキセンで３回展開する）では、単一の
スポツト、Rf0.55を示した。エタノールを除去
し、メチレンクロリドを加えた。有機相を希
NaHCO₃及び水で洗浄し、蒸発処理を行つて５
（Ｒ＝水素）を得た。NMR（270MHz）δ0.68（ｓ，
18−CH₃），0.94（ｄ，Ｊ＝6.6Hz，21−CH₃），
1.04（ｓ，19−CH₃），2.13（ｓ，26−CH₃），3.85
（ｍ，1α−Ｈ），3.98（ｍ，3α−Ｈ），5.60（ｍ，６
−Ｈ）；マススペクトルｍ／ｅ（相対強度，計算
量）402.3151（M⁺，0.50，C₂₆H₄₂O₃として計算
402.3134），387.2898（M⁺−CH₃，0.07，387.2899）
384.3042（M⁺−H₂0，1.00.384.3028），366.2922
（M⁺−２×H₂0，0.18，366.2922），289.2169（M⁺
−側鎖，0.13，289.2167），271.2061（M⁺−H₂O，
−側鎖，0.13，271.2061），253.1957（M⁺−２×
H₂O−側鎖，0.13，253.1957）。 ピリジン（0.5ml）と無水酢酸（0.5ml）中のジ
オール生成物の溶液を90℃で窒素中2.5時間加熱
した。その反応を冷水とK₂CO₃で急冷した。生
成物をEt₂Oで抽出した。有機相を1N HCl、希
NaHCO₃、水及び食塩水で洗浄し、乾燥した
（Na₂SO₄）。エーテルを蒸発させると12.4mgの５
（Ｒ＝アセチル基）が得られた。それはTLC（50
％アセトン／ヘキサン、Rf0.65）で均質であつ
た。 参考例 ４ 1α，3β−ジヒドロキシ−27−ノル−コレスト
−５，７−ジエン−25−オン−1α，3β−ジア
セテート（６）（Ｒ＝アセチル基） ヘキサン（0.5ml）中の５（Ｒ＝アセチル基）
（12.4mg，0.025mmol）とNaHCO₃（14mg）に１，
３−ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン
（3.9mg、0.013mmol）を加えた。窒素中で80℃で
20分間加熱したのち、反応混合物を冷却し、ろ過
した。ヘキサンを蒸発させ、残留物をドライ・キ
シレン（0.5ml）及び２，４，６−トリメチルピ
リジン（50μ1）中に溶解し、窒素中で90分間還
流させた。冷却した反応混合物をベンゼンで希釈
し、1N HCl、希NaHCO₃、水及び食塩水で洗浄
した。有機相を蒸発乾固させ、得られた残留物を
ｐ−トルエンスルホン酸（1.5mg）を含むジオキ
サン（0.5ml）に溶解させ、窒素中70℃で40分間
加熱した。ワーク・アツプののち得られた物質を
10％アセトン／ヘキサンで２回展開するTLCに
よつて精製し、ジエン−ジアセテート６（Ｒ＝ア
セチル基）（2.9mg，Rf0.29）を得た。UV（EtOH）
λmax293，281，271，262nm；マススペクトル
ｍ／ｅ（相対強度）484（M⁺，0.01），424（M⁺−
AcOH，0.08），364（M⁺−２×AcOH，1.00），
549（M⁺−２×AcOH−CH₃，0.05），251（M⁺−
２×AcOH−側鎖，0.10），118（0.84）。 参考例 ５ 1α−ヒドロキシ−27−ノル−25−ケトビタミ
ンD₃（７） 20％EtOH／ベンゼン（150ml）中の６（Ｒ＝
アセチル基）の溶液に、コレツクスフイルターを
取り付けた125ワツトのハノービア8A36ランプで
石英反応容器において、N₂中、０℃で20分間照
射した。溶剤を蒸発し、取り出した1α−ヒドロ
キシ−25−ケト−27−ノルプレビタミンD₃1，３
−ジアセテートをヘプタンに溶解し、窒素中85℃
で４時間加熱して、1α−ヒドロキシ−25−ケト
−27−ノルプレビタミンD₃1，３−ジアセテート
を生じた。溶剤を除去し、残留物をエーテル
（0.5ml）と0.1M KOH／MeOH（0.5ml）に溶解し
2.5時間室温で放置した。溶剤を除き、エーテル
と水を加えた。相分離を行い、有機相を水で洗浄
した。そのビタミン類似体７を６％２−プロパノ
ール／ヘキサンで展開する高圧液体クロマトグラ
フイー（HPLC）（0.6×25cm微粒状シリカゲルカ
ラム）で精製した。化合物７は151〜158mlで溶出
した。分析試料はHPLCに再注入する時は均質で
あつた。UV（エタノール）λmax265，
λmin228nm，λmax／λmin1.7；マススペクトル
ｍ／ｅ（相対強度）400.2973（M⁺，0.10C₂₄H₄₀O₃
としての計算値400.2977），382.2868（M⁺−H₂O，
0.51，382.2872），364.2798（M⁺−２×H₂O，
0.39，364.2766），269.1913（M⁺−H₂O−側鎖，
0.06，269.1905），251.1792（M⁺−２×H₂O−側
鎖，0.12，215.1800），152.0828（0.36，C₉H₁₁O₂，
152.0837），134.0735（1.00，C₉H₁₀O，134.0732）。 参考例 ６ 25−ケト−ノルビタミンD₃（化合物８）の調製 5.0mlのピリジン中の25−ケト−27−ノルコレ
ステロール（2.0ｇ）の溶液に無水酢酸1.0mlを加
え、その混合物を50℃で４時間加熱した。その混
合物を砕いた氷の上に注ぎ、固体K₂CO₃を加え、
そして水性混合液をエーテルで抽出した。エーテ
ル相を1N HCl溶液、希NaHCO₃溶液、さらに水
及び食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥さ
せた。エーテル溶剤の蒸発後、残留物を、ヘキサ
ン中の30％酢酸エチル溶液600mlで溶離するシリ
カゲル（4.5×４cmカラム）上のクロマトグラフ
イーにかけて、３−アセテート生成物（化合物
１、そこでＲ＝アセチル基）を1.8ｇ生じた。8.5
mlのヘキサンと5.5mlのベンゼンに溶解した27−
ケト−27−ノルコレステロール３−アセテート
（１）、Ｒ＝アセチル基）に固体NaHCO₃（285mg）
と115mgの１，３−ジブロモ−５，５−ジメチル
ヒダントインを加えた。混合物を80℃で窒素中で
20分間加熱後、ろ過し、残留物をドライ・ベンゼ
ンでよくすすいだ。全ろ液を蒸発させて残留物を
8.5mlのドライ・キシレン中に取り出し、それに
2.0mlのｓ−コリジンを添加した。この混合物を
窒素中で1.5時間還流し、次いで冷却し、水で希
釈し、エーテルで抽出した。エーテル抽出物を洗
浄し（1N HCl、希NaHCO₃、H₂O及び食塩水）、
そして乾燥し（Na₂SO₄）、ろ過したのち溶剤を
蒸発させた。 残留物を８mlのジオキサンに溶解し、ｐ−トル
エンスルホン酸35mgを加え、その混合物を70℃で
30分間加熱した。水を加え生成物をエーテルで抽
出した。エーテル相を洗浄し（希NaHCO₃，
H₂O及び食塩水）Na₂SO₄で乾燥し、ろ過したの
ち溶剤を蒸発させた。 その残留物に、５mlのエーテル中において、メ
タノール中の３mlの５％KOHを添加し混合物を
室温で１時間かきまぜた。水を加えたのち、混合
物をエーテルで抽出し、抽出物を洗浄し（H₂O
及び食塩水）乾燥し（Na₂SO₄）そして溶剤を蒸
発させた。残留物を、クロロホルム中の25％酢酸
エチルで展開する、シリカゲルプレート（0.75mm
厚）上のクロマトグラフイーにより88mgの目的生
成物、25−ケト−27−ノル−７−デヒドロコレス
テロールを与えた。この５，７−ジエン生成物を
エーテル（150ml）に溶解し、ビコール・フイル
ターを取り付けたハノーウランプを用いてN₂中
で５分間照射した。次いで溶剤を蒸発させ、残留
物を25％酢酸エチル／CHCl₃で２回展開するシリ
カゲル薄層板上でクロマトグラフイーさせそのプ
レビタミン生成物（25−ケト−27−ノループレビ
タミンD₃）を生じた。 この生成物を２mlのCCl₄に溶解し、80℃で3.5
時間N₂中で加熱して、異性化させた。溶剤を蒸
発させたところ25−ケト−27−ノル−ビタミン
D₃（化合物８）が得られた。 参考例 ７ ６−メキトシ−25−ケト−27−ノル−3.5−シ
クロビタミンD₃（化合物９ Ｚ＝Me） 0.25mlのドライ・ピリジン中の20mgの25−ケト
ビタミン８の溶液を40mgのトルエンスルホン酸ク
ロリドで処理した。５℃で90時間後、氷片と10％
NaHCO₃溶液を加え、その混合物をエーテルで
抽出した。エーテル相を洗浄し（1NHCl、希
NaHCO₃、水、食塩水）MgSO₄上で乾燥した。
溶剤の蒸発後、３−トシル化生成物（20mg）をド
ライ・メタノール２mlとドライ・ベンゼン0.3ml
に溶解し、NaHCO₃100mgを加え、混合液を55℃
で20時間温めた。H₂Oを加えたのち、混合物を
エーテルで抽出し、エーテル抽出物を洗浄し
（H₂Oと食塩水）、乾燥し（MgSO₂）、蒸発を行つ
て、目的の３，５−シクロビタミン生成物９（Ｚ
＝メチル基）20mgを生じた。 参考例 ８ 1α−ヒドロキシ−６−メトキシ−25−ケト−
27−ノル−３，５−シクロビタミンD₃（10Ｚ＝
Me） ドライCH₂Cl₂の0.7ml中のSeO₂1.9mgに０℃で、
90％ｔ−ブチルヒドロペルオキシド10μlを加え、
その混合物を０℃で30分間かきまぜた。この混合
物にシクロビタミン生成物９（Ｚ＝Me）20mgの
0.7mlのCH₂Cl₂溶液を滴下して加え、反応を12分
間室温で進めた。反応を飽和NaHCO₃溶液を加
えて停止させ、混合液をCH₂Cl₂で抽出した。有
機性抽出物を洗浄し（希NaHCO₃、水、食塩水）
乾燥し（MgSO₂）、そして生成物を薄層クロマト
グラフイー（シリカゲル、40％酢酸エチル／ヘキ
サン）によつて精製した。この方法で、1α−ヒ
ドロキシシクロビタミン10（Ｚ＝メチル）５mgが
得られた。そしてこれは、マススペクトル及びプ
ロトンnmrスペクトルでその特性値が得られた。 化合物10（１mg）を無水酢酸（0.1ml）でピリ
ジン（0.1ml）中55℃で1.5時間処理すると、対応
の1α−アセトキシ誘導体を生じた。同様に、1α
−ベンゾエートが、10のベンゾイルクロリドとの
反応で（ピリジン中室温で３時間）調製される。 参考例 ９ 1α−ヒドロキシ−25−ケト−27−ノルビタミ
ンD₃（化合物７） その1α−ヒドロキシ−６−メトキシ−25−ケ
ト−27−ノル−３，５−シクロビタミンD₃生成
物（10mg）が氷酢酸0.5ml中に溶かされ、55℃で
15分間加熱された。砕き氷と反応混合液を中和す
るのに十分な量のNaHCO₃とを次いで加え、混
合物をエーテルで抽出した。エーテル抽出物を洗
浄し（希NaHCO₃、水、食塩水）乾燥し
（MgSO₄）、そして蒸発させた。主として目的の
1α−ヒドロキシ−25−ケト−27−ノルビタミン
D₃3−アセテート生成物（化合物11、Ｒ＝アセチ
ル基）及び対応の５，６−トランス異性体を含有
する残留物を、それからクロマトグラフイーにか
けた（高圧液体クロマトグラフイー、Zorbax−
SILの0.62×25cmのカラムを用い、ヘキサン中の
2.5％２−プロパノールを溶離液とする。Zorbax
−SILは微粒状シリカゲル調製品、デユポン社
（ウイルミントン、デラウエア州）の製品）。目的
のシス−ビタミン生成物11（Ｒ＝アセチル基）は
103mlで溶出し、１回リサイクルさせたのち純粋
な形（3.4mg）で得たが、それはそのプロトン
nmrスペクトルで特徴付けられた。対応の５，６
−トランス異性体、1α−ヒドロキシ−25−ケト
−５，６−トランス−27−ノルビタミンD₃3−ア
セテートは112mlで溶出し、純粋な形で取り出さ
れた。 このようにして得られた３−アセテート生成物
11（Ｒ＝アセチル基）は、エーテル（0.5ml）と
0.1MKOH／MeOH（0.1ml）の溶液中で加水分解
された。加水分解は１時間、室温で行うと完全で
あり、次いで水を加え、混合液をエーテルで抽出
した。抽出物を水と食塩水で洗浄し、MgSO₄で
乾燥し、溶剤を蒸発させて、上記例６で証明した
同じ生成物についての構造及びデータと正確に一
致する紫外線、核磁気共鳴及びマススペクトルを
示す2.9mgの1α−ヒドロキシ−25−ケト−27−ノ
ルビタミンD₃（化合物７）を生成した。 ５，６−トランス生成物の３−アセテート誘導
体の全く同じ加水分解により、1α−ヒドロキシ
−25−ケト−５，６−トランス−27−ノルビタミ
ンD₃（UV：λmax273nm；マススペクトルｍ／
e400（M⁺）、152.134）を生じた。 生物学的活性 雄の乳離れしたばかりのねずみ（ホルツマン
社、マデイソン、ウイスコンシン州）を吊下式ワ
イヤーケージに収容し、以下の分析に用いる前
に、２〜３週間、スダらの（J.Nutr.100.1049
（1970））、低カルシウムのビタミンＤ欠乏食の餌
を随意に与えた。 腸のカルシウム輸送 上記のねずみは６匹ずつ６つのグループに分け
られ95％エタノール中0.05mlに溶解した試験化合
物を１回分の投薬で頚静脈内注射で与えられた。
グループ１のコントロールグループのねずみは、
溶剤ビヒクル（0.05mlの95％エタノール）だけが
与えられた。それらのねずみを、注射24時間後に
首を切り殺し、マーチンとデルーカの技術（Am.
J.Physiol.216，1351（1969））によつてカルシウム
輸送活性を測るために、その十二指腸が用いられ
た。結果を下記の表に示す。 【表】 骨カルシウム流通化（血清カルシウム濃度の上
昇） 上記のようにして餌を与えられたねずみは、そ
れぞれ６匹ずつのグループに分けられ、0.05mlの
95％エタノール（コントロールグループ）又は
0.05mlの95％エタノールに溶解した種々の量の試
験化合物（下記表に示したように）を、頚静脈内
注射で与えられた。その物質を１回の投与によ
り、犠性にする６又は24時間前に与えた。そのね
ずみを、上記指示した時間後首を切つて殺し、血
液を集め、血清を得るために遠心分離にかけた。
アリコートの血清（0.1ml）を1.9mlの0.1％の塩化
ランタン溶液と混合し、原子吸収光スペクトロホ
トメーター（パーキン エルマーモデルHO−
214）で血清中のカルシウム濃度（試験化合物に
よる骨カルシウム遊離の指標）を測定した。結果
を下記の表に示した。 【表】 【表】 上記データから1α−ヒドロキシ−25−ケト−
27−ノルビタミンD₃（化合物７）は言明したよう
なビタミンＤ様活性を示すことが明白である。特
に、この事について注目に値するのは迅速に活性
が開始することであり、（上記表の６時間のポイ
ントを参照）、そしてそれは、これまで知られて
いる最も迅速に作用するビタミンD₃誘導体であ
る１，25−（OH）₂D₃のそれに比べることができ
る。 生物学的活性なビタミンD₃類似体としての用
途以外に、本発明の化合物は、また他の所望のビ
タミンＤ化合物調製の合成中間体として有用であ
る。例えば、この1α−ヒドロキシ−25−ケト−
ビタミン化合物をメチルグリニヤール試薬（例え
ばCH₃MgBr又はCH₃Mgl）又はメチルリチウム
試薬で処理すると、知られているビタミンD₃の
最も効力のある代謝物質である1α，25−ジヒド
ロキシ−ビタミンD₃を生じる。その25−ケト誘
導体は、このようにこの極めて望ましい代謝物質
の簡単かつ直進的な調製の出発物質として役立つ
ことができる。さらに重要なことは、その25−ケ
トン誘導体は、高度に放射性の形の１，25−
（OH）₂D₃合成の出発物質として役立つことがで
きる。したがつて、そのケトンをトリチウム化メ
チルグリニヤールもしくはメチルリチウム試薬で
処理することにより、直接（26，27−³H）−１，
25−（OH）₂D₃を、及び適当な¹⁴C−標識付け試薬
との同じ反応により（26，27−¹⁴C）−１，25−
（OH）₂D₃を提供する。この方法によつて、極め
て比活性の高い、放射性標識を付けた１，25−
（OH）₂D₃が単一の容易に実施できる反応段階に
よつて調製される（例えば、比活性80Ci／
mmoleの（26，27−³H）−１，25−（OH）₂D₃が
調製される）。同じように、トリ重水素−もしく
は¹³C−標識付けの１，25−（OH）₂D₃は、ケトン
（７）を、市販の入手し得る同位体標識付けハロ
ゲン化メチル（例えばC²H₃I，¹³CH₃Iなど）を用
いる周知の方法で簡単に調製される適切な同位体
標識付けグリニヤールもしくはアルキルリチウム
試薬で処理することにより容易に調製される。 ５，６−トランスビタミンD₃化合物は、この
技術分野で周知のように紫外線照射により対応の
５，６−シス異性体に異性化されるので、前記の
方法によつて得られる５，６−トランス−1α−
ヒドロキシ−25−ケト−27−ノルビタミンD₃生
成物はその５，６−シス生成物への光化学的転換
によつて有用である。 本明細書において、“低級アルキル”という語
は炭素１から約４のメチル、エチル、イソブチ
ル、sec−ブチル、ｔ−ブチル基のようなアルキ
ル基を意味し、そして“アシル”という語は炭素
原子数１から４の脂肪族アシル又はベンゾイルを
意味し、これはホルミル、アセチル、ベンゾイル
又はニトロベンゾイル基のようなアシル基を包含
する。 （発明の効果） 本発明の化合物はビタミンＤ様活性で特徴づけ
られる化合物の調製にきわめて有用である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 1α，3β−ジヒドロキシ−27−ノル−コレス
   ト−５−エン−25−オン及びそのアシル化物（た
   だしアシルは炭素原子数１〜４の脂肪族アシル又
   はベンゾイルである）。