JPH0142944B2

JPH0142944B2 -

Info

Publication number: JPH0142944B2
Application number: JP62229954A
Authority: JP
Inventors: Efu Deruuka Hekutaa; Nobuo Ikegawa; Yoko Tanaka; Yoshiro Kobayashi
Original assignee: UISUKONSHIN ARAMUNI RISAACHI FUAUNDEESHON
Current assignee: UISUKONSHIN ARAMUNI RISAACHI FUAUNDEESHON
Priority date: 1979-03-05
Filing date: 1987-09-16
Publication date: 1989-09-18
Also published as: DK467780A; DK156644B; IL58525A; NL7920160A; DK425183A; DK446482A; DK156726C; SE8007427L; GB2044770B; DK156635C; IE49532B1; US4196133A; DK156644C; JPS6310946B2; DK156635B; CH654015A5; AU532388B2; IT1151077B; BE882036A; FR2450814A1

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、ビタミンＤ様活性で特徴づけられる
24，24−ジフルオロ−25−ヒドロキシビタミン
D₃の合成中間体である24，24−ジフルオロ−25
−ヒドロキシプレビタミンD₃に関する。（従来の技術及び発明が解決しようとする問題
点）ビタミンD₃は、カルシウムやリンのホメオス
タシスの制御剤として周知である。この化合物
は、正常な動物又は人間における腸のカルシウム
輸送と骨カルシウム流通を刺激し、くる病の予防
に有効であることが知られている。また、今では、有効であるためには、ビタミン
D₃は生体内ではヒドロキシル化型に変換されな
ければならないということがよく知られている。
例えば、そのビタミンは、初めに肝臓中でヒドロ
キシル化されて、25−ヒドロキシビタミンD₃が
形成され、さらに腎臓中でヒドロキシル化され
1α，25−ジヒドロキシビタミンD₃又は24，25−
ジヒドロキシビタミンD₃を生成する。このビタ
ミンの1α−ヒドロキシル化型は、一般に生理学
的に活性又はホルモン型のビタミンであり、ビタ
ミンＤ様活性といわれるもの、例えば、腸内のカ
ルシウム及びリン酸塩の吸収増加、骨ミネラルの
流通化及び腎臓中におけるカルシウムの維持のよ
うなビタミンＤ様活性といわれるものに対して応
答性があると考えられる。種々のビタミンＤ誘導体についての言及が特許
及び他の文献中に現存する。例えば、米国特許第
3565924号（25−ヒドロキシコレカルシフエロー
ルについて）、同3697559号（１，25−ジヒドロキ
シコレカルシフエロールについて）、同3741996号
（1α−ヒドロキシコレカルシフエロールについ
て）、同3907843号（1α−ヒドロキシエルゴカル
シフエロールについて）、同3715374号（24，25−
ジヒドロキシコレカルシフエロールについて）、
同3739001号（25，26−ジヒドロキシコレカルシ
フエロールについて）、同3786062号（22−デヒド
ロ−25−ヒドロキシコレカルシフエロールについ
て）、同3847955号（１，24，25−トリヒドロキシ
コレカルシフエロールについて）、同3906014号
（３−デオキシ−1α−ヒドロキシコレカルシフエ
ロールについて）、同4069321号（種々の側鎖フツ
素化ビタミンD₃誘導体及び側鎖フツ素化ジヒド
ロタチステロール₃類似体について）を参照。本発明は、優れたビタミンＤ様活性を発揮する
新規なビタミンD₃化合物の前駆体として有用な
プレビタミンD₃化合物を提供することを目的と
する。（問題点を解決するための手段）優れたビタミンＤ様活性を現わし、それ故ビタ
ミンD₃の種々の公知の適用面での代替品として
役立ち、骨軟化症、変形性骨異栄養症及び副甲状
腺機能不全のような様々の病気の治療に有用であ
る新しいビタミンD₃誘導体が見出された。この誘導体は、24，24−ジフルオロ−25−ヒド
ロキシコレカルシフエロール（24，24−ジフルオ
ロ−25−ヒドロキシビタミンD₃又は24F₂、25−
OHD₃）であることが確認できた。（発明の効果）本発明の化合物は、優れたビタミンＤ様活性を
示す24，24−ジフルオロ−25−ヒドロキシビタミ
ンD₃の合成中間体として用いられる。（実施例）次に本発明の実施例に基づきさらに詳細に説明
する。上記の24，24−ジフルオロ−25−ヒドロキシビ
タミンD₃の原料となる本発明の化合物は、次の
説明及び簡略化した図式に従つて合成できる。コレニツクアシド１を0゜でｐ−トルエンスル
ホン酸の存在下で適当な有機溶剤中（CH₂Cl₂）
ジヒドロピランで処理し、次いで、20゜のエタノ
ール中で1N NaOHで処理してコレニツクアシ
ドテトラヒドロピラニルエーテル（Ａ環中のヒド
ロキシル基の保護）を形成させる。この化合物
は、テトラヒドロフラン（THF）−エチルエーテ
ル中過剰のCH₃Liで０℃で４時間処理し、その
後、保護のテトラヒドロピラニル基はCH₂Cl₂−
メタノール液中のｐ−TsOHで20℃で24時間処理
して除去された。引き続きアセチル化（Ac₂O−
ピリジン−CH₂Cl₂、20゜、24時間）を行うと、メ
チルケトン２（mp148〜151゜、δ2.12（3H、ｓ、Ｃ
−25）、ｍ／e354（Ｍ−60））（収率＝６％、１から
の通しで）が得られた。メチルケトン２を、無水酢酸中でｐ−TsOHの
存在下で７時間環流させ（エノールアセチル化）、
ジアセテート３（mp109〜110゜、δ5.02（1H、ｍ、
Ｃ−23）、1.90（3H、ｓ、Ｃ−25）ｍ／e396（Ｍ−
60）を得た。このジアセテートを次にジグライム
中のクロロジフルオロ酢酸ナトリウムと170゜で
0.5時間加熱して、ジフルオロシクロプロパン４
に変換させた。収率；34％、mp112〜115゜、5.38
（1H、ｍ、Ｃ−６）、4.60（1H、ｍ、Ｃ−３）、
2.05（3H、ｓ、24−OAc）、2.02（3H、ｓ、３−
OAc）、1.60（3H、ｍ、Ｃ−26）、ｍ／e446（Ｍ−
60）。４をTHF−メタノール−水混液中、LiOHで
20℃で２時間処理したのち、引き続きアセチル化
（Ac₂O−ピリジン−CH₂Cl₂、20℃、24時間）を
行つて、シリカゲル上のクロマトグラフイーに付
したところ、ジフルオロケトン５が得られた（収
率9.3％、mp135−136−5゜、δ2.26（3H、ｔ、J_HF＝
１Hz、Ｃ−26）、ｍ／e404（Ｍ−60）。そのジフル
オロケトンは、23(E)−及び23（Ｚ）−共役ケトンの
シリカゲル上のクロマトグラフイーによつて分離
されるジフルオロケトンとの混合物として得られ
た。ジフルオロケトン５は、エチルエーテル中の過
剰量のCH₃MgIと０℃で15分間反応させ、次いで
アセチル化（Ac₂O−ピリジン−CH₂Cl₂、20゜、
20時間）して、25−カルビノール、６を収率85％
で供給する（mp163−164−5゜、δ1.28（6H、ｓ、
Ｃ−26、27）、ｍ／e420（Ｍ−60））。カルビノール
６は、Ｎ−ブロモ−スクシンイミドと環流CCl₄
中で25分間反応させアリル的に臭素化した。臭素
化した化合物は、次いでｓ−コリジンで、環流キ
シレン中で15分間処理して脱臭化水素化を行い、
４，６−ジエンと５，７−ジエン７との混合物を
得た。その５，７−ジエン（λmax263、272、
282及び292nｍ、ｍ／e419（Ｍ−59））は、ｐ−
TsOHでアセトン中20゜で15時間処理し、次いで
分離用薄層クロマトグラフイー（ベンゼン−エチ
ルアセテート（15：１）、３回）を行つて28％の
収率で分離された。回収された５，７ジエンは、
５％KOH−メタノールで20℃で15時間処理して
けん化され次いで、エタノールとベンゼンとの混
合物中で2.5分間０℃で照射処理して（ハノービ
ア高圧石英水銀蒸気ランプモデル654A36；
200W）、溶液の本発明に係る24，24−ジフルオロ
−25−ヒドロキシプレビタミンD₃ ８を得た。次に照射した上の溶液を、１時間環流させて、
薄層クロマトグラフイー（シリカゲル、ベンゼン
−エチルアセテート（５：１）、３回）と高圧液
体クロマトグラフイー（ゾーバツクスSIL、25cm
x2.1mm同上デユポン社（ウイルミントン、デラ
ウエア）から入手可能、CH₂Cl₂）で分別して、式で表わされる最終生成物の24，24−ジフルオロ−
25−ヒドロキシビタミンD₃、（λmax264nｍ、
λmin228nｍ、ｍ／e436（Ｍ＋）421、418、403、
377、271、253、136、118）を得た。ステートメントもし、ある目的のために必要ならば、上述のよ
うに回収したのちのアセチル化５，７−ジエンは
周知の手段によつて（MeOH中５％KOH、20゜、
15時間）けん化され、３位のアセトキシ基をヒド
ロキシル基に変換する。また、もし所望なら、本発明のプレビタミン８
は、5゜で溶剤を蒸発させ、引き続いてシリカゲル
上でクロマトグラフイーを行つて回収でき、その
後ビタミンに変換できる。 24，24−ジフルオロ−25−ヒドロキシビタミン
D₃の生物学的活性雄の乳離れしたねずみを吊下式ワイアーケージ
に収容し、以下の分析に用いる前に、３週間、須
田らの（J.Nutr.100、1049（1970））、低カルシウ
ムのビタミンＤ欠乏食の餌を随時に与えた。腸のカルシウム輸送上記のような５匹又は６匹のねずみのグループ
は、それぞれ犠牲にする８、23又は30時間前に、
95％エタノール中0.05mlに溶解した24，24−ジフ
ルオロ−25−ヒドロキシビタミンD₃（24F₂、25−
OH₂）又は25−ヒドロキシビタミンD₃（25−
OHD₃）のいずれかが１回分の投薬量
（650pmole）で頚静脈内に与えられた。コントロ
ールグループのねずみは、エタノールビヒクルだ
けが与えられた。それらのねずみを、それぞれの
規定の時間後に首を切り、マーチンとデルーカの
技術（Am.J.Physiology216、1351（1969）によつ
て腸のカルシウム輸送活性を測るために、その十
二指腸が用いられた。結果は下記の表に示す。【表】＊平均の標準偏差
腸のカルシウム輸送に関する24F₂、25−OHD₃
の少量投与の作用を示すため、上に指示したよう
に低カルシウム食を与えられたねずみを５匹又は
６匹のグループとして、これに、0.05mlの95％エ
タノールに溶解した24F₂、25−OHD₃又は25−
OHD₃を１回分の投薬量頚静脈内に与えた。コン
トロールグループのねずみはビヒクルのみ与えら
れた。その投与を受けたのち、20時間又は168時
間後に、ねずみを殺し、その十二指腸を、前述し
たマーチンとデルーカ法によつて腸カルシウム輸
送活性を測定するために使つた。結果を下記の第
２表に示す。【表】【表】＊平均の標準偏差
血清カルシウム濃度上記のようにして餌を与えられたねずみは、そ
れぞれ６匹のねずみのグループに分けられた。そ
のねずみの１つのグループに１回分投薬量
650pmoleで24F₂、25−OHD₃が、第２のグルー
プに650pmoleの25−OHD₃が（それぞれの場合
ビタミンD₃誘導体は0.05mlの95％エタノールに溶
解する）与えられ、そして第３のグループ（コン
トロール）にはビヒクルのみが与えられた。それ
らの物質は、犠牲にする８又は29時間前に、頚静
脈内に投与された。ねずみは、上記の表示した時間の経過後首を切
つて殺し、血液を集めて遠心分離にかけて血清を
得た。その血清（0.1ml）は1.9mlの0.1％NaCC溶
液と混合され、カルシウム濃度は原子吸収スペク
トロホトメーター（パーキン−エルマーモデル
HO−214）で測定された。結果は下記の表に示
される。【表】＊平均の標準偏差
くる病予防活性吊り下げたワイヤーケージ中に維持された雄の
乳離れしたねずみ（ホルツマン社、（マデイソン、
ウイスコンシン州））の６匹のグループごとに、
Am.J.Physiol204、833（1963）（Guroff DeLuca
とSteenbock）に記述された低リン食が餌として
与えられ、同時に、0.1mlのエタノール／プロピ
レングリコール（５／95 ｖ／ｖ）に溶解した
24F₂、25−OHD₃又は25−OHD₃が毎日２週間皮
下に投与された。コントロールグループのねずみ
は同様の方法で餌を与えられたが、ビヒクルのみ
が皮下に投与された。最後の皮下投与を受けてから24時間後に、ねず
みの首を切り、前記のように腸のカルシウム輸送
の測定のために十二指腸が用いられた。それらの
橈骨と尺骨が広がつた骨端板の測定のため取り出
され、大腿骨は灰分含有量の決定のため（大腿骨
は恒量になるまで乾燥され、マツフル炉中で650
℃で８時間焼いて灰とした。）取り出された。得られた結果は下記の表に示した。【表】【表】＊平均の標準偏差
雄の乳離れしたねずみに、上述した低リン食を
餌として与え、それぞれ５匹又は６匹のグループ
に分けた。それぞれのグループのねずみは各々１
回分投薬量（下記の表に示すとおり）の24F₂、
25−OHD₃又は25−OHD₃を0.05mlの95％エタノ
ール中に溶解して頚静脈内に与えられた。コント
ロールグループのねずみはエタノールビヒクルの
みを受けた。上記表示の投薬を受けてから168時
間後に、ねずみの首を切つて殺し、各々のグルー
プの血液を集めねずみの線試験（line test）U.S.
Pharmacopoeia、15th Rev.、Mack Publishing
Co.、Easton Pa.、1955 ｐ−889）に従いくる病
予防活性を決定するため橈骨と尺骨を取り出し
た。血液を集めたのち、ただちに遠心分離に付
し、血清を得た。チエンら（Anal.Chem.、28、
1756、（1956）の方法により血清中の無機リン量
が決定された。得られた結果を次表に示す。【表】【表】＊平均の標準偏差
毎日の24F₂、25−OHD₃投薬量に応じたくる病
予防活性を決定するために、ねずみに前述の低リ
ン食を３週間餌として与えた。それからそれらに
は、24F₂、25−OHD₃又は25−OHD₃を（それぞ
れの場合、650ρmoleを0.1mlのエタノール／プロ
ピレングリコール（５／95 ｖ／ｖ）に溶解した）
皮下に毎日８日間、餌は同じに維持して（各々の
グループに９匹のねずみ）、投与した。コントロ
ールグループのねずみ（４匹のねずみ）は、同様
の方法でエタノール／プロピレングリコールビヒ
クルのみが与えられた。最後の投薬ののち24時間経過してから、それら
を殺し、橈骨と尺骨を取り出し、くる病予防活性
を測定するために（ねずみ線試験、上のとおり）
用い、一方大腿骨は取り除かれ、前述のようにし
て灰化された。得られた結果を下記の表に示した。【表】＊平均の標準偏差
上記のデータから24，24−ジフルオロ−25−ヒ
ドロキシビタミンD₃は、ビタミンＤ様活性と断
言できる活性を示しこの点で25−ヒドロキシビタ
ミンD₃と全く同様に（米国特許第3565924号参
照）効果的であることがわかる。

Claims

【特許請求の範囲】

１ 24，24−ジフルオロ−25−ヒドロキシプレビ
タミンD₃。