JPH0319691A - ベクターとしてのポリオウイルス及びそれにより産生される経口ワクチン - Google Patents
ベクターとしてのポリオウイルス及びそれにより産生される経口ワクチンInfo
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- JPH0319691A JPH0319691A JP1153529A JP15352989A JPH0319691A JP H0319691 A JPH0319691 A JP H0319691A JP 1153529 A JP1153529 A JP 1153529A JP 15352989 A JP15352989 A JP 15352989A JP H0319691 A JPH0319691 A JP H0319691A
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、弱毒ボリオウィルス遺伝子に他種類のウイル
ス遺伝子を組み込んで得られる経口生ワクチンに関スる
。更に詳しくは本発明は経口生ウィルスポリオワクチン
として使用されてぃる弱毒ボリオウイルスのゲノムＲＮ
Ａに、他種ウィルス等の遺伝子を組み込むことによりポ
リオウィルスをベクターとして利用する新しいタイプの
ワクチンに関するものである。
ス遺伝子を組み込んで得られる経口生ワクチンに関スる
。更に詳しくは本発明は経口生ウィルスポリオワクチン
として使用されてぃる弱毒ボリオウイルスのゲノムＲＮ
Ａに、他種ウィルス等の遺伝子を組み込むことによりポ
リオウィルスをベクターとして利用する新しいタイプの
ワクチンに関するものである。
急性灰白髄炎（ポリオ）は世界的にしばしば大流行を起
こす重大な病気であった。１９５０年代に至り、病原体
であるポリオウィルスの組織培養による増殖法が発見さ
れて以来、このウィルスの研究が急速に進展した。その
結果、有効なワクチンの開発が相次いで成功し、我が国
でも弱毒ウイルスによる経口生ポリオワクチンの投与が
広範に実施され、ほぼ完璧なまでにポリオの制御が達威
された。この経口生ポリオワクチンは非常に完戒度の高
いワクチンであり、安全性、抗体陽転率が高い。その上
、被接種者が乳幼児であるので経口投与という接種法が
非常に歓迎されている。
こす重大な病気であった。１９５０年代に至り、病原体
であるポリオウィルスの組織培養による増殖法が発見さ
れて以来、このウィルスの研究が急速に進展した。その
結果、有効なワクチンの開発が相次いで成功し、我が国
でも弱毒ウイルスによる経口生ポリオワクチンの投与が
広範に実施され、ほぼ完璧なまでにポリオの制御が達威
された。この経口生ポリオワクチンは非常に完戒度の高
いワクチンであり、安全性、抗体陽転率が高い。その上
、被接種者が乳幼児であるので経口投与という接種法が
非常に歓迎されている。
ウイルスの感染性を保持したまま、他種ウイルス等の外
来性抗原遺伝子を組み込ませて生ウイルスワクチンとし
て使用するいわゆるウイルスヘクターに関しては、ワタ
シニアウイルスの場合が著名である。
来性抗原遺伝子を組み込ませて生ウイルスワクチンとし
て使用するいわゆるウイルスヘクターに関しては、ワタ
シニアウイルスの場合が著名である。
このウイルスベクターは製造法も確立され、科学的なデ
ータも多くの蓄積を見ているが、いまだに実用化には至
っていない。それにはＷＨＯによる天然痘の絶滅宣言お
よび種痘の廃止勧告にもとすく任意接種への行政的な切
り換え等の社会的な理由が先ず考えられる。本発明にお
いてはポリオウイルスベクタとして利用することに関し
ており、その基本的に意図することはワクシニアウイル
スの場合と同様で３ ４ ある。しかしながら、ポリオワクチンでは、先進国にお
けるポリオの流行は殆ど見られなくなったにも係わらず
、現在のところ接種の緩和ということは全くなくこの意
味においてはベクターとして採用されるに当たっても非
常に有利であることが考えられる。
ータも多くの蓄積を見ているが、いまだに実用化には至
っていない。それにはＷＨＯによる天然痘の絶滅宣言お
よび種痘の廃止勧告にもとすく任意接種への行政的な切
り換え等の社会的な理由が先ず考えられる。本発明にお
いてはポリオウイルスベクタとして利用することに関し
ており、その基本的に意図することはワクシニアウイル
スの場合と同様で３ ４ ある。しかしながら、ポリオワクチンでは、先進国にお
けるポリオの流行は殆ど見られなくなったにも係わらず
、現在のところ接種の緩和ということは全くなくこの意
味においてはベクターとして採用されるに当たっても非
常に有利であることが考えられる。
ポリオウィルス（ワタシニアでも同様）をベクタとして
他種ウィルス等のワクチンにすることの利点は、疾患や
性質等が種々ある全ての病原体に対して理論的には同様
のワクチン製造が可能であり、安全性や有効性がベクタ
ーに用いたウィルス（ポリオやワタシニア）についての
み考慮されればよい。したがって、遺伝子の組み込みに
用いられた個々の病原体の危険性とかワクチン製造の困
難度等の問題が全て解消されてしまう。生ポリオワクチ
ンはこの点においては非常に優秀であり、安全性や有効
性では現行の多くのワクチンの中でも傑出した存在であ
る。
他種ウィルス等のワクチンにすることの利点は、疾患や
性質等が種々ある全ての病原体に対して理論的には同様
のワクチン製造が可能であり、安全性や有効性がベクタ
ーに用いたウィルス（ポリオやワタシニア）についての
み考慮されればよい。したがって、遺伝子の組み込みに
用いられた個々の病原体の危険性とかワクチン製造の困
難度等の問題が全て解消されてしまう。生ポリオワクチ
ンはこの点においては非常に優秀であり、安全性や有効
性では現行の多くのワクチンの中でも傑出した存在であ
る。
それ故にベクターとして用いられた場合でもその効果は
非常に期待されると考えられる。
非常に期待されると考えられる。
Ｃ課題を解決するための手段〕
ウイルスがベクターとして組み換えＤＮＡ等の発現に使
われている例としてはワクシニアウィルス以外にも、ヘ
ルペスウイルス、ハキュロウィルス等がある。これらの
組み換えウィルスの作製には、組み換えを行うＤＮＡの
両端にウィルスと相同のＤＮＡ断片を結合させ、これを
無傷のウィルスＤＮＡとともに細胞内に取り込ませ相同
的遺伝子組み換えを起こさせることにより、組み換えウ
ィルスを作製するという方法が使われている。
われている例としてはワクシニアウィルス以外にも、ヘ
ルペスウイルス、ハキュロウィルス等がある。これらの
組み換えウィルスの作製には、組み換えを行うＤＮＡの
両端にウィルスと相同のＤＮＡ断片を結合させ、これを
無傷のウィルスＤＮＡとともに細胞内に取り込ませ相同
的遺伝子組み換えを起こさせることにより、組み換えウ
ィルスを作製するという方法が使われている。
本発明におけるポリオウィルスの場合には、ウィルスゲ
ノムＲＮＡそれ自体に感染性がある。さらにウイルスゲ
ノムＲＮＡ全長に相当するｃ．ＤＮＡプラスミッドも感
染性を持つことが発見され、回収されたポリオウイルス
中のゲノムＲＮＡが感染に用いたＣＤＮＡに完全に由来
していることが確認された。
ノムＲＮＡそれ自体に感染性がある。さらにウイルスゲ
ノムＲＮＡ全長に相当するｃ．ＤＮＡプラスミッドも感
染性を持つことが発見され、回収されたポリオウイルス
中のゲノムＲＮＡが感染に用いたＣＤＮＡに完全に由来
していることが確認された。
即ち、先に挙げたワタシニアウィルス等のＤＮＡウイル
スの場合には、ウィルスゲノムへの目的遺伝子の組み換
えはＤＮＡを感染させた細胞の中で行われたのに対して
、本発明のポリオウィルスでは、ｃＤＮＡのレベルで遺
伝子の組み換えを行っておけば、そのままの形で遺伝子
を組み換えられたポリオウィ５ 一 ６ ルスが簡便に回収できるという利点がある。さらには、
ポリオウイルスのｃＤＮＡ部分の上流にファジＴ７等の
ＲＮＡ合成酵素が認識するプロモ−タを連結させること
により、試験管内でｃＤＮＡと相同のＲＮＡを大量に効
率良く合成し得る方法が確立され、本発明の実施がより
一層容易なものとなった。
スの場合には、ウィルスゲノムへの目的遺伝子の組み換
えはＤＮＡを感染させた細胞の中で行われたのに対して
、本発明のポリオウィルスでは、ｃＤＮＡのレベルで遺
伝子の組み換えを行っておけば、そのままの形で遺伝子
を組み換えられたポリオウィ５ 一 ６ ルスが簡便に回収できるという利点がある。さらには、
ポリオウイルスのｃＤＮＡ部分の上流にファジＴ７等の
ＲＮＡ合成酵素が認識するプロモ−タを連結させること
により、試験管内でｃＤＮＡと相同のＲＮＡを大量に効
率良く合成し得る方法が確立され、本発明の実施がより
一層容易なものとなった。
即ち、本発明は経口生ポリオワクチンの接種法をそのま
ま利用して、ポリオウイルスの遺伝子中に他種ウイルス
等に由来する遺伝子を組み込むことによるそのウイルス
等に対する経口生ワクチンに関するものである。この場
合においては、ポリオウイルスは遺伝子を組み込まれた
多種ウイルス等に対ずるワクチンとして、被接種者への
経口投与、腸における増殖、抗原の発現、免疫の戒立等
に至るまでの役割を担うヘクターとして１動いているこ
とになる。
ま利用して、ポリオウイルスの遺伝子中に他種ウイルス
等に由来する遺伝子を組み込むことによるそのウイルス
等に対する経口生ワクチンに関するものである。この場
合においては、ポリオウイルスは遺伝子を組み込まれた
多種ウイルス等に対ずるワクチンとして、被接種者への
経口投与、腸における増殖、抗原の発現、免疫の戒立等
に至るまでの役割を担うヘクターとして１動いているこ
とになる。
次に本発明において使用されるウイルスゲノムに欠｛員
ヲ持つｃＤＮＡ由来のポリオウイルスについて述べる。
ヲ持つｃＤＮＡ由来のポリオウイルスについて述べる。
第１図にポリオウイルス遺伝子ＲＮＡの概念図を示す。
先に述べた通り、遺伝子を組み換えられたキメラ型のポ
リオウイルス内に含まれるキメラ型のウイルスＲＮＡが
感染に用いたｃＤＮＡをそのまま反映するということは
、一方では遺伝子操作法により容易に遺伝子組み換えを
行い得るという利点となる。しかしながら、他方では組
み換えを行ない得る領域およびその長さ等に制約を受け
ることが予測される。ウイルスゲノムの領域においては
、５゛末端や３゛末端における非蛋白質暗号領域等はウ
イルスの増殖に重要な機能を果たしており、この部分の
改変は不適当である。また同様の理由で、第１図におけ
るＰ２、ｐ ３ｆｉＪｆ域の改変も不可能で、結局Ｐ１
のウイルス構成蛋白遺伝子領域の改変のみが許されると
いうことになる。
リオウイルス内に含まれるキメラ型のウイルスＲＮＡが
感染に用いたｃＤＮＡをそのまま反映するということは
、一方では遺伝子操作法により容易に遺伝子組み換えを
行い得るという利点となる。しかしながら、他方では組
み換えを行ない得る領域およびその長さ等に制約を受け
ることが予測される。ウイルスゲノムの領域においては
、５゛末端や３゛末端における非蛋白質暗号領域等はウ
イルスの増殖に重要な機能を果たしており、この部分の
改変は不適当である。また同様の理由で、第１図におけ
るＰ２、ｐ ３ｆｉＪｆ域の改変も不可能で、結局Ｐ１
のウイルス構成蛋白遺伝子領域の改変のみが許されると
いうことになる。
上記の如き考察より、まずポリオウイルスのキャプシド
蛋白質部分に相当する遺伝子領域において欠損部分を持
つｃＤＮＡプラスミッドの獲得を目標とした実験を行っ
た。その結果キャブシド蛋白Ｐｌｊｆｆ域内において約
８００塩基を欠損したｃＤＮＡプラス案ソドを分離する
とかできた。このｃＤＮＡの塩基配列を調べてみると、
ポリオウィルスの蛋白質の７ ８ 暗号枠が欠損領域の前後でずれることなく、開始部位か
らＰ２、Ｐ３の領域までの蛋白質合戒を行い得る配列と
なっていることが判明した。そこで、本発明者はこの欠
損ｃＤＮＡよりＴ７のＲＮＡ合成酵素等を用いてＲＮＡ
とした後に、ヒト培養細胞にヘルパーとして完全ポリオ
ウイルスと重感染を行うことにより欠損ウイルスゲノム
を保持したポリオウイルスの増殖に威功したのである。
蛋白質部分に相当する遺伝子領域において欠損部分を持
つｃＤＮＡプラスミッドの獲得を目標とした実験を行っ
た。その結果キャブシド蛋白Ｐｌｊｆｆ域内において約
８００塩基を欠損したｃＤＮＡプラス案ソドを分離する
とかできた。このｃＤＮＡの塩基配列を調べてみると、
ポリオウィルスの蛋白質の７ ８ 暗号枠が欠損領域の前後でずれることなく、開始部位か
らＰ２、Ｐ３の領域までの蛋白質合戒を行い得る配列と
なっていることが判明した。そこで、本発明者はこの欠
損ｃＤＮＡよりＴ７のＲＮＡ合成酵素等を用いてＲＮＡ
とした後に、ヒト培養細胞にヘルパーとして完全ポリオ
ウイルスと重感染を行うことにより欠損ウイルスゲノム
を保持したポリオウイルスの増殖に威功したのである。
なお、この欠損型ポリオウイルスのゲノムＲＮＡの欠損
部分は感染に用いた欠損のｃＤＮＡと完全に相同である
ことが塩基配列の決定実験で確認されている。
部分は感染に用いた欠損のｃＤＮＡと完全に相同である
ことが塩基配列の決定実験で確認されている。
欠損型のポリオウイルスＲＮＡは完全ポリオウイルスＲ
ＮＡより短いのでウィルスを超遠心による精製を行えば
欠損型ウイルスは容易に分離可能である。
ＮＡより短いのでウィルスを超遠心による精製を行えば
欠損型ウイルスは容易に分離可能である。
またこの欠損ウイルスのみを細胞に大量に感染させると
、ウイルスの再生産は起こらないので子ウイルス増殖に
伴うポリオウィルスの神経毒性効果が全くない状態で外
来遺伝子の発現を起こさせることができる。
、ウイルスの再生産は起こらないので子ウイルス増殖に
伴うポリオウィルスの神経毒性効果が全くない状態で外
来遺伝子の発現を起こさせることができる。
次にキメラ型ポリオウイルスについて述べる。
キメラ型のポリオウイルスはこの欠損部分を補う形で他
種ウイルス等由来のＤＮＡやｃＤＮＡ等を結合させるこ
とにより作製される。その際欠損部位の前後におけるポ
リオウイルス遺伝子の蛋白質暗号と、組み込まれた他種
由来ＤＮＡ部分の蛋白質暗号の読み取り枠を一致させて
おくことが肝要である。発現させる目的でポリオウイル
スゲノム中に組み込ませる遺伝子のアミノ酸暗号枠を前
後のポリオウィルスの領域とで一致させることである。
種ウイルス等由来のＤＮＡやｃＤＮＡ等を結合させるこ
とにより作製される。その際欠損部位の前後におけるポ
リオウイルス遺伝子の蛋白質暗号と、組み込まれた他種
由来ＤＮＡ部分の蛋白質暗号の読み取り枠を一致させて
おくことが肝要である。発現させる目的でポリオウイル
スゲノム中に組み込ませる遺伝子のアミノ酸暗号枠を前
後のポリオウィルスの領域とで一致させることである。
このことにより作製されたキメラ型のポリオウイルスが
感染を起こした時に、組み込まれたＤＮＡ部分による蛋
白質の合成が前後のポリオウイルスの蛋白質に融合され
た状態で容易に発現されることが可能である。つまり、
過誤なく連結ができていれば組み込まれた遺伝子は容易
に発現する。即ち遺伝子を組み換えられたポリオウイル
スが遺伝子を組み込まれた他種ウィルス等に対するワク
チンとなり得る基盤はこの点において存在する。この考
察に基き、本発明は、まず第１図のＰＩ内の欠損部位に
外来の遺伝子を融合蛋白質が産生可能なように結合させ
たキメラ型のｃＤＮ９− １０ Ａプラスごノドを作製し、Ｔ７等のＲＮＡ合戒酵素によ
りＲＮＡとして培養細胞に感染させてキメラ型のポリオ
ウイルスを回収する。結合させる外来の遺伝子の例とし
ては、活性マーカーとして測定が容易になし得るマーカ
ーに、更に対象となるワクチン抗原が挙げられ、それら
は例えば、クロラムフェニコルアセチル基転移酵素（Ｃ
ＡＴ） 、ヒトーα−インターフェロン（α−ＨＩＦＮ
）などが活性測定の容易なマーカーと、ウイルスワクチ
ンとして利用可能なＢ型肝炎ウイルス表面抗原、日本脳
炎ウィルス表面抗原などのウイルス抗原とが用いられる
。これら６こついては後記する実施例においてさらに詳
しく説明する。
感染を起こした時に、組み込まれたＤＮＡ部分による蛋
白質の合成が前後のポリオウイルスの蛋白質に融合され
た状態で容易に発現されることが可能である。つまり、
過誤なく連結ができていれば組み込まれた遺伝子は容易
に発現する。即ち遺伝子を組み換えられたポリオウイル
スが遺伝子を組み込まれた他種ウィルス等に対するワク
チンとなり得る基盤はこの点において存在する。この考
察に基き、本発明は、まず第１図のＰＩ内の欠損部位に
外来の遺伝子を融合蛋白質が産生可能なように結合させ
たキメラ型のｃＤＮ９− １０ Ａプラスごノドを作製し、Ｔ７等のＲＮＡ合戒酵素によ
りＲＮＡとして培養細胞に感染させてキメラ型のポリオ
ウイルスを回収する。結合させる外来の遺伝子の例とし
ては、活性マーカーとして測定が容易になし得るマーカ
ーに、更に対象となるワクチン抗原が挙げられ、それら
は例えば、クロラムフェニコルアセチル基転移酵素（Ｃ
ＡＴ） 、ヒトーα−インターフェロン（α−ＨＩＦＮ
）などが活性測定の容易なマーカーと、ウイルスワクチ
ンとして利用可能なＢ型肝炎ウイルス表面抗原、日本脳
炎ウィルス表面抗原などのウイルス抗原とが用いられる
。これら６こついては後記する実施例においてさらに詳
しく説明する。
本発明において用いられる各種ウイルス遺伝子の塩基配
列やｃＤＮＡ作製方法等々は既に知られている方法が使
用可能である。即ち、強毒マホニー株ポリオウイルスゲ
ノムＲＮＡの全塩基配列は喜多村ら（Ｎａｔｕｒｅ，２
９１：５４７ ５５３（１９８１））、Ｒａｃａｎｉ
ｅｌ ｌｏら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
，ＵＳＡ，７８：４８８７４８９１ （１９８１））
に、弱毒セイビン１株ポリオウイルスゲノムＲＮＡの全
塩基配列は野木ら〔Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ７９：５７９３−５７９７ （１９８２
））に、マホニー株の感染性ｃＤＮＡの作製および方法
については、Ｒａｃａｎｉｅｌｌｏら〔Ｓｃｉｅｎｃｅ
．２１４：９１６−９１９ （１９８１））に、セイ
ビン１株の感染性ｃＤＮＡの作製については、小俣ら、
〔Ｇｅｎｅ，３２：１−１０ （１９８４））に、感染
性ポリオウイルスｃＤＮＡにＴ７等のＲＮＡ合［酵素の
認識するプロモーターを導入して試験管内で感染性を持
つポリオウイルスＲＮＡを合戒する方法についてはｖａ
ｎ ｄｅｒ Ｗｅｒｆら、（Ｐｒｏｃ，Ｎａ ｔ
］．Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ．ＵＳＡ，８３ ：２３３（１
−２３３４．（１．９８６））に、ポリオウイルスゲノ
ムのＰｌｊｌ域に欠損を導入する方法は久下ら、 ＣＪ
，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９２：４７３４８７ （１
９８６））に記載されている。
列やｃＤＮＡ作製方法等々は既に知られている方法が使
用可能である。即ち、強毒マホニー株ポリオウイルスゲ
ノムＲＮＡの全塩基配列は喜多村ら（Ｎａｔｕｒｅ，２
９１：５４７ ５５３（１９８１））、Ｒａｃａｎｉ
ｅｌ ｌｏら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
，ＵＳＡ，７８：４８８７４８９１ （１９８１））
に、弱毒セイビン１株ポリオウイルスゲノムＲＮＡの全
塩基配列は野木ら〔Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ７９：５７９３−５７９７ （１９８２
））に、マホニー株の感染性ｃＤＮＡの作製および方法
については、Ｒａｃａｎｉｅｌｌｏら〔Ｓｃｉｅｎｃｅ
．２１４：９１６−９１９ （１９８１））に、セイ
ビン１株の感染性ｃＤＮＡの作製については、小俣ら、
〔Ｇｅｎｅ，３２：１−１０ （１９８４））に、感染
性ポリオウイルスｃＤＮＡにＴ７等のＲＮＡ合［酵素の
認識するプロモーターを導入して試験管内で感染性を持
つポリオウイルスＲＮＡを合戒する方法についてはｖａ
ｎ ｄｅｒ Ｗｅｒｆら、（Ｐｒｏｃ，Ｎａ ｔ
］．Ａｃａｄ．Ｓｃ ｉ．ＵＳＡ，８３ ：２３３（１
−２３３４．（１．９８６））に、ポリオウイルスゲノ
ムのＰｌｊｌ域に欠損を導入する方法は久下ら、 ＣＪ
，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９２：４７３４８７ （１
９８６））に記載されている。
本発明の中核となる他種ウィルス等の外来遺伝子１ １
− １ ２〜 を組み込ませたポリオウイルスを作製するに際しては、
まず欠損型のウイルスゲノムＲＮＡでもポリオウイルス
を形或（きることがその前提条件となる。
− １ ２〜 を組み込ませたポリオウイルスを作製するに際しては、
まず欠損型のウイルスゲノムＲＮＡでもポリオウイルス
を形或（きることがその前提条件となる。
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこ
れらに限定されるものではない。
れらに限定されるものではない。
失嵐斑一上
ウイルスゲノムのＰｌｌｉ域に欠損を持ったポリオウイ
ルスの 前記久下らの論文には第１図６こおけるＰ １ ’６Ｍ
域の８１６塩基を欠損したセイビン１株由来のｃ ＤＮ
Ａを含むプラス旦ノドＰＶＳ （１）ＤＩ２１３の作製
について記載されている。この欠損部分を持つＰ１領域
を制限酵素のＢａｎｌｌにより約１、８ｋｂｐ （キロ
塩基対、以下ｋｂｐと称す）の断片として切り出し、全
く対応する部分を予め１３ａｎｆｆで除去しておいた感
染性を持ち完全長のポリオウイルスｃＤＮＡを含むプラ
スミッドｐＭＩ （Ｔ７）０にＴ４ＤＮＡリガーゼに
より連結させてＰ １ 領域に欠損部位を持ち他領域の
全てを含むプラスごソドｐＭｓ１（Ｔ７）１を調製した
。これらの操作手順を第２図に示した。
ルスの 前記久下らの論文には第１図６こおけるＰ １ ’６Ｍ
域の８１６塩基を欠損したセイビン１株由来のｃ ＤＮ
Ａを含むプラス旦ノドＰＶＳ （１）ＤＩ２１３の作製
について記載されている。この欠損部分を持つＰ１領域
を制限酵素のＢａｎｌｌにより約１、８ｋｂｐ （キロ
塩基対、以下ｋｂｐと称す）の断片として切り出し、全
く対応する部分を予め１３ａｎｆｆで除去しておいた感
染性を持ち完全長のポリオウイルスｃＤＮＡを含むプラ
スミッドｐＭＩ （Ｔ７）０にＴ４ＤＮＡリガーゼに
より連結させてＰ １ 領域に欠損部位を持ち他領域の
全てを含むプラスごソドｐＭｓ１（Ｔ７）１を調製した
。これらの操作手順を第２図に示した。
ゲノム中に欠損部位を持つポリオウイルスを人工的に作
製するためにまず上記ｐＭｓ１ （Ｔ７）１を制限酵
素ＥＣ ＯＲ ＩまたはＰｖｕ Ｔで切断させておき、
Ｔ７ＲＮＡ合成酵素により欠損を持つポリオウイルスＲ
ＮＡを合成した。このＲＮＡ １〜５μｇをＶａｎ
ｄｅｒ Ｗｅｒｆらの方法に従いヒｌ− Ｈ ｅＬａ
細胞に５００μｇ／ｍ４のＤＥＡＥデキストランととも
に添加し、３７゜Ｃで２時間取り込ませた後にヘルパー
としてポリオウイルスを重感染させ、ウイルス増殖に伴
う細胞変或効果（Ｃ Ｐ Ｅ）の生ずるまで培養を行う
と培養液中に欠損型ゲノムＲＮＡを持つポリオウイルス
が産生された。この欠損型のウイルスは新しいＨｅＬａ
細胞を用いて継代培養を行うことによりそのヘルパーウ
イルスに対する量的な比率を増大させることが可能であ
った。このことは継代を３回行うことで早くも欠損ウイ
ルスが確認されることにより証明された。第３図に欠ｆ
ｆｉ Ｒ Ｎ Ａが回収されたことを完全長のウイルス
ＲＮＡと比較するアガロースゲル電気泳動により証明で
きる威績を１３ １４− 示した。
製するためにまず上記ｐＭｓ１ （Ｔ７）１を制限酵
素ＥＣ ＯＲ ＩまたはＰｖｕ Ｔで切断させておき、
Ｔ７ＲＮＡ合成酵素により欠損を持つポリオウイルスＲ
ＮＡを合成した。このＲＮＡ １〜５μｇをＶａｎ
ｄｅｒ Ｗｅｒｆらの方法に従いヒｌ− Ｈ ｅＬａ
細胞に５００μｇ／ｍ４のＤＥＡＥデキストランととも
に添加し、３７゜Ｃで２時間取り込ませた後にヘルパー
としてポリオウイルスを重感染させ、ウイルス増殖に伴
う細胞変或効果（Ｃ Ｐ Ｅ）の生ずるまで培養を行う
と培養液中に欠損型ゲノムＲＮＡを持つポリオウイルス
が産生された。この欠損型のウイルスは新しいＨｅＬａ
細胞を用いて継代培養を行うことによりそのヘルパーウ
イルスに対する量的な比率を増大させることが可能であ
った。このことは継代を３回行うことで早くも欠損ウイ
ルスが確認されることにより証明された。第３図に欠ｆ
ｆｉ Ｒ Ｎ Ａが回収されたことを完全長のウイルス
ＲＮＡと比較するアガロースゲル電気泳動により証明で
きる威績を１３ １４− 示した。
欠損部分を持つウイルスを大量に培養しておき（８Ｘ１
０’ ｃｅｌｌｓ）塩化セシウム（１．３３ｇ／ｃＪ．
２５゜Ｃ）の密度勾配で３３０００回転／分、４゜Ｃ、
１５時間の超遠心によりウイルス材料中に存在するヘル
パーのポリオウイルスを分離した。
０’ ｃｅｌｌｓ）塩化セシウム（１．３３ｇ／ｃＪ．
２５゜Ｃ）の密度勾配で３３０００回転／分、４゜Ｃ、
１５時間の超遠心によりウイルス材料中に存在するヘル
パーのポリオウイルスを分離した。
この結果は第４図に示される。この図において試験管番
号の２５−３１ （フラクションＩ）、３２３６ （
フラクションＩｆ） 、３７−４４ （フラクション
ＩＩＩ）、とをプールしてそれぞれからウイルスＲＮＡ
を取り、それらをアガロースゲル電気泳動を行った結果
を第５図に示す。第５図に示すようにフラクションｍの
ＲＮＡがフラクションＩのヘルパーとして加えたポリオ
ウイルスＲＮＡよりも短くなっていることが判明した。
号の２５−３１ （フラクションＩ）、３２３６ （
フラクションＩｆ） 、３７−４４ （フラクション
ＩＩＩ）、とをプールしてそれぞれからウイルスＲＮＡ
を取り、それらをアガロースゲル電気泳動を行った結果
を第５図に示す。第５図に示すようにフラクションｍの
ＲＮＡがフラクションＩのヘルパーとして加えたポリオ
ウイルスＲＮＡよりも短くなっていることが判明した。
また、このＲＮＡの欠損部分の近辺の塩基配列をプライ
マー伸張法による塩基配列決定法により調べると、最初
に用いたｐ １ ８Ｎ域に欠損を持つｃＤＮＡと全く相
同であることが確認された。
マー伸張法による塩基配列決定法により調べると、最初
に用いたｐ １ ８Ｎ域に欠損を持つｃＤＮＡと全く相
同であることが確認された。
本実施例により欠損ゲノムを持ったポリオウイルスを人
工的に作製できた。これはウイルス粒子が形威されるに
当たっては完全なウイルスＲＮＡである必要はないとい
うことを意味しており、これにより他種遺伝子を組み込
ませたキメラ型のポリオウイルス作製の理論的な根拠力
ｑ＋ｉ立できた。
工的に作製できた。これはウイルス粒子が形威されるに
当たっては完全なウイルスＲＮＡである必要はないとい
うことを意味しており、これにより他種遺伝子を組み込
ませたキメラ型のポリオウイルス作製の理論的な根拠力
ｑ＋ｉ立できた。
実施斑−１
ヒ１〜Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の表面抗原遺伝子を
組み込ませたキメラ型のポリオウィルスの作Ｂ型肝炎ウ
イルス（ＨＢＶ）のウイルスゲノムは約３２００塩基対
の長さを持つ環状２本鎖ＤＮＡであり、そのａｄｒ株に
ついてゲノムＤＮＡのクロニングと全塩基配列の決定は
藤山ら、（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ， Ｖ
ｏｌ １１、４６０１４．６１０（１９８３））に記
載されている。本発明者らは回報文に従ってＨＢＶａｄ
ｒ株の全ゲノムＤＮＡを含む組み換え体プラスごソドｐ
ＨＢ１を作製した。この｝ＴＢＶＤＮＡの表面抗原遺伝
子領域（Ｓｒｅｇｉｏｎ）の制限酵素地図を第６図に示
す。
組み込ませたキメラ型のポリオウィルスの作Ｂ型肝炎ウ
イルス（ＨＢＶ）のウイルスゲノムは約３２００塩基対
の長さを持つ環状２本鎖ＤＮＡであり、そのａｄｒ株に
ついてゲノムＤＮＡのクロニングと全塩基配列の決定は
藤山ら、（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ， Ｖ
ｏｌ １１、４６０１４．６１０（１９８３））に記
載されている。本発明者らは回報文に従ってＨＢＶａｄ
ｒ株の全ゲノムＤＮＡを含む組み換え体プラスごソドｐ
ＨＢ１を作製した。この｝ＴＢＶＤＮＡの表面抗原遺伝
子領域（Ｓｒｅｇｉｏｎ）の制限酵素地図を第６図に示
す。
本実施例はこの地図において２種類の制限酵素ｘｈ１５
１６
０ＩとＳｐｅｌによって切り出される５５６塩基対の遺
伝子切片を、欠損を人工的に導入されたポリオウイルス
ｃＤＮＡプラスミッドに組め込む実験を行った。第７図
にその遺伝子断片についてのＤＮＡ塩基配列とそのアご
ノ酸配列を示す。
伝子切片を、欠損を人工的に導入されたポリオウイルス
ｃＤＮＡプラスミッドに組め込む実験を行った。第７図
にその遺伝子断片についてのＤＮＡ塩基配列とそのアご
ノ酸配列を示す。
先ず実施例１で作製されたｐＭｓ１ （Ｔ７）１の欠
損部位近辺に存在する制限酵素Ａｖａ ］部位に以下の
実験を容易にするためにＳａｃｌの合成ＤＮＡリンカー
を導入させたプラスξソドｐＭｓ１ （Ｔ７）Ｓｃを
作製した。Ｓａｃ１部位を導入された後のこの部位近辺
の塩基配列及び対応するアミノ酸暗号は下記の通りであ
る。
損部位近辺に存在する制限酵素Ａｖａ ］部位に以下の
実験を容易にするためにＳａｃｌの合成ＤＮＡリンカー
を導入させたプラスξソドｐＭｓ１ （Ｔ７）Ｓｃを
作製した。Ｓａｃ１部位を導入された後のこの部位近辺
の塩基配列及び対応するアミノ酸暗号は下記の通りであ
る。
Ａｖａｌ Ｓａｃｌ Ａ
ｖａｌ５’ ＧＴＧＣＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＣＧ
ＡＧＶａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ｐｒｏ Ｇｌｕ上記したＳａｃ１部位に第７図に
示したＨＢＶａｄｒの表面抗原遺伝子ＸｈｏＩ 一Ｓｐ
ｅＩ間の断片をアミノ酸暗号枠がずれないように連結さ
せるため下記のような２種類のリンカーＤＮＡを合成し
た。
ｖａｌ５’ ＧＴＧＣＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＣＧ
ＡＧＶａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ
Ｐｒｏ Ｇｌｕ上記したＳａｃ１部位に第７図に
示したＨＢＶａｄｒの表面抗原遺伝子ＸｈｏＩ 一Ｓｐ
ｅＩ間の断片をアミノ酸暗号枠がずれないように連結さ
せるため下記のような２種類のリンカーＤＮＡを合成し
た。
Ｘｈｏｌ Ｓａｃｌ Ｘｈｏｌ
ＴＣＧＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＡＧＣ ＣＧＡＣＴＣＧＡＧＴＣＧＡＧＣＴ Ｓｐｅｌ ＳａｃＩ
Ｓｐｅ ＩＣＴＡＧＴＧＣＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＧＣＡ
ＡＣＧＧＴＣＴＣＧＡＧＡＣＣＧＴＧＡＴＣ次にこのリ
ンカーＤＮＡをプラスミッドｐ Ｈ Ｂ １のＸｈｏｌ
及びＳｐｅ１部位にそれぞれ結合させた新たなプラスミ
ッドｐＨＢＸｈＳｐ １を作製した。
ＴＣＧＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＡＧＣ ＣＧＡＣＴＣＧＡＧＴＣＧＡＧＣＴ Ｓｐｅｌ ＳａｃＩ
Ｓｐｅ ＩＣＴＡＧＴＧＣＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＧＣＡ
ＡＣＧＧＴＣＴＣＧＡＧＡＣＣＧＴＧＡＴＣ次にこのリ
ンカーＤＮＡをプラスミッドｐ Ｈ Ｂ １のＸｈｏｌ
及びＳｐｅ１部位にそれぞれ結合させた新たなプラスミ
ッドｐＨＢＸｈＳｐ １を作製した。
これによりＸｈｏｌ−ＳｐｅＴの遺伝子断片ぱＳａｃＩ
の切断により切り出し可能となった。予めＳａｃｌで切
断しておいたプラスミッドｐＭｓ１ （Ｔ７）Ｓｃに
Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて結合させ、欠損を生してい
るポリオウイルスのｃＤＮＡＰ１コーディング領域にＨ
ＢＶａｄｒ表面抗原遺伝子の一部分を正しい方向に連結
されたキメラ型のプラスミッドｐＭ （Ｔ７）ＨＢＳＸ
ＳＩを樹立した。なお、反対方向に結合されたｐＭ （
Ｔ７）ＨＢＳＸＳ○も同時に分離された。以上の操作手
順を第８図に示す。
の切断により切り出し可能となった。予めＳａｃｌで切
断しておいたプラスミッドｐＭｓ１ （Ｔ７）Ｓｃに
Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて結合させ、欠損を生してい
るポリオウイルスのｃＤＮＡＰ１コーディング領域にＨ
ＢＶａｄｒ表面抗原遺伝子の一部分を正しい方向に連結
されたキメラ型のプラスミッドｐＭ （Ｔ７）ＨＢＳＸ
ＳＩを樹立した。なお、反対方向に結合されたｐＭ （
Ｔ７）ＨＢＳＸＳ○も同時に分離された。以上の操作手
順を第８図に示す。
１ ７一
１８
また２個所の連結部分における塩基配列と対応するアミ
ノ酸の暗号は次の通りである。
ノ酸の暗号は次の通りである。
Ｓａｃｌ
Ｐｏｌｉｏ 一− 一ＧＴＧＣＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴ
ＣＡＧＣＶａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌ
ｕ Ｌｅｕ ＳｅｒＸｈｏ ］ ＴＣＧＡＧＧＡＣＴ− 一一一ＨＢＶ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｈｒ
ＳｅｒＳｐｅｌ
ＳａｃＩ ＴＴＡＣＴＡＧＴＧＣＣＡＧＡＧＣＴＣＬｅｕ Ｌ
ｅｕ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｅ
ｕこれによりポリオウイルス領域と挿入されたＨ Ｂ
Ｖの領域を通してのアミノ酸暗号読み取り枠が一致して
いることが確認された。また同時に連結部分において蛋
白合戒の終了暗号（ＴＡＡ．．ＴＡＧ．．ＴＧＡ）が生
していないことも確認された。以下、実施例１に記載し
た場合と全く同様の操作を行ってキメラ型のポリオウイ
ルスＲＮＡ、そのＲＮＡをヘルパウイルスと培養細胞に
重感染させることによりＨＢＶの表面抗原遺伝子を含ん
だポリオウイルスを産生ＡＧＴ Ｐｏｌｉｏ した。
ＣＡＧＣＶａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｇｌ
ｕ Ｌｅｕ ＳｅｒＸｈｏ ］ ＴＣＧＡＧＧＡＣＴ− 一一一ＨＢＶ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｈｒ
ＳｅｒＳｐｅｌ
ＳａｃＩ ＴＴＡＣＴＡＧＴＧＣＣＡＧＡＧＣＴＣＬｅｕ Ｌ
ｅｕ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｅ
ｕこれによりポリオウイルス領域と挿入されたＨ Ｂ
Ｖの領域を通してのアミノ酸暗号読み取り枠が一致して
いることが確認された。また同時に連結部分において蛋
白合戒の終了暗号（ＴＡＡ．．ＴＡＧ．．ＴＧＡ）が生
していないことも確認された。以下、実施例１に記載し
た場合と全く同様の操作を行ってキメラ型のポリオウイ
ルスＲＮＡ、そのＲＮＡをヘルパウイルスと培養細胞に
重感染させることによりＨＢＶの表面抗原遺伝子を含ん
だポリオウイルスを産生ＡＧＴ Ｐｏｌｉｏ した。
実施例１と同様に産生されていると予測されるキメラ型
のポリオウイルス量のヘルパーウイルスに対する比率を
増大させるため、感染を受けた細胞がＣＰＥを生じた時
その培養液を新しい培養細胞に接種することによるウイ
ルスの継代を行った。Ｉ｛ Ｂ Ｖの表面抗原を含むポ
リオウイルスが形威されていることの確認のために、培
養液中のＨＢ表面抗原の測定をアボット社のキットを用
いて下記の手順で行った。
のポリオウイルス量のヘルパーウイルスに対する比率を
増大させるため、感染を受けた細胞がＣＰＥを生じた時
その培養液を新しい培養細胞に接種することによるウイ
ルスの継代を行った。Ｉ｛ Ｂ Ｖの表面抗原を含むポ
リオウイルスが形威されていることの確認のために、培
養液中のＨＢ表面抗原の測定をアボット社のキットを用
いて下記の手順で行った。
その結果を第１表に示す。
以下余白
１９
２０
第１表
（単位 ｃｐｍ）
即ち、マイクロタイターのウェルにＨＢｓ抗体結合のビ
ーズを入れ、検体（ウィルス培養液）、ＨＢＳ抗原の陰
性対照、陽性対照等を夫々２００μβずつ加える。４５
゜Ｃ、２時間（あるいは室温１６時間）後検体液を吸引
除去しビーズを水５ｍｆｆで２回洗浄する。＋２５
Ｉ標識ヒトＨＢＳ抗体液を２００μｌ各ウエルに加え４
５℃、１時間反応させ、１′ ■標識液を除去、ビーズ
を２回洗浄後ビーズに結合した放則能をガンマウエルシ
ンチレーションカウンタで測定した。
ーズを入れ、検体（ウィルス培養液）、ＨＢＳ抗原の陰
性対照、陽性対照等を夫々２００μβずつ加える。４５
゜Ｃ、２時間（あるいは室温１６時間）後検体液を吸引
除去しビーズを水５ｍｆｆで２回洗浄する。＋２５
Ｉ標識ヒトＨＢＳ抗体液を２００μｌ各ウエルに加え４
５℃、１時間反応させ、１′ ■標識液を除去、ビーズ
を２回洗浄後ビーズに結合した放則能をガンマウエルシ
ンチレーションカウンタで測定した。
陽性対照はＨＢＳ抗原２０ｎｇ／ｍｌ１２００μβを加
えた時の測定値１０４１０ｃｐｍであった。
えた時の測定値１０４１０ｃｐｍであった。
第１表に示すようにＨＢＶの表面抗原遺伝子を正方向に
連結された感染細胞の継代にのみＨ Ｂ表面抗原陽性で
あり、その発現量は継代を重ねることにより増大してい
くことがわかる。
連結された感染細胞の継代にのみＨ Ｂ表面抗原陽性で
あり、その発現量は継代を重ねることにより増大してい
くことがわかる。
本実施例により、キメラ型のポリオウイルスＲＮＡを細
胞にヘルパーとして完全なポリオウイルスとともに重感
染させるときキメラ型のポリオウイルス粒子が形成され
ること、及びそのウイルスゲノム中に挿入されている外
来性の遺伝子（本実施例においてはＨＢＶの表面抗原遺
伝子）が発現されていることが実証された。
胞にヘルパーとして完全なポリオウイルスとともに重感
染させるときキメラ型のポリオウイルス粒子が形成され
ること、及びそのウイルスゲノム中に挿入されている外
来性の遺伝子（本実施例においてはＨＢＶの表面抗原遺
伝子）が発現されていることが実証された。
本発明は以上説明したように、実施例１においてはＰｌ
領域に欠損を導入したポリオウイルスＲＮＡでもウイル
ス形威が可能であること、実施例２においては欠損部分
を補う形でＢ型肝炎ウイルスの表面抗原遺伝子を結合さ
せたキメラ型のポリオウイルス２ｌ ２２ ＲＮＡによるウイルス形成及びその外来遺伝子の発現が
生していることを示した。この場合においてはポリオウ
イルスは結合された外来遺伝子の発現を可能とさせたヘ
クターとして機能していることになり本発明の経口生ワ
クチンが生産されることが証明された。
領域に欠損を導入したポリオウイルスＲＮＡでもウイル
ス形威が可能であること、実施例２においては欠損部分
を補う形でＢ型肝炎ウイルスの表面抗原遺伝子を結合さ
せたキメラ型のポリオウイルス２ｌ ２２ ＲＮＡによるウイルス形成及びその外来遺伝子の発現が
生していることを示した。この場合においてはポリオウ
イルスは結合された外来遺伝子の発現を可能とさせたヘ
クターとして機能していることになり本発明の経口生ワ
クチンが生産されることが証明された。
ポリオワクチンは弱毒株を用いた経口生ワクチンとして
ポリオの制御に強力な役割を果たしたが、病気の悲惨さ
とワクチンの有効性や安全性からみて今後も引き続き接
種されていく見込みが強い。本発明ではこのワクチンの
本体であるポリオウイルスをベクターとして活用するも
のであり、実際の利用に際しては当然本来のポリオワク
ヂンの経口接種と不可分となる。例えば本発明の実施例
２で示したＢ型肝炎ウイルス表面抗原遺伝子を導入され
たポリオウイルスを上記ポリオワクチンに混合すれば同
時に２種類のワクチン接種が可能となる。このことは単
にＢ型肝炎ウイルスに限定されることなくその他の各種
ウイルス等及びそれ以外の病原体に対する多価ワクチン
への可能性も大となる。
ポリオの制御に強力な役割を果たしたが、病気の悲惨さ
とワクチンの有効性や安全性からみて今後も引き続き接
種されていく見込みが強い。本発明ではこのワクチンの
本体であるポリオウイルスをベクターとして活用するも
のであり、実際の利用に際しては当然本来のポリオワク
ヂンの経口接種と不可分となる。例えば本発明の実施例
２で示したＢ型肝炎ウイルス表面抗原遺伝子を導入され
たポリオウイルスを上記ポリオワクチンに混合すれば同
時に２種類のワクチン接種が可能となる。このことは単
にＢ型肝炎ウイルスに限定されることなくその他の各種
ウイルス等及びそれ以外の病原体に対する多価ワクチン
への可能性も大となる。
第１図はｐｌＶｉｉ域の８１６塩基対を欠損したセイビ
ン１株由来のｃＤＮＡを含むプラスミッドＰＶＳの作製
図、第２図はプラスミッドｐＭｓ１ （Ｔ７）１の操
作手順、第３図は欠ｆｆｊ４ Ｒ Ｎ Ａが回収された
ことを完全長のウイルスＲＮＡと比較するアガロースゲ
ル電気泳動図、第４図は欠損部分を持つウイルス材料中
に存在するヘルパーのポリオウイルスの分離結果、第５
図はウイルスＲＮＡのアガロースゲル電気泳動図、第６
図はＨＢＶＤＮＡの表面抗原遺伝子領域の制限酵素地図
、第７図はＤＮＡ塩基配列とそのアごノ酸配列、第８図
はポリオウイルスのｃＤＮＡＰＩコーディング領域にＨ
ＢＶＳＸａ ｄ ｒ表面抗原遺伝子の一部分を正しい方
向に結合させるキメラ型のプラスごソドｐＭ （Ｔ７）
ＨＢｓＸＳ１の操作手順である。 ２９０ ３００
ン１株由来のｃＤＮＡを含むプラスミッドＰＶＳの作製
図、第２図はプラスミッドｐＭｓ１ （Ｔ７）１の操
作手順、第３図は欠ｆｆｊ４ Ｒ Ｎ Ａが回収された
ことを完全長のウイルスＲＮＡと比較するアガロースゲ
ル電気泳動図、第４図は欠損部分を持つウイルス材料中
に存在するヘルパーのポリオウイルスの分離結果、第５
図はウイルスＲＮＡのアガロースゲル電気泳動図、第６
図はＨＢＶＤＮＡの表面抗原遺伝子領域の制限酵素地図
、第７図はＤＮＡ塩基配列とそのアごノ酸配列、第８図
はポリオウイルスのｃＤＮＡＰＩコーディング領域にＨ
ＢＶＳＸａ ｄ ｒ表面抗原遺伝子の一部分を正しい方
向に結合させるキメラ型のプラスごソドｐＭ （Ｔ７）
ＨＢｓＸＳ１の操作手順である。 ２９０ ３００
Claims (10)
- （１）ポリオウイルスゲノムＲＮＡに対するポリオウイ
ルス相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）よりポリオウイルスの構
成蛋白質領域等を人工的に欠損させて得られた組み換え
ＤＮＡプラスミッド構造物。 - （２）ポリオウイルスが１型マホニー株及びセイビン株
である特許請求の範囲第１項記載の組み換えＤＮＡプラ
スミッド構造物。 - （３）ＤＮＡプラスミッド構造物中のポリオウイルス相
補的ＤＮＡ部分がファージＴ７等のＲＮＡ合成酵素の認
識するプロモータに連結されていることを特徴とする特
許請求の範囲第１項記載の組み換えＤＮＡプラスミッド
構造物。 - （４）ＤＮＡプラスミッド構造物にファージＴ７等のＲ
ＮＡ合成酵素を作用させることにより得られる欠損部分
を持つポリオウイルスＲＮＡ。 - （５）特許請求の範囲第１項記載のＤＮＡ中のポリオウ
イルスｃＤＮＡの欠損部分へ、他種ウイルスゲノム等あ
るいはメッセンジャーＲＮＡ等由来のＤＮＡあるいはｃ
ＤＮＡを結合させたキメラ型の組み換えＤＮＡプラスミ
ッド構造物。 - （６）特許請求の範囲第５項記載のキラメ型組み換えＤ
ＮＡプラスミッド構造物にファージＴ７等のＲＮＡポリ
メレースを作用させることにより得られるキメラ型ポリ
オウイルスＲＮＡ。 - （７）特許請求の範囲第１、４、５、６項に記載された
組み換えＤＮＡ構造物、あるいは欠損型、キメラ型のポ
リオウイルスＲＮＡをサルやヒト等の培養細胞に感染さ
せることにより得られる欠損型あるいはキメラ型のポリ
オウィルスワクチン。 - （８）特許請求の範囲第７項記載のキメラ型のポリオウ
イルスを利用して生産される他種ウィルス等に対するワ
クチン。 - （９）ポリオウイルスセイビン株を利用して生産される
他種ウィルス等に対する経口ワクチン。 - （１０）特許請求の範囲第１項、第５項記載の組み換え
ＤＮＡプラスミッド、及び同第４項、第６項記載のポリ
オウイルスＲＮＡを利用して生産されるキメラ型のポリ
ウィルスによる他種ウィルス等に対する経口ワクチン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1153529A JPH0319691A (ja) | 1989-06-15 | 1989-06-15 | ベクターとしてのポリオウイルス及びそれにより産生される経口ワクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1153529A JPH0319691A (ja) | 1989-06-15 | 1989-06-15 | ベクターとしてのポリオウイルス及びそれにより産生される経口ワクチン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0319691A true JPH0319691A (ja) | 1991-01-28 |
Family
ID=15564518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1153529A Pending JPH0319691A (ja) | 1989-06-15 | 1989-06-15 | ベクターとしてのポリオウイルス及びそれにより産生される経口ワクチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0319691A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5965124A (en) * | 1991-12-06 | 1999-10-12 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Replication-competent recombinant viral vaccines and method of producing same |
| JP2023532735A (ja) * | 2020-07-02 | 2023-07-31 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 組み換えエンテロウイルスおよびその使用 |
-
1989
- 1989-06-15 JP JP1153529A patent/JPH0319691A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5965124A (en) * | 1991-12-06 | 1999-10-12 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Replication-competent recombinant viral vaccines and method of producing same |
| JP2023532735A (ja) * | 2020-07-02 | 2023-07-31 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 組み換えエンテロウイルスおよびその使用 |
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