JPH03198786A - 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ―スレオニンの製造法Info
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- JPH03198786A JPH03198786A JP33893789A JP33893789A JPH03198786A JP H03198786 A JPH03198786 A JP H03198786A JP 33893789 A JP33893789 A JP 33893789A JP 33893789 A JP33893789 A JP 33893789A JP H03198786 A JPH03198786 A JP H03198786A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、バリンアナログに耐性を有し、かつＬ−スレ
オニン生産能を有するエシェリヒア属に属する微生物を
用いるＬ−スレオニンの製造法に関する。
オニン生産能を有するエシェリヒア属に属する微生物を
用いるＬ−スレオニンの製造法に関する。
Ｌ−スレオニンは、アミノ酸製剤などの医薬品として有
用であるだけでなく、飼料添加用としても利用できるア
ミノ酸である。
用であるだけでなく、飼料添加用としても利用できるア
ミノ酸である。
従来の技術
従来、発酵法によるＬ−スレオニンの製造法としては、
エシェリヒア属に属し、ボレリジン感受性を示す微生物
を用いる方法（特公昭５ｌ−６７５２）、エシェリヒア
属に属し、ジアミノピメリン酸とメチオニンの要求性を
示し、かつスレオニンの生合成系がスレオニンのフィー
ドバック阻害に対して抵抗性を示す微生物を用いる方法
（特公昭５６１００３７）、セラチア属に属し、スレオ
ニン脱水素酵素が欠損し、かつスレオニン代謝拮抗物質
に耐性を示す微生物を用いる方法（特公昭５２−４８１
９５）、コリネバクテリウム属に属し、α−アミノ−β
−ヒドロキシ吉草酸および５−（２−アミノエチル）Ｌ
−システィンに耐性で、かつメチオニンの要求性を有す
る微生物を用いる方法（特開昭４７−１９０８７）、ブ
レビバクテリウム属に属し、α−アミノ−βヒドロキシ
吉草酸および５−（２−アミノエチル）Ｌ−システィン
に耐性で、かつロイシンの要求性を有する微生物を用い
る方法（特開昭５Ｏ−３１０９３）、ブレビバクテリウ
ム属に属し、α−アミノ−βヒドロキシ吉草酸および５
−（２−アミノエチル）Ｌ＝システィンに耐性で、かつ
Ｌ−イソロイシンおよびリジンの要求性を有する微生物
を用いる方法（特開昭５８−２２４６８４）、エシェリ
ヒア属に属し、リファンピシン、リジン、メチオニン、
アスパラギン酸およびホモセリンの少なくとも１種に耐
性を有するか、またはＬ−スレオニンの分解能の低下し
た微生物を用いる方法（特開昭６３−２７３４８７）な
どが知られている。
エシェリヒア属に属し、ボレリジン感受性を示す微生物
を用いる方法（特公昭５ｌ−６７５２）、エシェリヒア
属に属し、ジアミノピメリン酸とメチオニンの要求性を
示し、かつスレオニンの生合成系がスレオニンのフィー
ドバック阻害に対して抵抗性を示す微生物を用いる方法
（特公昭５６１００３７）、セラチア属に属し、スレオ
ニン脱水素酵素が欠損し、かつスレオニン代謝拮抗物質
に耐性を示す微生物を用いる方法（特公昭５２−４８１
９５）、コリネバクテリウム属に属し、α−アミノ−β
−ヒドロキシ吉草酸および５−（２−アミノエチル）Ｌ
−システィンに耐性で、かつメチオニンの要求性を有す
る微生物を用いる方法（特開昭４７−１９０８７）、ブ
レビバクテリウム属に属し、α−アミノ−βヒドロキシ
吉草酸および５−（２−アミノエチル）Ｌ−システィン
に耐性で、かつロイシンの要求性を有する微生物を用い
る方法（特開昭５Ｏ−３１０９３）、ブレビバクテリウ
ム属に属し、α−アミノ−βヒドロキシ吉草酸および５
−（２−アミノエチル）Ｌ＝システィンに耐性で、かつ
Ｌ−イソロイシンおよびリジンの要求性を有する微生物
を用いる方法（特開昭５８−２２４６８４）、エシェリ
ヒア属に属し、リファンピシン、リジン、メチオニン、
アスパラギン酸およびホモセリンの少なくとも１種に耐
性を有するか、またはＬ−スレオニンの分解能の低下し
た微生物を用いる方法（特開昭６３−２７３４８７）な
どが知られている。
発明が解決しようとする課題
本発明の目的は、アミノ酸製剤や飼料添加物として有用
なＬ−スレオニンを、より収率よく安価に製造する方法
を提供することにある。
なＬ−スレオニンを、より収率よく安価に製造する方法
を提供することにある。
課題を解決するための手段
本発明によれば、エシェリヒア属に属し、バリンアナロ
グに耐性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微
生物を、培地に培養し、培養物中にＬ−スレオニンを生
成蓄積させ、該培養物よりＬ−スレオニンを採取するこ
とを特徴とする発酵法によるＬ−スレオニンの製造法を
提供することができる。
グに耐性を有し、かつＬ−スレオニン生産能を有する微
生物を、培地に培養し、培養物中にＬ−スレオニンを生
成蓄積させ、該培養物よりＬ−スレオニンを採取するこ
とを特徴とする発酵法によるＬ−スレオニンの製造法を
提供することができる。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明に使用する微生物としては、エシェリヒア属に属
し、Ｌ−スレオニン生産能を有する微生物であればいず
れも用いることができる。
し、Ｌ−スレオニン生産能を有する微生物であればいず
れも用いることができる。
バリンのアナログとしては、バリン、バリンヒドロキサ
メート、Ｎ−メチルバリン、α−アミノ酪酸、２−チア
ゾールアラニンなどが知られておりいずれのアナログも
使用できる。
メート、Ｎ−メチルバリン、α−アミノ酪酸、２−チア
ゾールアラニンなどが知られておりいずれのアナログも
使用できる。
バリンアナログに対する耐性変異株は、エシェリヒア属
に属するＬ−スレオニン生産菌を通常の変異手段により
変異させ、上記の性質を付与することにより取得できる
。好適な菌株としてはエシェリヒア・コリＨ−７５３８
やＨ−７６００をあげることができる。エシェリヒア属
に属するスレオニン生産菌には、副生のアミノ酸が少な
いという利点がある。
に属するＬ−スレオニン生産菌を通常の変異手段により
変異させ、上記の性質を付与することにより取得できる
。好適な菌株としてはエシェリヒア・コリＨ−７５３８
やＨ−７６００をあげることができる。エシェリヒア属
に属するスレオニン生産菌には、副生のアミノ酸が少な
いという利点がある。
以下に本発明の耐性変異株の取得方法を具体的に説明す
る。
る。
エシェリヒア・コＩＪＨ−４２５８（四ｌ’１Ｍ ＢＰ
−９８５、ジアミノピメリン酸要求性、メチオニン要求
性、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸耐性、リファン
ピシン耐性）にＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮニトロソ
クアニジン（ＮＴＧ）を用いて常法の変異処理（０，２
ｍｇ／ｍ＋！、３０℃、３０分間）を施す。バリンヒド
ロキサメー）（Ｉｇ／ｆｌ）を含む最少培地（グルコー
ス５ｇ／β、ＮＨ４（１２ｇ／β、ＫＨ２ＰＯ４２ｇ／
、ｆ！、Ｍｇ５０＋・７Ｈ２００，１ｇ／ｊｌ！、Ｆ
ｅ２（Ｓｏ、）ａ ２０ｍｇ／ １２、ジアミノピメリ
ン酸５０ｍｇ／ＣＤＬ−メチオニン５０ｍｇ／Ａ、寒天
２０ｇ／＊ ｐＨ７，２）に塗布する。
−９８５、ジアミノピメリン酸要求性、メチオニン要求
性、α−アミノ−β−ヒドロキシ吉草酸耐性、リファン
ピシン耐性）にＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮニトロソ
クアニジン（ＮＴＧ）を用いて常法の変異処理（０，２
ｍｇ／ｍ＋！、３０℃、３０分間）を施す。バリンヒド
ロキサメー）（Ｉｇ／ｆｌ）を含む最少培地（グルコー
ス５ｇ／β、ＮＨ４（１２ｇ／β、ＫＨ２ＰＯ４２ｇ／
、ｆ！、Ｍｇ５０＋・７Ｈ２００，１ｇ／ｊｌ！、Ｆ
ｅ２（Ｓｏ、）ａ ２０ｍｇ／ １２、ジアミノピメリ
ン酸５０ｍｇ／ＣＤＬ−メチオニン５０ｍｇ／Ａ、寒天
２０ｇ／＊ ｐＨ７，２）に塗布する。
３０℃で２〜６日間培養し、生育してくる耐性株のコロ
ニーを取得する。バリンヒドロキサメート耐性変異株５
０株を釣菌し、Ｌ−スレオニン生産試験にかけ、親株よ
りＬ−スレオニン生産能が向上した菌株を選ぶ（本菌株
をエシェリヒア・コリＨ−７５３８という。）。また、
バリンヒドロキサメートのかわりにα−アミノ醋酸を２
ｇ／ｆｌ用いる以外は上記と同様の操作をおこないα−
アミノ醋酸耐性変異株を取得する（本菌株をエシェリヒ
ア・コリＨ−７６００という。）。これらの菌株はブダ
ペスト条約にもとづいて平成１年１２月２１日付で工業
技術院微生物工業技術研究所にそれぞれＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−２６９６、ＦＥＲＭ ＢＰ２６９８として寄託さ
れている。
ニーを取得する。バリンヒドロキサメート耐性変異株５
０株を釣菌し、Ｌ−スレオニン生産試験にかけ、親株よ
りＬ−スレオニン生産能が向上した菌株を選ぶ（本菌株
をエシェリヒア・コリＨ−７５３８という。）。また、
バリンヒドロキサメートのかわりにα−アミノ醋酸を２
ｇ／ｆｌ用いる以外は上記と同様の操作をおこないα−
アミノ醋酸耐性変異株を取得する（本菌株をエシェリヒ
ア・コリＨ−７６００という。）。これらの菌株はブダ
ペスト条約にもとづいて平成１年１２月２１日付で工業
技術院微生物工業技術研究所にそれぞれＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−２６９６、ＦＥＲＭ ＢＰ２６９８として寄託さ
れている。
なお、本発明で用いられた変異株と、親株（Ｈ４２５８
株）を、バリンヒドロキサメートあるいはα−アミノ酪
酸を含む最少寒天培地上で、３０℃、２４時間培養した
ときの生育の程度を比較した結果を第１表で示す。
株）を、バリンヒドロキサメートあるいはα−アミノ酪
酸を含む最少寒天培地上で、３０℃、２４時間培養した
ときの生育の程度を比較した結果を第１表で示す。
第 １ 表
十：良く生育する
±：やや生育する
：生育しない
本発明の微生物によるＬ−スレオニンの生産は、通常の
培養法にて実施可能である。使用培地としては、炭素源
、窒素源、無機物そのほか使用菌株の必要とする微量の
栄養素を程よく含有する培地ならば、合成培地または天
然培地いずれも使用可能である。
培養法にて実施可能である。使用培地としては、炭素源
、窒素源、無機物そのほか使用菌株の必要とする微量の
栄養素を程よく含有する培地ならば、合成培地または天
然培地いずれも使用可能である。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、ラクトー
ス、糖蜜、澱粉または粗糖の加水分解物などの炭水化物
、ピルビン酸、酢酸、プロピオン酸、ギ酸、フマール酸
、リンゴ酸などの有機酸などが用いられる。さらに微生
物の資化性によっては、グリセリン、エタノールなどの
アルコールなども用いられる。
ス、糖蜜、澱粉または粗糖の加水分解物などの炭水化物
、ピルビン酸、酢酸、プロピオン酸、ギ酸、フマール酸
、リンゴ酸などの有機酸などが用いられる。さらに微生
物の資化性によっては、グリセリン、エタノールなどの
アルコールなども用いられる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウムな
どの各種無機酸もしくは有機酸のアンモニウム塩、アミ
ン類、そのほか含窒素化合物、ならびにペプトン、肉エ
キス、コーン・ステイープ・リカー、カゼイン加水分解
物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化物
などが用いられる。
アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウムな
どの各種無機酸もしくは有機酸のアンモニウム塩、アミ
ン類、そのほか含窒素化合物、ならびにペプトン、肉エ
キス、コーン・ステイープ・リカー、カゼイン加水分解
物、大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化物
などが用いられる。
無機物としては、燐酸第一カリウム、燐酸第二カリウム
、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウ
ム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウ
ムなどが用いられる。
、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウ
ム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウ
ムなどが用いられる。
培養は振盪培養または深部通気攪拌培養などの好気的条
件下、温度２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃、ｐ
Ｈ５〜９、好ましくは中性付近に保持しておこなわれ
、通常２〜７日で完了する。
件下、温度２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃、ｐ
Ｈ５〜９、好ましくは中性付近に保持しておこなわれ
、通常２〜７日で完了する。
培地のｐＨ調整は炭酸カルシウム、無機または有機の酸
、アルカリ溶液、アンモニア、ｐＨ緩衝液などによって
おこなわれる。
、アルカリ溶液、アンモニア、ｐＨ緩衝液などによって
おこなわれる。
培養終了後、培養液から菌体などの沈殿物を除去し、イ
オン交換処理法、濃縮法、塩析法などを併用することに
より、培養液からＬ−スレオニンを回収することができ
る。
オン交換処理法、濃縮法、塩析法などを併用することに
より、培養液からＬ−スレオニンを回収することができ
る。
以下に本発明の詳細な説明する。
実施例１
エシェリヒア・コリＨ−７５３８、Ｈ−７６００および
親株であるＨ−４２５８を、グルコース２０ｇ／β、ペ
プトン１０ｇ／Ｃ酵母エキスＬｏｇ／ｊＬＮａｃｊ２
２．５ｇ／ｊ２、ジアミノピメリン酸０．５ｇ／ｊｌ！
の組成からなる種培地（ｐＨ７，４）で、３０℃、１６
時間振盪培養した。得られた種培養液１００ｍ１を１１
の下記発酵培地を含む２ｊ２の発酵槽に植菌し、温度３
０℃、攪拌数８００ｒｐｍ、通気量１β／ｍｉｎ、にて
培養した。培養中のｐＨ調整および窒素源の供給はアン
モニア水でおこない、ｐＨは約６．５に維持した。グル
コースを適宜供給しつつ、８０時間培養をおこなった。
親株であるＨ−４２５８を、グルコース２０ｇ／β、ペ
プトン１０ｇ／Ｃ酵母エキスＬｏｇ／ｊＬＮａｃｊ２
２．５ｇ／ｊ２、ジアミノピメリン酸０．５ｇ／ｊｌ！
の組成からなる種培地（ｐＨ７，４）で、３０℃、１６
時間振盪培養した。得られた種培養液１００ｍ１を１１
の下記発酵培地を含む２ｊ２の発酵槽に植菌し、温度３
０℃、攪拌数８００ｒｐｍ、通気量１β／ｍｉｎ、にて
培養した。培養中のｐＨ調整および窒素源の供給はアン
モニア水でおこない、ｐＨは約６．５に維持した。グル
コースを適宜供給しつつ、８０時間培養をおこなった。
その際のＬ−スレオニンの生産量を高速液体クロマトグ
ラフィー法により定量し、結果を第２表にまと狛だ。
ラフィー法により定量し、結果を第２表にまと狛だ。
発酵培地の組成は以下の通りである。
グルコース４０ ｇ＃、（ＮＨ，）２ＳＯ４１２ｇ／β
、ＫＨ２Ｐ０，２ｇ／β、Ｍｇ５Ｏ＜・７ Ｈ２Ｏ１ｇ
／ｊｌ！−ジアミノピメリン酸０．９ｇ／β、ＤＩ−−
メチオニン０．３ｇ／β、コーン・ステイープ・リカー
５ｇ＃ｌ’（ｐＨ７，４） Ｈ−７５３８株を用いて得たＬ−スレオニン含有培養物
１１を遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ、 １０分）にかけ
菌体その他の不純物を除去した。得られた上澄液を強酸
性陽イオン交換樹脂ダイヤイオン５ＫＩ（Ｈ型）のカラ
ムに通し、Ｌ−スレオニンを吸着させ、水洗後０．５規
定のアンモニア水で溶出して、Ｌ−スレオニン画分を集
めた。集めた両分を濃縮し、エタノールを加えて冷却下
で保存することにより、純度９８％以上のＬ−スレオニ
ンの結晶が３０ｇ得られた。
、ＫＨ２Ｐ０，２ｇ／β、Ｍｇ５Ｏ＜・７ Ｈ２Ｏ１ｇ
／ｊｌ！−ジアミノピメリン酸０．９ｇ／β、ＤＩ−−
メチオニン０．３ｇ／β、コーン・ステイープ・リカー
５ｇ＃ｌ’（ｐＨ７，４） Ｈ−７５３８株を用いて得たＬ−スレオニン含有培養物
１１を遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ、 １０分）にかけ
菌体その他の不純物を除去した。得られた上澄液を強酸
性陽イオン交換樹脂ダイヤイオン５ＫＩ（Ｈ型）のカラ
ムに通し、Ｌ−スレオニンを吸着させ、水洗後０．５規
定のアンモニア水で溶出して、Ｌ−スレオニン画分を集
めた。集めた両分を濃縮し、エタノールを加えて冷却下
で保存することにより、純度９８％以上のＬ−スレオニ
ンの結晶が３０ｇ得られた。
第 ２ 表
−４２５８
７５３８バリンヒドロキ
サメート耐性
３６．３
３８．５
Ｈ−７６００α−アミノ酪酸耐性
４０．３
発明の効果
本発明によれば、アミノ酸製剤や飼料添加物として有用
なＬ−スレオニンを、収率よく安価に製造することがで
きる。
なＬ−スレオニンを、収率よく安価に製造することがで
きる。
Claims (1)
- エシェリヒア属に属し、バリンアナログに耐性を有し、
かつＬ−スレオニン生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にＬ−スレオニンを生成蓄積させ、該培養
物よりＬ−スレオニンを採取することを特徴とする発酵
法によるＬ−スレオニンの製造法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33893789A JP2810739B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 |
| HU845290A HU207536B (en) | 1989-12-27 | 1990-12-22 | Process for producing 1-threonine with fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33893789A JP2810739B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03198786A true JPH03198786A (ja) | 1991-08-29 |
| JP2810739B2 JP2810739B2 (ja) | 1998-10-15 |
Family
ID=18322730
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33893789A Expired - Lifetime JP2810739B2 (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2810739B2 (ja) |
| HU (1) | HU207536B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116334155A (zh) * | 2023-05-31 | 2023-06-27 | 齐齐哈尔龙江阜丰生物科技有限公司 | 一种低含量l-苏氨酸的清洁生产方法 |
-
1989
- 1989-12-27 JP JP33893789A patent/JP2810739B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-12-22 HU HU845290A patent/HU207536B/hu unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116334155A (zh) * | 2023-05-31 | 2023-06-27 | 齐齐哈尔龙江阜丰生物科技有限公司 | 一种低含量l-苏氨酸的清洁生产方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUT60329A (en) | 1992-08-28 |
| HU908452D0 (en) | 1991-07-29 |
| HU207536B (en) | 1993-04-28 |
| JP2810739B2 (ja) | 1998-10-15 |
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