JPH0320206A - 皮膚化粧料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はコラーゲン合成冗進作用を有する噛乳動物の乳
清及びその分画成分を含有することを特徴とする皮膚化
粧料（医薬部外品たる薬用化粧品を含む．以下同じ）に
関する． 〔従来の技術〕 老齢化社会を迎えつつあるわが国において、老化（エー
ジング）に対する医学的関心が高まる中、皮膚科領域に
おいても皮膚の老化メカニズム等に関する研究が進めら
れ、特に、細胞賦活剤の投与による老化制御に内外の注
目が集まっている．従来、いくつかの動植物及び菌類の
抽出物に組織賦活能が認められ、医薬品や化粧品に用い
られてきた．しかしこれらのものの中で、細胞レベルに
おいて生理活性を有する物質として評価されたものは少
なく、例えば、組織切片に対するこれらの抽出物の添加
による＃素の消費量の増加を、ワールプルグ検圧計等を
用いて測定する方法、あるい祉また、ＡＴＰ等の酸化的
リン酸化を触媒するような酵素を用いた定量法が試みら
れている．しかしながら、これらの手段では、例えば、
組織切片を用いた酸素消費量試験法によれば、水もまた
賦活能を示し、極端なことを言えば炭素や窒素源′をも
った多くのものは適量の濃度にあって酸素の消費量の増
加を示す．少なくとも栄養剤としての評価にはこれらの
測定手段は有効であるが、細胞レベルで皮膚の機能をと
らえ検体の評価を行なうとき、これらの手段により細胞
賦活薫をとらえることは無理な点が多かった． 〔発明が解決しようとする問題点〕 い抵抗力とを有することにより、その生理機能を充分に
果たしている． 皮膚を組織学的に大別すると、表皮、真庶、皮下組織に
分けられるが、特に真皮は皮膚の支持組織として、皮膚
の恒常性維持のために重要な役割を果たしている．真皮
の主な構成細胞は線維芽細胞であり、コラーゲン等の蛋
白質やヒアルロン酸などのグリコサミノグリカンを産生
し、これらの結合組織成分の中で構築構造を形成してい
る．加齢に伴う皮膚の形態的変化としては、まず、皮膚
組織の厚さの減少及び萎縮が知られている（Ｍａｒｋｓ
．Ｒ．　．　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｐｈ
ｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅＳｋｉｎ．　Ｏｘｆｏ
ｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ．　１９８３
　Ｌまた、皮膚のねじれ伸張性は減少し、弾性回復力が
低下し、更にクルミが増し、やがて老人の皮膚にみられ
る最も特徴的変化であるところの皺（しわ）を形成する
に至る。

一方、真皮の加齢に伴なって生じる最も大きな生化学変
化は、細胞外マトリックスの主成分であるコラーゲンに
認められる．即ち、皮膚コラーゲン量は２０歳から８０
歳までの間に６５％減少し、真皮の厚さは薄くなる（　
Ｓｈｕｓｔｅｒ．Ｓ．　＊　ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｏ１ｏｇｙ．９３，６３９．
１９７５　）．また、コラーゲンの代謝回転率も加齢に
より低下し生体内に長時間存在するため、コラーゲンＳ
維中に無秩序な分子間架橋や糖化等が進行し、非可溶性
コラーゲンが増加し（　Ｌａｇｒａｎｄ．Ｙ．．　Ｐａ
ｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙ．　１７．　９９
１．　１９６９　）、細胞外マトリックスノ硬化の原因
となる． これらの研究の結果より、真皮１！雑芽細胞のコラーゲ
ン合成を特異的に冗進することができれば、真皮のコラ
ーゲン含有量が増加し真皮の厚さを増し、それに伴って
代謝回転も活性化され、可溶性コラーゲンが増加するこ
とにより細胞外マトリックスの柔軟性、伸展性を改善し
、その結果皺に代表される老化皮膚の形態的変化を抑制
できる可能性がある． 本発明は真皮の線雑芽細胞のコラーゲン合成を〔問題を
解決するための手段〕 本発明者らは、まず細胞レベルで、検体の評価を行なう
ため培養線維芽細胞を用いたコラーゲン合成能試馳法を
確立した． 即ち、本試験法は、培養面全体に単層を形成する直前の
状態（　ｓｕｂｃｏｎｆｌｕｅｎｔ　）まで培養したヒ
ト線維芽細胞に、検体と同時に放射性同位元素で標識し
たプロリン（（’Ｈ）一プロリン）を添加して更に培養
を続け細胞内に取り込ませた後、その培養土清と細胞画
分とから、一方で◆ま総蛋白質量として（　’Ｈ　）一
プロリン量を、もう一方ではコラーゲナーゼ処理して得
られたトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）可溶画分の〔１Ｈ〕−
プロリン量を測定し、合成コラーゲン量を定量するもの
である。

本発明者らは、動植物及び菌類より任意に選んだ種々の
物質について、そのコラーゲン合成冗進作用を上述の試
験法にてスクリーニングした結果、呻乳動物の乳清及び
その分画成分に高いコラーゲン合成冗進活性を認めるに
至った。

乳清は乳汁からカゼインと脂肪を除去した後に残る画分
て、牛乳からはチーズやカゼイン製造時の副産物として
得られる．また古代ギリシャではヒボクラテスにより自
然薬の一つとして、体の洗浄、利尿、解毒、機能増進、
体力向復、便秘の治療などに万能薬的食品として乳清が
利用されていた．現在でも乳清は飲料等に利用され、特
に栄養生理学、予防医学的にその意義が認められている
．また、乳清まり得られる蛋白質（ホエーたんぱく濃縮
物．ｗｐｃ）は、そのゲル形成性、保水性などの優れた
機能特性からハム、ソーセージ等加工食品向けに需要が
ある． しかしながら、これまで噛乳動物の乳清及びその分画成
分のコラーゲン合成冗進作用、またはその皮膚化粧料へ
の配合における有用性に関する研究は全くなされておら
ず、本発明者らにより初めて明らかにされたものである
． 即ち、哺乳動物の乳清のコラーゲン合成冗進作用は、分
娩後５日以内の初乳清に特に高く認めら動物の乳清及び
その分画成分を配合した皮膚化粧料を調製し皮膚に塗布
したところ、皮膚機能を冗進し、肌の皺を防止し、きめ
細やかな、かつしっとりした皮膚にすることを発見し、
また、その高い安全性を確認したため、本発明を完成す
るに至った．なお、本発明のコラーゲン合成充進作用を
有する噛乳動物の乳清及びその分画成分を配合した皮膚
化粧料は、真皮の線維芽細胞のコラーゲン合成を特異的
に冗進することにより、その効果をあらわすものと考え
られた． また、本発明の皮膚化粧料は組織損傷時、創床部に遊走
したａｍ芽細胞により形成される肉芽組織に作用し、そ
のコラーゲン合成を先進し真皮の再構成を促すことによ
り創傷治癒効果を有することも期待される． 即ち、本発明は、コラーゲン合成冗進作用を有する哺乳
動物の乳清及びその分画成分を含有することを特徴とす
る新規な皮膚化粧料を提供するものである． 以下、本発明につき詳述する． 本発明に至る過程で用いた先述のコラーゲン合成能試験
法は本発明のコラーゲン合成冗進作用を制限するもので
はなく、細胞レベルでコラーゲン合成能を検出し得る他
の試験法、例えば、放射性同位元素で標識したヒドロキ
シブロリンを用いる方法、コラーゲンの抗体を用いる免
疫学的方法、コラーゲンのｍＲＮＡを核酸プロープとハ
イプリダイズさせ検出する方法等をｉｎ　ｖｉｔｒｏ，
　ｉｎ　ｖｉｖｏ，　ｉｎ　ａｉｔｕで利用することが
できる．本発明に使用する乳清は、まず、ヒト、ウシ、
ヤギ、ヒツジ、ブタ等の哺乳動物から採取された新鮮な
乳汁、或いはその乳汁を予め乾燥粉末化した後水に溶解
したものが用いられ、通常、遠心分離によって最上層の
脂肪分を除いて脱脂後、種々の方法でカゼイン画分を除
去し得られる．カゼイン画分の除去法は通常、大きく二
つの方法に分けられる．一つは乳酸、塩酸、硫酸等の酸
の添加に．Ｊ：’）ｐＨ４．４〜４．６程度の酸性でカ
ゼインを等電点沈殿させ、もう一つはキモシン等の酵素
の作用によりカゼインを凝固させ、いずれも不溶化した
カゼイン画分を濾過、遠心分離或いはデヵンテーション
等により除去する方法で行なわれ、得られるカゼイン画
分は、前者を酸カゼイン、後者をレンネットカゼインと
呼ぶ． なお、噛乳動物の分娩後５日以内に採取される初乳から
得られる初乳清中のコラーゲン合成冗進作用が、特に高
いことが明らかとなり、従来、初乳中にはグロプリン含
量が多いことが知られていることからも、生理学上、重
要な意味をもつものと考えられる． 更に本発明者らは、乳清中のコラーゲン合成冗進作用の
分画法につき研究した結果、乳清の酸・アルコール処理
により可溶画分に効率的に移行することを発見した．ま
た、得られた酸・アルコール可溶画分は清澄で安定な溶
液であり、皮膚化粧料想方上、その原料として有利な性
状であり、更に蛋白質等、アレルゲンとなりうる高分子
物質濃度が著しく低減されるため、安全性も向上する。

以下に酸・アルコール想理条件につき詳細に説明するが
、本質的に呻乳動物の乳清に存在するコラーゲン合成冗
進作用成分は、種々の方法、例えば、脱乳糖、脱塩、溶
剤分画、塩析、限外濾過、ゲル濾過、イオン交換法等に
よっても分画、精製或いは濃縮することができる． 本発明の乳清の酸・アルコール可溶画分の調製に当って
は、まず、上述にある如く調製された乳清、或いはその
乳清を予め乾燥粉末化された後水に溶解したものを用い
、酸及びアルコールを別々に加えるか、または酸・アル
コール混液として加え、最終ｐＨ１〜５、アルコール濃
度１０〜５０％（Ｖ／Ｖ）好ましくはｐＨ２．０〜４．
５、７　４　−ｚ−ル濃度３０〜４０％（Ｖ／Ｖ）に調
整する．ｐＨ１未満、またはアルコール濃度５０％（Ｖ
／ｖ）以上では、コラーゲン合成冗進作用の作用成分が
失活或いは不溶化を起こす。また、ｐＨ５以上またはア
ルコール濃度１０％（ｖ／Ｖ）以下、或い辻酸もしくは
アルコールのどちらか一方だけの処理では、不等の方法
により濃縮してもよく、また、凍結乾燥、噴霧乾燥或い
は平板乾燥等の方法により乾燥粉末化することも可催で
ある． 本発明の皮膚化粧料は、化粧水、クリーム、乳液、パッ
クなど外用可能な任意の剤形であってよく、コラーゲン
合成冗進作用を有する呻乳動物の乳清及びその分画成分
の配合量も、症状の程度、剤形などによって適宜変更で
きる．また、その基エタノール、インプロパノール、ｎ
−ブタノール等任意のものが用いられるが、好ましくは
エタノールが用いられる．また、使用する酸も塩酸、酢
酸、乳酸、硫酸、クエン酸、リン酸等特に限定するもの
ではない．酸・アルコール処理の結果、生じる不溶物は
濾過、遠心分離或いはデカンテーション等により除去し
、．コラーゲン合成冗進作用成分を豊富に含有する可溶
画分が得られる．更に、酸・アルコール可溶画分は必要
に応じてｐＨを中性に調整し、減圧濃縮、限外濾過或い
は凍結濃縮とができる． 〔作用〕 かくして得られる本発明の皮膚化粧料の有効性及び安全
性について試験した結果は、次のとおりである． 隻鷺適１　培養ｗ＆維芽細胞のコラーゲン合成能試験 継代維持してきたＷ４−３８細胞（ヒト胎児肺正常２倍
体細胞，ＰＤＬ４０）を、試験前日に新しいＭＥＭ培地
（１０％牛胎児血清含有）に培地交換し２４時間培養（
　ｐｒｅｃｕｌｔｕｒａ　）後、培養上清に試料を添加
、〔ａＨ〕−ブロリンを終濃度２μＣｉとなる様添加し
、６時間、５％Ｃｏ，＋９５％Ａｉｒ．３７℃で培養し
た．なお、試料無添加区を対照とした．その後培養上清
を取り除き、細胞画分にフラ〜ゲナーゼタイブＮ　（　
Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ社製）　５　ｕｎｉｔｓ／ｍｌ
を３７℃，１８時間作用させ、トウントしコラーゲン量
とした． なお、非コラーゲン蛋白質量は、フラーゲナーゼ無処理
の総〔１Ｈ〕−プロリン量からコラーゲン量を差し引い
た値として表わした． その結果を第１表に示す． 試料の調製法と培地への試料添加量を下記する。

試料Ａ　：１ラーゲン合成冗進作用を有するウシ乳清 ウシの脱脂粉乳（常乳）５７０ｇを脱イオン水４．５１
と混合し、ＩＭ酢＠７００ｍｊ！を加えｐＨ４．４に調
整し、２時間攪拌、５℃で一夜放置した後、遠心分離（
　７００ｇｘ３０ｍｉｎ　）　Ｌ，、その上清をセライ
ト濾過し清澄な乳清を得た。

試料Ｂ　コラーゲン合成充進作用を有するウシ初乳清 ウシの分娩後２〜３日経過時に採取された初乳１０Ｎを
遠心分ｌｌ（　１５０００ｇＸ３０ｍｉｎ　）ｔ，、最
上層の脂肪分を除去した後、３０℃に加温、適量のキモ
シンを加え２時間攪拌後、遠心分ＸＩ　（　７２０ｇｘ
３０ｍｉｎ）シ、その上清をメンプランフィルターにて
濾過し清澄な初乳清を得た。

試料Ｃ　コラーゲン合成充進作用を有するウシ乳清の分
画或分 試料Ａで得られたウシ乳清５ｌを減圧下、１０倍濃縮し
、４℃まで冷却した時析出する乳糖を除いた後、水を加
え５ｌまで戻した．これにエタノール２．８２と濃塩酸
６０ｍ２との混合液を加え、ホモミキサーで２時間混和
した．その後遠心分離（　７００ｇｘ３０ｍｉｎ　）Ｌ
，、その上清６ｌにＩＮ＋，酸化ナトリウム０．２１を
加えｐＨ７．０とし、減圧下、２２まで濃縮し濾過して
清澄な乳清分画成分を得た． 試料Ｄ　コラーゲン合成光進作用を有するウシ初乳清の
分画成分 試料Ｂで得られたウシ初乳清５Ｑにメタノール３２を混
和し、酢酸でｐＨ３．０とし、更にホモミキサーで２時
間混合した．その後デカンテーションにて上清を分取し
、分画分子量１万の限外濾過膜で２倍濃縮し、セライト
濾過により清澄な初乳清分画成分を得た． 試料Ｅ　コラーゲン合成冗進作用を有するヤギ乳清の分
画成分 ヤギより採取された乳汁１０２を遠心分ＩＩ（　１５０
００ｇｘ３０ｍｉｎ　）　ｔ，、最上層の脂肪分を除去
した後、乳酸を加えｐＨ４　．５に調整し、２時間攪拌
、５℃で一夜放置した後、遠心分離（　７００ｇｘ３０
ｍｉｎ　）　Ｌ，、その上清をセライト濾過し清澄な乳
清を得た．この乳清６１にｎ−プタノール３．４２と酢
酸７０ｍｌの混液を加え、その後遠心分離（　７００ｇ
Ｘ３０ｓｉｎ）Ｌ、その上清４２にＩＮ水酸化ナトリウ
ムを加えｐＨ６．５とし、減圧下３１まで濃縮し濾過し
て清澄な乳清分画成分を得た。

試料Ｆ　コラーゲン合成冗進作用を有するヒッジ乳清 ヒツジより採取された乳汁１０２を遠心分離（１５００
０ｇＸ３０ｍｉｎ　）　Ｉ，、最上層の脂肪分を除去し
た後ＩＭ塩酸１．１２を加えｐＨ４　．５に調整し、２
時間攪拌、５℃で一夜放置した後、遠心分離（７００ｇ
Ｘ３０ｍｉｎ　）　シ、その上清をセライト濾過し清澄
な乳清を得た． 添加量（Ｖ／Ｖ培地Ｘ） 試料Ａ：　　　　　　５％ 試料Ｂ：　　　　　５％ 試料Ｃ：　　　　　２％ 試料Ｄ＝　　　　　２％ 試料Ｅ：　　　　　　２％ 試料Ｆ：　　　　　５％ 簸１遺 第１表より明らかな様に嘘乳動物の乳清及びその分画或
分は、線維芽細胞のコラーゲン合成を有意に、また特異
的に冗進することが明らかとなった． 区致班１　バネルテスト 小皺の悩みを有する３１〜５２歳（平均年齢４０．１歳
）の女性５０名を対象にして、下記の本発明皮膚化粧料
及び対照皮膚化粧料を、１日２回（朝、夕）連続３ケ月
塗布、使用せしめた結果の官能評価を第２表に示す． 〈本発明皮膚化粧料及び対照皮膚化粧料〉試験例１の試
料Ａ （対照皮膚化粧料は精製水）　　　　　　２０２グリセ
リン　　　　　　　　　　　　　５ｘエタノール　　　
　　　　　　　　　　　　５ｚメチルパラベン　　　　
　　　　　　　　０．１ｘ精製水　　　　　　　　　　
　　　　　６９．９Ｘ皐：対照との間に信頼度９９％で
有意差あり（ｎ＝４）第２表より明らかな様に、本発明
の皮膚化粧料は高い有効性を示すことが明らかとなった
．莱１貞 較捩班１　パッチテスト 年齢２１〜６４歳までの男性１７名、女性１３名、計３
０名からなる被検者の上腕屈側部に、クローズドパッチ
テストを実施した．試料として実施例１のウシ乳清を用
いた． 判定の基準　−：全く無反応，±：軽微な紅斑，十；明
らかな紅斑，＋＋；紅斑及び腫張、丘疹その結果、全被
検者において、一（全←無反応）であり、刺激反応及び
アレルギー反応を惹起する可能性は非常に少なく、安全
性の高いことが明らかとなった． 〔実施例〕 以下に本発明の実施例を示すが、これらによって本発明
を制限するものではない． 裏集負ユ 〈化粧水〉 グリセリン　　　　　　　　　　　　　　５ｘプロビレ
ングリコール　　　　　　　　　　４ｚ才レイルアルコ
ール　　　　　　　　　　０．１ｘボリオキシエチレン
ソルビタンモノラウリ１．５Ｘン酸エステル ボリ才キシエチレンラウリルエーテル　　０．５ｘエタ
ノール　　　　　　　　　　　　　　　１０ｘ試験例１
の試料Ａ　　　　　　　　　　　　２０％香料，染料，
防腐剤，紫外線吸収剤　　　　適量精製水　　　　　　
　　　　　　　　　　５８．９２犬蓋輿１ 〈クリーム〉 ステアリン酸 ステアリルアルコール 還元ラノリン スクワラン 才クチルドデカノール ポリ才キシエチレンセチルエーテル 親油型モノステアリン酸グリセリン プロピレングリコール 試験例１の試料Ｂ 香料，防腐剤，酸化防止剤 精製水 夫隻班１ く乳液〉 ステアリン酸 セタノール ワセリン ラノリンアルコール 流動パラフィン ボリ才キシエチレンモノ才レイ グリセリン ０．２ｘ １．５ｘ ３ｘ ２Ｘ １０Ｘ ン酸エステル２ｘ ３ｘ プロピレングリコール　　　　　　　　　　５ｘトリエ
タノールアミン　　　　　　　　　　　１ｘ試験例１の
試料Ｃ　　　　　　　　　　　　１５％香料，防腐剤，
＃化防止剤　　　　　　　　適量精製水　　　　　　　
　　　　　　　　　５７．３Ｘ夾凰斑１ くパック〉 ポリビニルアルコール　　　　　　　　　１５Ｘ力ルボ
キシメチルセルロースナトリウム　　５ｘブロピレング
リコール　　　　　　　　　　３ｘエタノール　　　　
　　　　　　　　　　　１０％試験例１の試料Ｅ　　　
　　　　　　　　　　５Ｘ香料，防腐剤，酸化剤　　　
　　　　　　適量精製水　　　　　　　　　　　　　　
　　６２％〔発明の効果〕 以上詳述した如く、本発明のコラーゲン合成充進作用を
有する咄乳動物の乳清及びその分画成分を含有すること
を特徴とする皮膚化粧料は、皮膚機能を冗進し、肌の皺
を防止し、きめ細やかな、かつしっとりした皮膚にする
老化制御機能を有しまた安全性も高いため、 臨床上の応用が十分に 期待される． したがって、 本発明の産業上の意義 は非常に大きい．

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）コラーゲン合成亢進作用を有する哺乳動物の乳清
   及びその分画成分を含有することを特徴とする皮膚化粧
   料
2. （２）哺乳動物がヒト、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタであ
   る特許請求の範囲第１項の皮膚化粧料
3. （３）乳清が分娩後５日以内の初乳清である特許請求の
   範囲第１項の皮膚化粧料
4. （４）分画成分が酸・アルコール可溶画分である特許請
   求の範囲第１項の皮膚化粧料
5. （５）酸・アルコール可溶画分がｐＨ１〜５、アルコー
   ル濃度１０〜５０％（Ｖ／Ｖ）で処理し、不溶物を除去
   して得られる特許請求の範囲第４項の皮膚化粧料