JPH03209397A - グライドバクチンｐｆ−１ペプチド抗腫瘍抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 （１）発明の分野 本発明は新規ペプチド抗生物質およびその抗腫瘍剤とし
ての使用に関する。本発明はまた前記抗生物質を製造す
る方法に関する。

（２）従来技術の説明 ２つの米国特許、Ｕ　Ｓ　Ｐ　４．６９２．５１０号（
小西はか）（１９８７年９月８日発行）、およびＵＳＰ
４、７７７、１６０号（岡はか）（１９８８年１０月１
１日発行）は、ポリアンギウム・ブラキスボルム（Ｐｏ
ｌｙａｎｇｖｍ　ｂｒａｃｈｙｓｐｏｒｕｍ）　Ｓｐ、
　ｎｏｖ、株に４８１−Ｂ１０１　　（ＡＴＣＣ５３０
８０）の発酵により生成される式Ｉ； ■ ＣＨ，Ｒ Ｒ’　　　　　Ｒ２グライドハクチ ＨＣＬ　　（ＣＨ２）６−　　　　　　　　　　　　　
　Ａ（ＢＬ−２８ｂ７Ｔ　　Ａ）ＨＣＨ，−（ＣＨ，）
、−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）２−　　　８（８１−２８
６７Ｔ　　Ｂ）ＨＣＨ３−（ＣＨ２＞ｌｌ−Ｃ（ＢＩＪ
−２８６，’Ｔ　　Ｃ）ＨＣＨ３−（ＣＨ２）４−　　
　　　　　　　　　　　　　　８ｌ−２８６７Ｔ　　Ｆ
ＯＨＣＨｓ−（ＣＨｚ＞６−　　　　　　　　　ＢＬＩ
−２’８６７７　Ｇのペプチド抗生物質を開示している
。上記ペプチド抗生物質は抗真菌および抗腫瘍両活性を
有すると報告された。一般に、一連の同族体がグライド
バクチン（Ｇｌｉｄｏｂａｃｔｉｎ）　　として示され
る。

他の関連技術に米国特許第４．７８９．７３１号〈岡は
か）（１９８８年１２月６日発行）および米国特許第４
．７４２．０４７号（岡はか）（１９８８年５月３日発
行）が包含され、それにはまた抗腫瘍性を有する半合成
グライドバクチンが開示されている。

本発明の他の関連技術は沼田はか、ザ・ジャーナル・オ
ブ・アンチバイオティックス（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）　　、４１．１０．　
ｐｐ１３５８〜１３６５（１９８８）および米国特許第
４．８３３．０７６号（小西はか）（１９８９年５月２
３日発行）中に開示ン され、著者は一定の脂質または油脂の添加ｊ＝よるグラ
イドバクチンＡＳＢまたはＣの生産性増大を報告してＬ
）る。さるに、パルミトレイン酸エステノペリノール酸
エステル、またはオレイン酸エステルを生産培地にそれ
ぞれ添加するによりグライドバクチンＡ、Ｂまた：″Ｉ
Ｃの生成促進がまたそれぞれ観察された。

発明の概要 本発明は式■、 の新規ポリペプチド抗生物質、グライドバクチンＰＦ−
１、に関する。

本発明の他の観点は式■の化合物の製造法；二関する。

そのような方法はポリアンギウム・ブラキスポルム（Ｐ
ｏｌｙａｎｇｉｕｍ　ｂｒａｃｈｙｓｐｏｒｕｍ）　Ｓ
ｐ、　ｎｏｖ。

を適当な脂肪酸エステル例えばリノレン酸エステル、並
びに炭素および窒素の他の資化性源を含む普通培地中で
好気性条件下に培養し、普通培地から該化合物を回収す
ることを含む。

生物学的モデル系における試験は本発明の化合物が抗腫
瘍活性を有することを示した。従って、本発明の他の観
点は抗腫瘍剤として有効な量の式Ｈの化合物並びに薬学
的に許容できる担体を含む薬学的組成物に関する。

詳細な説明 グライドバクテンＰＦ−１は、ＡＴＣＣ５３０８０の特
性を有するポリアンギウム・ブラキスポルム（Ｐｏｌｙ
ａｎｇｉｕｍ　ｂｒａｃｈｙｓｐｏｒｕｍ）のグライド
バクチン産生株またはそのグライドバクチンＰＦ−１産
生突然変異体を普通液体培地中で液内好気性条件下に培
養することにより製造できる。生産菌は他の資化性炭素
源とともに適当な脂肪酸エステル例えばリノレン酸エス
テルを含む普通培地中で増殖される。好ましい炭素源の
例は炭水化物であり、それにはラクトース、グリセロー
ノ収スクロース、コーンスターチ、クルコース、マンノ
ースおよびフルクトースが包含される。デンプンが炭素
源として普通培地中に使用されるとき、生ずる乳濁を低
下させるために採取前にアミラーゼをブロス：こ添加し
てもよい。普通培地はまた資化性窒素源例えば魚粉、ペ
プトン、大豆粉、落花生釉、綿実粕およびコーンステイ
ープリカーを含むべきである。

栄養無機塩もまた培地中に混合することができ、そのよ
うな塩はナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシ
ウム、リン酸、硫酸、塩化物、臭化物、硝酸、炭酸など
のイオンを与えることができる普通の塩を含むことがで
きる。

グライドペクチンＰＦ−１抗生物質の生成は生産菌の良
好な増殖が行なわれる温度、すなわち約１５〜４２℃で
行なうことができ、便宜に；ま約２８℃の温度で行なわ
れる。通常、最適生成：ま２０β発酵容器中で約４０時
間の培養後に得られる。発酵は三角フラスコ中および種
々の容量の実験室または工業的発酵槽中で行なうことが
できる。

タンク発酵を行なうとき、斜面培養または土壌培保存あ
るい：よ凍結乾燥保存した生産菌株を液体培地：こ接種
することにより普通培地中に種母を生成させる二とが好
ましい。二の方法で種母を得た後、それを抗生物質の大
規模生産のための発酵タンク培地に無菌的に移す。種母
を生成させる培地；ま、それが微生物の良好な増殖を与
えるものであれば、新抗生物質の生産のため：こタンク
中に利用されるものと同じかまたは異なってもよい。

グライドバクチンＰＦ−１の製造に対して、本発明：ま
、ポリアンギウム・ブラキスボルム（Ｐｏｌｙａｎｇｌ
ｕｍ　ｂｒａｃｈｙｓｐｏｒｕ＋ｎ）　Ｋ　４８１−　
Ｂ　１０１（ＡＴＣＣ５３０８０）の株に関して詳しく
記載されているが、培養特性が前記波々の５つの特許に
十分開示された微生物に限定されないことを理解すべき
である。本発明はまた他のグライドバクチンＰＦ−１産
生株または当業者によく知られた方法により、例えば寄
託微生物をＸ線または紫外線、ナイトロジェンマスター
ド、ファージなどにさらすことにより、生成できる寄託
微生物の突然変異体を包含するものである。

発酵が終ると、抗生物質を培養ブロスかろ適当な有機溶
媒またはそれらの混合物例えばｎ−ブタノールとメタノ
ールとの混合物で抽出する。有機抽出物を濃縮し、濃縮
抽出物を適当なアンチソルベント例えばヘキサンで希釈
することにより固体抗生物質複合体を沈殿させる。

他の抗生物質例えばグライドバクチンＡ、ＢおよびＣか
らの抗生物質の分離およびその精製は、次の特定態様の
説明中に示されるように、普通のクロマトグラフ操作に
より行なうことができる。

特定態様の説明 に４８１−Ｂ１０１の形態学、培養、生理学および分類
学的性状は前記５米国特許中に記載されている。

薬品 オレイン酸、リノール酸およびリノレン酸のそれぞれメ
チルエステルは東京化成■（Ｔｏｋｙｏ　Ｃｈｅｍ。

［ｎｄ、　Ｃｏ、　Ｌｔｄ、）から購入した。パルミト
レイン酸メチル、γ−リノレン酸メチル、１１，１４．
１７−エイコサトリエン酸メチルおよびアラキドン酸メ
チルはングマ畢ケミカル（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍ、　Ｃ
ｏ。

Ｌｔｄ、　）かみ購入した。

抗生物質製造 （１）培地および培養 保存菌株を、溶性デンプン０．５％、グルコース０．５
％、肉エキス０．１％、酵母エキス０．１％、〜Ｚｃａ
ｓｅｏ、２％、ＮａＣ１２０，１％、ＣａＣＯ５０，１
％および寒天１．６％からなる修正ベンネッ）　（ｔ３
ｅｎｎｅｕ）の寒天培地（ｐｔ（７，０）の斜面上に維
持した。よく増殖した寒天斜面を用い、前記寒天培地と
同じ成分を含む液体栄養培地に接種したｃ　２８℃で４
８時間回転振とう機（２０Ｏｒｐｍ）上で培養した後、
増殖した菌液の一定の量を、基礎生産培地ＦＲ−１０−
１を１００ｍ１含む５００ｍ１三角フラスコ中へ移した
。該培地は可溶性デンプン２％、ビート糖みつ１％、大
豆粕１％およびＣａＣ０，０，５％からなる（ｐＨ７，
２、オートクレーブ処理前〉。

（２）グライドバクチン生産量の測定 各成分の生産性はＨＰＬＣにより測定した。採取ブロス
（２ｒｎ１）にｎ−ブタノール３−を加えて１５分ＶＪ
Ｊ　Ｌ　＜かくはんし、１０分開５．ＱＱＱｒｐｍて遠
心分離した。上澄みの溶媒層を、Ｎ　Ｏｖ　Ａ−Ｐ　、
Ａ、　Ｋラジアルバク　（Ｒａｄｔａｌｐａｋ）カート
リッジを有するウォーターズ（（鴫（ａｔｅｒｓ）　　
Ｑ　Ａ　−１アナライザーで分析した。メタノール水溶
液く７０％）を移動相として流量１．０ｍｇ／分て使用
し、各成分の溶離を２５４ｎｍで検出した。グライドバ
クチンＰＦ−１、Ａ、、ＢおよびＣに対する保持時間：
まそれぞれ９．９．１０．８．１４．９および２５．６
分てあ（３）グライドハクチン生成ｊ二対する不飽和脂
肪酸の影響 種々の不飽和脂肪酸による発酵を、各生産培地１０ｒｎ
ｌを入れた５０ｍ１三角フラスコを用いて行なった。増
殖形培養株の２％を接種し８時間振とうした後、脂肪酸
１００μβをそれらのフラスコに加えた。培養を回転振
きう機上で７日間続けた。

グライドバクチンの全生成が５〜７日後に最大に達した
。パルミトレイン酸メチルエステル（Ｃ１６：１）、リ
ノール酸メチルエステル（Ｃ１８：２）およこ丈オレイ
ン酸メチルエステル（Ｃ１８：１）の添加がそれぞれ天
然に存在するクライトバクチン、へ、ＢおよびＣの生産
性増大を、新人王成分の形成なく生じた。一方すルン酸
メチルエステル（Ｃ１８：３）を生産培地に添加したと
き、ＨＰＬＣ分析により新規抗生物質、クライトバクチ
ンＰＦ−１、の存在がＶｌｉａ、Ｒされた。

７　　ＩＪルン酸エステルの添加はグライドハクチンＢ
の生産増大を生じた。発酵ブロスに対するエイコサトリ
エン酸メチルエステル（Ｃ２０：３）またはアラキドン
酸メチルエステル（Ｃ２０：４）の１％の添加が生産菌
の増殖およびグライドバクチン形成を阻止したけれども
、より低濃度のエイコサトリエン酸エステルまたはアラ
キドン酸エステルの添加はそれぞれグライドバクチンＰ
Ｆ−１を生成させ、またはグライドバクチンＢの生成を
増加した。

第１図は次の脂肪酸のメチルエステルの添加による第７
日の種々のグライドバクチン生成の量（μｇ／ｍｆ’）
を示す： （ｉ）１．１］％パルミトレイン酸エステル（ｉｉ）１
．０％オレイン酸エステル （ｉｉｉ）ｉ、０％９／−ルｐｘスｆル（ｉｖ）１．０
％Ｔ−リノレン酸エステル（ｖ）０．５％アラキドン酸
エステル （ｖｉ）１．０％リノレン酸エステル （ｖｉｉ）０．５％エイコサトリエン酸エステル（ｗｉ
ｎ）添加なし リノレン酸エステルの添加によりグライドバクチンＰＦ
−１が生成する我々の発見：よ我々をグライドバクチン
生成に対するリノレン酸ニスチル濃度の影響の試験に導
いた。表１に示すように、グライドハクチンＰＦ−１の
最適生成はリノレン酸エステルの濃度が１％であったと
きに観察された。

（４）グライドバクチンＰＦ−１の分離および精製培養
ブロス（９Ｌ）をｎ−ブタノール（９Ｌ）とメタノール
（２，２Ｌ）との混合物で抽出した。

水（２Ｌ）で洗浄した後、有機抽出液を濃縮しｎ−ブタ
ノール溶液２００薇とした。生じた溶液をｎ−ヘキサン
（ＩＬ）にかくはんして加えると粗活性固体（８，２ｇ
＞が沈殿した。固体を７０％メタノール水、容液（１０
０ｍｆ）中に溶解し、逆相ンリカゲル力ラム（１，２Ｌ
）上に装填した。溶離：ま順次６０％＜３．２Ｌ）　、
７０％（３，８Ｌ）および８０％メタノール水溶液（１
，９Ｌ）で行なった。

流出液を画分て捕集し、カンジダ・アルビカンス（口ａ
ｎｄｉｄａ　Ａｌｂｉｃａｎｓ）　Ａ９５４０に対する
濾紙円板検定およびＨＰＬＣニカラム：５ＳＣ−ＯＤＳ
２６２、センシュ科学（Ｓｅｎｓｈｕ　５ｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｃ　Ｃｏ、）；移動相、ＣＨ３０Ｈ：［２０＝　４
　：　ｌ　；検出、ＵＶ２５４ｎｍ；グライドバクチン
ＰＦ−１、ＡＳＢおよびＣの保持時間それぞれ４．９．
５．２．６．６および１０．２分〕によりモニターした
。グライドバクチンＰＦ−１を含む第１生物活性画分を
合わせて濃縮させる淡黄色固体１．９７　ｇが得られた
。以後の活性画分を処理するとグライドバクチン、へ（
９７０■）、Ｂ（９９ｍｇ）およびＣ（１７４ｍｇ）が
得られた。グライドバクチンＰＦ−１の粗面体（１，９
ｇ）を同様の逆相シリカゲルカラム（１，２ｆ）上で再
びクロマトグラフィーにかけ６０％（２，２ｆ）次に７
１ツ％メタノール水溶液（３，２１＞で溶離した。溶出
液を生物検定およびＨＰＬＣによりモニターした。活性
な画分を合わせて濃縮した（１．２２ｇ）。得ちれた精
製粉末（１００ｍｇ）をさらに調製用ＨＰＬＣ：カラム
Ｓ　５Ｃ−ＯＤＳ　８４２、φ３、ＯＸ２．５ＣＩ１１
．センンユ科学（Ｓｅｎｓｈｕ　Ｓｃ＋ｅｎｔｉｆ＋ｃ
Ｃｏ、）；８５％メタノール水溶液で溶出、流量７証／
分；３００ｎｍにおけるＵＶ吸収による検出；グライド
バクチンＰＦ−１の保持時間３０分〕・により精製した
。関連画分を集め、蒸発させ、凍結乾燥するとグライド
ハクチンＰＦ−１（５６ｍｇ）の純白固体が得ちれた。

残りの固体に対して前記調製用ＨＰＬＣ精製を繰返すと
、さらにグライドバクチンＰＦ−１合計５９５ｍｇが得
られた。

（５）物理化学的性質および構造解明 グライドバクチンＰＦ−１は白色無定形粉末として単離
された。それはメタノーノペエタノール、ｎ−ブタノー
ルおよびジメチルスルホキシド中に可溶性であるが、ｎ
−ヘキサンおよび水中に不溶であった。該抗生物質はり
トン−スミス（Ｒｙｄｏｎ−５ｍｉｔｈ）試薬、ヨウ素
および硫酸でＴＬＣプレート上：こ陽性呈色反応を与え
た。それはニンヒドリン、坂口、アントロンおよびドラ
ーゲンドルフ（Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆ　ｆ）反応に対し
て陰性であった。グライドハクチンＰＦ−１の二次イオ
ン質量分析測定（Ｓｒ−ＭＳ）はｍ／　ｚ　５４５　　
（Ｍ＋Ｈ）−に最高イオンビークを与えた。この結果は
微量分析および１３Ｃ−ＮＭＲと合わせて、グライドバ
クチンＰＦ−１！こ対してＣ２９Ｈ４４Ｎ６　（Ｍ”ｖ
Ｖ　Ｄ　４４　）の分子式を示した。

グライドバクチンＰＦ−１の物理化学的性質は表２中に
総括される。そのメタノール中のＵＶスペクトルは２６
１ｎｎ＋に強い吸収極大を示した。■Ｒスペクトル（図
２）はアミドＣ１６３０ｃａｌ−’および１５３０　ｃ
ｒｒｒ’〕並びにＯＨおよび（または）ＮＨ（３３００
ｃｍ−’）の存在を示した。’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（
第３図）は３メチル（δ：　０．９２ｐｐｍ、　　ｔ；
１．Ｏ３ｐｐｍ、　　ｄ；および１．２．１　ｐｐｍ　
。

ｄ）、２個の水酸基プロトン（δ：　４．６５ｐｐｍ　
。

ｄ；および４．８６ｐｐｍ　、　　ｄ）　、１０個のオ
レフィンプロトン（δ：　５．３５ｐｐｍ、　ｍ、　　
４　Ｈ；　６．２ｐｐｍ。

ｍ、５Ｈ；および６．９８ｐｐｍ　、　　ｄｄ、　　Ｌ
Ｈ）　、および４個のアミドプロトン（δ：　７．３３
ｐｐｍ　、　　ｔ；　７，５９ｐｐｍ　、　ｄ　；およ
び８−５７ｐｐｍ　、　ｄ）の存在を示した。４個のカ
ルボニルおよび１０個のオレフィン炭素シグナルを含む
２５以上の炭素ングナルがグライドバクチンＰＦ−１の
１３　Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル（図４）中にＳ忍めろ
れた。これろのデータはグライドバクチンＰＦ−１が不
飽和の程度を除いて構造的にグライドバクチンＢおよび
Ｃに類似することを示唆した。従って、我々はグライド
バクチンＰＦ−１の脂肪酸側鎖中に４つの二重結合があ
ることを決定した。２つの二重結合はカルボニル基に共
役し、他の２つは孤立している。

グライドバクチンＰＦ−１の構造を、さらに分解実験お
よびスペクトル分析によりグライドバクチンＡＳＢおよ
びＣのそれらと比較して決定した。

封管中６Ｎ−ＨＣβで１１０℃で１５時間グライドバク
チンＰＦ−１を酸加水分解すると、天然に存在するグラ
イドバクチンから得られたものと同じアミノ酸コンプレ
ックス、すなわちトレオニン、４−アミノ−３−ヒドロ
キシ−ｎ−吉草酸、４アミノ−（２Ｅ）−ペンテン酸お
よびエリトロ−４−ヒドロキシリシン、を与えた。従っ
て、該分解実験：まこれるの抗生物質間の差異が脂肪酸
部分のみにあると思われることを支持する。

グライドハクチンＰＦ−１のＳＩ−ＭＳスペクトルはｍ
／　Ｚ　５４５　（Ｍ＝Ｈ）−にプロトン付加分子イオ
ンビーク、並びにｍ／ｚ３０４（テトラデカテトラエノ
イルトレオニン）およびｍ／ｚ２４２（環状アミン）に
フラグメントイオンビークを示し、テトラデカテトラエ
ノイル側鎖構造の存在を支持した。ＵＶおよび’ＨＮＭ
Ｒスペクトルは酸側鎖中に２つの他の孤立二重結合と共
役（２Ｅ。

４Ｅ）−ジエン酸構造を示した。グライドバクチンＰ　
Ｆ　−１（ＤＩ３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはグライドバク
チンＢのそれとは、グライドバクチンＢの２つのメチレ
ン炭素（δ：２８．３および３０．５　）の代りにグラ
イドバクチンＰＦ−１はさらに２つのｓ　ｐ　２炭素（
δ：１２６．９〜１３１．４）を含むことを除−）で、
非常に類似した。

シスまたはトランス二重結合の導入；こよる＋３（Ｎ〜
ＩＲシグナルシフトはよく研究されて−）るグライド　
（１〜ｒｉｇｈｔ、　Ｊ、Ｌ、Ｃ，）　　　ファイトケ
ミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ＋５ｔｒｙ）　　、１
９．　ｐｐ、１４３〜ｌ　４４（１９８０）およびロン
ジ（Ｒｏｓｓｉ）ほか、テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈ
ｅｄｒｏｎ）、３８．ｐｐ、６３９〜６４４　　（１９
８２）Ｅ。我々は前にグライドバクチンＢの脂肪酸（Ｃ
６〜Ｃ１４）部分の炭素ＮＭＲシグナルをグライドバク
チン、へ中のそれとの比較を基にしてＣＬ　　（δ：　
１３．４）　　ＣＨ２（２１，５）−ＣＨ２（３０，５
）　−Ｃ）＋２（２８，３）　−ＣＨ２（２５，６また
は２６．３＞　−ＣＨ＝ＣＨ（ｚ、　　１２３．３およ
び１２８．８）−ＣＨ２（２６，３または２５．６）　
−ＣＨ２（３２，０）　−とじて帰属した。さらに、本
発明のグライドバクチンＰＦ−１の脂肪酸残基中の他の
孤立二重結合が今回Ｃ１１−Ｃ１２にあり、「ｚ」立体
化学を有することが確認される。総括的に、グライドバ
クチンＰＦ−１の脂肪酸残基が（２Ｅ、４Ｅ。

８２．１１２）−テトラデカテトラエン酸であり、’　
Ｃ−Ｎ　Ｍ　ＲシグナルはＣＨ３（δ：　１４．０）　
−ＣＨ２（１９，９＞　　−口Ｈ＝ＣＨ（ｚ、　　　１
　２６．９〜１３１．４）−ＣＨ２（２５，１）−ＣＨ
＝ＣＨ（Ｚ、　１２６．９〜１３１．４）ＣＨ２（２７
，０）　−ＣＨ２（３２，０）−として帰属した。

生物学的活性 （１）抗菌活性 グライドバクチンＰＦ−１の最小阻止濃度（ＭＩＣ）を
系列寒天希釈法により種々の微生物に対して測定した。

普通寒天〔栄研（Ｅｉｋｅｎ）を細菌に対し、またサブ
ロー　（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ）デキストロース寒天：デ
イフコ（Ｄｉｆｃｏ）〕を真菌に対して用いた。

接種量は細菌に対して１０　’　ＣＦＵ＃ｎｔ’、真菌
に対して１０５〜１０　’　ＣＦＵ／ｒｎｌに調製した
。グライドバクチンＰＦ−１の試験管内抗菌および抗真
菌活性は表３中にグライドバクチンＣで認められた活性
とともに示される。他のグライドバクチンと同様に、グ
ライドバクチンＰＦ−１は１００μｇ／ｍｉで試験した
細菌を阻止しなかったが、しかし、それは真菌に対して
並の活性を示した。グライドバクチンＰＦ−１固有の真
菌活性はグライドバクチンＣのそれよりかなり弱かった
。

（２）抗腫瘍活性 グライドバクチンＰＦ−１およびグライドバクチンＡを
マウス腫瘍細胞系に対する試験管内細胞毒性について、
およびマウス中の生体内抗暉瘍活性について試験した。

マイトマイシンＣを試験管内および生体内実験の両方に
おいて参照化合物として用いた。Ｂ１６−ＦＩＯ（マウ
ス黒色腫）細胞はラン胎児血清（ＦＣ５，１０％）およ
びカナマイシン（６０μｇ　／　ｒｒｄ！　）を補足し
た濃縮イーグル（Ｅａｇｌｅ）最少必須培地中で対数期
に増殖させた。

Ｐ２Ｓ５　（マウスリンパ性白血病）細胞はＦＣ３（１
０％）、ペニシリン（１００Ｕ／ｒｎｌりおよびストレ
プトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補足したＲＰＭ１
１６４０培地中であった。Ｂ１６−ＦＩＯおよびＰ３８
８細胞を採取し、９６ウエル（Ｂ１６−ＦＩＯ細胞に対
し）および２４ウエル（Ｐ　３８８細胞に対し）組織培
養プレートのウェル中へ試験物質とともにそれぞれ３Ｘ
１０’および２Ｘ１０’細胞／ｒｎ１の接種量で移植し
た。それらを加湿下５％ＣＯ□および９５％空気中、３
？ｔで１テ２時間培養した。Ｂ１６−ＦＩＯ細抱に対す
る細胞毒性は、生存細胞を０．００６％ニュートラルレ
ッド溶液により染色した後５４０ｎｍにお（する比色分
析で測定した。Ｐ３８８細胞については生存細胞の数を
クールター（Ｃｏｕ　１ｔｅｒ）カウンターにより測定
した。表４中に示されるよう；こ、グライドバクチンＡ
およびＰＦ−１はともにＢ１６−ＦｌｏおよびＰ３８８
細胞に対して強力な細胞毒性を示した。

グライドバクチンＡおよびＰＦ−１の高分子生合成（Ｄ
ＮＡＳＲＮＡおよびタンパク質）に対する阻止効果を培
養Ｌ１２１０マウス白血病細胞中で測定した。細胞（５
Ｘ　１０’細抱／　ｒｎｌ）を試験化合物とともに３７
℃で１５分間インキニベートし、さらに培養混合物に標
識前駆物質、３Ｈ−チミジン、１４Ｃ−ウリジンまたは
３Ｈ−ロイシンを添加した後４時間培養した。冷５％ト
リクロロ酢酸溶液で洗浄した後細胞の酸不溶画分中に取
込まれた放射能を液体シンチレーションカウンターｊこ
より測定した。表５中に示されるように、グライドバク
チン、へおよびＰＦ−１がとも：こタンパク質合成を阻
止した。グライドバクチンＰＦ−１の阻止活性：よグラ
イドバクチンＡのそれの約各であった。同化合吻は試験
した最高濃度の１００μｇ／−でＤ　Ｎ　、４．および
ＲＮＡ合成の両方に有意な阻止効果を示さなかった。

グライドバクチンＰＦ−１の生体内抗腫瘍活性を実験マ
ウス腫瘍系中で測定した。めすＣＤＦ。

およびＢＤＦ、マウスｊ二１０１ｉ　リンパ性白血病Ｐ
３８８細胞を含む希腹水液０．４−および１０％メラニ
ン性黒色種Ｂ１６ブライ０．５ｍｌをそれぞれ腹腔内に
接種した。試験化合物は腫瘍移植１日後から始めて９日
間毎日腹腔内に投与した。注目すべきことには、表６中
に示されるように、グライドバクチンＰＦ−１がＰ２Ｓ
５に対してグライドバクチンＡより約４倍も強力であっ
た。グライドバクチンＡおよびＰＦ−１は、それぞれ１
９０％および１７４％の最大Ｔ／Ｃ値でともにＰ３８８
白血病に対して比較的広い化学療法活性を示したが、し
かし、それら：ま試験した用量で腹腔内Ｂ１６黒色腫に
対して有意な抗腫瘍活性を示さなかった。

前記動物試験結果から、グライドバクチンＰＦ１が哺乳
動物腫瘍に対して有効な阻止作用を有することが明らか
である。従って、本発明は腫瘍をもつ宿主に化合物の有
効腫瘍阻止量を投与することを含む哺乳動物腫瘍を阻止
する方法を提供する。

本発明の薬学的に有効な化合物は、製剤学の常法により
、例えばヒトを含む哺乳動物に対する経口または非経口
投与のための薬学的調製物に処理することができる。普
通の賦形剤は、活性化合物と有害に作用しない非経口、
経小腸または局所適用に適する薬学的に許容できる有機
または無機担体物質である。適当な薬学的に許容できる
担体には塩水溶液、アルコール、アラビアゴム、植物油
、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、ア
ミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸
、ペトロラタム、香油、脂肪酸モノグリセリドおよびジ
グリセリド、ペンタエリトリトール脂肪酸エステノベヒ
ドロキシーメチルセルロース、ポリビニルピロリドンな
どが包含され、しかし、それろ：＝限定されない。薬学
的調製物は滅菌し、また望むなろば活性化合物と有害に
反応しない添加剤例えば滑沢剤、保存剤、安定剤、湿潤
剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝剤、着色剤
、着香剤および（または）芳香物質などと混合すること
ができる。

非経口適用には、注射用無菌溶液、好ましくは油性また
は水性溶液、並びに懸濁液、乳化剤、または坐剤を含め
て移植組織が殊に適する。アンプル剤は便宜な単位薬量
である。

経小腸適用には、タルクおよび（または）炭水化物担体
または結合剤などを有する錠剤、糖剤、坐剤またはカプ
セル剤が殊に適し、担体は、好ましくはラクトース右よ
び（または）コーンスターチ並びに（または）馬鈴薯デ
ンプンである。甘味を与えたビヒクルが使用されるシロ
ップ剤、エリキシル剤などを使用できる。活性化合物が
特異的に分解できるコーティングで、例えばマイクロカ
プセル化、多層コーチングなどにより、保護されるもの
を含めて徐放性組成物を配合することができる。

一般に、本発明の化合物は必要薬量を含む薬学的に許容
できる担体中の単位剤形に調剤される。

本発明による化合物の薬量は一般に、患者、例えば体重
’、５ｋｇのヒト、に投与するときに５〜２５０ｍｇ／
日である。投与宿主に適する薬量および用法は普通の考
慮を用いて、例えば主題化合物および既知抗腫瘍剤の特
異活性の、例えば適当な普通の薬理学的プロトコルによ
る普通の比較により決定することができる。

前記記載から当業者は本発明の本質的特徴を容易に確認
することができ、その趣旨および範囲から逸脱すること
なく、本発明の種々の変更および改変をなし、それを種
々の使用法ふよび条件に適合させることができる。

表 ９ グライドバクチンＰＦ−１の物理化学的性質性 質 ：　白色粉末 ！Ｌ　Ｐ。

：　　１９４−１９６°　（ｄｅｃ、　）微量元素分析
：計算値 （Ｃ２□Ｈ１，Ｎ、０６・Ｈ２０） ：　　Ｃ６１，９０，Ｈ８，２４，Ｎ９．９６測定値 ：　　Ｃ６１，８４，Ｉ（８，１７，〜９．６２ＳＬ！
、ＩＳ　ｍ／’ｚ ：　　５４５　（！、１−Ｈ）” ＴＬＣシラン化プレート ：　　Ｒｆ　　Ｏ，４７ ＥｔＯＨ−ＬＯ（５５：　４５） ＨＰＬＣ５ＳＣ−ＯＤＳ　２６２ ：　　Ｒｔ４．９’ ＭｅＯｆｌ−ＨＪ　（４：　１） 流 量 １−／分 表４゜ マウス腫瘍細胞に対する試験管内細物毒性タライ ドバクチンへ ０．０４ ０、００８ ブライ ドバクチンＰＦ ０．０７ ０．０１０ マイ トマイシンＣ ５Ｏ Ｔ ＊ 試験せず 表５゜ １２１０ 白血病細胞中の高分子合成の阻止 ブライ ドバクチンＡ 〉１００ 〉１００ ０．０３ ブライ ドバクチンＰＦ−１ 〉１００ 〉１００ ０．０７ マイ トマイシンロ １．７ 〉１００ 〉１００

【図面の簡単な説明】

第１図（はポリアンギウム・ブラキスポルム（Ｐｏｌｙ
ａｎｇｉｕｍｂｒａｃｈｙｓｐｏｒｕｍ）　３ｐ、ｎｏ
ｖ、の発酵に供給された不飽和脂肪酸のグライドバクチ
ン生成に対する効果である。 第２図はグライドバクチンＰＦ−１のＩＲスペクトルで
ある。 第３図はグライドバクチンＰＦ−１ＯＮＭＲスペクトル
である。 第４図はグライドバクチンＰＦ−１の１３（：　　ＮＭ
Ｒスペクトルである。 ＦＩＧ、１ 魚 ・４００ 改（ ００ １、α力 （ｐｇ／ｍｌ）

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）式、 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するグライドバクチンＰＦ−１。
2. （２）グライドバクチンＰＦ−１の腫瘍阻止量および薬
   学的担体を含む薬学的組成物。
3. （３）グライドバクチンＰＦ−１の腫瘍阻止量を哺乳動
   物宿主に投与することを含む、グライドバクチンＰＦ−
   １に感受性の悪性腫瘍を哺乳動物中で阻止する方法。
4. （４）請求項（１）記載のグライドバクチンＰＦ−１を
   製造する方法であって、ポリアンギウム・ブラキスポル
   ム（Ｐｏｌｙａｎｇｉｕｍ　ｂｒａｃｈｙｓｐｏｒｕｍ
   ）Ｓｐ．ｎｏｖ．Ｋ−４８１−Ｂ１０１（ＡＴＣＣ５３
   ０８０）を資化性の炭素源および窒素源を含み、さらに
   不飽和脂肪酸を含む普通倍地中で培養することを含む方
   法。
5. （５）不飽和脂肪酸がリノレン酸エステルである、請求
   項（４）記載のグライドバクチンＰＦ−１の製造法。
6. （６）不飽和脂肪酸がエイコサトリエン酸エステルであ
   る、請求項（４）記載のグライドバクチンＰＦ−１の製
   造法。