JPS6016236B2 - 抗生物質ｃ―１５００３ ｐ―３の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗生物質Ｃ−１５００が−３を工業的に有利
に製造する方法に関する。

抗生物質Ｃ−１５００班−３〔以下、「Ｐ−３」と略称
することもある。

〕は、±穣などの試料から分離された微生物ノカルディ
ア属菌の培養により得られた新規化合物であり、この抗
生物質およびその製造法についてはすでに出願されてい
る〔特磯昭５２一３７１６０特機昭５２−３７８６６〕
。上記の方法で使用された菌は抗生物質Ｃ−１５００３
の各成分の一種又はそれ以上を同時に生産蓄積するので
、もしそのうちの特定成分のみを採取しようとする場合
には、その分離精製工程がや）複雑になり、又その収率
も必ずしも高くない。

本発明者らは、その分離精製工程をできるだけ簡略化し
てＰ一３を効率よく製造する方法について種々研究した
ところ、培地中に特定物質を添加することにより、目的
とするＰ−３を極めて効率よく、または単独に近い状態
で製造し得るという新知見を得、これに基づいてさらに
研究した結果、本発明を完成したものである。

すなわち本発明は、ノカルデイア属に属する抗生物質Ｃ
−１５００３生産菌を、ィソブチＩＪ′一ＣｏＡの前駆
物質および／または炭素数４の脂肪酸を添加した培地に
培養し、培養物中に抗生物質Ｃ−１５００蛇−３を特異
的に生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
抗生物質Ｃ−１５００が−３の製造法である。

本発明においては、「抗生物質Ｃ−１５００３」あるい
は「Ｃ−１５００３」とは、下記の一般式（１）におい
て示される四つの化合物の夫々あるいは２以上の混合物
を含めた総称である。

く・） 〔式中、Ｒは−ＣＯ−Ｃ比−ＣＨ３， 又 は を表わす。

〕一般式（１）においてＲが−ＣＯ−Ｃ比‐ＣＨ３の化
合物を「抗生物質Ｃ−１５００犯−２」あるし、は単に
「Ｐ−２」と、Ｒがの化 合物を「抗生物質Ｃ−１５００班−３」と、Ｒが−ＣＯ
−Ｃ均一ＣＨ２一ＣＨ３の化合物を「抗生物質Ｃ−１５
００犯−３」あるいは単に「Ｐ−３′」とＲがの化合物
を「抗生物質Ｃ−１５００が−４」あるいは単に「Ｐ−
４」と、それぞれ称するものとする。

本発明の方法に用いることができる菌株としては、たと
えば土壌などから分離された放線菌Ｎｏ．Ｃ−１５００
３珠〔以下、「舵．Ｃ−１５００３朱」と略称すること
もある。

〕などが挙げられる。船．Ｃ−１５００３株の菌学的諸
性質をシャーリングおよびゴツトリープの方法〔インタ
ーナショナル・ジヤーナル・オブ・システマテイツク・
バクテリオ ロ ジー（ｌｎｔｅｍａｔｉｏ雌Ｉ Ｊｏ
川雌１ ｏｆＳ侭ｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ）、第１鯖蓋、３１３頁〜３４０頁、１９６母王〕
に準じて検討し、２８℃、２１日間にわたって観察した
結果は下記の通りである。

１ 形態的特徴 基生菌糸は寒天借地上および液体塔地中ともによく伸長
し、分枝する。

その直径の多くは０．８〜１．２ｒのであり、時には禅
菌状または分枝した短い菌糸状に分断することがある。
種々の分類用培地上でよく生育し、気菌糸は基生菌糸上
に発育するが、東状体（５０〜２００仏ｗ×２００×１
０００山の）を形成し、それらの上に発育することが多
い。気菌糸の形状の多くは屈曲状または線状を示し、ま
れにゆるい螺旋状を示すものも見られる。成熟した培養
を検鏡すると胞子が連鎖状になっていると考えられるも
のは少なく、それらの培養表面から採取した菌懸濁液に
ついて検鏡した所、長楕円形（０．８〜１．２ムの×４
．８〜６．８山肌）および楕円形（０．８〜１．２×１
．０〜２．０Ａ肌）の分節胞子様のものが多く観察され
、電子顕微鏡による観察ではその表面は平滑であった。
２ 菌体組成 本菌株はＩＳＰＮｏ．１の改変塔地中で２８℃，６６〜
９０時間振濠培養して、菌体を集め、洗糠した。

上記菌体をピー・ベツカーらの方法〔アプライド・マイ
クロバイオロジーＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ）、１２巻、４２１頁、１９６ぷ王〕およびェム・
ビー−レェヒバリェ一方法〔ジャーナル・オプ・ラボラ
トリー・アンド・クリニカル・メデイシン（Ｊｏｕｍａ
ｌｏｆＬａ功ｒａＰｒｙａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ）７１巻、９３４頁、１９６母王〕に従っ
て菌体細胞中のジアミ／ピメリン酸および糖組成を検し
た結果、前者はメソ体であること、後者はガラクトース
およびアラビノースに相当するスポットの存在が認めら
れた。３ 分類用塔地上の諸性質本菌株は各種塔地上で
、いずれも比較的よく発育し、その基生菌糸は培養初期
無色ないし淡黄色で、その後、淡黄褐色または黄褐色を
示す。

また種々の分類塔地中に黄色ないし黄褐色の可溶性色素
を生成する。気菌糸は粉状で、一般には中程度に発育し
、白色ないし黄色または淡黄褐色を示す。本菌株の各種
分類用塔地上における諸性状は第１表に示した通りであ
る。第１表 Ｍ．Ｃ−１５００３紫の分類用塔地上の諸
性質（ィ） 簾糖・硝酸塩寒天塔地生育：豊富、黄色（
３ｊａ）※ないし淡黄褐色（乳ｃ）※東状体形成気菌糸
（ＡＭ）：貧弱、白色 可溶性色素（ＳＰ）：なしまたは徴糞褐色（ロ） グリ
セロール・硝酸塩寒天塔地 Ｇ：中程度、淡黄色（次ａ）※東状体形成ＡＭ：中程度
、白色 ＳＰ：なし （ハ） ブドウ糖・アスパラギン寒天塔地Ｇ：中程度、
淡明黄色（３ｐａ）※ないし明黄色（松ａ）※ＡＭ：貧
弱、白色 ＳＰ：明黄色（沙ａ）※ （ニ） グリセロール・アスパラギン寒天塔地Ｇ：中程
度、淡黄色（沈ａ）※東状体形成ＡＭ：貧弱、白色 ＳＰ：なし （ホ） でん粉寒天塔地 Ｇ：中程度、淡黄色（Ｚａ）※なしし淡黄褐色（滋ａ）
※東状体形成ＡＭ：豊富、淡黄色（次ａ）※ ＳＰ：なし （へ） 栄養寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（Ｚａ）※ないし黄色（雄３）※東
状体形成 ＡＭ：貧弱、白色 ＳＰ：なし （ト） リンゴ酸カルシウム寒天培地 Ｇ：中程度、淡黄色（次ａ）※ないし淡黄色（友ａ）※
東状体形成ＡＭ：中程度、白色ないし淡黄色（Ｘａ）※
ＳＰ：なし（チ） 酵母エキス・麦芽エキス寒天培地Ｇ
：中程度、淡黄褐色（乳ｃ）※ないし明褐色（３ａ）※
東状体形成ＡＭ：中程度、白色ないし淡黄色（沙ａ）※
ＳＰ：なし（ＩＪ） オートミール寒天培地Ｇ：中程度
、淡黄色（次ａ）※ないし黄色（ＺＰ）※東状体形成 ＡＭ：貧弱、白色ないし淡黄色 ＳＰ：なし （ヌ） べプトン・酵母エキス・鉄寒天塔地Ｇ：中程度
、黄色（２３）※ＡＭ：なし ＳＰ：黄色（松卒）※ （ル） チ。

ジン寒天塔地Ｇ：中程度、淡黄色（松ａ）※ないし黄色
（＄ａ）、東状体形成 ＡＭ：中程度、白色ないし淡黄色（２ｃａ）※ＳＰ：黄
褐色（３ｉｅ）※※：カラー・ハーモニー、マニュアル
、第４版、（コンテエイナー、コーポレーション・オプ
・アメリカ、１９５洋手発行）による色名記号４ 生理
的性質本菌株の生理的性質は第２表に示した通りである
。

すなわち生育温度範囲は１２０ないし斑。○、または寒
天塔地（ＩＳＰＮｏ．２）上で気菌糸をよく着生する温
度範囲は２０ｑｏないし３５００である。第２表 Ｎｏ
．Ｃ−１５００３珠の生理的状生育温度範囲：１〆０〜
総００気菌糸着生温度２０℃〜３５ｑ０ ‐ゼラチン液化：陽性 でん粉加水分解：陽・性 硝酸塩還元能：陽‘性 ミルク・ベプトン化：陽性 ミルク・凝固：陰性 カゼイン分解能：陽・性 メラニン様色素形成（ベプトン・酵母エキス鉄寒天塔地
）：陰性、（チロジン寒天培地）：陽性チロジン分解館
：腸性 キサンチン分解熊：陰性 ヒポキサンチン分解館：陰性 リゾチーム耐性：陽性 食塩耐性：２％ ５ 各種炭素源の利用性 プリーダムおよびゴットリーブの方法〔ジャーナル・オ
ブ・バクテリオロジー（Ｊｏ川岬１ ｏｆ母ｃｔｅｒｉ
ｏｌｏ鋤）、５母雀、１０７頁、１９４８王〕に記載さ
れている培地およびそれに酵母エキス（バクト）を０．
１％添加した基礎培地を用いて、各種炭素源の利用性を
検し、それらの結果を第３表に示した。

第３表豚Ｃ−１５００３株の炭素源利用性炭素源
生育 炭素源 生育※ ※Ｄ−キンロー
ス ＋什 ラフィノース 士土Ｌ−アラピノース
＋ ＋ メリピオース ＋＋Ｄ−グルコース
日什 ｉ−ィノントール −−Ｄ−ガラクトース ＋
＋ Ｄ−ソルビトール −Ｄ−フラクトース 川
日 Ｄ−マン二トール 什什Ｌ−ラムノース ＋十
グリセロール −士Ｄ−マンノース 川什
可溶性澱粉 ＋十ンュークロース 什日 対 照
ラクトース マルトース 士＋ トレハロース 十日 ※：酵母エキス０．１発添加基礎培地 注；川：豊富な発育 什：比較的良好を発育＋：発育
を認める 土僅かに発育する−；発育しない ６ その他の諸性質 前述２に示した方法で菌体を集め、これらとジェー・マ
ーマーらの方法〔ジャーナル・オブ・モレキユフー・バ
イオロジー（Ｊｏｕｍａｌ ｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢ
ｉｏｌｏ難）、３巻、２０８頁、１９６１年〕に準じて
ＤＮＡを調製し、ＤＮＡのＧ−Ｃ（グアニンーシートン
）含量を検すると約７１モル％であった。

本菌株の栄養菌糸をグラム染色すると陽・性であつた。

以上述べたＮｏ．Ｃ−１５００針珠の諸性質をェス・ェ
ー ．ワックスマン弓旨−七、ジ・アクチノミセテス（
ｍｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）、第２巻、ザ・ウィ
リアムス・アンド・ウィルキンス・カンパニー発行、１
９６１年、アール・ィー・ブッフアナン・アンド・ェヌ
・イー・ギボンス縄、パージーズ・マニュアル・オブ・
デターミネーテイブ・バクテリオロジ− （ Ｂｅｒｇ
ｅｙ′Ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｎｎｊ船ｔｉ
Ｖｅ協ｃｔｅｒｉｏｌｏ鋤）、第８版、１９７ム王およ
びその他の文献に従って検索した。本菌株はノルディア
（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属のグループｍに属すると考えら
れるが、既知菌株の中には上記諸性質をする種は見出さ
れず、新菌種と同定された。本菌株Ｍ．Ｃ−１５００３
粥ま、工業技術院微生物工業技術研究所にＦＥＲＭ−Ｐ
Ｎｏ．３９９２として、財団法人発酵研究所にＩＦＯ−
１３７２６として、ジ・アメリカン・タイプ・カルチヤ
ー・コレクション（Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐ
ｅ Ｃｕｌｔｍｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｎ均ｒｙｌ
ａｎｄ，Ｕ．Ｓ．Ａ）にＡＴＣＣ−３１２８１として、
それぞれ寄託されている。

以上に述べた様にＮｏ．Ｃ−１５００３朱はノカルディ
ア属の新種であるが、微生物の一般的性質として自然的
にまたは変異剤によって変異を起し得る。

たとえばＸ線、ガンマ‐線、紫外線等の放射線の照射単
胞子分離、種々の薬剤を含有する培地上での培養、その
他の手段で変異させて得られる多くの変異株、あるいは
自然的に得られる突然変異株等であっても、上記した菌
学的性状または下記の示した様な菌学的性状との比較に
おいて実質的に別種とするに足らず、しかもＰ−２，Ｐ
−３，Ｐ−３および（または）Ｐ−４を生産する性質を
有するものはすべて本発明の方法に利用し得る。たとえ
ばＮｏ．Ｃ−１５００乳珠の種々の変異処理することに
より、可溶性色素をほとんど生成しないもの、基生菌糸
が無色のもの、黄緑色のもの、赤褐色ないし燈赤色を示
すもの、菌糸が梶菌状または分枝した短い菌糸に分断し
易いものおよび気菌糸が多く白色または気菌糸をほとん
ど着生しない変異株が得られている。本発明の方法にお
いて培地に添加されるィソブチリルＣｏＡの前駆物質と
は、抗生物質Ｃ−１５００３生産菌を培養している培地
中に添加した場合に、ィソブチリルＣｏＡに変りうる物
質を意味し、その例としては、炭素数５のＱ−アミノ酸
、炭素数５のケトカルボン酸が挙げられる。

炭素数５のＱ−アミノ酸としては、たとえばバリンなど
が挙げられ、そのヱステル（例、メチルェステル、エチ
ルェステル）またはその塩（例、塩酸塩）でもよく、０
体、Ｌ体、ＤＬ体のいずれでもよい。炭素数５のケトカ
ルボン酸としては、たとえばＱ−ケトィソバレリル酸な
どが挙げられ、そのェステル（例、メチルェステル、エ
チルェステル）またはその塩（例、ナトリウム塩、カリ
ウム塩、カルシウム塩）でもよく、Ｄ体、Ｌ体、ＤＬ体
のいずれでもよい。本発明において培地に添加される炭
素数４の脂肪酸としては、たとえばｎ−ブチリル酸、ィ
ソブチリル酸等が挙げられ、そのェステル（例、メチル
ェステル、エチルェステル）またはその塩（例、ナトリ
ウム塩、カリウム塩、カルシウム塩）でもよい。

上記の添加物の添加量は、培地に対し、一般的には約０
．０１〜１．０％（Ｗ／Ｖ％）、より好ましくは約０．
１〜０．５％（Ｗ／Ｖ％）である。

添加時期は、抗生物質Ｐ−３の生産が継続している限り
いつでもよく、たとえば培養当初でもよく、培養開始後
の適宜の時期であってもよい。抗生物質Ｃ−１５００３
生産菌の培養に用いられる培地は該菌株が利用し得る栄
養源を含むものなら、液状でも固状でもよいが、大量を
処理するときには液体培地を用いるのがより適当である
。

培地には本発明に用いられる添加物を添加するほか、Ｎ
ｏ．Ｃ−１５００３先が同化し得る炭素源、消化し得る
窒素源、無機物質、微量栄養素等が適宜配合される。炭
素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、ショ糖、麦芽
糖、デキストリソ、でん粉、グリセリン、マンニトール
、ソルビトール等、油脂類（例、大豆油、ラード油、チ
キン油等）その他が、窒素源としては、たとえば肉ヱキ
ス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スチープ
・リカー、ベプトン、棉実紛、綾糖蜜、尿素、アンモニ
ウム塩類（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等）その他が用い
られる。さらにナトリウム、カリウム、カルシウム、マ
グネシウムなどを含む塩類、鉄、マンガン、亜鉛、コバ
ルト、ニッケルなどの金属塩類、リン酸、ホウ酸などの
塩類や酢酸、プロピオン酸などの有機酸の塩類が適宜用
いられる。その他、アミノ酸（例、グルタミン酸、アス
パラギン酸、アラニン、グリシン、リジン、メチオニン
、プロリン等）、ベプチド（例、ジベプチド、トリベプ
チド等）、ビタミン類（例、Ｂ，Ｂ２、ニコチン酸、Ｂ
２，Ｃ，Ｅ等）、核酸類（例、プリン、ピリミジンおよ
びその誘導体等）等を含有させてもよい。もちろん培地
の餌を調節する目的で無機または有機の酸、アルカリ類
、緩衝剤等を加え、あるし、は消泡の目的で油脂類、表
面活性剤等の適量を添加してもよい。培養の手段は静贋
培養でも、振濠培養あるいは通気濃拝培養法等の手段を
用いてもよい。

大量の処理には、いわゆる深部通気燈梓培養によるのが
望ましいことはいうまでもない。培養の条件は培地の状
態、組成、菌株刀種類、培養の手段等によって一定しな
いのは当然であるが、それらは通常２ぴ０〜３５ｏｏの
温度で初発ｐＨを中性附近に選択するのがよい。とりわ
け、培養中期の温度は２３００〜３０℃、また初発ｐＨ
は６．５〜７．５の条件が望ましい。培養期間も前記の
諸条件により一定しないが、所望の抗生物質濃度が大と
なるまで培養するのがよい。これに要する時間は液体培
地を用いる振函培養または通気損杵培養の場合は通常２
〜１０日間程度である。上記したＰ−３製造法の具体的
な実験例として、的．Ｃ−１５００３珠の可溶性でんぷ
ん３％、塩化アンモニウム０．２％、硫酸マグネシュゥ
ム０．０５％、リン酸第１カリウム１．０９％、リン酸
第２カリウム２．０９％、硫酸第１鉄０．００１％から
なる培地（１）または、デキストリン５％、コーン・ス
チープ・リカ−３％、ベプトン０．１％、炭酸カルシュ
ウム０．５％からなる培地（Ｄ）に前記した種々の添加
物を加え、培養した結果を培地（１）の場合を第４表に
、また培地（ロ）の場合を第５表に示した。

この場合、Ｃ−１５００３の総生成量はタラ。

ミセス・アベラネウス（Ｔａｉａｒｏｍｙｃｅｓ ａｖ
ｅｌｌａｎｅ順）『０７７２１を試験菌とし、検定培地
〔リン酸ニナトリウム３．５夕、リン酸ーカリウム０．
５夕、酵母エキス（ディフコ）５夕、グルコース１０夕
、寒天１５夕、蒸留水１０００の【、ｐＨ７．０〕上で
、Ｐ−３を標準とするペーパー・ディスク法で測定した
。また生成されたＰ−２，Ｐ−３またはＰ−４の分別に
は、これらを含む培養炉液に同量の酢酸エチルを添加抽
出し、濃縮、乾固後、元の炉液の１／１００客の酢酸エ
チルに溶解し、薄層クロマトグラフィー用の試料とした
。薄層クロマトグラフィーは、シリカゲル６価畑（メル
ク社製）のガラスプレートを用い展開溶媒として、水飽
和酢酸エチルを用いた。生成量および生成比率は、島津
２波長クロマトスキヤナーＣＳ−９１０を用い２５４ｎ
ｍの吸収の濃さと広さから測定した。この場合、Ｐ−２
，Ｐ−３およびＰ−７の検出量を１００％として計算し
た。これらの結果を第４表および第５表に示した。すな
わち、地．Ｃ−１５００３株を通常の培養を行なった場
合、Ｐ−３の生成量は約６０Ｗ／Ｗ％であり、それを単
離する精製工程においても収率も低下するが、実験例に
示したように、たとえば培地中にバリンを加えて培養す
ることにより、その生成物のほとんどは所望のＰ−３の
みとなり、効率的に採取できる。第 ４ 表 （注）添加時間が０とは、培養当初の時を表わすものと
する。

第 ５ 表（注）添加時間が０は、上記と同意義。

このように培養物中に特異的に蓄積生成されたＰ−３を
精製取得するには、かかる微生物代謝物を採取するのに
通常用いられる分離精製の方法が適宜利用される。

まず本物質が中性脂溶性であるため、水と混じらない有
機溶媒たとえば酢酸エチル、酢酸アミルなどの脂肪酸ェ
ステル、ブタノールなどのアルコール類、クロロホルム
などのハロゲン化炭化水素、メチルィソブチルケトンな
どのケトン類が用いられる。抽出は中性付近で行なわれ
、好ましくはｐＨ７に調整された培養炉液から酢酸エチ
ルを用いて行なわれる。抽出液を水洗後、減圧下に濃縮
し、石油エーテル、ヘキサンのような非櫨性溶媒を加え
て有効成分を含む粗物質を採取する。この中にはＴＬＣ
上で抗生物質Ｃ−１５００３以外の多数のスポットがみ
とめられるため、つぎに精製工程が利用される。すなわ
ち、通常用いられる精製法として種々の吸着クロマトグ
ラフィーが有効であり、吸着剤としては一般に使用され
る担体たとえばシリカゲル、アルミナ、マクロポーラス
非イオン系吸着樹脂等が利用できる。シリカゲルを利用
する場合には、非極性溶媒たとえば石油エーテル、ヘキ
サンから展開をはじめ、酢酸エチル、アセトン、エタノ
ール、メタノールなどの磁性溶媒を添加するかまたはジ
クロルメタン、クロロホルムなどの含ハロゲン炭化水素
類から展開をはじめ、エタノール、メタノールなどのア
ルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケト
ン類等の犠牲溶媒を添加することにより、Ｐ−３を溶出
、分離、採取する。また、マクロポーラス吸着性樹脂を
用いる場合、Ｐ−３を溶出するには、低級アルコール類
あるいは低級ケトン類、ェステルと水との混合物等が用
いられる。低級アルコール類としては、たとえばメタノ
ール、エタノール、プロパノール、ブタノールなど、低
級ケトン類としては、たとえばアセトン、メチルエチル
ケトン、ヱステル類としては、酢酸エチルなどが利用で
きる。その一例を示すと６０％メタノール水に粗物質ロ
をとかし、ダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成）カラム
に通過させて吸着せしめ、７０％メタノール水で洗浄後
９０％メタノール水で溶出すると目的物Ｐ−３が溶出さ
れる。いずれの方法でも、得られたＰ−３の画分を減＊
圧濃縮し、乾燥物に対して５〜８倍量の酢酸エチルを加
え放置するとＰ−３の結晶が析出する。

本発明の方法によると、Ｐ−３の生成比率は非常に高く
なり、また、生成量も数倍に増大するので、本発明方法
は生産量の増大と分離精製の容易さの点において工業上
きわめて有利である。実施例４で得られたＰ−３の物理
化学的性状を第６表に示す。第６表 抗生物質Ｃ−１５００３Ｐ‐３（Ｃ３２日４３ＣＩＮ２
０９＝６３５．１６９）Ｐ−３，Ｐ−３、およびＰ−４
は新規化合物であるが、Ｐ−２は、元素分析値、比旋光
度、紫外線吸収スペクトル、赤外線吸収スペクトル、マ
ススベクトルなどから、カプチャンらの報告〔ジャーナ
ル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエテイ ‐ （
Ｊｏｍｎａｌ ｏｆ 肌ｅｒｉＣａｎ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌＳｏｃｉｅツ）９７巻、５２９４頁、１９７３王）
に示されるメィタンシノール・プロピオネートと同一の
化合物と考えられる。

生物活性 Ａ 抗微生物活性 トリプテイカーゼ・ソイ寒天培地（ＢＢリ製）を検定培
地として、以下に示す微生物に対する発育阻止能をペー
パー・ディスク法で検した。

すなわち、下記微生物含菌平板塔地上でＰ−３の３００
ムタ／の‘の溶液の０．０２舷をペーパー・ディスク（
東洋製作所、薄型、直型８風）に含ませたものにより生
育阻止能を検した。その結果、下記微生物に対しては活
性を示さなかった。エシエリヒア・コリ・プ。

テウス・ブルガリス、フ。ロテウス・ミラビリス、シユ
ウドモナス・アエルギーノサ、スタフイロコツクス・ア
ウレウス、バチルス・ズプチリス、バチルス・セレウス
、クレブジエラ・ニユウモニエ、セラチア・マルセスセ
ンス、ミコバクテリウム・アビウムー方、検定塔地〔燐
酸二ナトリウム３．５夕、燐酸ーカリゥム０．５夕、酵
母エキス（ディフコ）５夕、グルコース１０夕、寒天１
５夕、蒸留水ｌｏｏ０の‘、ｐＨ７．０〕の寒天平板を
用い、タラロマィセス・アベラネウス（Ｔａｌａｒｏｍ
ｙｃｅｓａｖｅｌｌａｎｅ船）を試験菌としてその生育
館を検するとＰ−３は、３ムタ／のとで生育阻止力を示
した。また、テトラヒメナ・ピリホルミス （Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａｐの他ｒｍｉｓ）Ｗ株を試験
微生物とし、検定塔地〔トリプトース・ベプトン（ディ
フコ）２０夕、酵母エキス１夕、グルコース２夕、蒸留
水ｌｏｏ０の【、１モル燐酸緩衝液−７．０ １０の【
〕を用い、２８ｏｏ、４独特間ないし４報時間培養して
、液体稀釈検定法により該抗生物質の該微生物発育阻止
館を検した。

その結果、Ｃ−１５００＊−３は１仏夕／叫で該微生物
の発育を阻止することを認めた。抗カビ性を第７表に示
す。

第７表から明らかなように、Ｐ−３は、植物病源菌の発
育を阻止する。Ｐ−３の１０００ムタ／の【溶液０．０
２奴を浸した円形炉紙を、第７表の微生物をそれぞれ移
植した培地に置き、阻止円の直径を測定した。第７表
抗菌スベクトラム Ｂ 抗腫傷活性 腫湯細胞Ｐ３８８（１×１ぴ細胞／匹、マウス、腹腔移
植）に対するＰ−３の治療効果（９日間連続腹腔内投与
）を調べた。

その結果、これらの物質によるマウスの延命率は対照に
比し、０．００６２５のｏ／ｋｇ／日投与で２００％を
示す抗腫蕩作用が認められた。Ｃ 毒性 マウスを供試動物とした急性毒性試験で、Ｐ−３を腹腔
注射した場合、ＬＤ，ｏｏ値が０．６２５ｍｏ／ｋ９、
またＬＤ。

値は０．３１物９／ｋｏであった。上記したようにＰ−
３は糸状菌および原虫に対し、強い発育阻止能を有する
ので、防轍剤または抗原虫剤としても有用なものである
。また、Ｐ−３は、腫湯をもつ０甫乳動物（例、マウス
など）に対し延命効果を示すので、抗腫場剤としても有
用であると期待される。Ｐ−３を防徴剤および抗原虫剤
として使用するには、たとえば土壌、活性汚泥または動
物体液などの細菌生態を検する際に有利に使用し得る。

すなわち、土壌から有用な細菌類を分離する場合、また
は糠水処理に用いられている活性汚泥法の運転、解析に
原虫または徴以外の細菌類の作用を検する場合、試料中
に生存する鰍または原虫を発育させず、細菌生態を選択
的に発育させることが出来る。具体的には被検試料を液
体または岡体培地に添加し、その培地１の‘当りに本抗
生物質１０なし、し１００仏夕／私の１％メタノール含
有水溶液を０．１Ｍ添加し、培養する。Ｐ−３は、表７
に示した微生物によってひきおこされる植物病の処置に
用いる抗菌剤としても用いることができる。

その具体的な応用例としては、Ｐ−３を１％メタノール
水に０．５一夕／私〜５仏夕／羽となるように溶解した
液剤として、たとえばィネ小黒核病、ィネゴマ葵枯病、
ィネ紋枯病などの処置に用いることができる。以下に実
施例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明する。

なお、パーセントはとくにことわりのないかぎり、重量
／容量％を表わす。実施例 １ 種塔地（グルコース１．０％、バクトートリプトン２．
０％、バクトー酵母エキス１．２％、ｐＨ７．０）４０
の‘を２００の【ェルレンマィャーフラスコに分注し、
滅菌後、ノカルディア・スベシーズ Ｍ．Ｃ−１５００
３（ＩＦＯ１３７２６、ＡＴＣＣ ３１２８１：ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ Ｍ．３９９２）を接種した。

このものを２８℃で回転振綾機上（２０比．ｐ．ｍ．）
で４斑時間培養し種培養とした。この培養物を滅菌した
蒸留水で３回洗菌後、洗菌体を滅菌蒸留水で元の量に戻
し、この１の【を主培地（可溶性でんぷん３％、塩化ア
ンモニウム０．２％、硫酸マグネシュウム０．０５％、
リン酸第１カリウム１．０９％、リン酸第２カリウム２
．０９％、硫酸第１鉄０．００１％、Ｌーバリン０．１
％）に接種して主培養を行なった。主培養は、培地４０
の‘を２００の‘のェルレンマィャーフラスコに分注、
滅菌、接種後、回転振濠機上で（２０仇．ｐ．ｍ．）２
ぴ○で８日間行なった。Ｃ−１５００３の総生産量は１
６山夕／叫で、その約９５Ｗ／Ｗ％がＰ−３であった。
実施例 ２ 実施例１に示した種培地を調製し、その５００の‘を２
０００畝坂口コルベンに分注、滅菌した。

これに実施例１と同じ菌株を接種し、２がｏで往復振盤
機上（１１仇．ｐｍ．）で４８時間培養し接種用種培養
を調製した。２００そ客ステンレススチール醗酵タンク
に種培地（グルコース２．０％、可溶性でんぷん３．０
％、コーン・スチーブ・リカー１．０％、生大豆粉１．
０％、ポリベプトン０．５％、食塩０．３％、炭酸カル
シュウム０．５％、ｐＨ７．０）１００夕を調製し、１
２１℃、２０分間滅菌し冷却後、接種用種培養５００そ
接種した。温度２８００、通気量１００夕／分、２００
回転／分で４即時間種培養を行なった。この種培養１０
そを２００そ客ステンレススチール醗酵タンクに主塔地
（デキストリン５％、コーン・スチープ・リカー３％、
ベプトン０．１％、Ｌ−バリン０．３％、炭酸カルシュ
ウム０．５％、ｐＨ７．０）１００そに移植し、２８℃
で、通気量１００夕／分、擬伴１５０回転／分で４日間
培養を行なった。Ｃ−１５００３の総生産量１２山夕／
机【で生成されたＣ−１５００３のうちＰ−３は約９８
Ｗ／Ｗ％であった。実施例 ３ 実施例２で得られた培養物９５のこアセトン５０そを加
え３０分間燈拝し、ハイフロスーパーセル（米国 ジョ
ンズマンヴィル・プロダクト社）２ｋ９を加えよくかき
まぜる。

混合物を加圧式炉過機で炉過し、炉液１３．５そを得る
。炉液に水５０〆、酢酸エチル９０夕を加え額伴抽出し
、この操作を２回くり返す。酢酸エチル層を合せて水８
０そ宛で２回水洗し、無水硫酸ナトリウムｌｋ９を加え
て乾燥後２００机上まで減圧濃縮し、石油エーテルを加
え、析出する沈澱を炉取する（３５夕）。得られた粗物
質に酢酸エチル５０肌を加えかきまぜ、不溶物を炉去し
炉液にシリカゲル（西独 メルク社 ０．０５〜０．２
柵）１０夕を加えてかきまぜた後酢酸エチルを減圧下に
蟹去しあらかじめ用意したシリカゲルカラム（５００の
‘）の上端におき、ｎーヘキサン５００私、ｎ−へキサ
ン・酢酸エチル（３：１）５００泌、ｎ−へキサン・酢
酸エチル（１：１）、水飽和酢酸エチル２そを流し、港
出液を５０の上宛分画する。各フラクションの１叫宛を
濃縮乾団し０．１の【の酢酸エチルを加え、シリカゲル
ガラスプレート（西独メルク社 キーゼルゲル６岬２乳
０．２５肋、２０×２０）の下端から２．５仇の位置に
スポットし、展開溶媒、水飽和酢酸エチルで約１７伽展
開する。展開後紫外線（２５３７Ａ）下で吸収像をしら
べＲｆｏ．４都付近に吸収のあるフラクションを集め約
２私まで減圧濃縮後、濃縮液に石油エーテル２物【を加
え、粗結晶９．１夕を得た。．これを酢酸エチル２．物
上に加温溶解後、冷却し、析出する結晶を炉取すると８
５０の９のＰ−３精結晶が得られた。ｍｐ１８９〜１９
０００。（Ｐ−３：９７Ｗ／Ｗ％）実施例 ４ 実施例３で得られた粗物質２０夕をメタノール２００の
‘にとかし、水２００泌を加えて溶解する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ノカルデイア属に属する抗生物質Ｃ−１５００３生
   産菌を、イソブチリルＣｏＡの前駆物質および／または
   炭素数４の脂肪酸を添加した培地に培養し、培養物中に
   抗生物質Ｃ−１５００３Ｐ−３を特異的に生成蓄積せし
   め、これを採取することを特徴とする抗生物質Ｃ−１５
   ００３Ｐ−３の製造法。