JPH03215428A - Ｂｍｙ―４１９５０抗腫瘍抗生物質 - Google Patents
Ｂｍｙ―４１９５０抗腫瘍抗生物質Info
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- JPH03215428A JPH03215428A JP2073173A JP7317390A JPH03215428A JP H03215428 A JPH03215428 A JP H03215428A JP 2073173 A JP2073173 A JP 2073173A JP 7317390 A JP7317390 A JP 7317390A JP H03215428 A JPH03215428 A JP H03215428A
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- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
関連出願についてのクロス・リファレンス本出願は１９
８９年３月２３日付の本出願人らの同時係属米国特許出
願第３２７． ９２９号の部分継続出願である。
８９年３月２３日付の本出願人らの同時係属米国特許出
願第３２７． ９２９号の部分継続出願である。
発明の背景
発明の分野
本発明は新規の抗腫瘍抗生物質並びにその製造及び回収
に関する。
に関する。
の発酵による抗生物質ＡＭ−２２８２の製造を記載して
いる。この抗生物質は抗感染及び活性を有すると報告さ
れている。ＡＭ−２２８２は後にスタウロスポリン（ｓ
ｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ ）と命名され、その構造は
Ｊ．Ｃｈｅｍ，Ｓｏｃ，Ｃｈｅｍ， Ｃｏｍｍｕｎ．
Ｌ ９ ７ ８ ：８００−８０１、１９７８に であると報告されている。
いる。この抗生物質は抗感染及び活性を有すると報告さ
れている。ＡＭ−２２８２は後にスタウロスポリン（ｓ
ｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ ）と命名され、その構造は
Ｊ．Ｃｈｅｍ，Ｓｏｃ，Ｃｈｅｍ， Ｃｏｍｍｕｎ．
Ｌ ９ ７ ８ ：８００−８０１、１９７８に であると報告されている。
ヨーロッパ公告特許出願第２３８， ０１１号は
の構造を有し、ストレプトミセス（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ）ｓｐ． ＵＣＮ−０ １ （ＦＥＲＭ ＢＰ
−９９０ ）の発酵によって生産されるＵＣＮ−０ １
という名称の抗腫瘍抗生物質を記載している。化合物Ｕ
ＣＮ−０ １はＪ，Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ， ｐ，
１７８２、１９８７ １２月号にも記載されている。
ｃｅｓ）ｓｐ． ＵＣＮ−０ １ （ＦＥＲＭ ＢＰ
−９９０ ）の発酵によって生産されるＵＣＮ−０ １
という名称の抗腫瘍抗生物質を記載している。化合物Ｕ
ＣＮ−０ １はＪ，Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ， ｐ，
１７８２、１９８７ １２月号にも記載されている。
米国特許第４． ５５２． ８４２号にはレベツカマイ
シン（ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）と呼ばれる抗腫瘍抗
生物質が、ノカルジア・アエロコロニケネス（Ｎｏｃａ
ｒｄｉａａｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ） ＡＴＣ
Ｃ ３ ９ ２ ４ ３の発酵によって生産されるとし
て記載されている。レベッカマイシンは構造式 ■ ａｃｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ） （Ｊ， Ａｎｔｉｂｉｏｔ． ４ ０ ： れた。
シン（ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）と呼ばれる抗腫瘍抗
生物質が、ノカルジア・アエロコロニケネス（Ｎｏｃａ
ｒｄｉａａｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ） ＡＴＣ
Ｃ ３ ９ ２ ４ ３の発酵によって生産されるとし
て記載されている。レベッカマイシンは構造式 ■ ａｃｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ） （Ｊ， Ａｎｔｉｂｉｏｔ． ４ ０ ： れた。
６７８、
９８７》
として分類しなおさ
ａｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ ） Ａ Ｔ Ｃ Ｃ
３ ９ ２ ４ ３の発酵にによって生産される４′
−デスク口口レベッ力マイシンと呼ばれる抗腫瘍抗生物
質を記載している。
３ ９ ２ ４ ３の発酵にによって生産される４′
−デスク口口レベッ力マイシンと呼ばれる抗腫瘍抗生物
質を記載している。
この化合物は構造式
■
ＵＭｅ
を有する。
■
８６年１
１月２１日付提出の米国特許出願
第
９３３． ４２８号は式
Ａ６
〔上記式中、
ｎは１〜６の整数であり、
Ａ６
及びＡ
３はＨ及びー（ＣＨ２）．，ＮＲ’Ｒ２から選ば
れ、
かつＡ６
及びｐ， ＋ ３の少なくとも１つは
（（：Ｈ２）、
ＮＲ
Ｒ２
であり、
Ｒ’及びＲ２は、無関係に、水素、未置換及び置換Ｃ１
Ｃｓアルキルと、アルキル部分中に１〜３個の炭素を
有しかつアリール部分が未置換フエニルあるいは１〜３
個のアルキル、アルコキシ、ハロ、カルボキシル、アル
コキシ力ルボニル、及びアミノ並びに千ノー及びジ−低
級アルキルアミノ基で置換されたフェニルであるアリー
ルアルキルと、未置換フェニル及び１〜３個のアルキル
、アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、モノ及びジ
アルキルアミノ、二トロ、カルボキシル、アルコキシカ
ルボニル及びシアノ基で置換されたフェニルから選ばれ
るアリールとから選ばれ、但しＲ１とＲ２の両方共がお
のおのアリールであることはなくかつ、一緒になるとき
、Ｒ１とＲ２とは窒素原子と一緒に５一又は６一員環を
形成するためー（ＣＨ２）．一及び＝（ＣＨ２）２−Ｒ
’−（ＣＨ２）− （ここで、Ｒ３はＣＨ２、ＮＨ、０
及びＳから選ばれる）から選ばれ得ることを条件とし、 ＸはＨ，Ｆ，［Ｉ！、ＢｒＳＣ，−Ｃ３アルキル、ＯＨ
，カルボキシル、アルキル部分がＣ１−Ｃ３アルキルで
あるアルコキシ力ルボニル及びアルコキシ、ペンジルオ
キシ、アミノ、及びモノー及びジーアルキルアミノから
選ばれ、かつ Ｒ４はＨ及びＣＨ３から選ばれる〕 及びその製剤上受容できる酸付加塩及び塩基塩の一連の
抗腫瘍抗生物質を記載している。
Ｃｓアルキルと、アルキル部分中に１〜３個の炭素を
有しかつアリール部分が未置換フエニルあるいは１〜３
個のアルキル、アルコキシ、ハロ、カルボキシル、アル
コキシ力ルボニル、及びアミノ並びに千ノー及びジ−低
級アルキルアミノ基で置換されたフェニルであるアリー
ルアルキルと、未置換フェニル及び１〜３個のアルキル
、アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、アミノ、モノ及びジ
アルキルアミノ、二トロ、カルボキシル、アルコキシカ
ルボニル及びシアノ基で置換されたフェニルから選ばれ
るアリールとから選ばれ、但しＲ１とＲ２の両方共がお
のおのアリールであることはなくかつ、一緒になるとき
、Ｒ１とＲ２とは窒素原子と一緒に５一又は６一員環を
形成するためー（ＣＨ２）．一及び＝（ＣＨ２）２−Ｒ
’−（ＣＨ２）− （ここで、Ｒ３はＣＨ２、ＮＨ、０
及びＳから選ばれる）から選ばれ得ることを条件とし、 ＸはＨ，Ｆ，［Ｉ！、ＢｒＳＣ，−Ｃ３アルキル、ＯＨ
，カルボキシル、アルキル部分がＣ１−Ｃ３アルキルで
あるアルコキシ力ルボニル及びアルコキシ、ペンジルオ
キシ、アミノ、及びモノー及びジーアルキルアミノから
選ばれ、かつ Ｒ４はＨ及びＣＨ３から選ばれる〕 及びその製剤上受容できる酸付加塩及び塩基塩の一連の
抗腫瘍抗生物質を記載している。
ヨーロッパ公告特許出願第１７５． ２８４号はアクチ
ノマズラ・メリアウラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ
ｍｅｌｌｉａｕｒａ）．へＴＣＣ３９６９１の発酵によ
って生産されるＡＴ２４３３Ａｌ、ＡＴ２４３３Ａ２、
ＡＴ２４３３Ｂ１およびＡＴ２４３３Ｂ２と称する４種
の抗腫瘍抗生物質を記載している。これらの化合物は構
造式ＨｔＪ （上記構造式中、ＸはＨ又はＣ１であり、ＲはＨ又はＣ
Ｈ３である） を有する。
ノマズラ・メリアウラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ
ｍｅｌｌｉａｕｒａ）．へＴＣＣ３９６９１の発酵によ
って生産されるＡＴ２４３３Ａｌ、ＡＴ２４３３Ａ２、
ＡＴ２４３３Ｂ１およびＡＴ２４３３Ｂ２と称する４種
の抗腫瘍抗生物質を記載している。これらの化合物は構
造式ＨｔＪ （上記構造式中、ＸはＨ又はＣ１であり、ＲはＨ又はＣ
Ｈ３である） を有する。
ＰＣＴ出願Ｗ○８ ８／０ ７ ０ ４ ５はある種の
細胞系に対して生体外抗腫瘍活性を有すると報告されて
いる化合物Ｋ２５２の誘導体を記載している。
細胞系に対して生体外抗腫瘍活性を有すると報告されて
いる化合物Ｋ２５２の誘導体を記載している。
記載されている化合物の中には、４４頁に化合物６５〜
７６として見られる幾つかのＫ２５２ ７才キソ誘導
体がある。
７６として見られる幾つかのＫ２５２ ７才キソ誘導
体がある。
発明の要約
本発明は構造式
Ｈ
を有する本明細書中でＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０と称
する新規の抗腫瘍抗生物質並びに実質的に純粋な形での
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０の製造、単離及び精製方法
に関する。
する新規の抗腫瘍抗生物質並びに実質的に純粋な形での
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０の製造、単離及び精製方法
に関する。
抗生物質ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０は、ストレプトミ
セス・スタウロスポレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｅｕｓ） ｎｏｖ．ｓｐ．のＢＭ
Ｙ−４ １ ９ ５ ０生ＡＴＣＣ５ ５ ０ ０ ６
あるいはその突然変異株又は４１９５０生産性株、好ま
しくはストレプトミセス・ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）株Ｃ３
９２８０−４５０−９（ＡＴＣＣ ５ ３ ７ ３ ０
）あるいはその突然変異株又は変異株の、水性栄養培地
中、液中好気条件下での、該培地中で該閑によって実質
的な量のＢＭＹ−４１９５０が生産されるまでの発酵並
びに共生産物質を実質的に含まないＢＭＹ−４ １ ９
５ ０の培地からの回収によって得られる。
セス・スタウロスポレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｅｕｓ） ｎｏｖ．ｓｐ．のＢＭ
Ｙ−４ １ ９ ５ ０生ＡＴＣＣ５ ５ ０ ０ ６
あるいはその突然変異株又は４１９５０生産性株、好ま
しくはストレプトミセス・ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）株Ｃ３
９２８０−４５０−９（ＡＴＣＣ ５ ３ ７ ３ ０
）あるいはその突然変異株又は変異株の、水性栄養培地
中、液中好気条件下での、該培地中で該閑によって実質
的な量のＢＭＹ−４１９５０が生産されるまでの発酵並
びに共生産物質を実質的に含まないＢＭＹ−４ １ ９
５ ０の培地からの回収によって得られる。
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０は抗菌性を示しかつ実験動
物腫瘍系に対する活性をも示す。
物腫瘍系に対する活性をも示す。
詳細な説明
４１９５０生産性株の発酵によって製造される。
特に好ましいＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０生産性株は米
国農務省ノーザン・リジョナル・リサーチ・センター
（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ （：ｅｎｔｅｒ）、ＡＲＳパテント・カル
チャー・コレクション（Ｐａｔｅｎｔ ［：ｕｌｔｕｒ
ｅ ［：ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から得られ、そこでは該
株はＮＲＲＬ１１、１８４ストレプトミセス（ Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ） ｓｐ，として同定される。
国農務省ノーザン・リジョナル・リサーチ・センター
（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ （：ｅｎｔｅｒ）、ＡＲＳパテント・カル
チャー・コレクション（Ｐａｔｅｎｔ ［：ｕｌｔｕｒ
ｅ ［：ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から得られ、そこでは該
株はＮＲＲＬ１１、１８４ストレプトミセス（ Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ） ｓｐ，として同定される。
ＮＲＲＬ １ １、１８４株の生物学的純粋培養菌は米
国メリーランド州口ックビレのアメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション（ ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ
ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）に寄託さ
れかつＡＴＣＣ５５００６としてその永久菌コレクショ
ン加えられている。この株の培養菌は米国コネチカット
州、ウォーリングフォードのブリストルーマイヤーズ・
スクイブ・カンパ−＝− −（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅ
ｒｓ ＳｑｕｉｂｂＣｏｍｐａｎｙ ） Ｐ Ｒ Ｄ
Ｄアクチノミセス・カルチャー・コレクション（Ａｃｔ
ｉｎｏｍｙｃｅｓ Ｃｕｌｔｕｒｅ ［：ｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ）に凍結乾燥菌としても保存されている。
国メリーランド州口ックビレのアメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション（ ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ
ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）に寄託さ
れかつＡＴＣＣ５５００６としてその永久菌コレクショ
ン加えられている。この株の培養菌は米国コネチカット
州、ウォーリングフォードのブリストルーマイヤーズ・
スクイブ・カンパ−＝− −（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅ
ｒｓ ＳｑｕｉｂｂＣｏｍｐａｎｙ ） Ｐ Ｒ Ｄ
Ｄアクチノミセス・カルチャー・コレクション（Ａｃｔ
ｉｎｏｍｙｃｅｓ Ｃｕｌｔｕｒｅ ［：ｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ）に凍結乾燥菌としても保存されている。
ＮＲＲＬＩＩ、１８４の分類学的研究は米国特許第４，
１０７， ２９７号及びＪ， Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ ３ ０ （４） ：２７２−２８２、１９７７中
に詳細に記載されている。この株はストレプトミセス・
スタウロスポレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓ
ｔａｕｒｏｓｐｏｒｅｕｓ） ｎｏｖ．ｓｐ．という名
称をもつ新規のストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ）種として分類されている。
１０７， ２９７号及びＪ， Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ ３ ０ （４） ：２７２−２８２、１９７７中
に詳細に記載されている。この株はストレプトミセス・
スタウロスポレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓ
ｔａｕｒｏｓｐｏｒｅｕｓ） ｎｏｖ．ｓｐ．という名
称をもつ新規のストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ）種として分類されている。
もう１つの特に好ましいＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０生
Ｃ３９２８０−４５０−９と称するストレプトミセス・
ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒ
ｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）の新規株である。この株は沼津で
集められた土壌試料から単離された。株Ｃ３９２８０４
５０−９の生物学的純粋培養菌は米国メリーラント州ロ
ックビレのアメリカン・タイプ・カルチャー０コレクシ
ョン（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ［
：ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に寄託され、ＡＴＣＣ ５ ３
７ ３ ０としてその永久菌コレクションへ加えられ
た。
Ｃ３９２８０−４５０−９と称するストレプトミセス・
ヒグロスコピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒ
ｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）の新規株である。この株は沼津で
集められた土壌試料から単離された。株Ｃ３９２８０４
５０−９の生物学的純粋培養菌は米国メリーラント州ロ
ックビレのアメリカン・タイプ・カルチャー０コレクシ
ョン（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ［
：ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に寄託され、ＡＴＣＣ ５ ３
７ ３ ０としてその永久菌コレクションへ加えられ
た。
Ｃ３９２８０と称するこの培養菌は米国コネクチカット
州ウォーリングフォードのブリストルーマイヤーズ・ス
クイブ・ファーマシュウティカル、リサーチ・アンド・
ディベロプメント・ディビジョン・カルチャー・コレク
ション（Ｂｒｉｓｔｏｌ−ＭｙｅｒＳｑｕｉｂｂ Ｐｈ
ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［］ｉｖｉｓｉｏｎ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）の凍結乾燥管及び
低温パイアル中の休眠培養菌としても保存されている。
州ウォーリングフォードのブリストルーマイヤーズ・ス
クイブ・ファーマシュウティカル、リサーチ・アンド・
ディベロプメント・ディビジョン・カルチャー・コレク
ション（Ｂｒｉｓｔｏｌ−ＭｙｅｒＳｑｕｉｂｂ Ｐｈ
ａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［］ｉｖｉｓｉｏｎ Ｃｕｌ
ｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ）の凍結乾燥管及び
低温パイアル中の休眠培養菌としても保存されている。
株Ｃ３９２８０−４５０−９について行われた株である
ことを示す。株Ｃ３９２８０−４５０一９はシャーリン
グ及びゴットリーブ（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ＆ Ｇｏｔｔｌ
ｉｅｂ） （Ｉｎｔ， Ｊ．Ｓｅｐｔ．Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ １ ６ ：３１３−３４０、１９６６；同
上１８：６９−１８９、１９６８；同上２２：２６５−
３９４、１９７２）、スタネック及びロバーツ（Ｓｔａ
ｎｅｃｋ＆ Ｒｏｂｅｒｔｓ（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ， ２ ８ ： ２ ２ ６３１、１９７４）
、Ｋ． Ｐ．シャール（Ｋ， Ｐ， Ｓｈａａｌ） ［
Ｍ．グッドフェロー及びＤ．Ｅ．ミニキン（Ｍ， Ｇｏ
ｏｄｆｅｌｌｏｗａｎｄ Ｄ．Ｅ．Ｍｉｎｎｉｋｉｎ）
編、ケミカル・メソッズ・イン・バクテリアル・システ
マテ２イックス（ＣｈｅｍｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ）、
ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ Ｉｎｃ．＋ｐｐ． ３
５ ９ − ３ ８ １、１ ９ ８ ５〕によって記
載されている物質及び方法によって決定された下記の性
質を有する。
ことを示す。株Ｃ３９２８０−４５０一９はシャーリン
グ及びゴットリーブ（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ＆ Ｇｏｔｔｌ
ｉｅｂ） （Ｉｎｔ， Ｊ．Ｓｅｐｔ．Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ １ ６ ：３１３−３４０、１９６６；同
上１８：６９−１８９、１９６８；同上２２：２６５−
３９４、１９７２）、スタネック及びロバーツ（Ｓｔａ
ｎｅｃｋ＆ Ｒｏｂｅｒｔｓ（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ， ２ ８ ： ２ ２ ６３１、１９７４）
、Ｋ． Ｐ．シャール（Ｋ， Ｐ， Ｓｈａａｌ） ［
Ｍ．グッドフェロー及びＤ．Ｅ．ミニキン（Ｍ， Ｇｏ
ｏｄｆｅｌｌｏｗａｎｄ Ｄ．Ｅ．Ｍｉｎｎｉｋｉｎ）
編、ケミカル・メソッズ・イン・バクテリアル・システ
マテ２イックス（ＣｈｅｍｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ）、
ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ Ｉｎｃ．＋ｐｐ． ３
５ ９ − ３ ８ １、１ ９ ８ ５〕によって記
載されている物質及び方法によって決定された下記の性
質を有する。
形態
株Ｃ３９２８０−４５０−９の形態的特性には、１）ノ
ン・フラグメンティング（ｎｏｎ−ｆｒａｇｍｅｎｔｉ
ｎｇ）基質及び気中菌糸の生成、２）気中菌糸上の枝分
かれ担胞子体から生じた分節胞子のらせん鎖でかつ該胞
子鎖が２〜６巻きを有すること、３）なめらかな胞子装
飾が含まれる。
ン・フラグメンティング（ｎｏｎ−ｆｒａｇｍｅｎｔｉ
ｎｇ）基質及び気中菌糸の生成、２）気中菌糸上の枝分
かれ担胞子体から生じた分節胞子のらせん鎖でかつ該胞
子鎖が２〜６巻きを有すること、３）なめらかな胞子装
飾が含まれる。
培養及び生理的特性
記述培地上で観察された培養特性を第１表に示す。ＩＳ
Ｐ培地Ｎｏ． ４及び改良ベネット（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ
Ｂｅｎｎｅｔ’ ｓ）培地中で吸湿性変化が明らかであ
る。
Ｐ培地Ｎｏ． ４及び改良ベネット（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ
Ｂｅｎｎｅｔ’ ｓ）培地中で吸湿性変化が明らかであ
る。
可溶性馬鈴薯澱粉及びブドウ糖は増殖のために利用され
る。イノシットの利用は疑わしい。生理的特性は第２表
に示してある。
る。イノシットの利用は疑わしい。生理的特性は第２表
に示してある。
細胞壁の化学
株Ｃ３９２８０−４５０−９全細胞加水分解物の分析は
細胞壁成分としてＬＬ−ジアミノピメリン酸、ガラクト
ース、リボース、及びマンノースを示した。従ってこの
菌はタイプＩ細胞壁に割当てられる。燐脂質の分析はホ
スファチジルエタノールアミンとホスファチジルグリセ
リンとの存在を検出し、燐脂質パターンをＰＩＩとして
分類している。
細胞壁成分としてＬＬ−ジアミノピメリン酸、ガラクト
ース、リボース、及びマンノースを示した。従ってこの
菌はタイプＩ細胞壁に割当てられる。燐脂質の分析はホ
スファチジルエタノールアミンとホスファチジルグリセ
リンとの存在を検出し、燐脂質パターンをＰＩＩとして
分類している。
第１表
株Ｃ ３９２８０
９の培養特性
ｌｓＰ６
不良
無色
なし
なし
ＩＳＰ７
不良
無色
なし
なし
灰色、
２ｔｌｌ
第１表
続き
色名及び番号はＡ．コーネラップ（Ａ． Ｋｏｒｎｅｒ
ｕｐ）及びＪ． Ｈ．’７ ンシャ− （Ｊ．Ｈ，Ｗａ
ｎｓｃｈｅｒ）、ラインホールド・カラー・アトラス（
Ｒｅｉｎｈｏｌｄ ＣｏｌｏｒＡｔｌａｓ），Ｒｅｉｎ
ｈｏｌｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ，コペンハーゲン、デンマークカラとった。
ｕｐ）及びＪ． Ｈ．’７ ンシャ− （Ｊ．Ｈ，Ｗａ
ｎｓｃｈｅｒ）、ラインホールド・カラー・アトラス（
Ｒｅｉｎｈｏｌｄ ＣｏｌｏｒＡｔｌａｓ），Ｒｅｉｎ
ｈｏｌｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ，コペンハーゲン、デンマークカラとった。
第２表 株Ｃ ３９２８０− ４５０− ９の生理的特
性増殖温度 １０〜３７℃ｐＨ許容範囲
５．５〜９ ＮａＣ Ｉｔ許容範囲 １％〜８％ゼラチン液
化 十 澱粉加水分解 十 ウレアーゼ ＋ ミルク凝固 ペプトン化 十 硝酸塩還元 リゾチーム 株Ｃ３９２８０−４５０−９はその形態特性及び細胞の
化学からストレプトミセス（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
）としての分類は菌のらせん胞子鎖の菌株群形成及びそ
の次の吸湿性によって確認される。
性増殖温度 １０〜３７℃ｐＨ許容範囲
５．５〜９ ＮａＣ Ｉｔ許容範囲 １％〜８％ゼラチン液
化 十 澱粉加水分解 十 ウレアーゼ ＋ ミルク凝固 ペプトン化 十 硝酸塩還元 リゾチーム 株Ｃ３９２８０−４５０−９はその形態特性及び細胞の
化学からストレプトミセス（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
）としての分類は菌のらせん胞子鎖の菌株群形成及びそ
の次の吸湿性によって確認される。
本発明が特別な好ましい菌株ＡＴＣＣ ５３７３０又は
ＡＴＣＣ ５ ５ ０ ０ ６の使用あるいはその説明
に充分に答える菌に限定されるものではないことは言う
までもない。他のＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０生産性株
あるいはＸ線照射、紫外線、窒素マスタードによる処理
、ファージ暴露などのような通常の手段によって生成さ
せることができる上記閑の突然変異株を含むことを特に
意図している。
ＡＴＣＣ ５ ５ ０ ０ ６の使用あるいはその説明
に充分に答える菌に限定されるものではないことは言う
までもない。他のＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０生産性株
あるいはＸ線照射、紫外線、窒素マスタードによる処理
、ファージ暴露などのような通常の手段によって生成さ
せることができる上記閑の突然変異株を含むことを特に
意図している。
抗生物質製造
のＢ Ｍ Ｙ
０生産性株、好ましくはスト
（ＡＴＣＣ ５ ３ ７ ３ ０）又はその変異株又は
突然変異株を水性栄養培地中で液中好気条件下で培養す
ることによってＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０を製造する
ことができる。菌は資化性炭素源、例えば蔗糖、乳糖、
ブドウ糖、ラムノース、果糖、マンノース、メリビオー
ス、グリセリン又は可溶性澱粉を含む栄養培地中で増殖
する。栄養培地は魚粉、ペプトン、大豆粉、落花生粉、
綿実粉、とうもろこし浸漬液、酵母エキス又はアンモニ
ウム塩のような資化性窒素源をも含むべきである。必要
ならば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシ
ウム、炭酸カルシウム、燐酸塩などのような無機塩が添
加される。所望ならば、銅、マンガン、鉄、亜鉛などの
ような微量元素が培地へ添加され、あるいはこれらを培
地の他の成分の不純物として供給することができる。
突然変異株を水性栄養培地中で液中好気条件下で培養す
ることによってＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０を製造する
ことができる。菌は資化性炭素源、例えば蔗糖、乳糖、
ブドウ糖、ラムノース、果糖、マンノース、メリビオー
ス、グリセリン又は可溶性澱粉を含む栄養培地中で増殖
する。栄養培地は魚粉、ペプトン、大豆粉、落花生粉、
綿実粉、とうもろこし浸漬液、酵母エキス又はアンモニ
ウム塩のような資化性窒素源をも含むべきである。必要
ならば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシ
ウム、炭酸カルシウム、燐酸塩などのような無機塩が添
加される。所望ならば、銅、マンガン、鉄、亜鉛などの
ような微量元素が培地へ添加され、あるいはこれらを培
地の他の成分の不純物として供給することができる。
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０の製造はＢ Ｍ Ｙ−４１
９５０生産性菌の満足な増殖を助ける任意の温度、例え
ば２０〜４０℃で行うことができるが、好ましくは２５
〜３５℃、最も好ましくは２７〜３２℃で発酵を行う。
９５０生産性菌の満足な増殖を助ける任意の温度、例え
ば２０〜４０℃で行うことができるが、好ましくは２５
〜３５℃、最も好ましくは２７〜３２℃で発酵を行う。
培地には好ましくは中性ｐＨが用いられかつ該抗生物質
の製造は一般に約７〜約１Ｚ日間行われる。
の製造は一般に約７〜約１Ｚ日間行われる。
発酵は、フラスコ内、あるいは種々の容量の実験室用又
は工業用発酵槽中で行われる。タンク発酵を用いようと
するときには、該閑の斜面又は土壌培養菌あるいは凍結
乾燥培養菌を含む少量の培地を接種することによって栄
養ブロス中に増殖形接種物を生成させることが望ましい
。この方法で活性接種物を得た後、ＢＭＹ−４ １ ９
５ ０の大規模生産用の発酵タンク培地へ無菌的に移
す。増殖形接種物がその中で生成される培地はＢ Ｍ
Ｙ −４１９５０生産性閑の良好な増殖が得られるよう
なものである限り、タンク内で利用されるものと同じで
あっても、あるいは異なっていてもよい。
は工業用発酵槽中で行われる。タンク発酵を用いようと
するときには、該閑の斜面又は土壌培養菌あるいは凍結
乾燥培養菌を含む少量の培地を接種することによって栄
養ブロス中に増殖形接種物を生成させることが望ましい
。この方法で活性接種物を得た後、ＢＭＹ−４ １ ９
５ ０の大規模生産用の発酵タンク培地へ無菌的に移
す。増殖形接種物がその中で生成される培地はＢ Ｍ
Ｙ −４１９５０生産性閑の良好な増殖が得られるよう
なものである限り、タンク内で利用されるものと同じで
あっても、あるいは異なっていてもよい。
発酵中の撹拌は機械的インペラーによって行うことがで
きかつラード油やシリコーン油のような通常の消泡剤を
所要ならば添加することができる。
きかつラード油やシリコーン油のような通常の消泡剤を
所要ならば添加することができる。
所望のＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０抗生物質の発酵培地
からの単離及びＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０の精製は通
常の抽出及びクロマトグラフィー技術によって達成され
る。好ましい単離及び精製方法は下の実施例２に示され
る。
からの単離及びＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０の精製は通
常の抽出及びクロマトグラフィー技術によって達成され
る。好ましい単離及び精製方法は下の実施例２に示され
る。
上記の発酵方法でＢＭＹ−４１９５０を得た後、ＢＭＹ
−４ １ ９ ５ ０ （７−オキソスタウ口スポリ
ン）はスタウロスポリンの酸化によって化学的に合成す
ることもできることが発見された。代表的な酸化は下記
のようである。
−４ １ ９ ５ ０ （７−オキソスタウ口スポリ
ン）はスタウロスポリンの酸化によって化学的に合成す
ることもできることが発見された。代表的な酸化は下記
のようである。
２０ｍｌパイアル中の２００ｍｇのスタウロスポリンへ
５ｍｊ！の無水塩化メチレンを大過剰（０．２５ｇ）の
酸化マンガンＣＭｎθ２活性化（Ａ ｌｄｒ ｉｃｈ）
コを添加した。この混合物を２３℃で２０分間音波処
理した。追加のＭｎ０２（０． ２ ５ ｇ ）を添加
し、さらに音波処理（２０分間）した。この方法をさら
に４回、２時間にわたって繰返し、この時点で反応混合
物を２３℃で１晩中（さらに１４時間）撹拌させた。
５ｍｊ！の無水塩化メチレンを大過剰（０．２５ｇ）の
酸化マンガンＣＭｎθ２活性化（Ａ ｌｄｒ ｉｃｈ）
コを添加した。この混合物を２３℃で２０分間音波処
理した。追加のＭｎ０２（０． ２ ５ ｇ ）を添加
し、さらに音波処理（２０分間）した。この方法をさら
に４回、２時間にわたって繰返し、この時点で反応混合
物を２３℃で１晩中（さらに１４時間）撹拌させた。
反応混合物へディカライ｝ （Ｏｉｃａｌｉｔｅ）を加
えた後、濾過し、アセトンーメタノール（９：１）で洗
浄し、濃縮した。所望な７−才キソスタウ口スポリンを
真空液体クロマトグラフィーで精製した後、逆相（Ｃ，
．）ＨＰＬＣで精製して５ ｍｇの精製物を得た。
えた後、濾過し、アセトンーメタノール（９：１）で洗
浄し、濃縮した。所望な７−才キソスタウ口スポリンを
真空液体クロマトグラフィーで精製した後、逆相（Ｃ，
．）ＨＰＬＣで精製して５ ｍｇの精製物を得た。
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０の物理化学的性質ＢＭＹ−
４ １ ９ ５ ０の物理化学的性質は下記の通りであ
る。
４ １ ９ ５ ０の物理化学的性質は下記の通りであ
る。
外観：黄色無定形固体
分子式： Ｃ ２８Ｈ ２，Ｎ −０ ４分子量：４８
０ 質量スペクトル： 紫外線スペク トル （Ｍ＋Ｈ）“イオン４８１ 〔フィニンガン４５００シングル・ タアドラポール・マス・ス ベクト口メーター（Ｆｉｎｎｉｇａｎ ４５００ Ｓｉｎｇｌｅ ＱｕａｄｒａｐｏｌｅＭａｓ
ｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）］：ヒューレットーパ
ッカード （Ｈｅｗｌｅｔ−Ｐａｃｋａｒｄ） （ＨＰ）８４５２
Ａダイオード・アレー・スペ クト口フォトメーター （Ｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅ
ｔｅｒ）（濃度０．２ｍｇ／２０−メタノ ール） 中性： ４２０ｎｍ（６５） 、３７２ｎｍ（８１）
、３３７ｎｍ肩、３１８ｎｍ （８０７）、３０８ｎｍ
肩、２８８ｎｍ （４４７）、２６０ｎｍ （３７４）
、２４０ｎｍ（６７１）３６０ ＭＨｚ ’Ｈ−ＮＭＲ
：ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）モデルＡＭ３０００分光
計。ジュアル（Ｄｕａｌ）炭素一プロトンプローブ、５ ｍＩＴｌＯ 溶剤： ｄ ６−ＤＭＳＤ 観察された化学シフト（ｐｐｍ） ： １１．０１ （ｓ，ＩＨ）． ９．１９ （ｄ，ＩＨ
）９、０６ （ｄ，ＩＨ）， ８．０１ （ｄ，ＩＨ）
，７．７０ （ｄ，ＬＨ）， ７．５６ （ｍ，ＩＮ）
，７．４７ （ｍ，ＩＮ）， ７．３９ （ｍ，ＩＮ）
，７．３１ （ｍ，ＩＨ）， ６．７４ （ｍ．ＩＨ）
．４．１０ （ｍ，ｉｌｌ）， ３．２２ （ｓ，３日
），２．３２ （ｓ，３Ｈ）． １．９６ （ｍ，ＩＨ
），１、７５ （ｍ，ＩＨ）， １．４０ （ｓ，３Ｈ
）。
０ 質量スペクトル： 紫外線スペク トル （Ｍ＋Ｈ）“イオン４８１ 〔フィニンガン４５００シングル・ タアドラポール・マス・ス ベクト口メーター（Ｆｉｎｎｉｇａｎ ４５００ Ｓｉｎｇｌｅ ＱｕａｄｒａｐｏｌｅＭａｓ
ｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）］：ヒューレットーパ
ッカード （Ｈｅｗｌｅｔ−Ｐａｃｋａｒｄ） （ＨＰ）８４５２
Ａダイオード・アレー・スペ クト口フォトメーター （Ｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅ
ｔｅｒ）（濃度０．２ｍｇ／２０−メタノ ール） 中性： ４２０ｎｍ（６５） 、３７２ｎｍ（８１）
、３３７ｎｍ肩、３１８ｎｍ （８０７）、３０８ｎｍ
肩、２８８ｎｍ （４４７）、２６０ｎｍ （３７４）
、２４０ｎｍ（６７１）３６０ ＭＨｚ ’Ｈ−ＮＭＲ
：ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）モデルＡＭ３０００分光
計。ジュアル（Ｄｕａｌ）炭素一プロトンプローブ、５ ｍＩＴｌＯ 溶剤： ｄ ６−ＤＭＳＤ 観察された化学シフト（ｐｐｍ） ： １１．０１ （ｓ，ＩＨ）． ９．１９ （ｄ，ＩＨ
）９、０６ （ｄ，ＩＨ）， ８．０１ （ｄ，ＩＨ）
，７．７０ （ｄ，ＬＨ）， ７．５６ （ｍ，ＩＮ）
，７．４７ （ｍ，ＩＮ）， ７．３９ （ｍ，ＩＮ）
，７．３１ （ｍ，ＩＨ）， ６．７４ （ｍ．ＩＨ）
．４．１０ （ｍ，ｉｌｌ）， ３．２２ （ｓ，３日
），２．３２ （ｓ，３Ｈ）． １．９６ （ｍ，ＩＨ
），１、７５ （ｍ，ＩＨ）， １．４０ （ｓ，３Ｈ
）。
溶解度：ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ） 、テトラ
ヒド口フラン（ＴＩＩＦ） 、ＣＨＣＩ ３−Ｃｌ３０
１｛（２：１ ｖ／ｖ）に可溶。
ヒド口フラン（ＴＩＩＦ） 、ＣＨＣＩ ３−Ｃｌ３０
１｛（２：１ ｖ／ｖ）に可溶。
呈色反応：ヨウ化白金酸に対して紫色陽性Ｒｆ値：シリ
カゲル６０ ＴＬＣ［メルク個ｅｒｋ）］ ；［：Ｈ
［：Ａ ３ （：Ｈ３０Ｈ（９：１ ｖ／ｖ） ： ０
． ４２。ＴＨＦ：０． ２０ｏワットマン（Ｗｈａｔ
ｍａｎ）ＭＫ Ｃ＋ａ：０、ＬＭ ＮＨ４０ＡＣ ＴＨ
Ｆ（１’ｌ ｖ／ｖ）’ ０．２５ｏＢＭＹ−４ １
９ ５ ０の特性に基づいて、該抗生物質は構造式 Ｈ を有する新規化合物７ オキソスタウ口スポリン であると決定された。
カゲル６０ ＴＬＣ［メルク個ｅｒｋ）］ ；［：Ｈ
［：Ａ ３ （：Ｈ３０Ｈ（９：１ ｖ／ｖ） ： ０
． ４２。ＴＨＦ：０． ２０ｏワットマン（Ｗｈａｔ
ｍａｎ）ＭＫ Ｃ＋ａ：０、ＬＭ ＮＨ４０ＡＣ ＴＨ
Ｆ（１’ｌ ｖ／ｖ）’ ０．２５ｏＢＭＹ−４ １
９ ５ ０の特性に基づいて、該抗生物質は構造式 Ｈ を有する新規化合物７ オキソスタウ口スポリン であると決定された。
生物学的活性
ＢＭＹ．−４ １ ９ ５ ０は標準生体外スクリーニ
ング試験で抗菌活性を示すことがわかった。例えば、て
６．２５μｇ／ｍ１、エンテロコックス・ファエカリス
（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）
Ａ ２０６８８に対して１２．５μｇ／ｍ１のＭＩＣ
（最小阻止濃度）を示す。
ング試験で抗菌活性を示すことがわかった。例えば、て
６．２５μｇ／ｍ１、エンテロコックス・ファエカリス
（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）
Ａ ２０６８８に対して１２．５μｇ／ｍ１のＭＩＣ
（最小阻止濃度）を示す。
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０は、通常の生体外系及び生
体内実験動物腫瘍系で試験するとき、抗腫瘍活性をも示
す。
体内実験動物腫瘍系で試験するとき、抗腫瘍活性をも示
す。
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０の抗腫瘍試験のより詳細な
記載を以下に示す。
記載を以下に示す。
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０をネズミ及びヒトの腫瘍細
胞系に対する生体外細胞毒活性について試験した。
胞系に対する生体外細胞毒活性について試験した。
生体内では、ネズミの白血病腫瘍モデルに対する活性を
試験しｔこ。生体外では、マイトマイシンＣ及びシスプ
ラチンを参照化合物として使用したが、生体内参照とし
てはエトポシド（ＶＰ−１６）を用いた。
試験しｔこ。生体外では、マイトマイシンＣ及びシスプ
ラチンを参照化合物として使用したが、生体内参照とし
てはエトポシド（ＶＰ−１６）を用いた。
８１６−ＦＩＯ（ネズミ黒色＠）及びＨＣＴ１１６ （
ヒト結腸癌細胞クローン）細胞をコンプリート・マッコ
イ培地（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＭｃＣｏｙｓ Ｍｅｄｉａ
）で培養した。この培地はマッコイ （ＭｃＣｏｙｓ）
５ Ａ培地４ ２ （ｌｉｔ’＋水６ｍｌ中の５０
０ｍｇの炭酸水素ナトリウム、Ｌ−セリン６．５６ｍｇ
，Ｌ−アスパラギン１． ５ ｍｇ、水２ｄ中の８ ２
． ４ ｍｇのピルビン酸ナトリウム、必須アミノ酸〔
５０Ｘ、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）］６．２５ｍｊ！、非必
須アミノ酸［１００Ｘ、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）） ３．
０ ｍｌ， ３ ｍｌのし−グルタミン（２００ＭＭ
） 、３艷のＭＥＭビタミン〔ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）
］、ペニシリン／ストレプトマイシン〔ギブコ（Ｇｉｂ
ｃｏ）］６．２５ｍｌ及び５０ｒｄの熱不活性化、画定
胎児子牛血清からなる。
ヒト結腸癌細胞クローン）細胞をコンプリート・マッコ
イ培地（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＭｃＣｏｙｓ Ｍｅｄｉａ
）で培養した。この培地はマッコイ （ＭｃＣｏｙｓ）
５ Ａ培地４ ２ （ｌｉｔ’＋水６ｍｌ中の５０
０ｍｇの炭酸水素ナトリウム、Ｌ−セリン６．５６ｍｇ
，Ｌ−アスパラギン１． ５ ｍｇ、水２ｄ中の８ ２
． ４ ｍｇのピルビン酸ナトリウム、必須アミノ酸〔
５０Ｘ、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）］６．２５ｍｊ！、非必
須アミノ酸［１００Ｘ、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）） ３．
０ ｍｌ， ３ ｍｌのし−グルタミン（２００ＭＭ
） 、３艷のＭＥＭビタミン〔ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）
］、ペニシリン／ストレプトマイシン〔ギブコ（Ｇｉｂ
ｃｏ）］６．２５ｍｌ及び５０ｒｄの熱不活性化、画定
胎児子牛血清からなる。
両細胞系を対数期細胞増殖中に採取し、１５０μｌ培地
中３６００細胞を９６ウエルミクロタイタープレートの
各ウエル中に入れた。空気９５％、二酸化炭素５％加湿
インキュベーター中で３７℃で２４時間インキユベーシ
ョンして細胞をプレートヘ付着させた後、試料／参照薬
品の５０μｌをウエルの最上列の１２のうちの１１へ入
れるが、１２番目には５０μｌの培地を入れる。薬品／
培地をプレートの８ウエルを下へ逐次希釈（４倍希釈）
する。薬品／培地の存在下で細胞を次に７２時間インキ
ユベートする。１０％ホル７リンで固定した後、薬品で
死んだ細胞をプレートから洗浄除去するが、生存細胞は
０． ０ ０ ７ ５％クリスタルバイオレットで染色
される。乾燥後、染着物を１０％エタノール及び１％酢
酸で処理し、プレートをダイナテク（Ｄｙｎａｔｅｃｈ
） ＭＲ ６ ０ ０プレート読み機で定量化し、ＩＣ
ｓｏ値（５０％の細胞の死又は増殖阻止が起こる薬品濃
度）を計算する。下表はＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０及
び標準薬品マイトマイシンＣ及びシスプラチンについて
測定されたデータを示す。
中３６００細胞を９６ウエルミクロタイタープレートの
各ウエル中に入れた。空気９５％、二酸化炭素５％加湿
インキュベーター中で３７℃で２４時間インキユベーシ
ョンして細胞をプレートヘ付着させた後、試料／参照薬
品の５０μｌをウエルの最上列の１２のうちの１１へ入
れるが、１２番目には５０μｌの培地を入れる。薬品／
培地をプレートの８ウエルを下へ逐次希釈（４倍希釈）
する。薬品／培地の存在下で細胞を次に７２時間インキ
ユベートする。１０％ホル７リンで固定した後、薬品で
死んだ細胞をプレートから洗浄除去するが、生存細胞は
０． ０ ０ ７ ５％クリスタルバイオレットで染色
される。乾燥後、染着物を１０％エタノール及び１％酢
酸で処理し、プレートをダイナテク（Ｄｙｎａｔｅｃｈ
） ＭＲ ６ ０ ０プレート読み機で定量化し、ＩＣ
ｓｏ値（５０％の細胞の死又は増殖阻止が起こる薬品濃
度）を計算する。下表はＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０及
び標準薬品マイトマイシンＣ及びシスプラチンについて
測定されたデータを示す。
生体外抗腫瘍活性（ＩＣ，。μｇ／ｍｌ！．又は希釈）
薬品 Ｂ１６−ＦＩＯ ＨＣＴ−１１６ＢＭＹ−４
１９５０ ０．９８μｇ／ｍｆ Ｏ．２４ｕ
ｇ／ｍｆシスプラチン ３．９ ｔ−ｔｇ／−１５
．６ ｔｔｇ／ｍｌマイトマイシンＣ Ｏ．９８μｇ
／ｍｌ．０．９８μｇ／一ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０
の生体内活性をネズミ白血病腫瘍系で測定した。雌ＣＤ
Ｆ，マウスを、１０６個のリンパ球白血病Ｐ３８８細胞
を含む希釈腹水０．５ｍｉｌ’で腹腔内接種した。１０
匹のマウスは未処理であったが、この群の中間生存期間
は１０日であった。各４匹のマウス３群を、腫瘍移植の
１、２、３、４及び５日後にＢＭＹ−４ １ ９ ５
０で処理した。ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０は初めにＤ
ＭＳ○、Ｔｗｅｅｎ８ ０及び緩衝食塩水に溶解した後
、腹腔内投与した。１８及び６ｍｇ／ｋｇ／日で処理し
た群は薬品誘発毒性を受け、全マウスが７日前に死亡し
た。２ｍｇ／ｋｇ／日を投与された第３群は中間生存期
間が１３日であった。かくして％Ｔ／Ｃ （薬品処理群
の生存期間／未処理対照群の生存期間×１００）は１３
０％であった。このネズミ腫瘍試験の抗腫瘍活性の基準
は１２５％以上の％Ｔ／Ｃである。かくして、ＢＭＹ−
４ １ ９ ５ ０はＰ３８８８ネズミ白血病腫瘍モデ
ルに於ける抗腫瘍活性の基準を満たしている。
薬品 Ｂ１６−ＦＩＯ ＨＣＴ−１１６ＢＭＹ−４
１９５０ ０．９８μｇ／ｍｆ Ｏ．２４ｕ
ｇ／ｍｆシスプラチン ３．９ ｔ−ｔｇ／−１５
．６ ｔｔｇ／ｍｌマイトマイシンＣ Ｏ．９８μｇ
／ｍｌ．０．９８μｇ／一ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０
の生体内活性をネズミ白血病腫瘍系で測定した。雌ＣＤ
Ｆ，マウスを、１０６個のリンパ球白血病Ｐ３８８細胞
を含む希釈腹水０．５ｍｉｌ’で腹腔内接種した。１０
匹のマウスは未処理であったが、この群の中間生存期間
は１０日であった。各４匹のマウス３群を、腫瘍移植の
１、２、３、４及び５日後にＢＭＹ−４ １ ９ ５
０で処理した。ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０は初めにＤ
ＭＳ○、Ｔｗｅｅｎ８ ０及び緩衝食塩水に溶解した後
、腹腔内投与した。１８及び６ｍｇ／ｋｇ／日で処理し
た群は薬品誘発毒性を受け、全マウスが７日前に死亡し
た。２ｍｇ／ｋｇ／日を投与された第３群は中間生存期
間が１３日であった。かくして％Ｔ／Ｃ （薬品処理群
の生存期間／未処理対照群の生存期間×１００）は１３
０％であった。このネズミ腫瘍試験の抗腫瘍活性の基準
は１２５％以上の％Ｔ／Ｃである。かくして、ＢＭＹ−
４ １ ９ ５ ０はＰ３８８８ネズミ白血病腫瘍モデ
ルに於ける抗腫瘍活性の基準を満たしている。
治療的使用
上述のように、ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０は抗菌活性
、ような細菌に対する活性を示す。
、ような細菌に対する活性を示す。
従って、本発明は、ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０に感じ
やすい微生物感染の治療法であって、宿主、例えば温血
噛乳類へ、かかる治療が必要なときに、かかる感染を治
療するのに充分な量のＢＭＹ４１９５０又はその製剤組
成物を投与することを含む治療法を提供する。
やすい微生物感染の治療法であって、宿主、例えば温血
噛乳類へ、かかる治療が必要なときに、かかる感染を治
療するのに充分な量のＢＭＹ４１９５０又はその製剤組
成物を投与することを含む治療法を提供する。
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０は啼乳動物の悪性腫瘍に対
する抗腫瘍活性をも示す。
する抗腫瘍活性をも示す。
本発明は、もう１つの面に於て、ＢＭＹ４１９５０に感
受性の悪性腫瘍にかかつている晴乳動物宿主の治療法で
あって、該宿主へ腫瘍抑制量のＢＭＹ−４ １ ９ ５
０又はその製剤組成物を投与することを含む治療法を
提供する。
受性の悪性腫瘍にかかつている晴乳動物宿主の治療法で
あって、該宿主へ腫瘍抑制量のＢＭＹ−４ １ ９ ５
０又はその製剤組成物を投与することを含む治療法を
提供する。
さらにもう１つの面に於で、本発明は、製剤上受容でき
る不活性担体又は希釈剤と組み合わせ有効な抗菌又は腫
瘍抑制量のＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０を含む製剤組成
物を提供する。かかる組成物は他の抗菌剤又は抗腫瘍剤
を含むことができかつ所望な投与ルートのために適当な
任意の形に作ることができる。かかる組成物の例には、
錠剤、カプセル、丸剤、散剤及び穎粒のような経口投与
用の固体組成物、液剤、懸濁液、シロップ又はエリキシ
ルのような経口投与用液体組成物及び滅菌溶液、懸濁液
又はエマルジョンのような非経口投与用製剤が含まれる
。これらの組成物は、使用直前に滅菌水、生理的食塩水
又は他の滅菌注射用媒質に溶解させることができる滅菌
固体組成物の形で製造することができる。
る不活性担体又は希釈剤と組み合わせ有効な抗菌又は腫
瘍抑制量のＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０を含む製剤組成
物を提供する。かかる組成物は他の抗菌剤又は抗腫瘍剤
を含むことができかつ所望な投与ルートのために適当な
任意の形に作ることができる。かかる組成物の例には、
錠剤、カプセル、丸剤、散剤及び穎粒のような経口投与
用の固体組成物、液剤、懸濁液、シロップ又はエリキシ
ルのような経口投与用液体組成物及び滅菌溶液、懸濁液
又はエマルジョンのような非経口投与用製剤が含まれる
。これらの組成物は、使用直前に滅菌水、生理的食塩水
又は他の滅菌注射用媒質に溶解させることができる滅菌
固体組成物の形で製造することができる。
抗菌剤として使用するためには、ＢＭＹ４１９５０又は
その製剤組成物を、活性成分の濃度が処理される特別な
菌に対する最小阻止濃度より高いように投与する。
その製剤組成物を、活性成分の濃度が処理される特別な
菌に対する最小阻止濃度より高いように投与する。
抗腫瘍剤として用いるためには、ＢＭＹ４１９５０又は
その製剤組成物をＥＰ ２３８．０１１号に記載されて
いる化合物ＵＣＮ−０ １と実質的に同じ方法で投与す
ることができる。与えられた噛乳類宿主に対するＢＭＹ
−４ １ ９ ５ ０の最適投与量及び投与法は当業者
が容易に確かめることができる。勿論、用いられるＢＭ
Ｙ−４ １ ９ ５ ０の実際の投与量は調合されるそ
の組成物、投与形式及びその投与部位、宿主及び治療さ
れる疾病によって異なることは言うまでもない。薬品の
作用を変化させる年令、性別、体重、食事、投与時間、
投与ルート、排泄速度、患者の状態、薬品の組み合わせ
、反応感受性及び病気の重篤度を含む多くの因子を考慮
に入れる。
その製剤組成物をＥＰ ２３８．０１１号に記載されて
いる化合物ＵＣＮ−０ １と実質的に同じ方法で投与す
ることができる。与えられた噛乳類宿主に対するＢＭＹ
−４ １ ９ ５ ０の最適投与量及び投与法は当業者
が容易に確かめることができる。勿論、用いられるＢＭ
Ｙ−４ １ ９ ５ ０の実際の投与量は調合されるそ
の組成物、投与形式及びその投与部位、宿主及び治療さ
れる疾病によって異なることは言うまでもない。薬品の
作用を変化させる年令、性別、体重、食事、投与時間、
投与ルート、排泄速度、患者の状態、薬品の組み合わせ
、反応感受性及び病気の重篤度を含む多くの因子を考慮
に入れる。
下記の実施例は説明のためのみのものであり、本発明の
範囲を限定するためのものではない。ヌートリソイ （
Ｎｕｔｒｉｓｏｙ）は米国イリノイス州デカター（Ｄｅ
ｃａｔｕｒ）のアーチャーズ・ダニエルズ・ミドランド
・カンパニー （Ａｒｃｈｅｒｓ Ｄａｎｉｅｌｓ Ｍ
ｉｄｌａｎｄＣＯ，）から発売されている大豆粉である
。ファ−マメディア（Ｐｈａｒｍａｍｅｄ ｉａ）は米
国テキサス州フオートウォースのバッキー・オイル・シ
ード・プロダクッ・カンパ−− − （Ｂｕｃｋｅｙｅ
Ｏｉｌ Ｓｅｅｄ ＰｒｏｄｕｃｔｓＣｏ．）から市
販されている綿実内胚乳粉である。
範囲を限定するためのものではない。ヌートリソイ （
Ｎｕｔｒｉｓｏｙ）は米国イリノイス州デカター（Ｄｅ
ｃａｔｕｒ）のアーチャーズ・ダニエルズ・ミドランド
・カンパニー （Ａｒｃｈｅｒｓ Ｄａｎｉｅｌｓ Ｍ
ｉｄｌａｎｄＣＯ，）から発売されている大豆粉である
。ファ−マメディア（Ｐｈａｒｍａｍｅｄ ｉａ）は米
国テキサス州フオートウォースのバッキー・オイル・シ
ード・プロダクッ・カンパ−− − （Ｂｕｃｋｅｙｅ
Ｏｉｌ Ｓｅｅｄ ＰｒｏｄｕｃｔｓＣｏ．）から市
販されている綿実内胚乳粉である。
Ｓ． Ｊ． 澱粉〔スタクリブス（Ｓｔａｃｌｉｐｓｅ
） Ｊ−ＵＢ＃扮〕は米国イリノイス州デカター（Ｄ
ｅｃａｔｕｒ）のＡ， Ｅ．ステーリー・マヌファクチ
ャリング・カンパニー （ Ａ，Ｅ．Ｓｔａｌｅｙ Ｍ
ａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏ， ）が発売している
とうもろこし澱粉である。
） Ｊ−ＵＢ＃扮〕は米国イリノイス州デカター（Ｄ
ｅｃａｔｕｒ）のＡ， Ｅ．ステーリー・マヌファクチ
ャリング・カンパニー （ Ａ，Ｅ．Ｓｔａｌｅｙ Ｍ
ａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏ， ）が発売している
とうもろこし澱粉である。
実施例１
（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒ
ｅｕｓ）株Ｒ１００６９（ＡＴＣＣ ５ ５ ０ ０
６）を保持し、試験管内のＣａＣＯ３で補充された酵母
エキスー麦芽エキス寒天の寒天斜面上に移した。この培
地はデキストロース４．０ｇ，酵母エキス４．０ｇ、麦
芽エキス１０ｇ１炭酸カルシウム１．５ｇ及び寒天２０
ｇと１１にするための蒸留水とからなる。おのおのが移
入された寒天斜面を２８℃で５〜７日間インキユベート
した。生産期の接種物をつくるため、斜面培養からの表
面増殖菌を、蒸留水１ｌにしたセレロース３０ｇ１ファ
ーマメディア（Ｐｈａｒｍａｍｅｄｉａ ，綿実内胚乳
粉）１０ｇ，ヌートリソイ （Ｎｕｔｒ ｉｓｏｙ，大
豆粉）１０ｇ、炭酸カルシウム３．０ｇからなる滅菌培
地１ ０ ０ｍｆを含む５ ０ ０ｍｌのエルレンマイ
ヤーフラスコへ移した。この増殖形培養物を２５ｏｒｐ
ｍにセットしたロータリーシェーカーで２８℃で４８時
間インキユベートした。この増殖形培養物５−を、蒸留
水で１ｌにしたＳ．Ｊ．澱粉（とうもろこし澱粉） ６
０ｇ、セレロース１０ｇ、ヌートリソイ （Ｎｕｔｒｉ
ｓｏｙ） １ ０ ｇ，デヒ゛ツタード・ブリュワー
ズ（Ｄｅｂｉｔｔｅｒｅｄ Ｂｒｅｗｅｒ’ｓ）酵母５
ｇ，硫酸第一鉄７水化物１ｇ、硫酸アンモニウムｌｇ、
塩基性燐酸アンモニウムＩｇ及び炭酸カルシウム１０ｇ
からなる生産培地１００１１１１をおのおのが含む５
０ ０ｍｊ２のエルレンマイヤーフラスコ中へ接種した
。この生産培養物をロータリーシェーカーで２８℃でイ
ンキユベートし、回転速度を２５Ｏｒｐｍにセットした
。最適生産は一般に２１６〜２６４時間で起こった。
ｅｕｓ）株Ｒ１００６９（ＡＴＣＣ ５ ５ ０ ０
６）を保持し、試験管内のＣａＣＯ３で補充された酵母
エキスー麦芽エキス寒天の寒天斜面上に移した。この培
地はデキストロース４．０ｇ，酵母エキス４．０ｇ、麦
芽エキス１０ｇ１炭酸カルシウム１．５ｇ及び寒天２０
ｇと１１にするための蒸留水とからなる。おのおのが移
入された寒天斜面を２８℃で５〜７日間インキユベート
した。生産期の接種物をつくるため、斜面培養からの表
面増殖菌を、蒸留水１ｌにしたセレロース３０ｇ１ファ
ーマメディア（Ｐｈａｒｍａｍｅｄｉａ ，綿実内胚乳
粉）１０ｇ，ヌートリソイ （Ｎｕｔｒ ｉｓｏｙ，大
豆粉）１０ｇ、炭酸カルシウム３．０ｇからなる滅菌培
地１ ０ ０ｍｆを含む５ ０ ０ｍｌのエルレンマイ
ヤーフラスコへ移した。この増殖形培養物を２５ｏｒｐ
ｍにセットしたロータリーシェーカーで２８℃で４８時
間インキユベートした。この増殖形培養物５−を、蒸留
水で１ｌにしたＳ．Ｊ．澱粉（とうもろこし澱粉） ６
０ｇ、セレロース１０ｇ、ヌートリソイ （Ｎｕｔｒｉ
ｓｏｙ） １ ０ ｇ，デヒ゛ツタード・ブリュワー
ズ（Ｄｅｂｉｔｔｅｒｅｄ Ｂｒｅｗｅｒ’ｓ）酵母５
ｇ，硫酸第一鉄７水化物１ｇ、硫酸アンモニウムｌｇ、
塩基性燐酸アンモニウムＩｇ及び炭酸カルシウム１０ｇ
からなる生産培地１００１１１１をおのおのが含む５
０ ０ｍｊ２のエルレンマイヤーフラスコ中へ接種した
。この生産培養物をロータリーシェーカーで２８℃でイ
ンキユベートし、回転速度を２５Ｏｒｐｍにセットした
。最適生産は一般に２１６〜２６４時間で起こった。
実施例２
溶剤は使用前に再蒸留しなかった。メタノール、酢酸エ
チル、クロロホルム、アセトン及びエチルエーテルはＡ
ＣＳ試薬等級であった。水とはバーンスデッド・ナノピ
ュア（Ｂａｒｎｓｔｅａｄ Ｎａｎｏｐｕｒｅ） ＩＩ
システム中を通した自家用（ｉｎ−ｈｏｕｓｅ）脱イ才
ン水である。テトラヒド口フランはＢ＆ＪブランドＨＰ
ＬＣ等級溶剤であった。酢酸アンモニウムはフィッシャ
ー （Ｆｉｓｈｅｒ） ＨＰＬＣ等級であった。
チル、クロロホルム、アセトン及びエチルエーテルはＡ
ＣＳ試薬等級であった。水とはバーンスデッド・ナノピ
ュア（Ｂａｒｎｓｔｅａｄ Ｎａｎｏｐｕｒｅ） ＩＩ
システム中を通した自家用（ｉｎ−ｈｏｕｓｅ）脱イ才
ン水である。テトラヒド口フランはＢ＆ＪブランドＨＰ
ＬＣ等級溶剤であった。酢酸アンモニウムはフィッシャ
ー （Ｆｉｓｈｅｒ） ＨＰＬＣ等級であった。
ブロス濾過
全発酵ブロスをＤｉｃａｌｉｔｅ（ｓｐｅｅｄｐｌｕｓ
）濾過助剤含有ソーン（ｓｅｗｎ）フィルターバックで
ライニングされた１２′ トルハースト・ラボラトリー
・センタースラング・セントリフユーガル・フィルタ０
ユニット （Ｔｏｌｈｕｒｓｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
ＣｅｎｔｅｒｓｌｕｎｇＣｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆ
ｉｌｔｅｒ ［Ｊｎｉｔ（Ｍｏｄｅｌ ＩＢ１５．Ａｒ
ｎｅｔｅｋ，！ｎｃ．） ］で濾過した。
）濾過助剤含有ソーン（ｓｅｗｎ）フィルターバックで
ライニングされた１２′ トルハースト・ラボラトリー
・センタースラング・セントリフユーガル・フィルタ０
ユニット （Ｔｏｌｈｕｒｓｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
ＣｅｎｔｅｒｓｌｕｎｇＣｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆ
ｉｌｔｅｒ ［Ｊｎｉｔ（Ｍｏｄｅｌ ＩＢ１５．Ａｒ
ｎｅｔｅｋ，！ｎｃ．） ］で濾過した。
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
シリカゲル６０Ｆ−２５４プレート（ＢＭ， ｒｅａｇ
ｅｎｔｓ，Ｃａｔ． ５７６５ 、５ｃｍＸ １ ０ｃ
ｍＸ０．２ ５ｍｍ厚》で正相ＴＬＣを行った。逆相Ｔ
ＬＣはワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＭＫＣ．．プレー
ト （Ｃａｔ． ４８０３−１１０ 、０． ２ ｍｍ
厚）で行った。プレートは、キャップ付きワットマン円
筒形ジャー及び１０ｍｆの溶離液で展開した。展開、風
乾したプレートを２５４及び２６６ｎｍ紫外線で可視化
した。正相ＴＬＣプレートもアルカロイド用ヨウ化白金
酸噴霧試薬で可視化した。
ｅｎｔｓ，Ｃａｔ． ５７６５ 、５ｃｍＸ １ ０ｃ
ｍＸ０．２ ５ｍｍ厚》で正相ＴＬＣを行った。逆相Ｔ
ＬＣはワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＭＫＣ．．プレー
ト （Ｃａｔ． ４８０３−１１０ 、０． ２ ｍｍ
厚）で行った。プレートは、キャップ付きワットマン円
筒形ジャー及び１０ｍｆの溶離液で展開した。展開、風
乾したプレートを２５４及び２６６ｎｍ紫外線で可視化
した。正相ＴＬＣプレートもアルカロイド用ヨウ化白金
酸噴霧試薬で可視化した。
真空液体クロマトグラフイ−（ＶＬＣ）ＶＬＣ装置は封
入ガラスディスク（Ｍポロジティ、１ ０−１ ５μ）
、真空用側ホース及び受器フラスコ取付け用下部２ ４
／４ ０ジョイントを含むブフナー漏斗（Ｋｏｎｔｅｓ
， Ａｒｔ， Ｋ−９５４１００）からなる。
入ガラスディスク（Ｍポロジティ、１ ０−１ ５μ）
、真空用側ホース及び受器フラスコ取付け用下部２ ４
／４ ０ジョイントを含むブフナー漏斗（Ｋｏｎｔｅｓ
， Ａｒｔ， Ｋ−９５４１００）からなる。
漏斗に吸着剤をドライ充填し、充分な量の最小極性溶出
溶剤を真空下に吸い込んで、密に充填した高さ５ｃｍの
吸着剤床を形成させた。
溶剤を真空下に吸い込んで、密に充填した高さ５ｃｍの
吸着剤床を形成させた。
試料は、予め吸着させて調製された漏斗へ装填してもよ
く、あるいは最小極性溶出溶剤の溶液で装填される。
く、あるいは最小極性溶出溶剤の溶液で装填される。
同質溶離液にて所定容量溶出するか、あるいは溶離液の
極性を増加して段階勾配で溶出する。各容量の溶出溶媒
使用の後、漏斗は吸引乾燥する。
極性を増加して段階勾配で溶出する。各容量の溶出溶媒
使用の後、漏斗は吸引乾燥する。
半分取ＨＰＬＣ
下記の構成部品を用いてＨＰＬＣ装置をつくった。ウォ
ーターズ・アソシェーツ（ＷａｔｅｒｓＡｓｓｏｃｉａ
ｔｅｓ）モデル５９０ソルベント・デリバリー０システ
ム（Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ
）ポンプ、３２０ｎｍにセットしたクナバー（Ｋｎａｖ
ｅｒ）モデル８７可変波長検出器、ウォーターズ・アソ
シエーツ（ＷａｔｅｒｓＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ）モデル
Ｕ６Ｋ注入器、ヒース（Ｈｅａｔｈ）モデルＳＲ−２
０ ４ストリップ・チャート・レコーダー、ワットマン
・パーティシル（Ｗｈａｔｍａｎ Ｐａｒｔｉｓｉｌ）
１ ６ ０ Ｄ Ｓ − ３カラム（１０ｍｍＸ５
０ｃｍ）。各装置を３１６ステンレス鋼チューブ（外径
１． ６ ｍｍ、内径０．２３１１１［Ｄ）で連結した
。
ーターズ・アソシェーツ（ＷａｔｅｒｓＡｓｓｏｃｉａ
ｔｅｓ）モデル５９０ソルベント・デリバリー０システ
ム（Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ
）ポンプ、３２０ｎｍにセットしたクナバー（Ｋｎａｖ
ｅｒ）モデル８７可変波長検出器、ウォーターズ・アソ
シエーツ（ＷａｔｅｒｓＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ）モデル
Ｕ６Ｋ注入器、ヒース（Ｈｅａｔｈ）モデルＳＲ−２
０ ４ストリップ・チャート・レコーダー、ワットマン
・パーティシル（Ｗｈａｔｍａｎ Ｐａｒｔｉｓｉｌ）
１ ６ ０ Ｄ Ｓ − ３カラム（１０ｍｍＸ５
０ｃｍ）。各装置を３１６ステンレス鋼チューブ（外径
１． ６ ｍｍ、内径０．２３１１１［Ｄ）で連結した
。
溶離液を４−／分でポンプ輸送した。
単離：
抽出
全ブロス（１ ０ Ｉ！＞を８００ｇのＤｉｃａｌｉｔ
ｅ濾過助剤を用いて遠心分離濾過した。菌糸マットをテ
トラヒド口フラン（８β）中に３時間懸濁し、２４ｃｍ
ブフナー漏斗（Ｃｏｏｒｓ Ｎｏ． １ １ ）を通し
て濾過し、固体を追加の２１のアセトンで洗浄した。
ｅ濾過助剤を用いて遠心分離濾過した。菌糸マットをテ
トラヒド口フラン（８β）中に３時間懸濁し、２４ｃｍ
ブフナー漏斗（Ｃｏｏｒｓ Ｎｏ． １ １ ）を通し
て濾過し、固体を追加の２１のアセトンで洗浄した。
有機相を合わせ、減圧下で蒸発して残留物３３ｇを得た
。
。
濾液を、分液別の漏斗でＴＨＦ （：ｌ）とエチルエー
テル（６ｎ）との混合物で１回抽出した。
テル（６ｎ）との混合物で１回抽出した。
有機層を減圧下で溶剤を除去して４００ｍｇの残留物を
得た。濾液を酢酸エチル（２１）で第２回の抽出を行い
、濃縮後２６６ｍｇの残留物を得た。
得た。濾液を酢酸エチル（２１）で第２回の抽出を行い
、濃縮後２６６ｍｇの残留物を得た。
上記抽出法で得た３つの粗製残留物をさらに精製するた
めに合わせた。
めに合わせた。
酸一塩基抽出
粗製固体（３３．７６ｇ）を０． ５ Ｍ Ｈ［［ （
ｐＨ１． ５ ）２５０ｍｊ！に溶解し、この酸性水層
を分液の漏斗で１ ５ ０ｍｌずつのクロロホルムで３
回抽出した。有機層を合わせ、真空中で濃縮して４．
０ ４ ｇの残留物を得た。
ｐＨ１． ５ ）２５０ｍｊ！に溶解し、この酸性水層
を分液の漏斗で１ ５ ０ｍｌずつのクロロホルムで３
回抽出した。有機層を合わせ、真空中で濃縮して４．
０ ４ ｇの残留物を得た。
水層をアンモニア水でｐＨ９．５〜１０に調節した。
１５０ｄずつのクロロホルムでさらに３回洗浄して、有
機層を合わせて濃縮した後、１． １ １ ｇの残留物
を得た。
機層を合わせて濃縮した後、１． １ １ ｇの残留物
を得た。
第１回ＶＬＣ一段階勾配
３ ０ ｍｌＫｏｎｔｅｓ焼結ガラス漏斗に、通常の方
法で、Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ Ｓｉ ６０ 、１５−
２５μ（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｒｔ．９３３６）
１ ６ ｇを充填した。塩基性ｐＨでのクロロホルム
抽出物（１．１１ｇ）を追加の３ｇの吸着剤上に予め吸
着させ、クロロホルムスラリーとして漏斗に装填した。
法で、Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ Ｓｉ ６０ 、１５−
２５μ（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｒｔ．９３３６）
１ ６ ｇを充填した。塩基性ｐＨでのクロロホルム
抽出物（１．１１ｇ）を追加の３ｇの吸着剤上に予め吸
着させ、クロロホルムスラリーとして漏斗に装填した。
下記の容量及び組成の溶離液から９分画が得られた。
分画Ｎｏ 溶離液容量 溶離液組成 残留物重量１
１００ ｍｌ［：Ｈ［：Ｉｌ３１７１ ｍｇ２
１００ ｍＲ ＣＨＣｊ！ ３
３２ ｍｇ３ １００ ｍｊｉ！ ＣＨ
［：ｆ ３１％ＭｅＯＨ １３ ｍｇ４ １
００ ｄ ＣＨＣｊ’ ３−１％ＭｅＯＨ ５
４ ｍｇ５ １００ ｒｄ ＣＨ（［ ３−
２％ＭｅＯ８ ２０８ ｍｇ６ １００ ｍｉ
！ ＣＨＣｊｌ！ ３−２％ＭｅＯＨ ４３
ｍｇ７ １００ ｍｌ［：ＨＣｊ！ ３−２％Ｍ
ｅＯＨ ２４ ｍｇ８ ２００ ｒｎｆ
ＣＨ（［ ３−５％Ｍｅ［ｌＨ １０９ ｍｇ９
２００ ｍｌ［：ＨＣＡ ３−５０％ＭｅＯＨ
２８９ ｍｇＴＬＣ分析の結果、分画３と４がＢＭＹ
４１９５０の特性をもつ黄色蛍光物質を含んでいたので
これらを合わせた。
１００ ｍｌ［：Ｈ［：Ｉｌ３１７１ ｍｇ２
１００ ｍＲ ＣＨＣｊ！ ３
３２ ｍｇ３ １００ ｍｊｉ！ ＣＨ
［：ｆ ３１％ＭｅＯＨ １３ ｍｇ４ １
００ ｄ ＣＨＣｊ’ ３−１％ＭｅＯＨ ５
４ ｍｇ５ １００ ｒｄ ＣＨ（［ ３−
２％ＭｅＯ８ ２０８ ｍｇ６ １００ ｍｉ
！ ＣＨＣｊｌ！ ３−２％ＭｅＯＨ ４３
ｍｇ７ １００ ｍｌ［：ＨＣｊ！ ３−２％Ｍ
ｅＯＨ ２４ ｍｇ８ ２００ ｒｎｆ
ＣＨ（［ ３−５％Ｍｅ［ｌＨ １０９ ｍｇ９
２００ ｍｌ［：ＨＣＡ ３−５０％ＭｅＯＨ
２８９ ｍｇＴＬＣ分析の結果、分画３と４がＢＭＹ
４１９５０の特性をもつ黄色蛍光物質を含んでいたので
これらを合わせた。
第２回ＶＬＣ
１５ｍｌのＫｏｎｔｅｓ焼結ガラス漏斗に７．５ｇのし
ｉｃｈｒｏｐｒｅｐ Ｓｉ ６０、 １５−２５μ
（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ａｒｔ，９３３６）
を充填した。黄色蛍光物質（６７ｍｇ）を含む分画を５
ＩｎＩ！の酢酸エチルに溶解し、漏斗の頂部へ装填した
。所望の黄色帯を目で見ながら溶出し、従って、 分画を下記のように分けた。
ｉｃｈｒｏｐｒｅｐ Ｓｉ ６０、 １５−２５μ
（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ａｒｔ，９３３６）
を充填した。黄色蛍光物質（６７ｍｇ）を含む分画を５
ＩｎＩ！の酢酸エチルに溶解し、漏斗の頂部へ装填した
。所望の黄色帯を目で見ながら溶出し、従って、 分画を下記のように分けた。
１ １００ｒｎｌＥｔＯＡｃ ３
９＋ｎｇ２ ７５ｍｌ εｔＯＡｃ
２０ ｍｇ３ １００ｍｊ！ Ｅ
ｔＱＡｃ １９ｍｇ第２分画がＴＬＣで黄
色蛍光物質を有することを示した。
９＋ｎｇ２ ７５ｍｌ εｔＯＡｃ
２０ ｍｇ３ １００ｍｊ！ Ｅ
ｔＱＡｃ １９ｍｇ第２分画がＴＬＣで黄
色蛍光物質を有することを示した。
ＨＰＬＣ精製
ＢＭＹ−４ １ ９ ５ ０ （２ ０ｍｇ）を含む粗
分画部を０．３ｍｌのＴＨＦに溶解し、０． ２ Ｍ
ＮＨ．ＯＡｃ−ＴＨＦ（１ ： １）流速４−／分で平
衡になっているＷｈａｔｍａｎ Ｐａｒｔｉｓｉｌ １
０ ０ Ｄ Ｓ − ３カラム（５０ｃｍＸ１０ｍｍ
）上へ注入した。２種の青色蛍光物質が８．７分及び１
３分で溶出した後、Ｂ Ｍ Ｙ − ４１９５０が１７
分で２つの分画にわたって溶出した。これらの分画を集
め、２５ｍｌずつのクロロホルムで２回抽出し、クロロ
ホルム層を合わせ、真空中で濃縮乾固してＢＭＹ ＝４
１ ９ ５ ０ （１． ８ｍｇ）を得た。
分画部を０．３ｍｌのＴＨＦに溶解し、０． ２ Ｍ
ＮＨ．ＯＡｃ−ＴＨＦ（１ ： １）流速４−／分で平
衡になっているＷｈａｔｍａｎ Ｐａｒｔｉｓｉｌ １
０ ０ Ｄ Ｓ − ３カラム（５０ｃｍＸ１０ｍｍ
）上へ注入した。２種の青色蛍光物質が８．７分及び１
３分で溶出した後、Ｂ Ｍ Ｙ − ４１９５０が１７
分で２つの分画にわたって溶出した。これらの分画を集
め、２５ｍｌずつのクロロホルムで２回抽出し、クロロ
ホルム層を合わせ、真空中で濃縮乾固してＢＭＹ ＝４
１ ９ ５ ０ （１． ８ｍｇ）を得た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するＢＭＹ−４１９５０と称する化合物。 ２、液中好気条件下で資化性炭素及び窒素源を含む水性
栄養培地中で￥ストレプトミセス￥・￥スタウロスポレ
ウス￥（￥Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ￥￥ｓｔａｕｒｏ
ｓｐｏｒｅｕｓ￥）のＢＭＹ−４１９５０生産性株を該
培地中で該菌によって実質的な量のＢＭＹ−４１９５０
が生産されるまで培養すること及び培地から共生産物質
を実質的に含まないＢＭＹ−４１９５０を回収すること
を含む式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するＢＭＹ−４１９５０の製造法。 ３、該菌が￥ストレプトミセス￥・￥スタウロスポレウ
ス￥（￥Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ￥￥ｓｔａｕｒｏｓ
ｐｏｒｅｕｓ￥）ＡＴＣＣ５５００６、あるいはそのＢ
ＭＹ−４１９５０生産性突然変異株又は変異株である請
求項２記載の製造法。 ４、製剤上受容できる不活性粗体又は希釈剤と組み合わ
せて有効抗菌量のＢＭＹ−４１９５０を含む製剤組成物
。 ５、製剤上受容できる不活性担体又は希釈剤と組み合わ
せて有効腫瘍抑制量のＢＭＹ−４１９５０を含む製剤組
成物。 ６、菌感染に冒された動物宿主へ有効抗菌量のＢＭＹ−
４１９５０を投与することを含む菌感染に冒された動物
宿主を治療する方法。 ７、悪性腫瘍に冒された哺乳類宿主へ有効腫瘍抑制量の
ＢＭＹ−４１９５０を投与することを含む悪性腫瘍に冒
された哺乳類宿主を治療する方法。 ８、￥ストレプトミセス￥・￥ヒグロスコピクス￥（￥
ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ￥￥ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ
ｕｓ￥）のＢＭＹ−４１９５０生産性株を液中好気条件
下で資化性炭素及び窒素源を含む水性栄養培地中で、該
培地中で該菌によって実質的な量のＢＭＹ−４１９５０
が生産されるまで培養すること及び共生産物質を実質的
に含まないＢＭＹ−４１９５０を培地から回収すること
を含む式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有するＢＭＹ−４１９５０の製造法。 ９、該菌が￥ストレプトミセス￥・￥ヒグロスコピクス
￥（￥ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ￥￥ｈｙｇｒｏｓｃｏ
ｐｉｃｕｓ￥）株Ｃ３９２８０−４５０−９（ＡＴＣＣ
５３７３０）あるいはその変異株又は突然変異株である
請求項８記載の製造法。 １０、資化性炭素及び窒素源を含む水素栄養培地中で培
養するとき回収可能な量の抗生物質ＢＭＹ−４１９５０
を生産することができる￥ストレプトミセス￥・￥ヒグ
ロスコピクス￥（￥ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ￥￥ｈｙ
ｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ￥）株Ｃ３９２８０−４５０−
９（ＡＴＣＣ５３７３０）の生物学的純粋培養菌。
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