JPH03216188A - 新規制限酵素及びその製造方法 - Google Patents
新規制限酵素及びその製造方法Info
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- JPH03216188A JPH03216188A JP2010217A JP1021790A JPH03216188A JP H03216188 A JPH03216188 A JP H03216188A JP 2010217 A JP2010217 A JP 2010217A JP 1021790 A JP1021790 A JP 1021790A JP H03216188 A JPH03216188 A JP H03216188A
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- bvui
- enzyme
- dna
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
Ｌ産業上の利用分野］
本発明は遺伝子操作等に有効な新規な制限酵素及びその
製造法に関する． ［従来の技術］ 制限酵素とはデオキシリポ核酸（ ［ｌＮＡ）上のある
特定の塩基配列を認識し、この配列内または近傍の２本
鎖を９Ｊ断ずるエンドヌクレアーゼである． この酵素は酵素活性に高い基質特異性と再現性を有して
おり、遺伝子の単敲、塩基配列の解折やタンパク質の構
造解析をはじめ、遺伝物質の大量生産などの遺伝子操作
を行う上で不可欠である． また，今後の遺伝病の解明や治療、遺伝子の人工変換等
に重要な産業的意義を有する；ｇ東である。
製造法に関する． ［従来の技術］ 制限酵素とはデオキシリポ核酸（ ［ｌＮＡ）上のある
特定の塩基配列を認識し、この配列内または近傍の２本
鎖を９Ｊ断ずるエンドヌクレアーゼである． この酵素は酵素活性に高い基質特異性と再現性を有して
おり、遺伝子の単敲、塩基配列の解折やタンパク質の構
造解析をはじめ、遺伝物質の大量生産などの遺伝子操作
を行う上で不可欠である． また，今後の遺伝病の解明や治療、遺伝子の人工変換等
に重要な産業的意義を有する；ｇ東である。
制限酵素は種々の微生物より単離されており、七の認識
する塩基配列、切断様式により、現在までに約１００種
類が知られているが、これら制限酵素も理論上考えられ
る種類の酵素の半分ほどしか発見されていない。
する塩基配列、切断様式により、現在までに約１００種
類が知られているが、これら制限酵素も理論上考えられ
る種類の酵素の半分ほどしか発見されていない。
Ｅ本発明の目的］
本発明者等は有効な制限酵素の開発を目的として多数の
制限酵素生産菌の研究を行なってきた． その結果，バクテロイデス属に属する菌が、既存の藻類
由来の制限酵素Ｓｐｌｌ （公告明６３−ｑａ：・１６
号）のアインシンマーを生産していることを突き止めた
。
制限酵素生産菌の研究を行なってきた． その結果，バクテロイデス属に属する菌が、既存の藻類
由来の制限酵素Ｓｐｌｌ （公告明６３−ｑａ：・１６
号）のアインシンマーを生産していることを突き止めた
。
この菌は藻類に比べ培養が短時間で、制限酵素の生産性
が高い，しかも本菌の生産する制限酵素ＢｖｕＩは制限
酵素ＳｐｌＩに比へ、より幅広い堪安定性を備えている
ことを見出し、本発明の完戊に至った．すなわち、本発
明は従来使用されてきた制限酵素ＳＰＩＩに比べより幅
広い塩安定性を有する制限酵素Ｂ▼ｕｌ及び高い生産性
と簡便な工業的生産方法を提供することにある．［問題
点を解決する為の千段］ 本発明中の第１発明は次の酵素化学的諸性質を有する新
規制限酵素ＢｖｕＩに関するものである． （ａ）作用及び基質特異性 制限酵素ＢｖｕＩは二本釦デオキシリポ核酸中のＴ といラ塩基配列を認識し、矢印で切断する酵素である。
が高い，しかも本菌の生産する制限酵素ＢｖｕＩは制限
酵素ＳｐｌＩに比へ、より幅広い堪安定性を備えている
ことを見出し、本発明の完戊に至った．すなわち、本発
明は従来使用されてきた制限酵素ＳＰＩＩに比べより幅
広い塩安定性を有する制限酵素Ｂ▼ｕｌ及び高い生産性
と簡便な工業的生産方法を提供することにある．［問題
点を解決する為の千段］ 本発明中の第１発明は次の酵素化学的諸性質を有する新
規制限酵素ＢｖｕＩに関するものである． （ａ）作用及び基質特異性 制限酵素ＢｖｕＩは二本釦デオキシリポ核酸中のＴ といラ塩基配列を認識し、矢印で切断する酵素である。
制限酵素ＢｖｕＩの認識部位の決定のため、大腸菌ファ
ージ入 ＤＮＡ、動物ウイルスＡｄ２ ＤＮＡ ．大腸
菌ファージφＸ１７４ ＲＦ ＤＮＡ ．大腸菌ファー
ジＭ１３ ｍｐｌ８ ＲＦ ＤＮＡ ．動物ウ４ ルス
ＳＶ４０ ＤＮＡ、大腸菌プラスミト’ｐＢＲ３２２
ＤＮＡの各Ｉ］ＮＡの切断数を調べた． その結果、λ ＤＮＡを１箇所、Ａｄ２ ０ＮＡを４箇
所、またφＸｌ７４ ＲＦ ＤＮＡを２箇所切断し、そ
の他のＤＮＡは切断していなかった。
ージ入 ＤＮＡ、動物ウイルスＡｄ２ ＤＮＡ ．大腸
菌ファージφＸ１７４ ＲＦ ＤＮＡ ．大腸菌ファー
ジＭ１３ ｍｐｌ８ ＲＦ ＤＮＡ ．動物ウ４ ルス
ＳＶ４０ ＤＮＡ、大腸菌プラスミト’ｐＢＲ３２２
ＤＮＡの各Ｉ］ＮＡの切断数を調べた． その結果、λ ＤＮＡを１箇所、Ａｄ２ ０ＮＡを４箇
所、またφＸｌ７４ ＲＦ ＤＮＡを２箇所切断し、そ
の他のＤＮＡは切断していなかった。
これを７ ７−／クスのデータ（Ｇｅｎｅ，Ｖｏｌ．１
０，Ｐ−３７１．１９８０年）に照らし合わせたところ
、木酵素は５−ＣＧＴＡＣＧ−３’を認識切断すること
が示された。これは、制限酵素ＳｐｌＩ（Ｋａｗａｍｕ
ｒａ，Ｍ．．ｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｃ
ｊｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏ１．＋４，Ｐ−１８８
５，１９８６年）の認識塩基配列であった．そこで、大
腸菌ファーシ入 ＤＮＡを用い、制限酵素Ｂ▼ｕＩと制
限酵素Ｓｐｌ＋のタブルタイゼッショ／を試みたところ
、切断片に変化はなく、制限酵素１３ｖｕ１は制限酵素
ＳｐｌＩのアイソシゾマーであることが確かめられた． 切断点の決定は次の方法で行った． まず、制限酵素ＢｖｕＩで大腸菌ファージ入 ＤＮＡを
切断し、切断末端のリン酸をアルカリフォスファターゼ
で除いた。
０，Ｐ−３７１．１９８０年）に照らし合わせたところ
、木酵素は５−ＣＧＴＡＣＧ−３’を認識切断すること
が示された。これは、制限酵素ＳｐｌＩ（Ｋａｗａｍｕ
ｒａ，Ｍ．．ｅｔａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｃ
ｊｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏ１．＋４，Ｐ−１８８
５，１９８６年）の認識塩基配列であった．そこで、大
腸菌ファーシ入 ＤＮＡを用い、制限酵素Ｂ▼ｕＩと制
限酵素Ｓｐｌ＋のタブルタイゼッショ／を試みたところ
、切断片に変化はなく、制限酵素１３ｖｕ１は制限酵素
ＳｐｌＩのアイソシゾマーであることが確かめられた． 切断点の決定は次の方法で行った． まず、制限酵素ＢｖｕＩで大腸菌ファージ入 ＤＮＡを
切断し、切断末端のリン酸をアルカリフォスファターゼ
で除いた。
次にポリヌクレオチド力イネース及び
［γ−３２Ｐ］アデノシン三リン酸を用いて、ＤＮＡ断
片の５゜末端に放射性リン酸を付加した。
片の５゜末端に放射性リン酸を付加した。
この放射性リン酸を付加したＤＮＡ断片を制限酵素Ａｃ
ｃ ｌで切断し、新たに生成された断片の内１５０及び
４８９ｂｐの２断片をポリアクリルアミトゲル電気泳動
で分離・分取した． この２断片をマクサム・ギル八一ト法によりその５“末
端からの塩基配列を調べたところ、これらの実験から得
られた制限酵素ＢｖｕＩは、Ｔ という塩基配列を認識し、矢印の位置で切断していると
判明した． （ｂ）酵素反応の至適条件及び酵素の安定性至適ＰＨ：
制限酵素Ｂｖｕ Ｉの至適ｐ＋＋は８．０であった． 安定ＰＨ：制限酵素ＢｖｕＩは４℃２４時間の処理にお
いて、ｐＨ７．０〜９．５の間で １０ｏｚの活性を維持していた． 至適温度 ：制限酵票ＢｖｕＩの至適温度は３７℃であ
った。
ｃ ｌで切断し、新たに生成された断片の内１５０及び
４８９ｂｐの２断片をポリアクリルアミトゲル電気泳動
で分離・分取した． この２断片をマクサム・ギル八一ト法によりその５“末
端からの塩基配列を調べたところ、これらの実験から得
られた制限酵素ＢｖｕＩは、Ｔ という塩基配列を認識し、矢印の位置で切断していると
判明した． （ｂ）酵素反応の至適条件及び酵素の安定性至適ＰＨ：
制限酵素Ｂｖｕ Ｉの至適ｐ＋＋は８．０であった． 安定ＰＨ：制限酵素ＢｖｕＩは４℃２４時間の処理にお
いて、ｐＨ７．０〜９．５の間で １０ｏｚの活性を維持していた． 至適温度 ：制限酵票ＢｖｕＩの至適温度は３７℃であ
った。
安定温度 ：５０℃、５分間の加熱でも１００＄の活性
を維持していた。
を維持していた。
安定塩漬度：塩化ナトリウム濃度５０〜ｌｏＯ＋＊Ｍで
１００％の活性を示した． （ｃ）分子量 ： ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷ Ｇ
ｌａｓｓ （東ソー株式会社製）を用いたゲルろ過法で ４７，０００であった． 本発明中の第２発明は、バクテロイデス属に属する制限
酵素ＢｖｕＩ生産菌を栄養培地で培養し、培養物より制
限酵素１３ｖｕＩを採取することを特徴とするものであ
る． 本発明で使用する微生物はバクテロイデス属に属するＢ
ｖｕＩ生産菌であればいずれでも良いが、例えば人糞便
中より分離されたバクテロイデス●プルガータスＳ−１
５（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ Ｓ−
＋５微工研菌条寄第１１１２５号〕が好適である． 木菌は以下に示す生理学的性質を有していた。
１００％の活性を示した． （ｃ）分子量 ： ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷ Ｇ
ｌａｓｓ （東ソー株式会社製）を用いたゲルろ過法で ４７，０００であった． 本発明中の第２発明は、バクテロイデス属に属する制限
酵素ＢｖｕＩ生産菌を栄養培地で培養し、培養物より制
限酵素１３ｖｕＩを採取することを特徴とするものであ
る． 本発明で使用する微生物はバクテロイデス属に属するＢ
ｖｕＩ生産菌であればいずれでも良いが、例えば人糞便
中より分離されたバクテロイデス●プルガータスＳ−１
５（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ Ｓ−
＋５微工研菌条寄第１１１２５号〕が好適である． 木菌は以下に示す生理学的性質を有していた。
ｌ偏性嫌気性菌
２芽胞形成 −，グラム陰性桿菌
（０．３〜０，５ Ｘ ２．５ − ５．ＯｗＩｌ〕３
胆汁による発育促進 硫化水素ガスの発生 運動性 偽酸塩還元 インドール生成 ゼ・ラチン液化 ＋ ＋ ４コハク酸・酢酸発酵 ベプトン，酵母エキス，フィルデス液 ルコース培地による ５炭素源同化性 アラビノース ＋，キシロース リポース ー，グルコース マンノース ＋ フルクトース ガラクトース ＋ シュークロース マルトース ＋ セロビオース ラクトース ＋ トレハロース メリビオース ＋，ラフィノース メレチトース ー ソルビトール マニトール ー イノシトール クリセロール 木菌は以上の生理学的性質から「腸内菌の世界・嫌気性
菌の分離と同定」 （光岡知足著）により７へクテけイ
デス●プルガータス（Ｂａｃｔｅｒａｉｄｅｓ ｖｕｌ
ｇａｔｕｓ）と同定された．培養法に制限はなく、通常
行われるパクテロィデス属細菌の培養法で増殖可能であ
るものなら何でもよい． 例えば，炭素源としてはグルコース，シュークロースな
どの糖類、及び窒素源としてペプトン、アミノ酸、酵母
エキスなど、その他の無機塩類として塩化ナトリウムや
塩化マグネシウム、リン酸カリウムなどを用いる。
胆汁による発育促進 硫化水素ガスの発生 運動性 偽酸塩還元 インドール生成 ゼ・ラチン液化 ＋ ＋ ４コハク酸・酢酸発酵 ベプトン，酵母エキス，フィルデス液 ルコース培地による ５炭素源同化性 アラビノース ＋，キシロース リポース ー，グルコース マンノース ＋ フルクトース ガラクトース ＋ シュークロース マルトース ＋ セロビオース ラクトース ＋ トレハロース メリビオース ＋，ラフィノース メレチトース ー ソルビトール マニトール ー イノシトール クリセロール 木菌は以上の生理学的性質から「腸内菌の世界・嫌気性
菌の分離と同定」 （光岡知足著）により７へクテけイ
デス●プルガータス（Ｂａｃｔｅｒａｉｄｅｓ ｖｕｌ
ｇａｔｕｓ）と同定された．培養法に制限はなく、通常
行われるパクテロィデス属細菌の培養法で増殖可能であ
るものなら何でもよい． 例えば，炭素源としてはグルコース，シュークロースな
どの糖類、及び窒素源としてペプトン、アミノ酸、酵母
エキスなど、その他の無機塩類として塩化ナトリウムや
塩化マグネシウム、リン酸カリウムなどを用いる。
また、血液成分を数％加えることにより成育がよくなる
． 本酵素の抽出、精製は一般の制限酵素精製法に従った方
法で行なえる。
． 本酵素の抽出、精製は一般の制限酵素精製法に従った方
法で行なえる。
すなわち、培養菌体は常法に従って集菌し、超音波処理
などの方法により菌体を破砕する．破砕後、遠心分離な
どの方法で無細胞抽出液を得る． この抽出液をイオン交換クロマトグラフィー法、ゲルろ
過法、アフィニティーク自マトグラフィー法などのクロ
マトグラフィー法の組合わせにより精製を行い、制限酵
素１３ｖｕＩを得る。
などの方法により菌体を破砕する．破砕後、遠心分離な
どの方法で無細胞抽出液を得る． この抽出液をイオン交換クロマトグラフィー法、ゲルろ
過法、アフィニティーク自マトグラフィー法などのクロ
マトグラフィー法の組合わせにより精製を行い、制限酵
素１３ｖｕＩを得る。
ＢｖｕＩの活性測定は次の通り行った。
ＩＯＩＩＭトリス塩酸， ｐＨ７．５ ． ７層Ｍ２
−メルカブトエタノール， ７＋＋＋Ｍ塩化マグネシウ
ム，５０ｍＭ ｋｇ化ナトリウムｌｌｌ’ｇ入ＤＮＡか
らなる反応系に、酵素を加えて全量を５０μ１とし、３
７℃で１時間反応させた． 反応液に１＄ＳＯＳ（ドデシル硫酸ナトリウム） ．
５（Ｈ ク’ ＩＪ セａ−ル、０． １＄ＢＰＢ（プ
ロ−ｆ：フｘノールブルー）からなる酵素反応停止液を
５．１加えて反応を停止させた． 友応液中の大腸菌ファージλ ＤＮＡを０．５ｐｇ／ｍ
ｌのエチジウムブロマイトを含ませた１％アガロースゲ
ル電気泳勤にて分離し、ＵＶ照射でＤＮＡのハンドの数
と量が変化しなくなったときを終点とした。
−メルカブトエタノール， ７＋＋＋Ｍ塩化マグネシウ
ム，５０ｍＭ ｋｇ化ナトリウムｌｌｌ’ｇ入ＤＮＡか
らなる反応系に、酵素を加えて全量を５０μ１とし、３
７℃で１時間反応させた． 反応液に１＄ＳＯＳ（ドデシル硫酸ナトリウム） ．
５（Ｈ ク’ ＩＪ セａ−ル、０． １＄ＢＰＢ（プ
ロ−ｆ：フｘノールブルー）からなる酵素反応停止液を
５．１加えて反応を停止させた． 友応液中の大腸菌ファージλ ＤＮＡを０．５ｐｇ／ｍ
ｌのエチジウムブロマイトを含ませた１％アガロースゲ
ル電気泳勤にて分離し、ＵＶ照射でＤＮＡのハンドの数
と量が変化しなくなったときを終点とした。
上記反応において ｌ！ｇ入 ＤＮＡを完全に切断する
酵素活性を１単位とした。
酵素活性を１単位とした。
Ｃ実施例ｊ
／へタテロイデス・プルカータスＳ−１５ （微工研菌
寄第１１１２５号）はスチールシャー及びカザミノ酸液
体培地（表１）を用いて鎌気培養を行った． 前培養は３７℃で２４時間、本培養は前培養液を本培養
液の１／＋００量接種し、３７℃で４８時間行った． 遠・Ｑ分離で菌体を集めたところ、約１２ｇの湿菌体を
得た． システイン墳＃ ０ ． ４ ｇ
得られた菌体１１ｇに緩衝液Ａ（１０層Ｎトリス塩酸，
ｐＨ７．５． １０ｒｍＨ ２−メルカプトエタノー
ル，７■Ｍ塩化マグネシウム月１０鱈を加え、超音波で
処理し、遠心分離で無細胞抽出液を得た．精製は以下の
高速液体クａマトグラフィー（東ソー株式会社製）にて
精製を行った．得られた無細胞抽出液を０．４５ｍのフ
ィルターに通した後、緩衝液Ｂ （１０論阿トリス塩酸
，ｐ｝１７．５． ７＋ｓＭ ２−メルカブトエタノー
ル， ？＋＋＋Ｈ塩化マグネシウム）で平衡したＤＥＡ
Ｅ− トヨパールパック８５０Ｍ（イオン交換クロマト
グラフィー）に吸着させた。
寄第１１１２５号）はスチールシャー及びカザミノ酸液
体培地（表１）を用いて鎌気培養を行った． 前培養は３７℃で２４時間、本培養は前培養液を本培養
液の１／＋００量接種し、３７℃で４８時間行った． 遠・Ｑ分離で菌体を集めたところ、約１２ｇの湿菌体を
得た． システイン墳＃ ０ ． ４ ｇ
得られた菌体１１ｇに緩衝液Ａ（１０層Ｎトリス塩酸，
ｐＨ７．５． １０ｒｍＨ ２−メルカプトエタノー
ル，７■Ｍ塩化マグネシウム月１０鱈を加え、超音波で
処理し、遠心分離で無細胞抽出液を得た．精製は以下の
高速液体クａマトグラフィー（東ソー株式会社製）にて
精製を行った．得られた無細胞抽出液を０．４５ｍのフ
ィルターに通した後、緩衝液Ｂ （１０論阿トリス塩酸
，ｐ｝１７．５． ７＋ｓＭ ２−メルカブトエタノー
ル， ？＋＋＋Ｈ塩化マグネシウム）で平衡したＤＥＡ
Ｅ− トヨパールパック８５０Ｍ（イオン交換クロマト
グラフィー）に吸着させた。
０〜．４０ｈＭの塩化ナトリウムの直線的濃度勾配を持
つ緩衝液Ｂで溶出させ、６０〜１２０＋ｓＭ塩化ナトリ
ウム濃度に制限酵素画分を得た。
つ緩衝液Ｂで溶出させ、６０〜１２０＋ｓＭ塩化ナトリ
ウム濃度に制限酵素画分を得た。
得られた制限酵素画分を１０％（Ｖ／Ｖ）グリセロール
を含む緩衝液Ｂに一夜透析した．この透析した制限酵素
画分を１０＄（Ｖ／Ｖ）グリセロールを含む緩衝液Ｂで
平衡したＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ−５ＰＷ Ｇｌａｓｓ
（イオン交換クロマトグラフィー〕に吸着させた後
、Ｏ〜２５０層Ｘの直線的塩化ナトリウム濃度勾配を有
する＃衝掖Ｂで溶出させ１００〜１３０ｍＭ塩化ナトリ
ウム濃度の制限酵素画分を得た。
を含む緩衝液Ｂに一夜透析した．この透析した制限酵素
画分を１０＄（Ｖ／Ｖ）グリセロールを含む緩衝液Ｂで
平衡したＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ−５ＰＷ Ｇｌａｓｓ
（イオン交換クロマトグラフィー〕に吸着させた後
、Ｏ〜２５０層Ｘの直線的塩化ナトリウム濃度勾配を有
する＃衝掖Ｂで溶出させ１００〜１３０ｍＭ塩化ナトリ
ウム濃度の制限酵素画分を得た。
この制限酵素画分を３倍に濃縮して２００ｍＭ塩化ナト
リウム及び１０２（Ｖ／Ｖ冫グリセロールを含む緩衝液
ＢにてＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷ ＧｌａＳｓ （
ゲルろ過）に供して、リテンションタイム１４．０〜ｌ
５，０分に制限酵素画分を得た。
リウム及び１０２（Ｖ／Ｖ冫グリセロールを含む緩衝液
ＢにてＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷ ＧｌａＳｓ （
ゲルろ過）に供して、リテンションタイム１４．０〜ｌ
５，０分に制限酵素画分を得た。
得られた制限酵素画分を５０％（Ｖ／Ｖ）グリセロール
を含む緩衝液Ｂで一夜透析を行い、最終酵素標品（１，
２００ ｕｎｉｔ）を得た．ゲルろ過画分において、非
特異的なＤＮＡ分解酵素は見られなかった． ［効 果］ 上述した本発明により、従来使用されてきた制限酵素Ｓ
ｐｌ＋に比べ、より幅広い塩安定性を有する新規制限酵
素の簡便な工業生産法が可能となった。
を含む緩衝液Ｂで一夜透析を行い、最終酵素標品（１，
２００ ｕｎｉｔ）を得た．ゲルろ過画分において、非
特異的なＤＮＡ分解酵素は見られなかった． ［効 果］ 上述した本発明により、従来使用されてきた制限酵素Ｓ
ｐｌ＋に比べ、より幅広い塩安定性を有する新規制限酵
素の簡便な工業生産法が可能となった。
Claims (3)
- （１）次の酵素化学的諸性質を有する新規制限酵素Ｂｖ
ｕＩ。 （ａ）作用及び基質特異性 二本鎖デオキシリボ核酸中の塩基配列 【遺伝子配列があります】 を認識し、かつこれを矢印の位置で切断する（式中、Ａ
はアデノシン、Ｇはグアノシン、Ｔはチミジン、Ｃはシ
チジンを示す）。 （ｂ）至適ｐＨ８．０ （ｃ）安定ｐＨ７．０〜９．５ （ｄ）至適温度３７℃ （ｅ）安定温度５０℃ 但し、５分間の加熱による。 （ｆ）安定塩濃度５０〜１００ｍＭ 但し、塩化ナトリウムによる。 （ｇ）分子量４７，０００ 但し、ゲルろ過法による。 - （２）バクテロイデス属に属する制限酵素ＢｖｕＩ生産
菌を栄養培地で培養し、培養物より制限酵素ＢｖｕＩを
採取することを特徴とする制限酵素ＢｖｕＩの製造方法
。 - （３）バクテロイデス属に属する制限酵素ＢｖｕＩ生産
菌が、バクテロイデス・ブルガータスＳ−１５である特
許請求の範囲第２項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010217A JPH03216188A (ja) | 1990-01-19 | 1990-01-19 | 新規制限酵素及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010217A JPH03216188A (ja) | 1990-01-19 | 1990-01-19 | 新規制限酵素及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03216188A true JPH03216188A (ja) | 1991-09-24 |
Family
ID=11744105
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2010217A Pending JPH03216188A (ja) | 1990-01-19 | 1990-01-19 | 新規制限酵素及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03216188A (ja) |
-
1990
- 1990-01-19 JP JP2010217A patent/JPH03216188A/ja active Pending
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