JPH03244381A - 新規制限酵素及びその製造方法 - Google Patents
新規制限酵素及びその製造方法Info
- Publication number
- JPH03244381A JPH03244381A JP2041512A JP4151290A JPH03244381A JP H03244381 A JPH03244381 A JP H03244381A JP 2041512 A JP2041512 A JP 2041512A JP 4151290 A JP4151290 A JP 4151290A JP H03244381 A JPH03244381 A JP H03244381A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- restriction enzyme
- ccoi
- stable
- dna
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は新規な制限酵素及びその製造方法に関する。
［従来の技術］
制限酵素とはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）上の成る特定
の塩基配列を認識し、この配列内または近傍の２本鎖を
切断するエンドヌクレアーゼである。
の塩基配列を認識し、この配列内または近傍の２本鎖を
切断するエンドヌクレアーゼである。
この制限酵素は酵素活性に高い基質特異性と再現性を有
しており、また遺伝子の単離、塩基配列の解析や蛋白質
の構造解析をはじめ、遺伝物質の大量生産などの遺伝子
操作を行う上で不可欠な酵素である。
しており、また遺伝子の単離、塩基配列の解析や蛋白質
の構造解析をはじめ、遺伝物質の大量生産などの遺伝子
操作を行う上で不可欠な酵素である。
また、今後の遺伝病の解明や治療、遺伝子の人工変換等
に重要な産業的意義を有する試薬でもある。
に重要な産業的意義を有する試薬でもある。
制限酵素は種々の微生物より単離されており、その認識
する塩基配列、切断様式により現在までに約１００種類
が知られているが、これら制限酵素も理論上考えられる
種類の酵素の半分はどしか発見されていない。
する塩基配列、切断様式により現在までに約１００種類
が知られているが、これら制限酵素も理論上考えられる
種類の酵素の半分はどしか発見されていない。
［本発明の目的］
本発明者等はイ１効な制限酵素の開発を目的として多数
の制限酵素生産菌の研究を行なってきた。
の制限酵素生産菌の研究を行なってきた。
その結果、クロストリジウム属に属する菌が、既存の放
線菌Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｅｒｏ−ｃｏｌｏｎｉｇｅｎ
ｅｓ由来の制限酵素Ｎａｅｌのアイソシソマーを生産し
ていることを突き止めた。
線菌Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｅｒｏ−ｃｏｌｏｎｉｇｅｎ
ｅｓ由来の制限酵素Ｎａｅｌのアイソシソマーを生産し
ていることを突き止めた。
この菌は短時間の培養で制限酵素の生産性が高い、しか
も本菌の生産する制限酵素Ｃｃｏ Ｉは熱やｐＨに対し
て高度に安定性があることを見出し、本発明の完成に至
った。すなわち、本発明は従来使用されてきた制限酵素
Ｎａｅｌに比べ、より幅広い温度安定性とｐ）Ｉ安定性
を有する制限酵素ＣｃｏＩ及びその工業的生産方法を提
供することにある。
も本菌の生産する制限酵素Ｃｃｏ Ｉは熱やｐＨに対し
て高度に安定性があることを見出し、本発明の完成に至
った。すなわち、本発明は従来使用されてきた制限酵素
Ｎａｅｌに比べ、より幅広い温度安定性とｐ）Ｉ安定性
を有する制限酵素ＣｃｏＩ及びその工業的生産方法を提
供することにある。
Ｅ問題点を解決する為の手段］
本発明中の第１発明は次の酵素化学的諸性質を有する新
規制限酵素ＣｃｏＩに関するものである。
規制限酵素ＣｃｏＩに関するものである。
（ａ）作用及び基質特異性
制限酵素Ｃｃｏ Ｉは２木釦デオキシリボ核酸中の↓
↑
という塩基配列を認識し、矢印で切断する酵素である。
制限酵素ＣｃｏＩの認識部位の決定のため、大腸菌ファ
ージ入 ＤＮＡ、動物ウィルスＡｄ２ ＩＩＮＡ 、大
腸菌ファージφＸ１７４ ＲＦ ＤＮＡ 、大腸菌ファ
ージ８１３ ｍｐ１８ ＲＦ ＤＮＡ 、動物つ４ ル
スＳＶ４０ ＤＮＡ、大腸菌プラスミＦｐＢＲ３２２Ｄ
ＮＡの各ＤＮＡの切断数を調へた。
ージ入 ＤＮＡ、動物ウィルスＡｄ２ ＩＩＮＡ 、大
腸菌ファージφＸ１７４ ＲＦ ＤＮＡ 、大腸菌ファ
ージ８１３ ｍｐ１８ ＲＦ ＤＮＡ 、動物つ４ ル
スＳＶ４０ ＤＮＡ、大腸菌プラスミＦｐＢＲ３２２Ｄ
ＮＡの各ＤＮＡの切断数を調へた。
ソノ結果、入ＤＮＡ、ＳＶ４０ ＤＮＡ、Ｍ２ＯＤＮＡ
を１ｆｌｌ所、Ａｄ２ ＤＮＡを１３箇所、ｐＢＲ３２
２ＤＮＡを４箇所切断した。
を１ｆｌｌ所、Ａｄ２ ＤＮＡを１３箇所、ｐＢＲ３２
２ＤＮＡを４箇所切断した。
これをファー、クスノデータ（Ｇｅｎｅ、Ｖｏｌ、１０
゜Ｐ−３？ Ｉ 、 １９８０年）に照らし合わせたと
ころ、木酵素は５’−ＧＣＣＧＧＣ−３’を認識切断す
ることが示された。これは、制限酵素Ｎａｅｌ（Ｋｅｓ
ｓｌｅｒ、［１：、 ａｎｄＨｏｌｔｋｅ、Ｈｌ、 、
Ｇｅｎｅ、Ｖｏｌ、４？、Ｐ−１−１５３，１９８８年
）の認識塩基配タリであった。
゜Ｐ−３？ Ｉ 、 １９８０年）に照らし合わせたと
ころ、木酵素は５’−ＧＣＣＧＧＣ−３’を認識切断す
ることが示された。これは、制限酵素Ｎａｅｌ（Ｋｅｓ
ｓｌｅｒ、［１：、 ａｎｄＨｏｌｔｋｅ、Ｈｌ、 、
Ｇｅｎｅ、Ｖｏｌ、４？、Ｐ−１−１５３，１９８８年
）の認識塩基配タリであった。
そこ−Ｃ１ＳＶ４０ ［］ＮＡヲ用イ、制Ｆ［［素Ｇｃ
ｏＬ！＝制限酵素Ｎａｅｌのタブルタイゼ゛ツションを
試みたところ、切断片に変化はなく、制限酵素ＧｃｏＩ
は制限酵素Ｎａｅｌのアイソシソマーであることが確認
された。
ｏＬ！＝制限酵素Ｎａｅｌのタブルタイゼ゛ツションを
試みたところ、切断片に変化はなく、制限酵素ＧｃｏＩ
は制限酵素Ｎａｅｌのアイソシソマーであることが確認
された。
νｊ断点の決定は次の方法で行った。
まず、制限酵素（：ｃｏ ｌで大腸菌ファージＭ１３
ｍｐ＋ａ ＲＦ ＤＮＡを切断し、切断末端のリン酸を
アルカリフォスファターゼで除いた。
ｍｐ＋ａ ＲＦ ＤＮＡを切断し、切断末端のリン酸を
アルカリフォスファターゼで除いた。
次にポリヌクレオチドカイネース及び
［γ−３２Ｐ］アデノシン三リン酸を用いて、ＩＩＮＡ
断片の５′末端に放射性リン酸を付加した。
断片の５′末端に放射性リン酸を付加した。
この放射性リン酸を付カーしたＤＮＡ断片を制限酵素Ｂ
ｂｅ Ｉで切断し、新たに生成された断片の内３８８ｂ
ｐ（ベースペアー）をポリアクリルアミドゲル電気泳動
で分離、分取した。
ｂｅ Ｉで切断し、新たに生成された断片の内３８８ｂ
ｐ（ベースペアー）をポリアクリルアミドゲル電気泳動
で分離、分取した。
この断片をマクサム・キルノヘート法によりその５゛末
端からの塩基配列を調べたところ、これらの実験から得
られた制限酵素ＣｃｏＩは、↓ ↑ という塩基配列を認識し、矢印の位置で切断していると
判明した。
端からの塩基配列を調べたところ、これらの実験から得
られた制限酵素ＣｃｏＩは、↓ ↑ という塩基配列を認識し、矢印の位置で切断していると
判明した。
（ｂ）酵素反応の至適条件及び酵素の安定性至適ｐＨ：
制限酵素Ｃｃｏ Ｉの至適ｐＨは８．０であった。
制限酵素Ｃｃｏ Ｉの至適ｐＨは８．０であった。
安定ｐＨ：制限酵素ＣｃｏＩは４℃２４時間の処理にお
いて、ｐＨ５，０〜１Ｏ００の間で１００％の活性を維
持していた。
いて、ｐＨ５，０〜１Ｏ００の間で１００％の活性を維
持していた。
至適温度
二制限酵素ＣｃｏＩの至適温度は４５℃であった。
安定温度
＝７０℃、５分間の加熱でも１００％の活性を維持して
いた。
いた。
安定塩濃度：塩化ナトリウム濃度５０ｍＭ〜ｌｏｏｍＭ
で安定に活性を示した。至適塩濃 度は５０ｍＭであった。
で安定に活性を示した。至適塩濃 度は５０ｍＭであった。
（ｃ）分子ｔｉｃ ： ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００Ｓ
Ｗ Ｇｌａｓｓ （東ソー■製）を用いたゲルろ過法で
６２，０００であった・ 本発明中の第２発明は、クロストリジウム属に属する制
限酵素ＣｃｏＩ生産菌を栄養培地で培養し、培養物より
制限酵素ＣｃｏＩを採取することを特徴とするものであ
る。
Ｗ Ｇｌａｓｓ （東ソー■製）を用いたゲルろ過法で
６２，０００であった・ 本発明中の第２発明は、クロストリジウム属に属する制
限酵素ＣｃｏＩ生産菌を栄養培地で培養し、培養物より
制限酵素ＣｃｏＩを採取することを特徴とするものであ
る。
本発明で使用する微生物はクロストリジウム属に属する
ＣｃｏＩ生産菌であればいずれでも良いが、例えば人糞
中より分離されたクロストリジウム コツコイデスＢ−
２（微工研菌条寄第１１２３８号）が好適である。
ＣｃｏＩ生産菌であればいずれでも良いが、例えば人糞
中より分離されたクロストリジウム コツコイデスＢ−
２（微工研菌条寄第１１２３８号）が好適である。
木菌は以下に示す生理学的性質を有していた。
１偏性嫌気性菌
２偏在性芽胞形威 ＋、ダラム陽性短桿菌（０，６〜１
．ＯＸｏ、８〜３．０１４１）３運動性 硝酸塩生成 インドール生成 ゼラチン液化 レシチナーゼ活性 リパーゼ活性 溶血反応 ４コハク酸・酢酸発酵 ペプトン、酵母エキス、フィルデス液、グルコース培地
による ５炭素源同化性 アラビノース ＋ キシロース ＋ラムノース
＋ ンルポース ＋リポース ＋ グルコース
＋マンノース ＋ フルクトース ＋ガラク
トース ＋ シュークロース ＋マンニトール ＋
セロビオース ＋ラクトース ＋、トレハロース
＋メリビオース ＋、ラフィノース ＋メレチトー
ス ＋、ンルヒトール ＋イノシトール ＋、グリセ
ロール マンニトール ＋、エリスリトール 本菌は以上の生理学的性質から「腸内菌の世界・嫌気性
菌の分離と同定」 （光岡知足著）によりクロストリジ
ウム・コッコイデス（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｏｃ
ｃｏｉｄｅｓ）と同定された。
．ＯＸｏ、８〜３．０１４１）３運動性 硝酸塩生成 インドール生成 ゼラチン液化 レシチナーゼ活性 リパーゼ活性 溶血反応 ４コハク酸・酢酸発酵 ペプトン、酵母エキス、フィルデス液、グルコース培地
による ５炭素源同化性 アラビノース ＋ キシロース ＋ラムノース
＋ ンルポース ＋リポース ＋ グルコース
＋マンノース ＋ フルクトース ＋ガラク
トース ＋ シュークロース ＋マンニトール ＋
セロビオース ＋ラクトース ＋、トレハロース
＋メリビオース ＋、ラフィノース ＋メレチトー
ス ＋、ンルヒトール ＋イノシトール ＋、グリセ
ロール マンニトール ＋、エリスリトール 本菌は以上の生理学的性質から「腸内菌の世界・嫌気性
菌の分離と同定」 （光岡知足著）によりクロストリジ
ウム・コッコイデス（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｏｃ
ｃｏｉｄｅｓ）と同定された。
培養法に制限はなく、通常行われるクロストリジウム属
細菌の培養法で増殖可能であるものなら何でもよい。
細菌の培養法で増殖可能であるものなら何でもよい。
例えば、炭素源としてはグルコース、ンユークロースな
どの糖類、及び窒素源としてペプトン、アミノ酸、酵母
エキスなど、その他の無機ＮＴｎとして塩化ナトリウム
や塩化マグネシウム、リン酸カリウムなどを用いる。
どの糖類、及び窒素源としてペプトン、アミノ酸、酵母
エキスなど、その他の無機ＮＴｎとして塩化ナトリウム
や塩化マグネシウム、リン酸カリウムなどを用いる。
また、血液成分を数％加えることにより成育がよくなる
。
。
木酵素の抽出、精製は一般の制限酵素精製法に従った方
法で行なえる。
法で行なえる。
すなわち、培養菌体は常法に従って集菌し、超音波処理
などの方法により菌体を破砕する。
などの方法により菌体を破砕する。
破砕後、遠心分離などの方法で無細胞抽出液を得る。
この抽出液をイオン交換クロマトグラフィー法・ゲルろ
過法、アフィニティークロマトグラフィー法などのクロ
マトグラフィー法の組合わせにより精製を行い、制限酵
素ＣｃｏＩを得る。
過法、アフィニティークロマトグラフィー法などのクロ
マトグラフィー法の組合わせにより精製を行い、制限酵
素ＣｃｏＩを得る。
ＣｃＯＩの活性測定は次の通り行った。
１０ｍＭ ト リス塩酸、ｐＨ７，５，７ｍＭ ２−
メルカプトエタノール、７１Ｍ塩化マグネシウム、５０
ｍＭ塩化ナトリウム、１μｇ入ＤＮＡからなる反応系に
、酵素を加えて全量を５０ρ℃とし、３７℃で１時間反
応させた。
メルカプトエタノール、７１Ｍ塩化マグネシウム、５０
ｍＭ塩化ナトリウム、１μｇ入ＤＮＡからなる反応系に
、酵素を加えて全量を５０ρ℃とし、３７℃で１時間反
応させた。
反応液に１＄ Ｓ［］Ｓ （ドデシル硫酸ナトリウム）
、 ５０％グＩＪ −１＝ Ｏ−ル、０．１＄ＢＰＢ
（ブロモフェノールブルー）からなる酵素反応停止液を
５１１β加えて反応を停止させた。
、 ５０％グＩＪ −１＝ Ｏ−ル、０．１＄ＢＰＢ
（ブロモフェノールブルー）からなる酵素反応停止液を
５１１β加えて反応を停止させた。
反応液中の大腸菌ファージ入 ＤＮＡを０．５１．１ｇ
１ｍ４のエチジウムブロマイドを含ませたｔＸアガロー
スゲル電気泳動にて分離し、υＶ熱照射ＤＮＡの／ヘン
ドの数と量が変化しなくなったときを終点とした。
１ｍ４のエチジウムブロマイドを含ませたｔＸアガロー
スゲル電気泳動にて分離し、υＶ熱照射ＤＮＡの／ヘン
ドの数と量が変化しなくなったときを終点とした。
上記反応において １１４％入 ＤＮＡを完全に切断す
る酵素活性を１単位とした。
る酵素活性を１単位とした。
［実施例］
クロストリジウム・コッコイデスＢ−２（微工研菌寄第
１１２３８号）はスチールジャー及びカザミノ酸液体培
地（表１）を用いて嫌気培養を行った。
１１２３８号）はスチールジャー及びカザミノ酸液体培
地（表１）を用いて嫌気培養を行った。
前培養は３７℃で２４時間、本培養は前培養液を本培養
液の１／１００量接種し、３７℃で４８時間行った。
液の１／１００量接種し、３７℃で４８時間行った。
遠心分離で菌体を集めたところ、約１２ｇの湿菌体を得
た。
た。
表 １
カザミノ酸液体培地、 ｐＨ７，０（ＮａＯＨ） １
１カザミノ酸 ４．０ｇ酵母
エキス ３．０ｇポリペプトン
３・０ｇグルコース
１０．Ｏｇ堝化ナトリウム
１．５８システイン塩酸 ０．４ｇ
得られた菌体７．Ｏｇに緩衝液Ａ（１０ｍＭ ）リス塩
酸、 ｐＨ７，５，１０ｍＭ ２−メルカプトエタノー
ル。
１カザミノ酸 ４．０ｇ酵母
エキス ３．０ｇポリペプトン
３・０ｇグルコース
１０．Ｏｇ堝化ナトリウム
１．５８システイン塩酸 ０．４ｇ
得られた菌体７．Ｏｇに緩衝液Ａ（１０ｍＭ ）リス塩
酸、 ｐＨ７，５，１０ｍＭ ２−メルカプトエタノー
ル。
７ＩＩＭ塩化マグネシウム）５０ＩＩＱを加え、フレン
チプレスで細胞を破砕し、遠心分離で無細胞抽出液を得
た。
チプレスで細胞を破砕し、遠心分離で無細胞抽出液を得
た。
精製は以下の高速液体クロマトクラフィー（東ソー■製
）にて行なった。
）にて行なった。
得られた無細胞抽出液を０．４５μｍのフィルターに通
した後、緩衝液Ｂ（１０ｍＭ）リス塩酸。
した後、緩衝液Ｂ（１０ｍＭ）リス塩酸。
ｐＨ７，５，７厘Ｍ２−メルカプトエタノール、 ７ｍ
Ｍ塩化マグネシウム）で平衡したＤＥＡＥ−トヨパール
バック８５０Ｍ（イオン交換クロマトグラフィー）に吸
着させた。０〜４００ｍＭの塩化ナトリウムの直線的濃
度勾配を持つ緩衝ＭＢで溶出させ、３００ｍＭ塩化ナト
リウム濃度に制限酵素画分を得た。
Ｍ塩化マグネシウム）で平衡したＤＥＡＥ−トヨパール
バック８５０Ｍ（イオン交換クロマトグラフィー）に吸
着させた。０〜４００ｍＭの塩化ナトリウムの直線的濃
度勾配を持つ緩衝ＭＢで溶出させ、３００ｍＭ塩化ナト
リウム濃度に制限酵素画分を得た。
得られた制限酵素画分を１０％（Ｖ／Ｖ）グリセロール
を含む緩衝液Ｂに一夜透析した。この制限酵素画分を１
０２（Ｖ／Ｖ）グリセロールを含む緩衝液Ｂで平衡した
ＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ−５ＰＷ Ｇｌａｓｓ（イオン
交換クロマトグラフィー）に吸着させ、また、０〜２５
０■Ｈの直線的塩化ナトリウム濃度勾配を持つ緩衝液Ｂ
で溶出させて、１２０〜１８０ｍＭ塩化ナトリウム濃度
の制限酵素画分を得た。
を含む緩衝液Ｂに一夜透析した。この制限酵素画分を１
０２（Ｖ／Ｖ）グリセロールを含む緩衝液Ｂで平衡した
ＴＳＫｇｅｌ ＤＥＡＥ−５ＰＷ Ｇｌａｓｓ（イオン
交換クロマトグラフィー）に吸着させ、また、０〜２５
０■Ｈの直線的塩化ナトリウム濃度勾配を持つ緩衝液Ｂ
で溶出させて、１２０〜１８０ｍＭ塩化ナトリウム濃度
の制限酵素画分を得た。
得られた制限酵素画分を１０％（Ｖ／Ｖ）グリセロール
を含む緩衝液Ｂに一夜透析した。この制限酵素画分をｌ
ｏｇ（Ｖ／Ｖ）グリセロールを含む緩衝液Ｂで平衡した
ＴＳＫｇｅｌ Ｈｅｐａｒｉｎ−５ＰＷ Ｇｌａｓｓ（
アフィニティークロマトグラフィー）に吸着させた。
を含む緩衝液Ｂに一夜透析した。この制限酵素画分をｌ
ｏｇ（Ｖ／Ｖ）グリセロールを含む緩衝液Ｂで平衡した
ＴＳＫｇｅｌ Ｈｅｐａｒｉｎ−５ＰＷ Ｇｌａｓｓ（
アフィニティークロマトグラフィー）に吸着させた。
Ｏ〜２５０＋＊Ｍの直線的塩化ナトリウム濃度勾配を持
つ緩衝液Ｂで溶出させて、４０〜８０ｍＭ塩化ナトリウ
ム濃度の制限酵素画分を得た。
つ緩衝液Ｂで溶出させて、４０〜８０ｍＭ塩化ナトリウ
ム濃度の制限酵素画分を得た。
この制限酵素画分を１８倍に濃縮して、２００＋＊Ｍ塩
化ナトリウム及びｌ０Ｘ（Ｖ／Ｖ）グリセロールを含む
緩衝液ＢにてＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷ Ｇｌａｓ
ｓ （ゲルろ過）に供した。
化ナトリウム及びｌ０Ｘ（Ｖ／Ｖ）グリセロールを含む
緩衝液ＢにてＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷ Ｇｌａｓ
ｓ （ゲルろ過）に供した。
リテンンヨンタイム１２．０〜１６．０分に°制限酵素
画分を得、最終酵素標品（９６０ｕｎｉｔ）を得た。
画分を得、最終酵素標品（９６０ｕｎｉｔ）を得た。
ゲルろ過画分においては非特異的なりＮＡ分解酵素及び
フォスファターゼは見られなかった。
フォスファターゼは見られなかった。
［効 果］
上述した本発明によれば、従来使用されてきた制限酵素
に比べ、より幅広いｐＨ安定性、及び温度安定性を有す
る新規制限酵素の簡便な工業生産法が可能となった。
に比べ、より幅広いｐＨ安定性、及び温度安定性を有す
る新規制限酵素の簡便な工業生産法が可能となった。
Claims (3)
- （１）次の酵素化学的諸性質を有する新規制限酵素Ｃｃ
ｏＩ。 （ａ）作用及び基質特異性２本釦デオキシリボ核酸中の
塩基配列 ５′−ＧＣＣＧＧＣ−３′ ３′−ＣＧＧＣＣＧ−５′ を認識し、かつこれを矢印の位置で切断する（式中、Ｇ
はグアノシン、Ｃはシチジンを示す）。 （ｂ）至適ｐＨ８．０ （ｃ）安定ｐＨ５．０〜１０．０ （ｄ）至適温度４５℃ （ｅ）安定温度７０℃ 但し、５分間の加熱による。 （ｆ）安定塩濃度５０〜１００ｍＭ 但し、塩化ナトリウムによる。 （ｇ）分子量６２，０００ 但し、ゲルろ過法による。 - （２）クロストリジウム属に属する制限酵素ＣｃｏＩ生
産菌を栄養培地で培養し、培養物より制限酵素ＣｃｏＩ
を採取することを特徴とする制限酵素ＣｃｏＩの製造方
法。 - （３）クロストリジウム属に属する制限酵素ＣｃｏＩ生
産菌が、クロストリジウム・コッコイデスＢ−２である
特許請求の範囲第２項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2041512A JPH03244381A (ja) | 1990-02-21 | 1990-02-21 | 新規制限酵素及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2041512A JPH03244381A (ja) | 1990-02-21 | 1990-02-21 | 新規制限酵素及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03244381A true JPH03244381A (ja) | 1991-10-31 |
Family
ID=12610429
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2041512A Pending JPH03244381A (ja) | 1990-02-21 | 1990-02-21 | 新規制限酵素及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03244381A (ja) |
-
1990
- 1990-02-21 JP JP2041512A patent/JPH03244381A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5633138A (en) | Thermostable alkaline phosphatase of thermus thermophilus | |
| US4420562A (en) | Method for producing creatinase | |
| US4430432A (en) | Endo-deoxyribonuclease and process for the production thereof | |
| JPH03244381A (ja) | 新規制限酵素及びその製造方法 | |
| US5061628A (en) | Restriction endonuclease FseI | |
| JPH062061B2 (ja) | Ｎ−アセチルノイラミン酸リア−ゼの製法 | |
| JPS5820269B2 (ja) | グルコ−ス異性化酵素の製造方法 | |
| GB2183657A (en) | New restriction enzyme and process for producing the same | |
| US4886756A (en) | Novel restriction endonuclease SplI and process for the production of the same | |
| US4259446A (en) | Process for preparation of deoxyribonucleases | |
| US5120651A (en) | Restriction enzyme agei and process for producing same | |
| US4833082A (en) | New restriction enzyme and process for producing the same | |
| JPH03216188A (ja) | 新規制限酵素及びその製造方法 | |
| US4668631A (en) | Process for producing a restriction enzyme | |
| JPH03112484A (ja) | 新規制限酵素及びその製造方法 | |
| RU2070925C1 (ru) | Штамм бактерий escherichia coli - продуцент эндонуклеазы рестрикции eco 71 ki | |
| JPH0458884A (ja) | 新規制限酵素 | |
| RU2044053C1 (ru) | Штамм бактерий escherichia coli - продуцент эндонуклеазы рестрикции eco27k1 | |
| JPH02283281A (ja) | 新規制限酵素及びその製造法 | |
| RU2053298C1 (ru) | Штамм бактерий escherichia coli - продуцент эндонуклеазы рестрикции eco 75 ki | |
| SU908793A1 (ru) | Штамм еSснеRIснIа coLI в834 ( @ , @ ),несущий плазмиду RSF 2124,-тест субстрат дл рестрикционной эндонуклеазы ecoR11 | |
| SU1761803A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS aLVeI - продуцент рестриктазы BaV В II | |
| JPH0198484A (ja) | ２型−制限エンドヌクレアーゼ、その取得法、相補的二本鎖ｄｎａ−配列を認識及び切断する方法 | |
| JP2602840B2 (ja) | プラスミド及びそれで形質転換されたエシェリチア・コリ | |
| RU2044054C1 (ru) | Штамм бактерий escherichia coli - продуцент эндонуклеазы рестрикции eco 110 ki |