JPH03224482A - ワサビから分離された新規カルラウイルス(Carlavirus) - Google Patents

ワサビから分離された新規カルラウイルス(Carlavirus)

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JPH03224482A
JPH03224482A JP1720290A JP1720290A JPH03224482A JP H03224482 A JPH03224482 A JP H03224482A JP 1720290 A JP1720290 A JP 1720290A JP 1720290 A JP1720290 A JP 1720290A JP H03224482 A JPH03224482 A JP H03224482A
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岸根 日出男
Hiroko Nishida
浩子 西田
Toru Shimomura
徹 下村
Kanichirou Shiyouhara
匠原 監一郎
Shuichi Yamashita
修一 山下
Tsuneo Tsuchisaki
土崎 常男
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野] 本発明は退化現象の現れたワサビがら分離されたカルラ
ウィルス(Carlavirus)に属する新規ウィル
ス及びその変異株に関する。
本発明のウィルスは、退化現象の原因となるこれらのウ
ィルスにワサビが感染しているが否かを検定するための
抗体作製用の抗原として利用することができる。さらに
、これらのワサビウィルス病を予防乃至治療するための
検体として利用することもできる。
〔従来の技術〕
ワサビ−asabia ’a anica)の多くの品
種は実生で増殖されているが「真妻」等の優良品種は株
分けで増殖されている。しかし株分けを繰り返すことに
よって、根茎の肥大が悪くなり、子株もほとんど採れな
(なるといういわゆる退化現象が現われるので、優良株
分は品種は絶滅の危機に瀕している。この退化現象の主
な原因となっているのがウィルス感染によるウィルス病
と考えられている〔鈴木春夫ら、静岡農試研法■、55
〜66(1976) )。
ワサビから分離されているウィルスは門シー圓(ワサビ
系タバコモザイクウィルス) CMV(キエウリモザイ
クウイルス)及びTuMV (カブモザイクウィルス)
の3種が報告されている〔上掲誌、小室康謹ら、植物防
疫皿、486〜488 (1966)栃原比呂志ら、関
東東山病虫研報11,46(1964) )。現在のと
ころ、植物に感染しているウィルスを殺滅し、ウィルス
病を治療する農薬はまだ見出されていない、ウィルスに
感染した植物からウィルスを除去するいわゆるウィルス
フリー化のためのほとんど唯一の方法として組織培養技
術を利用した茎頂生長点培養法がラン、ユサ、カーネー
ション等の花卉、ブドウ、リンゴ、ミカン等の果樹、イ
チゴ、ヤマノイモ等の野菜、センキュウ、ジオウ等の薬
用植物において実用化されている。ワサビにおいても茎
頂生長点培養法が適用され、ノリクロン法や苗条原基茎
法により実用化が進められている。
しかし茎頂生長点培養法により作出した苗が全てウィル
スフリーになるわけではなく、茎頂生長点培養法により
作出した苗のウィルス検定は必須である。ウィルス検定
法には生物検定法、電子顕微鏡法及び抗血清試験法があ
り、対照とする植物とウィルスの種類により、これらの
方法を組合せて検定することが必要である。ワサビにお
いては前述のごとく3種類のウィルスすなわちTMV−
jl、CMV及びTuMVにのみ感染していることが知
られていたため、茎頂培養法により作出した培養菌がウ
ィルスフリーか否かの検定は当然、これら3種類のウィ
ルスのみを対照として行なわれてきた。しかし、検定の
結果、ウィルスフリーと判断されても、実際にはウィル
スに感染されていることが見出されている。
〔発明が解決しようとする課題〕
本発明は、ワサビのウィルス検定を確実なものとし、完
全にウィルスフリーなワサビを得ることを目的としてワ
サビに感染する新規なウィルスを検索し、これを獲得し
ようとするものである。そして得られたウィルスは、ワ
サビウィルス検定を行うための抗体作製用の抗原として
、またこれらのウィルス病の予防ないし治療のための検
体として利用しようとするものである。
〔課題を解決するための手段〕
本発明者らは、ワサビの新規ウィルスを取得することを
目的として静岡県湯ケ島町のワサビ田から得られたワサ
ビ(品種: 「真妻」)について新規ウィルスの検索を
行った。その結果、棒状ウィルス、ひも状ウィルス及び
桿菌状〜弾丸状ウィルスの3種のウィルスが検出された
。このうち棒状ウィルスは、300nm X 18n■
の大きさでTMV−賀の抗血清とよく反応したので、公
知のtabaco mosaic virusのワサビ
系と同定した。そしてひも状ウィルス及び桿菌状〜弾丸
状ウィルスについては、後述するような検定の結果、文
献未載の新種のウィルスであることが確認され、本発明
をなすに至った。
本発明は、上記2種のウィルスのうちひも状ウィルスで
あるカルラウィルス(Carlavirus)に属する
新規ウィルスに関する。
また、本発明のカルラウィルスは35〜37°Cで5〜
15日程度さらす高温処理、亜硝酸、ヒドロキシアミン
で処理する化学処理及びIn vitro +*uta
gen−esis−reverse genetics
法等による遺伝子操作等で変異させることができるが、
このような変異株も本発明は包含するものである。
本発明のウィルスについて採取法及び形態等を示すと次
のとおりである。
a) ウィルスの採取及び検出 Carlavirusの単離・増殖は、茎頂培養法によ
りCarlavirus単独感染メリクロン単独感染メ
ツクロンルシュート法でフリクロンを増殖させることに
より行なった。すなわち、伊豆湯ケ産のワサビ(品種:
「真妻」)を供試し、根茎あたり7〜8個の茎頂を摘出
し、この茎頂をベンジルアミノプリン1■/l及び寒天
10g/lを含むムラシゲスクーグ寒天培地上に置床し
て培養した。培養は18°C116時間照射/day、
2000 luxの人工気象器内で行なった。培養1〜
2力月後、1〜2C1に生長したシュートを電子顕微鏡
検定法、生物検定法及びELISA法によりウィルス検
定したところ、ウィルスフリー株、T?lV単独感染株
、Carlavirus単独感染株及びTM単独感染−
lavirus単独感染株が得られ単独感染−arla
virus単独感染株をマルチ単独感染−ト法により増
殖させることにより、Carlavirusを増殖した
。スライドグラス上に0.1*oj2/41!リン酸緩
衝液を一滴たらし、その中に上記で得たマルチプルシュ
ートを切りきざんで入れ、汁液をしみ出させた。
次イで、コロジオン支持膜を張り、カーボン補強した銅
製グリッドの膜面をこのワサビ汁液に接触させ、速やか
に余分の液を濾紙で吸いとり膜面を上にして風乾させた
。スライドグラス上に0.1vxo1/1リン酸緩衝液
に1%グルタルアルデヒドを溶かした固定液を数滴たら
し、その液面に風乾させたグリッドの試料面を下にして
3〜5分間浮かべ、固定させた。固定させた試料の乗っ
たグリッドを脱イオン蒸留水で3回洗浄した後、染色液
(2%リンタングステン酸水溶液、ドライウェル0.5
%添加pH7,0)で30秒間染色し、濾紙で余分の染
色液を吸いとり、膜面を上にして風乾させて検出のため
の試料とした。
b) ウィルスの形態の観察 この様にして作成した試料を透過型電子顕微鏡で検鏡し
、ウィルスの形態を観察した。
その結果、棒状ウィルス、ひも状ウィルス及び桿菌状〜
弾丸状の3種のウィルスが検出された。
棒状ウィルスは300nm X 18r+mの大きさで
、TMV−Hの抗血清とよ(反応したことから既知のT
MV−Wと同定した。ワサビに感染していることが報告
されているひも状ウィルスとしてはTuMVがあるが、
TuMVの大きさが750ローX1ltvであるのに対
し、本発明で検出されたひも状ウィルスは第1図に示す
ような形態を呈し、その大きさは650〜700nm 
X 13n+*と大きく異なり、またTuMVに感染し
た植物に特異的に見出される風車状封入体は見出されな
かった。
さらにTuMVの抗血清と全く反応しなかった。以上の
ことから本発明のひも状ウィルスはTuMVとは異なる
カルラウィルス(Carlavirus)に属するウィ
ルスであると判断した。桿菌状〜弾丸状のウィルスは2
30〜250nm X 85〜90nmで内部に4.5
nmのら旋構造のヌクレオキャプシドと外部に被膜を有
することから、このウィルスはラブドウィルス(P l
 antrhabdovirus)に属するウィルスで
あると判断した。
C)超薄切片法によるウィルスの細胞内所見グルタルア
ルデヒドとオスミウム酸による二重固定法により固定し
たワサビ試料をエポキシ樹脂に包埋・固化後、超薄切片
を作成した。この超薄切片を銅製グリッドにのせ、酢酸
ウランとクエン酸鉛による二重染色法で染色した。この
様に作成した試料を透過型電子顕微鏡で検鏡し、ウィル
スの細胞内存在様式及びウィルス感染細胞の変化につい
て観察した。
本発明のカルラウィルス(Carlavirus)に属
するひも状ウィルスは超薄切片法による観察により細胞
質内に散在あるいは集塊して認められ、感染細胞の細胞
質内には時に膜状構造体の増生が認められたが、TuM
V感染細胞にみられる様なたば状あるいは風車状の細胞
質封入体は検出されなかった。
d)寄主範囲 本発明のカルラウィルス(Carlavirus)が他
の植物に感染するかどうかについて第1表に示すハクサ
イ等2科13種の植物について接種試験を行った。
すなわち、カルラウィルス(Carlavirus)の
みに感染しているワサビフリクロンを作成し、これを接
種源として、各種植物に汁液接種した。ウィルス検定方
法は接種葉及び上葉について病徴を観察するとともにO
N法で行なった。
第1表に、2科13種の植物に汁液接種を行なった検定
結果を示した。この結果から分るように、いずれの植物
に対してもカルラウィルス(Carlavirus)の
感染は全く認められなかった。
ハクサイ カ    フ゛ コマツナ タイサイ キャベツ カリフラワー ブロッコリー 15 0/2 ケール       O/2 ダイコン(みの早生)015 (赤丸)015 サントウサイ    015 15 15 ち且吋y徂       0/1        0/
11)検出株数/供試株数 次にカルラウィルス(Carlavirus)、ラブド
ウィルス(P R,ant rhabdovirus)
及びTMV−に混合感染している親ワサビ「真妻」 (
品種名)を接種源としてアブラナ科植物を中心に6科2
9種の植物に汁液接種した。このようなアブラナ科植物
を中心に6科29種の植物に汁液接種を行なった結果を
第2表及び第3表に示した。いずれの植物に対してもカ
ルラウィルス(Carlavirus)及びラブドウィ
ルス(P l ant rhabdovirus)の感
染は認められなかった。
アブラナ科植物に感染するカルラウィルス(Carla
virus)としてはブラジルでケールラテントウイル
スただ一種だけが報告されているが、本発明で見出され
たカルラウィルス(Carlavirus)は第1表及
び第2表に示したとおりケールに感染せず、このことか
ら本発明のウィルスは新種のウィルスであることが明ら
かとなった。
第2表 キャベツ」エゴ11旦亜− 第3表 タバコ(Xanthi−nc) (Sumsun) Nicotiana   υ互u■互Lトマト(福寿2
号) ハ■紅nfloridana センニチコウ キュウリ (画集) ChenO0diu−amaranticolor虹」
吐組L ササゲ(十人ささげ) (ブラソフアイカラピー) インゲン(top crop) (大手亡) ソラマメ (−寸) エントウ (ウスイ) (14isconsin Perfection)(P
erfected  Waies)e) 新種ウィルス
の現地発生調査 ワサビ栽培現地のウィルス発生調査を行なった。
ワサビ5品種31検体についてDN法でウィルス検定を
行なった。本発明で見出されたカルラウィルス(Car
lavirus)は、5品種検体から検出され、ワサビ
にとって非常に重要ななウィルスであることが明らかと
なった。
(発明の効果) 本発明は、退化現象の現れたワサビから分離されたカル
ラウィルス(Carlavirus)に属する新種のウ
ィルスを提供するものである。
本発明の新種ウィルスは、栽培中のワサビがこのウィル
スに感染しているか否かの検定あるいは、組織培養によ
り作出した培養体がウィルスフリーになっているか否か
の検定のための抗体作製用抗原として利用することがで
きる。また、このウィルスに感染したワサビの治療乃至
感染予防のための研究の検体として利用することもでき
る。
その結果、ワサビの退化現象を予防し、ワサビの品質を
向上することができる。
【図面の簡単な説明】
第1図は、本発明の微生物カルラウィルス(Car−1
avirus)の形態を示す電子顕微鏡写真である(倍
率55,000倍)。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)ワサビから分離され、ダイレクトネガティヴ法(
    DN法)で約650〜700×13nmのヒモ状形態を
    示し、ターニップモザイクウイルス(turnipmo
    saicvirus)の抗血清と反応しないカルラウイ
    ルス(Carlavirus)に属するウィルスまたは
    その変異株
JP1720290A 1990-01-26 1990-01-26 ワサビから分離された新規カルラウイルス(Carlavirus) Expired - Lifetime JPH0636736B2 (ja)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109827983A (zh) * 2019-03-19 2019-05-31 湖州灵粮生态农业有限公司 一种电子束图像的水果表面缺陷检测方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN109827983A (zh) * 2019-03-19 2019-05-31 湖州灵粮生态农业有限公司 一种电子束图像的水果表面缺陷检测方法

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