JPH03240793A - アンフォテリシンｂの精製方法および組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はアンフォテリシンＢの精製方法および組成物、
更に詳しくは、４種の溶剤系を用いてアンフォテリシン
Ｂの精製および結晶化を改良する方法およびアンフォテ
リシンＢ組成物に関する。

従来技術 アンフォテリシンＢは強い抗真菌剤であって、ポリエン
マクロライド抗生物質として公知の化合物群の１っであ
る。これらの化合物の特徴は、共役二重結合鎖を有する
大きなラクトン環である。

アンフオテリンンＢ１およびそのストレプトミセス・ナ
トサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｎｏｄｏｓｕｓ）
からの製法は、ダッチャーらのＶ、Ｓ、特許第２９０８
６１１号（１９５９年ＩＯ月１３日発行）に開示されて
いる。アンフォテリシンＢの構造は、下式で示されるこ
とが知られ、でいる。

）１０ ダッチャーらが開示する、アンフォテリシンの抽出およ
び結晶化方法は、 Ａ）粗アンフォテリシンを酸と共にアルコールにスラリ
ー化した後、強塩基で中和するか、あるいは Ｂ）粗アンフォテリシンをジメチルホルムアミドでスラ
リー化し、これを水性アルコールまたは水性ケトンで処
理する 方法である。

ミッチェルらのＵ、Ｓ、特許第４１７７２６５号に、ア
ンフォテリシンＢの精製方法が開示され、この方法でヨ
ウ化ナトリウムまたはチオシアン酸ナトリウムおよびア
セトンまたはメタノールから成る可溶化剤が用いられて
いる。これら可溶化剤のいずれか１つを用いることによ
り、アンフォテリシンＢの可溶性が多いに改良され、さ
もなければアセトンまたはメタノール単独での可溶性が
制限される。

アンフォテリシンＢの精製に有用で、一貫性の高い収率
の高結晶物を付与しうる新しい方法および組成物が求め
られている。

発明の構成と効果 本発明は、アンフォテリシンＢの精製に好適で、−貫し
て高収率の結晶物を付与しうる新しい方法および結晶化
組成物を提供するものである。本発明の新しいアンフナ
テリシン８組成物は、アンフォテリシンＢをメタノール
、ジメチルホルムアミド、塩化メチレンおよび水との溶
液で含有する。本発明の新しい方法は、粗製、部分精製
または汚染アンフォテリシンＢを、メタノール、ジメチ
ルホルムアミドおよび酸の溶液に溶解し：得られる抽出
混合物を不溶成分から分離し：精製した抽出物を塩化メ
チレンおよび水の混合溶剤と混合し；アンフォテリシン
Ｂを結晶化し：次いで結晶物を回収することから成る。

アンフォテリシンＢの製造操作の一貫性および生成物の
結晶性は、本発明方法の４種溶剤系を採用することによ
り実質的に改良されうろことがわかった。４種溶剤系は
、アンフォテリシンＢを最初に溶解するジメチルホルム
アミドおよびメタノール、並びに最初の溶液の濾過後に
加える、塩化メチレンおよび水から成る。得られるアン
フォテリシンＢの結晶化組成物は、アンフォテリシンＢ
、および上記４種の溶剤中でアンフォテリシンＢと共に
塩を形成しうる酸から成る。

加えて、精製、結晶化、濾過および洗浄後、生成物を少
なくとも２重量％、好ましくは約２〜６重量％の水分が
保持されるように乾燥すれば、より安定な結晶物質が得
られることがわかった。

下記表に本発明方法の利点を示す。なお、表には、ダッ
チャーらのＵ、Ｓ、特許第２９０８６１１号に記載の方
法（従来法）と本発明方法のそれぞれから得られるアン
フォテリシンＢ生成物の比較か示されている。各生成物
について、微生物学的効力、収率、純度（生成物の強熱
後の残量によって測定）、および安定性を測定した。

これらの改良を発現させる正確なメカニズムはわからな
いが、アンフォテリシンＢ１メタノールおよびツメチル
ホルムアミドに加えられる塩化メチレンと水が結晶構造
を強化し、これによって、得られるアンフォテリシンＢ
の微生物学的効力、純度および安定性を増進すると思わ
れる。

精製方法で出発原料として用いるアンフォテリシンＢと
しては、粗製、部分精製または不純アンフォテリシンＢ
が包含される。なお、「不純アンフォテリシンＢ」とは
、アンフォテリシンＢを薬理用途に対して許容されない
ようにする物理的不純物（たとえばゴミ粒子、繊維物質
および他の粒状成分）を含有していることを意味する。

本発明方法の第１工程は、出発原料のアンフォテリシン
Ｂをメタノールおよびジメチルホルムアミドの混合物に
懸濁しく但し、順序は任意）、これに酸を加えてアンフ
ォテリシンＢを抽出する工程である。酸としては、アン
フォテリシンＢと共に容易に塩を形成するものであれば
いずれであってもよく、たとえばクエン酸、塩化水素酸
、硫酸などが挙げられる。温度は臨界的でないが、上記
形成した混合物の温度を約１５〜２０℃に調整し、次い
で出発原料のアンフォテリシンＢが溶解するまで撹拌す
ることにより、抽出を行うことが好ましい。

抽出混合物の分離は、当該分野で周知の操作を用いて行
う。好ましくは、濾過を採用して不溶物質からアンフォ
テリシンＢ抽出物を分離する。

次いで、精製したアンフォテリシンＢ抽出物を塩化メチ
レンおよび水の混合溶剤と混合する。温度と塩化メチレ
ンおよび水の添加順序は臨界的ではないが、水を約５〜
ｌＯ℃に冷却することが好ましい。この混合物のｐ）ｌ
を、水性トリエタノールアミンなどの水性塩基または他
の任意の適当な塩基を用いて約５〜７、好ましくは約６
に調整する。この混合物は非晶質生成物を沈澱させ、得
られるスラリー（非晶質生成物と溶剤のスラリー）は、
アンフォテリシンＢの結晶物質への転移を促進する好適
な環境を提供する。

非晶質アンフォテリシンＢのスラリーを、約４０〜６０
℃、好ましくは約４５〜５５℃の温度で加熱することに
より、結晶物質に変換する。必要に応じて、スラリーに
少量の種結晶を加えて、結晶化を促進させてもよい。

結晶アンフォテリシンＢの回収は、通常の操作法（たと
えば遠心分離または濾過）を用いて行うことができる。

単離した物質は、要すれば、乾燥前に適当な溶剤で洗浄
することができる。好ましくは、単離した結晶物質を、
少なくとも２重量％、最適には２〜６重量％の水分が保
持されるように乾燥すべきである。洗浄工程に用いる溶
剤の具体例は、アセトン、アセトンと水の混合物、メタ
ノール、メタノールと水の混合物、水、またはこれらの
組合せである。

上記方法を行うための操作条件は、無菌生成物が得られ
るように選定すればよい。

次に実施例を挙げて、本発明をより具体的に説明するが
、本発明はこれらの実施例によって制限されるものでは
ない。

実施例凰 ５６５１７ｆ７）メタノールニ、約１０８Ｋ（べ−Ｘｋ
ｇ、すなわち純活性物質のｋ　ｇ）のアンフォテリシン
Ｂおよび２２５Ｑのジメチルホルムアミドを加える。約
ｔｓ、ｓｋｙのクエン酸・モノ水和物（または当量の酸
無水物）を加える。混合物を１５〜２０℃に維持して、
投入物が実質的に溶解するまで撹拌する。次いで濃厚溶
液を濾過して透明にす次に、濾液に約１４０ｅの塩化メ
チレンを加える。約５〜ｌＯ℃に冷却した、約２２５ｅ
の水を加える。次いでｐＨを約６に調整して、アンフォ
テリシンＢを析出せしめる。このｐＨＨ整には、４０％
Ｖ／Ｖの水性トリエタノールアミンを使用した。次いで
、得られるスラリーを約３０分にわたり約４４〜４６℃
に加熱する。顕微鏡検査で測定しながら、生成物が結晶
化したとき、混合物を２〜３時間にわたって約ｌθ℃に
冷却する。次いで精製した生成物を濾過で単離し、約８
５１２の４０％Ｖ／Ｖの冷水性メタノールで洗浄する。

次いでウェットケーキを約１４０７２のアセトンにスラ
リー化する。濾過後、ケーキを約２８９のアセトンで洗
浄し、次いで含水量２〜６％まで乾燥する。

これによって、約９．７８にのアンフォテリシンＢを特
徴する

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アンフォテリシンＢ、およびアンフォテリシンＢと
   共に塩を形成しうる酸を、メタノール、ジメチルホルム
   アミド、塩化メチレンおよび水からなる溶液に配合して
   成ることを特徴とするアンフォテリシンＢ組成物。 ２、他の成分として、組成物ｐＨを約５〜７に調整する
   薬剤を含有する請求項第１項記載の組成物。 ３、ａ）アンフォテリシンＢ、メタノール、ジメチルホ
   ルムアミドおよびアンフォテリシンＢと共に塩を形成し
   うる酸の溶液を形成し、 ｂ）不溶物からアンフォテリシンＢ抽出物を分離し、 ｃ）該アンフォテリシンＢ抽出物を、塩化メチレンおよ
   び水からなる混合溶剤と混合し、ｄ）得られる混合物の
   ｐＨを約５〜７に調整し、 ｅ）かかるスラリーを加熱して、結晶物質の形成を促進
   し、次いで ｆ）結晶アンフォテリシンＢを回収する ことを特徴とするアンフォテリシンＢの精製および結晶
   化方法。 ４、ｉ）工程（ｅ）で形成した結晶物質を残りの溶剤か
   ら分離し、次いで ｉｉ）分離した結晶を洗浄および乾燥し、この場合約２
   〜６重量％の水分が保持されるように乾燥することによ
   り、結晶物質の回収を行う請求項第３項記載の方法。 ５、工程（ａ）を約１５〜２０℃で行う請求項第３項記
   載の方法。 ６、工程（ａ）において、アンフォテリシンＢ、メタノ
   ールおよびジメチルホルムアミドを混合し、次いでこれ
   にクエン酸を加える請求項第３項記載の方法。 ７、分離を濾過で行う請求項第３項記載の方法。 ８、工程（ｃ）において、アンフォテリシンＢ抽出物に
   塩化メチレンを加えた後、かかる塩化メチレンおよび抽
   出物に約５〜１０℃の温度で水を加える請求項第３項記
   載の方法。９、工程（ｄ）において、混合物のｐＨを約
   ６に調整する請求項第３項記載の方法。 １０、非晶質アンフォテリシンＢを約４０〜６０℃に加
   熱して、結晶アンフォテリシンＢに変換する請求項第３
   項記載の方法。