JPH03244388A - 澱粉若しくは澱粉加水分解物からマルトース及びマルトトリオースを生成する方法 - Google Patents
澱粉若しくは澱粉加水分解物からマルトース及びマルトトリオースを生成する方法Info
- Publication number
- JPH03244388A JPH03244388A JP2122810A JP12281090A JPH03244388A JP H03244388 A JPH03244388 A JP H03244388A JP 2122810 A JP2122810 A JP 2122810A JP 12281090 A JP12281090 A JP 12281090A JP H03244388 A JPH03244388 A JP H03244388A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amylase
- pullulanase
- enzyme
- starch
- maltose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/16—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an alpha-1, 6-glucosidase, e.g. amylose, debranched amylopectin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2451—Glucanases acting on alpha-1,6-glucosidic bonds
- C12N9/2457—Pullulanase (3.2.1.41)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01041—Pullulanase (3.2.1.41)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/842—Clostridium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、澱粉若しくは澱粉加水分解物からマルトース
及びマルトトリオースを生成する方法に係り、とりわけ
新しいタイプのアミラーゼ、即ち、澱粉からマルトース
シロップを生威し得る高温で安定なα−アミラーゼ−プ
ルラナーゼ （ａｍｙｌａｓｅ−ｐｕｌｌｕｌａｎａｓｅ）酵素を使
用するマルトース及びマルトトリオースの生成方法に関
する。この可溶性の酵素は、デキストリン若しくは低分
子量の可溶性澱粉を含む培養媒体上でクロストリジウム
属のサーモハイドロサルファリキュム（ｔｈｅｒｍｏｈ
ｙｄｒｏｓｕｌｆｕｒｉｃｕｍ）変種（ｓｔｒａｉｎｓ
）が生長する時、該変種によって培養媒体中に生成され
る。
及びマルトトリオースを生成する方法に係り、とりわけ
新しいタイプのアミラーゼ、即ち、澱粉からマルトース
シロップを生威し得る高温で安定なα−アミラーゼ−プ
ルラナーゼ （ａｍｙｌａｓｅ−ｐｕｌｌｕｌａｎａｓｅ）酵素を使
用するマルトース及びマルトトリオースの生成方法に関
する。この可溶性の酵素は、デキストリン若しくは低分
子量の可溶性澱粉を含む培養媒体上でクロストリジウム
属のサーモハイドロサルファリキュム（ｔｈｅｒｍｏｈ
ｙｄｒｏｓｕｌｆｕｒｉｃｕｍ）変種（ｓｔｒａｉｎｓ
）が生長する時、該変種によって培養媒体中に生成され
る。
（従来の技術）
澱粉のグルコース単位（ｕｎｉｔｓ）は、主にα−１゜
４−グルコシドの結合基（ｌｉｎｋａｇｅｓ）によって
互いに連結され長い主鎖を形成する。加えて、澱粉はα
−１，６−グルコシドの結合基を有し、これは上記主鎖
の側鎖部分に結合基として存在する。
４−グルコシドの結合基（ｌｉｎｋａｇｅｓ）によって
互いに連結され長い主鎖を形成する。加えて、澱粉はα
−１，６−グルコシドの結合基を有し、これは上記主鎖
の側鎖部分に結合基として存在する。
α−アミラーゼは、主鎖に沿って澱粉の１．４結合基を
アトランダムに切り（ｃｌｓａｖｅ） 、一方α−アミ
ラーゼは非還元性の主鎖末端で同様の結合基を切る。こ
れに対しプルラナーゼは、波切酵素であって分岐点の１
．６−結合基を切る。
アトランダムに切り（ｃｌｓａｖｅ） 、一方α−アミ
ラーゼは非還元性の主鎖末端で同様の結合基を切る。こ
れに対しプルラナーゼは、波切酵素であって分岐点の１
．６−結合基を切る。
マルトースシロップは、植物（ｐｌａｎｔ ）β−アミ
ラーゼをして澱粉を加水分解することにより、もしくは
糸状菌（ｍｏｌｄ）α−アミラーゼを糖化してバクテリ
ア性α−アミラーゼを用いて液化された澱粉を更に加水
分解することにより調製される。
ラーゼをして澱粉を加水分解することにより、もしくは
糸状菌（ｍｏｌｄ）α−アミラーゼを糖化してバクテリ
ア性α−アミラーゼを用いて液化された澱粉を更に加水
分解することにより調製される。
いずれの方法によってもおよそ６０％のマルトースを含
むマルトースシロップが得られる。プルラナーゼとα−
アミラーゼを併用すればこれにより高い収率のマルトー
スが得られる。マルトースシロップは、特有のマイルド
な甘み、低粘度、低吸湿性及び高熱安定性の由に菓子及
びパン製造業において主に用いられている。
むマルトースシロップが得られる。プルラナーゼとα−
アミラーゼを併用すればこれにより高い収率のマルトー
スが得られる。マルトースシロップは、特有のマイルド
な甘み、低粘度、低吸湿性及び高熱安定性の由に菓子及
びパン製造業において主に用いられている。
（発明が解決しようとする問題点）
もし用いられる酵素が高温で活性且つ安定であれば、澱
粉の加水分解工程にとって好都合である。
粉の加水分解工程にとって好都合である。
しかし、β−アミラーゼ、糸状菌α−アミラーゼ及び肝
炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
）及び桿菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）等の商業的に有用
なプルラナーゼは６０℃以上の温度では使用不可である
。このように高熱安定性の麦芽糖酵素（ｍａｌｔｏｇｅ
ｎｉｃ−ｅｎｚｙｍｅ）はマルトースシロップの生成に
好適である。
炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
）及び桿菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）等の商業的に有用
なプルラナーゼは６０℃以上の温度では使用不可である
。このように高熱安定性の麦芽糖酵素（ｍａｌｔｏｇｅ
ｎｉｃ−ｅｎｚｙｍｅ）はマルトースシロップの生成に
好適である。
もしいくつかの酵素を工程中に用いんとすれば。
酵素の安定化条件（ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｑｕｉｒｅ
＋５ｅｎｔｓ ）に関して中間物（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓ
ｅｓ ）を形成すること、若しくは遷移中（ｉｎ ５ｕ
ｃｃｅｓｓｉｏｎ ）に酵素を用いること及び中間工程
を調整をすることのいずれかが通常必要とされる。簡略
化及び経済性の点から、単一の酵素が工程にとって満足
するものであるならばより望ましいであろう。この理由
から、マルトースシロップの生成に用いられべき理想的
な酵素は。
＋５ｅｎｔｓ ）に関して中間物（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓ
ｅｓ ）を形成すること、若しくは遷移中（ｉｎ ５ｕ
ｃｃｅｓｓｉｏｎ ）に酵素を用いること及び中間工程
を調整をすることのいずれかが通常必要とされる。簡略
化及び経済性の点から、単一の酵素が工程にとって満足
するものであるならばより望ましいであろう。この理由
から、マルトースシロップの生成に用いられべき理想的
な酵素は。
液化性、糖化性且つ澱粉の波切能（ｄｅｂｒａｎｃｈｉ
ｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ）を備えているべきである。
ｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ）を備えているべきである。
Ｈｙｕｎ及びＺｅｉｋｕｓ（１９８５； Ｊ、Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｅ、４９，１１６８）は、米国イエローストン
国立公園のオクトパス温泉（ｈｏｔ ０ｃｔｏｐｕｓ
ｓｐｒｉｎｇ）から単離されたクロストリジウム属のサ
ーモハイドロサルファリキュム変種Ｅ３９（ＡＴＣＣ３
３２２３）により澱粉を分解することについて研究した
。この変種は、細胞結束（ｃｅｌｌ−ｂｏｕｎｄ） し
たプルラナーゼ及びグルコースアミラーゼは生成すこと
はあってもα−アミラーゼを生成することはない。上記
変種Ｅ３９から得られる製剤（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
ｓ）は、中間工成物としてｆＲ察されグルコース、マル
トース以外のマルトトリオース若しくはマルトテトラオ
ースを生成しながら澱粉を加水分解する。
ｅｒｉｏｅ、４９，１１６８）は、米国イエローストン
国立公園のオクトパス温泉（ｈｏｔ ０ｃｔｏｐｕｓ
ｓｐｒｉｎｇ）から単離されたクロストリジウム属のサ
ーモハイドロサルファリキュム変種Ｅ３９（ＡＴＣＣ３
３２２３）により澱粉を分解することについて研究した
。この変種は、細胞結束（ｃｅｌｌ−ｂｏｕｎｄ） し
たプルラナーゼ及びグルコースアミラーゼは生成すこと
はあってもα−アミラーゼを生成することはない。上記
変種Ｅ３９から得られる製剤（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
ｓ）は、中間工成物としてｆＲ察されグルコース、マル
トース以外のマルトトリオース若しくはマルトテトラオ
ースを生成しながら澱粉を加水分解する。
（問題点を解決する為の手段）
本発明方法で使用されている酵素は前述のアミラーゼと
は異なる。なぜなら、該酵素は、同じ蛋白質分子中に２
つの分離された酵素活性基、α−アミラーゼ及びプルラ
ナーゼが共存する全く新しいタイプのアミラーゼ即ちα
−アミラーゼ−プルラナーゼであるからである。
は異なる。なぜなら、該酵素は、同じ蛋白質分子中に２
つの分離された酵素活性基、α−アミラーゼ及びプルラ
ナーゼが共存する全く新しいタイプのアミラーゼ即ちα
−アミラーゼ−プルラナーゼであるからである。
本発明方法で使用されているα−アミラーゼプルラナー
ゼ酵素は澱粉を分解してマルトースとマルトトリオース
にする。
ゼ酵素は澱粉を分解してマルトースとマルトトリオース
にする。
本発明方法で使用されるα−アミラーゼ−プルラナーゼ
の生成物は、１９６９年にオーストラリア砂糖工場で単
離された（Ｈｏｌｌａｕｓ ＆ Ｋｌａｕｓｈｏｆｅｒ
。
の生成物は、１９６９年にオーストラリア砂糖工場で単
離された（Ｈｏｌｌａｕｓ ＆ Ｋｌａｕｓｈｏｆｅｒ
。
１９７３ ； Ｉｎｔ、Ｓｕｇａｒ Ｊ、、７５，２３
７−２４１及び２７１−２７５ ）クロストリジウム属
のサーモハイドロサルファリキュム変種Ｅ １０１−６
９（Ｄ Ｓ Ｍ ３７８３）及びＥｌｏｏ−６９（ＤＳ
、Ｍ ５６７）と共に観察された。変種Ｅ１００−６９
は、バクテリア性りロストリジウム属のサーモハイドロ
サルファリキュムの新しいタイプの変種である。クロス
トリジウム属のサーモハイドロサルファリキュム変種Ｅ
１０１−６９は、１９８６年７月３日に上記の如く寄託
番号ＤＳＭ３７８３としてドイツの微生物寄託所（Ｓａ
ｍ＋＋＋ｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓ
ｗｈｅｎ）に寄託された。変種Ｅ１００−６９はそれよ
り以前に同じ寄託所（ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）にその発
見者によって寄託された。 サツ力ロミケスセレビシェ
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
）酵母のいくつかの変種のうち、エタノールを生成す
為炭素源としてマルトース及びマルトトリオースが用い
られ得る（Ｓｔｅｔｉａｒｔ ＆ Ｒｕ５ｓｅｌ、１９
８３ ； ｉｎ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ。
７−２４１及び２７１−２７５ ）クロストリジウム属
のサーモハイドロサルファリキュム変種Ｅ １０１−６
９（Ｄ Ｓ Ｍ ３７８３）及びＥｌｏｏ−６９（ＤＳ
、Ｍ ５６７）と共に観察された。変種Ｅ１００−６９
は、バクテリア性りロストリジウム属のサーモハイドロ
サルファリキュムの新しいタイプの変種である。クロス
トリジウム属のサーモハイドロサルファリキュム変種Ｅ
１０１−６９は、１９８６年７月３日に上記の如く寄託
番号ＤＳＭ３７８３としてドイツの微生物寄託所（Ｓａ
ｍ＋＋＋ｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓ
ｗｈｅｎ）に寄託された。変種Ｅ１００−６９はそれよ
り以前に同じ寄託所（ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）にその発
見者によって寄託された。 サツ力ロミケスセレビシェ
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
）酵母のいくつかの変種のうち、エタノールを生成す
為炭素源としてマルトース及びマルトトリオースが用い
られ得る（Ｓｔｅｔｉａｒｔ ＆ Ｒｕ５ｓｅｌ、１９
８３ ； ｉｎ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ。
Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ａ
ｓｐｅｃｔｓ、Ｐ、４６１．ｅｄｓ。
ｓｐｅｃｔｓ、Ｐ、４６１．ｅｄｓ。
Ｊ、５ｐｅｎｃｅｒ、 Ｄ、５ｐｅｎｃｅｒ ａｎｄ
Ａ、Ｓｍ１ｔｈ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ
ｅｔｉ Ｙｏｒｋ） 、 ａ−アミラーゼ−プルラナー
ゼはとりわけ澱粉をこれら糖分の混合物に分解するので
、α−アミラーゼ−プルラナーゼをつぶした酵素（ｍａ
ｓｈｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ）として用いることによって
酵母菌によって澱粉からエタノールが生成され得る。
Ａ、Ｓｍ１ｔｈ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ
ｅｔｉ Ｙｏｒｋ） 、 ａ−アミラーゼ−プルラナー
ゼはとりわけ澱粉をこれら糖分の混合物に分解するので
、α−アミラーゼ−プルラナーゼをつぶした酵素（ｍａ
ｓｈｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ）として用いることによって
酵母菌によって澱粉からエタノールが生成され得る。
添付図面は、以下の如く本発明方法に使用するα−アミ
ラーゼ−プルラナーゼの特性を示すものである。
ラーゼ−プルラナーゼの特性を示すものである。
第１図は、α−アミラーゼ−プルラナーゼ活性基の温度
特性を、第２図は８５℃（Ａ）及び６０℃（Ｂ）におけ
α−アミラーゼ−プルラナーゼ活性基のＰＨ特性を、第
３図は基質（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ）及びカルシウムを
含まない緩衝剤中での異なった温度におけα−アミラー
ゼ−プルラナーゼの不活性度を。
特性を、第２図は８５℃（Ａ）及び６０℃（Ｂ）におけ
α−アミラーゼ−プルラナーゼ活性基のＰＨ特性を、第
３図は基質（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ）及びカルシウムを
含まない緩衝剤中での異なった温度におけα−アミラー
ゼ−プルラナーゼの不活性度を。
第４図は高温度でのカルシウムによるα−アミラーゼ−
プルラナーゼの安定性を、第５図は異なった温度におけ
る精製α−アミラーゼ−プルラナーゼによる澱粉の加水
分鮮度を、第６図は異なった温度におけるα−アミラー
ゼ−プルラナーゼによって形成された最終生成物の薄層
クロマトグラムを、夫々示す。
プルラナーゼの安定性を、第５図は異なった温度におけ
る精製α−アミラーゼ−プルラナーゼによる澱粉の加水
分鮮度を、第６図は異なった温度におけるα−アミラー
ゼ−プルラナーゼによって形成された最終生成物の薄層
クロマトグラムを、夫々示す。
蔓亙隻企基立且定
α−アミラーゼ及びプルラナーゼの活性度は、これらに
より純粋なアミロース（ポテトから得たタイプｍ ：
Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｓ＋１ｃａｌ Ｃｏ、Ｌｔｄ、、Ｓ
ｔ、Ｌｏｕｉｓ、Ｍ。
より純粋なアミロース（ポテトから得たタイプｍ ：
Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｓ＋１ｃａｌ Ｃｏ、Ｌｔｄ、、Ｓ
ｔ、Ｌｏｕｉｓ、Ｍ。
６３１７８ＵＳＡ）及びプルラン（ｐｕｌｌｕｌａｎ）
−（Ｓｉｇｍａ）から遊離した糖分の減少速度を測定
することにより同定した。２５μＱの酵素を、２ミリモ
ルのＣａ Ｃｌ ｚ、０．１ミリモルのＮａ、−ＥＤＴ
Ａ、及び５０ミリモルのＮａＣ１を含みＰＨ５，６に調
整された１００ミリモルの酢酸ナトリウム緩衝剤中０．
５％濃度の基質１ｍｌに添加した。チューブ（ｔｕｂｅ
ｓ ）を８５℃で１５分間保温した後、Ｎｅ１ｓｏｎ
−Ｓｏａ＋ｏｇｙｉ法（Ｎｅｌｓｏｎｔ１９４４；Ｊ、
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋ｗ、、１５３．３７５ ； Ｓｏｍ
ｏｇｙｉ、１９５２；Ｊ。
−（Ｓｉｇｍａ）から遊離した糖分の減少速度を測定
することにより同定した。２５μＱの酵素を、２ミリモ
ルのＣａ Ｃｌ ｚ、０．１ミリモルのＮａ、−ＥＤＴ
Ａ、及び５０ミリモルのＮａＣ１を含みＰＨ５，６に調
整された１００ミリモルの酢酸ナトリウム緩衝剤中０．
５％濃度の基質１ｍｌに添加した。チューブ（ｔｕｂｅ
ｓ ）を８５℃で１５分間保温した後、Ｎｅ１ｓｏｎ
−Ｓｏａ＋ｏｇｙｉ法（Ｎｅｌｓｏｎｔ１９４４；Ｊ、
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋ｗ、、１５３．３７５ ； Ｓｏｍ
ｏｇｙｉ、１９５２；Ｊ。
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｎ＋、、１９５．１９ ）により糖分
の減少量を決定した。上述の分析において、α−アミラ
ーゼ若しくはプルラナーゼ酵素１単位により遊離された
砂糖の減少量は、無水グリコースの１０億分のＩモルに
対応する。アミロースをＨＣＩで中和された１モルＮａ
ＯＨ溶液に導入し、上記緩衝剤を添加し、最後に１ 、
２ μｍ ＲＡＩＩＰ膜フィルタ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ
Ｃａｒｐ。
の減少量を決定した。上述の分析において、α−アミラ
ーゼ若しくはプルラナーゼ酵素１単位により遊離された
砂糖の減少量は、無水グリコースの１０億分のＩモルに
対応する。アミロースをＨＣＩで中和された１モルＮａ
ＯＨ溶液に導入し、上記緩衝剤を添加し、最後に１ 、
２ μｍ ＲＡＩＩＰ膜フィルタ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ
Ｃａｒｐ。
、Ａｓｈｂｙ Ｒｏａｄ Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡＯ１７
３０，ＵＳＡ ）を用いて濾過した。
３０，ＵＳＡ ）を用いて濾過した。
蛋白質をＬｏｗｒｙの方法（Ｌｏｗｒｙ ｅｔ ａｌ、
、１９５２ ； Ｊ。
、１９５２ ； Ｊ。
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、１９３，２５６）によりオヴア
ルブミン（Ｓｉｇｍａから提供）を標準として同定した
。
ルブミン（Ｓｉｇｍａから提供）を標準として同定した
。
使用媒体の組成
成分 ｇ／Ｑ可溶性
澱粉（Ｚｕｌｋｏｗｓｋｙによる） ２０
．０（Ｅ＋ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｆｅｄｅ
ｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍ−ａｎｙ） イーストエキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ）
５．０（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ、ＵＳＡ）トリ
プトン １０．０（Ｄｉ
ｆｃｏ） 肉エキス（Ｌａｂ −Ｌｅｍｃｏ）
５．０（Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ、、Ｂａｓｉｎｇｓｔ
ｏｋｅ、Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ、Ｅｎｇｌａｎｄ）ＫＨ，
Ｐｏ４６．８ に２ＨＰＯ４・３Ｈ，０１１，４ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２００，０２ ＭｇＳＯ４・７Ｈ，ＯＯ，０１ ＣａＣ１２・２Ｈ２００，０Ｉ ＰＨ６，８ 生酔 ｒａｗ ｅｎｚ ｍｅの ｃｈａｒａｃｔｅ
ｒｉｚａｔｉｏｎ）変種ＥＩＯＩ−６９を、レザズリン
１■ＩＱ及びチオグリコール酸２００μＱ／Ｑを事前に
加えた上記媒体上で、６８℃非酸化条件下（ａｎａｅｒ
ｏｂｉｃ ｃｏｎｄｉ−ｔｉｏｎｓ） ３０時間、攪拌
なしで２Ｑフラスコ中で培養した。細胞を遠心分離によ
り取り除き、その後硫酸アンモニウムに７０％飽和させ
ることにより。
澱粉（Ｚｕｌｋｏｗｓｋｙによる） ２０
．０（Ｅ＋ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｆｅｄｅ
ｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍ−ａｎｙ） イーストエキス（Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ）
５．０（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ、ＵＳＡ）トリ
プトン １０．０（Ｄｉ
ｆｃｏ） 肉エキス（Ｌａｂ −Ｌｅｍｃｏ）
５．０（Ｏｘｏｉｄ Ｌｔｄ、、Ｂａｓｉｎｇｓｔ
ｏｋｅ、Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ、Ｅｎｇｌａｎｄ）ＫＨ，
Ｐｏ４６．８ に２ＨＰＯ４・３Ｈ，０１１，４ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２００，０２ ＭｇＳＯ４・７Ｈ，ＯＯ，０１ ＣａＣ１２・２Ｈ２００，０Ｉ ＰＨ６，８ 生酔 ｒａｗ ｅｎｚ ｍｅの ｃｈａｒａｃｔｅ
ｒｉｚａｔｉｏｎ）変種ＥＩＯＩ−６９を、レザズリン
１■ＩＱ及びチオグリコール酸２００μＱ／Ｑを事前に
加えた上記媒体上で、６８℃非酸化条件下（ａｎａｅｒ
ｏｂｉｃ ｃｏｎｄｉ−ｔｉｏｎｓ） ３０時間、攪拌
なしで２Ｑフラスコ中で培養した。細胞を遠心分離によ
り取り除き、その後硫酸アンモニウムに７０％飽和させ
ることにより。
α−アミラーゼ−プルラナーゼの生製剤が表面に浮いた
培養媒体から分離沈殿し、そのα−アミラ−ゼの活性基
は５２０単位／■Ｑ（Ｕ■党１）及びプルラナーゼ活性
基は１５５０単位／■党 となった、該酵素の本来的性
質のいくつかは、１２０００単位／ｍＱのα−アミラー
ゼの活性基及び３７０００単位／ ｍ Ｑのプルラナー
ゼ活性基を有するこの生製剤を用いることにより特徴付
けられた。
培養媒体から分離沈殿し、そのα−アミラ−ゼの活性基
は５２０単位／■Ｑ（Ｕ■党１）及びプルラナーゼ活性
基は１５５０単位／■党 となった、該酵素の本来的性
質のいくつかは、１２０００単位／ｍＱのα−アミラー
ゼの活性基及び３７０００単位／ ｍ Ｑのプルラナー
ゼ活性基を有するこの生製剤を用いることにより特徴付
けられた。
酵素の両活性基共、希釈した生酵素（１２００単位／鳳
αのα−アミラーゼ及び３７００単位／ ｍ Ｑのプル
ラナーゼのα−アミラーゼ及びプルラナーゼ活性基を上
述の方法（Ｐ８−９）により異なった温度で決定すると
、最適温度は８５℃（第１図）となった。
αのα−アミラーゼ及び３７００単位／ ｍ Ｑのプル
ラナーゼのα−アミラーゼ及びプルラナーゼ活性基を上
述の方法（Ｐ８−９）により異なった温度で決定すると
、最適温度は８５℃（第１図）となった。
両活性基の最適ＰＨは、８５℃で同定した場合（第２図
Ａ）いずれも５．６であり、６０℃で同定した場合（第
２図Ｂ）５．２であった。ここで図中数値１００は面温
度条件におけ最も高い活性基数を示す、希釈された生酵
素（３０単位のα−アミラーゼ及び９０単位のプルラナ
ーゼ）２５μ２を、ＰＨが異なった値に調整され且つ０
．５％のアミロース若しくはプルラン５０ミリモルのＮ
ａＣ１及び１０ミリモルのＣａＣｌ２含む１００ミリモ
ルのクエン酸ナトリウム１ｍＱに添加した。その後チュ
ーブを８５℃若しくは６０℃で１５分間保温し、遊離し
た糖分の減少度を同定した。
Ａ）いずれも５．６であり、６０℃で同定した場合（第
２図Ｂ）５．２であった。ここで図中数値１００は面温
度条件におけ最も高い活性基数を示す、希釈された生酵
素（３０単位のα−アミラーゼ及び９０単位のプルラナ
ーゼ）２５μ２を、ＰＨが異なった値に調整され且つ０
．５％のアミロース若しくはプルラン５０ミリモルのＮ
ａＣ１及び１０ミリモルのＣａＣｌ２含む１００ミリモ
ルのクエン酸ナトリウム１ｍＱに添加した。その後チュ
ーブを８５℃若しくは６０℃で１５分間保温し、遊離し
た糖分の減少度を同定した。
両活性基は６０℃で安定であるが、１００ミリモルの酢
酸ナトリウム緩衝剤中、ＰＨ５，６、異なった温度で保
温した時には両者共高温の同条件では不活性となり、α
−アミラーゼ及びプルラナーゼの最終濃度は夫々８００
単位／ｍＱ及び２４００単位／ ｍ Ｑとなる。残余の
α−アミラーゼ及びプルラナーゼの活性基は、上述の方
法（Ｐ８−９）により図に示された時間に採取されたサ
ンプル５０μａを用いて同定した。
酸ナトリウム緩衝剤中、ＰＨ５，６、異なった温度で保
温した時には両者共高温の同条件では不活性となり、α
−アミラーゼ及びプルラナーゼの最終濃度は夫々８００
単位／ｍＱ及び２４００単位／ ｍ Ｑとなる。残余の
α−アミラーゼ及びプルラナーゼの活性基は、上述の方
法（Ｐ８−９）により図に示された時間に採取されたサ
ンプル５０μａを用いて同定した。
カルシウムイオンは、高温で同様に両活性基を安定化し
た（第４図）。生酵母を、ＰＨ５，６で異なった量のカ
ルシウムを含む１００ミリモルの酢酸ナトリウム緩衝剤
中に添加し、α−アミラーゼの最終濃度８００単位１１
及びプルラナーゼの最終濃度２４００単位／ｍ１２
を得た。これを８５℃、９０℃及び９５℃で２時間保
温した。残余のα−アミラーゼ及びプルラナーゼの活性
基を上述の方法（Ｐ８−９）により５０μＱのサンプル
を用いて同定した。
た（第４図）。生酵母を、ＰＨ５，６で異なった量のカ
ルシウムを含む１００ミリモルの酢酸ナトリウム緩衝剤
中に添加し、α−アミラーゼの最終濃度８００単位１１
及びプルラナーゼの最終濃度２４００単位／ｍ１２
を得た。これを８５℃、９０℃及び９５℃で２時間保
温した。残余のα−アミラーゼ及びプルラナーゼの活性
基を上述の方法（Ｐ８−９）により５０μＱのサンプル
を用いて同定した。
見亙立葺星
可溶性のα−アミラーゼ−プルラナーゼ酵素を変種ＥＩ
ＯＩ−６９の流体培養基から以下の如く精製した。該変
種を、９頁で述べた媒体中２２Ｑフラスコ内で攪拌せず
に６８℃、４０時間非酸素雰囲気下（ａｎａｅｒｏｂｉ
ｃａｌｌｙ）で培養した。細胞を遠心分離により取り除
いた後、小麦澱粉（ＢＤＨＣｈｅｍｉｃａｌｓＬｔｄ、
、Ｂｒｏｏｍ Ｒｏｏｄ、Ｐｏｏｌｅ ＢＨ１２４ＮＮ
、Ｅｎｇｌａｎｄ） １５ｇ／ｎ及びナトリウムアジド
２００ｍｇ／Ｑを冷たい表面浮遊物質に添加し、次いで
冷間で９０時間攪拌し酵素を澱粉に吸収させた。その後
澱粉を２４時間静置し、表面浮遊物質を除去し、更に底
に溜った澱粉ケーキを２Ｑの氷冷水に懸濁させ且つ遠心
分離することにより洗浄した。吸収酸素を、ホットバス
中で抽出し、２・１／２Ｑの６０℃温水と混合し、且つ
遠心分離すことにより澱粉から脱離した。
ＯＩ−６９の流体培養基から以下の如く精製した。該変
種を、９頁で述べた媒体中２２Ｑフラスコ内で攪拌せず
に６８℃、４０時間非酸素雰囲気下（ａｎａｅｒｏｂｉ
ｃａｌｌｙ）で培養した。細胞を遠心分離により取り除
いた後、小麦澱粉（ＢＤＨＣｈｅｍｉｃａｌｓＬｔｄ、
、Ｂｒｏｏｍ Ｒｏｏｄ、Ｐｏｏｌｅ ＢＨ１２４ＮＮ
、Ｅｎｇｌａｎｄ） １５ｇ／ｎ及びナトリウムアジド
２００ｍｇ／Ｑを冷たい表面浮遊物質に添加し、次いで
冷間で９０時間攪拌し酵素を澱粉に吸収させた。その後
澱粉を２４時間静置し、表面浮遊物質を除去し、更に底
に溜った澱粉ケーキを２Ｑの氷冷水に懸濁させ且つ遠心
分離することにより洗浄した。吸収酸素を、ホットバス
中で抽出し、２・１／２Ｑの６０℃温水と混合し、且つ
遠心分離すことにより澱粉から脱離した。
抽出物はＰＨ５，６に調整された強酢酸ナトリウムを用
いることにより２０ミリモル調製され、同じ緩衝剤を用
いて平衡化された２、６Ｘ１５ａｎのＤＥＡＥセルロー
スカラム（ＤＥ５２ ； Ｗｈａｔｍａｎ Ｌｔｄ。
いることにより２０ミリモル調製され、同じ緩衝剤を用
いて平衡化された２、６Ｘ１５ａｎのＤＥＡＥセルロー
スカラム（ＤＥ５２ ； Ｗｈａｔｍａｎ Ｌｔｄ。
Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ Ｍｉｌｌ、Ｍａｉｄｓｔｏｎ
ｅ、Ｋｅｎｔ、Ｅｎｇｌａｎｄ）に作用せしめた。該カ
ラムを上記平衡化された緩衝剤で洗浄し１次いで最初に
１００ミリモルの塩化ナトリウムでその後２００ミリモ
ルの塩化ナトリウムにより同緩衝剤中で溶出させた。残
塩（ｓｔｒｏｎｇｅｒ ５ａｌｔ ）を用いて得られた
溶出液を合体させ、ＰＭＩＯ薄膜を備えた限外濾過室（
ＡｍｉｃｏｎＣｏｒｐ、、Ｄｅａｍｖｅｒｓ Ｍａｓｓ
ａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ）を用いて２１＋ｎＱに濃
縮した。
ｅ、Ｋｅｎｔ、Ｅｎｇｌａｎｄ）に作用せしめた。該カ
ラムを上記平衡化された緩衝剤で洗浄し１次いで最初に
１００ミリモルの塩化ナトリウムでその後２００ミリモ
ルの塩化ナトリウムにより同緩衝剤中で溶出させた。残
塩（ｓｔｒｏｎｇｅｒ ５ａｌｔ ）を用いて得られた
溶出液を合体させ、ＰＭＩＯ薄膜を備えた限外濾過室（
ＡｍｉｃｏｎＣｏｒｐ、、Ｄｅａｍｖｅｒｓ Ｍａｓｓ
ａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ）を用いて２１＋ｎＱに濃
縮した。
サンプルをＰＨ７，０のリン酸カルシウム緩衝剤１０ミ
リモルに接触的に（ａｇａｉｎｓｔ）透析しくｄｉａｌ
ｙｚｅｄ）、同緩衝剤を用いて平衡化された２、６×１
３ｃｍの水酸化リン灰石カラム（Ｂｉｏ Ｇｅｌ ＩＴ
、Ｂｉ。
リモルに接触的に（ａｇａｉｎｓｔ）透析しくｄｉａｌ
ｙｚｅｄ）、同緩衝剤を用いて平衡化された２、６×１
３ｃｍの水酸化リン灰石カラム（Ｂｉｏ Ｇｅｌ ＩＴ
、Ｂｉ。
Ｒｅｄ、１４１４ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｗａｙ ５ｏｕｔ
ｈ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｃａ１ｉｆｏｒ−ｎｉａ ９４
８０４．ＵＳＡ ）に作用せしめた。該カラムは最初に
平衡化された緩衝剤で洗浄し、次いでＰＨ７の１０−４
００ミリモルのリン酸カルシウムを用いて徐々に溶出さ
せた。酵素を溶離した結果、活性度のピーク部に連なっ
てそれより明らかに活性度の低い肩部が所見された。ピ
ーク部で溶出された成分（ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ）は上
記の如く合体され、濃縮されて容積１ｍ党となる。
ｈ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｃａ１ｉｆｏｒ−ｎｉａ ９４
８０４．ＵＳＡ ）に作用せしめた。該カラムは最初に
平衡化された緩衝剤で洗浄し、次いでＰＨ７の１０−４
００ミリモルのリン酸カルシウムを用いて徐々に溶出さ
せた。酵素を溶離した結果、活性度のピーク部に連なっ
てそれより明らかに活性度の低い肩部が所見された。ピ
ーク部で溶出された成分（ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ）は上
記の如く合体され、濃縮されて容積１ｍ党となる。
濃縮サンプルを、ＰＨ６，５，５０ミリモルの酢酸アン
ムニウム緩衝剤中で５ｕｐｅｒｏｓｅ （商品名）１２
及び６ゲルを結合した濾過カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｌｌｐｐｓａｌａ、
Ｓｗｅｄｅｎ ）中、６ｍＱ／桑の速度で２００μ党の
バッチ毎に通過させた。
ムニウム緩衝剤中で５ｕｐｅｒｏｓｅ （商品名）１２
及び６ゲルを結合した濾過カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｌｌｐｐｓａｌａ、
Ｓｗｅｄｅｎ ）中、６ｍＱ／桑の速度で２００μ党の
バッチ毎に通過させた。
酵素は２つの隣接するピークを持って溶離され、これら
ピークに対応する物質（■及び■）は凍結乾燥される。
ピークに対応する物質（■及び■）は凍結乾燥される。
この段階における製剤工の明確なα−アミラーゼ活性基
は３９キロ単位／■（ＫＵ／■）であり、またその明確
なプルラナーゼ活性基は１０１キロ単位／■、更に製剤
■の明確な活性基は夫々３６キロ単位／■及び９０キロ
単位／■であった。
は３９キロ単位／■（ＫＵ／■）であり、またその明確
なプルラナーゼ活性基は１０１キロ単位／■、更に製剤
■の明確な活性基は夫々３６キロ単位／■及び９０キロ
単位／■であった。
両製剤をその後６モルのグアニジンハイドロクロライド
及びβ−メルカプトエタノールの存在する変性条件下で
、５ｕｐｅｒｏｓｅ （商品名）６カラムを用いてゲル
濾過した。これらの条件下では一般の蛋白質はその全て
の非共有結合構造を消失し且つそのサブユニットに分離
されることが観察され（Ｔａｎｆｏｒｄ、１９６８．Ａ
ｄｖａｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅ＠、、２３，１２１
）ている、ゲル濾過の前に上記サンプルを次のような組
成、即ち、７．３モルのグアニジンハイドロクロライド
、０．１モルの酢酸ナトリウム、０．０２モルのＥＤＴ
Ａ、０．５モルのβ−メルカプトエタノールを有するＰ
Ｈ８，１の緩衝剤サンプルに溶解した。これらサンプル
を５０℃、４時間保温し、ＰＨを５．０に調整し且つ該
サンプルを６モルのグアニジンハイドロクロライド、１
００ミリモルの酢酸ナトリウム、２０ミリモルのβ−メ
ルカプトエタノールより成るＰＨ５，０の緩衝剤中１
ｍ Ｑ ／ ｈ の流速で２００μａのバッチ毎に通
過させた。酵素が溶出された成分を合体し、ＰＨ７゜９
の２０ミリモル炭酸水素アンモニウム緩衝剤に接触的に
透析した。斯くして得られた復元酵素製剤は、ドデシル
硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドの勾配
ゲル電気泳動（参照、リーフレット、“Ｃａ１ｉｂｒａ
ｔｉｏｎ ｋｉｔｓ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗ
ｅ−ｉｇｈｔ ｄｅｔｅｒｎ＋１ｎａｔｉｏｎ ｕｓｉ
ｎｇ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ； ”Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ ＣｈｅＩＩｌｉｃａｌｓ、υ
ｐｐｓａｌａ、Ｓｔ＋＋ｅｄｅｎ。
及びβ−メルカプトエタノールの存在する変性条件下で
、５ｕｐｅｒｏｓｅ （商品名）６カラムを用いてゲル
濾過した。これらの条件下では一般の蛋白質はその全て
の非共有結合構造を消失し且つそのサブユニットに分離
されることが観察され（Ｔａｎｆｏｒｄ、１９６８．Ａ
ｄｖａｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅ＠、、２３，１２１
）ている、ゲル濾過の前に上記サンプルを次のような組
成、即ち、７．３モルのグアニジンハイドロクロライド
、０．１モルの酢酸ナトリウム、０．０２モルのＥＤＴ
Ａ、０．５モルのβ−メルカプトエタノールを有するＰ
Ｈ８，１の緩衝剤サンプルに溶解した。これらサンプル
を５０℃、４時間保温し、ＰＨを５．０に調整し且つ該
サンプルを６モルのグアニジンハイドロクロライド、１
００ミリモルの酢酸ナトリウム、２０ミリモルのβ−メ
ルカプトエタノールより成るＰＨ５，０の緩衝剤中１
ｍ Ｑ ／ ｈ の流速で２００μａのバッチ毎に通
過させた。酵素が溶出された成分を合体し、ＰＨ７゜９
の２０ミリモル炭酸水素アンモニウム緩衝剤に接触的に
透析した。斯くして得られた復元酵素製剤は、ドデシル
硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドの勾配
ゲル電気泳動（参照、リーフレット、“Ｃａ１ｉｂｒａ
ｔｉｏｎ ｋｉｔｓ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗ
ｅ−ｉｇｈｔ ｄｅｔｅｒｎ＋１ｎａｔｉｏｎ ｕｓｉ
ｎｇ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ； ”Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ ＣｈｅＩＩｌｉｃａｌｓ、υ
ｐｐｓａｌａ、Ｓｔ＋＋ｅｄｅｎ。
１９８２）により均一化され、グアニジンハイドロクロ
ライド中でゲル濾過が遂行され、その結果酵素の特性化
に用いられた。
ライド中でゲル濾過が遂行され、その結果酵素の特性化
に用いられた。
酵素に対する炭水化物の結合
精製されたα−アミラーゼ−プルラナーゼは炭水化物を
含有していた。加水分解後、該酵素は、０．２モルのＮ
ａＨ２ＰＯ４と、ノルマルブタノール、アセトン及び水
の溶離剤としての混合液（４： ５ ：１、Ｖ／Ｖ）と
により湿潤されたシリカゲル６０プレート（Ｎａ ５５
５３．Ｅ、Ｍｅｒｃｋ ）上で薄層のクロマトグラフィ
ーにマンノース、グルコース、ガラクトース及びラムノ
ース（ｒａｍｎｏｓｅ ）と同じ移動度を有する糖分を
分離した。マンノースを標準としてＡｎｔｒｏｎ法（Ｓ
ｐｉｒｏ、１９６５ ； Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｔｚｙｍｏｌｏｇｙｔＶｏｌ、８．ｐ、３）により中性
ヘキソースを同定したところ、中性ヘキソースの量は蛋
白質と中性ヘキソースの全量の１０％と算出された。
含有していた。加水分解後、該酵素は、０．２モルのＮ
ａＨ２ＰＯ４と、ノルマルブタノール、アセトン及び水
の溶離剤としての混合液（４： ５ ：１、Ｖ／Ｖ）と
により湿潤されたシリカゲル６０プレート（Ｎａ ５５
５３．Ｅ、Ｍｅｒｃｋ ）上で薄層のクロマトグラフィ
ーにマンノース、グルコース、ガラクトース及びラムノ
ース（ｒａｍｎｏｓｅ ）と同じ移動度を有する糖分を
分離した。マンノースを標準としてＡｎｔｒｏｎ法（Ｓ
ｐｉｒｏ、１９６５ ； Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｔｚｙｍｏｌｏｇｙｔＶｏｌ、８．ｐ、３）により中性
ヘキソースを同定したところ、中性ヘキソースの量は蛋
白質と中性ヘキソースの全量の１０％と算出された。
艷亜夏光玉ｉ
ポリアクリルアミド（ＦＡＡ）４／３０ゲル（Ｐｈａｒ
＋ａａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ）との
５ＤＳ−ポリアクリルアミドの勾配ゲル電気泳動は、α
−アミラーゼ−プルラナーゼが異常に高い分子量を有す
る唯一のサブユニットから成ることを示した。酵素サブ
ユニットについて得られた相対的（ｒｅｌａｔｉｖｅ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｚｅｉｇｈｔ）は、製剤１を用
いた場合１９００００±３００００ 、製剤■を用いた
場合ｔａｏｏ。
＋ａａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ）との
５ＤＳ−ポリアクリルアミドの勾配ゲル電気泳動は、α
−アミラーゼ−プルラナーゼが異常に高い分子量を有す
る唯一のサブユニットから成ることを示した。酵素サブ
ユニットについて得られた相対的（ｒｅｌａｔｉｖｅ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｚｅｉｇｈｔ）は、製剤１を用
いた場合１９００００±３００００ 、製剤■を用いた
場合ｔａｏｏ。
Ｏ±３００００であった。自然の（ｎａｔｉｖｅ）操作
条件で、同じゲルを用いた場合、変性のα−アミラーゼ
プルラナーゼについて得られた相対的分子量は。
条件で、同じゲルを用いた場合、変性のα−アミラーゼ
プルラナーゼについて得られた相対的分子量は。
製剤Ｉを用いた場合３７００００±８５０００．製剤■
を用いた場合３３００００±８５０００であった。勾配
ゲル電気泳動により酵素から得られる帯（ｂａｎｄｓ）
は非常に拡がっていた。一方、グアニジンハイドロクロ
ライドのゲル濾過によ場合は、シャープで対称なピーク
が相対的分子量２７５０００±５００００に対応する点
で得られた。この方法は製剤■及び製剤■の両方を含む
サンプルではその区別がつかなかった。
を用いた場合３３００００±８５０００であった。勾配
ゲル電気泳動により酵素から得られる帯（ｂａｎｄｓ）
は非常に拡がっていた。一方、グアニジンハイドロクロ
ライドのゲル濾過によ場合は、シャープで対称なピーク
が相対的分子量２７５０００±５００００に対応する点
で得られた。この方法は製剤■及び製剤■の両方を含む
サンプルではその区別がつかなかった。
製剤■及び製剤■は、自然状態でのゲル濾過及び自然状
態でのゲル電気泳動もしくは変性条件に於いて移動度が
僅かに相違するが、この相違は再製剤１、■のまさに知
られた２つの分子系層に於ける唯一的な真の相違である
。両分子系態は同様な作用をなし、同じアミノ酸組成物
、同じアミノ末端を有するアミノ酸配列を有し、且つ概
して云えば同量の中性ヘキソース（ｎｅｕｔｒａｌ ｈ
ｅｘｏｓｅｓ）を備えている。生体機構の違った炭化水
素部分（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｍｏｉｔｉｅｓ）
もしくは未知の配位子（ｌｉｇａｎｄ・・・おそらく脂
質）によってポリペブタイドの鎖状構造が変わることが
、上記の相違の理由であろうと考えられる。
態でのゲル電気泳動もしくは変性条件に於いて移動度が
僅かに相違するが、この相違は再製剤１、■のまさに知
られた２つの分子系層に於ける唯一的な真の相違である
。両分子系態は同様な作用をなし、同じアミノ酸組成物
、同じアミノ末端を有するアミノ酸配列を有し、且つ概
して云えば同量の中性ヘキソース（ｎｅｕｔｒａｌ ｈ
ｅｘｏｓｅｓ）を備えている。生体機構の違った炭化水
素部分（ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｍｏｉｔｉｅｓ）
もしくは未知の配位子（ｌｉｇａｎｄ・・・おそらく脂
質）によってポリペブタイドの鎖状構造が変わることが
、上記の相違の理由であろうと考えられる。
（実施例）
以下、本酵素を用いるマルトース及びマルトトリオース
の生成例を説明する。
の生成例を説明する。
なった温 での 粉の
基質が存在するとα−アミラーゼ−プルラナーゼが安定
化され、６０℃ばかりでなく８０℃でも澱粉を加水分解
するのに該酵素を用いることが可能となった（第５図）
。１００ミリモルの酢酸ナトリウム緩衝剤中に０．５％
のコーンスターチ（Ｓｉｇ＋ｍａ）、２ミリモルのＣａ
Ｃ１，，０，１ミリモルのＮａ、 −Ｅ Ｄ Ｔ Ａ、
５０ミリモルのＮａＣ１を含み且つＰＨ５，６のチュー
ブ内に精製化されたα−アミラーゼ−プルラナーゼをα
−アミラーゼが４８０単位／ ｒｍ ｎ及びプルラナー
ゼが１１００単位／ｒａＱの状態で添加した。該チュー
ブを６０℃、７０℃及び８０℃の温度で保温し、これら
の還元糖分は図に示す時間毎に採取したサンプルから同
定した。加水分解率（％）は、希釈酸を用いて（０，５
Ｎ ＨＣｌ、 １００℃、３時間）グリコースに加水分
解された基質中に存在する還元糖分量に対し、サンプル
中に存在する還元糖分量を比較することにより算出した
。
化され、６０℃ばかりでなく８０℃でも澱粉を加水分解
するのに該酵素を用いることが可能となった（第５図）
。１００ミリモルの酢酸ナトリウム緩衝剤中に０．５％
のコーンスターチ（Ｓｉｇ＋ｍａ）、２ミリモルのＣａ
Ｃ１，，０，１ミリモルのＮａ、 −Ｅ Ｄ Ｔ Ａ、
５０ミリモルのＮａＣ１を含み且つＰＨ５，６のチュー
ブ内に精製化されたα−アミラーゼ−プルラナーゼをα
−アミラーゼが４８０単位／ ｒｍ ｎ及びプルラナー
ゼが１１００単位／ｒａＱの状態で添加した。該チュー
ブを６０℃、７０℃及び８０℃の温度で保温し、これら
の還元糖分は図に示す時間毎に採取したサンプルから同
定した。加水分解率（％）は、希釈酸を用いて（０，５
Ｎ ＨＣｌ、 １００℃、３時間）グリコースに加水分
解された基質中に存在する還元糖分量に対し、サンプル
中に存在する還元糖分量を比較することにより算出した
。
により される 生成物
α−アミラーゼ−プルラナーゼにより形成された最終生
成物を次の如く同定した。緩衝剤（１００ミリモルの酢
酸ナトリウム、２ミリモルのＣａＣ１□、０．１ミリモ
ルのＮａ、−Ｅ Ｄ Ｔ Ａ、５００ミリモルのＮａＣ
１，ＰＨ５，６）中央々アミロース（ポテトによるタイ
プ■）、プルラン及びコーンスターチ（全てＳｉｇｍａ
による）の０．５％溶液を調製し、精製化されたα−ア
ミラーゼ−プルラナーゼの製剤Ｉ若しくは■を該溶液に
添加し、これらを８０℃に保温した。酵素は２種の濃度
、即ちα−アミラーゼが４８０単位／ｍＱ 及びプルラ
ナーゼが１１００単位／ｍＱの場合（＝ Ｉ Ｘ）と、
その１０倍強の場合（＝１０ｘ）とを用いた。２４時間
後及び４８時間後の加水分解物から採取したサンプルを
シリカゲル６０プレート（！！１５５５３．Ｅ、Ｍｅｒ
ｃｋ）上で滴まし、２−プロパツール、アセトン及び水
（２： ２ ： １、Ｖ／Ｖ）の混合液で溶離させた。
成物を次の如く同定した。緩衝剤（１００ミリモルの酢
酸ナトリウム、２ミリモルのＣａＣ１□、０．１ミリモ
ルのＮａ、−Ｅ Ｄ Ｔ Ａ、５００ミリモルのＮａＣ
１，ＰＨ５，６）中央々アミロース（ポテトによるタイ
プ■）、プルラン及びコーンスターチ（全てＳｉｇｍａ
による）の０．５％溶液を調製し、精製化されたα−ア
ミラーゼ−プルラナーゼの製剤Ｉ若しくは■を該溶液に
添加し、これらを８０℃に保温した。酵素は２種の濃度
、即ちα−アミラーゼが４８０単位／ｍＱ 及びプルラ
ナーゼが１１００単位／ｍＱの場合（＝ Ｉ Ｘ）と、
その１０倍強の場合（＝１０ｘ）とを用いた。２４時間
後及び４８時間後の加水分解物から採取したサンプルを
シリカゲル６０プレート（！！１５５５３．Ｅ、Ｍｅｒ
ｃｋ）上で滴まし、２−プロパツール、アセトン及び水
（２： ２ ： １、Ｖ／Ｖ）の混合液で溶離させた。
精製化されたα−アミラーゼ−プルラナーゼ（ＬＸ）は
、プルランをマルトトリオースに分解するが、一方ポテ
トアミロース及びコーンスターチは両者共マルトースと
マルトトリオースに分解された（第６図）、高濃度の酵
素（１０Ｘ）を用いたときには、マルトトリオースは更
に分解されことが観察された（第６図）。この場合、７
７％のマルトース、１５％のグルコース及び４％のマル
トトリオースが４８時間の加水分解でコーンスターチか
ら生成された。マルトース及びマルトトリオースは、ニ
ュークレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ） ５ Ｃ１ｍの
逆相物質（ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｍａｔｅｒ
ｉａｌｓ）（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇ−ｅｌ、Ｄ−５
１６０Ｄｕｒｅｎ、Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ
ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ）及び溶離剤として水を充填し
たカラム中液体クロマトグラフィーにより定量した。ま
た、グルコースは酵素活性を利用して（ＵＶ ｔｅｓｔ
ｋｉｔ Ｎａ ７１６２５１゜Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
−Ｍａｎｎｈｅｉｍ、 Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｆｅｄｅｒ
ａｌ Ｒｅｐｕｂ−１ｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ ）
定量した。加水分解生成物のパーセンテージは、希釈酸
を用いて（０，５Ｎ ＨＣＩ、１００’Ｃ，３ｈ）グル
コースに加水分解された基質の量に対するこれらの量を
比較すことにより算出した。
、プルランをマルトトリオースに分解するが、一方ポテ
トアミロース及びコーンスターチは両者共マルトースと
マルトトリオースに分解された（第６図）、高濃度の酵
素（１０Ｘ）を用いたときには、マルトトリオースは更
に分解されことが観察された（第６図）。この場合、７
７％のマルトース、１５％のグルコース及び４％のマル
トトリオースが４８時間の加水分解でコーンスターチか
ら生成された。マルトース及びマルトトリオースは、ニ
ュークレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ） ５ Ｃ１ｍの
逆相物質（ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｍａｔｅｒ
ｉａｌｓ）（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇ−ｅｌ、Ｄ−５
１６０Ｄｕｒｅｎ、Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ
ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ）及び溶離剤として水を充填し
たカラム中液体クロマトグラフィーにより定量した。ま
た、グルコースは酵素活性を利用して（ＵＶ ｔｅｓｔ
ｋｉｔ Ｎａ ７１６２５１゜Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
−Ｍａｎｎｈｅｉｍ、 Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｆｅｄｅｒ
ａｌ Ｒｅｐｕｂ−１ｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ ）
定量した。加水分解生成物のパーセンテージは、希釈酸
を用いて（０，５Ｎ ＨＣＩ、１００’Ｃ，３ｈ）グル
コースに加水分解された基質の量に対するこれらの量を
比較すことにより算出した。
変種Ｅ １０１−６９ びＥ １００−６９の比変種
Ｅ １０１−６９及びＥ １００−６９を、レザズリン
Ｉｍｇ／Ｑ及びチオグリコール酸２００μ氾／１２を添
加した前述の媒体上で６８℃、２４時間、振とうさせる
ことなく非酸化性条件下で培養した。細胞を遠心分離に
より取り除き、その表面より部分的に精製されたα−ア
ミラーゼ−プルラナーゼ製剤が生成した。該α−アミラ
ーゼ−プルラナーゼは変種Ｅ １０１−６９の場合２１
キロ単位／ｍｇの明確なα−アミラーゼ活性基及び６３
キロ単位／ｍｇの明確プルラナーゼ活性基を、変種Ｅ
１００−６９の場合２０キロ単位／ｍｇのα−アミラー
ゼ活性基及び５６キロ単位／ｍｇのプルラナーゼ活性基
を夫々有している。
Ｅ １０１−６９及びＥ １００−６９を、レザズリン
Ｉｍｇ／Ｑ及びチオグリコール酸２００μ氾／１２を添
加した前述の媒体上で６８℃、２４時間、振とうさせる
ことなく非酸化性条件下で培養した。細胞を遠心分離に
より取り除き、その表面より部分的に精製されたα−ア
ミラーゼ−プルラナーゼ製剤が生成した。該α−アミラ
ーゼ−プルラナーゼは変種Ｅ １０１−６９の場合２１
キロ単位／ｍｇの明確なα−アミラーゼ活性基及び６３
キロ単位／ｍｇの明確プルラナーゼ活性基を、変種Ｅ
１００−６９の場合２０キロ単位／ｍｇのα−アミラー
ゼ活性基及び５６キロ単位／ｍｇのプルラナーゼ活性基
を夫々有している。
これら製剤を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに通した
後、両者共わずかな弱い帯と、加えて事前に均一状態に
精製された変種Ｅ １０１−６９のα−アミラーゼプル
ラナーゼと同程度の移動度をもって移動する強い拡散し
た帯とを示した。
後、両者共わずかな弱い帯と、加えて事前に均一状態に
精製された変種Ｅ １０１−６９のα−アミラーゼプル
ラナーゼと同程度の移動度をもって移動する強い拡散し
た帯とを示した。
第工図は、α−アミラーゼ−プルラナーゼ活性基の温度
特性を、第２図は８５℃（Ａ）及び６０℃（Ｂ）におけ
α−アミラーゼ−プルラナーゼ活性基のＰＨ特性を、第
３図は基質及びカルシウムを含まない緩衝剤中での異な
った温度におけるα−アミラーゼ−プルラナーゼの不活
性度を、第４図は高温度でのカルシウムによるα−アミ
ラーゼ−プルラナーゼの安定性を、第５図は異なった温
度における精製α−アミラーゼ−プルラナーゼによる澱
粉の加水分鮮度を、第６図は異なった温度におけα−ア
ミラーゼ−プルラナーゼによって形成された最終生成物
の薄層クロマトグラムを、夫々示す。 一以上一
特性を、第２図は８５℃（Ａ）及び６０℃（Ｂ）におけ
α−アミラーゼ−プルラナーゼ活性基のＰＨ特性を、第
３図は基質及びカルシウムを含まない緩衝剤中での異な
った温度におけるα−アミラーゼ−プルラナーゼの不活
性度を、第４図は高温度でのカルシウムによるα−アミ
ラーゼ−プルラナーゼの安定性を、第５図は異なった温
度における精製α−アミラーゼ−プルラナーゼによる澱
粉の加水分鮮度を、第６図は異なった温度におけα−ア
ミラーゼ−プルラナーゼによって形成された最終生成物
の薄層クロマトグラムを、夫々示す。 一以上一
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、酵素と澱粉若しくは澱粉加水分解物とを６０℃以上
の温度でＰＨ４−６．５で反応させ、マルトース及びマ
ルトトリオースを生成する方法であつて、該酵素が全く
同一（ｏｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｓａｍｅ）の蛋白質分
子中にα−アミラーゼ活性基及びプルラナーゼ活性基を
備えたものであり、これら活性基は澱粉をマルトース及
びマルトトリオースに分解する作用を有し、該酵素がク
ロストリジウム属の変種（ｓｔｒａｉｎ）に由来し、ポ
リアクリルアミドの勾配ゲル電気泳動により決定された
相対分子量が、ドデシル硫酸ナトリウムの存在下では１
８５０００±３５０００であり、且つ両酵素活性基の適
性温度が略８０乃至９０℃、望ましくは略８５℃であり
、適性ＰＨが８５℃のときＰＨ５−６、望ましくは５．
６、６０℃のとき４．５−５．５、望ましくは５．２で
あることを特徴とする方法。 ２、酵素がクロストリジウム属サーモハイドロサルファ
リキュム変種を用いて生成される特許請求の範囲第１項
に記載の生成方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI863484A FI81112C (fi) | 1986-08-27 | 1986-08-27 | Amylas av ny typ. |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62212660A Division JPS63102678A (ja) | 1986-08-27 | 1987-08-26 | アミラーゼ酵素並びにその生成方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03244388A true JPH03244388A (ja) | 1991-10-31 |
Family
ID=8523060
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62212660A Granted JPS63102678A (ja) | 1986-08-27 | 1987-08-26 | アミラーゼ酵素並びにその生成方法 |
| JP2122810A Pending JPH03244388A (ja) | 1986-08-27 | 1990-05-11 | 澱粉若しくは澱粉加水分解物からマルトース及びマルトトリオースを生成する方法 |
| JP3114002A Expired - Lifetime JPH0714356B2 (ja) | 1986-08-27 | 1991-04-17 | 澱粉若しくは澱粉加水分解物からマルトース及びマルトトリオースを生成する方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62212660A Granted JPS63102678A (ja) | 1986-08-27 | 1987-08-26 | アミラーゼ酵素並びにその生成方法 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3114002A Expired - Lifetime JPH0714356B2 (ja) | 1986-08-27 | 1991-04-17 | 澱粉若しくは澱粉加水分解物からマルトース及びマルトトリオースを生成する方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4971906A (ja) |
| EP (1) | EP0258050B1 (ja) |
| JP (3) | JPS63102678A (ja) |
| DE (1) | DE3779522T2 (ja) |
| DK (1) | DK164461C (ja) |
| FI (1) | FI81112C (ja) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3702626A1 (de) * | 1987-01-29 | 1989-01-05 | Antranikian Gerabed | Thermostabile amylasen und pullulanasen aus 2 anaeroben mikroorganismen |
| DE3909096A1 (de) * | 1989-03-20 | 1990-09-27 | Garabed Antranikian | Alpha-amylase |
| NO902087L (no) * | 1989-06-05 | 1990-12-06 | Alko Ab Oy | Alfa-amylase-pullulanase-enzym og dna-sekvens som koder for dette, rekombinant dna-molekyl og en rekombinant klon som uttrykker enzymet. |
| DK0415397T3 (da) * | 1989-08-31 | 1995-04-03 | Kao Corp | Alkalisk pullulanase samt mikroorganisme og fremgangsmåde til fremstilling deraf |
| US5147796A (en) * | 1989-09-19 | 1992-09-15 | Kao Corporation | Alkaline pullulanase Y having α-amylase activity |
| DK47291D0 (da) * | 1991-03-15 | 1991-03-15 | Novo Nordisk As | Pullulanase |
| US5665585A (en) * | 1992-09-03 | 1997-09-09 | Alko-Yhiot Oy | Recombinant production of glucoamylase P in trichoderma |
| GB2291058B (en) * | 1994-07-14 | 1998-12-23 | Solvay | Acid-stable and thermo-stable alpha-amylases derived from sufolobus species |
| US5811277A (en) * | 1995-02-21 | 1998-09-22 | Food Industry Research And Development Institute | Method for recovery and purification of isoamylase by adsorption on raw starch |
| US6713290B2 (en) * | 1998-07-24 | 2004-03-30 | Samsung Fine Chemicals Co., Ltd. | Process for preparing optically pure (S)-3-hydroxy-γ-butyrolactone |
| JP4861724B2 (ja) * | 2006-02-28 | 2012-01-25 | サンヨー食品株式会社 | 即席食品容器の蓋部 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4011139A (en) * | 1974-11-26 | 1977-03-08 | Standard Brands Incorporated | Process for producing α-1,6 glucosidases using thermophilic microorganisms |
| JPS5534046A (en) * | 1978-09-01 | 1980-03-10 | Cpc International Inc | Novel glucoamyrase having excellent heat resistance and production |
| US4335208A (en) * | 1980-03-11 | 1982-06-15 | Novo Industri A/S | Saccharification of starch hydrolysates |
| US4400470A (en) * | 1981-01-14 | 1983-08-23 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Use of co-cultures in the production of ethanol by the fermentation of biomass |
| US4405717A (en) * | 1981-10-26 | 1983-09-20 | Cpc International Inc. | Recovery of acetic acid from a fermentation broth |
| US4536477A (en) * | 1983-08-17 | 1985-08-20 | Cpc International Inc. | Thermostable glucoamylase and method for its production |
| US4628031A (en) * | 1984-09-18 | 1986-12-09 | Michigan Biotechnology Institute | Thermostable starch converting enzymes |
| DE3582020D1 (de) * | 1984-11-09 | 1991-04-11 | Hitachi Ltd | Thermostabile alpha-amylase produzierende thermostabile anaerobe bakterie, thermostabile alpha-amylase und verfahren zur deren herstellung. |
| JPS61162183A (ja) * | 1985-01-07 | 1986-07-22 | Agency Of Ind Science & Technol | プルラナ−ゼ様酵素の製造法 |
| US4613570A (en) * | 1985-02-08 | 1986-09-23 | Cpc International Inc. | Novel thermostable, aciduric alpha-amylase and method for its production |
| US4612287A (en) * | 1985-05-23 | 1986-09-16 | Cpc International Inc. | Plasmids containing a gene coding for a thermostable pullulanase and pullulanase-producing strains of Escherichia coli and Bacillus subtilis containing the plasmids |
| US4628028A (en) * | 1985-05-23 | 1986-12-09 | Cpc International Inc. | Novel thermostable pullulanase enzyme and method for its production |
-
1986
- 1986-08-27 FI FI863484A patent/FI81112C/fi not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-08-26 EP EP87307560A patent/EP0258050B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-26 JP JP62212660A patent/JPS63102678A/ja active Granted
- 1987-08-26 DE DE8787307560T patent/DE3779522T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-08-27 US US07/090,197 patent/US4971906A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-08-27 DK DK448887A patent/DK164461C/da not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-05-11 JP JP2122810A patent/JPH03244388A/ja active Pending
-
1991
- 1991-04-17 JP JP3114002A patent/JPH0714356B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63102678A (ja) | 1988-05-07 |
| DK448887D0 (da) | 1987-08-27 |
| FI81112C (fi) | 1990-09-10 |
| FI863484L (fi) | 1988-02-28 |
| JPH0364106B2 (ja) | 1991-10-03 |
| DE3779522D1 (de) | 1992-07-09 |
| US4971906A (en) | 1990-11-20 |
| EP0258050A2 (en) | 1988-03-02 |
| DK164461B (da) | 1992-06-29 |
| JPH0714356B2 (ja) | 1995-02-22 |
| FI863484A0 (fi) | 1986-08-27 |
| DE3779522T2 (de) | 1992-12-24 |
| DK164461C (da) | 1992-11-16 |
| DK448887A (da) | 1988-02-28 |
| EP0258050A3 (en) | 1988-08-10 |
| FI81112B (fi) | 1990-05-31 |
| EP0258050B1 (en) | 1992-06-03 |
| JPH0576380A (ja) | 1993-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kuriki et al. | A new way of producing isomalto-oligosaccharide syrup by using the transglycosylation reaction of neopullulanase | |
| US4618579A (en) | Raw starch saccharification | |
| CA1282724C (en) | Enzymatic hydrolysis of granular starch directly to glucose | |
| Farkaš et al. | Extracellular β-glucanases of the yeast, Saccharomyces cerevisiae | |
| Takasaki | Pullulanase-amylase complex enzyme from Bacillus subtilis | |
| Shaw et al. | Production of high-maltose syrup and high-protein flour from rice by an enzymatic method | |
| US4628028A (en) | Novel thermostable pullulanase enzyme and method for its production | |
| Campos et al. | Purification and characterization of a glucoamylase from Humicola grisea | |
| JPH03244388A (ja) | 澱粉若しくは澱粉加水分解物からマルトース及びマルトトリオースを生成する方法 | |
| JPS62259554A (ja) | 小麦及び他の穀類のペントサン含有デンプンからのグルコ−スシロツプ及び純化デンプンの改良製造法 | |
| CN101087888A (zh) | 淀粉加工 | |
| Brena et al. | Chromatographic methods for amylases | |
| Doyle et al. | The high maltose-producing α-amylase of Penicillium expansum | |
| JPH0330672A (ja) | 新規耐熱性および耐酸性プルラナーゼ酵素およびその製造方法 | |
| Ono et al. | Effective purification of glucoamylase in koji, a solid culture of Aspergillus oryzae on steamed rice, by affinity chromatography using an immobilized acarbose (BAY g-5421) | |
| Pigman | Extent of hydrolysis of starches by amylases in the presence and absence of yeasts | |
| JP2004248673A (ja) | でんぷん由来製品 | |
| Maitin et al. | Properties of an extracellular amylase purified from a Bacillus species | |
| JP3026857B2 (ja) | 新規プルラナーゼおよびその製造法 | |
| Verberne et al. | A new hydrocyclone process for the separation of starch and gluten from wheat flour | |
| US4814267A (en) | Method for preparing high conversion syrups and other sweeteners | |
| Kambourova et al. | Purification and general biochemical properties of thermostable pullulanase from Bacillus stearothermophilus G-82 | |
| JPS5917983A (ja) | アミラ−ゼｇ３の製造法 | |
| JPS594118B2 (ja) | アミラ−ゼｇ４，５によるオリゴ糖の製造法 | |
| CN111793663B (zh) | 一种具有广泛pH值适应性的淀粉普鲁兰酶及应用 |