JPS61162183A - プルラナ−ゼ様酵素の製造法 - Google Patents
プルラナ−ゼ様酵素の製造法Info
- Publication number
- JPS61162183A JPS61162183A JP60000588A JP58885A JPS61162183A JP S61162183 A JPS61162183 A JP S61162183A JP 60000588 A JP60000588 A JP 60000588A JP 58885 A JP58885 A JP 58885A JP S61162183 A JPS61162183 A JP S61162183A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- pullulanase
- starch
- maltose
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/16—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an alpha-1, 6-glucosidase, e.g. amylose, debranched amylopectin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
- C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2451—Glucanases acting on alpha-1,6-glucosidic bonds
- C12N9/2457—Pullulanase (3.2.1.41)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01041—Pullulanase (3.2.1.41)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/839—Bacillus subtilis
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
１技術分野〕
本発明は、澱粉糖化酵素の製造方法に関するも場である
。
。
（従来技術〕
プルラナーゼはプルランのα−１，６−グルコシド結合
を切断し、最終的にマルトトリオースを生成する酵素で
あり、種々の細菌、放線菌などに広く存在することが知
られている。プルラナーゼはアミロペクチンあるいはこ
れを含む澱粉に作用させたとき、その分岐結合（α−１
，６−グルコシド結合）を切断してアミロース様多糖を
生成することから法度反応の増加をともなうことが知ら
れているが、α−１，４−グルコシド結合は切断するこ
とはできない。一方、α−１，４−グルコシド結合を切
断するα−アミラーゼやβ−アミラーゼなどのアミラー
ゼはα−１，６−グルコシド結合は切断することはでき
ない、極めて、まれな例外として。
を切断し、最終的にマルトトリオースを生成する酵素で
あり、種々の細菌、放線菌などに広く存在することが知
られている。プルラナーゼはアミロペクチンあるいはこ
れを含む澱粉に作用させたとき、その分岐結合（α−１
，６−グルコシド結合）を切断してアミロース様多糖を
生成することから法度反応の増加をともなうことが知ら
れているが、α−１，４−グルコシド結合は切断するこ
とはできない。一方、α−１，４−グルコシド結合を切
断するα−アミラーゼやβ−アミラーゼなどのアミラー
ゼはα−１，６−グルコシド結合は切断することはでき
ない、極めて、まれな例外として。
グルコアミラーゼはα−１，４−グルコシド結合の斗で
なく、α−１，６−グルコシド結合も切断するシとがで
きる。
なく、α−１，６−グルコシド結合も切断するシとがで
きる。
α−１，６−グルコシド結合を切断する酵素にはプルラ
ナーゼの他に、イソアミラーゼ、Ｒ−酵素。
ナーゼの他に、イソアミラーゼ、Ｒ−酵素。
アミロ−１，６−グルコシダーゼと呼ばれる種々な酵素
があり、総称してα−１，６−グルコシダーゼ。
があり、総称してα−１，６−グルコシダーゼ。
あるいは、一般に、枝切り酵素（ｄｅｂｒａｎｃｈｉｎ
ｇｅｎｚｙｍｅ）と呼ばれている。
ｇｅｎｚｙｍｅ）と呼ばれている。
プルラナーゼなど枝切り酵素は、最近、β−アミラーゼ
と組み合わせて澱粉に同時に作用させることにより、マ
ルトースを収量よく生産するのに使用したり、また、グ
ルコアミラーゼの分岐（α−１，６−グルコシド結合）
切断能力をおぎなうために、グルコアミラーゼと併用す
ることにより、澱粉からグルコースを収量よく製造する
ために使用される有用な酵素である。
と組み合わせて澱粉に同時に作用させることにより、マ
ルトースを収量よく生産するのに使用したり、また、グ
ルコアミラーゼの分岐（α−１，６−グルコシド結合）
切断能力をおぎなうために、グルコアミラーゼと併用す
ることにより、澱粉からグルコースを収量よく製造する
ために使用される有用な酵素である。
しかし、例えば、プルラナーゼをグルコアミラーゼと併
用するためにはグルコアミラーゼがｐＨ４〜５、温度５
５〜６０℃に最適作用域をもつため、少なくとも５５℃
〜６０℃で長時間使用できる熱安定性をもち。
用するためにはグルコアミラーゼがｐＨ４〜５、温度５
５〜６０℃に最適作用域をもつため、少なくとも５５℃
〜６０℃で長時間使用できる熱安定性をもち。
且つｐＨ４〜５で作用できる酵素であることが要求さ九
る。
る。
１しかるに、従来知られている多くの枝切り酵素・４１
、一部の微生物のもの（バシルス・ステアロサーモフィ
ラス（日本農芸化学会大会昭和４７年度講演要旨集第８
８頁、最適温度６５〜６７．５℃）、バシルス・アシド
プルリティカス（特開昭５７−１７４０８９． Ｓｔ、
ａｒｃｈ ３４゜３４０（１ｇｓ２）、最適温度６０℃
）を除き、殆んどは最適作用温度が４０〜５０℃付近に
あって、熱安定性に劣ることが欠点であった。
、一部の微生物のもの（バシルス・ステアロサーモフィ
ラス（日本農芸化学会大会昭和４７年度講演要旨集第８
８頁、最適温度６５〜６７．５℃）、バシルス・アシド
プルリティカス（特開昭５７−１７４０８９． Ｓｔ、
ａｒｃｈ ３４゜３４０（１ｇｓ２）、最適温度６０℃
）を除き、殆んどは最適作用温度が４０〜５０℃付近に
あって、熱安定性に劣ることが欠点であった。
本発明者は、前記目的にかなった枝Ｑノリ酵素を開発す
ることを目的として、広く自然界より微生物の検索を行
ってきた結果、土壌中より分離し、バシルス・ズブチル
スと同定した細菌の生産するプルラナーゼ様酵素が、最
適作用ｐＨが約５〜約７．５の広いｐＨ範囲にあり、且
つ最適作用温度が６０〜６３℃の高い温度にあることを
認めた。そして、本葬ｎを商業的に生産すべく、プルラ
ナーゼ活性増強分ための微生物変異を行なった結果、同
酵素を高力価に生産するツニカマイシン耐性のバシルス
・ｋブチルスＴＵ株を得ることができた。本発明はこの
知見にもとずいてなされたものである。
ることを目的として、広く自然界より微生物の検索を行
ってきた結果、土壌中より分離し、バシルス・ズブチル
スと同定した細菌の生産するプルラナーゼ様酵素が、最
適作用ｐＨが約５〜約７．５の広いｐＨ範囲にあり、且
つ最適作用温度が６０〜６３℃の高い温度にあることを
認めた。そして、本葬ｎを商業的に生産すべく、プルラ
ナーゼ活性増強分ための微生物変異を行なった結果、同
酵素を高力価に生産するツニカマイシン耐性のバシルス
・ｋブチルスＴＵ株を得ることができた。本発明はこの
知見にもとずいてなされたものである。
本発明は、広作用ｐＨ域をもつ耐熱性プルラナーゼ様酵
素を生産するバシルス・ズブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔ、１ｌｉｓ）ＴＯ株を培養し、培養物から同酵
素を採取することを特徴とするプルラナーゼ様酵素の製
造方法にをするものである。
素を生産するバシルス・ズブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔ、１ｌｉｓ）ＴＯ株を培養し、培養物から同酵
素を採取することを特徴とするプルラナーゼ様酵素の製
造方法にをするものである。
本発明により生産されるプルラナーゼ様酵素は。
プルランを基質とするとき、最終的に、主とじてマルト
トリオースを生成するプルラナーゼ活性を示すが、同時
に、アミロース、アミロペクチン。
トリオースを生成するプルラナーゼ活性を示すが、同時
に、アミロース、アミロペクチン。
グリコーゲンなどのα−１，４−グルコシド結合分解活
性をもち、マルトースとマルトトリオースを主成分とし
て生成するα−アミラーゼ活性をもっている。このプル
ラナーゼ活性とα−アミラーゼ活性は、硫安分画、各種
有機溶剤による分画、陰イオン交換体による吸着クロマ
トグラフィー、ゲル濾過、無機担体などへの吸着などの
タンパク質精製方法によって分離されず、５ｅｐｈａｄ
ｅｘ Ｇ−２００＄ｒｍａｃｉｅ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ製）、 Ｃｅｌｌｕｌｏｆｉｎｅｍｆｙｏｏ
ｍ（チッソ曲製）Ｂｉｏｇｅｌ Ａ−０，５ｍ（Ｂｉｏ
−Ｒａｄ−訃、製）などを用いたゲル濾過法により測定
され：亀分子量が４５〜５５万の高分子量である（通常
のプルラナーゼの分子量は１０万前後）ことから、それ
ぞれの活性をもつ複数個のサブユニットがかなり強固に
結合し、複合酵素を形成していることが考えられる（第
３図は、Ｂｉｏｇｅｌ Ａ １．５ｍによるα−アミラ
ーゼ活性、プルラナーゼ活性及びタンパク質の溶出曲線
を示しているが、これら王者の溶出パターンは完全に一
致している）ａ 本発明により生産されるプルラナーゼ様酵素のプルラン
分解活性の酵素的性質を以下に記載する。
性をもち、マルトースとマルトトリオースを主成分とし
て生成するα−アミラーゼ活性をもっている。このプル
ラナーゼ活性とα−アミラーゼ活性は、硫安分画、各種
有機溶剤による分画、陰イオン交換体による吸着クロマ
トグラフィー、ゲル濾過、無機担体などへの吸着などの
タンパク質精製方法によって分離されず、５ｅｐｈａｄ
ｅｘ Ｇ−２００＄ｒｍａｃｉｅ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ製）、 Ｃｅｌｌｕｌｏｆｉｎｅｍｆｙｏｏ
ｍ（チッソ曲製）Ｂｉｏｇｅｌ Ａ−０，５ｍ（Ｂｉｏ
−Ｒａｄ−訃、製）などを用いたゲル濾過法により測定
され：亀分子量が４５〜５５万の高分子量である（通常
のプルラナーゼの分子量は１０万前後）ことから、それ
ぞれの活性をもつ複数個のサブユニットがかなり強固に
結合し、複合酵素を形成していることが考えられる（第
３図は、Ｂｉｏｇｅｌ Ａ １．５ｍによるα−アミラ
ーゼ活性、プルラナーゼ活性及びタンパク質の溶出曲線
を示しているが、これら王者の溶出パターンは完全に一
致している）ａ 本発明により生産されるプルラナーゼ様酵素のプルラン
分解活性の酵素的性質を以下に記載する。
（１）作用； プルランのα−１，６−グルコシド結合
を分解し、主としてマルトトリオースを生成する。
を分解し、主としてマルトトリオースを生成する。
（２）作用温度及び最適作用温度； １％プルラン、０
．０５Ｍ トＩＪ Ｘ緩衝液（ｐＨ７，０） （７）下
テ３０分間反応したとき、約８０℃まで作用し、最適作
用温度は６０〜６３℃（第２図）。
．０５Ｍ トＩＪ Ｘ緩衝液（ｐＨ７，０） （７）下
テ３０分間反応したとき、約８０℃まで作用し、最適作
用温度は６０〜６３℃（第２図）。
（−３）作用ｐＨ及び最適作用ｐＨ；１％プルラン、０
．０５に緩衝液で測定したとき、ＰＨ約３．５〜約１１
の広いｐＨ範囲に作用する。第１図に示す通り、ｐＨ５
付近とｐＨ７〜７．５のピークが認められ、最適作用Ｐ
Ｈは約５〜行７．５の広い範囲にあると考えられる（ク
エン酸−リン酸二ナトリウム緩衝液とリン酸緩衝液、２
％プルラン、５５℃で３０分反応）。
．０５に緩衝液で測定したとき、ＰＨ約３．５〜約１１
の広いｐＨ範囲に作用する。第１図に示す通り、ｐＨ５
付近とｐＨ７〜７．５のピークが認められ、最適作用Ｐ
Ｈは約５〜行７．５の広い範囲にあると考えられる（ク
エン酸−リン酸二ナトリウム緩衝液とリン酸緩衝液、２
％プルラン、５５℃で３０分反応）。
（４）熱安定性；０．θ鎖トリス緩衝液（ｐＨ７，０）
のもとで各温度で１０分間加熱後、プルランを基質とし
て残存活性を測定した。その結果６５０℃、１０分間の
加熱までは殆んど失活が認められず、５５℃、１０分間
の加熱で約３０％失活した。そして、６０℃、１０分間
の加熱で約８０％失活した。
のもとで各温度で１０分間加熱後、プルランを基質とし
て残存活性を測定した。その結果６５０℃、１０分間の
加熱までは殆んど失活が認められず、５５℃、１０分間
の加熱で約３０％失活した。そして、６０℃、１０分間
の加熱で約８０％失活した。
（５） ｐ）ｌ安定性； ０．１Ｍ緩衝液のもとて３
０℃で３時間放置後、プルランを基質としして残存活性
を測定した結果、ＰＨ約５〜約ＩＯで安定であった・ （６）阻害剤； ｌＸｌ０−３ＭのＨｇＣＱ２、Ａｇ
ＮＯ３で９０％以上阻害された。また同濃度のＺｎ５Ｏ
４により約７０％阻害された。
０℃で３時間放置後、プルランを基質としして残存活性
を測定した結果、ＰＨ約５〜約ＩＯで安定であった・ （６）阻害剤； ｌＸｌ０−３ＭのＨｇＣＱ２、Ａｇ
ＮＯ３で９０％以上阻害された。また同濃度のＺｎ５Ｏ
４により約７０％阻害された。
安定化剤； カルシウムイオンの存在下で熱安性が著し
く増加する。ｌＸｌ０−”Ｍ塩化カルシウムの存在下で
、最適作用温度は約６５℃に認められた（１％プルラン
、３０分反応）。
く増加する。ｌＸｌ０−”Ｍ塩化カルシウムの存在下で
、最適作用温度は約６５℃に認められた（１％プルラン
、３０分反応）。
（８）精製方法； 本酵素は液体培養物の培養濾液から
、リン酸カルシウムゲルに吸着させ。
、リン酸カルシウムゲルに吸着させ。
蒸留水で洗滌後０．５ＭＫＣｌ２またはリン酸−カリウ
ム溶液で抽出し、次いで、ＤＥＡＥ−セファロースカラ
ムクロマトグラフィ ー、Ｂｉｏｇｅｌ Ａ １．５ｍによるカラムクロマト
グラフィー、同カラムによる再クロマトグラフィー等に
よりクロマト的、電気泳動的に均一まで精製する。二と
ができる。
ム溶液で抽出し、次いで、ＤＥＡＥ−セファロースカラ
ムクロマトグラフィ ー、Ｂｉｏｇｅｌ Ａ １．５ｍによるカラムクロマト
グラフィー、同カラムによる再クロマトグラフィー等に
よりクロマト的、電気泳動的に均一まで精製する。二と
ができる。
（９）分子量； Ｂｉｏｇｅｌ Ａ Ｏ，５ｍで測定
した分子量は約５５万であった。
した分子量は約５５万であった。
活性測定法； プルラナーゼ活性の測定は、０、１Ｍリ
ン酸緩衝液に溶解させた１％プルラン溶液（ｐＨ７，０
）０．５ｍ Ｑに適量の酵素を加え、水で全量１ｍＱと
し、４０℃で反応させる。この条件で１分間に１μｍｏ
ｌのグルコースに相当する還元力を生成する酵素量を１
ｍ位とした。
ン酸緩衝液に溶解させた１％プルラン溶液（ｐＨ７，０
）０．５ｍ Ｑに適量の酵素を加え、水で全量１ｍＱと
し、４０℃で反応させる。この条件で１分間に１μｍｏ
ｌのグルコースに相当する還元力を生成する酵素量を１
ｍ位とした。
以上から明らかなように１本発明のプルラナーゼ活性は
ｐＨ約５〜約７．５の極めて広いＰＨ範囲に最適作用ｐ
Ｈが認められ、また、最適作用温度は６０〜６３℃にあ
る極めて熱安定性に優れた酵素であり１本発明以前に知
られているバシルス属のプルラナーゼ（例えば、 Ａｇ
ｒｉｃ Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、４０，１５２３（１９７
６）（最適ｐＨ６〜６．５、最適温度５０℃）、特公昭
５９−３９６３０（最適ｐＨ７，０，最適温度４５℃）
、特開昭５７−１７４０８９（最適ｐＨ３，５〜５．５
、最適温度約６０℃））とは異った新規なプルラナーゼ
様酵素であるということができる。
ｐＨ約５〜約７．５の極めて広いＰＨ範囲に最適作用ｐ
Ｈが認められ、また、最適作用温度は６０〜６３℃にあ
る極めて熱安定性に優れた酵素であり１本発明以前に知
られているバシルス属のプルラナーゼ（例えば、 Ａｇ
ｒｉｃ Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、４０，１５２３（１９７
６）（最適ｐＨ６〜６．５、最適温度５０℃）、特公昭
５９−３９６３０（最適ｐＨ７，０，最適温度４５℃）
、特開昭５７−１７４０８９（最適ｐＨ３，５〜５．５
、最適温度約６０℃））とは異った新規なプルラナーゼ
様酵素であるということができる。
本発明において、例示菌として使用されるバシルス・ズ
ブチルスＴＯ株の菌学的性質は下記の通りであり、本国
は微工研条寄第６８４号として工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されてる。
ブチルスＴＯ株の菌学的性質は下記の通りであり、本国
は微工研条寄第６８４号として工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託されてる。
￥ｌｌ１ｙｌ聰態的性質
台？菌で大きさ０．５〜０．７Ｘ０．８〜１．２μ、４
４（運動性、ダラム陽性、胞子は球形〜楕円形。
４（運動性、ダラム陽性、胞子は球形〜楕円形。
（２）培養的性質
（ａ）肉汁寒天斜面培養； 表面スムースで生育良良好
、培養後期は淡黄色を示す。
、培養後期は淡黄色を示す。
（ｂ）グルコース肉汁寒天斜面培養； 肉汁寒天暗培養
よりも生育劣る。
よりも生育劣る。
（ｃ）肉汁液体培養； 生育はよくないが混濁を生生じ
、沈降する。
、沈降する。
（ｄ）クエン酸寒天斜面培養； わずかに生育する。
（ｅ）ペプトン−ゼラチン穿刺培養； ゆっくり液化す
る。
る。
（ｆ）ミルク液体培養； カゼインを凝固し、次いでペ
プトン化する。
プトン化する。
（ｇ）ポテト培養； 生育はあまりよくない。
（３）生化学的性質
−“（至）−酸塩の還元； 陰性
…中カタラーゼ； 陽性
（社）ｊチロシナーゼ； 陰性
（ｄ）インドール； 生成しない
（ｅ）クエン酸の利用； 陽性
（ｆ）硫化水素の生成； 陽性
（ｇ）ウレアーゼ； 陰性
（ｈ）澱粉の加水分解； 陽性
（ｉ）炭水化物の利用； Ｄ−グルコース、Ｄ−フラク
トース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、シューク
ロース、マルトース、ラクトース、デンプン、デキスト
リン、グリコーゲン、Ｄ−キシロース、Ｄ−アラビノー
ス、し−アラビノースなどの炭水化物から酸を生成する
が、ガスの発生は認められない。
トース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、シューク
ロース、マルトース、ラクトース、デンプン、デキスト
リン、グリコーゲン、Ｄ−キシロース、Ｄ−アラビノー
ス、し−アラビノースなどの炭水化物から酸を生成する
が、ガスの発生は認められない。
（４）生育ＰＨ及び生育温度
本国は中性付近よりも、弱アルカリ性のｐＨ７，５〜ｐ
Ｈ８，５で良好に生育する。生育最適温度は３５゜〜４
５℃にあり、最高生育温度は約５０℃である。
Ｈ８，５で良好に生育する。生育最適温度は３５゜〜４
５℃にあり、最高生育温度は約５０℃である。
本発明により生産される新規なプルラナーゼ様酵素はプ
ルランをマルトトリオースに分解するα−１，６−グル
コシド結合分解活性の他に、アミ工％１、アミロペクチ
ンやグリコーゲンなどに存在１椙α−１，４−グルコシ
ド結合を分解して、主とｊＪ−ｔマルトースとマルトト
リオースを生成する新規なα−アミラーゼ活性をもって
いるため、この活性をもたないプルラナーゼやイソアミ
ラーゼなどに比べ、グルコアミラーゼと併用して澱粉の
糖化を行った場合、澱粉の糖化反応を促進し、且つ最終
的なグルコースの収量も、通常、０．５〜３％高く収得
することができる。例えば、グルコアミラーゼ囃独で３
０％濃度の液化澱粉に作用させた場合、グルコースの収
量は９４〜９５％である。そして。
ルランをマルトトリオースに分解するα−１，６−グル
コシド結合分解活性の他に、アミ工％１、アミロペクチ
ンやグリコーゲンなどに存在１椙α−１，４−グルコシ
ド結合を分解して、主とｊＪ−ｔマルトースとマルトト
リオースを生成する新規なα−アミラーゼ活性をもって
いるため、この活性をもたないプルラナーゼやイソアミ
ラーゼなどに比べ、グルコアミラーゼと併用して澱粉の
糖化を行った場合、澱粉の糖化反応を促進し、且つ最終
的なグルコースの収量も、通常、０．５〜３％高く収得
することができる。例えば、グルコアミラーゼ囃独で３
０％濃度の液化澱粉に作用させた場合、グルコースの収
量は９４〜９５％である。そして。
グルコアミラーゼに市販のプルラナーゼを共存させた場
合、グルコースの収量は約９６．５％であったが、同一
プルラナーゼ活性の本発明の酵素剤を共存させた場合は
９７．０〜９７．５％の収量でグルコースが得られた。
合、グルコースの収量は約９６．５％であったが、同一
プルラナーゼ活性の本発明の酵素剤を共存させた場合は
９７．０〜９７．５％の収量でグルコースが得られた。
このように、グルコースの収量が高いばかりでなく、最
高の糖化率に到達する時間も、本１の酵素剤を使用する
場合、著しく短縮するこ稍例できる。すなわち、このこ
とはゲルコアミラ〜の使用量を節減できることを意味し
ている。
高の糖化率に到達する時間も、本１の酵素剤を使用する
場合、著しく短縮するこ稍例できる。すなわち、このこ
とはゲルコアミラ〜の使用量を節減できることを意味し
ている。
また１本発明の酵素はアミロース、アミロペクチン、デ
ンプン、グリコーゲンなどに作用させた場合、主として
、マルトースとマルトトリオースを生成するが１本酵素
がα−１，６−グルコシド結合分解活性をもっているた
め、マルトースとマルトトリオースは極めて高い収量で
得ることができる。例えば、本酵素剤を液化デンプンに
作用させたとき、マルトースとマルトトリオースは、い
ずれも約４０〜約５０％の高収量で得られる。マルトー
スとマルトトリオースを、このような糖組成で生成する
アミラーゼは未だ知られていない。本発明の酵素剤を使
用して得られるこのような糖化物はマルトースとマルト
トリオースの両方の特性をもつものであり、甘味料、甘
味調整剤１食品増量剤など１種々の食品の添加剤として
利用できるものである。また、本発明の酵素は、極めて
熱安定性に優れ、グルコアミラーゼの限界温度である６
０℃においても長時間の反応をおこなうことができるば
かりか、 ＰＨ４，５〜５．０のグルコアミラーゼの良
好な作用ｐＨ範囲でも好適に利用することができる。
ンプン、グリコーゲンなどに作用させた場合、主として
、マルトースとマルトトリオースを生成するが１本酵素
がα−１，６−グルコシド結合分解活性をもっているた
め、マルトースとマルトトリオースは極めて高い収量で
得ることができる。例えば、本酵素剤を液化デンプンに
作用させたとき、マルトースとマルトトリオースは、い
ずれも約４０〜約５０％の高収量で得られる。マルトー
スとマルトトリオースを、このような糖組成で生成する
アミラーゼは未だ知られていない。本発明の酵素剤を使
用して得られるこのような糖化物はマルトースとマルト
トリオースの両方の特性をもつものであり、甘味料、甘
味調整剤１食品増量剤など１種々の食品の添加剤として
利用できるものである。また、本発明の酵素は、極めて
熱安定性に優れ、グルコアミラーゼの限界温度である６
０℃においても長時間の反応をおこなうことができるば
かりか、 ＰＨ４，５〜５．０のグルコアミラーゼの良
好な作用ｐＨ範囲でも好適に利用することができる。
４開ように１本発明により生産される酵素は、種帽ｌ効
果をもつものである。
果をもつものである。
補刷のプルラナーゼ様酵素剤を生産するためには、窒素
源として、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、カゼイン
、コーン・ステイープ・リカー、大豆粕、魚粉のような
有機窒素源や、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
リン酸アンモニウムのようなアンモニウム塩、硝酸ナト
リウム、硝酸カリウムのような硝酸塩あるいは尿素のよ
うな無機窒素源のいずれか、または両方を使用する。
源として、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、カゼイン
、コーン・ステイープ・リカー、大豆粕、魚粉のような
有機窒素源や、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
リン酸アンモニウムのようなアンモニウム塩、硝酸ナト
リウム、硝酸カリウムのような硝酸塩あるいは尿素のよ
うな無機窒素源のいずれか、または両方を使用する。
炭素源としては、通常、澱粉、デキストリン、マルトー
ス、グルコース等が使用される。そしてこれに補足する
栄養源として、リン酸塩、マグネシウム塩や、少量のマ
ンガン、鉄化合物が添加される。
ス、グルコース等が使用される。そしてこれに補足する
栄養源として、リン酸塩、マグネシウム塩や、少量のマ
ンガン、鉄化合物が添加される。
培養は、ＰＨ約５〜約９、温度２５〜５５℃で行なうこ
とができるが１通常、 ｐＨ７〜９．温度３０℃前後で
２〜４間Ｉ好気的に行われる。該酵素は殆んど菌体外Ｎ
ＡＩ産されるので、培養後、濾過または遠心分離ｅｌ除
菌し、上澄液を回収する。そして、必要に応じ濃縮し、
硫酸アンモニウムや硫酸ナトリウムなどにより塩析する
か、または、アセトン、イソプロパツール、エタノール
、メタノール等の有機溶剤を加えて該酵素を沈殿物とし
て回収し、濃厚溶液として、または乾燥物として保存す
る。
とができるが１通常、 ｐＨ７〜９．温度３０℃前後で
２〜４間Ｉ好気的に行われる。該酵素は殆んど菌体外Ｎ
ＡＩ産されるので、培養後、濾過または遠心分離ｅｌ除
菌し、上澄液を回収する。そして、必要に応じ濃縮し、
硫酸アンモニウムや硫酸ナトリウムなどにより塩析する
か、または、アセトン、イソプロパツール、エタノール
、メタノール等の有機溶剤を加えて該酵素を沈殿物とし
て回収し、濃厚溶液として、または乾燥物として保存す
る。
本酵素を使用し、囃独または、グルコアミラーゼやβ−
アミラーゼなどと併用して、澱粉を糖化する反応は、通
常、ｐＨ４〜９．温度４０℃〜７０℃で行われる。
アミラーゼなどと併用して、澱粉を糖化する反応は、通
常、ｐＨ４〜９．温度４０℃〜７０℃で行われる。
以下に、実施例により本発明の詳細な説明する。
実施例１
大豆粕５％、コーン・ステイープ・リカー０．６％、肉
エキス０．４％、リン酸二カリ０．３％、硫酸マグネシ
ウム０．１％、可溶性デンプン２％、尿素０．３％、ソ
ディウム・ドデシルサルフェート０．１％、硫酸銅５Ｘ
１０− ’ Ｍ、塩化マンガン２．５ Ｘ １０″″”
Ｍ、塩化カルシウムｌＸｌ０−３Ｍ、硫酸ｎ鉛ｔｘｔ
ｏ−’ Ｍ、 硫嘩鉄ＩＸＩＰ ’ Ｍカラナル培地（
ｐＨ７，２）３０ｍＭ ＆２００ｍＱ容五角フラスコに
入れ、常法により殺菌後、バシル°フ・ズブチルスＴＵ
株（ＦＥＲＮ ＢＰ−６８４）を接種し、３０’Ｃぐ３
日間振盪培養した。培養後、遠心分離して得た上澄液中
のプルラナーゼ活性は培地１ｗ！当り９．６ｑＬ位であ
った。またα−アミラーゼ活性は培地１ｍＱ当り４５．
２単位であった。
エキス０．４％、リン酸二カリ０．３％、硫酸マグネシ
ウム０．１％、可溶性デンプン２％、尿素０．３％、ソ
ディウム・ドデシルサルフェート０．１％、硫酸銅５Ｘ
１０− ’ Ｍ、塩化マンガン２．５ Ｘ １０″″”
Ｍ、塩化カルシウムｌＸｌ０−３Ｍ、硫酸ｎ鉛ｔｘｔ
ｏ−’ Ｍ、 硫嘩鉄ＩＸＩＰ ’ Ｍカラナル培地（
ｐＨ７，２）３０ｍＭ ＆２００ｍＱ容五角フラスコに
入れ、常法により殺菌後、バシル°フ・ズブチルスＴＵ
株（ＦＥＲＮ ＢＰ−６８４）を接種し、３０’Ｃぐ３
日間振盪培養した。培養後、遠心分離して得た上澄液中
のプルラナーゼ活性は培地１ｗ！当り９．６ｑＬ位であ
った。またα−アミラーゼ活性は培地１ｍＱ当り４５．
２単位であった。
ここでα−アミラーゼ活性は以下のようにして測定した
。
。
０．１Ｍリン酸緩衝液に溶解させた１％可溶性澱粉液（
ｐＨ７，０）０．５ｓ Ｑに、適量の酵素を加え、水で
全量１ｍＱとし、４０℃で反応させる。この条件で１分
間に１μｍｏｌのグルコースに相当する還元力を生成す
る酵素量をＩＩＩｔ位とした。
ｐＨ７，０）０．５ｓ Ｑに、適量の酵素を加え、水で
全量１ｍＱとし、４０℃で反応させる。この条件で１分
間に１μｍｏｌのグルコースに相当する還元力を生成す
る酵素量をＩＩＩｔ位とした。
実施例２
実施例１で使用した培地で使用した培地と同じ組成の培
地で培養した。バシルス・ズブチルスＴＯ株（ＦＥＲＭ
０Ｐ−６８４）の培養上澄２５０ｒｓ Ｑに、０．４
Ｍリン酸二ナトリウム溶液及び０．４Ｍ塩化カルシウム
溶液各１５０ａ＋ Ｑを滴下しながら添加してリン酸カ
ルシウムゲルを形成させるとともに、これに酵素を吸着
させた。次いで、ガラスフィルターで濾過して吸着物を
回収し、蒸溜水で充分洗滌後、０．５Ｍリン酸・カリウ
ム溶液２００ｖｓ Ｑで酵素を溶出し、透析、濃桿ルた
。
地で培養した。バシルス・ズブチルスＴＯ株（ＦＥＲＭ
０Ｐ−６８４）の培養上澄２５０ｒｓ Ｑに、０．４
Ｍリン酸二ナトリウム溶液及び０．４Ｍ塩化カルシウム
溶液各１５０ａ＋ Ｑを滴下しながら添加してリン酸カ
ルシウムゲルを形成させるとともに、これに酵素を吸着
させた。次いで、ガラスフィルターで濾過して吸着物を
回収し、蒸溜水で充分洗滌後、０．５Ｍリン酸・カリウ
ム溶液２００ｖｓ Ｑで酵素を溶出し、透析、濃桿ルた
。
、次いで、 ２．５Ｘ１０−３阿トリス緩衝液（ｐＨ７
，０）でせ衝止したＤＥＡＥ・セファロースカラムにで
処理し、同緩衝液で流出するプルラナーゼ活゛性区分を
集め、濃縮、透析後、２．５Ｘ１０− ” ＭトＩＪ
ス緩衝液（ｐＨ７，０）で緩衝化したＢｉｏｇｅｌ Ａ
１．５ｍカラムでゲル濾過を行い、活性区分を集め、
同カラムで再クロマトグラフィーを繰返した。第３図は
Ｂｉｏｇｅｌ Ａ １．５ｍカラム（１，５Ｘ８７ｃｍ
）による溶出曲線を示している。精製された酵素はタン
パク質曲線、プルラナーゼ活性曲線及びα−アミラーゼ
活性曲線は完全に一致している。最終的に回収された酵
素標品のプルラナーゼ活性は５８５単位そしてアミラー
ゼ活性は１０７０単位であった。
，０）でせ衝止したＤＥＡＥ・セファロースカラムにで
処理し、同緩衝液で流出するプルラナーゼ活゛性区分を
集め、濃縮、透析後、２．５Ｘ１０− ” ＭトＩＪ
ス緩衝液（ｐＨ７，０）で緩衝化したＢｉｏｇｅｌ Ａ
１．５ｍカラムでゲル濾過を行い、活性区分を集め、
同カラムで再クロマトグラフィーを繰返した。第３図は
Ｂｉｏｇｅｌ Ａ １．５ｍカラム（１，５Ｘ８７ｃｍ
）による溶出曲線を示している。精製された酵素はタン
パク質曲線、プルラナーゼ活性曲線及びα−アミラーゼ
活性曲線は完全に一致している。最終的に回収された酵
素標品のプルラナーゼ活性は５８５単位そしてアミラー
ゼ活性は１０７０単位であった。
実施例３
イワシミール５％、コーン・ステイープ・リカー４％、
リン酸二カリ０．３％、硫酸マグネシウム０゜憚、可溶
性デンプン２％、尿素０．１％、ソディウドデシルサル
フェート０．０６％、硫酸銅５ Ｘ １０−５Ｍ、塩化
マンガン２．５ＸｌＯ−’ Ｍ、塩化カルシウムＩＸ
１０−３Ｍ、硫酸亜鉛ｌＸｌ０− ’ Ｍ、硫酸鉄１×
ｌｏ−’ Ｍカラなる培地（ｐＨ７，２）３０ｍＭを２
００ｖａ ｎ容三角フラスコに入れ、常法により殺菌後
、バシルス・ズブチルスｒｕ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６８
４）を接種し、 ３０℃で３日間振盪培養した。培養後
、遠心分離して得た上澄液について生産されたプルラナ
ーゼ活性を測定した結果、培地１ＩＩＱ当り６．９−位
であった。
リン酸二カリ０．３％、硫酸マグネシウム０゜憚、可溶
性デンプン２％、尿素０．１％、ソディウドデシルサル
フェート０．０６％、硫酸銅５ Ｘ １０−５Ｍ、塩化
マンガン２．５ＸｌＯ−’ Ｍ、塩化カルシウムＩＸ
１０−３Ｍ、硫酸亜鉛ｌＸｌ０− ’ Ｍ、硫酸鉄１×
ｌｏ−’ Ｍカラなる培地（ｐＨ７，２）３０ｍＭを２
００ｖａ ｎ容三角フラスコに入れ、常法により殺菌後
、バシルス・ズブチルスｒｕ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６８
４）を接種し、 ３０℃で３日間振盪培養した。培養後
、遠心分離して得た上澄液について生産されたプルラナ
ーゼ活性を測定した結果、培地１ＩＩＱ当り６．９−位
であった。
実施例４
実施例２で調製した酵素剤を市販のグルコアミラーゼと
併用して澱粉の糖化反応を行った。
併用して澱粉の糖化反応を行った。
基質としては、ポテト澱粉を市販液化酵素で液化したＤ
Ｅ７．７のものを使用した（グルコアミラーゼ。
Ｅ７．７のものを使用した（グルコアミラーゼ。
液化酵素は、天野製薬■、ノボ・ジャパン■などにより
入手することができる。）、固形分として各３ｇの液化
澱粉に、グルコアミラーゼ（ノボ社製工業用酵素）を液
化澱粉固形分に対して、０．２％量と実施例２で調製し
た本発明の酵素剤または市販のプルラナーゼを加え、ｌ
Ｘｌ０−”Ｍ塩化カルシウムの存在下、ＰＨ４，８〜５
．０で、 ５７．５℃で糖化反応を１った（各プルラナ
ーゼ剤は、前記の活性測定法」おいて、リン酸緩衝液の
代りに、酢酸緩衝液を用い、ｐＨ５，０で測定する以外
、同じ条件で行ない、基質１ｇに対し０．５ｓ単位の酵
素量を添加した）。
入手することができる。）、固形分として各３ｇの液化
澱粉に、グルコアミラーゼ（ノボ社製工業用酵素）を液
化澱粉固形分に対して、０．２％量と実施例２で調製し
た本発明の酵素剤または市販のプルラナーゼを加え、ｌ
Ｘｌ０−”Ｍ塩化カルシウムの存在下、ＰＨ４，８〜５
．０で、 ５７．５℃で糖化反応を１った（各プルラナ
ーゼ剤は、前記の活性測定法」おいて、リン酸緩衝液の
代りに、酢酸緩衝液を用い、ｐＨ５，０で測定する以外
、同じ条件で行ない、基質１ｇに対し０．５ｓ単位の酵
素量を添加した）。
得られた結果は第１表及び第２表に示す通りであった。
第１表
第１表は、糖化開始１，２．３．５と２０時間目におけ
るＤＨ値（全糖中の還元糖をグルコースとして表わした
値）を示す。全糖はフェノール硫酸法で定量し、還元糖
はフェリシアン化カリ法により定量した。表から明らか
なように、本発明の酵素剤を用いた場合、糖化開始初期
における糖化が促進されていることがわかる。
るＤＨ値（全糖中の還元糖をグルコースとして表わした
値）を示す。全糖はフェノール硫酸法で定量し、還元糖
はフェリシアン化カリ法により定量した。表から明らか
なように、本発明の酵素剤を用いた場合、糖化開始初期
における糖化が促進されていることがわかる。
第２表は、糖化開始後、２２時間、２５時間と２８時間
目の糖化物を高速液体クロマトグラフィーにより糖組成
を分析した結果を示している。表から明らかなように、
本発明のプルラナーゼを用いた場合、最高９７．１％の
収量でグルコースが得られた。
目の糖化物を高速液体クロマトグラフィーにより糖組成
を分析した結果を示している。表から明らかなように、
本発明のプルラナーゼを用いた場合、最高９７．１％の
収量でグルコースが得られた。
また、１１Ｆ化２２時間目のグルコース収量から明らか
なように、糖化反応が著しく促進されていることがわか
る。
なように、糖化反応が著しく促進されていることがわか
る。
第２表
実施例５
実施例４と同様にして１本発明の酵素を基質ｇ当り０．
５単位添加し、 ｐＨ４，５〜５．３、温度５５℃で糖
化した。糖化開始２４時間後、２時間毎に生成したグル
コース収量を高速液体クロマトグラフィーにより求めた
。第３表は各糖化ｐＨにおける最高値を示したときのグ
ルコース収量を示している。
５単位添加し、 ｐＨ４，５〜５．３、温度５５℃で糖
化した。糖化開始２４時間後、２時間毎に生成したグル
コース収量を高速液体クロマトグラフィーにより求めた
。第３表は各糖化ｐＨにおける最高値を示したときのグ
ルコース収量を示している。
第３表
〜５のグルコアミラーゼの最適作用ＰＨ条件下で効果的
に作用し、無添加の場合に比べ、グルコース菖を約２％
増加することができた。
に作用し、無添加の場合に比べ、グルコース菖を約２％
増加することができた。
（第１図； プルランを基質としたときの最適ＰＨを示
す。 第２図； プルランを基質としたときの最適温度を示す
。 第３図； Ｂｉｏｇｅｌ Ａ １．５ｍカラム（１，
５Ｘ８７ａｎ）によるプルラナーゼ活性、アミラーゼ活 性及びタンパク質（２８０ｎｍにおける吸収）の溶出曲
線を示す。 特許出願人工業技術院長等々力 達 指定代理人 工業技術院微生物工業技術研究所長大山数 フラクショノ 官庁出願 手続主甫正書（自発） 昭和６０年８月２日 １、事件の表示 昭和６０年特許願第 ５８
８ 号２、発明の名称 プルラナーゼ様酵素の製造法 ３、補正をする者 ４、指定代理人 ６、補正による増加する発明の数 な し７、補正の
対象 明細書の「特許請求の範囲」及び「発明の詳細
な説別紙 Ｏ特許請求の範囲を次の通り訂正する。 特許請求の範囲 「澱粉を、主成分としてマルトースとマルトトリオース
に分解する新規なα−アミラーゼ活性をもつプルラナー
ゼ様複合酵素を生産するバシルス属菌株を培養し、培養
物か＆該酵素を採取することを特徴とする新規なα−ア
ミラーゼ活性をもつプルラナーゼ様複合酵素の製造績」 ○明細書第６真下末より第６行目の「行７．５」を「約
７．５」に訂正する。
す。 第２図； プルランを基質としたときの最適温度を示す
。 第３図； Ｂｉｏｇｅｌ Ａ １．５ｍカラム（１，
５Ｘ８７ａｎ）によるプルラナーゼ活性、アミラーゼ活 性及びタンパク質（２８０ｎｍにおける吸収）の溶出曲
線を示す。 特許出願人工業技術院長等々力 達 指定代理人 工業技術院微生物工業技術研究所長大山数 フラクショノ 官庁出願 手続主甫正書（自発） 昭和６０年８月２日 １、事件の表示 昭和６０年特許願第 ５８
８ 号２、発明の名称 プルラナーゼ様酵素の製造法 ３、補正をする者 ４、指定代理人 ６、補正による増加する発明の数 な し７、補正の
対象 明細書の「特許請求の範囲」及び「発明の詳細
な説別紙 Ｏ特許請求の範囲を次の通り訂正する。 特許請求の範囲 「澱粉を、主成分としてマルトースとマルトトリオース
に分解する新規なα−アミラーゼ活性をもつプルラナー
ゼ様複合酵素を生産するバシルス属菌株を培養し、培養
物か＆該酵素を採取することを特徴とする新規なα−ア
ミラーゼ活性をもつプルラナーゼ様複合酵素の製造績」 ○明細書第６真下末より第６行目の「行７．５」を「約
７．５」に訂正する。
Claims (1)
- （１）澱粉を、主成分としてマルトースとマルトトリオ
ースに分解する新規なα−アミラーゼ活性をもつプルラ
ナーゼ様複合酵素を生産するバシルス属菌株を培養し、
培養物かに該酵素を採取することを特徴とする新規なα
−アミラーゼ活性をもつプルラナーゼ様複合酵素の製造
法
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60000588A JPS61162183A (ja) | 1985-01-07 | 1985-01-07 | プルラナ−ゼ様酵素の製造法 |
| EP85302258A EP0188049A3 (en) | 1985-01-07 | 1985-04-01 | Pullulanase-like enzyme, method for preparation thereof, and method for saccharification of starch therewith |
| US06/719,244 US4657865A (en) | 1985-01-07 | 1985-04-02 | Pullulanase-like enzyme, method for preparation thereof, and method for saccharification of starch therewith |
| DK153085A DK153085A (da) | 1985-01-07 | 1985-04-03 | Pullulanaselignende enzymer, fremgangsmaade til fremstilling deraf og fremgangsmaade til forsukring af stivelse dermed |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60000588A JPS61162183A (ja) | 1985-01-07 | 1985-01-07 | プルラナ−ゼ様酵素の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61162183A true JPS61162183A (ja) | 1986-07-22 |
| JPH0118717B2 JPH0118717B2 (ja) | 1989-04-06 |
Family
ID=11477883
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60000588A Granted JPS61162183A (ja) | 1985-01-07 | 1985-01-07 | プルラナ−ゼ様酵素の製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4657865A (ja) |
| EP (1) | EP0188049A3 (ja) |
| JP (1) | JPS61162183A (ja) |
| DK (1) | DK153085A (ja) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8609288D0 (en) * | 1986-04-16 | 1986-05-21 | Ici Plc | Debranching enzyme |
| FI81112C (fi) * | 1986-08-27 | 1990-09-10 | Alko Ab Oy | Amylas av ny typ. |
| EP0405283A3 (en) * | 1989-06-26 | 1991-03-06 | Enzyme Bio-Systems Ltd. | Novel thermoduric and aciduric pullulanase enzyme and method for its production |
| US5055403A (en) * | 1989-06-26 | 1991-10-08 | Enzyme Bio-Systems, Ltd. | Thermoduric and aciduric pullulanase enzyme and method for its production |
| US5147796A (en) * | 1989-09-19 | 1992-09-15 | Kao Corporation | Alkaline pullulanase Y having α-amylase activity |
| DE69133154T2 (de) * | 1990-04-05 | 2003-07-24 | Kao Corp., Tokio/Tokyo | Detergentzusammensetzung |
| DK47291D0 (da) * | 1991-03-15 | 1991-03-15 | Novo Nordisk As | Pullulanase |
| US20030180900A1 (en) * | 2002-02-08 | 2003-09-25 | Oreste Lantero | Methods for producing ethanol from carbon substrates |
| RU2010124696A (ru) * | 2007-12-18 | 2012-01-27 | Джорджия Тек Ризёч Копэрэйшн (Us) | Системы и способы для изменения скорости энзиматических процессов |
| CN107365730B (zh) * | 2017-09-08 | 2021-12-10 | 河南新仰韶生物酶制剂有限公司 | 枯草芽孢杆菌菌株及利用该菌株生产支链淀粉酶的方法 |
| CN119120429A (zh) * | 2018-10-31 | 2024-12-13 | 天野酶制品株式会社 | 麦芽三糖生成淀粉酶 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS519033B1 (ja) * | 1969-09-12 | 1976-03-23 | ||
| US4251630A (en) * | 1978-07-28 | 1981-02-17 | Kurth Malting Corporation | Preparation of malt high in alpha-1,6-hydrolase |
| US4318989A (en) * | 1979-06-07 | 1982-03-09 | Lifeline Products, Inc. | Starch-degrading enzymes from Cladosporium resinae |
| US4234686A (en) * | 1979-06-07 | 1980-11-18 | Lifeline Products, Inc. | Starch-degrading enzymes derived from cladosporium resinae |
| US4355110A (en) * | 1979-07-19 | 1982-10-19 | Miller Brewing Company | Preparation of debranching enzyme from rice for producing a low calorie beer |
| IL61982A (en) * | 1980-02-15 | 1984-01-31 | Cpc International Inc | Genetically engineered microorganisms for massive production of amyloytic enzymes and process for preparing same using the corresponding recombinant dnas containing amylase coding genes |
| CA1211314A (en) * | 1983-05-20 | 1986-09-16 | William F. Line | Production of dextrose and maltose syrups using an enzyme derived from rice |
-
1985
- 1985-01-07 JP JP60000588A patent/JPS61162183A/ja active Granted
- 1985-04-01 EP EP85302258A patent/EP0188049A3/en not_active Withdrawn
- 1985-04-02 US US06/719,244 patent/US4657865A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-03 DK DK153085A patent/DK153085A/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0118717B2 (ja) | 1989-04-06 |
| EP0188049A3 (en) | 1987-10-21 |
| DK153085D0 (da) | 1985-04-03 |
| US4657865A (en) | 1987-04-14 |
| DK153085A (da) | 1986-07-08 |
| EP0188049A2 (en) | 1986-07-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS61162183A (ja) | プルラナ−ゼ様酵素の製造法 | |
| EP0258050A2 (en) | An amylase of a new type | |
| JPS5917983A (ja) | アミラ−ゼｇ３の製造法 | |
| JPS594119B2 (ja) | アミラ−ゼｇ４，５によるオリゴ糖の製造方法 | |
| JPH05292962A (ja) | 新規な枝切り酵素及びその製造法 | |
| JPS6225977A (ja) | 新規なアミラ−ゼ | |
| US4925795A (en) | Method of using G-4 amylase to produce high maltotetraose and high maltose content starch hydrolysates | |
| JP2843110B2 (ja) | プルラナーゼ | |
| JPS5937957B2 (ja) | アミラ−ゼｇ３によるマルトトリオ−スの製造法 | |
| JPH0681598B2 (ja) | 澱粉の糖化によるグルコースの製造方法 | |
| JPS61162182A (ja) | プルラナ−ゼ様酵素剤 | |
| JPH0378990B2 (ja) | ||
| JPH0424993B2 (ja) | ||
| JP2866460B2 (ja) | 多糖類の糖化方法 | |
| JPH0134037B2 (ja) | ||
| JPS6331194B2 (ja) | ||
| JPH062071B2 (ja) | 糖類の製造法 | |
| JPS6339234B2 (ja) | ||
| JPH0435158B2 (ja) | ||
| JPH0253036B2 (ja) | ||
| JPS62126991A (ja) | マルト−スの製造法 | |
| JPS6314955B2 (ja) | ||
| JPH0133160B2 (ja) | ||
| JPS5844356B2 (ja) | バシルス属アミラ−ゼｇ６の製造法 | |
| JPS6027513B2 (ja) | 耐熱性α−１，６−グルコシダ−ゼＡの製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |