JPH0328436B2 - - Google Patents
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- JPH0328436B2 JPH0328436B2 JP57038869A JP3886982A JPH0328436B2 JP H0328436 B2 JPH0328436 B2 JP H0328436B2 JP 57038869 A JP57038869 A JP 57038869A JP 3886982 A JP3886982 A JP 3886982A JP H0328436 B2 JPH0328436 B2 JP H0328436B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な抗生物質誘導体に関し、さらに
詳しくは、下記式 式中、R1は水素原子又は水酸基を表わし、
R2及びR3は水素原子又は一緒になつてイソ
プロピリデン基 を表わし、R4は置換又は未置換のベンジル
基を表わす、 で示される化合物に関する。 下記式 で示される７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格
（カルバペネム骨格）を有する抗生物質（以下、
この骨格を有する抗生物質をカルバペネム系抗生
物質という）は、一般に高い抗菌力とβ−ラクタ
マーゼ阻害性を有しており、従来から、発酵法、
半合成法、全合成法により各種のカルバペネム系
抗生物質が製造されている〔例えば、本発明等が
提供したものに限定しても、PS−５（ジヤーナ
ル・オブ・アンテイビオテイクス、32巻（1979
年）、262〜286頁）、PS−６（公開特許公報昭54−
59295号）、PS−７（公開特許公報昭54−92983
号）、PS−５、PS−６及びPS−７等の３−位側
鎖の置換による新規カルバペネム抗生物質の製造
方法（公開特許公報昭56−156281号及び昭56−
161393号）等〕。 しかし、これ迄に提案されているカルバペネム
系抗生物質で発酵法により製造されている化合物
は、一般に生体内で不安定であるとして、それら
の改良が多角的に検討されている。本発明者等が
提案した前記公開特許公報昭56−156281号に記載
の発明も発酵法により製造される化合物の改良法
の範mm2に属するものであり、具体的には、式 式中、R1は水素原子、メチル基又は水酸基
を表わし、R2及びR3はそれぞれ水素原子、
アルキル基又はＮ−保護基を表わし、R4は
水素原子又はエステル残基を表わし、ｎは０
又は１である。 の化合物又はその塩を式 R5−SH 式中、R5は水素原子又は一価の有機基を表
わす、 のチオール化合物又はその反応性誘導体と反応せ
しめ、次式 式中、R1、R4及びR5は前記の意味を有する、 を示される３−位側鎖の置換誘導体の製造方法を
提供するものであり、さらに、これらの方法によ
つて製造される化合物は、生体内で安定化される
傾向が窺える。 ところが、ごく最近、本発明者らはストレプト
ミセス・SP OA−6129（FERM BP−11）が、こ
れまで発表されているカルバペネム系抗生物質と
３−位の置換基の種類においてタイプの異なる、
次式 式中、R1は前記の意味を有する、 で示される抗生物質OA−6129A、B1及びB2（以
下、「抗生物質OA−6129群」という。）を生産す
ることが判明し先に提案した（特願昭57−11010
号出願明細書参照）。 これらの抗生物質は、前述のPS−５等に比し、
抗菌活性は劣るが、発酵出産性が優れているた
め、半合成によるカルバペネム系抗生物質の開発
用原料として有用である。 本発明は、抗生物質OA−6129群の化合物もＳ
−酸化することにより上述の公開特許公報昭56−
156281号記載の発明と同様に３−位側鎖の置換誘
導体の製造に供することができることを確認して
完成した。 しかして、本発明により提供される前記式
（）の化合物は、カルバペネム骨格の３−位に
Ｓ−酸化されたパンテテイニル基を有し且つ６−
位にエチル基又は１−ヒドロキシエチル基を有し
ている点に構造的特徴を有する抗生物質のエステ
ル及び／又は、パントイル基の水酸基がイソプロ
ピリデン化された誘導体であり従来の文献に未載
の新規な抗生物質誘導体である。以下、これらの
抗生物質誘導体のうち、式（）のR1、R2、R3
及びR4が水素原子を表わす抗生物質の誘導体を
「抗生物質OA−6129A誘導体」と、R1が水酸基
を表わし、R2、R3及びR4が水素原子を表わす抗
生物質の誘導体のうち、５，６−シス立体配置を
有するものを「抗生物質OA−6129B1誘導体」
と、同様に５，６−トランス立体配置を有するも
のを「抗生物質OA−6129B2誘導体」と略称す
る。 これらの式（）で示される抗生物質誘導体
は、前述した如く、より高活性及び／又は生体内
で安定性が向上したカルバペネム系抗生物質の誘
導体の開発に有用であり、下記式 式中、R1及びR4は前記の意味を有する、 で示される３−位側鎖のパントイル基の水酸基を
必要により保護された化合物は、各種の有機溶媒
に対する溶解性が改善されることから、さらに、
その合成中間体として有用性が高いものである。 本明細書において用いる置換ベンジル基におけ
るベンゼン環上の置換基としては、例えば、メチ
ル、エチル等の低級アルキル基；メトキシ、エト
キシ等の低級アルコキシ基、塩素、フツ素などの
ハロゲン原子、ニトロ基、等が挙げられる。かか
る置換ベンジル基としては例えばｐ−ニトロベン
ジル基、ｐ−ブロモベンジル基、ｐ−メチルベン
ジル基、２，４−ジニトロベンジル基、ｐ−メト
キシベンジル基等が包含される。前記式（）に
おいて、R4によつて表わされる「置換もしくは
未置換ベンジル基」としては中でもベンジル基及
びｐ−ニトロベンジル基が好適である。しかし
て、本発明により提供される具体的な化合物とし
ては、 Γ６−エチル−３−パンテテイニル−７−オキソ
−１−アザビシクロ〔３・２・０〕ヘプト−２
−エン−２−カルボン酸 ｐ−ニトロベンジル
エステルスルオキシド Γ６−エチル−３−イソプロピリデンパンテテイ
ニル−７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸
ｐ−ニトロベンジルエステルスルオキシド Γ６−エチル−３−パンテテイニル−７−オキソ
−１−アザビシクロ〔３・２・０〕ヘプト−２
−エン−２−カルボン酸 ｏ，ｐ−ジニトロベ
ンジルスルオキシド Γ（５，６−トランス）−６−（１−ヒドロキシエ
チル−３−イソプロピリデンパンテテイニル−
７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・０〕
ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｐ−ニト
ロベンジルエステルスルオキシド Γ（５，６−シス）−６−（１−ヒドロキシエチ
ル）−３−イソプロピリデンパンテテイニル−
７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・０〕
ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｐ−ニト
ロベンジルエステルスルオキシド Γ（５，６−トランス）−６−（１−ヒドロキシエ
チル）−３−イソプロピリデンパンテテイニル
−７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・
０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｐ−
ブロモベンジルエステルスルオキシド Γ（５，６−トランス）−６−（１−ヒドロキシエ
チル）−３−イソプロピリデンパンテテイニル
−７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・
０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｏ，
ｐ−ジニトロベンジルエステルスルオキシド Γ（５，６−シス）−６−（１−ヒドロキシエチ
ル）−３−イソプロピリデンパンテテイニル−
７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・０〕
ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｐ−メト
キシベンジルエステルスルオキシド 等を挙げることができる。 本発明に例えば、式（）の化合物の出発原料
となる抗生物質OA−6129群化合物は、該抗生物
質OA−6129生産性微生物を栄養培地中で培養
し、その培養物から、β−ラクタマーゼ阻害活性
を有する上記の抗生物質OA−6129を採取するこ
とからなる方法により製造することができ、より
具体的には、抗生物質OA−6129群化合物の生産
菌として検索されたストレプトミセスSPOA−
6129（FERM BP−11）菌、例えば、該菌株の胞
子または菌系を栄養源含有倍地に接種して、好気
的に増殖させることによつて生産される。 かくして、培養物中に蓄積された式（）で示
される抗生物質OA−6129群の化合物は水溶性で
あり、主として菌体外に存在するので、有利に
は、培養後、過、遠心分離、抽出などのそれ自
体公知の分離法によつて菌体を除去し、その
液、上澄液、抽出液などより回収される。 上記の如くして得られた抗生物質OA−6129A、
B1及びB2は、それ自体公知のエステル化法によ
つて次式 式中、R1及びR4は前記の意味を有する。 で示される２−位カルボン酸のエステルに誘導す
ることができ、例えば、該抗生物質又はその塩を
置換もしくは未置換のベンジルハライド（例えば
ベンジルクロライド、ベンジルブロマイド、ｐ−
ニトロベンジルクロライド、ｐ−ニトロベンジル
ブロマイド、ｐ−メトキシベンジルブロマイド、
２，４−ジニトロベンジルクロライド、ｐ−ブロ
モベンジルブロマイドなど）と反応せしめること
によりエステルに変えることができる。本エステ
ル化反応は、一般に不活性液体媒体中で行なうの
が好ましく、使用し得る不活性液体媒体として
は、例えば、クロロホルム、塩化メチレンなどの
ハロゲン化炭化水素類；ジメチルホルムアミド、
ヘキサメチルホスホルアミドなどのアミド類；ジ
メチルスルホキシド；テトラヒドロフラン、ジオ
キサンなどのエーテル類；酢酸エチル、酢酸ｎ−
ブチル、などのエステル類；アセトン、メチルエ
チルケトンなどのケトン類などが挙げられ、これ
ら液体媒体はそれぞれ単独で使用してもよく、或
いは必要に応じて２種以上混合して用いることも
できる。 反応温度は臨界的ではなく、使用するハライド
の種類、液体媒体の種類等に応じて広範に変える
ことができ、抗生物質OA−6129A、B1及びB2が
著るしく分解しない温度範囲内に任意に選ぶこと
ができるが、一般に60℃以下の温度、好ましは０
〜40℃の範囲、さらに好ましくは５℃〜室温の範
囲が有利である。 また、上記反応に際しては、必要に応じて、ト
リエチルアミン、ピリジン、などの反応助剤を添
加してもよい。 かかる条件下に反応は大体１〜24時間以内、通
常３〜12時間で終らせることができる。 なお、上記ハライドと反応せしめられる抗性物
質OA−6129A、B1又はB2は必ずしも単離された
ものを使用する必要はなく、前記抗生物質OA−
6129生産菌の培養物又はその培養物から菌体を分
離した後の培養液を使用することができ、或いは
部分的に精製した粗製の抗生物質OA−6129A、
B1又はB2を使用することもできる。かかる部分
精製物としては、後述の参考例に示す、該培養液
の活性吸着溶出濃縮物；培養液のダイヤイオン
HP−20（三菱化成工業(株)製）吸着溶出濃縮物；
該濃縮物をQAE−セフアデツクス（フアルマシ
ア社製）に吸着させグラジエント食塩濃度の燐酸
緩衝液で溶出し、活性炭で脱塩した濃縮物；低温
でのPH3.5におけるブタノール抽出濃縮物などが
挙げられる。 かくして得られる抗生物質OA−6129A、B1又
はB2のエステルは、抗生物質の分野におけるそ
れ自体公知の種々の方法により、反応混合物から
分離することができ、或いは精製することができ
る。例えば、反応終了後、先ず副生物などの水溶
性不純分を除去するため、反応液を水性媒体中に
おける。その際PHをほぼ中性に保つため該水性媒
体としては中性緩衝液を使用するのが望ましい。
次いで、この混合液を例えば、酢酸エチル、塩化
メチレン、クロロホルムなどの水と実質的に混和
しない非極性有機溶媒で処理して抗生物質OA−
6129A、B1又はB2のエステルを該有機溶媒層に
抽出する。この抽出に際し、例えば食塩、硫酸ア
ンモニウムなどの如き塩類を加え、塩析効果によ
り抽出効率を高めるようにすることがでる。 該溶媒層は、脱水芒硝などで乾燥した後、それ
自体公知の方法に従い、例えばバイオ・ビーズＳ
−X3（バイオラツド社製）、セフアデツクスLH−
20（フアルマシヤ社製）などによるゲル過；シ
リカゲル、アルミナ、フロリジル（フロリジン社
製）などを担体とする吸着クロマトグラフイーな
どを適宜組合せ且つ必要に応じて反復使用して、
エステルを単離することができる。 以上の如くして得られた抗生物質OA−6129A、
B1又はB2の置換もしくは未置換ベンジルエステ
ルは、必要により３−位の炭素原子に結合してい
るパントイル基のα−及びγ−位の水酸基を同時
にエーテル化した次式 式中、R1及びR4は前記の意味を有する、 で代表される環状ケタール又は環状アセタール誘
導体に変えることができる。そのケタール又はア
セタール化は、それ自体公知の方法によつて行な
うことができる。 例えば、抗生物質OA−6129A、B1又はB2のエ
ステルをケトン又はアルデヒド誘導体と反応せし
めることにより、それらの環状ケタール又は環状
アセタール誘導体に変えることができる。この反
応は、一般に反応試薬を溶媒として使用し行うの
が好ましく、使用し得る反応試薬としては、例え
ばアセトン、２，２−ジメトキシプロパン、ホル
ムアルデヒド、２，２−ジメトキシエタン、アセ
トアルデヒド、ベンズアルデヒド、プロピオンア
ルデヒド、アセトフエノン、ジフエニムルトン、
シクロヘキサノン、ジベンジルケトン、１，１−
ジフエニルアセトンなどが挙げられ、これらの反
応試薬はそれぞれ単独で使用してもよく、或いは
必要に応じて２種以上を混合して用いることもで
きる。 また、必要により反応試薬に対する抗生物質
OA−6129A、B1又はB2のエステルの溶解性を考
慮して、不活性溶媒を混合させることもできる。 反応温度は臨界的ではなく、使用する液体媒体
の種類等に応じて広範に変えることができ、抗生
物質OA−6129のエステルが著るしく分解しない
温度範囲内で任意に選ぶことができるが、一般に
60℃以下の温度、好ましくは−40〜40℃の範囲、
さらに好ましくは０℃〜室温の範囲が有利であ
る。 また、上記反応に際しては、必要に応じて、無
水ｐ−トルエンスルホン酸、ボロントルフロライ
ドエーテラート塩化亜鉛などの反応促進剤を添加
する。 かかる条件下に反応は大体30分〜12時間以内、
通常２〜５時間で終らせることができる。 かくして得られる該エステルの環状ケタール又
は環状アセタール誘導体は、それ自体公知の分
離、精製方法に準じて反応混合物から単離するこ
とができる。例えば、反応終了後、先ず過剰の反
応促進剤等を不活化するためにアミン類で処理し
た後、処理液を例えば、酢酸エチル、クロロホル
ムなどの水と実質的に混和しない非極性有機溶媒
中にあける。該混合液から副生物などの水溶性不
純分を除去するため、水性媒体で洗浄する。 その際、水性媒体としては中性緩衝液を使用す
るのが望ましい。次いで、該有機溶媒層を濃縮乾
固した後、それ自体公知の方法に従い、例えば、
シリカゲル、バイオビーズ（バイオラド社製）、
セフアデツクスLH−20（フアルマシヤ社製）な
どを担体とするクロマトグラフイーなどを適宜組
合せ且つ必要に応じて反復使用して、所望の環状
ケタール又は環状アセタール誘導体を単離するこ
とができる。 かくして得られる式（）で示されるエステル
又はそれらのパントイル基のα−及びγ−位の水
酸基を同時にエーテル化した式（）で示される
化合物で代表される環状ケタール又は環状アセタ
ール誘導体のＳ−酸化は、それ自体公知の方法、
例えばペニシリン系、セフアロスポリン系などの
硫黄含有β−ラクタム系抗生物質のＳ−酸化に際
して屡々利用される方法に従つて行なうことがで
きる。 例えば、前記式（）又は（）の化合物は、
カルバペネム骨格に実質的に作用しない温和な酸
化剤、即ち、過安息香酸、オゾン、フエニルジク
ロロ・イオダイド、過酸化水素、二酸化セレン、
又はメタ過ヨード酸ナトリウムなどと反応せしめ
られる。かかる温和な酸化剤としては有機過酸が
好適であり、特に過安息香酸及びｍ−クロロ過安
息香酸が挙げられ、最も好ましくはｍ−クロロ過
安息香酸のような置換過安息香酸が作用される。
該式（）又は式（）の化合物と酸化剤との反
応は、不活性溶媒、例えば塩化メチレン、クロロ
ホルム、四塩化炭素等の溶媒中で、室温またはそ
れ以下、好ましくは約−40℃〜約20℃程度の温和
な温度条件下に行なうのが有利である。該反応は
かかる条件下で通常３分間〜３時間の間に終了せ
しめることができる。 式（）又は式（）の化合物の酸化に使用さ
れる酸化剤の使用量は、酸化剤の種類や反応条件
等に応じて広範に変えることができるが、一般に
は、式（）又は式（）の化合物１モルに対し
て0.3〜1.8モル当量、好ましくは1.0〜1.3モル当
量の範囲内が有用である。 反応終了後、Ｓ−酸化生成物である前記式
（）の化合物は、それ自体公知の種々の方法に
従つて単離精製することができ、通常、カルバペ
ネム系抗生物質の単離精製に際して屡々利用さる
方法により反応液から単離することができる。例
えば、反応終了後の反応液から固形分を去し、
液にリン酸緩衝液の如き緩衝液を添加して、該
液のPHが酸性側に傾かないよう保持しながら、
該液を、例えば活性炭、アンバーライトXAD
−２（ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤ・イ
オンHP−20（三菱化成社製）などによる吸着と
メタノール／水、アセトン／水などによる溶出と
の組合せ；ダウエツクス1X2（ダウケミカル社
製）、ダウエツクス50X2（ダウケミカル社製）、
QAE−セフアデツクスＡ−25（フアルマシヤ社
製）などのイオン交換樹脂による吸着および溶
出；セフアデツクスＧ−10（フアルマシヤ社製）、
バイオゲル−P2（バイオ・ラツト社製）などによ
るゲル過；セルローズ、アビセルSF（アメリカ
ン・ビスコース社製）、DEAE−セルローズ ワ
ツトマンDE−32（ワツトマン社製）、DEAE−セ
フアデツクスＡ−25（フルマシヤ社製）、シリカゲ
ル、アルミナなどによるカラム法または薄層法の
クロマトグラフイー；アセトンなどの溶剤添加に
よる強制沈殿法；凍結乾燥法；などをそれぞれ単
独で或いは適宜組合せて、さらに必要に応じて反
復使用することにより、これら処理に付し、前記
式（）の化合物を単離することができる。 該化合物は、例えば前記の如く、公開特許公報
昭56−156281号記載の方法に準じて処理すること
により、所望の３−位側鎖が置換された有用カル
バペネム系抗生物に変換できることから、合成中
間体として有用である。 以下に、本発明を参考例及び実施例によつてさ
らに詳しく説明する。 参考例 １ 抗生物質OA−6129A、B1及びB2の発酵法によ
る製造 (A) 500ml容エルレンマイヤーフラスコに100mlの
下記組成の種母培地（Ｓ−１）を入れ、常法に
より、120℃で15分間殺菌した。一方、ストレ
プトミセス・エスビーOA−6129（Streptmyces
sp.OA−6129）菌株の胞子を充分着生させ、こ
の一白金耳を上記種母培地に接種し、28℃で48
時間ロータリーシエーカー（200rpm、振幅７
cm）で振とう培養した。この種母培養液200ml
を、下記組成の種母培地（SE−４）15を入
れた30容ジヤー・フアーメンターに接種し、
28℃、400rpmで撹拌及び7.5／min通気の条
件下に90時間通気撹拌培養を行つた。消泡剤と
してシリコンKM−75〔信越化学(株)製〕を0.07
％使用した。 (B) 上記(A)で得られた24時間培養後の種母培養液
２を下記組成の生産培地（GM−１）100
を入れた200容醗酵タンクに接種し、28℃、
200rpmで撹拌及び50／min通気の条件下に
90時間通気撹拌培養を行つた。消泡剤としてシ
リコンKM−75〔前出〕を0.07％使用した。 経時的に培養液をサンプリングし、遠心分離
した上澄液についての抗菌力の測定を行つた。 各時間における測定結果は、下表に示す通り
であつた。 培養時間（時間） 抗菌力価（μｇ／ml） 48 2.6 72 11.5 90 24.0 種母培地（Ｓ−１）の組成： ミート 1.5％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキストラクト 0.5 〃 ポテトスターチ 2.0 〃 CaCO3 0.2 〃 PH（殺菌前） 7.0 種母培地（SE−４）の組成： 牛肉エキストラクト 0.3％（Ｗ／Ｖ） トリプトン 0.5 〃 グリコース 0.1 〃 溶性でんぷん 2.4（Ｗ／Ｖ） 酵母エキストラクト 0.5 〃 CaCO3 0.4 〃 ミート 0.5 〃 PH（殺菌前） 7.5 生産培地（GM−１）の組成： グリセリン 8.0％（Ｗ／Ｖ） 魚 粉 1.0 〃 ミート 3.0 〃 CaCO3 0.3 〃 K2HPO4 0.2 〃 MgSO4 0.2 〃 NaOHでPHを7.2に調整 別にPH5.5の0.01Mリン酸緩衝液中に溶解し、
且つオートクレーブで１Kg／cm2Ｇ、５分間殺菌
したビタミンB12を0.0005％（Ｗ／Ｖ）添加。 (C) 上記(B)で得られた90時間培養後の醗酵液100
に５％（Ｗ／Ｖ）量のトプコパーライトNo.34
〔東興パーライト(株)製〕を添加し、バスケツト
型遠心分離機で菌体を分離し、90の培養液
を得た。 これをダイヤイオンHP−20〔三菱化成(株)製〕
充填カラム（10×100cm）に吸着させ、蒸留水
５で洗浄後、30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水で溶
出した。 １区分を１とし、その溶出液を分画した。
バイオアツセイ活性画分８から画分15まで合計
８の溶出液を集め、これをダイヤイオン
PA306S〔三菱化成(株)製〕充填カラム（８×60
cm）に吸着させ、蒸留水１で洗浄後、3.0％
食塩水で溶出した。500mlずつ溶出液を分画し、
バイオアツセイ活性画分７から画分16までの合
計５の溶出液を集めた。この溶出液には、抗
生物質OA−6129A、B1及びB2が含まれてい
た。該溶出液6.0に300ｇの食塩を加え、ダイ
ヤイオンHP−20充填カラム（６×150cm）に
吸着させ、蒸留水500mlで洗浄後、濃度が０％
から40％まで直線的に増加するアセトン水合計
4.0で溶出した。 １区分を17mlとし、その溶出液を分画した。
バイオアツセイ活性画分20から画分130までの
約1.8の溶出液には主に抗生物質OA−
6129B1、B2と、若干の抗生物質OA−6129Aが
含まれた。バイオアツセイ活性画分131から画
分170までの約700mlの溶出液には抗生物質OA
−6129Aが含まれた。 上記の２区分をそれぞれ凍結乾燥し、茶褐色
の粉末を得た。 〔抗生物質OA−6129Aの精製〕 抗生物質OA−6129Aを主に含む溶出液を凍結
乾燥することによつて得られた茶褐色粉末を少量
の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２（バイオラ
ツド社製）充填カラム（８×100cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分
1.0を集めた。この活性画分を予め、0.01Mリ
ン酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフア
デツクスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム
（４×40cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄
後、濃度が０％から４％まで直線的に増加する食
塩水（合計3.0）で溶出を行つた。溶出液を15
mlずつ分画し、バイオアツセイを行い、画分51か
ら画分70まで、合計300mlの活性画分を得た。 この画分を凍結乾燥し、黄褐色の粉末を得た。 この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食塩
を加え、ダイヤイオンHP−20AG〔三菱化成業(株)
製〕充填カラム（２×50cm）に吸着させ、５％食
塩水50mlで洗浄後、蒸留水100mlで洗浄した。濃
度が０％から30％まで直線的に増加するアセトン
水（合計1.0）で溶出し、１画分を10mlとし、
その溶出液を分画した。バイオアツセイにより、
活性画分35から画分45までの合計110mlを集め、
これを凍結乾燥すると黄褐色の粉末52mgが得られ
た。 抗生物質OA−6129Aの粗粉末52mgを、少量の
蒸留水に溶解し、セフアデツクスＧ−10（フアル
マシア社製）充填カラム（２×80cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分30
mlを集めた。この活性画分を予め、0.01Mリン酸
緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデツ
クスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム（２
×30cm）に吸着させ、上記緩衝液50mlで洗浄後、
濃度０％から５％まで直線的に増加する食塩水
（合計800ml）で溶出を行い、溶出液を５mlずつ分
画した。バイオアツセイにより、活性画分36から
画分40までの合計25mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔三菱化成(株)製〕充填カラム（２×40
cm）に吸着させ、蒸留水50mlで洗浄後、濃度０％
から30％まで直線的に増加するアセトン水（合計
800）で溶出し、１画分を５mlとし、その溶出
液を分画した。 バイオアツセイにより活性画分105から画分117
の合計65mlを集めた。 これを凍結乾燥することにより淡黄色粉末21mg
を得た。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を有した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕24 D：11.6゜（ｃ＝1.0、0.01Mリ
ン酸緩衝液、PH8.4） 但し、紫外部吸収においてλnax300nmのεを
5600とした時の値である。 (3) 分子式 理論分子式 C20H30N3O7SNa（M.W.＝479） (4) 紫外部吸収スペクトラム λ0.01Mリン酸緩衝液（pH8.4） max nm（ε）：300（5600） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ーク νKBr naxcm-1： 1750（β−ラクタム）、1660（アミド）、1600（カル
ボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O）（内
部基準：DSS） δ（ppm） 0.89（3H，ｓ，【式】）、0.92（3H， ｓ，【式】）、1.00（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz， CH2−ＣH3 ）、1.60〜2.00（2H，ｍ，ＣH2 −
CH3）、 2.48（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−ＣH2 −
CO） 2.80〜3.65（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH2 −ＣH2 −Ｎ，Ｎ−ＣH2 −CH2−CO，Ｃ
−ＣH2 ，OH） 3.95（2H，ｍ，Ｃ−５Ｈ，【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒 アセトニトリル：水（８：２） 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオートグラフイー Rf値 0.53 (8) 呈色反応 ニンヒドリンに対する反応：陰性 エールリツヒ試薬に対する反応：陽性 (9) 元素分析、融点 吸湿性のため測定不能 〔抗生物質OA−6129B1及びB2精製〕 抗生物質OA−6129B1及びB2を主に含む溶出液
を、凍結乾燥することによつて得られた茶褐色の
粉末を、少量の蒸留水に溶解し、抗生物質OA−
6129Aの粗粉末と同様にバイオゲルＰ−２、
QAE−セフアデツクスＡ−25次いで、ダイヤイ
オンHP−20AG充填カラム処理し、バイオアツ
セイによる初出活性画分と、後出活性画分の２区
分を得た。前者活性区分には抗生物質OA−
6129B1が後者活性区分には抗生物質OA−6129B2
が含まれていた。両区分をそれぞれ凍結乾燥する
ことによりOA−6129B1の黄褐色粉末が840mg、
抗生物質OA−6129B2の黄褐色粉末が470mg得ら
れた。 〔抗生物質OA−6129B1の精製〕 抗生物質OA−6129B1の粗粉末840mgを、少量
の蒸留水に溶解し、セフアデツクスＧ−10（フア
ルマシア社製）充填カラム（２×80cm）に導き、
蒸留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分
35mlを集めた。この活性画分を予め、0.01Mリン
酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデ
ツクスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム
（２×30cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄
後、濃度が０％から５％まで直線的に増加する食
塩水（合計800ml）で溶出を行い、溶出液を５ml
ずつ分画した。300nmに紫外部極大吸収を有する
画分39から画分43までの合計25mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔三菱化成(株)製〕充填カラム（２×40
cm）に吸着させ、蒸留水にて展開を行い、溶出液
を５mlずつ分画した。 上記と同様に300nmの紫外部極大吸収を調べる
ことにより画分51から画分70の合計100を集めた。
これを凍結乾燥することにより、淡黄色粉末21mg
を得た。 この淡黄色粉末21mgを少量の蒸留水に溶解し、
活性炭素〔和光純薬工業(株)製〕充填カラム（1.5
×７cm）に吸着させ、蒸留水20mlで洗浄後、濃度
が０％から50％まで直線的に増加するイソプロピ
ルアルコール水（合計200ml）で溶出を行い、溶
出液を２mlずつ分画した。 300nmに紫外部極大吸収を有する画分18から画
分32までの合計30mlを集め、これを凍結乾燥する
と、淡黄色粉末８mgが得られた。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を示した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕24 D：24.2゜（ｃ＝0.5、H2O中） (3) 分子式 C20H30N3O8SNa（M.W.495） (4) 紫外部吸収スペクトル λH2O naxnm（ε）＝300（6400） (5) 赤外部吸収スペクトル νKBr naxcm-1：1750（β−ラクタム）、1650（アミ
ド）、1590（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O、内部
基準DSS） δ：0.86（3H，ｓ，【式】） 0.89（3H，ｓ，【式】） 1.33（3H，ｄ，Ｊ＝6.0Hz，【式】） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz、NH−CH2−ＣH2
−CO） 2.75〜3.70（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，
Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −NH，NH−ＣH2 −CH2−
CO，【式】） 3.93（1H，ｓ，【式】） 3.95〜4.40（2H，ｍ，Ｃ−5H，
【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒 アセトニトリル／0.1Mトリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン−塩酸緩衝液（PH7.5）／0.1M
エチレンジアミン（PH7.5）＝
120：30：１ 検出方法 Comamonas terigena B996によ
るバイオオートグラフイー Rf値 0.17 (8) 高圧紙電気泳動 PH8.6のベロナール緩衝液、東洋紙、No.51を
用い1500V、30分泳動した。 Rm値0.67（Rm値はPS−５ナトリウム塩の移動
度を1.0としたものである） (9) 高速液体クロマトグラフイー 充てん剤；マイクロボンダパツクC18 カラム；7.8mm（内径）×30cm （日本ウオーターズリミテツド） 移動相；３％アセトニトリルを含む0.01モルリ
ン酸二アンモニウム緩衝液（PH7.5） 流 量；1.5ml／min 検出方法；紫外部301nm 上記の条件下で保持時間13.9分である。 〔抗生物質OA−6129B2の精製〕 抗生物質OA−6129B2の粗粉末470mgを前記抗
生物質OA−6129B1の粗粉末と同様に、セフアデ
ツクスＧ−10、QAE−セフアデツクスＡ−25、
ダイヤイオンHP−20AG次いで、活性炭充填カ
ラムで処理し、淡黄色粉末23mgを得た。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を示した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕24 D：14.7゜（ｃ＝1.0、0.01Mリ
ン酸緩衝液、PH8.4） (3) 分子式 C20H30N3O8SNa（M.W.495） (4) 紫外部吸収スペクトラム λ0.01Mリン酸緩衝液（pH8.4） maxnm（ε）＝300
（5400） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ーク νKBr naxcm-1：1760（β−ラクタム）、1660（アミ
ド）、1600（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O、内部
基準DSS） δ：0.87（3H，ｓ，【式】） 0.92（3H，ｓ，【式】） 1.28（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，【式】） 2.45（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz、NH−CH2−ＣH2
−CO） 2.75〜3.60（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，
Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −NH，NH−ＣH2 −CH2−
CO，【式】） 3.94（1H，ｓ，【式】） 3.95〜4.35（2H，ｍ，Ｃ−5H，
【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒 アセトニトリル／0.1Mトリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン−塩酸緩衝液（pH7.5）／0.1M
エチレンジアミン水溶液
（pH7.5）＝120／30／１ 検出方法 Comamonas terigena B996によ
るバイオオートグラフイー Rf値 0.17 (8) 高圧紙電気泳動 pH8.6のベロナール緩衝液、東洋紙No.51を用
い1500V、30分泳動した。 Rm値0.67（Rm値はPS−５ナトリウム塩の移動
度を1.0としたものである。 (9) 高速液体クロマトグラフイー 充てん剤：マイクロボンダパツクC18 カラム：7.8mm（内径）×30cm （日本ウオーターズリミテツド） 移動相：３％アセトニトリルを含む0.01モルリ
ン酸二アンモニウム緩衝液（pH7.5） 流 量：1.5ml／min 検出方法：紫外部301nm 上記の条件下で、保持時間22.5分である。 参考例 ２ 抗生物質OA−6129Aのベンジルエステルの製
造 抗生物質OA−6129Aナトリウム塩44.6mgをジ
メチルホルムアミド8.0mlに溶解し、氷冷下、ト
リエチルアミン0.25mlを加え、撹拌しながらベン
ジルブロマイド0.18mlを加えた。同温度で30分反
応させた後、室温で３時間反応させた。 反応液を100mlの酢酸エチルに注ぎ、食塩飽和
の0.01Mリン酸緩衝液（pH8.4）20mlで洗浄後、
水層を更にメチレンクロライド100mlで再抽出し
た。抽出液を合わせ、硫酸ナトリウム（無水）で
脱水後、減圧留去した。残渣を少量のベンゼンに
溶解し、バイオビーズSX−３カラムに吸着させ、
ベンゼンで溶出し、ベンゼン／アセトン（１／
１）の混合溶媒展開のシリカゲルTLCにて、Rf
値0.39にUV吸収を示す区分を集め、減圧乾固し
た。 この残渣を少量のメチレンクロライドに溶解
し、ベンゼン／アセトン（２／１）にて充填した
シリカゲル12ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／
アセトン（２／１）、（１／１）及び（１／３）混
合溶媒並びにアセトンで順次展開し、アセトンで
溶出する区分を集めて、減圧乾固すると、標題化
合物が21.4mg得られた。 この抗生物質OA−6129Aのベンジルエステル
は次の物理化学特性を示した。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：52.4゜（ｃ＝0.5、CH2Cl2） (2) 紫外部吸収スペクトラム λCH2Cl2 naxnm（ε）：318（7400） (3) 赤外部吸収スペクトラムの主要ピーク νCH2Cl2 naxcm-1：1772（β−ラクタム）、1700（エ
ステ
ル）、1665（アミド） (4) 核磁気共鳴スペクトラム（内部基準：TMS） (イ) CD2Cl2を溶媒としたとき δ（ppm）： 0.88（3H，ｓ，【式】）、0.97（3H， ｓ，【式】）、1.03（3H，ｔ＝Ｊ＝7.5Hz， CH2−ＣH3 ）、1.60〜2.10（3H，ｍ，ＣH2 −CH3，
OH）、2.39（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−Ｃ
H2−CO）、2.85〜3.67（12H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−
6H，Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −Ｎ，Ｎ−ＣH2 −CH2−
CO，Ｃ−ＣH2 −OH，OH又はNH）、3.93（2H，
ｍ，Ｃ−5H，【式】）、4.17（1H，br， NH又はOH）、5.17（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz、ＣＨ
Ｈ−Ar）、5.32（1H，ｄ，Ｊ＝130Hz，CHＨ−
Ar）、6.73（1H，brNH）、7.35（5Hs，ArＨ） (ロ) CD2Cl2＋D2Oを溶媒としたとき δ（ppm）： 0.88（3H，ｓ，【式】） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.02（3H，ｔ＝Ｊ＝7.5Hz，CH2−ＣH3 ） 1.55〜2.00（2H，ｍ，ＣH2 −CH3） 2.39（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−ＣH2 −
CO） 2.80〜3.67（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH2 −ＣH2 −Ｎ，Ｎ−ＣH2 −CH2−CO，Ｃ
−ＣH2 −OH） 3.93（1H，dt，Ｊ＝3.0Hz，Ｊ＝90HzＣ−5H） 3.93（1H，ｓ，【式】） 5.13（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz，ＣＨＨ−Ar） 5.28（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz，CHＨ−Ar） 7.35（5H，ｓ，ArH） MS（ｍ／ｚ）：455（【式】）、 418、 329、 本エステルの加水分解（6N塩酸、115℃、16時
間）生成物中には、システアミン、β−アラニン
が確認された。 以上の理化学的性質から抗生物質OA−6129A
の構造は であり、５，６−トランス立体配置を有すると考
えられる。 参考例 ３ 抗生物質OA−6129Aのｐ−ニトロベンジルエ
ステルの製法 抗生物質OA−6129A63.5mgをジメチルホルム
アミド9.0mlに溶解し、氷冷下トリエチルアミン
0.2mlを加え撹拌しながら、ｐ−ニトロベンジル
ブロマイド285mgを含むジメチルホルムアミド溶
液1.5mlを加え、同温度で30分反応させた後、室
温で３時間反応させた。 反応液を100mlの酢酸エチルに注ぎ、食塩飽和
の0.01Mリン酸緩衝液（pH8.4）20mlで洗浄後、
水層を更にメチレンクロライド100mlで再抽出し
た。抽出液を合わせ、硫酸ナトリウム（無水）で
脱水後減圧留去した。 この残渣を少量のメチレンクロライドに溶解
し、ベンゼン／アセトン（１／１）にて充填した
シリカゲル12ｇのカラムに吸着させベンゼン／ア
セトン（１／１）、（１／３）の混合溶媒並びにア
セトンで順次展開した。アセトン溶出区分でベン
ゼン／アセトン（１／１）の混合溶媒展開のシリ
カゲルTLCにて、Rf値0.33にUV吸収を示す区分
を集め減圧乾固すると標題化合物36.3mgが得られ
た。 この抗生物質OA−6129Aのｐ−ニトロベンジ
ルエステルは次のような諸物理化学特性を示し
た。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：37.5゜（ｃ＝1.0、CH2Cl2） (2) 紫外部吸収スペクトラム λCH2Cl2 naxnm（ε）：319（8400）、270（10500） (3) 赤外部吸収スペクトラム νCH2Cl2 naxcm-1：1770（β−ラクタム）、1700（エ
ステ
ル）、1665（アミド） (4) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：CD2Cl2；
内部基準：TMS） δ（ppm）： 0.87（3H，ｓ，【式】） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.04（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，CH2−ＣH3 ） 1.5〜2.2（3H，ｍ，ＣH2 −CH3，OH） 2.40（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−ＣH2 −
CO） 2.8〜3.7（12H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ−
ＣH2 −ＣH2 −Ｎ，Ｎ−ＣH2 −CH2−CO，Ｃ−
ＣH2 −OH，OH又はNH） 3.94（2H，ｍ，Ｃ−5H，【式】） 4.17（1H，br，NH又はOH） 5.19（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，ＣＨ・Ｈ−Ar） 5.45（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，CH・Ｈ−Ar） 6.74（1H，br，NH） 7.63（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 8.18（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 参考例 ４ 抗生物質OA−6129A・ｐ−ニトロベンジルエ
ステルのイソプロピリデン化法 抗生物質OA−6129A・ｐ−ニトロベンジルエ
ステル110mgをアセトン10mlに溶解し、２，２−
ジメトキシプロパン0.5ml及び無水硫酸ナトリウ
ム20mgを加え、室温下撹拌しながら無水ｐ−トル
エンスルホン酸40mgを加え、同温度で３時間反応
させた。 反応液に、トリエチルアミン0.1mlを滴下し、
５分間撹拌後、酢酸エチル50ml中に注ぎ、0.1M
リン酸緩衝液（pH8.4）20mlで洗浄後、さらに、
同緩衝液（pH＝6.8）20mlで洗浄した。 抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧留
去した。残渣を少量の塩化メチレンに溶解し、ベ
ンゼン／アセトン（５／１）にて充填したシリカ
ゲル５ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／アセト
ン（５／１）、（３／１）（１／１）、（２／１）、
（１／５）の混合溶媒で順次展開した。 ベンゼン／アセトン（１／１）で溶出する区分
を集めて濃縮すると、ベンゼン／アセトン（１／
１）の混合溶媒展開のシリカゲルTLCにてRf値
0.56に、UV吸収を示す標題化合物が72.0mgが得
られた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：34.9゜（ｃ＝1.0、CHCl3） (2) 紫外部吸収スペクトラム λCHCl3 naxnm（ε）：319（6200）、270（9800） (3) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒CDCl3、内部
基準TMS） δ（ppm） 0.97（3H，ｓ，【式】） 1.03（3H，ｓ，【式】） 1.07（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz−CH2−ＣH3 ） 1.40（3H，ｓ，【式】） 1.43（3H，ｓ，【式】） 1.7〜2.0（2H，ｍ，−ＣH2 −CH3） 2.43（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−ＣH2 −
CO） 2.5〜3.8（11H，C4−H2 ，C5−Ｈ，−Ｓ−ＣH2
−CH2−Ｎ，Ｎ−ＣH2 −ＣH2 −CO，Ｃ−ＣH2
−Ｏ−） 3.97（1H，dt，Ｊ＝３Hz，９Hz，C5−Ｈ） 4.03（1H，ｓ，【式】） 5.20（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，ＣＨ・Ｈ−Ar） 5.49（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，CH・Ｈ−Ar） 6.52（1H，br，ＮＨ） 6.93（1H，br，ＮＨ） 7.58（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 8.15（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） (4) 赤外線吸収スペクトラム（溶媒CHCl3） 波長（cm-1） 1770（β−ラクタム）、1660（アミド） 参考例 ５ 抗生物質OA−6129B2のｐ−ニトロベンジルエ
ステルの製造 抗生物質OA−6129B2ナトリウム塩190mgをジ
メチルホルムアミド6.0mlに溶解し、氷冷下トリ
エチルアミン0.2mlを加え、撹拌しながらｐ−ニ
トロベンジルブロマイド210mgを含むジメチルホ
ルムアミド溶液を加えた。同温で５分間反応させ
た後室温で３時間反応させた。反応液を100mlの
メチレンクロライドに注ぎ、食塩飽和の0.1Mリ
ン酸緩衝液（pH6.8）20mlで２回洗浄した。更に
水層はメチレンクロライド100mlで２回抽出を行
つた。抽出液を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱
水後減圧留去した。 残渣を少量のメチレンクロライドに溶解し、ベ
ンゼン／アセトン（１／１）にて充填したシリカ
ゲル６ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／アセト
ン（１／１）、（１／２）（１／３）、（１／５）の
混合溶媒並びにアセトンで順次展開した。ベンゼ
ン／アセトン（１／５）からアセトンにて溶出
し、ベンゼン／アセトン（１／４）展開のシリカ
ゲルTLCにてRf値0.15にUV吸収を示す表題化合
物が85mgが得られた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：41.4゜（ｃ＝1.0、ジオキサン） (2) IRスペクトル νKBr naxcm-1：1760（β−ラクタム）、1695（エステ
ル）、1640（アミド） (3) UVスペクトル λCH2Cl2 naxnm（ε）：320（10500）、271（10500） (4) NMRスペクトル（Pyridine−d5） 但しδ1−5ppmまでを記す。 δ（ppm） 1.30（6H，ｓ，ＣH3 −Ｃ−ＣH3 ） 1.55（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，ＣH3 −CH） 2.70（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH2−ＣH2 −
CO） 2.90〜4.05（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH2 −ＣH2 −NH，NH−ＣH2 −CH2−CO，
【式】） 4.10〜4.50（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 4.52（1H，ｓ，【式】） (5) Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ：523
【式】 参考例 ６ 抗生物質OA−6129B2・ｐ−ニトロベンジルエ
ステルのイソプロピリデン化法 抗生物質OA−6129B2・ｐ−ニトロベンジルエ
ステル20mgをアセトン5.0ml、２，２−ジメトキ
シプロパン2.0ml、硫酸ナトリウム（無水）100mg
の混合溶媒に溶解させ、室温で撹拌しながら、ｐ
−トルエンスルホン酸0.5mgを加える。30分間反
応させた後、反応液にトリエチルアミン6μを
加え、５分間撹拌した。反応液を減圧留去し、残
渣に30mlのメチレンクロライドを加え、0.1Mリ
ン酸緩衝液（pH8.4）20mlで洗浄後、抽出層を硫
酸ナトリウム（無水）で脱水し、減圧留去した。
残渣を少量のメチレンクロライドに溶解し、ベン
ゼン／アセトン（２／１）で充填したシリカゲル
２ｇのカラムに吸着させた。ベンゼン／アセトン
（２／１）、（１／１）（１／２）の混合溶媒で順次
展開し、ベンゼン／アセトン（１／１）から
（１／２）で溶出する区分を集めて、濃縮すると、
ベンゼン／アセトン（１／４）混合溶媒展開のシ
リカゲルTLCにて、Rf値（0.64）を示す標題の
イソプロピリデン化物6.6mg得られた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：55.1゜（ｃ＝0.5、CH2Cl2） (2) IRスペクトル νCHCl3 naxcm-1：1778（β−ラクタム）、1700（エス
テ
ル）、1668（アミド） (3) UVスペクトル λCH2Cl2 naxnm（ε）：319（9700）、270（11900） (4) NMRスペクトル（CDCl3） δ（ppm） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.02（3H，ｓ，【式】） 1.37（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，ＣH3 −CH） 1.40（3H，ｓ，【式】） 1.43（3H，ｓ，【式】） 2.41（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH2−ＣH2 −
CO） 2.75〜3.80（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH2 −ＣH2 −NH，NH−ＣH2 −CH2−CO，
Ｏ−CH2−Ｃ） 4.02（1H，ｓ，【式】） 4.00〜4.30（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 5.16（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，ＣＨＨ−Ar） 5.44（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，CHＨ−Ar） 6.56（1H，br，NH） 6.92（1H，br，NH） 7.55（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ） 8.12（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ） (5) Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ：563
【式】 実施例 １ 抗生物質OA−6129A ｐ−ニトロベンジルエス
テル Ｓ−オキシドの製法 OA−6129A・ｐ−ニトロベンジルエステル26
mg（0.044mmol）を塩化メチレン５mlに溶解後、
−35℃に冷却し、ｍ−クロロ過安息香酸11mg
（0.066mmol）を含む塩化メチレン溶液を滴下し、
同温度で30分間反応させた後反応液を塩化メチレ
ン100ml中に注ぎ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液
にて洗浄後ベンゼン／アセトン（１／１）にて充
填したシリカゲル10mlに吸着させ、ベンゼン／ア
セトン（１／３）、（１／５）にて溶出し、アセト
ン展開のシリカゲルTLCにてRf値0.14にUV吸収
を示す区分を減圧乾固すると表題化合物16.8mgが
得られた。 尚、この化合物はPS−５・ｐ−ニトロベンジ
ルエステル・Ｓ−オキシド体にＤ−パンテテイン
を反応させて得た（5R，6R）−６−エケル−３
−（Ｒ）−パンテテイニル−７−オキソ−１−アザ
ビシクロ〔３・２・０〕ヘプト−２−エン−２−
カルボン酸ｐ−ニトロベンジルエステルを前記と
同様に過酸処理して得られた化合物と理化学的性
状は一致した。 〔α〕24 D 11.0゜（ｃ＝1.0、CH2Cl2） UV λCH2Cl2 naxnm（ε）：310sh（7500）、270（12400
） IR νCH2Cl2 naxcm-1：1790（β−ラクタム）、1715（エ
ス
テル）、1670（アミド） NMR（CD2Cl2）δ： 0.88（3H，ｓ，【式】） 0.98（3H，ｓ，【式】） 1.05（3H，ｔ，Ｊ＝7.0Hz，CH2−CH3） 1.50〜2.00（3H，ｍ，ＣH2 −CH3，OH） 2.39（2H，ｔ，Ｊ＝6.0Hz，CO−ＣH2 −CH2−
NH） 2.95〜4.30（14H，ｍ，Ｃ−４H2 ，Ｃ−５Ｈ，
Ｃ−６Ｈ，Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −NH，CO−CH2−
ＣH2 −NH，Ｃ−ＣH2 −Ｏ，【式】 OH） 5.10〜5.60（2H，ｍ，CH2−Ar） 6.70（1H，ｍ，NH） 7.30（1H，ｍ，NH） 7.62（2H，ｍ，Ar・Ｈ） 8.20（2H，ｍ，Ar・Ｈ） MS （FD） ｍ／ｚ 631（Ｍ＋Na）、609（Ｍ＋１） 実施例 ２ イソプロピリデンOA−6129B2 ｐ−ニトロベ
ンジルエステル Ｓ−オキシドの製造 OA−6129B2・ｐ−ニトロベンジルエステル・
9′，11′−Ｏ−イソプロピリデン体110mgｒ
（1.170mmol）を塩化メチレン7.7mlに溶解後、−
30℃に冷却し、ｍ−クロロ過安息香酸42.9mgｒ
（0.187mmol）を含む塩化メチレン溶液を滴下し、
同温度で30分間反応させた後、反応液に、トリエ
チルアミン0.027ml（0.193mmol）を含む塩化メ
チレン溶液を同温度で滴下し、反応液を塩化メチ
レン20ml中に注ぎ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液
にて、洗浄し、さらに、リン酸緩衝液（pH6.80）
にて、洗浄し、有管層を無水硫酸ナトリウムにて
乾燥し、減圧濃縮した。この残渣をベンゼン／ア
セトン（２／１）で充填したシリカゲル５ｇｒに
吸着させ、ベンゼン／アセトン（１／１）、、
（１／３）、（１／10）にて溶出し、ベンゼン／ア
セトン（１／３）のシリカゲルTLCにて、Rf値
0.24にUV吸収（波長2537Å）を示す区分を減圧
濃縮し、乾固すると、表題化合物81.8mgｒ（収率
72.6％）が得られた。 理化学的性状 Γ旋光度 〔α〕23.5 D＋18.5゜（ｃ＝1.0、CHCl3） ΓUV λCHCl3 naxnm（ε）：314（7400）、268（12100） ΓIR νCHCl3 naxcm-1：1780（β−ラクタム）、1705（
エ
ステル）、1660（アミド） ΓNMR（CDCl3） δ（ppm） 0.97（3H，ｓ，【式】） 1.04（3H，ｓ，【式】） 1.37（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，CH3−CH−） 1.43（6H，ｍ，【式】） 2.41（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，CO−ＣH2 −CH2−
NH） 2.80〜3.80（11H，ｍ，Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −NH，
CO−CH2−ＣH2 −NH，Ｃ−4H2，Ｃ−６Ｈ，
Ｃ−CH2−Ｏ） 4.03（1H，ｓ，Ｏ−CH−CO） 4.00〜4.50（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 5.19（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，【式】） 5.46（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，【式】） 6.17（1H，ｍ，ＮＨ） 6.95（1H，ｍ，ＮＨ） 7.67（2H，ｍ，Ar・Ｈ） 8.17（2H，ｄ，Ar・Ｈ） ΓMS （FD） ｍ／ｚ 687（Ｍ＋Na）、665（Ｍ＋１）
詳しくは、下記式 式中、R1は水素原子又は水酸基を表わし、
R2及びR3は水素原子又は一緒になつてイソ
プロピリデン基 を表わし、R4は置換又は未置換のベンジル
基を表わす、 で示される化合物に関する。 下記式 で示される７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格
（カルバペネム骨格）を有する抗生物質（以下、
この骨格を有する抗生物質をカルバペネム系抗生
物質という）は、一般に高い抗菌力とβ−ラクタ
マーゼ阻害性を有しており、従来から、発酵法、
半合成法、全合成法により各種のカルバペネム系
抗生物質が製造されている〔例えば、本発明等が
提供したものに限定しても、PS−５（ジヤーナ
ル・オブ・アンテイビオテイクス、32巻（1979
年）、262〜286頁）、PS−６（公開特許公報昭54−
59295号）、PS−７（公開特許公報昭54−92983
号）、PS−５、PS−６及びPS−７等の３−位側
鎖の置換による新規カルバペネム抗生物質の製造
方法（公開特許公報昭56−156281号及び昭56−
161393号）等〕。 しかし、これ迄に提案されているカルバペネム
系抗生物質で発酵法により製造されている化合物
は、一般に生体内で不安定であるとして、それら
の改良が多角的に検討されている。本発明者等が
提案した前記公開特許公報昭56−156281号に記載
の発明も発酵法により製造される化合物の改良法
の範mm2に属するものであり、具体的には、式 式中、R1は水素原子、メチル基又は水酸基
を表わし、R2及びR3はそれぞれ水素原子、
アルキル基又はＮ−保護基を表わし、R4は
水素原子又はエステル残基を表わし、ｎは０
又は１である。 の化合物又はその塩を式 R5−SH 式中、R5は水素原子又は一価の有機基を表
わす、 のチオール化合物又はその反応性誘導体と反応せ
しめ、次式 式中、R1、R4及びR5は前記の意味を有する、 を示される３−位側鎖の置換誘導体の製造方法を
提供するものであり、さらに、これらの方法によ
つて製造される化合物は、生体内で安定化される
傾向が窺える。 ところが、ごく最近、本発明者らはストレプト
ミセス・SP OA−6129（FERM BP−11）が、こ
れまで発表されているカルバペネム系抗生物質と
３−位の置換基の種類においてタイプの異なる、
次式 式中、R1は前記の意味を有する、 で示される抗生物質OA−6129A、B1及びB2（以
下、「抗生物質OA−6129群」という。）を生産す
ることが判明し先に提案した（特願昭57−11010
号出願明細書参照）。 これらの抗生物質は、前述のPS−５等に比し、
抗菌活性は劣るが、発酵出産性が優れているた
め、半合成によるカルバペネム系抗生物質の開発
用原料として有用である。 本発明は、抗生物質OA−6129群の化合物もＳ
−酸化することにより上述の公開特許公報昭56−
156281号記載の発明と同様に３−位側鎖の置換誘
導体の製造に供することができることを確認して
完成した。 しかして、本発明により提供される前記式
（）の化合物は、カルバペネム骨格の３−位に
Ｓ−酸化されたパンテテイニル基を有し且つ６−
位にエチル基又は１−ヒドロキシエチル基を有し
ている点に構造的特徴を有する抗生物質のエステ
ル及び／又は、パントイル基の水酸基がイソプロ
ピリデン化された誘導体であり従来の文献に未載
の新規な抗生物質誘導体である。以下、これらの
抗生物質誘導体のうち、式（）のR1、R2、R3
及びR4が水素原子を表わす抗生物質の誘導体を
「抗生物質OA−6129A誘導体」と、R1が水酸基
を表わし、R2、R3及びR4が水素原子を表わす抗
生物質の誘導体のうち、５，６−シス立体配置を
有するものを「抗生物質OA−6129B1誘導体」
と、同様に５，６−トランス立体配置を有するも
のを「抗生物質OA−6129B2誘導体」と略称す
る。 これらの式（）で示される抗生物質誘導体
は、前述した如く、より高活性及び／又は生体内
で安定性が向上したカルバペネム系抗生物質の誘
導体の開発に有用であり、下記式 式中、R1及びR4は前記の意味を有する、 で示される３−位側鎖のパントイル基の水酸基を
必要により保護された化合物は、各種の有機溶媒
に対する溶解性が改善されることから、さらに、
その合成中間体として有用性が高いものである。 本明細書において用いる置換ベンジル基におけ
るベンゼン環上の置換基としては、例えば、メチ
ル、エチル等の低級アルキル基；メトキシ、エト
キシ等の低級アルコキシ基、塩素、フツ素などの
ハロゲン原子、ニトロ基、等が挙げられる。かか
る置換ベンジル基としては例えばｐ−ニトロベン
ジル基、ｐ−ブロモベンジル基、ｐ−メチルベン
ジル基、２，４−ジニトロベンジル基、ｐ−メト
キシベンジル基等が包含される。前記式（）に
おいて、R4によつて表わされる「置換もしくは
未置換ベンジル基」としては中でもベンジル基及
びｐ−ニトロベンジル基が好適である。しかし
て、本発明により提供される具体的な化合物とし
ては、 Γ６−エチル−３−パンテテイニル−７−オキソ
−１−アザビシクロ〔３・２・０〕ヘプト−２
−エン−２−カルボン酸 ｐ−ニトロベンジル
エステルスルオキシド Γ６−エチル−３−イソプロピリデンパンテテイ
ニル−７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・
２・０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸
ｐ−ニトロベンジルエステルスルオキシド Γ６−エチル−３−パンテテイニル−７−オキソ
−１−アザビシクロ〔３・２・０〕ヘプト−２
−エン−２−カルボン酸 ｏ，ｐ−ジニトロベ
ンジルスルオキシド Γ（５，６−トランス）−６−（１−ヒドロキシエ
チル−３−イソプロピリデンパンテテイニル−
７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・０〕
ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｐ−ニト
ロベンジルエステルスルオキシド Γ（５，６−シス）−６−（１−ヒドロキシエチ
ル）−３−イソプロピリデンパンテテイニル−
７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・０〕
ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｐ−ニト
ロベンジルエステルスルオキシド Γ（５，６−トランス）−６−（１−ヒドロキシエ
チル）−３−イソプロピリデンパンテテイニル
−７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・
０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｐ−
ブロモベンジルエステルスルオキシド Γ（５，６−トランス）−６−（１−ヒドロキシエ
チル）−３−イソプロピリデンパンテテイニル
−７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・
０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｏ，
ｐ−ジニトロベンジルエステルスルオキシド Γ（５，６−シス）−６−（１−ヒドロキシエチ
ル）−３−イソプロピリデンパンテテイニル−
７−オキソ−１−アザビシクロ〔３・２・０〕
ヘプト−２−エン−２−カルボン酸 ｐ−メト
キシベンジルエステルスルオキシド 等を挙げることができる。 本発明に例えば、式（）の化合物の出発原料
となる抗生物質OA−6129群化合物は、該抗生物
質OA−6129生産性微生物を栄養培地中で培養
し、その培養物から、β−ラクタマーゼ阻害活性
を有する上記の抗生物質OA−6129を採取するこ
とからなる方法により製造することができ、より
具体的には、抗生物質OA−6129群化合物の生産
菌として検索されたストレプトミセスSPOA−
6129（FERM BP−11）菌、例えば、該菌株の胞
子または菌系を栄養源含有倍地に接種して、好気
的に増殖させることによつて生産される。 かくして、培養物中に蓄積された式（）で示
される抗生物質OA−6129群の化合物は水溶性で
あり、主として菌体外に存在するので、有利に
は、培養後、過、遠心分離、抽出などのそれ自
体公知の分離法によつて菌体を除去し、その
液、上澄液、抽出液などより回収される。 上記の如くして得られた抗生物質OA−6129A、
B1及びB2は、それ自体公知のエステル化法によ
つて次式 式中、R1及びR4は前記の意味を有する。 で示される２−位カルボン酸のエステルに誘導す
ることができ、例えば、該抗生物質又はその塩を
置換もしくは未置換のベンジルハライド（例えば
ベンジルクロライド、ベンジルブロマイド、ｐ−
ニトロベンジルクロライド、ｐ−ニトロベンジル
ブロマイド、ｐ−メトキシベンジルブロマイド、
２，４−ジニトロベンジルクロライド、ｐ−ブロ
モベンジルブロマイドなど）と反応せしめること
によりエステルに変えることができる。本エステ
ル化反応は、一般に不活性液体媒体中で行なうの
が好ましく、使用し得る不活性液体媒体として
は、例えば、クロロホルム、塩化メチレンなどの
ハロゲン化炭化水素類；ジメチルホルムアミド、
ヘキサメチルホスホルアミドなどのアミド類；ジ
メチルスルホキシド；テトラヒドロフラン、ジオ
キサンなどのエーテル類；酢酸エチル、酢酸ｎ−
ブチル、などのエステル類；アセトン、メチルエ
チルケトンなどのケトン類などが挙げられ、これ
ら液体媒体はそれぞれ単独で使用してもよく、或
いは必要に応じて２種以上混合して用いることも
できる。 反応温度は臨界的ではなく、使用するハライド
の種類、液体媒体の種類等に応じて広範に変える
ことができ、抗生物質OA−6129A、B1及びB2が
著るしく分解しない温度範囲内に任意に選ぶこと
ができるが、一般に60℃以下の温度、好ましは０
〜40℃の範囲、さらに好ましくは５℃〜室温の範
囲が有利である。 また、上記反応に際しては、必要に応じて、ト
リエチルアミン、ピリジン、などの反応助剤を添
加してもよい。 かかる条件下に反応は大体１〜24時間以内、通
常３〜12時間で終らせることができる。 なお、上記ハライドと反応せしめられる抗性物
質OA−6129A、B1又はB2は必ずしも単離された
ものを使用する必要はなく、前記抗生物質OA−
6129生産菌の培養物又はその培養物から菌体を分
離した後の培養液を使用することができ、或いは
部分的に精製した粗製の抗生物質OA−6129A、
B1又はB2を使用することもできる。かかる部分
精製物としては、後述の参考例に示す、該培養液
の活性吸着溶出濃縮物；培養液のダイヤイオン
HP−20（三菱化成工業(株)製）吸着溶出濃縮物；
該濃縮物をQAE−セフアデツクス（フアルマシ
ア社製）に吸着させグラジエント食塩濃度の燐酸
緩衝液で溶出し、活性炭で脱塩した濃縮物；低温
でのPH3.5におけるブタノール抽出濃縮物などが
挙げられる。 かくして得られる抗生物質OA−6129A、B1又
はB2のエステルは、抗生物質の分野におけるそ
れ自体公知の種々の方法により、反応混合物から
分離することができ、或いは精製することができ
る。例えば、反応終了後、先ず副生物などの水溶
性不純分を除去するため、反応液を水性媒体中に
おける。その際PHをほぼ中性に保つため該水性媒
体としては中性緩衝液を使用するのが望ましい。
次いで、この混合液を例えば、酢酸エチル、塩化
メチレン、クロロホルムなどの水と実質的に混和
しない非極性有機溶媒で処理して抗生物質OA−
6129A、B1又はB2のエステルを該有機溶媒層に
抽出する。この抽出に際し、例えば食塩、硫酸ア
ンモニウムなどの如き塩類を加え、塩析効果によ
り抽出効率を高めるようにすることがでる。 該溶媒層は、脱水芒硝などで乾燥した後、それ
自体公知の方法に従い、例えばバイオ・ビーズＳ
−X3（バイオラツド社製）、セフアデツクスLH−
20（フアルマシヤ社製）などによるゲル過；シ
リカゲル、アルミナ、フロリジル（フロリジン社
製）などを担体とする吸着クロマトグラフイーな
どを適宜組合せ且つ必要に応じて反復使用して、
エステルを単離することができる。 以上の如くして得られた抗生物質OA−6129A、
B1又はB2の置換もしくは未置換ベンジルエステ
ルは、必要により３−位の炭素原子に結合してい
るパントイル基のα−及びγ−位の水酸基を同時
にエーテル化した次式 式中、R1及びR4は前記の意味を有する、 で代表される環状ケタール又は環状アセタール誘
導体に変えることができる。そのケタール又はア
セタール化は、それ自体公知の方法によつて行な
うことができる。 例えば、抗生物質OA−6129A、B1又はB2のエ
ステルをケトン又はアルデヒド誘導体と反応せし
めることにより、それらの環状ケタール又は環状
アセタール誘導体に変えることができる。この反
応は、一般に反応試薬を溶媒として使用し行うの
が好ましく、使用し得る反応試薬としては、例え
ばアセトン、２，２−ジメトキシプロパン、ホル
ムアルデヒド、２，２−ジメトキシエタン、アセ
トアルデヒド、ベンズアルデヒド、プロピオンア
ルデヒド、アセトフエノン、ジフエニムルトン、
シクロヘキサノン、ジベンジルケトン、１，１−
ジフエニルアセトンなどが挙げられ、これらの反
応試薬はそれぞれ単独で使用してもよく、或いは
必要に応じて２種以上を混合して用いることもで
きる。 また、必要により反応試薬に対する抗生物質
OA−6129A、B1又はB2のエステルの溶解性を考
慮して、不活性溶媒を混合させることもできる。 反応温度は臨界的ではなく、使用する液体媒体
の種類等に応じて広範に変えることができ、抗生
物質OA−6129のエステルが著るしく分解しない
温度範囲内で任意に選ぶことができるが、一般に
60℃以下の温度、好ましくは−40〜40℃の範囲、
さらに好ましくは０℃〜室温の範囲が有利であ
る。 また、上記反応に際しては、必要に応じて、無
水ｐ−トルエンスルホン酸、ボロントルフロライ
ドエーテラート塩化亜鉛などの反応促進剤を添加
する。 かかる条件下に反応は大体30分〜12時間以内、
通常２〜５時間で終らせることができる。 かくして得られる該エステルの環状ケタール又
は環状アセタール誘導体は、それ自体公知の分
離、精製方法に準じて反応混合物から単離するこ
とができる。例えば、反応終了後、先ず過剰の反
応促進剤等を不活化するためにアミン類で処理し
た後、処理液を例えば、酢酸エチル、クロロホル
ムなどの水と実質的に混和しない非極性有機溶媒
中にあける。該混合液から副生物などの水溶性不
純分を除去するため、水性媒体で洗浄する。 その際、水性媒体としては中性緩衝液を使用す
るのが望ましい。次いで、該有機溶媒層を濃縮乾
固した後、それ自体公知の方法に従い、例えば、
シリカゲル、バイオビーズ（バイオラド社製）、
セフアデツクスLH−20（フアルマシヤ社製）な
どを担体とするクロマトグラフイーなどを適宜組
合せ且つ必要に応じて反復使用して、所望の環状
ケタール又は環状アセタール誘導体を単離するこ
とができる。 かくして得られる式（）で示されるエステル
又はそれらのパントイル基のα−及びγ−位の水
酸基を同時にエーテル化した式（）で示される
化合物で代表される環状ケタール又は環状アセタ
ール誘導体のＳ−酸化は、それ自体公知の方法、
例えばペニシリン系、セフアロスポリン系などの
硫黄含有β−ラクタム系抗生物質のＳ−酸化に際
して屡々利用される方法に従つて行なうことがで
きる。 例えば、前記式（）又は（）の化合物は、
カルバペネム骨格に実質的に作用しない温和な酸
化剤、即ち、過安息香酸、オゾン、フエニルジク
ロロ・イオダイド、過酸化水素、二酸化セレン、
又はメタ過ヨード酸ナトリウムなどと反応せしめ
られる。かかる温和な酸化剤としては有機過酸が
好適であり、特に過安息香酸及びｍ−クロロ過安
息香酸が挙げられ、最も好ましくはｍ−クロロ過
安息香酸のような置換過安息香酸が作用される。
該式（）又は式（）の化合物と酸化剤との反
応は、不活性溶媒、例えば塩化メチレン、クロロ
ホルム、四塩化炭素等の溶媒中で、室温またはそ
れ以下、好ましくは約−40℃〜約20℃程度の温和
な温度条件下に行なうのが有利である。該反応は
かかる条件下で通常３分間〜３時間の間に終了せ
しめることができる。 式（）又は式（）の化合物の酸化に使用さ
れる酸化剤の使用量は、酸化剤の種類や反応条件
等に応じて広範に変えることができるが、一般に
は、式（）又は式（）の化合物１モルに対し
て0.3〜1.8モル当量、好ましくは1.0〜1.3モル当
量の範囲内が有用である。 反応終了後、Ｓ−酸化生成物である前記式
（）の化合物は、それ自体公知の種々の方法に
従つて単離精製することができ、通常、カルバペ
ネム系抗生物質の単離精製に際して屡々利用さる
方法により反応液から単離することができる。例
えば、反応終了後の反応液から固形分を去し、
液にリン酸緩衝液の如き緩衝液を添加して、該
液のPHが酸性側に傾かないよう保持しながら、
該液を、例えば活性炭、アンバーライトXAD
−２（ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤ・イ
オンHP−20（三菱化成社製）などによる吸着と
メタノール／水、アセトン／水などによる溶出と
の組合せ；ダウエツクス1X2（ダウケミカル社
製）、ダウエツクス50X2（ダウケミカル社製）、
QAE−セフアデツクスＡ−25（フアルマシヤ社
製）などのイオン交換樹脂による吸着および溶
出；セフアデツクスＧ−10（フアルマシヤ社製）、
バイオゲル−P2（バイオ・ラツト社製）などによ
るゲル過；セルローズ、アビセルSF（アメリカ
ン・ビスコース社製）、DEAE−セルローズ ワ
ツトマンDE−32（ワツトマン社製）、DEAE−セ
フアデツクスＡ−25（フルマシヤ社製）、シリカゲ
ル、アルミナなどによるカラム法または薄層法の
クロマトグラフイー；アセトンなどの溶剤添加に
よる強制沈殿法；凍結乾燥法；などをそれぞれ単
独で或いは適宜組合せて、さらに必要に応じて反
復使用することにより、これら処理に付し、前記
式（）の化合物を単離することができる。 該化合物は、例えば前記の如く、公開特許公報
昭56−156281号記載の方法に準じて処理すること
により、所望の３−位側鎖が置換された有用カル
バペネム系抗生物に変換できることから、合成中
間体として有用である。 以下に、本発明を参考例及び実施例によつてさ
らに詳しく説明する。 参考例 １ 抗生物質OA−6129A、B1及びB2の発酵法によ
る製造 (A) 500ml容エルレンマイヤーフラスコに100mlの
下記組成の種母培地（Ｓ−１）を入れ、常法に
より、120℃で15分間殺菌した。一方、ストレ
プトミセス・エスビーOA−6129（Streptmyces
sp.OA−6129）菌株の胞子を充分着生させ、こ
の一白金耳を上記種母培地に接種し、28℃で48
時間ロータリーシエーカー（200rpm、振幅７
cm）で振とう培養した。この種母培養液200ml
を、下記組成の種母培地（SE−４）15を入
れた30容ジヤー・フアーメンターに接種し、
28℃、400rpmで撹拌及び7.5／min通気の条
件下に90時間通気撹拌培養を行つた。消泡剤と
してシリコンKM−75〔信越化学(株)製〕を0.07
％使用した。 (B) 上記(A)で得られた24時間培養後の種母培養液
２を下記組成の生産培地（GM−１）100
を入れた200容醗酵タンクに接種し、28℃、
200rpmで撹拌及び50／min通気の条件下に
90時間通気撹拌培養を行つた。消泡剤としてシ
リコンKM−75〔前出〕を0.07％使用した。 経時的に培養液をサンプリングし、遠心分離
した上澄液についての抗菌力の測定を行つた。 各時間における測定結果は、下表に示す通り
であつた。 培養時間（時間） 抗菌力価（μｇ／ml） 48 2.6 72 11.5 90 24.0 種母培地（Ｓ−１）の組成： ミート 1.5％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキストラクト 0.5 〃 ポテトスターチ 2.0 〃 CaCO3 0.2 〃 PH（殺菌前） 7.0 種母培地（SE−４）の組成： 牛肉エキストラクト 0.3％（Ｗ／Ｖ） トリプトン 0.5 〃 グリコース 0.1 〃 溶性でんぷん 2.4（Ｗ／Ｖ） 酵母エキストラクト 0.5 〃 CaCO3 0.4 〃 ミート 0.5 〃 PH（殺菌前） 7.5 生産培地（GM−１）の組成： グリセリン 8.0％（Ｗ／Ｖ） 魚 粉 1.0 〃 ミート 3.0 〃 CaCO3 0.3 〃 K2HPO4 0.2 〃 MgSO4 0.2 〃 NaOHでPHを7.2に調整 別にPH5.5の0.01Mリン酸緩衝液中に溶解し、
且つオートクレーブで１Kg／cm2Ｇ、５分間殺菌
したビタミンB12を0.0005％（Ｗ／Ｖ）添加。 (C) 上記(B)で得られた90時間培養後の醗酵液100
に５％（Ｗ／Ｖ）量のトプコパーライトNo.34
〔東興パーライト(株)製〕を添加し、バスケツト
型遠心分離機で菌体を分離し、90の培養液
を得た。 これをダイヤイオンHP−20〔三菱化成(株)製〕
充填カラム（10×100cm）に吸着させ、蒸留水
５で洗浄後、30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水で溶
出した。 １区分を１とし、その溶出液を分画した。
バイオアツセイ活性画分８から画分15まで合計
８の溶出液を集め、これをダイヤイオン
PA306S〔三菱化成(株)製〕充填カラム（８×60
cm）に吸着させ、蒸留水１で洗浄後、3.0％
食塩水で溶出した。500mlずつ溶出液を分画し、
バイオアツセイ活性画分７から画分16までの合
計５の溶出液を集めた。この溶出液には、抗
生物質OA−6129A、B1及びB2が含まれてい
た。該溶出液6.0に300ｇの食塩を加え、ダイ
ヤイオンHP−20充填カラム（６×150cm）に
吸着させ、蒸留水500mlで洗浄後、濃度が０％
から40％まで直線的に増加するアセトン水合計
4.0で溶出した。 １区分を17mlとし、その溶出液を分画した。
バイオアツセイ活性画分20から画分130までの
約1.8の溶出液には主に抗生物質OA−
6129B1、B2と、若干の抗生物質OA−6129Aが
含まれた。バイオアツセイ活性画分131から画
分170までの約700mlの溶出液には抗生物質OA
−6129Aが含まれた。 上記の２区分をそれぞれ凍結乾燥し、茶褐色
の粉末を得た。 〔抗生物質OA−6129Aの精製〕 抗生物質OA−6129Aを主に含む溶出液を凍結
乾燥することによつて得られた茶褐色粉末を少量
の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２（バイオラ
ツド社製）充填カラム（８×100cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分
1.0を集めた。この活性画分を予め、0.01Mリ
ン酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフア
デツクスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム
（４×40cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄
後、濃度が０％から４％まで直線的に増加する食
塩水（合計3.0）で溶出を行つた。溶出液を15
mlずつ分画し、バイオアツセイを行い、画分51か
ら画分70まで、合計300mlの活性画分を得た。 この画分を凍結乾燥し、黄褐色の粉末を得た。 この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食塩
を加え、ダイヤイオンHP−20AG〔三菱化成業(株)
製〕充填カラム（２×50cm）に吸着させ、５％食
塩水50mlで洗浄後、蒸留水100mlで洗浄した。濃
度が０％から30％まで直線的に増加するアセトン
水（合計1.0）で溶出し、１画分を10mlとし、
その溶出液を分画した。バイオアツセイにより、
活性画分35から画分45までの合計110mlを集め、
これを凍結乾燥すると黄褐色の粉末52mgが得られ
た。 抗生物質OA−6129Aの粗粉末52mgを、少量の
蒸留水に溶解し、セフアデツクスＧ−10（フアル
マシア社製）充填カラム（２×80cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分30
mlを集めた。この活性画分を予め、0.01Mリン酸
緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデツ
クスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム（２
×30cm）に吸着させ、上記緩衝液50mlで洗浄後、
濃度０％から５％まで直線的に増加する食塩水
（合計800ml）で溶出を行い、溶出液を５mlずつ分
画した。バイオアツセイにより、活性画分36から
画分40までの合計25mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔三菱化成(株)製〕充填カラム（２×40
cm）に吸着させ、蒸留水50mlで洗浄後、濃度０％
から30％まで直線的に増加するアセトン水（合計
800）で溶出し、１画分を５mlとし、その溶出
液を分画した。 バイオアツセイにより活性画分105から画分117
の合計65mlを集めた。 これを凍結乾燥することにより淡黄色粉末21mg
を得た。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を有した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕24 D：11.6゜（ｃ＝1.0、0.01Mリ
ン酸緩衝液、PH8.4） 但し、紫外部吸収においてλnax300nmのεを
5600とした時の値である。 (3) 分子式 理論分子式 C20H30N3O7SNa（M.W.＝479） (4) 紫外部吸収スペクトラム λ0.01Mリン酸緩衝液（pH8.4） max nm（ε）：300（5600） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ーク νKBr naxcm-1： 1750（β−ラクタム）、1660（アミド）、1600（カル
ボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O）（内
部基準：DSS） δ（ppm） 0.89（3H，ｓ，【式】）、0.92（3H， ｓ，【式】）、1.00（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz， CH2−ＣH3 ）、1.60〜2.00（2H，ｍ，ＣH2 −
CH3）、 2.48（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−ＣH2 −
CO） 2.80〜3.65（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH2 −ＣH2 −Ｎ，Ｎ−ＣH2 −CH2−CO，Ｃ
−ＣH2 ，OH） 3.95（2H，ｍ，Ｃ−５Ｈ，【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒 アセトニトリル：水（８：２） 検出方法 Comamonas terrigena B996に
よるバイオオートグラフイー Rf値 0.53 (8) 呈色反応 ニンヒドリンに対する反応：陰性 エールリツヒ試薬に対する反応：陽性 (9) 元素分析、融点 吸湿性のため測定不能 〔抗生物質OA−6129B1及びB2精製〕 抗生物質OA−6129B1及びB2を主に含む溶出液
を、凍結乾燥することによつて得られた茶褐色の
粉末を、少量の蒸留水に溶解し、抗生物質OA−
6129Aの粗粉末と同様にバイオゲルＰ−２、
QAE−セフアデツクスＡ−25次いで、ダイヤイ
オンHP−20AG充填カラム処理し、バイオアツ
セイによる初出活性画分と、後出活性画分の２区
分を得た。前者活性区分には抗生物質OA−
6129B1が後者活性区分には抗生物質OA−6129B2
が含まれていた。両区分をそれぞれ凍結乾燥する
ことによりOA−6129B1の黄褐色粉末が840mg、
抗生物質OA−6129B2の黄褐色粉末が470mg得ら
れた。 〔抗生物質OA−6129B1の精製〕 抗生物質OA−6129B1の粗粉末840mgを、少量
の蒸留水に溶解し、セフアデツクスＧ−10（フア
ルマシア社製）充填カラム（２×80cm）に導き、
蒸留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分
35mlを集めた。この活性画分を予め、0.01Mリン
酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデ
ツクスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム
（２×30cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄
後、濃度が０％から５％まで直線的に増加する食
塩水（合計800ml）で溶出を行い、溶出液を５ml
ずつ分画した。300nmに紫外部極大吸収を有する
画分39から画分43までの合計25mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔三菱化成(株)製〕充填カラム（２×40
cm）に吸着させ、蒸留水にて展開を行い、溶出液
を５mlずつ分画した。 上記と同様に300nmの紫外部極大吸収を調べる
ことにより画分51から画分70の合計100を集めた。
これを凍結乾燥することにより、淡黄色粉末21mg
を得た。 この淡黄色粉末21mgを少量の蒸留水に溶解し、
活性炭素〔和光純薬工業(株)製〕充填カラム（1.5
×７cm）に吸着させ、蒸留水20mlで洗浄後、濃度
が０％から50％まで直線的に増加するイソプロピ
ルアルコール水（合計200ml）で溶出を行い、溶
出液を２mlずつ分画した。 300nmに紫外部極大吸収を有する画分18から画
分32までの合計30mlを集め、これを凍結乾燥する
と、淡黄色粉末８mgが得られた。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を示した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕24 D：24.2゜（ｃ＝0.5、H2O中） (3) 分子式 C20H30N3O8SNa（M.W.495） (4) 紫外部吸収スペクトル λH2O naxnm（ε）＝300（6400） (5) 赤外部吸収スペクトル νKBr naxcm-1：1750（β−ラクタム）、1650（アミ
ド）、1590（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O、内部
基準DSS） δ：0.86（3H，ｓ，【式】） 0.89（3H，ｓ，【式】） 1.33（3H，ｄ，Ｊ＝6.0Hz，【式】） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz、NH−CH2−ＣH2
−CO） 2.75〜3.70（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，
Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −NH，NH−ＣH2 −CH2−
CO，【式】） 3.93（1H，ｓ，【式】） 3.95〜4.40（2H，ｍ，Ｃ−5H，
【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒 アセトニトリル／0.1Mトリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン−塩酸緩衝液（PH7.5）／0.1M
エチレンジアミン（PH7.5）＝
120：30：１ 検出方法 Comamonas terigena B996によ
るバイオオートグラフイー Rf値 0.17 (8) 高圧紙電気泳動 PH8.6のベロナール緩衝液、東洋紙、No.51を
用い1500V、30分泳動した。 Rm値0.67（Rm値はPS−５ナトリウム塩の移動
度を1.0としたものである） (9) 高速液体クロマトグラフイー 充てん剤；マイクロボンダパツクC18 カラム；7.8mm（内径）×30cm （日本ウオーターズリミテツド） 移動相；３％アセトニトリルを含む0.01モルリ
ン酸二アンモニウム緩衝液（PH7.5） 流 量；1.5ml／min 検出方法；紫外部301nm 上記の条件下で保持時間13.9分である。 〔抗生物質OA−6129B2の精製〕 抗生物質OA−6129B2の粗粉末470mgを前記抗
生物質OA−6129B1の粗粉末と同様に、セフアデ
ツクスＧ−10、QAE−セフアデツクスＡ−25、
ダイヤイオンHP−20AG次いで、活性炭充填カ
ラムで処理し、淡黄色粉末23mgを得た。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を示した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕24 D：14.7゜（ｃ＝1.0、0.01Mリ
ン酸緩衝液、PH8.4） (3) 分子式 C20H30N3O8SNa（M.W.495） (4) 紫外部吸収スペクトラム λ0.01Mリン酸緩衝液（pH8.4） maxnm（ε）＝300
（5400） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ーク νKBr naxcm-1：1760（β−ラクタム）、1660（アミ
ド）、1600（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D2O、内部
基準DSS） δ：0.87（3H，ｓ，【式】） 0.92（3H，ｓ，【式】） 1.28（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，【式】） 2.45（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz、NH−CH2−ＣH2
−CO） 2.75〜3.60（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，
Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −NH，NH−ＣH2 −CH2−
CO，【式】） 3.94（1H，ｓ，【式】） 3.95〜4.35（2H，ｍ，Ｃ−5H，
【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒 アセトニトリル／0.1Mトリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン−塩酸緩衝液（pH7.5）／0.1M
エチレンジアミン水溶液
（pH7.5）＝120／30／１ 検出方法 Comamonas terigena B996によ
るバイオオートグラフイー Rf値 0.17 (8) 高圧紙電気泳動 pH8.6のベロナール緩衝液、東洋紙No.51を用
い1500V、30分泳動した。 Rm値0.67（Rm値はPS−５ナトリウム塩の移動
度を1.0としたものである。 (9) 高速液体クロマトグラフイー 充てん剤：マイクロボンダパツクC18 カラム：7.8mm（内径）×30cm （日本ウオーターズリミテツド） 移動相：３％アセトニトリルを含む0.01モルリ
ン酸二アンモニウム緩衝液（pH7.5） 流 量：1.5ml／min 検出方法：紫外部301nm 上記の条件下で、保持時間22.5分である。 参考例 ２ 抗生物質OA−6129Aのベンジルエステルの製
造 抗生物質OA−6129Aナトリウム塩44.6mgをジ
メチルホルムアミド8.0mlに溶解し、氷冷下、ト
リエチルアミン0.25mlを加え、撹拌しながらベン
ジルブロマイド0.18mlを加えた。同温度で30分反
応させた後、室温で３時間反応させた。 反応液を100mlの酢酸エチルに注ぎ、食塩飽和
の0.01Mリン酸緩衝液（pH8.4）20mlで洗浄後、
水層を更にメチレンクロライド100mlで再抽出し
た。抽出液を合わせ、硫酸ナトリウム（無水）で
脱水後、減圧留去した。残渣を少量のベンゼンに
溶解し、バイオビーズSX−３カラムに吸着させ、
ベンゼンで溶出し、ベンゼン／アセトン（１／
１）の混合溶媒展開のシリカゲルTLCにて、Rf
値0.39にUV吸収を示す区分を集め、減圧乾固し
た。 この残渣を少量のメチレンクロライドに溶解
し、ベンゼン／アセトン（２／１）にて充填した
シリカゲル12ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／
アセトン（２／１）、（１／１）及び（１／３）混
合溶媒並びにアセトンで順次展開し、アセトンで
溶出する区分を集めて、減圧乾固すると、標題化
合物が21.4mg得られた。 この抗生物質OA−6129Aのベンジルエステル
は次の物理化学特性を示した。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：52.4゜（ｃ＝0.5、CH2Cl2） (2) 紫外部吸収スペクトラム λCH2Cl2 naxnm（ε）：318（7400） (3) 赤外部吸収スペクトラムの主要ピーク νCH2Cl2 naxcm-1：1772（β−ラクタム）、1700（エ
ステ
ル）、1665（アミド） (4) 核磁気共鳴スペクトラム（内部基準：TMS） (イ) CD2Cl2を溶媒としたとき δ（ppm）： 0.88（3H，ｓ，【式】）、0.97（3H， ｓ，【式】）、1.03（3H，ｔ＝Ｊ＝7.5Hz， CH2−ＣH3 ）、1.60〜2.10（3H，ｍ，ＣH2 −CH3，
OH）、2.39（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−Ｃ
H2−CO）、2.85〜3.67（12H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−
6H，Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −Ｎ，Ｎ−ＣH2 −CH2−
CO，Ｃ−ＣH2 −OH，OH又はNH）、3.93（2H，
ｍ，Ｃ−5H，【式】）、4.17（1H，br， NH又はOH）、5.17（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz、ＣＨ
Ｈ−Ar）、5.32（1H，ｄ，Ｊ＝130Hz，CHＨ−
Ar）、6.73（1H，brNH）、7.35（5Hs，ArＨ） (ロ) CD2Cl2＋D2Oを溶媒としたとき δ（ppm）： 0.88（3H，ｓ，【式】） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.02（3H，ｔ＝Ｊ＝7.5Hz，CH2−ＣH3 ） 1.55〜2.00（2H，ｍ，ＣH2 −CH3） 2.39（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−ＣH2 −
CO） 2.80〜3.67（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH2 −ＣH2 −Ｎ，Ｎ−ＣH2 −CH2−CO，Ｃ
−ＣH2 −OH） 3.93（1H，dt，Ｊ＝3.0Hz，Ｊ＝90HzＣ−5H） 3.93（1H，ｓ，【式】） 5.13（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz，ＣＨＨ−Ar） 5.28（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz，CHＨ−Ar） 7.35（5H，ｓ，ArH） MS（ｍ／ｚ）：455（【式】）、 418、 329、 本エステルの加水分解（6N塩酸、115℃、16時
間）生成物中には、システアミン、β−アラニン
が確認された。 以上の理化学的性質から抗生物質OA−6129A
の構造は であり、５，６−トランス立体配置を有すると考
えられる。 参考例 ３ 抗生物質OA−6129Aのｐ−ニトロベンジルエ
ステルの製法 抗生物質OA−6129A63.5mgをジメチルホルム
アミド9.0mlに溶解し、氷冷下トリエチルアミン
0.2mlを加え撹拌しながら、ｐ−ニトロベンジル
ブロマイド285mgを含むジメチルホルムアミド溶
液1.5mlを加え、同温度で30分反応させた後、室
温で３時間反応させた。 反応液を100mlの酢酸エチルに注ぎ、食塩飽和
の0.01Mリン酸緩衝液（pH8.4）20mlで洗浄後、
水層を更にメチレンクロライド100mlで再抽出し
た。抽出液を合わせ、硫酸ナトリウム（無水）で
脱水後減圧留去した。 この残渣を少量のメチレンクロライドに溶解
し、ベンゼン／アセトン（１／１）にて充填した
シリカゲル12ｇのカラムに吸着させベンゼン／ア
セトン（１／１）、（１／３）の混合溶媒並びにア
セトンで順次展開した。アセトン溶出区分でベン
ゼン／アセトン（１／１）の混合溶媒展開のシリ
カゲルTLCにて、Rf値0.33にUV吸収を示す区分
を集め減圧乾固すると標題化合物36.3mgが得られ
た。 この抗生物質OA−6129Aのｐ−ニトロベンジ
ルエステルは次のような諸物理化学特性を示し
た。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：37.5゜（ｃ＝1.0、CH2Cl2） (2) 紫外部吸収スペクトラム λCH2Cl2 naxnm（ε）：319（8400）、270（10500） (3) 赤外部吸収スペクトラム νCH2Cl2 naxcm-1：1770（β−ラクタム）、1700（エ
ステ
ル）、1665（アミド） (4) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：CD2Cl2；
内部基準：TMS） δ（ppm）： 0.87（3H，ｓ，【式】） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.04（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，CH2−ＣH3 ） 1.5〜2.2（3H，ｍ，ＣH2 −CH3，OH） 2.40（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−ＣH2 −
CO） 2.8〜3.7（12H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ−
ＣH2 −ＣH2 −Ｎ，Ｎ−ＣH2 −CH2−CO，Ｃ−
ＣH2 −OH，OH又はNH） 3.94（2H，ｍ，Ｃ−5H，【式】） 4.17（1H，br，NH又はOH） 5.19（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，ＣＨ・Ｈ−Ar） 5.45（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，CH・Ｈ−Ar） 6.74（1H，br，NH） 7.63（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 8.18（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 参考例 ４ 抗生物質OA−6129A・ｐ−ニトロベンジルエ
ステルのイソプロピリデン化法 抗生物質OA−6129A・ｐ−ニトロベンジルエ
ステル110mgをアセトン10mlに溶解し、２，２−
ジメトキシプロパン0.5ml及び無水硫酸ナトリウ
ム20mgを加え、室温下撹拌しながら無水ｐ−トル
エンスルホン酸40mgを加え、同温度で３時間反応
させた。 反応液に、トリエチルアミン0.1mlを滴下し、
５分間撹拌後、酢酸エチル50ml中に注ぎ、0.1M
リン酸緩衝液（pH8.4）20mlで洗浄後、さらに、
同緩衝液（pH＝6.8）20mlで洗浄した。 抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧留
去した。残渣を少量の塩化メチレンに溶解し、ベ
ンゼン／アセトン（５／１）にて充填したシリカ
ゲル５ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／アセト
ン（５／１）、（３／１）（１／１）、（２／１）、
（１／５）の混合溶媒で順次展開した。 ベンゼン／アセトン（１／１）で溶出する区分
を集めて濃縮すると、ベンゼン／アセトン（１／
１）の混合溶媒展開のシリカゲルTLCにてRf値
0.56に、UV吸収を示す標題化合物が72.0mgが得
られた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：34.9゜（ｃ＝1.0、CHCl3） (2) 紫外部吸収スペクトラム λCHCl3 naxnm（ε）：319（6200）、270（9800） (3) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒CDCl3、内部
基準TMS） δ（ppm） 0.97（3H，ｓ，【式】） 1.03（3H，ｓ，【式】） 1.07（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz−CH2−ＣH3 ） 1.40（3H，ｓ，【式】） 1.43（3H，ｓ，【式】） 1.7〜2.0（2H，ｍ，−ＣH2 −CH3） 2.43（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH2−ＣH2 −
CO） 2.5〜3.8（11H，C4−H2 ，C5−Ｈ，−Ｓ−ＣH2
−CH2−Ｎ，Ｎ−ＣH2 −ＣH2 −CO，Ｃ−ＣH2
−Ｏ−） 3.97（1H，dt，Ｊ＝３Hz，９Hz，C5−Ｈ） 4.03（1H，ｓ，【式】） 5.20（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，ＣＨ・Ｈ−Ar） 5.49（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，CH・Ｈ−Ar） 6.52（1H，br，ＮＨ） 6.93（1H，br，ＮＨ） 7.58（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 8.15（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） (4) 赤外線吸収スペクトラム（溶媒CHCl3） 波長（cm-1） 1770（β−ラクタム）、1660（アミド） 参考例 ５ 抗生物質OA−6129B2のｐ−ニトロベンジルエ
ステルの製造 抗生物質OA−6129B2ナトリウム塩190mgをジ
メチルホルムアミド6.0mlに溶解し、氷冷下トリ
エチルアミン0.2mlを加え、撹拌しながらｐ−ニ
トロベンジルブロマイド210mgを含むジメチルホ
ルムアミド溶液を加えた。同温で５分間反応させ
た後室温で３時間反応させた。反応液を100mlの
メチレンクロライドに注ぎ、食塩飽和の0.1Mリ
ン酸緩衝液（pH6.8）20mlで２回洗浄した。更に
水層はメチレンクロライド100mlで２回抽出を行
つた。抽出液を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱
水後減圧留去した。 残渣を少量のメチレンクロライドに溶解し、ベ
ンゼン／アセトン（１／１）にて充填したシリカ
ゲル６ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／アセト
ン（１／１）、（１／２）（１／３）、（１／５）の
混合溶媒並びにアセトンで順次展開した。ベンゼ
ン／アセトン（１／５）からアセトンにて溶出
し、ベンゼン／アセトン（１／４）展開のシリカ
ゲルTLCにてRf値0.15にUV吸収を示す表題化合
物が85mgが得られた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：41.4゜（ｃ＝1.0、ジオキサン） (2) IRスペクトル νKBr naxcm-1：1760（β−ラクタム）、1695（エステ
ル）、1640（アミド） (3) UVスペクトル λCH2Cl2 naxnm（ε）：320（10500）、271（10500） (4) NMRスペクトル（Pyridine−d5） 但しδ1−5ppmまでを記す。 δ（ppm） 1.30（6H，ｓ，ＣH3 −Ｃ−ＣH3 ） 1.55（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，ＣH3 −CH） 2.70（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH2−ＣH2 −
CO） 2.90〜4.05（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH2 −ＣH2 −NH，NH−ＣH2 −CH2−CO，
【式】） 4.10〜4.50（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 4.52（1H，ｓ，【式】） (5) Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ：523
【式】 参考例 ６ 抗生物質OA−6129B2・ｐ−ニトロベンジルエ
ステルのイソプロピリデン化法 抗生物質OA−6129B2・ｐ−ニトロベンジルエ
ステル20mgをアセトン5.0ml、２，２−ジメトキ
シプロパン2.0ml、硫酸ナトリウム（無水）100mg
の混合溶媒に溶解させ、室温で撹拌しながら、ｐ
−トルエンスルホン酸0.5mgを加える。30分間反
応させた後、反応液にトリエチルアミン6μを
加え、５分間撹拌した。反応液を減圧留去し、残
渣に30mlのメチレンクロライドを加え、0.1Mリ
ン酸緩衝液（pH8.4）20mlで洗浄後、抽出層を硫
酸ナトリウム（無水）で脱水し、減圧留去した。
残渣を少量のメチレンクロライドに溶解し、ベン
ゼン／アセトン（２／１）で充填したシリカゲル
２ｇのカラムに吸着させた。ベンゼン／アセトン
（２／１）、（１／１）（１／２）の混合溶媒で順次
展開し、ベンゼン／アセトン（１／１）から
（１／２）で溶出する区分を集めて、濃縮すると、
ベンゼン／アセトン（１／４）混合溶媒展開のシ
リカゲルTLCにて、Rf値（0.64）を示す標題の
イソプロピリデン化物6.6mg得られた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕24 D：55.1゜（ｃ＝0.5、CH2Cl2） (2) IRスペクトル νCHCl3 naxcm-1：1778（β−ラクタム）、1700（エス
テ
ル）、1668（アミド） (3) UVスペクトル λCH2Cl2 naxnm（ε）：319（9700）、270（11900） (4) NMRスペクトル（CDCl3） δ（ppm） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.02（3H，ｓ，【式】） 1.37（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，ＣH3 −CH） 1.40（3H，ｓ，【式】） 1.43（3H，ｓ，【式】） 2.41（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH2−ＣH2 −
CO） 2.75〜3.80（11H，ｍ，Ｃ−4H2，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH2 −ＣH2 −NH，NH−ＣH2 −CH2−CO，
Ｏ−CH2−Ｃ） 4.02（1H，ｓ，【式】） 4.00〜4.30（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 5.16（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，ＣＨＨ−Ar） 5.44（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，CHＨ−Ar） 6.56（1H，br，NH） 6.92（1H，br，NH） 7.55（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ） 8.12（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ） (5) Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ：563
【式】 実施例 １ 抗生物質OA−6129A ｐ−ニトロベンジルエス
テル Ｓ−オキシドの製法 OA−6129A・ｐ−ニトロベンジルエステル26
mg（0.044mmol）を塩化メチレン５mlに溶解後、
−35℃に冷却し、ｍ−クロロ過安息香酸11mg
（0.066mmol）を含む塩化メチレン溶液を滴下し、
同温度で30分間反応させた後反応液を塩化メチレ
ン100ml中に注ぎ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液
にて洗浄後ベンゼン／アセトン（１／１）にて充
填したシリカゲル10mlに吸着させ、ベンゼン／ア
セトン（１／３）、（１／５）にて溶出し、アセト
ン展開のシリカゲルTLCにてRf値0.14にUV吸収
を示す区分を減圧乾固すると表題化合物16.8mgが
得られた。 尚、この化合物はPS−５・ｐ−ニトロベンジ
ルエステル・Ｓ−オキシド体にＤ−パンテテイン
を反応させて得た（5R，6R）−６−エケル−３
−（Ｒ）−パンテテイニル−７−オキソ−１−アザ
ビシクロ〔３・２・０〕ヘプト−２−エン−２−
カルボン酸ｐ−ニトロベンジルエステルを前記と
同様に過酸処理して得られた化合物と理化学的性
状は一致した。 〔α〕24 D 11.0゜（ｃ＝1.0、CH2Cl2） UV λCH2Cl2 naxnm（ε）：310sh（7500）、270（12400
） IR νCH2Cl2 naxcm-1：1790（β−ラクタム）、1715（エ
ス
テル）、1670（アミド） NMR（CD2Cl2）δ： 0.88（3H，ｓ，【式】） 0.98（3H，ｓ，【式】） 1.05（3H，ｔ，Ｊ＝7.0Hz，CH2−CH3） 1.50〜2.00（3H，ｍ，ＣH2 −CH3，OH） 2.39（2H，ｔ，Ｊ＝6.0Hz，CO−ＣH2 −CH2−
NH） 2.95〜4.30（14H，ｍ，Ｃ−４H2 ，Ｃ−５Ｈ，
Ｃ−６Ｈ，Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −NH，CO−CH2−
ＣH2 −NH，Ｃ−ＣH2 −Ｏ，【式】 OH） 5.10〜5.60（2H，ｍ，CH2−Ar） 6.70（1H，ｍ，NH） 7.30（1H，ｍ，NH） 7.62（2H，ｍ，Ar・Ｈ） 8.20（2H，ｍ，Ar・Ｈ） MS （FD） ｍ／ｚ 631（Ｍ＋Na）、609（Ｍ＋１） 実施例 ２ イソプロピリデンOA−6129B2 ｐ−ニトロベ
ンジルエステル Ｓ−オキシドの製造 OA−6129B2・ｐ−ニトロベンジルエステル・
9′，11′−Ｏ−イソプロピリデン体110mgｒ
（1.170mmol）を塩化メチレン7.7mlに溶解後、−
30℃に冷却し、ｍ−クロロ過安息香酸42.9mgｒ
（0.187mmol）を含む塩化メチレン溶液を滴下し、
同温度で30分間反応させた後、反応液に、トリエ
チルアミン0.027ml（0.193mmol）を含む塩化メ
チレン溶液を同温度で滴下し、反応液を塩化メチ
レン20ml中に注ぎ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液
にて、洗浄し、さらに、リン酸緩衝液（pH6.80）
にて、洗浄し、有管層を無水硫酸ナトリウムにて
乾燥し、減圧濃縮した。この残渣をベンゼン／ア
セトン（２／１）で充填したシリカゲル５ｇｒに
吸着させ、ベンゼン／アセトン（１／１）、、
（１／３）、（１／10）にて溶出し、ベンゼン／ア
セトン（１／３）のシリカゲルTLCにて、Rf値
0.24にUV吸収（波長2537Å）を示す区分を減圧
濃縮し、乾固すると、表題化合物81.8mgｒ（収率
72.6％）が得られた。 理化学的性状 Γ旋光度 〔α〕23.5 D＋18.5゜（ｃ＝1.0、CHCl3） ΓUV λCHCl3 naxnm（ε）：314（7400）、268（12100） ΓIR νCHCl3 naxcm-1：1780（β−ラクタム）、1705（
エ
ステル）、1660（アミド） ΓNMR（CDCl3） δ（ppm） 0.97（3H，ｓ，【式】） 1.04（3H，ｓ，【式】） 1.37（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，CH3−CH−） 1.43（6H，ｍ，【式】） 2.41（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，CO−ＣH2 −CH2−
NH） 2.80〜3.80（11H，ｍ，Ｓ−ＣH2 −ＣH2 −NH，
CO−CH2−ＣH2 −NH，Ｃ−4H2，Ｃ−６Ｈ，
Ｃ−CH2−Ｏ） 4.03（1H，ｓ，Ｏ−CH−CO） 4.00〜4.50（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 5.19（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，【式】） 5.46（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，【式】） 6.17（1H，ｍ，ＮＨ） 6.95（1H，ｍ，ＮＨ） 7.67（2H，ｍ，Ar・Ｈ） 8.17（2H，ｄ，Ar・Ｈ） ΓMS （FD） ｍ／ｚ 687（Ｍ＋Na）、665（Ｍ＋１）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式 式中、R1は水素原子又は水酸基を表わし、
R2及びR3は水素原子又は一緒になつてイソ
プロピリデン基【式】を表わし、R4 は置換又は未置換のベンジル基を表わす、 で示される化合物。 ２ 該式（）のR1が水酸基を表わし、R2及び
R3が一緒になつてイソプロピリデン基を表わす
特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ３ ５，６−トランス又は５，６−シス立体配置
を有する特許請求の範囲第２項記載の化合物。 ４ 該式（）のR1が水素原子を表わし、R2及
びR3は水素原子又は一緒になつてイソプロピリ
デン基を表わす特許請求の範囲第１項記載の化合
物。 ５ 該式（）のR2及びR3が水素原子を表わす
特許請求の範囲第４項記載の化合物。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57038869A JPS58157787A (ja) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | 抗生物質ｏａ−６１２９ａ，ｂ↓１およびｂ↓２のｓ−オキシド誘導体 |
| KR1019830000259A KR840003255A (ko) | 1982-01-28 | 1983-01-24 | 항생물질 oa-6129a,b1,b2의 유도체 및 그 제법 |
| EP83100772A EP0085407A1 (en) | 1982-01-28 | 1983-01-27 | Derivatives of antibiotics 0A-6129A, 0A-6129B1 and 0A-6129B2 and their preparation method |
| ES519325A ES8403907A1 (es) | 1982-01-28 | 1983-01-27 | Un procedimiento para la produccion de nuevos derivados de los antibio-oa-6129, ca-6129 b1 y ca-6129b2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57038869A JPS58157787A (ja) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | 抗生物質ｏａ−６１２９ａ，ｂ↓１およびｂ↓２のｓ−オキシド誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58157787A JPS58157787A (ja) | 1983-09-19 |
| JPH0328436B2 true JPH0328436B2 (ja) | 1991-04-19 |
Family
ID=12537214
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57038869A Granted JPS58157787A (ja) | 1982-01-28 | 1982-03-13 | 抗生物質ｏａ−６１２９ａ，ｂ↓１およびｂ↓２のｓ−オキシド誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58157787A (ja) |
-
1982
- 1982-03-13 JP JP57038869A patent/JPS58157787A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58157787A (ja) | 1983-09-19 |
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