JPH0331180B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はカワラタケ属に属する担子菌由来の蛋
白多糖体を主成分とするプロスタグランジン調節
剤に係り、詳しくはクレスチンよりなるプロスタ
グランジン調節剤に関する。該クレスチンは、抗
腫瘍剤として既に社会に提供されており、極めて
低毒性で、且つ腸内菌叢攪乱などの心配がなく、
長期投与が可能である。また、変異原性やアレル
ギー反応などにも影響を与えず、したがつて、健
康な人に対する催奇形成や、アレルギー反応の危
険もなく、極めて安全な物質である。 一般にプロスタグランジン（以下PGsと略す）
は全身の各種臓器に見い出され、その臓器の機能
と密接に関係する作用を有する。PGsの生理作
用、薬理作用も既に現在までに、極めて巾広いも
のを有することが判明している。循環器系の薬理
作用として、血管の拡張、収縮に関与し、血圧の
上昇、降下をもたらし、また血小板凝集に対して
拮抗的、誘発あるいは促進作用を示すことにより
動脈硬化、脳卒中に対して治療並びに予防薬とし
て有用である。さらに抗不整脈作用，抗ぜんそく
作用，呼吸促進作用，鎮咳・去たん作用，抗アレ
ルギー作用，抗アナフイラキシー作用，免疫調整
作用，抗潰瘍作用，利尿作用，子宮の運動促進，
緊張促進，緊張抑制作用，癌の転移防止作用等が
みられており、利尿剤，抗潰瘍剤，分娩促進剤，
避妊剤，妊娠中絶剤，抗癌剤さらには老化防止剤
として有用である。 本発明者等は、本発明の前記蛋白多糖体が抗腫
瘍効果に加えてプロスタグランジン調節作用の薬
理効果をも有していることを知見し、本発明に至
つたものである。本発明蛋白多糖体がこれらPGs
を調節することは、既述した種々の疾患の治療並
びに予防に役立つことが期待される。 本発明プロスタグランジン調節剤の活性成分で
ある蛋白多糖体は、例えば特公昭46−17149号公
報，特公昭51−36322号公報，特公昭56−14274号
公報，特公昭56−14276号公報，特公昭56−39288
号公報などに記載されている公知の物質であり、
カワラタケ属に属する担子菌を培養して得られる
菌糸体、培養物（Broth）又は子実体の熱水又は
アルカリ性水溶液による抽出物であつて、約18〜
38％の蛋白質を含み、5000〜300000（超遠心分離
測定法）の分子量を有するものである。本発明の
蛋白多糖体のうち、カワラタケ菌糸体［FERM
−P2412（ATCC20547）］由来の蛋白多糖体は、
前記したとおり、クレスチンという商品名で市販
されているものであり（最近の新薬第28集14〜16
ページ，1977年及び第29集96〜101ページ，1978
年、医薬品要覧第1346ページ，昭和54年５月第６
版，薬業時報社発行、医療薬日本医薬品集第７版
第240ページ，1983年，薬業時報社発行）、PS−
Ｋとも呼称されているものであつて、その性状の
一端を示せば次のとおりである。 主要画分の糖部分はβ−Ｄ−グルカンで、この
グルカン部分の構造は１→３，１→４および１→
６結合を含む分枝構造であり、蛋白質の構成アミ
ノ酸は、アスパラギン酸，グルタミン酸等の酸性
アミノ酸とバリン，ロイシン等の中性アミノ酸が
多く、リジン，アルギニン等の塩基性アミノ酸は
少ない。水に可溶で、メタノール，ピリジン，ク
ロロホルム，ベンゼン，ヘキサンには殆んど溶け
ない。約120℃から徐々に分解する。 本発明の活性物質である前記蛋白多糖体は、
PGA，PGB，PGC，PGD，PGE，PGF，PGG，
PGH，PGI等のPGs、TXA、TXB並びにそれら
の代謝産物の調節に関与している。しかも該活性
物質はこれらの１種のみならず数種のPGsの調節
をしている。 該活性物質がPGsとその代謝物の産生を調節す
ることは次のことより示される。 本発明蛋白多糖体は、細胞内メツセンジヤー
としてPGsと密接に関与しているサイクリツク
アデノシンモノホスフエイト（cAMP）のレベ
ルを上昇させる（実施例３参照）。 アラキドン酸を出発物質とするリンパ球の
PGs代謝に関するインビトロ実験で、本発明蛋
白多糖体はPGE₂，PGD₂，６−keto−PGF₁〓，
PGF₂〓の産生に関与している（実施例１参照）。 インビトロで本発明蛋白多糖体が培養癌細胞
のPGE，PGF₂〓の生合成に影響を与える（実施
例４参照）。 担癌動物に本発明蛋白多糖体を投与し、腫瘍
増殖、腫瘍細胞内PGEレベルを測定したとこ
ろ、腫瘍増殖抑制とともに腫瘍細胞内PGEレ
ベルが上昇する（実施例５参照）。また、担癌
動物では血漿中の６−keto−PGF₁〓が顕著に増
大するが、該蛋白多糖体の投与により正常レベ
ルまで回復する（実施例７参照）。 本発明蛋白多糖体の抗不整脈作用が、プロス
タグランジン代謝阻害剤インドメタシンにより
阻止される（実施例８参照）。 本発明の蛋白多糖体は、その毒性が極めて低く
且つ副作用も殆んど生起しないなど、生体に対し
て非常に安全な物質であることが知られている。
本発明の蛋白多糖体の急性毒性値を下記表−１に
示す。

【表】 なお、上掲表−１に示される急性毒性値は、下
記試験法により調べたものである。 マウスはICR−JCL系、４〜５週令、体重21〜
24ｇのものを、ラツトは呑竜系、４〜５週令、体
重100〜150ｇのものを用いた。本発明蛋白多糖体
の投与経路は、静脈内、皮下、腹腔内および経口
の四経路の投与を実施した。本発明の蛋白多糖体
を生理食塩水に溶解して投与し、７日間にわた
り、一般症状、死亡ならびに体重について観察
し、観察期間終了後に屠殺剖検した。 表−１に示されるように、ラツト、マウスとも
投与可能な最大投与量においてもまつたく死亡例
は認められず、LD₅₀値の算定が事実上不可能な
程に、本発明の蛋白多糖体は生体に対して極めて
安全である。 なお、本発明蛋白多糖体の胃腸に対する影響を
体重９〜12Kgのビーグル犬に該蛋白多糖体を５
ｇ／匹量投与して90分後の胃の出血状況を調べる
ことにより調べたが、本発明蛋白多糖体の投与に
よる出血は全くみられなかつた。 このように、本発明の蛋白多糖体は急性毒性も
極めて低く、安全な医薬品であり、プロスタグラ
ンジン調節剤として有用である。 本発明の蛋白多糖体は、プロスタグランジン調
節剤として用いる場合、任意の剤型にすることが
できる。又、投与も各経路で行なわれる。また、
アスピリンやインドメタシンなどの従来のプロス
タグランジン調節剤と併用することができる。 経口投与の場合には、それに適用される錠剤、
顆粒剤、散剤、カプセル剤などは、それらの組成
物中に製剤上一般に使用される結合剤、包含剤、
賦形剤、潤滑剤、崩壊剤、湿潤剤のような添加物
を含有していてもよく、又経口用液体製剤として
用いる場合は、内用水剤、振とう合剤、懸濁液
剤、乳剤、シロツプ剤の形態であつてもよく、又
使用する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であ
つてもよい。さらに、このような液体製剤は普通
用いられる添加剤、保存剤のいずれを含有しても
よい。注射用の場合には、その組成物は安定剤、
緩衝剤、保存剤、等張化剤などの添加剤を含んで
いてもよく、単位投与量アンプル、又は多投与量
容器中で提供される。なお、上記組成物は水溶
液、懸濁液、溶液、油性または水性ビヒクル中の
乳液のような形態であつてもよく、一方活性成分
は使用する前に適当なビヒクルたとえば発熱物質
不含の滅菌した水で再溶解させる粉末であつても
よい。 本発明のプロスタグランジン調節剤は人間及び
動物に経口的または非経口的に投与されるが経口
投与が好ましい。経口的投与は舌下投与を包含す
る。非経口的投与は注射、例えば皮下、筋肉、静
脈注射、点滴などを含む。 本発明のプロスタグランジン調節剤の投与量は
動物か人間により、また年齢、個人差、病状など
に影響されるので、場合によつては下記範囲外の
量を投与する場合も生ずるが、一般に人間を対象
とする場合、本発明活性物質の経口投与量は体重
１Kg、１日当り10〜1000mg、好ましくは20〜600
mgを１回から３回に分けて投与する。 実施例 １ リンパ球に取り込ませたアラキドン酸のPGsへ
の代謝に対するクレスチンの影響 BALB／Ｃマウス脾リンパ球を取り出し、１
×10⁷個／mlに調整し、そこに³H−アラキドン酸
を2μCi添加し、37℃にて90分インキユベートし
た。そのものを３回培地で洗つた。再び１×10⁷
個／mlにして、シリコン化した試験管に２ml分注
した。この試験管を６本用意し、２本はコントロ
ールとし、２本は10μｇ／mlのクレスチンを加
え、残りの２本には100μｇ／mlのクレスチンを
加えた。 37℃で60分インキユベートし、その後０℃にて
1200rpmで５分間遠心分離した。そのペレツトを
とり、２mlの培地を加えたものに、５mlの石油エ
ーテルを入れて振とうした。石油エーテル層を除
去し、残つた水層を、0.5NのHClにてPH3.5に調
整した。 その酸性液を５mlのエーテルにて３回抽出し、
エーテル層を蒸発乾固して、ジアゾメタン溶液に
より、エステルを行なつた。このものをメルク社
の薄層クロマトグラフイーにて、酢酸エチル：イ
ソオクタン：酢酸：水の90：50：20：100の容積
比の混合溶剤にて展開し、分離を行なつた。この
スポツトの同定は標品PGD₂，PGE₂，PGE₂〓，６
−keto−PGE₁〓を用いて行なつた。分離したシリ
カゲル層をかきとつて、液体シンチレター液に懸
濁し、カウントを求め、PGsの変動を調べた。 その結果、クレスチン添加により、PGD₂，
PGE₂のあきらかな変動、６−keto−PGF₁〓，
PGF₂〓の変動がみられた（表−２参照）。

【表】 実施例 ２ 摘出ウサギ空腸のPGs生成に及ぼすクレスチン
の作用 日本在来種雌性ウサギ（体重約２Kg）から空腸
片を摘出し、潅流培養器中でKrebs−
bicarbonate液、37℃，95％O₂＋５％CO₂通気条
件下で30分間インキユベートし、培養液中に遊離
したPGE含量を測定した。空腸摘出２時間前に
クレスチン１ｇ／Kgを経口投与したところ、非投
与群に比し、PGE生成の増加がみられた。 実施例 ３ Sarcoma180腫瘍細胞のcAMPレベルに及ぼす
クレスチンの作用 Sarocma180担癌マウス腹部より腹水型腫瘍を
取り出し、この細胞10⁷個にクレスチン100μｇ／
mlを加え、室温にて５分間培養した。培養終了
後、煮沸、ホモゲナイズ、遠心分離を行ない、得
られた上清中のcAMP含量をGliman法により測
定した。 cAMPレベルは、クレスチン投与群では
118pmol／10⁸個細胞、クレスチン非投与群では
89pmol／10⁸個細胞であつた。 この結果、クレスチンは癌細胞中のcAMPを上
昇させる作用を有していることが認められた。 実施例 ４ 培養癌細胞のPGE，PGF₂〓レベルに及ぼすクレ
スチンの作用 イーグル培養液に10％の牛胎児血清を添加した
培地10mlを、底表面積75cm²の組織培養用ポリスチ
レン製フラスコ（Code No.25110，Corning社製
（USA））に入れ、ヒト単核性白血病培養細胞株
Ｊ−111を５×10⁵個移植し、37℃，５％CO₂，95
％空気条件下で７日間培養を行なつた。培地は、
培養開始後２日目及び４日目に新鮮な培地と交換
した。 クレスチンを50μｇ／mlの濃度で添加した。培
養済培地を４℃，1500rpmで遠心分離し、上清を
得、PGEとPGF₂〓レベルをクリニカルアツセイ社
（USA）の³H−プロスタグランジンＥラジオイ
ムノアツセイキツト及び³Hプロスタグランジン
Ｆラジオイムノアツセイキツトを用いて測定し
た。 その結果、クレスチン添加により培地中の
PGE及びPGF₂〓レベルの減少がみられた（第１図
及び第２図参照）。 実施例 ５ エールリツヒ癌細胞中PGEレベルに及ぼすク
レスチン投与の影響 ８週令の雌性C57BL／６マウスにエールリツ
ヒ癌を１×10⁶個皮下移植し、２週後にエーテル
にてマウスを屠殺し、腫瘍を得た。クレスチンを
腫瘍移植後の翌日から１ｇ／Kgを連日経口投与し
た。 腫瘍組織をハサミにて細くきざみ、ガラスホモ
ゲナイザーに入れ、メチルアルコールを腫瘍１ｇ
当り７ml添加し、０℃でホモゲナイズ後、濾紙濾
過により濾液を得た。この濾液にクロロホルムを
２倍容量入れ、よく混合し、４℃で30分間放置し
た。沈澱した蛋白質を吸収濾過することにより除
き、得た濾液をロータリーエバポレーターで40℃
以上で乾燥させた。この乾固物をクロロホルム，
メタノール，希塩酸（PH2.0）と共に分液ロート
に入れ、よく混合させた後の下層の溶液２mlに溶
解させた。この溶液のPGE含量をクリニカルア
ツセイ社製³HプロスタグランジンＥラジオイム
ノアツセイキツトを用いて測定した。 クレスチン投与群ではPGE含量は4.7nｇ／１ｇ
腫瘍、対照群（クレスチンは投与せず）は1.8n
ｇ／１ｇ腫瘍であつた。 この結果、クレスチン投与群では癌細胞中の
PGEの増量がみられた。 実施例 ６ クレスチンの癌転移防止効果 ８週令の雌性C3H／Heマウス尾静脈より
MH134肝癌細胞２×10⁶個を移植し、２週後に屠
殺し、肺を摘出し、転移巣を計測した。クレスチ
ンを、癌移植の13，７，１時間前および移植後
５，11，17時間後にそれぞれ１ｇ／Kg量を経口投
与した。 クレスチン投与群（10匹平均）では転移陽性率
が60％で転移巣の数が2.1であつたのに対し、対
照群（クレスチン投与せず）（10匹平均）ではそ
れぞれ100％，4.5であつた。 この結果、クレスチン投与により転移陽性率及
び転移巣数の減少が確認された。 実施例 ７ 自然発症高血圧ラツト（SHR）の背部皮下に
メチルコラントレン誘発肉腫細胞１×10⁶個を移
植し、２週後に腹部大静脈より採血を行ない、血
漿を得た。クレスチンを腫瘍移植後24時間目より
13日間、1000mg／Kg量を連日経口投与した。 得られた血漿のエーテル抽出物を薄層クロマト
グラフイー（TLC）にて分離し、メチルオキシ
ムシリル誘導体に導いてから、ガスクロマトグラ
フイー・スペクトラム（GC−MS）により、６
−keto−PGF₁〓の変動を調べた。 担癌クレスチン投与群では６−keto−PGF₁〓の
量が4.4nｇ／血漿mlであつたのに対し、担癌無処
置群（クレスチン投与せず）では11.0nｇ／血漿
mlであつた。因みに、非担癌無処置対照群の６−
keto−PGF₁〓は3.0nｇ／血漿mlであつた。 その結果、腫瘍移植動物では血漿６−keto−
PGF₁〓レベルの上昇がみられたが、腫瘍移植後、
クレスチンを投与した動物では、非担癌正常動物
のそれと同レベルであつた。 実施例 ８ クレスチンの抗不整脈作用 Wistar系雌性ラツト（体重約200ｇ）にウレタ
ンを投与して麻酔せしめた後、不整脈誘起剤であ
るaconitineを50μｇ／Kg静脈内投与することによ
り、不整脈状態を誘起せしめた。aconitine投与
１時間前にクレスチン１ｇ／Kgを経口投与したと
ころ、aconitine投与によるECG（Electro−
diagram）の乱れが正常に回復される傾向がみら
れた。 次に、aconitine投与の１時間及び１分前にプ
ロスタグランジン代謝阻害剤であるインドメタシ
ンを10mg／Kg静脈内投与すると、クレスチンの抗
不整脈作用が消失した。このことからクレスチン
の抗不整脈作用はプロスタグランジンを介してい
ることが示された。 実施例 ９ カプセル剤の作製 圧力式自動充填機を用い、０号硬カプセルにク
レスチンを330mg充填し、カプセルを作製した。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は、実施例４に於ける培養癌
細胞のPGE，PGF₂〓に及ぼす本発明蛋白多糖体の
作用を示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ カワラタケ属に属する担子菌を培養して得ら
   れる菌糸体又は子実体の熱水又はアルカリ性水溶
   液による抽出物であつて、約18〜38％の蛋白質を
   含み、分子量が5000〜300000（超遠心分離測定法）
   である蛋白多糖体を活性成分とするプロスタグラ
   ンジン調節剤。 ２ 前記蛋白多糖体がカワラタケより得られるも
   のであることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   に記載のプロスタグランジン調節剤。