JPH04230628A - 脂質調節薬としての１０員環ラクトンの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、脂質調節薬として用いられる１
０員環ラクトンに関する。

【０００２】血清コレステロール濃度の上昇はそれだけ
でも、または同時に血清トリグリセリドの上昇を伴う場
合も、動脈硬化に対する危険因子であり、これは特に冠
血管硬化、心筋梗塞、抹消血管閉塞の形で現れるが、脳
領域の卒中の形でも現れる。他方、多数の研究から血清
コレステロール濃度を正常化または低下させることによ
りこの危険性は決定的に低下することが知られている。 これはある程度食事によって、またよりいっそう薬物療
法によって影響を受ける可能性がある。同様に、既存の
動脈硬化性の血管変化がまだ回復不能な段階（直接石灰
化）に入っていない限り、著しく高まった血清コレステ
ロールを大幅に低下させることによってこれの退行を誘
発することができる。

【０００３】数十年間にわたって食事上の欠陥が続いて
いた東洋では、集団内の死亡はほぼ５０％以上の症例に
おいて直接または間接に動脈硬化に起因する。従って血
清コレステロールを低下させるために極めて有効であり
、同時に耐容性の良好な薬剤を開発することが極めて望
ましい。従来これに関して用いられていたものは、フィ
ブレート（ｆｉｂｒａｔｅ）類、ニコチン酸、非吸収性
の胆汁酸金属イオン封鎖剤、プロブコール（ｐｒｏｂｕ
ｃｏｌ）、および特にこの数年では競合性ＨＮＧ−Ｃｏ
Ａレダクターゼ抑制薬型のもの、たとえばロバスタチン
（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）型のもの（エンドー（Ｅｎｄ
ｏ，Ａ．Ｊ．），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２８，４０１
（１９８５））であった。

【０００４】本発明者らは、意外にも１０員環ラクトン
が血清コレステロール濃度を低下させうることを見出し
た。

【０００５】従って本発明は、式Ｉの化合物：

【０００
６】

【０００７】（式中、それぞれ無関係にＲ１およびＲ４
は水素およびヒドロキシルであり、Ｒ２およびＲ３はヒ
ドロキシルであり、Ｒ５は水素、ヒドロキシルおよびオ
キソ基であり、そしてＲ２とＲ３、およびＲ３とＲ４は
、それぞれ一緒に二重結合を形成してもよい）を血清コ
レステロールを低下させるための薬剤の製造に使用する
ことに関する。

【０００８】本発明を以下に、特にその好ましい形態に
おいて詳述する。本発明はさらに特許請求の範囲の記載
によって定められる。

【０００９】欧州特許第３３３，０２４号明細書に式Ｉ
の化合物の製法が記載されている。ペニシリウム（Ｐｅ
ｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）菌株、好ましくはＤＳＭ　　４２
０９および４２１０は、この化合物を通常の発酵液中で
合成する。それらは菌糸体および培養ブロスを有機溶剤
で抽出し、次いでクロマトグラフィーにより精製するこ
とにより単離される。

【００１０】式Ｉの化合物は血中脂肪低下作用をもつ。 血清中の動脈硬化性（ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ）リポ蛋
白質ＶＬＤＬおよびＬＤＬはこの化合物によって大幅に
低下するが、血管保護性ＨＤＬに対する作用は極めて弱
い。血管保護指数（ｖａｓｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　　
ｉｎｄｅｘ）ＨＤＬ−コレステロール：ＬＤＬ−コレス
テロールはこうして大幅に増大する。

【００１１】式Ｉの化合物の血中脂肪低下作用は以下の
実験により確認された：初期体重１８０ｇ以上の雄ラッ
トにポリエチレングリコール４００中の式Ｉの被験物質
を摂食により１日１回（朝に）投与した（０．５ｍｌ／
体重１００ｇ）；関連対照群には同量の溶剤のみを投与
した。最終（７日目）投与は採血および屠殺の２４時間
前に行われた。試験中、飼料および水は自由摂取であっ
た。飼料は後眼窩採血の２４時間前に取り除かれ、採血
は軽いエーテル麻酔下に処置期間の前および後（すなわ
ち１日目および８日目）に行われた。血清グルタミン酸
−シュウ酸トランスアミナーゼ（ＳＧＯＴ）、血清グル
タミン酸−ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＳＧＰＴ）
、アルカリホスファターゼ（ａＰ）、ビリルビンおよび
クレアチニンを各動物の血清中において測定した。 １群の動物すべてのプールした血清において、トリグリ
セリドの尺度として全グリセリンを測定した（エッグス
タイン（Ｅｇｇｓｔｅｉｎ，Ｍ．），クロイツ（Ｋｒｅ
ｕｔｚ，Ｆ．Ｈ．）：Ｋｌｉｎ．Ｗｓｃｈｒ．４４，２
６２および２６７（１９６６）；ワーレフェルト（Ｗａ
ｈｌｅｆｅｌｄ，Ａ．Ｗ．），於：ベルグマイヤー（Ｈ
．Ｏ．Ｂｅｒｇｍｅｉｅｒ）著，Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　　
ｄｅｒ　　ｅｎｚｙｍａｔｉｓｃｈｅｎＡｎａｌｙｓｅ
（酵素分析法），第２版，ＩＩ巻，フェルラーク・ヘミ
ー，１９７４，１８７８頁）。採血直後に動物を脊柱捻
挫により屠殺した。肝臓を摘出し、相対肝重量を測定し
た。さらに体重増加および飼料消費量を調べた。統計的
分析はスチュデントのｔ−検定（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ　
　ｔ　　ｔｅｓｔ）により行った。

【００１２】血清リポ蛋白質を分析するために、処置期
間後に１群のラットすべての血清をプールした。血清リ
ポ蛋白質は調製用超遠心機（コントロン（Ｋｏｎｔｒｏ
ｎ）ＴＧＡ、ベックマン、５０．４Ｔｉローター（ｒｏ
ｔｏｒ））により分離された。

【００１３】血清リポ蛋白質の浮遊（コガ（Ｋｏｇａ，
Ｓ．）、ホルウィズ（Ｈｏｒｗｉｔｈ，Ｄ．Ｌ．）およ
びスキャヌ（Ｓｃａｎｕ，Ａ．Ｍ．）：Ｊｏｕｒｎａｌ
　　ｏｆ　　Ｌｉｐｉｄ　　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　　１０
，５７７（１９６９），ハーベル（Ｈａｖｅｌ，Ｒ．Ｊ
．）、エーデル（Ｅｄｅｒ，Ｈ．Ａ．）およびブラグド
ン（Ｂｒａｇｄｏｎ，Ｈ．Ｈ．）：Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎ
ｖｅｓｔ．３４，１３４５（１９５５））を下記の密度
において行った： １．　　ＶＬＤＬ　　　　密度　　　　＜１．００６２
．　　ＬＤＬ　　　　　　密度　　　　１．００６−１
．０４３．　　ＨＤＬ　　　　　　密度　　　　１．０
４−１．２１ベーリンガー／マンハイムからのアッセイ
キットを用いてコレステロールの酵素測定をコドパプ（
ＣＨＯＤＰＡＰ）高性能法により行い（ジーデル（Ｓｉ
ｅｄｅｌ，Ｊ．），シュラムベルガー（Ｓｃｈｌｕｍｂ
ｅｒｇｅｒ，Ｈ．），クローズ（Ｋｌｏｓｅ，Ｓ．），
ツィーゲンホルン（Ｚｉｅｇｅｎｈｏｒｎ，Ｊ．）およ
びワーレフェルト（Ｗａｈｌｅｆｅｌｄ，Ａ．Ｗ．）：
Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
１９，８３８（１９８１））、別個のリポ蛋白質画分に
おいて完全な酵素測定法によりトリグリセリドを測定し
（エッグスタイン（Ｅｇｇｓｔｅｉｎ，Ｍ．），クロイ
ツ（Ｋｒｅｕｔｚ，Ｆ．Ｈ．）：Ｋｌｉｎ．Ｗｓｃｈｒ
．４４，２６２および２６７（１９６６）；ワーレフェ
ルト（Ｗａｈｌｅｆｅｌｄ，Ａ．Ｗ．），於：ベルグマ
イヤー（Ｈ．Ｏ．Ｂｅｒｇｍｅｉｅｒ）著，Ｍｅｔｈｏ
ｄｅｎ　　ｄｅｒ　　ｅｎｚｙｍａｔｉｓｃｈｅｎ　　
Ａｎａｌｙｓｅ（酵素分析法），第２版，ＩＩ巻，フェ
ルラーク・ヘミー，１９７４，１８７８頁）；蛋白質は
ロウリーらの方法により測定された（ロウリー（Ｌｏｗ
ｒｙ，Ｏ．Ｈ．），ローゼボロー（Ｒｏｓｅｂｏｒｏｕ
ｇｈ，Ｎ．Ｊ．），ファル（Ｆａｒｒ，Ａ．Ｌ．），Ｊ
．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９３，２６５（１９５１））
。

【００１４】Ｒ１、Ｒ４およびＲ５がヒドロキシルであ
り、そしてＲ２およびＲ３が一緒に二重結合を形成する
式Ｉの好ましい化合物についての結果を実施例中の表１
−３に挙げる。

【００１５】式Ｉの化合物は、高いコレステロール濃度
に基づく疾病、特に冠血管性心臓病、動脈硬化症および
これに類する疾病の予防および治療に用いられる。また
本発 明は式Ｉの化合物の薬剤組成物に関する。

【００１６】薬剤組成物の調製に際しては、有効物質の
ほかに薬剤学的に受容しうる添加物、たとえば希釈剤お
よび／または賦形剤を用いることもできる。これは有効
物質と混合したのちそれを投与に適した形態に変える、
生理学的に受容しうる物質を意味する。

【００１７】適切な固形または液状製剤の例は、錠剤、
コーティング錠、散剤、カプセル剤、坐剤、シロップ剤
、乳剤、懸濁剤、点滴剤または注射用液剤、および有効
物質の遅延放出製剤である。しばしば用いられる賦形剤
または希釈剤の例として挙げられるものは、種々の糖類
または各種デンプン、セルロース誘導体、炭酸マグネシ
ウム、ゼラチン、動物性および植物性油、ポリエチレン
グリコール、水その他の適切な溶剤、ならびにグルコー
スまたは塩類の添加により等張となしうる含水緩衝液で
ある。

【００１８】さらに、界面活性剤、着色剤および着香剤
、安定剤ならびに保存剤を、本発明による薬剤組成物の
他の添加物として適宜用いることができる。薬理学的に
受容しうる高分子キャリヤー、たとえばポリフェニルピ
ロリドン、または薬剤学的に受容しうる他の添加物、た
とえばシクロデキストリンもしくは多糖類を用いること
もできる。上記化合物は特に胆汁酸と結合する添加物、
殊に胃腸管内で吸収されない無毒性の塩基性アニオン交
換体と組み合わせることができる。

【００１９】上記製剤は経口的に、直腸内に、または非
経口的に投与することができる。製剤を用量単位で調製
することができ、かつ好ましい；特に錠剤、カプセル剤
、坐剤が適切な用量単位の例である。各用量単位は最高
１，０００ｍｇ、好ましくは１０−１００ｍｇの有効成
分を含有しうる。しかしこれ以上または以下の用量単位
を用いることもでき、これは適宜投与前に分割するか、
または複数で用いるべきである。

【００２０】放出を遅延させ、または長期間にわたって
延長するために、たとえば有効物質を粒状でコーティン
グするか、または適切なポリマー、ワックスなどに内包
することにより、経口投与用の用量単位を適宜マイクロ
カプセル化することができる。

【００２１】非経口投与は、筋肉内または皮下注射用の
無菌液剤および懸濁剤などの液状剤形を用いて行うこと
ができる。この型の剤形は、適量の有効物質を生理学的
に受容しうる適切な希釈剤、たとえば水性または油性媒
質に溶解または懸濁させ、そしてこの溶液または懸濁液
を殺菌することにより調製され、その際適宜、適切な安
定剤、乳化剤および／または保存剤および／または酸化
防止剤も用いられる。特に長期間の治療という観点から
経口投与剤形が好ましく、これは前記疾病の予防および
治療をかなり容易にする。

【００２２】上記製剤は一般に慣用される方法により調
製される。投与形式は患者または危険性のある者の体型
、年齢、性および医療状態に依存する。

【００２３】本発明を以下にさらに実施例により説明す
る。

【００２４】

【実施例】

【００２５】

【表１】

【００２６】

【表２】

【００２７】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　［表３］ラット、雄、株：ＨＯＥ　　ＷＩＳＫｆ
（ＳＰＦ　　７１）　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　対照からの変化　　％　　　　動物数　　　　　
　化合物　　　　　　　　　　　　用量　　　　　　　
　体重　　　　相対　　　　　　相対前／後　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｍｇ／　　　
　　　後　　　　　　肝重量　　　　飼料　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｋ
ｇ／日　　　　　　　　　　　　後　　　　　　　　消
費量　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　後　　　　　　５／５　　　
　式Ｉ；　　　　　　　　　　　　　　１５　　　　　
　−３　　　　　　　　　　　　　　　　−１　　　　
　　　　　　　　Ｒ１，Ｒ４，Ｒ５　　　　　　　　　
　　　ヒドロキシル　　　　　　　　　　　　Ｒ２およ
びＲ３　　　　　　　　　　　　二重結合 　　５／５　　　　ロバスタチン　　　　　　　　１０
　　　　　　＋４　　　　　　　　　　　　　　　　＋
８　　５／５　　　　ロバスタチン　　　　　　　　５
０　　　　　　　　０　　　　　　　　　　　　　　　
　＋４　　５／５　　　　ロバスタチン　　　　　　３
００　　　　　　＋１　　　　　　　　　　　　　　　
　＋１１０／１０　　クロフィブレート　　１００　　
　　　　−２　　　　　　＋１９　　　　−２２０／１
９　　対照　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　０表１から明らかなように、式Ｉの化
合物：Ｒ１、Ｒ４およびＲ５がヒドロキシルであり、そ
してＲ２およびＲ３が二重結合を形成するものは、クロ
フィブレート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）のわずか１／７
の使用量で同等に大幅な血清中の動脈硬化性リポ蛋白質
ＶＬＤＬおよびＬＤＬの低下（それらのコレステロール
含量により測定）を生じ、ＨＤＬ画分について生じた低
下はわずか半量であった。その結果、血管保護指数ＨＤ
Ｌ−コレステロール：ＬＤＬ−コレステロールが著しく
増大し、これは同様にクロフィブレートの場合より明ら
かに高い。上記の本発明化合物を使用すると、主として
ＶＬＤＬ中において輸送されるトリグリセリドも顕著に
低下する。競合性ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ抑制薬で
あるロバスタチンは、ＬＤＬ−コレステロールに対する
作用に関しては本発明化合物より明らかに劣り、ＶＬＤ
ＬおよびＨＤＬに対する作用に関してはほぼ等しい。耐
容性パラメーター、すなわち血清酵素ＳＧＯＴ、ＳＧＰ
ＴおよびａＰ、ならびに血清ビリルビンおよび血清クレ
アチニンは本発明化合物によって病的に変化しないのに
対し、ロバスタチンはトランスアミナーゼＳＧＯＴにお
いて用量依存性の、明らかに病的な変化を生じた。体重
増加および飼料消費量は被験化合物においては関連ある
変化を示さないのに対し、クロフィブレートによれば一
般に知られているように相対肝重量が増加した。

【００２８】２．肝細胞培養におけるコレステロール生
合成抑制薬としての生物試験 ＨＥＰ−Ｇ２細胞単層をリポ蛋白質不含の栄養培地中で
適宜な濃度の式Ｉの被験物質と共に１時間前培養する。 １４Ｃ−標識した生合成前駆物質（１４Ｃ）酢酸ナトリ
ウムを添加したのち、インキュベーションを３時間続行
する。次いで一部の細胞を内部基準３Ｈ−コレステロー
ルの添加後にアルカリ加水分解する。加水分解された細
胞からの脂質をクロロホルム／メタノール混合物で抽出
する。この脂質混合物をキャリヤーコレステロールの添
加後に調製用薄層クロマトグラフィーにより分画し、コ
レステロールバンドを染色し、次いで単離し、１４Ｃ−
前駆物質から形成された１４Ｃ−コレステロールの量を
シンチグラフィーにより測定する。アリコートの細胞に
おける細胞蛋白質を測定して、これにより細胞蛋白質ｍ
ｇ当たり単位時間に１４Ｃ−前駆物質から形成された１
４Ｃ−コレステロールの量を計算することができる。対
照は添加された被験物質の抑制作用を比較するために用
いられ、これにより培地中における被験物質の個々のモ
ル濃度においてコレステロール合成の抑制を直接に比較
することができる。細胞培養物の統合性（ｉｎｔｅｇｒ
ｉｔｙ）、および被験物質に暴露されたことによる細胞
損傷の無いことは、形態学的に（光学顕微鏡）評価され
、かつアリコートの細胞培養物につきインキュベーショ
ン培地中への乳酸デヒドロゲナーゼ放出を測定すること
により生化学的に測定される。

【００２９】用いた標準品はロバスタチン（ＩＣ５０：
２．３×１０−８モル濃度）および２５−ヒドロキシコ
レステロール（ＩＣ５０：２．３×１０−７モル濃度）
であった。Ｒ１、Ｒ４およびＲ５がヒドロキシルであり
、Ｒ２およびＲ３が一緒に二重結合を形成する式Ｉの化
合物は１×１０−７モル濃度で生合成を５０％抑制した
；細胞培養物は損傷を受けなかった。

【００３０】３．錠剤の製造 経口投与に適した、下記成分を含有する錠剤はそれ自体
既知の方法で、有効物質および助剤を顆粒化し、次いで
圧縮して錠剤となすことにより製造される。これらの錠
剤はコレステロール濃度の上昇に基づく疾病の処置に１
日２−４回、１錠の用量で用いるのに適している。

【００３１】 成分（１錠当たり）　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　重量（ｍｇ）式Ｉ： 　　Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５　　ヒドロキシル　　Ｒ２および
Ｒ３　　二重結合　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　５０ｍｇラクトース　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　１００ｍｇコーンスター
チ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　３０ｍｇタルク　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３ｍ
ｇコロイドシリカ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
３ｍｇステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２ｍｇ
４．カプセル剤の製造 経口投与に適したカプセル剤は下記成分を含有し、それ
自体既知の方法で、有効物質および助剤を混合し、ゼラ
チンカプセルに充填することにより製造される。これら
のカプセル剤はコレステロール濃度の上昇に基づく疾病
の処置に１日２−４回、１カプセルの用量で用いられる
。

【００３２】 成分（１カプセル当たり）　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　重量（ｍｇ）式Ｉ：

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　血清コレステロールを低下させるため
   の薬剤の製造を目的とした式Ｉの化合物：（式中、それ
   ぞれ無関係にＲ１およびＲ４は水素およびヒドロキシル
   であり、Ｒ２およびＲ３はヒドロキシルであり、Ｒ５は
   水素、ヒドロキシルおよびオキソ基であり、そしてＲ２
   とＲ３、およびＲ３とＲ４は、それぞれ一緒に二重結合
   を形成してもよい）の使用。
2. 【請求項２】　　血清コレステロールを低下させるため
   の薬剤の製造を目的とした式Ｉの化合物：（式中、Ｒ１
   、Ｒ４およびＲ５はヒドロキシルであり、そしてＲ２お
   よびＲ３は一緒に二重結合を形成する）の使用。
3. 【請求項３】　　血清コレステロールを処置するための
   経口投与用薬剤の製造を目的とした、請求項１に記載の
   式Ｉの化合物の使用。