JPH0334997A - リンパ細胞活性化因子、その製造方法及びそれを用いたウィルス抗体の生産方法 - Google Patents
リンパ細胞活性化因子、その製造方法及びそれを用いたウィルス抗体の生産方法Info
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- JPH0334997A JPH0334997A JP1169019A JP16901989A JPH0334997A JP H0334997 A JPH0334997 A JP H0334997A JP 1169019 A JP1169019 A JP 1169019A JP 16901989 A JP16901989 A JP 16901989A JP H0334997 A JPH0334997 A JP H0334997A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
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- C07K—PEPTIDES
- C07K2/00—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、新規なリンパ細胞活性化因子に関するもので
ある。さらに詳しくいえは、本発明は、抗体形成作用を
失うことなくリンパ細胞の増殖促進を行う新規なリンパ
細胞活性化因子、その製造方法及びそれを用いてウィル
ス抗体を生産する方法に関するものである。
ある。さらに詳しくいえは、本発明は、抗体形成作用を
失うことなくリンパ細胞の増殖促進を行う新規なリンパ
細胞活性化因子、その製造方法及びそれを用いてウィル
ス抗体を生産する方法に関するものである。
従来の技術
近午、バイオテクノロジーの発展とともに、体の免疫機
構に作用して、異物に対する防御力を高める効果を有す
る生体応答修飾物質、すなわちＢＲＭ（Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌ Ｒｅ５ｐｏｎｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）がガン
治療との関係から注目されている。ガンは体にとって１
種の異物であり、体の防御力が低下したり、あるいはガ
ン細胞が体の異物監視機構を巧みにすり抜けて生き延び
たりすると、逐次増殖していくことが知られている。
構に作用して、異物に対する防御力を高める効果を有す
る生体応答修飾物質、すなわちＢＲＭ（Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌ Ｒｅ５ｐｏｎｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）がガン
治療との関係から注目されている。ガンは体にとって１
種の異物であり、体の防御力が低下したり、あるいはガ
ン細胞が体の異物監視機構を巧みにすり抜けて生き延び
たりすると、逐次増殖していくことが知られている。
したがって、なんらかの方法で免疫機構をはじめとする
体の防御機能を高めてやると異物であるガンの排除が可
能である。前記ＢＲＭはこのような体の防御機能を高め
る物質であって、種々の因子か見い出されているが、中
でもリンパ球か分泌するリンホカイン、体内のいろいろ
な細胞から分泌されるサイト力イン及びマクロファージ
が産出するモノ力インか注目されている。
体の防御機能を高めてやると異物であるガンの排除が可
能である。前記ＢＲＭはこのような体の防御機能を高め
る物質であって、種々の因子か見い出されているが、中
でもリンパ球か分泌するリンホカイン、体内のいろいろ
な細胞から分泌されるサイト力イン及びマクロファージ
が産出するモノ力インか注目されている。
般に、動物は、その体の中に病原菌やその他の異物が侵
入してくると、免疫担当細胞がこれらを排除し、生体代
謝系を正常に維持しようとする、いわゆる免疫機能を有
している。この免疫担当細胞の中で最もポピユラーなも
のかリンパ球であり、このリンパ球にはＢ細胞とＴ細胞
とがあって、このうち、Ｂ細胞は各種の抗体を産出して
侵入した異物を中和したり、無毒化する作用を有し、こ
の際Ｔ細胞がＢ細胞の抗体生産能力を適切に調節してい
る。
入してくると、免疫担当細胞がこれらを排除し、生体代
謝系を正常に維持しようとする、いわゆる免疫機能を有
している。この免疫担当細胞の中で最もポピユラーなも
のかリンパ球であり、このリンパ球にはＢ細胞とＴ細胞
とがあって、このうち、Ｂ細胞は各種の抗体を産出して
侵入した異物を中和したり、無毒化する作用を有し、こ
の際Ｔ細胞がＢ細胞の抗体生産能力を適切に調節してい
る。
また、外敵を直接殺すナチュラルキラー（ＮＫ）細胞や
細菌や異物を捕捉して食べるマクロファジ（大食細胞）
も免疫担当細胞の１つである。
細菌や異物を捕捉して食べるマクロファジ（大食細胞）
も免疫担当細胞の１つである。
前記リンパ細胞を活性化し、リンパ細胞の増殖や分化を
促進する因子としては、これまで種々のもの、例えばＴ
細胞の増殖やＢ細胞の分化を促進するインターロイキン
１（ＩＬ−１）、Ｔ細胞を増殖させ、かつγ−インター
フェロンなどのリンホカインの分泌を促進するインター
ロイキン２（ＩＬ−２）、Ｂ細胞の増殖を促進するイン
ターロイキン４ （ＩＬ４）、Ｂ細胞の抗体産生細胞へ
の最終的な分化を誘導するインターロイキン５（ＩＬ−
５）、Ｂ細胞を増殖せず、抗体の産生を促進するＢ細胞
分化因子であるインターロイキン６（ＩＬ−６）などが
知られている。
促進する因子としては、これまで種々のもの、例えばＴ
細胞の増殖やＢ細胞の分化を促進するインターロイキン
１（ＩＬ−１）、Ｔ細胞を増殖させ、かつγ−インター
フェロンなどのリンホカインの分泌を促進するインター
ロイキン２（ＩＬ−２）、Ｂ細胞の増殖を促進するイン
ターロイキン４ （ＩＬ４）、Ｂ細胞の抗体産生細胞へ
の最終的な分化を誘導するインターロイキン５（ＩＬ−
５）、Ｂ細胞を増殖せず、抗体の産生を促進するＢ細胞
分化因子であるインターロイキン６（ＩＬ−６）などが
知られている。
しかしながら、これまで知られている細胞分化促進因子
は、Ｂ細胞、Ｔ細胞又はマクロ細胞に対して、それぞれ
特異的に作用するものである上に、細胞の分化が進むに
従って、抗体形成作用のような活性作用が減退するのを
免れないという欠点があった。
は、Ｂ細胞、Ｔ細胞又はマクロ細胞に対して、それぞれ
特異的に作用するものである上に、細胞の分化が進むに
従って、抗体形成作用のような活性作用が減退するのを
免れないという欠点があった。
発明が解決しようとする課題
本発明は、このような従来の細胞活性化因子がもつ欠点
を克服し、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロ細胞のいずれに対し
ても有効で、しかも細胞増殖を促進すると共に抗体形成
の促進も行いうる新規な細胞活性化因子を提供すること
を目的とするものである。
を克服し、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロ細胞のいずれに対し
ても有効で、しかも細胞増殖を促進すると共に抗体形成
の促進も行いうる新規な細胞活性化因子を提供すること
を目的とするものである。
課題を解決するだめの手段
本発明者は、リンパ細胞の分化を促進するのに有効な細
胞活性化因子を得るために鋭意研究を重ねた結果、哺乳
動物の小腸上皮粘膜中にリンパ細胞活性化因子が存在し
、この活性化因子はリンパ細胞の分化を促進すると共に
、意外にもリンパ細胞の抗体形成も促進すること、した
がって、これを利用すれば、エイズウィルスやＢ型肝炎
つィルスヤ流行性感冒ウィルスなどのウィルスに対する
抗体を迅速に生産しうろことを見い出し、この知見に基
づき本発明をなすに至った。
胞活性化因子を得るために鋭意研究を重ねた結果、哺乳
動物の小腸上皮粘膜中にリンパ細胞活性化因子が存在し
、この活性化因子はリンパ細胞の分化を促進すると共に
、意外にもリンパ細胞の抗体形成も促進すること、した
がって、これを利用すれば、エイズウィルスやＢ型肝炎
つィルスヤ流行性感冒ウィルスなどのウィルスに対する
抗体を迅速に生産しうろことを見い出し、この知見に基
づき本発明をなすに至った。
すなわち、本発明は、リンパ細胞の増殖促進作用及び抗
体形成促進作用を有することを特徴とする哺乳動物の小
腸上皮粘膜由来のリンパ細胞活性化因子を提供するもの
である。
体形成促進作用を有することを特徴とする哺乳動物の小
腸上皮粘膜由来のリンパ細胞活性化因子を提供するもの
である。
このリンパ細胞活性化因子は、哺乳動物の小腸」二皮粘
膜をホモジナイザーなとで摩砕し、この摩砕物から超遠
心分離などにより固形分を除いたのち、その」二澄液を
透析処理し、非透析画分を次いで塩析処理して、生成し
た沈殿を回収することにより製造することができる。
膜をホモジナイザーなとで摩砕し、この摩砕物から超遠
心分離などにより固形分を除いたのち、その」二澄液を
透析処理し、非透析画分を次いで塩析処理して、生成し
た沈殿を回収することにより製造することができる。
また、このようにして得たリンパ細胞活性化因子を通常
のウィルス抗体製造用栄養培地に加え、適法に従って培
養すれば、各種ウィルスに対する抗体を迅速に生産する
ことかできる。
のウィルス抗体製造用栄養培地に加え、適法に従って培
養すれば、各種ウィルスに対する抗体を迅速に生産する
ことかできる。
本発明のリンパ細胞活性化因子は、約５，０００〜１０
．０００の範囲の分子量を有し、６０’Ｏの温度で３０
分間熱処理しても破壊されない熱に安定なペプチド群か
ら成っている。そして、このものは哺乳動物の小腸上皮
粘膜から、はじめて得られたものであって、リンパ細胞
の増殖促進作用と共に、抗体形成促進作用を示すという
特徴を有している。
．０００の範囲の分子量を有し、６０’Ｏの温度で３０
分間熱処理しても破壊されない熱に安定なペプチド群か
ら成っている。そして、このものは哺乳動物の小腸上皮
粘膜から、はじめて得られたものであって、リンパ細胞
の増殖促進作用と共に、抗体形成促進作用を示すという
特徴を有している。
本発明のリンパ細胞活性化因子は、哺乳動物の上皮粘膜
から得られるものであるが、この哺乳動物としては、特
に制限はなく、ラン、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサ
ギ、ラット、マウスなどの小腸を利用することができる
。これらの小腸からリンパ細胞活性因子を分離するには
、例えは哺乳動物の体内から取り出した小腸から、レー
ザメスなとを利用して上皮粘膜を剥離したのち、これに
必要に応して適当な媒質例えばＣＭＦ−ＰＢＳ （Ｃａ
ｌｃｉｕ…Ｍｇｎｅｓｉｕｍ Ｆｒｅｅ Ｐｈｏｓｐｈ
ａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ ５ａｌｉｎｅ）を１〜５倍
容の割合で加えて摩砕し、この摩砕物を１０ 、０ＯＯ
Ｃ；以上という超高速で遠心分離する。次いで、このよ
うにして得た上澄液を透析し、非透析画分をコロジオン
膜などを用いて濃縮し、さらに必要に応じて微細フィル
ターを通してろ過し、その中の細菌を除去する。 この
ようにして得られた小腸」二皮粘膜抽出液は、そのまま
でも使用することができるが、これに適当な無機塩例え
は硫酸アンモニウムを加えて塩析することにより、リン
パ細胞活性化因子を沈殿として分離することができる。
から得られるものであるが、この哺乳動物としては、特
に制限はなく、ラン、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサ
ギ、ラット、マウスなどの小腸を利用することができる
。これらの小腸からリンパ細胞活性因子を分離するには
、例えは哺乳動物の体内から取り出した小腸から、レー
ザメスなとを利用して上皮粘膜を剥離したのち、これに
必要に応して適当な媒質例えばＣＭＦ−ＰＢＳ （Ｃａ
ｌｃｉｕ…Ｍｇｎｅｓｉｕｍ Ｆｒｅｅ Ｐｈｏｓｐｈ
ａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ ５ａｌｉｎｅ）を１〜５倍
容の割合で加えて摩砕し、この摩砕物を１０ 、０ＯＯ
Ｃ；以上という超高速で遠心分離する。次いで、このよ
うにして得た上澄液を透析し、非透析画分をコロジオン
膜などを用いて濃縮し、さらに必要に応じて微細フィル
ターを通してろ過し、その中の細菌を除去する。 この
ようにして得られた小腸」二皮粘膜抽出液は、そのまま
でも使用することができるが、これに適当な無機塩例え
は硫酸アンモニウムを加えて塩析することにより、リン
パ細胞活性化因子を沈殿として分離することができる。
本発明のリンパ細胞活性化因子の生理活性は、該因子を
含有する小腸上皮粘膜抽出物を、適当な培地に添加し、
この培地中において、例えはラットやウサギなとの哺乳
動物の肺臓由来リンパ細胞を培養させ、その増殖により
、リンパ細胞の増殖を促進させる機能を有することを確
認することかできるし、また、例えば哺乳動物の静脈に
ヒツジ赤血球などを注射してそのリンパ細胞に抗体を形
成させたのち、この抗体形成リンパ細胞を取り出して、
前記と同様にして培養させ、抗体形成リンパ細胞の増殖
により、リンパ細胞の分化を促進させる機能を有するこ
とか確認できる。
含有する小腸上皮粘膜抽出物を、適当な培地に添加し、
この培地中において、例えはラットやウサギなとの哺乳
動物の肺臓由来リンパ細胞を培養させ、その増殖により
、リンパ細胞の増殖を促進させる機能を有することを確
認することかできるし、また、例えば哺乳動物の静脈に
ヒツジ赤血球などを注射してそのリンパ細胞に抗体を形
成させたのち、この抗体形成リンパ細胞を取り出して、
前記と同様にして培養させ、抗体形成リンパ細胞の増殖
により、リンパ細胞の分化を促進させる機能を有するこ
とか確認できる。
前記培養条件については特に制限はなく、従来動物細胞
の培養において慣用されている方法を用いることができ
、通常２５〜４５°Ｃの範囲の温度において、二酸化炭
素１〜５容量％を含有する空気と二酸化炭素との混合ガ
ス雰囲気下、１〜７日間程度培養することによって行わ
れる。
の培養において慣用されている方法を用いることができ
、通常２５〜４５°Ｃの範囲の温度において、二酸化炭
素１〜５容量％を含有する空気と二酸化炭素との混合ガ
ス雰囲気下、１〜７日間程度培養することによって行わ
れる。
本発明の小腸上皮粘膜由来のリンパ細胞活性化因子は、
哺乳動物のリンパ細胞の増殖を促進させると共に、リン
パ細胞の抗体形成を促進させるなど、リンパ細胞の分化
を促進させる生理活性を有している。したかって、該リ
ンパ細胞活性化因子を含有する培地中において、抗体形
成リンパ細胞を培養することにより、抗体形成リンパ細
胞を容易に増殖させることができる。
哺乳動物のリンパ細胞の増殖を促進させると共に、リン
パ細胞の抗体形成を促進させるなど、リンパ細胞の分化
を促進させる生理活性を有している。したかって、該リ
ンパ細胞活性化因子を含有する培地中において、抗体形
成リンパ細胞を培養することにより、抗体形成リンパ細
胞を容易に増殖させることができる。
次に、ウィルス抗体を製造する好適な方法（Ｍｉｓｈｅ
ｌｌ−Ｄｕｔｔｏｎ法（１９６７午）〕の１例について
説明すると、ますＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ（Ｅａｇｌｅ
の基本培地）中にマウス牌細胞を浮遊させたのち、遠心
分離処理して上澄液を除去し、次いで沈降した細胞に、
細胞濃度がｉｏｘ １０’／ ｍＱ程度になるようにＥ
ａｇｌｅ″ＳＭＥＭを加えて細胞浮遊液を調製する。次
に、これに本発明のリンパ細胞活性化因子を含む液を適
当量加えたのち、さらに抗原としてのウィルス、例えば
インフルエンザウィルスなどを添加し、Ｍｉｓｈｅｌｌ
Ｄｕｔｔｏｎ混合ガス（ＣＯ２１０容量％、０２７容量
％、Ｎ２８３容量％）雰囲気下、ｌ〜７日間程度培養を
行う。なお、培養期間中はウシ胎仔血清の適当量を逐次
添加する。
ｌｌ−Ｄｕｔｔｏｎ法（１９６７午）〕の１例について
説明すると、ますＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ（Ｅａｇｌｅ
の基本培地）中にマウス牌細胞を浮遊させたのち、遠心
分離処理して上澄液を除去し、次いで沈降した細胞に、
細胞濃度がｉｏｘ １０’／ ｍＱ程度になるようにＥ
ａｇｌｅ″ＳＭＥＭを加えて細胞浮遊液を調製する。次
に、これに本発明のリンパ細胞活性化因子を含む液を適
当量加えたのち、さらに抗原としてのウィルス、例えば
インフルエンザウィルスなどを添加し、Ｍｉｓｈｅｌｌ
Ｄｕｔｔｏｎ混合ガス（ＣＯ２１０容量％、０２７容量
％、Ｎ２８３容量％）雰囲気下、ｌ〜７日間程度培養を
行う。なお、培養期間中はウシ胎仔血清の適当量を逐次
添加する。
このようにして、ウィルス抗体産生細胞の増殖が行われ
るが、その増殖程度はプラソク（Ｐｌａｑ）法により抗
体産生細胞数を求めることにより確認することができる
。
るが、その増殖程度はプラソク（Ｐｌａｑ）法により抗
体産生細胞数を求めることにより確認することができる
。
このように、本発明のリンパ細胞活性化因子を用いるこ
とにより、エイズやＢ型肝炎ウィルス、流行性感冒ウィ
ルスなとに対する抗体を大量かつ迅速に生産することか
できる。
とにより、エイズやＢ型肝炎ウィルス、流行性感冒ウィ
ルスなとに対する抗体を大量かつ迅速に生産することか
できる。
発明の効果
本発明のリンパ細胞活性化因子は、ウシ、ウマ、ヒツジ
、ヤギ、ブタ、ウサギ、ラットのように容易に入手可能
な哺乳動物の小腸から簡単に製造することができ、しか
も優れたリンパ細胞分化促進作用及び抗体形成促進作用
を有するので、これまで製造に時間がかかり、予防対策
に応じきれないでいた流行性感冒用のワクチンの製造な
ど迅速性を要するウィルス抗体の製造用として特に有用
である。
、ヤギ、ブタ、ウサギ、ラットのように容易に入手可能
な哺乳動物の小腸から簡単に製造することができ、しか
も優れたリンパ細胞分化促進作用及び抗体形成促進作用
を有するので、これまで製造に時間がかかり、予防対策
に応じきれないでいた流行性感冒用のワクチンの製造な
ど迅速性を要するウィルス抗体の製造用として特に有用
である。
実施例
次に実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
調製例１ ラット肺臓由来リンパ細胞標品の調製ネンブ
クールによる麻酔下のラットを開腹したのち、頚静脈を
切り分けじゃ血し、次いで１０重量％塩化ベンザルコニ
ウム溶液で殺菌処理を行ってから、腹壁を開いて、肺臓
を取り出した。次に、この肺臓から脂肪及び結合組織を
取り除いたのち、臓器を数片に切断し、少量のＲＰＭ１
１６４０が入っている皿に入れ、該臓器からリンパ細胞
をピペッティングにより取り出し、次いで、二重ナイロ
ンクロスを通してろ過して、細胞凝集塊と結合組織を除
去したのち、ろ液を遠心分離管に入れ、１５０Ｇで５分
間遠心分離処理した。
クールによる麻酔下のラットを開腹したのち、頚静脈を
切り分けじゃ血し、次いで１０重量％塩化ベンザルコニ
ウム溶液で殺菌処理を行ってから、腹壁を開いて、肺臓
を取り出した。次に、この肺臓から脂肪及び結合組織を
取り除いたのち、臓器を数片に切断し、少量のＲＰＭ１
１６４０が入っている皿に入れ、該臓器からリンパ細胞
をピペッティングにより取り出し、次いで、二重ナイロ
ンクロスを通してろ過して、細胞凝集塊と結合組織を除
去したのち、ろ液を遠心分離管に入れ、１５０Ｇで５分
間遠心分離処理した。
このようにして集められたリンパ細胞をＲＰＭ１１６４
０培地により洗浄したのち、赤血球を取り除くために、
この細胞にトリス−塩化アンモニウム緩衝液を加えてよ
くかきまぜ、しばらく放置してから、弱い遠心分離処理
を行い、次いで集められた細胞を遠心分離処理により、
ＲＰＭ１１６４０で３回洗浄し、さらに試験培地で１回
洗浄して肺臓由来リンパ細胞の標品を調製した。
０培地により洗浄したのち、赤血球を取り除くために、
この細胞にトリス−塩化アンモニウム緩衝液を加えてよ
くかきまぜ、しばらく放置してから、弱い遠心分離処理
を行い、次いで集められた細胞を遠心分離処理により、
ＲＰＭ１１６４０で３回洗浄し、さらに試験培地で１回
洗浄して肺臓由来リンパ細胞の標品を調製した。
調製例２ ａｎｔｉ−５ＲＢＣ抗体形成リンパ細胞標
品の調製 ヒツジ赤血球（バイオケミカルインダストリー社製）を
雄うノトの尾静脈に注射し、４日後に調製例１と同様に
してこのラットの肺臓からリンパ１ 細胞を採取し、ａｎｔｉ−３ＲＢＣ抗体（抗ヒツジ赤血
球抗体）形成リンパ細胞の標品を調製した。
品の調製 ヒツジ赤血球（バイオケミカルインダストリー社製）を
雄うノトの尾静脈に注射し、４日後に調製例１と同様に
してこのラットの肺臓からリンパ１ 細胞を採取し、ａｎｔｉ−３ＲＢＣ抗体（抗ヒツジ赤血
球抗体）形成リンパ細胞の標品を調製した。
実施例１
牛の腹腔から、−二指腸より回腸にわたる小腸部分を取
り出し、その上皮粘膜をレーザ刃により剥離したのち、
ＣＭＦ−ＰＢＳを用いてホモジナイズし、次いでこのホ
モジネートを１２００ｏｃで３０分間超遠心分離処理し
て上澄液を得、さらにこの上澄液を３０００Ｇで、１０
分間遠心分離処理して固形分を除去した。
り出し、その上皮粘膜をレーザ刃により剥離したのち、
ＣＭＦ−ＰＢＳを用いてホモジナイズし、次いでこのホ
モジネートを１２００ｏｃで３０分間超遠心分離処理し
て上澄液を得、さらにこの上澄液を３０００Ｇで、１０
分間遠心分離処理して固形分を除去した。
次に、このようにして得られた上澄液を氷冷しながら、
２４時間ＣＭＦ−ＰＢＳに対して透析処理したのち、非
透析画分をコロジオンメンプランにより、約５ｍｇタン
パク質／ｍ（ｌ濃度に濃縮し、次いでこれを０．２２μ
ｍのミリポアフィルタ−に通して細菌を除去し、小腸上
皮粘膜抽出物（ＳＩＭＥ）を得た。
２４時間ＣＭＦ−ＰＢＳに対して透析処理したのち、非
透析画分をコロジオンメンプランにより、約５ｍｇタン
パク質／ｍ（ｌ濃度に濃縮し、次いでこれを０．２２μ
ｍのミリポアフィルタ−に通して細菌を除去し、小腸上
皮粘膜抽出物（ＳＩＭＥ）を得た。
前記ＳＩＭＥ３重量％及び新生子ウシ血清（ＮＢＣ５）
３重量％を含有するＲＰＭ１１６４０培地に、調製例１
で得られた肺臓由来リンパ細胞をｌ １． Ｘ ｌ Ｏ
’細胞／ｍＯ，濃度になるように懸濁させ、この懸濁液
２ｍＯ。
３重量％を含有するＲＰＭ１１６４０培地に、調製例１
で得られた肺臓由来リンパ細胞をｌ １． Ｘ ｌ Ｏ
’細胞／ｍＯ，濃度になるように懸濁させ、この懸濁液
２ｍＯ。
２
について、５容量％の二酸化炭素と９５容量％の空気と
の混合ガス雰囲気下、相対湿度１００％、温度３７°Ｃ
の条件で培養を行い、培地中の細胞数を求めた。
の混合ガス雰囲気下、相対湿度１００％、温度３７°Ｃ
の条件で培養を行い、培地中の細胞数を求めた。
なお、細胞数は、９サンプルについての平均値である。
また、培養された細胞中のＤＮＡ含量及び培地中のグル
コース濃度も求めた。なお、対照としてＮＢＣ５３重量
％を含有するＲＰＭ１１６４０培地を用い、同様に実施
した。これらの結果を第１表に示す。
コース濃度も求めた。なお、対照としてＮＢＣ５３重量
％を含有するＲＰＭ１１６４０培地を用い、同様に実施
した。これらの結果を第１表に示す。
第１表
第１表から分かるように、ＳＩＭＥを添加した培地では
、リンパ細胞は増殖し、かつＤＮＡ含量も増加し、さら
にグルコースが消費されている。
、リンパ細胞は増殖し、かつＤＮＡ含量も増加し、さら
にグルコースが消費されている。
リンパ細胞が芽球化、分化、成長を示す際、グルコース
の代謝が促進されることが知られており、ＳＩＭＥを添
加した培地ではグルコース濃度が減少していることから
も、リンパ細胞が増殖していることが分かる。
の代謝が促進されることが知られており、ＳＩＭＥを添
加した培地ではグルコース濃度が減少していることから
も、リンパ細胞が増殖していることが分かる。
実施例２
調製例２で得たａｎｔｉ−５ＲＢＣ抗体が形成された肺
臓由来リンパ細胞を実施例１と同様にして、ＳＩＭＥ３
重量％を含む培地及びＮＢＣ３３重量％を含む培地中で
４日間培養し、１０７細胞／ｍＱの細胞集団を得た。次
いで、この細胞懸濁液０．ｈ＋＋Ｉ２を、１０重量％５
ＲＢＣ０，５＋＋＋Ｑとモルモット補体０．１ｍＱの混
合物に加え、これをカニンガムチャンバーに入れて、チ
ャンバーを密閉し、３７℃で１時間インキュベイトした
のち、溶血抗体形成細胞（ＰＦＣ）の数を求めた。
臓由来リンパ細胞を実施例１と同様にして、ＳＩＭＥ３
重量％を含む培地及びＮＢＣ３３重量％を含む培地中で
４日間培養し、１０７細胞／ｍＱの細胞集団を得た。次
いで、この細胞懸濁液０．ｈ＋＋Ｉ２を、１０重量％５
ＲＢＣ０，５＋＋＋Ｑとモルモット補体０．１ｍＱの混
合物に加え、これをカニンガムチャンバーに入れて、チ
ャンバーを密閉し、３７℃で１時間インキュベイトした
のち、溶血抗体形成細胞（ＰＦＣ）の数を求めた。
その結果、ＰＦＣの数は、ＳＩＭＥとＮＢＣ５を添加し
た培地では１４０／Ｃｈａｍｂｅｒ、 ＳＩＭＥのみを
添加した培地では、１００／Ｃｈａｍｂｅｒ ＮＢＣ５
のみを添加した培地では６８ ／ Ｃｈａｍｂｅｒであ
った・実施例３ 実施例１で得たＳＩＭＨの、飽和硫酸アンモニウム溶液
４０重量％を加え、塩析を行い、形成された沈殿を除い
たのち、さらに飽和硫酸アンモニウム溶液をトータルで
５５重量％になるように加え塩析を行って、形成された
沈殿を除去し、引き続きさせに１・−タルで８０重量％
になるように飽和硫酸アンモニウム溶液を加えて塩析を
行い、形成された沈殿を回収した。
た培地では１４０／Ｃｈａｍｂｅｒ、 ＳＩＭＥのみを
添加した培地では、１００／Ｃｈａｍｂｅｒ ＮＢＣ５
のみを添加した培地では６８ ／ Ｃｈａｍｂｅｒであ
った・実施例３ 実施例１で得たＳＩＭＨの、飽和硫酸アンモニウム溶液
４０重量％を加え、塩析を行い、形成された沈殿を除い
たのち、さらに飽和硫酸アンモニウム溶液をトータルで
５５重量％になるように加え塩析を行って、形成された
沈殿を除去し、引き続きさせに１・−タルで８０重量％
になるように飽和硫酸アンモニウム溶液を加えて塩析を
行い、形成された沈殿を回収した。
このようにして得られた沈殿それぞれを、蒸留水に対し
て透析処理して硫酸アンモニウムを除去し、３種の両分
を得た。
て透析処理して硫酸アンモニウムを除去し、３種の両分
を得た。
これらの画分それぞれ５重量％をＲＰＭ １１６４０培
地に加え、実施例１と同様にして、調製例１で得た肺臓
由来リンパ細胞の培養を行い、細胞数及びグルコース濃
度を求めた。その結果を第２表に示す。
地に加え、実施例１と同様にして、調製例１で得た肺臓
由来リンパ細胞の培養を行い、細胞数及びグルコース濃
度を求めた。その結果を第２表に示す。
なお。画分Ａについて、セントリザルを用いた限外ろ適
法により物性を求めたところ、分子量約５ ５．０００〜１０，０００． ６０°Ｃで３０分間の熱処理で破 壊されない熱に安定なペプチド群であることが分かった
。
法により物性を求めたところ、分子量約５ ５．０００〜１０，０００． ６０°Ｃで３０分間の熱処理で破 壊されない熱に安定なペプチド群であることが分かった
。
第
表
注）画分Ａ
硫酸アンモニウム溶液４０重量％使用
画分Ｂ：
５５重量％使用
画分Ｃ：
８０重量％使用
この結果から、
ＳＩＭＥから塩析により、
リンパ細
６
胞活性化因子の濃縮物が容易に得られることか分かる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ リンパ細胞の増殖促進作用及び抗体形成促進作用を
有することを特徴とする哺乳動物の小腸上皮粘膜由来の
リンパ細胞活性化因子。 ２ 哺乳動物の小腸上皮粘膜を摩砕処理し、得られた摩
砕物から固形分を除いたのち、次いで透析と、その非透
析画分を塩析処理し、生成した沈殿を回収することを特
徴とする請求項１記載のリンパ細胞活性化因子の製造方
法。 ３ 請求項１記載のリンパ細胞活性化因子を含有する培
地中において、ウィルス抗体を培養増殖させることを特
徴とするウィルス抗体の生産方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1169019A JPH0334997A (ja) | 1989-06-30 | 1989-06-30 | リンパ細胞活性化因子、その製造方法及びそれを用いたウィルス抗体の生産方法 |
| CA002019408A CA2019408A1 (en) | 1989-06-30 | 1990-06-20 | Lymphocyte-activating factor, method for the preparation thereof and method for the proliferation of antibody-forming lymphocytes and production of antibody using the same |
| EP90307053A EP0407092A1 (en) | 1989-06-30 | 1990-06-27 | Lymphocyte-activating factor, method for the preparation thereof and method for the proliferation of antibody-forming lymphocytes and production of antibody using the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1169019A JPH0334997A (ja) | 1989-06-30 | 1989-06-30 | リンパ細胞活性化因子、その製造方法及びそれを用いたウィルス抗体の生産方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0334997A true JPH0334997A (ja) | 1991-02-14 |
Family
ID=15878826
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1169019A Pending JPH0334997A (ja) | 1989-06-30 | 1989-06-30 | リンパ細胞活性化因子、その製造方法及びそれを用いたウィルス抗体の生産方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0407092A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0334997A (ja) |
| CA (1) | CA2019408A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01218634A (ja) * | 1988-02-29 | 1989-08-31 | Nippon Shokubai Kagaku Kogyo Co Ltd | 耐水性担体、該担体を含有してなる水処理用触媒および該触媒を用いてなる水処理方法 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0422115A4 (en) * | 1988-06-29 | 1991-07-03 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Identification of human t-lymphocyte epitopes in pathogens for vaccine development |
| AUPS252302A0 (en) * | 2002-05-23 | 2002-06-13 | Glutagen Pty Ltd | Palliative treatment for gluten intolerance |
| RU2514653C1 (ru) * | 2012-12-28 | 2014-04-27 | Елена Владимировна Мартынова | Способ получения лимфоцитов из тонкого кишечника мыши |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3443411A1 (de) * | 1984-11-28 | 1986-05-28 | Eugen Dr. 8000 München Zoubek | Arzneimittel |
-
1989
- 1989-06-30 JP JP1169019A patent/JPH0334997A/ja active Pending
-
1990
- 1990-06-20 CA CA002019408A patent/CA2019408A1/en not_active Abandoned
- 1990-06-27 EP EP90307053A patent/EP0407092A1/en not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01218634A (ja) * | 1988-02-29 | 1989-08-31 | Nippon Shokubai Kagaku Kogyo Co Ltd | 耐水性担体、該担体を含有してなる水処理用触媒および該触媒を用いてなる水処理方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2019408A1 (en) | 1990-12-31 |
| EP0407092A1 (en) | 1991-01-09 |
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