JPH0347839B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0347839B2 JPH0347839B2 JP58151415A JP15141583A JPH0347839B2 JP H0347839 B2 JPH0347839 B2 JP H0347839B2 JP 58151415 A JP58151415 A JP 58151415A JP 15141583 A JP15141583 A JP 15141583A JP H0347839 B2 JPH0347839 B2 JP H0347839B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ammonia
- phenylalanine
- bacterial cells
- cinnamic acid
- alkylglycine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明はＬ−フエニルアラニンの製法に関す
る。Ｌ−フエニルアラニンは必須アミノ酸の一つ
であり、栄養上又は医薬上有用な物質である。 微生物の生産する酵素を用いて、桂皮酸とアン
モニア又はアンモニア供与体からＬ−フエニルア
ラニンを製造する方法は知られている（英国特許
第1489418号公報、特開昭53−96388号公報、特開
昭56−26197号公報など）。 しかしながら、これらの公報に記載されている
方法は、まだ満足すべきものではない。 本発明者らは桂皮酸とアンモニアとから効率良
くＬ−フエニルアラニンを製造する方法について
種々検討した結果、Ｌ−フエニルアラニンアンモ
ニアリアーゼ活性含有物及びアルキルグリシンの
存在下、又は該Ｌ−フエニルアラニンアンモニア
リアーゼ活性含有物のアルキルグリシン処理物の
存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアンモニ
ア供与体とを水性培地中で反応せしめるにより効
率よく、Ｌ−フエニルアラニンが製造されること
を見い出した。 以下に本発明を詳細に説明する。 本発明に用いられる微生物としては、Ｌ−フエ
ニルアラニンアンモニアチアーゼ活性を有する微
生物であれば、いずれも使用される。その具体例
としては、ロドトルラ・ルブラATCC20258、ロ
ドトルラ・テキセンシスIFO932、ロドトルラ・
グリチニスIFO0559、スポロボロマイセス・ロゼ
ウスIFO1040、等があげられる。 上記微生物を培養するための培地としては、炭
素源、窒素源、無機物等を程よく含有しておれば
合成培地、天然培地のいずれも使用可能である。
炭素源としては、グルコース、シエークロース、
廃糖蜜などの糖類、グリセロール、ソルビトー
ル、マンニトール糖の糖アルコール類が使用でき
る。窒素源としては、アンモニア水、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、
酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウム等の各種無
機及び有機のアンモニウム化合物、尿素などの窒
素化合物、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水
分解物、脱脂大豆あるいはその消化物糖の窒素性
有機物質等が使用できる。無機物としては、ナト
リウム、カリウム、マンガン、マグネシウム、カ
ルシウム、銅等の金属の塩類や燐酸、硫酸、硝
酸、塩酸等の塩類が使用できる。 培養は、例えば、PH５〜８、20〜40℃で１〜５
日間行なう。 ついで、得られた上記微生物の培養液、菌体
（例えば、洗浄菌体、乾燥菌体）又はその処理物
（例えば、菌体摩砕物、菌体の自己消化物、菌体
の超音波処理物、菌体を例えばアクリルアミドゲ
ルまたはカラギーナンゲル等により固定化したも
の）を桂皮酸とアンモニア又はアンモニア供与体
に、アルキルグリシンの存在下に作用させるか、
または界面活性剤と接触させた、上記微生物の培
養液、菌体または菌体の処理物を桂皮酸とアンモ
ニアまたはアンモニア供与体に作用させ、Ｌ−フ
エニルアラニンを生成させる。 桂皮酸の濃度としては0.05〜１モル、アンモニ
ア又はアンモニア供与体の濃度としては１〜10モ
ルの範囲である。原料の桂皮酸、アンモニア又は
アンモニア供与体は一括又は間歇的に供給する。
アンモニア供与体としては、酢酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム等のアンモ
ニウム塩があげられる。 本発明で使用されるアルキルグリシンは両性界
面活性剤の一つであり、アルキルグリシン含有物
としてはアノンLG（商品名、日本油脂製）が好適
に用いられる。 アルキルグリシンの添加量は、反応液に対して
0.05〜10W／Ｖ％、好ましくは0.5〜10W／Ｖ％
である。これらは、直接反応液に加えるか、又
は、水溶液として添加することができる。 反応は通常、温度20〜45℃、好ましくは25〜35
℃、PH８〜11、好ましくは９〜10で５〜70時間行
う。反応後、反応液から生成したＬ−フエニルア
ラニンの分離は通常のイオン交換樹脂法、沈澱法
等により行うことができる。 以下に実施例を示す。 実施例 １ ロドトルラ・ルブラATCC20258を酵母エキス
1.0ｇ、ペプトン1.0ｇ、食塩0.5ｇおよびＬ−フエ
ニルアラニン0.05ｇを含む培地100mlで、28℃で
17時間振とう培養した。該培養液から遠心分離し
て得た菌体を0.9％冷食塩水で洗浄の後、遠心分
離して洗浄菌体を得た。該菌体に予め調製したア
ンモニア2.8Mおよび桂皮酸150ｍＭを含有する基
質液（PH＝10）10mlを加え、さらに第１表に示す
界面活性剤の10％水溶液を第１表に示す様に加え
て30℃で５時間反応した。反応後、反応混合物を
遠心分離して、その上澄液をペーパークロマトグ
ラフイー〔展開溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水
＝５：２：２（ｖ／ｖ）〕で分析して、フエニルア
ラニン生成量を測定した。その結果を第１表に示
す。
る。Ｌ−フエニルアラニンは必須アミノ酸の一つ
であり、栄養上又は医薬上有用な物質である。 微生物の生産する酵素を用いて、桂皮酸とアン
モニア又はアンモニア供与体からＬ−フエニルア
ラニンを製造する方法は知られている（英国特許
第1489418号公報、特開昭53−96388号公報、特開
昭56−26197号公報など）。 しかしながら、これらの公報に記載されている
方法は、まだ満足すべきものではない。 本発明者らは桂皮酸とアンモニアとから効率良
くＬ−フエニルアラニンを製造する方法について
種々検討した結果、Ｌ−フエニルアラニンアンモ
ニアリアーゼ活性含有物及びアルキルグリシンの
存在下、又は該Ｌ−フエニルアラニンアンモニア
リアーゼ活性含有物のアルキルグリシン処理物の
存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアンモニ
ア供与体とを水性培地中で反応せしめるにより効
率よく、Ｌ−フエニルアラニンが製造されること
を見い出した。 以下に本発明を詳細に説明する。 本発明に用いられる微生物としては、Ｌ−フエ
ニルアラニンアンモニアチアーゼ活性を有する微
生物であれば、いずれも使用される。その具体例
としては、ロドトルラ・ルブラATCC20258、ロ
ドトルラ・テキセンシスIFO932、ロドトルラ・
グリチニスIFO0559、スポロボロマイセス・ロゼ
ウスIFO1040、等があげられる。 上記微生物を培養するための培地としては、炭
素源、窒素源、無機物等を程よく含有しておれば
合成培地、天然培地のいずれも使用可能である。
炭素源としては、グルコース、シエークロース、
廃糖蜜などの糖類、グリセロール、ソルビトー
ル、マンニトール糖の糖アルコール類が使用でき
る。窒素源としては、アンモニア水、塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、
酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウム等の各種無
機及び有機のアンモニウム化合物、尿素などの窒
素化合物、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水
分解物、脱脂大豆あるいはその消化物糖の窒素性
有機物質等が使用できる。無機物としては、ナト
リウム、カリウム、マンガン、マグネシウム、カ
ルシウム、銅等の金属の塩類や燐酸、硫酸、硝
酸、塩酸等の塩類が使用できる。 培養は、例えば、PH５〜８、20〜40℃で１〜５
日間行なう。 ついで、得られた上記微生物の培養液、菌体
（例えば、洗浄菌体、乾燥菌体）又はその処理物
（例えば、菌体摩砕物、菌体の自己消化物、菌体
の超音波処理物、菌体を例えばアクリルアミドゲ
ルまたはカラギーナンゲル等により固定化したも
の）を桂皮酸とアンモニア又はアンモニア供与体
に、アルキルグリシンの存在下に作用させるか、
または界面活性剤と接触させた、上記微生物の培
養液、菌体または菌体の処理物を桂皮酸とアンモ
ニアまたはアンモニア供与体に作用させ、Ｌ−フ
エニルアラニンを生成させる。 桂皮酸の濃度としては0.05〜１モル、アンモニ
ア又はアンモニア供与体の濃度としては１〜10モ
ルの範囲である。原料の桂皮酸、アンモニア又は
アンモニア供与体は一括又は間歇的に供給する。
アンモニア供与体としては、酢酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム等のアンモ
ニウム塩があげられる。 本発明で使用されるアルキルグリシンは両性界
面活性剤の一つであり、アルキルグリシン含有物
としてはアノンLG（商品名、日本油脂製）が好適
に用いられる。 アルキルグリシンの添加量は、反応液に対して
0.05〜10W／Ｖ％、好ましくは0.5〜10W／Ｖ％
である。これらは、直接反応液に加えるか、又
は、水溶液として添加することができる。 反応は通常、温度20〜45℃、好ましくは25〜35
℃、PH８〜11、好ましくは９〜10で５〜70時間行
う。反応後、反応液から生成したＬ−フエニルア
ラニンの分離は通常のイオン交換樹脂法、沈澱法
等により行うことができる。 以下に実施例を示す。 実施例 １ ロドトルラ・ルブラATCC20258を酵母エキス
1.0ｇ、ペプトン1.0ｇ、食塩0.5ｇおよびＬ−フエ
ニルアラニン0.05ｇを含む培地100mlで、28℃で
17時間振とう培養した。該培養液から遠心分離し
て得た菌体を0.9％冷食塩水で洗浄の後、遠心分
離して洗浄菌体を得た。該菌体に予め調製したア
ンモニア2.8Mおよび桂皮酸150ｍＭを含有する基
質液（PH＝10）10mlを加え、さらに第１表に示す
界面活性剤の10％水溶液を第１表に示す様に加え
て30℃で５時間反応した。反応後、反応混合物を
遠心分離して、その上澄液をペーパークロマトグ
ラフイー〔展開溶媒；ｎ−ブタノール：酢酸：水
＝５：２：２（ｖ／ｖ）〕で分析して、フエニルア
ラニン生成量を測定した。その結果を第１表に示
す。
【表】
す。
実施例 ２ 実施例１と同様に培養して得た培養液200mlを
実施例１と同様の処理をして、洗浄菌体を得た。
該菌体に予め調製したアンモニア8Mおよび桂皮
酸300ｍＭを含有する基質液（PH＝10）10mlを加
え、アノンLG添加又は無添加の条件下、30℃で
反応を行い、フエニルアラニン生成量を経時的に
調べた。その結果を第２表に示す。
実施例 ２ 実施例１と同様に培養して得た培養液200mlを
実施例１と同様の処理をして、洗浄菌体を得た。
該菌体に予め調製したアンモニア8Mおよび桂皮
酸300ｍＭを含有する基質液（PH＝10）10mlを加
え、アノンLG添加又は無添加の条件下、30℃で
反応を行い、フエニルアラニン生成量を経時的に
調べた。その結果を第２表に示す。
【表】
本反応では、桂皮酸の阻害により、反応初期の
反応は無添加と比して大幅な変化はないが、アノ
ンLGの添加により24〜48時間で多量のフエニル
アラニンが生成する。 実施例 ３ 菌体としてロドトルラ・グルチニスIFO0559を
用いた他は、実施例１と同様の方法により、培養
液100mlから、洗浄菌体を得た。該菌体に予め調
製したアンモニア2.8Mおよび桂皮酸230ｍＭを含
有する基質液（PH＝10）10mlと、アノンLG10％
水溶液を第３表の様に加えて、30℃で反応した。
その結果を第３表に示す。
反応は無添加と比して大幅な変化はないが、アノ
ンLGの添加により24〜48時間で多量のフエニル
アラニンが生成する。 実施例 ３ 菌体としてロドトルラ・グルチニスIFO0559を
用いた他は、実施例１と同様の方法により、培養
液100mlから、洗浄菌体を得た。該菌体に予め調
製したアンモニア2.8Mおよび桂皮酸230ｍＭを含
有する基質液（PH＝10）10mlと、アノンLG10％
水溶液を第３表の様に加えて、30℃で反応した。
その結果を第３表に示す。
【表】
アノンLG0.1％の添加量でも効果は顕著であ
り、0.5％以上であれば、フエニルアラニン生成
量は著しく増加する。 実施例 ４ 第４表に示す菌体をNaCl0.5ｇ、Ｌ−フエニル
アラニン0.05ｇおよびコーン・ステイーブ・リカ
ー3.0ｇを含む培地100mg（PH6.0）を用いて28℃
で17時間振とう培養し、実施例１と同様の処理で
洗浄菌体を得た。該菌体に、アンモニア2.9Mお
よび桂皮酸150ｍＭを含有する（PH＝10）10mlを
加え、更に、アノンLG10％水溶液を第４表に示
す如く加えて30℃で８時間反応した。その結果を
第４表に示す。
り、0.5％以上であれば、フエニルアラニン生成
量は著しく増加する。 実施例 ４ 第４表に示す菌体をNaCl0.5ｇ、Ｌ−フエニル
アラニン0.05ｇおよびコーン・ステイーブ・リカ
ー3.0ｇを含む培地100mg（PH6.0）を用いて28℃
で17時間振とう培養し、実施例１と同様の処理で
洗浄菌体を得た。該菌体に、アンモニア2.9Mお
よび桂皮酸150ｍＭを含有する（PH＝10）10mlを
加え、更に、アノンLG10％水溶液を第４表に示
す如く加えて30℃で８時間反応した。その結果を
第４表に示す。
【表】
実施例 ５
実施例１と同様の処理で得た洗浄菌体を、アノ
ンLG2％水溶液を用いて、室温で30分処理した
後、遠心分離し、更に、0.9％冷食塩水10mlで洗
浄し、遠心分離して、アノンLG処理菌体を得た。
この菌体およびアノンLG未処理菌体を用いて、
アンモニア2.8Mおよび桂皮酸150ｍＭを含有する
基質液（PH＝10）を用いて、30℃で反応した。そ
の結果を第５表に示す。
ンLG2％水溶液を用いて、室温で30分処理した
後、遠心分離し、更に、0.9％冷食塩水10mlで洗
浄し、遠心分離して、アノンLG処理菌体を得た。
この菌体およびアノンLG未処理菌体を用いて、
アンモニア2.8Mおよび桂皮酸150ｍＭを含有する
基質液（PH＝10）を用いて、30℃で反応した。そ
の結果を第５表に示す。
【表】
アノンLGの効果は、基質液に添加するだけで
はなく、予め菌体と接触させることによつても、
その効果を発揮しうる。 実施例 ６ 実施例１と同様の処理で、300mlの培養液から
ロドトルラ・ルブラATCC20258の洗浄菌体を採
取し、これをアノンLG2％水溶液20mlで室温下、
30分間、接触処理した。このアノンLG処理菌体
を常法通りにκ−カラギーナンで固定化して、固
定化菌体を得た。この固定化菌体に、アンモニア
2.8Mおよび桂皮酸3.150ｍＭを含有する基質液
（PH＝10）30mlを加えて30℃で48時間反応させ、
経時的にＬ−フエニルアラニンの生成量を調べ
た。比較として、上述と同様の培養液から得た洗
浄菌体およびアノン処理していない固定化菌体を
用いて、同一条件で反応させた。その結果を第６
表に示す。
はなく、予め菌体と接触させることによつても、
その効果を発揮しうる。 実施例 ６ 実施例１と同様の処理で、300mlの培養液から
ロドトルラ・ルブラATCC20258の洗浄菌体を採
取し、これをアノンLG2％水溶液20mlで室温下、
30分間、接触処理した。このアノンLG処理菌体
を常法通りにκ−カラギーナンで固定化して、固
定化菌体を得た。この固定化菌体に、アンモニア
2.8Mおよび桂皮酸3.150ｍＭを含有する基質液
（PH＝10）30mlを加えて30℃で48時間反応させ、
経時的にＬ−フエニルアラニンの生成量を調べ
た。比較として、上述と同様の培養液から得た洗
浄菌体およびアノン処理していない固定化菌体を
用いて、同一条件で反応させた。その結果を第６
表に示す。
Claims (1)
- １ Ｌ−フエニルアラニンアンモニアリアーゼ活
性を有する微生物の培養物、菌体もしくはその処
理物（以下「Ｌ−フエニルアラニンアンモニアリ
アーゼ活性含有物」という）及びアルキルグリシ
ンの存在下、又は該Ｌ−フエニルアラニンアンモ
ニアリアーゼ活性含有物のアルキルグリシン処理
物の存在下に、桂皮酸とアンモニアもしくはアン
モニア供与体とを水性培地中で反応せしめてＬ−
フエニルアラニンを生成せしめ、これを採取する
ことを特徴とするＬ−フエニルアラニンの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15141583A JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | Ｌ−フエニルアラニンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15141583A JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | Ｌ−フエニルアラニンの製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6043393A JPS6043393A (ja) | 1985-03-07 |
| JPH0347839B2 true JPH0347839B2 (ja) | 1991-07-22 |
Family
ID=15518109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15141583A Granted JPS6043393A (ja) | 1983-08-19 | 1983-08-19 | Ｌ−フエニルアラニンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6043393A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61247395A (ja) * | 1985-04-23 | 1986-11-04 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Ｌ−フェニルアラニンの製造法 |
| US5981239A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-09 | Great Lakes Chemical Corp. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs using Rhodotorula graminis |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5626197A (en) * | 1979-08-09 | 1981-03-13 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Preparation of l-phenylalanine |
-
1983
- 1983-08-19 JP JP15141583A patent/JPS6043393A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6043393A (ja) | 1985-03-07 |
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