JPH055478B2 - - Google Patents
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- JPH055478B2 JPH055478B2 JP26585884A JP26585884A JPH055478B2 JP H055478 B2 JPH055478 B2 JP H055478B2 JP 26585884 A JP26585884 A JP 26585884A JP 26585884 A JP26585884 A JP 26585884A JP H055478 B2 JPH055478 B2 JP H055478B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ammonium
- phenylalanine
- acid
- urea
- medium
- Prior art date
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- Expired - Lifetime
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
産業上の利用分野
本発明は微生物を用いるＬ−フエニルアラニン
の製造法に関する。 従来の技術 従来、フエニルピルビン酸を基質とする酵素法
によるＬ−フエニルアラニンの製法としては、各
種微生物菌体に、フエニルピルビン酸とアミノ基
供与体としての各種アミノ酸類を作用せしめる方
法（Amino Acids、第２巻、18頁、1960年；特
公昭37−10672号公報；Amino Acids、第５巻、
61頁、1962年；特公昭45−20556号公報）、コリネ
バクテリウム属細菌の菌体にフエニルピルビン酸
とナイロン環状オリゴマー（特公昭44−17991号
公報）、ナイロン６加水分解物（特公昭44−17992
号公報）あるいはラクタム（特公昭44−17990号
公報）を作用せしめる方法が知られている。 発明が解決しようとする問題点 従来の方法においては、用いるアミノ基供与体
原料が高価である上に、Ｌ−フエニルアラニンの
収量もまだ満足すべきものではない。常に優れた
Ｌ−フエニルアラニンの製造方法が求められてい
る。 問題を解決するための手段 本発明によると、フマール酸及びアンモニウム
イオン又は尿素の存在下、フエニルピルビン酸を
Ｌ−フエニルアラニンに変換する能力を有する微
生物を用いることにより著量のＬ−フエニルアラ
ニンを得ることができる。 本発明に用いられる微生物としては、フマール
酸及びアンモニウムイオン又は尿素の存在下にフ
エニルピルビン酸をＬ−フエニルアラニンに変換
する能力を有するアスロバクター属、バチルス
属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム
属、フラボバクテリウム属、クレブシエラ属、ク
ルイベラ属又はミクロコツカス属に属する微生物
であれば、野生株、変異株、細胞融合法あるいは
遺伝子操作法その他の遺伝的手法で誘導される組
換え株等いずれも用いられ、具体的には、アース
ロバクター・グロビホルミス（Arthrobacter
globiformis）ATCC8010、バチルス・スフエリ
カス（Bacillus sphaericus）ATCC10208、ブレ
ビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
（Brevibacterium lactofermentum）
ATCC13655、コリネバクテリウム・ハイドロカ
ーボクラスタム（Corynebacterium
hydrocarboclastum）ATCC15108、フラボバク
テリウム・スアベオレンス（Flavobacterium
suaneolens）ATCC958、クレブシエラ・オキシ
トカ（Klebsiella oxytoca）ATCC8724、クルイ
ベラ・クリオレセンス（Kluyvera cryorescens）
ATCC14237、ミクロコツカス・ルテウス
（Micrococcus luteus）ATCC10240等があげら
れる。 これらの微生物を培地に培養して、Ｌ−フエニ
ルアラニンを得る培地としては、炭素源、窒素
源、無機塩などを含む培地であれば、天然培地、
人口培地のいずれでもよい。 炭素源としては、グルコース、フラクトース、
シユークロース、マルトース、澱粉、廃糖蜜など
の糖類、グリセロール、ソルビトール、マンニト
ール等の糖アルコール類、酢酸、ギ酸、フマール
酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸等の有機酸
類メタノール、エタノール、プロパノール等のア
ルコール類が使用される。 窒素源としては、アンモニア水、塩化アンモニ
ウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢
酸アンモニウム、燐酸アンモニウム等のアンモニ
ウム化合物、尿素等の窒素化合物、グルタミン
酸、アスパラギン酸、メチオニン、グリシン、リ
ジン、アルギニン、オルニチン等のアミノ酸類、
ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解物、脱
脂大豆あるいはその消化物等の天然栄養物が使用
される。 無機物としては、リン酸第一カリウム、リン酸
第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネ
シウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マン
ガン、炭酸カルシウム等が使用される。本発明に
使用する微生物が生育のために特定の栄養素を必
要とする場合には、その栄養素を適量培地中に存
在させなければならないが、これらの物質は窒素
源として例示した天然物に含まれて添加される場
合もある。 フエニルピルビン酸、フマール酸及びアンモニ
ウムイオン又は尿素は前記培地に最初から加えら
れてもよいし、又微生物の培養途中で加えられて
もよい。 フエニルピルビン酸およびフマール酸は、アン
モニウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシ
ウム塩等の各種の塩として使用される。 アンモニウムイオンは、硫酸アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウ
ム、フマール酸アンモニウム、リンゴ酸アンモニ
ウム等の塩類として、あるいはアンモニア水ある
いはアンモニアガスとして供給される。 培養は、温度20〜40℃，PH５〜８で１〜５日間
行う。かくして、培養液中にＬ−フエニルアラニ
ンが生成する。 次に、前記微生物の菌体を得る場合の培地組成
及び培養条件としては、前記組成の培地及び培養
条件が用いられる。 かくして得られる微生物菌体はそのまま反応に
使用できるし、さらに該菌体を種々処理して得ら
れる処理物を反応に用いてもよい。 微生物菌体としては、菌体の機械的摩砕処理
物、超音波処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理
物、酵素処理物、乾燥処理物、界面活性剤処理
物、菌体の蛋白質分画、菌体及び菌体処理物の固
定化物等が用いられる。 反応は水性液中、前記で得られる菌体もしくは
その処理物をフエニルピルビン酸、フマール
酸及びアンモニウムイオン又は尿素に使用する
ことによつて行われる。 反応に使用するフエニルピルビン酸、フマール
酸及びアンモニウムイオンとしては前記と同じも
のが用いられる。 反応に使用するフエニルピルビン酸の濃度とし
ては、0.01〜１モル、フマール酸の濃度としては
0.01〜２モル、アンモニウムイオンもしくは尿素
の濃度としては0.01〜10モルの範囲である。 これらの原料は、一括または間歇的に供給され
る。 作用条件としては、温度20〜60℃、好ましくは
25〜45℃，PH６〜10、好ましくは７〜９で、10〜
48時間行う。 かくして、水性液中にＬ−フエニルアラニンが
生成する。 培養液もしくは水性液中からＬ−フエニルアラ
ニンを回収する方法としては、イオン交換樹脂
法、沈殿法等が用いられる。 以下に実施例を示す。 実施例 １ グルコース0.5％、酵母エキス0.3％、粉末肉エ
キス1.5％の組成の培地（PH7.0）10mlを含む試験
管に、第１表に示す微生物を１エーゼ宛接種し、
210rpmの振盪条件、28℃の温度条件下で18時間
振動培養する。 培養終了後、遠心分離により集菌し、菌体を凍
結保存（−20℃）する。１日凍結保存後、10mlの
0.85％食塩溶液を試験管に加え、融解後、遠心及
び洗浄を行う。得られた菌体を、下記組成の反応
液1.5mlに懸濁し、40℃の静置条件下で、18時間
反応させたところ、各々の微生物が第１表に示す
濃度のＬ−フエニルアラニンを生成した。 反応液の組成は次のとおり；β−フエニルピル
ビン酸ナトリウム100mM、ピリドキサールリン
酸200μM、トリスバツフアー100mM（PH8.4）、フ
マール酸アンモニウム200mM。
の製造法に関する。 従来の技術 従来、フエニルピルビン酸を基質とする酵素法
によるＬ−フエニルアラニンの製法としては、各
種微生物菌体に、フエニルピルビン酸とアミノ基
供与体としての各種アミノ酸類を作用せしめる方
法（Amino Acids、第２巻、18頁、1960年；特
公昭37−10672号公報；Amino Acids、第５巻、
61頁、1962年；特公昭45−20556号公報）、コリネ
バクテリウム属細菌の菌体にフエニルピルビン酸
とナイロン環状オリゴマー（特公昭44−17991号
公報）、ナイロン６加水分解物（特公昭44−17992
号公報）あるいはラクタム（特公昭44−17990号
公報）を作用せしめる方法が知られている。 発明が解決しようとする問題点 従来の方法においては、用いるアミノ基供与体
原料が高価である上に、Ｌ−フエニルアラニンの
収量もまだ満足すべきものではない。常に優れた
Ｌ−フエニルアラニンの製造方法が求められてい
る。 問題を解決するための手段 本発明によると、フマール酸及びアンモニウム
イオン又は尿素の存在下、フエニルピルビン酸を
Ｌ−フエニルアラニンに変換する能力を有する微
生物を用いることにより著量のＬ−フエニルアラ
ニンを得ることができる。 本発明に用いられる微生物としては、フマール
酸及びアンモニウムイオン又は尿素の存在下にフ
エニルピルビン酸をＬ−フエニルアラニンに変換
する能力を有するアスロバクター属、バチルス
属、ブレビバクテリウム属、コリネバクテリウム
属、フラボバクテリウム属、クレブシエラ属、ク
ルイベラ属又はミクロコツカス属に属する微生物
であれば、野生株、変異株、細胞融合法あるいは
遺伝子操作法その他の遺伝的手法で誘導される組
換え株等いずれも用いられ、具体的には、アース
ロバクター・グロビホルミス（Arthrobacter
globiformis）ATCC8010、バチルス・スフエリ
カス（Bacillus sphaericus）ATCC10208、ブレ
ビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
（Brevibacterium lactofermentum）
ATCC13655、コリネバクテリウム・ハイドロカ
ーボクラスタム（Corynebacterium
hydrocarboclastum）ATCC15108、フラボバク
テリウム・スアベオレンス（Flavobacterium
suaneolens）ATCC958、クレブシエラ・オキシ
トカ（Klebsiella oxytoca）ATCC8724、クルイ
ベラ・クリオレセンス（Kluyvera cryorescens）
ATCC14237、ミクロコツカス・ルテウス
（Micrococcus luteus）ATCC10240等があげら
れる。 これらの微生物を培地に培養して、Ｌ−フエニ
ルアラニンを得る培地としては、炭素源、窒素
源、無機塩などを含む培地であれば、天然培地、
人口培地のいずれでもよい。 炭素源としては、グルコース、フラクトース、
シユークロース、マルトース、澱粉、廃糖蜜など
の糖類、グリセロール、ソルビトール、マンニト
ール等の糖アルコール類、酢酸、ギ酸、フマール
酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸等の有機酸
類メタノール、エタノール、プロパノール等のア
ルコール類が使用される。 窒素源としては、アンモニア水、塩化アンモニ
ウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、酢
酸アンモニウム、燐酸アンモニウム等のアンモニ
ウム化合物、尿素等の窒素化合物、グルタミン
酸、アスパラギン酸、メチオニン、グリシン、リ
ジン、アルギニン、オルニチン等のアミノ酸類、
ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解物、脱
脂大豆あるいはその消化物等の天然栄養物が使用
される。 無機物としては、リン酸第一カリウム、リン酸
第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネ
シウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マン
ガン、炭酸カルシウム等が使用される。本発明に
使用する微生物が生育のために特定の栄養素を必
要とする場合には、その栄養素を適量培地中に存
在させなければならないが、これらの物質は窒素
源として例示した天然物に含まれて添加される場
合もある。 フエニルピルビン酸、フマール酸及びアンモニ
ウムイオン又は尿素は前記培地に最初から加えら
れてもよいし、又微生物の培養途中で加えられて
もよい。 フエニルピルビン酸およびフマール酸は、アン
モニウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシ
ウム塩等の各種の塩として使用される。 アンモニウムイオンは、硫酸アンモニウム、リ
ン酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、酢酸アンモニウム、ギ酸アンモニウ
ム、フマール酸アンモニウム、リンゴ酸アンモニ
ウム等の塩類として、あるいはアンモニア水ある
いはアンモニアガスとして供給される。 培養は、温度20〜40℃，PH５〜８で１〜５日間
行う。かくして、培養液中にＬ−フエニルアラニ
ンが生成する。 次に、前記微生物の菌体を得る場合の培地組成
及び培養条件としては、前記組成の培地及び培養
条件が用いられる。 かくして得られる微生物菌体はそのまま反応に
使用できるし、さらに該菌体を種々処理して得ら
れる処理物を反応に用いてもよい。 微生物菌体としては、菌体の機械的摩砕処理
物、超音波処理物、凍結乾燥処理物、溶媒処理
物、酵素処理物、乾燥処理物、界面活性剤処理
物、菌体の蛋白質分画、菌体及び菌体処理物の固
定化物等が用いられる。 反応は水性液中、前記で得られる菌体もしくは
その処理物をフエニルピルビン酸、フマール
酸及びアンモニウムイオン又は尿素に使用する
ことによつて行われる。 反応に使用するフエニルピルビン酸、フマール
酸及びアンモニウムイオンとしては前記と同じも
のが用いられる。 反応に使用するフエニルピルビン酸の濃度とし
ては、0.01〜１モル、フマール酸の濃度としては
0.01〜２モル、アンモニウムイオンもしくは尿素
の濃度としては0.01〜10モルの範囲である。 これらの原料は、一括または間歇的に供給され
る。 作用条件としては、温度20〜60℃、好ましくは
25〜45℃，PH６〜10、好ましくは７〜９で、10〜
48時間行う。 かくして、水性液中にＬ−フエニルアラニンが
生成する。 培養液もしくは水性液中からＬ−フエニルアラ
ニンを回収する方法としては、イオン交換樹脂
法、沈殿法等が用いられる。 以下に実施例を示す。 実施例 １ グルコース0.5％、酵母エキス0.3％、粉末肉エ
キス1.5％の組成の培地（PH7.0）10mlを含む試験
管に、第１表に示す微生物を１エーゼ宛接種し、
210rpmの振盪条件、28℃の温度条件下で18時間
振動培養する。 培養終了後、遠心分離により集菌し、菌体を凍
結保存（−20℃）する。１日凍結保存後、10mlの
0.85％食塩溶液を試験管に加え、融解後、遠心及
び洗浄を行う。得られた菌体を、下記組成の反応
液1.5mlに懸濁し、40℃の静置条件下で、18時間
反応させたところ、各々の微生物が第１表に示す
濃度のＬ−フエニルアラニンを生成した。 反応液の組成は次のとおり；β−フエニルピル
ビン酸ナトリウム100mM、ピリドキサールリン
酸200μM、トリスバツフアー100mM（PH8.4）、フ
マール酸アンモニウム200mM。
【表】
実施例 ２
クレブシエラ・オキシトカATCC8724を使用
し、反応液の組成を下記の如く変えた他は実施例
１と同様に行つた結果反応液中に3.5mg／mlのＬ
−フエニルアラニンが生成した。 反応液組成：β−フエニルピルビン酸ナトリウ
ム100mM、ピリドキサールリン酸200μM、フマ
ール酸ナトリウム100mM、尿素100mM、トリス
バツフアー100mM（PH8.4） 発明の効果 本発明方法により著量のＬ−フエニルアラニン
を得ることができる。
し、反応液の組成を下記の如く変えた他は実施例
１と同様に行つた結果反応液中に3.5mg／mlのＬ
−フエニルアラニンが生成した。 反応液組成：β−フエニルピルビン酸ナトリウ
ム100mM、ピリドキサールリン酸200μM、フマ
ール酸ナトリウム100mM、尿素100mM、トリス
バツフアー100mM（PH8.4） 発明の効果 本発明方法により著量のＬ−フエニルアラニン
を得ることができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ アースロバクター属、バチルス属、ブレビバ
クテリウム属、コリネバクテリウム属、フラボバ
クテリウム属、クレブシエラ属、クルイベラ属又
はミクロコツカス属に属し、フマール酸及び
アンモニウムイオン又は尿素の存在下フエニルピ
ルビン酸をＬ−フエニルアラニンに変換する能力
を有する微生物を、 Ａ (イ)フエニルピルビン酸(ロ)フマール酸及び(ハ)ア
ンモニウムイオン又は尿素の存在下に培地に培
養することにより、又は Ｂ 培地に培養して得られる菌体もしくはその処
理物及び前記(イ)、(ロ)及び(ハ)を含有する水性液中
で反応させ、 培養液もしくは水性液中にＬ−フエニルアラニ
ンを生成させこれを採取することを特徴とするＬ
−フエニルアラニンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26585884A JPS61141893A (ja) | 1984-12-17 | 1984-12-17 | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26585884A JPS61141893A (ja) | 1984-12-17 | 1984-12-17 | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61141893A JPS61141893A (ja) | 1986-06-28 |
| JPH055478B2 true JPH055478B2 (ja) | 1993-01-22 |
Family
ID=17423060
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26585884A Granted JPS61141893A (ja) | 1984-12-17 | 1984-12-17 | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61141893A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4783403A (en) * | 1984-02-08 | 1988-11-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing l-phenylalanine |
-
1984
- 1984-12-17 JP JP26585884A patent/JPS61141893A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61141893A (ja) | 1986-06-28 |
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