JPH0348794B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

この発明は、発酵法によるＬ−グルタミン酸の
製造法に関する。 従来知られているＬ−グルタミン酸生産菌は、
本発明者らの知見によれば、特定の培地ではＬ−
グルタミン酸を唯一の炭素源として生育すること
ができるが、本発明者らは、このような特定の培
地においてもＬ−グルタミン酸を唯一の炭素源と
して生育できないような変異株が、従来のＬ−グ
ルタミン酸生産菌より高い収率でＬ−グルタミン
酸を生産することを知つた。 この発明はこの知見に基いて完成されたもので
ある。 本発明の変異株を誘導するために用いられる原
株は、ブレビバクテリウム属のＬ−グルタミン酸
生産菌であり、例えば以下のものがある。 ブレビバクテリウム・デイバリカタム
ATCC14020 ブレビバクテリウム・フラバム ATCC14067 ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタム
ATCC13869 ブレビバクテリウム・ロゼウム ATCC13825 ブレビバクテリウム・サツカロリテイカム
ATCC14066 これらの原株はいずれも下記のＬ−グルタミン
酸を炭素源とする培地によく生育することができ
る。 Ｌ−グルタミン酸を炭素源とする培地：１中
Ｌ−グルタミン酸ソーダ7.0ｇ、アンモニア水1.0
ml、KH₂PO₄1.0ｇ、MgSO₄・7H₂O0.4ｇ、
FeSO₄・7H₂O10mg、MnSO₄・4H₂O8mg、サイア
ミン塩酸塩100μｇ、ビオチン30μｇ及び寒天を含
み、PH7.0にKOHにて調節した培地。 本発明の変異株は、上記のようなＬ−グルタミ
ン酸を炭素源とする培地（但し変異株が栄養要求
性を有している場合には、生育に必要な栄養素の
必要最少限量を当然含有しなければならない）に
も生育することができない。 このような変異株は、原株をＮ−メチル−
N′−ニトロ−Ｎ−ニトログアニジンに接触せし
める等、通常の変異処理により得られる。 本発明の変異株がＬ−グルタミン酸を炭素源と
して生育できないという性質のほかに、従来Ｌ−
グルタミン酸の生産性を高めることが知られてい
る性質、例えば薬剤耐性（モノフルオロ酢酸耐
性、ケトマロン酸耐性等）、栄養要求性、薬剤感
受性等、を有していれば、一層Ｌ−グルタミン酸
の生産性が高くなることが多い。 本発明の変異株を具体的に例示すれば、 ブレビバクテリウム・フラバム AJ11664 （FERM−Ｐ 5878 ）がある。 この変異株の具体的な誘導方法と、Ｌ−グルタ
ミン酸を唯一の炭素源とする寒天培地上での生育
度を示す実験結果以下に示す。 本発明者らの知見によれば、従来知られている
Ｌ−グルタミン酸生産菌を生産培地中で長時間培
養しても一旦生成したグルタミン酸は全く消費さ
れない。にも拘らず、上記変異株が高収率で生産
するのは、生成グルタミン酸の分解能除去とは全
く別のメカニズムによるものと考えられる。 実施例 １ ブレビバクテリウム・フラバムATCC14067の
生菌体をニトロソグアニジン850μｇ／mlで30℃、
15分処理することにより変異株を誘導後レプリカ
法により下記のグルタミン酸を唯一の炭素源とす
る寒天培地上で全く生育しないが、コハク酸を唯
一の炭素源とする培地（第１表に示す）によく生
育する変異株ブレビバクテリウム・フラバム
AJ11664を分離した。 実施例 ２ AJ11664及び対照としてATCC14067をＬ−グ
ルタミン酸を唯一の炭素源とする第１表に記載の
グルタミン酸培地に培養して、その生育度を測定
した。対照としてグルタミン酸培地の7.0ｇ／
のＬ−グルタミン酸にかえて、5.0ｇ／のコハ
ク酸にかえたコハク酸培地を用いてAJ11664及び
ATCC14067を培養した。 試験菌株をペプトン1.0ｇ／dl、酵母エキス1.0
ｇ／dl、氷酢酸0.1ｇ／dl、食塩0.5ｇ／dl及び寒
天２ｇ／dlを含むスラント培地上に培養し、これ
を第１表に示す培地（プレート）にぬりつけ、30
℃にて培養した。48時間後の生育度を観察して第
２表に示す。

【表】

【表】 −：生育せず
：良好な生育
：極めて良好な生育
尚、コハク酸培地の5.0ｇ／のコハク酸を、
5.0ｇ／のフマール酸、リンゴ酸、酢酸、グル
コース又はアスパラギン酸にかえてAJ11664又は
ATCC14067を上記と同じ方法で培養したところ、
いずれの菌も、すべての培地において良好又は極
めて良好な生育を示した。 かかる微生物をもちいて、Ｌ−グルタミン酸を
生産せしめるには特に困難はなく、炭素源、窒素
源及び無機塩類、更に必要あれば生育促進物質、
要求栄養物質等の有機微量栄養素を含む通常の栄
養培地を用いて常法により行う。 もちいる炭素源としては、グルコース、糖蜜、
デンプン加水分解物などの糖類、酢酸、コハク酸
などの有機酸、エチルアルコールなどのアルコー
ル類などが使用できる。窒素源としては硫安、硝
安、尿素、アンモニア水、アンモニアガスなどが
使用できる。更にビオチン量を適切に調節した
り、ペニシリン等の抗生物質、脂肪酸エステル系
界面活性剤等の添加は良好な結果ももたらす。 培養は好気的条件下で行うのがよく、培養温度
は30〜40℃、培養PHは５〜９の範囲の特定の温
度、PHに調節しつつ行うのが望ましい。 炭素源、窒素源は分割又は、連続的に添加して
もよい。かくして１ないし７日も培養すれば培養
液中に著量のＬ−グルタミン酸が生成蓄積され
る。 培養液中に蓄積されたＬ−グルタミン酸を採取
するには、鉱酸の添加による晶析法、イオン交換
樹脂法等常法により行われる。 以下実施例により本発明を具体的に説明する。 実施例 １ ブレビバクテリウム・フラバムAJ11664又は
ATCC14067を0.5％のグルコースを含有するブイ
ヨン斜面培地で30℃にて24時間培養後、下記組成
の培地50mlを注入した500ml容振盪フラスコへ接
種して、30℃で２日間振盪培養したところ、第３
表に示すように培養液中にＬ−グルタミン酸が生
成蓄積された。 培地組成 グルコース 3.6ｇ／dl 尿 素 1.0ｇ／dl KH₂PO₄ 0.1ｇ／dl MgSO₄・7H₂O 0.04ｇ／dl FeSO₄・7H₂O 0.001ｇ／dl MnSO₄・4H₂O 0.00081ｇ／dl ビタミンB₁塩酸塩 10.0μｇ／dl ビオチン 0.15mg／dl カゼイン分解物 0.1％ （デイフコ製カザミノ酸） PH 7.0

【表】 実施例 ２ ブレビバクテリウム・フラバムAJ11664又は
ATCC14067（親株）を0.5％のグルコースを含有
するブイヨン斜面培地で30℃にて24時間培養後、
下記組成の培地50mlを注入した500ml容振盪フラ
スコへ接種して30℃て３日間振盪培養したとこ
ろ、第４表に示すように培養液中にＬ−グルタミ
ン酸が生成蓄積された。 培地組成 酢酸アンモニウム 2.31ｇ／dl 酢酸ナトリウム 2.72ｇ／dl KH₂PO₄ 0.3ｇ／dl MgSO₄・7H₂O 0.08ｇ／dl FeSO₄・7H₂O 0.002ｇ／dl MnSO₄ 0.00324ｇ／dl ビタミンB₁塩酸塩 2.5μｇ／dl ビオチン 0.05μｇ／dl 微量金属無機培 混合物※ 0.05ml／dl クレゾールレツド 0.5mg／dl カゼイン分解物（デイフコ製カザミノ酸）
0.1ｇ／dl PH 8.0 ※微量金属無機塩混合物 ZnSO₄・7H₂O 8.800mg／ FeCl₃・6H₂O 970mg／ CuSO₄・5H₂O 393mg／ Na₂B₄O₇ 88mg／ MnCl₂・4H₂O 72mg／ （NH₄）₆Mo₇O₂・H₂O 37mg／

【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ブレビバクテリウムに属し、Ｌ−グルタミン
   酸を炭素源として生育する能力を欠き、かつＬ−
   グルタミン酸生産能を有する微生物変異株を培養
   し、培地中に生成蓄積されたＬ−グルタミン酸を
   採取することを特徴とする発酵法によるＬ−グル
   タミン酸の製造法。 ２ 微生物変異株が下記のＬ−グルタミン酸を炭
   素源とする培地に生育する能力を欠くものである
   特許請求の範囲第１項記載の発酵法によるＬ−グ
   ルタミン酸の製造法。 Ｌ−グルタミン酸を炭素源とする培地：１
   中、Ｌ−グルタミン酸ソーダ7.0ｇ、アンモニア
   水1.0ml、KH₂PO₄1.0ｇ、MgSO₄・7H₂O0.4ｇ、
   FeSO₄・7H₂O10mg、MnSO₄・4H₂O81mg、サイ
   アミン塩酸塩100μｇ、ビオチン30μｇ、該微生物
   変異株特有の要求物質の必要最少量及び寒天20ｇ
   を含み、PH7.0にKOHにて調節した培地。 ３ 微生物変異株がブレビバクテリウム・フラバ
   ムに属するものである特許請求の範囲第１項又は
   第２項記載の発酵法によるＬ−グルタミン酸の製
   造法。