JPH0349692A - Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 - Google Patents
Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法Info
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- JPH0349692A JPH0349692A JP18491889A JP18491889A JPH0349692A JP H0349692 A JPH0349692 A JP H0349692A JP 18491889 A JP18491889 A JP 18491889A JP 18491889 A JP18491889 A JP 18491889A JP H0349692 A JPH0349692 A JP H0349692A
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- galactosidase
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野〉
本発明は、大乳オリゴ糖や複合糖質の糖鎮中に含まれる
Ｎ−アセチルラクトサミンの製造法に関するちのである
． 〈従来の技術〉 Ｎ−アセチルラクトサミンは、血液型糖蛋白質の分解物
から最初に単離されたガラクトースとＮ−アセチルグル
コサミンがβ一１．４結合したアミノ２糖で，大乳オリ
ゴ糖や，リボ多糖，各種の糖蛋白質及び糖脂質の糖鎖中
に存在する生化学的に非常に重要なオリゴ糖である．ま
た、腸内細菌の一つビフィズス菌の発育因子としても知
られ、機能性食品素材としてち有用な物質である． 従来、Ｎ−アセチルラクトサミンの製造は，化学合成も
しくは高エネルギー化合物ＵＤＰ一ガラクトースとＮ−
アセチルグルコサミンを基質として、ラクトース合成酵
素により合成されることが知られているが，これらの方
法は、工程が複雑でしかも高価となり工業的にはまだ難
点の多い製造法である。一方，簡便な方法として、ラク
トースとＮ−アセチルグルコサミンを基質として，ラク
トバシラスビフィダス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｉｆｉｄｕｓｌやスボロボロミセス シングラリス（
Ｓ ｏｒｏｂｏｌｏｍ ｃｅ−ｓ ｓｉｎ ｕＬａｒｉ
ｓｌの生菌体を用いた報告［Ｊ．Ｂｉ−ｏｌ．ｃｈｅｍ
． ．２１７．７９（１９５５） ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈ
ｅｗ＋． ．４２， ２３０７１１９６４１１や、ラク
トバシラス ビフィダスの生産するβ−ガラクトシダー
ゼを作用させた報告［ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．
， ２０８． ２９９ １１９５４） ］などがある
．又、最近ではガラクトースとＮ−アセチルグルコサミ
ンを基質としてエシエリシア コリ（ Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の生産するβ一ガラクトシダーゼ
を作用させ、脱水縮合反応によるＮ−アセチルラクトサ
ミン生産の報告［第ｌＯ回糖質シンポジウム講演要旨集
，ｐｌ０７（１９８７１ ］も示されている． 〈発明が解決しようとする問題点） しかしながら、前記の微生物国体やβ−ガラクトシダー
ゼを用いる方法は、いずれもＮ一アセチルラクトサミン
の生成量が少ないこと及び目的とするＮ−アセチルラク
トサミンの生成量に比べ，β−１．６結合異性体のＮ−
アセチルア口ラクトサミンの生成比率が非常に高いこと
などの欠点があった．本発明者らは、前述の欠点を解決
すべくＮ−アセチルラクトサミンを簡便でしかも安価に
工業生産できる方法を種々検討した結果、バシラスサー
キュランスの生産するβ−ガラクトシダ一ゼが、ラクト
ースとＮ−アセチルグルコサミンを基質としてＮ−アセ
チルラクトサミンを効率よく生産することを見い出し、
本発明を完成するに至った． 〈問題を解決するための手段〉 本発明は、ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを含
有する基質に、バシラス サーキュランスの生産するβ
−ガラクトシターゼを作用させ、ガラクトース転移反応
によりＮ一アセチルラクトサミンを効率よく製造する方
法を提供することを目的とする． 本発明のβ−ガラクトシダーゼは、バシラス サーキュ
ランスの生産する酵素であれば，微生物を培養し、その
培養液から硫安沈澱等により調製した粗酵素や市販酵素
、いずれでも用いることができる． 反応に用いるラクトースとＮ−アセチルグルコサミンの
量は、モル比で１：ｌ−１＋５とし、全基質濃度として
２０〜７０％とするのが好ましい．また、本発明に用い
るバシラスサーキュランスの生産するβ−ガラクトシダ
ゼは、反応系におイテ０． ５０／ｒａ ｌ 〜５０／
ｍ ｌとなるように添加し、ｐＨ４〜９，温度５℃〜５
０℃に保持し、２時間〜５０時間作用させるのが好まし
い． 上記のようにして得られた反応液は、加熱により反応を
停止させ、生成したＮ−アセチルラクトサミンを必要に
応じて活性炭力ラムクロマトグラフィー、ゲル濾過、高
速液体クロマトグラフィー等の手段を組み合わせて精製
することができる． く実施例〉 以下に、本発明の実施例について，さらに具体的に説明
するか、かかる説明によって本発明が何ら限定されない
ことは勿論である．（１）ラクトース０．９ｇとＮ−ア
セチルグルコサミンｌ．ｌｇ （モル比ｌ：２）を０．
１Ｍリン酸緩衝液１ｐＨ７． ０）に溶解し，５ＩＩＩ
１！溶液とした．この溶液に，バシラス サーキュラン
ス起源の市！ＩｌｉｉＯ−ガラクトシダ一ゼ（大和化成
：ビ才ラクタ）を１２Ｕ添加し、２５℃で２８時間反応
させ，５分間の煮沸により反応を停止した．次に、得ら
れた反応液のＮ−アセチルラクトサミンの生成量を高速
液体クロマトグラフィーにより測定した．本反応により
２９５ＢのＮ−アセチルラクトサミンが製造された（２
）ラクトース０． ４５ｇとＮ−アセチルグルコサミン
１．１ｇ（モル比ｌ：４）を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．ｏ）に溶解し、５ｍβ溶液とした．この溶液に、
バシラス サーキュランス起源の市版β−ガラクトシダ
ーゼ（大和化成：ビオラクタ）を１４Ｕ添加し、２５℃
でｌＯ時間反応させ、５分間の煮沸により反応を停止し
た。次に、得られた反応液のＮ−アセチルラクトサミン
の生成量を高速液体クロマトグラフィーにより測定した
．本反応により、２００ｍｇのＮ−アセチルラクトサミ
ンが製造された． β−ガラクトシダーゼの酵素活性の測定１０ｍ ＭのＯ
ＮＰ−Ｇａｌ （オルトーニトロフェニルガラクトシド
）溶液０．２ｍＪ２と０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
） ０．７ｍｆ２を混合し、適当濃度に希釈した酵素液
０．１ｎｆｆを加え，３０℃で反応を行った。ｌ Ｍ
Ｎ ａ２ｃ Ｌ２ｎ＋．ｇを加え，反応停止後、オルト
ーニトロフェノールの吸収である４２０ｎｎ＋の吸光度
を測定した．酵素活性ＩＵは、１分間にｌｕｍｏｌｅの
オルトーニトロフェノールを遊離する酵素量と定義した
．Ｎ−アセチルラクトサミンの分析 実施例で得られた反応液は、次の高速液体クロマトグラ
フィーの条件で測定した．カラム： ＹＭＣ−Ｐａｃ
ｋ ＰＡ−０３ （４．６ Ｘ ２５０ｍｍｌ移動層ニ
アセトニトリル：水＝８０：２０流 速 ：
０．８ｍｌ２／ｗｉｎ．温 度＝２５℃ 検 出 ： ＵＶ＊ｔｓａｓ＋ 試 料 二 ｌＯμ ｌ
Ｎ−アセチルラクトサミンの製造法に関するちのである
． 〈従来の技術〉 Ｎ−アセチルラクトサミンは、血液型糖蛋白質の分解物
から最初に単離されたガラクトースとＮ−アセチルグル
コサミンがβ一１．４結合したアミノ２糖で，大乳オリ
ゴ糖や，リボ多糖，各種の糖蛋白質及び糖脂質の糖鎖中
に存在する生化学的に非常に重要なオリゴ糖である．ま
た、腸内細菌の一つビフィズス菌の発育因子としても知
られ、機能性食品素材としてち有用な物質である． 従来、Ｎ−アセチルラクトサミンの製造は，化学合成も
しくは高エネルギー化合物ＵＤＰ一ガラクトースとＮ−
アセチルグルコサミンを基質として、ラクトース合成酵
素により合成されることが知られているが，これらの方
法は、工程が複雑でしかも高価となり工業的にはまだ難
点の多い製造法である。一方，簡便な方法として、ラク
トースとＮ−アセチルグルコサミンを基質として，ラク
トバシラスビフィダス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｉｆｉｄｕｓｌやスボロボロミセス シングラリス（
Ｓ ｏｒｏｂｏｌｏｍ ｃｅ−ｓ ｓｉｎ ｕＬａｒｉ
ｓｌの生菌体を用いた報告［Ｊ．Ｂｉ−ｏｌ．ｃｈｅｍ
． ．２１７．７９（１９５５） ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈ
ｅｗ＋． ．４２， ２３０７１１９６４１１や、ラク
トバシラス ビフィダスの生産するβ−ガラクトシダー
ゼを作用させた報告［ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．
， ２０８． ２９９ １１９５４） ］などがある
．又、最近ではガラクトースとＮ−アセチルグルコサミ
ンを基質としてエシエリシア コリ（ Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の生産するβ一ガラクトシダーゼ
を作用させ、脱水縮合反応によるＮ−アセチルラクトサ
ミン生産の報告［第ｌＯ回糖質シンポジウム講演要旨集
，ｐｌ０７（１９８７１ ］も示されている． 〈発明が解決しようとする問題点） しかしながら、前記の微生物国体やβ−ガラクトシダー
ゼを用いる方法は、いずれもＮ一アセチルラクトサミン
の生成量が少ないこと及び目的とするＮ−アセチルラク
トサミンの生成量に比べ，β−１．６結合異性体のＮ−
アセチルア口ラクトサミンの生成比率が非常に高いこと
などの欠点があった．本発明者らは、前述の欠点を解決
すべくＮ−アセチルラクトサミンを簡便でしかも安価に
工業生産できる方法を種々検討した結果、バシラスサー
キュランスの生産するβ−ガラクトシダ一ゼが、ラクト
ースとＮ−アセチルグルコサミンを基質としてＮ−アセ
チルラクトサミンを効率よく生産することを見い出し、
本発明を完成するに至った． 〈問題を解決するための手段〉 本発明は、ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを含
有する基質に、バシラス サーキュランスの生産するβ
−ガラクトシターゼを作用させ、ガラクトース転移反応
によりＮ一アセチルラクトサミンを効率よく製造する方
法を提供することを目的とする． 本発明のβ−ガラクトシダーゼは、バシラス サーキュ
ランスの生産する酵素であれば，微生物を培養し、その
培養液から硫安沈澱等により調製した粗酵素や市販酵素
、いずれでも用いることができる． 反応に用いるラクトースとＮ−アセチルグルコサミンの
量は、モル比で１：ｌ−１＋５とし、全基質濃度として
２０〜７０％とするのが好ましい．また、本発明に用い
るバシラスサーキュランスの生産するβ−ガラクトシダ
ゼは、反応系におイテ０． ５０／ｒａ ｌ 〜５０／
ｍ ｌとなるように添加し、ｐＨ４〜９，温度５℃〜５
０℃に保持し、２時間〜５０時間作用させるのが好まし
い． 上記のようにして得られた反応液は、加熱により反応を
停止させ、生成したＮ−アセチルラクトサミンを必要に
応じて活性炭力ラムクロマトグラフィー、ゲル濾過、高
速液体クロマトグラフィー等の手段を組み合わせて精製
することができる． く実施例〉 以下に、本発明の実施例について，さらに具体的に説明
するか、かかる説明によって本発明が何ら限定されない
ことは勿論である．（１）ラクトース０．９ｇとＮ−ア
セチルグルコサミンｌ．ｌｇ （モル比ｌ：２）を０．
１Ｍリン酸緩衝液１ｐＨ７． ０）に溶解し，５ＩＩＩ
１！溶液とした．この溶液に，バシラス サーキュラン
ス起源の市！ＩｌｉｉＯ−ガラクトシダ一ゼ（大和化成
：ビ才ラクタ）を１２Ｕ添加し、２５℃で２８時間反応
させ，５分間の煮沸により反応を停止した．次に、得ら
れた反応液のＮ−アセチルラクトサミンの生成量を高速
液体クロマトグラフィーにより測定した．本反応により
２９５ＢのＮ−アセチルラクトサミンが製造された（２
）ラクトース０． ４５ｇとＮ−アセチルグルコサミン
１．１ｇ（モル比ｌ：４）を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．ｏ）に溶解し、５ｍβ溶液とした．この溶液に、
バシラス サーキュランス起源の市版β−ガラクトシダ
ーゼ（大和化成：ビオラクタ）を１４Ｕ添加し、２５℃
でｌＯ時間反応させ、５分間の煮沸により反応を停止し
た。次に、得られた反応液のＮ−アセチルラクトサミン
の生成量を高速液体クロマトグラフィーにより測定した
．本反応により、２００ｍｇのＮ−アセチルラクトサミ
ンが製造された． β−ガラクトシダーゼの酵素活性の測定１０ｍ ＭのＯ
ＮＰ−Ｇａｌ （オルトーニトロフェニルガラクトシド
）溶液０．２ｍＪ２と０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
） ０．７ｍｆ２を混合し、適当濃度に希釈した酵素液
０．１ｎｆｆを加え，３０℃で反応を行った。ｌ Ｍ
Ｎ ａ２ｃ Ｌ２ｎ＋．ｇを加え，反応停止後、オルト
ーニトロフェノールの吸収である４２０ｎｎ＋の吸光度
を測定した．酵素活性ＩＵは、１分間にｌｕｍｏｌｅの
オルトーニトロフェノールを遊離する酵素量と定義した
．Ｎ−アセチルラクトサミンの分析 実施例で得られた反応液は、次の高速液体クロマトグラ
フィーの条件で測定した．カラム： ＹＭＣ−Ｐａｃ
ｋ ＰＡ−０３ （４．６ Ｘ ２５０ｍｍｌ移動層ニ
アセトニトリル：水＝８０：２０流 速 ：
０．８ｍｌ２／ｗｉｎ．温 度＝２５℃ 検 出 ： ＵＶ＊ｔｓａｓ＋ 試 料 二 ｌＯμ ｌ
Claims (1)
- ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを含有する基質
にバシラスサーキュランス（￥Ｂａｃｉｌ−ｌｕｓ ｃ
ｉｒｃｕｌａｎｓ￥）の生産するβ−ガラクトシダーゼ
を作用させ、ガラクトース転移反応を行わせることを特
徴とするＮ−アセチルラクトサミンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18491889A JP2819312B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18491889A JP2819312B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0349692A true JPH0349692A (ja) | 1991-03-04 |
| JP2819312B2 JP2819312B2 (ja) | 1998-10-30 |
Family
ID=16161611
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18491889A Expired - Lifetime JP2819312B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2819312B2 (ja) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001292791A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 |
| JP2001292792A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルグルコサミンの回収方法 |
| JP2001354691A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-12-25 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | 精製されたｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 |
| JP2006223268A (ja) * | 2005-02-21 | 2006-08-31 | Yakult Honsha Co Ltd | ガラクトシル２糖類の製造法 |
| JP2010001590A (ja) * | 2008-06-23 | 2010-01-07 | Urabe Co Ltd | 伸縮性経編地 |
| US7883874B2 (en) | 2003-06-30 | 2011-02-08 | Clasado Inc. | Galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
| US8030049B2 (en) | 2006-01-31 | 2011-10-04 | Clasado Inc. | Galactosidase with α-galactosyltransferase activity |
| US8058047B2 (en) | 2005-12-20 | 2011-11-15 | Clasado, Inc. | α-galactosidase with transgalactosylating activity |
| US8132195B2 (en) | 2004-09-13 | 2012-03-06 | Panasonic Corporation | Disk device with shape identifier |
| US8168414B2 (en) | 2006-03-28 | 2012-05-01 | Clasado Inc. | Beta-galactosidase with transgalactosylating activity |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2024101286A1 (ja) | 2022-11-11 | 2024-05-16 |
-
1989
- 1989-07-18 JP JP18491889A patent/JP2819312B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001292791A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 |
| JP2001292792A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルグルコサミンの回収方法 |
| JP2001354691A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-12-25 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | 精製されたｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 |
| US7883874B2 (en) | 2003-06-30 | 2011-02-08 | Clasado Inc. | Galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
| US8132195B2 (en) | 2004-09-13 | 2012-03-06 | Panasonic Corporation | Disk device with shape identifier |
| JP2006223268A (ja) * | 2005-02-21 | 2006-08-31 | Yakult Honsha Co Ltd | ガラクトシル２糖類の製造法 |
| US8058047B2 (en) | 2005-12-20 | 2011-11-15 | Clasado, Inc. | α-galactosidase with transgalactosylating activity |
| US8030049B2 (en) | 2006-01-31 | 2011-10-04 | Clasado Inc. | Galactosidase with α-galactosyltransferase activity |
| US8168414B2 (en) | 2006-03-28 | 2012-05-01 | Clasado Inc. | Beta-galactosidase with transgalactosylating activity |
| JP2010001590A (ja) * | 2008-06-23 | 2010-01-07 | Urabe Co Ltd | 伸縮性経編地 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2819312B2 (ja) | 1998-10-30 |
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