JPH03500656A - ウイルス感染の治療および予防薬剤アシル・カルニチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ウィルス感染の治療および予防薬剤アシル・カルニチン本発明はウィルス感染の 治療および予防薬剤アシル・カルニチンに関するものである。

種々のウィルスはヒト、動物および植物にとって健康上非常に危険でありかつ無 害のものから非常に危険な感染までひきおこすことができる。バクテリアとは反 対に、ウィルスは生存のため、その活性の発展のためかつ増殖のため生きている 宿主細胞を必要とする。

最近、性習慣の変化により、単純ヘルペスウィルス（ＨＳＶ）−１および２型、 サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）　、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）　、ヒ ト・バビロ−７ウイルス（ＣＰＶ）等によるような性行為ウィルス感染症の不安 の増加が現れている。

現在、ヘルペスの治療に使用されているアシログアノシン〔「アシロビールＪ　 （Ａｃｙｌｏｖｉｒ））およびエイズの治療に用いられているアジドチミジン（ Ａｚｉｏｔｉｍｉｄｉｎ：ＡＺＴ）を除いて、満足のいく広範囲抗ウイルス薬剤 は存在していない。

これらの薬剤には問題がなくはない、しかし原則として予防的な種類は入手可能 ではない。

予防はＨＳＶ、ＣＭＶ、ＨＩＶおよびＶＣＶのような場合にとくに望ましく、そ のさい宿主の生存期間中ウィルスは存続しかつしばしば疾病は多年遅く敞症しか つ病理学的に異っている。

これまで提案されたすべての薬剤は、ウィルスが細胞内に侵入後、それをそこで 不活化するかまたは殺すように、ウィルスの直接の制圧を目的としている。

今や、意外にも、ウィルス複製に直接作用するだけでなく、未だ説明し得ない変 化を通じて、ウィルスを宿主細胞中で完全に不活化し、かつそれを生き残し続け ることを阻止する唯一の薬剤が開発された。

本発明による薬剤は請求の範囲第１項に定義される一方、特別な具体例は従属す る請求の範囲から読み取ることができる。

この関連において有効として見出された好適な化合物は式、０ＣＯＣＨｆｆ のし−アセチルカルニチン（ｒ−）ジメチル−β−アセチル−ブチロベタイン） である。

カルニチンは自然に体内に生じる化合物である。また、オルト−Ｌ−アセチルｍ Ａ体は公知の化合物であり、種々の器官に存在し、また合成の、市場で入手可能 な誘導体である。この誘導体は例えば経口利用のため年齢に起因する神経の代謝 障害の治療のため錠剤または通則の形において勧められている。このような障害 は老年性痴呆として一般に知られている記憶喪失、意外な行動および不規ｊｌｌ な幻覚である。勧められる投与量は３０ｍｇ／ｋｇ／日である。

Ｌ−アセチル−カルニチンは強力な抗ウィルス活性を有しそしてウィルス感染の 治療に使用され、とくに、そのような感染の予防のために驚（べき成果を以て使 用されるということが全く予期せずに見出された。

Ｌ−アセチル−カルニチンの抗ウィルス活性を証明するために行われた試験は以 下のように要約されることできる。

〔１〕１立　にお番　イルレス　に、″　Ｌ−アセ　ル−力匹玉」≦グΣ１度 ２つの試験系が行われた。第１の系においては、動物およびヒト起源（アフリカ ミドリザル：ヒト頚管癌細胞）の種々の細胞系が、Ｈ３Ｖ−１および２型、ＣＭ Ｖ、アデノウィルス、水痘−帯状庖疹−ウィルス（ＶＺＶ）　、ＲＳウィルス（ Ｒ３ｖ）、ポリオウィルス、コックスサンキウイルス、腸内ウィルスおよび種痘 ウィルスにより感染させられた。

上記ウィルスにより感染させられた各々５個の培養がそれぞれ１００ｍｇ／ｍＡ のし一アセチルーカルニチン・ＨＣｌまたは対照媒体（活性媒体なし）により処 理された。

ウィルス力価は毎日の間隔で１２日間測定された。

全ての対照群はそれぞれ特定のウィルスに対応して１０１〜１０ｓコロニー形成 単位（プラーク形成単位ｐｆｕ）／ｍＪの範囲の力価でウィルス増殖陽性であっ た。　゛それに対してＬ−アセチル−カルニチン・ＨＣＮで処理された試料は負 （Ｏｐ　ｆ　ｕ／ｍｆｆ１）　、すなわちウィルスの増殖を生じなかった。

第２の試験系において抗ウィルス活性についてのし一アセチルーカルニチンの作 用が測定された。

それぞれ５個の培養がウィルス感染させられそしてＬ−アセチル−カルニチン・ ＨＣｊ！または対照培地で１０．２０．４０．５０．６０．７０．８０．９０． １００．２００．４００ｍｇ／ｍｌにより処理された、そしてウィルス力価は上 記のようにして測定された。

抗ウィルス活性は２０ｍｇ／ｍ１以上の全投与群で確認された。

抗ウィルス活性は完全にまたは全く発生せずかつ投与依存型を示した。

〔２〕　イルス・　に　ぼ　ヨのり この試験は、その間中Ｈ３Ｖ１、またはＨ３Ｖ２の感染がＬ−アセチルーカルニ チンによって阻止される時間を測定することを目的とした。

それぞれ５個の感染細胞の培養を（４０ｍ　ｇ　／　ｍ　１２　）で以下の時間 処理した。すなわち、感染後、−２４時間、−１２時間、−２時間、−１時間、 −３０分、−２０分、−１０分、０，１時間、２時間、３時間、４時間、８時間 、１２時間および１６時間。

これらは感染後２４時間のウィルス増殖について調べられた。

ウィルス複製は、感染前２４時間から感染後４時間まで処理されたすべての培養 において完全に抑制された。

ウィルスは感染後４時間より遅くＬ−アセチル−カルニチンにより処理された培 養において正常に増殖した。

これらの試験においてウィルス増殖の予防は完全（Ｏｐ　ｆ　ｕ／ｍりであり、 一方、Ｌ−アセチル−カルニチンにより処理されないかまたはこの処理を感染後 ４時間より遅く受けた対照においてウィルスは正常に増殖した。

〔３〕　イルス゛′　に八　な　ハ　ヨそれぞれ５個の培養をＬ−アセチル−カ ルニチン・ＨＣｆｆｉ　（４０ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌ　）で１０分または２０分、 ３０分および４０分作用させた。その後、Ｌ−アセチル−カルニチンを除去し、 そして細胞をＨ３ＶＩ、またはＨ３Ｖ２で同時点に、または２４時間後、４８時 間後または７２時間後に感染させた。

ウィルス増殖は、たとえ感染を、最初の３日遅く行ったとしても、Ｌ−アセチル −カルニチン・ＨＣＥの作用を少なくとも２０分間行うとき完全に抑制された。

〔４〕ウイルス　に　するＬ−アセチル−カルニチンＬ−アセチルーカルニチン がＨ３Ｖによる感染後４時間完全に有効であるという観察は細胞とウィルスの最 初の相互反応後も有効であることを容易に想起させる。

Ｌ−アセチル−カルニチンによる細胞の前処理がウィルス増殖を上首尾で抑制す るので、Ｌ−アセチル−カルニチンが吸収を阻害するどうかが調べられた。

細胞は感染の荊１時間または感染と同時にＬ−アセチル−カルニチン（４０ｍ　 ｇ　／　Ａ’　）により処理された。

感染はトリチウム化チミヂンによって放射能標識されたウィルスにより行われ、 そしてＷＩ議の出現は細胞の細胞質および膜区分において、感染生存細胞の減少 の機能として検査された。

標識は感染細胞の膜および細胞質区分に動力学的型式で検査され、ウィルスの吸 収と侵入ぶ起ったことを示した。

〔５〕゛　・　に・するＬ−アセチル−ラニチンの　の〜宝ユ Ｌ−アセチル−カルニチン・ＨＣｌ（４０ｍｇ／ｍｊ２）を以下のように処理を した。

（１）無処理 （２）室温において１週間放置 （３）　５６℃において３０分 （４＋　３７℃において２時間 （７）７回の凍結−融解ムこくりかえし。

これらの前処理後、それぞれの溶液に、ＨＶＳを怒染させた細胞培養を３７℃で １時間行った。この作用の開始後２４時間後にウィルス力価が各試料について測 定された。５個のすべての調製物がウィルス増殖を完全に阻害した（Ｏｐ　ｆ　 ｕ／ｍＪ）　、これに対し対応する対照（Ｌ−アセチル−カルニチンなし）はウ ィルスの増殖を阻止しなかった（１０’　ｐ　ｆ　ｕ／ｍｊ２）　。

以上より、Ｌ−アセチル−カルニチンの抗ウィルス活性は上記の温度条件下では 完全に安定であることが推論される。

〔６〕ウイルスに・するＬ−アセチル−カルニチンの省ウィルス自体に対するし 一アセチルーカルニチンの効果はどの程度かを決めるために、すなわちウィルス 自体が物質により攻撃されるか、そしてウィルスの生残は宿主細胞の変化のため に阻害されないかどうかを確認するために、トリチウム化されたＨ３Ｖウィルス を試験管中で細胞なしに、３７℃、１時間、Ｌ−アセチル−カルニチン・Ｈｃｘ 　（４０ｍｇ／ｍりを作用させるか、または活性物質なしの対照を作用させた。

次いでウィルスをミ’Ｊ　、１５アフイルター（０，２２μ孔径）を通して減圧 濾過した。フィルター上に残存する放射能を測定した。なぜならば、完全なウィ ルスのみがフィルタ上に保持され、一方攻馨され、溶解されたウィルスはその分 子構成分まで分解されるのでフィルターを通して除去されるからである。

ウィルスを対照の調製物で処理後、全部の最初の放射能がフィルター上に見出さ れる。Ｌ−アセチル−カルニチンで処理後測定された放射能は最初の測定された それの５０％であった。それより、ウィルス自体へのＬ−アセチル−カルニチン の直接の構造損傷作用は重要でなくはないことが推論される。

〔７〕ヘルペス　Ｐブに　するＬ−アセチル−カルニチンの、用− この試験はマウスでの典型的なヘルペス病変の発生についてＬ−アセチル−カル ニチン処置の作用の測定のためのものである。

ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）担体中のし一カルニチンの希釈物が調製され た。このものは局所適用のために有効なゲルである。ゲル中のし一アセチルーカ ルニチン投与量は、０．５または１．２および４ｇ／ｍｊ！であった。

マウスにＨＳＶＩまたはＨＳＶ２を耳に皮下注射して感染後−２，０および＋２ 時間後にＬ−アセチル−カルニチン含有ゲルを耳への局所的な適用により治療し た。

対照としてＬ−アセチル−カルニチンなしのＰＥＧにより処理されかつ同様な方 法で怒染させられたマウスをおいた。

追加の治療が、対応するゲルの同様な局所的な適用によって２４時間後に行われ た。

すべての未治療マウスおよび５００ｍｇ／ｍ！！で治療されたマウスは３Ｅ’ｄ Ｈ３Ｖ病変（１０／１０−１００％）を発症し、４ｇ　／　ｍ　！！軟膏により 治療されたマウスは感染後８日の経過において疾病を発症しなかった（０／１０ −０％）。

Ｌ−アセチル−カルニチン軟膏の１ｇ／ｍｌで治療された動物の３分の１　（３ ３％）および２　ｇ／ｍ！軟膏で治療された動物の５分の１　（２０％）は感染 後６日で最小の疾病症状を示した。

他は完全に８日の間中疾病がなかった。

試験（８日間の）終わりに耳を除去しそしてウィルス力価が測定された。

対照群の耳のウィルス力価は１ないし４Ｘ１０’　ｐｆｕ／ｍｌの間の範囲であ った。

１または２ｇ／ｍｆＬ−アセチル−カルニチン軟膏により処置されかつ最小の病 理発現を呈した２匹の動物は工ないし５×１０″ｐｆｕ／ｍρの力価を有してい た。

１または２ｇ／ｍｌのし一アセチルーカルニチン軟膏で治療された発病症状のな い他の６匹の動物は１〜３ＸＩＯ”ｐｆｕ／ｍｌの力価を存していた。

４ｇ／ｍｊ！の軟膏で治療された動物中にはウィルスはなかった（Ｏｐ　ｆ　ｕ ／ｍＡ）　。

〔８〕！ユ Ｌ−アセチル−カルニチン・ＨＣＩはマウスに関して筋肉内投与において３００ ０ｍｇ／ｋｇ以上、腹腔内投与において３６００ｍｇ／ｋｇ以上、静脈内投与に おいて１６００ｍｇ／ｋｇ以上および経口投与において１８０００ｍｇ／ｋｇ以 上の急性毒性ＬＤ５゜を有する。ラットに関しては筋肉内投与（ｉ、ｍ、）で３ ０００ｍｇ／ｋｇ以上、腹腔内投与（ｉ、ｐ、）で２７４８ｍｇ／ｋｇ、静脈内 投与（ｉ／ｖ、）で１０００ｍｇ／ｋｇおよび経口投与（ｐ、ｏ、）で１０００ ０ｍｇ／ｋｇ以上の値である。

２６週間の間Ｌ−アセチルーカルニチンを経口で２５０〜５００ｍｇ／ｋｇ／日 の投与量および筋肉内に５０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与されたモルモットお よびウサギを用いた長期間の試験の結果、体重、血液組成、肝機能、血液および 尿の生化学値に顕著な変化は見られなかった。また主要な臓官の肉眼的および顕 微鏡観察の結果、いかなる病理学的変化もみられなかった。

また、犬に７５．１５０および３００ｍｇ／ｋｇ／日の筋肉内投与した試験では 、いかなる毒性学的な性質の徴候も生じなかった。

更に、局所適用により血管拡張をひきおこすことが観察された。

１２人のボランティアの手の皮膚に４　ｍ　ｇ　／　ｍ　１．の濃度で局所通用 した結果、本化合物は熱傷、刺痛または疼痛を与えないことが明らかになった。

しかしながら、多分血管拡張のために、軽い熱作用を生じた。

組繊細胞培養においてＬ−アセチル−カルニチンは最小毒性であり、とくに４０ ｍｇ／ｍ”ｆｆの濃度以上で細胞のタンパク合成を阻害した。

しかし薬物を局所通用したマウスでは、４　ｇ　／　ｍ　Ｒの投与量ニおいて観 察された、多分同様に血管拡張に由来する局所的な発赤を除いて、明白な毒性は みられなかった。

要約すると、以上のデータは、Ｌ−アセチル−カルニチンは組織培養および動物 において試験されたウィルスすべての増殖を阻止したことを示している。特に処 治は細胞を感染に対して明らかに不反応にしかつそれによりすべてのウィルスの 生存および繁殖能力を奪い取るものと思われる。ＨＩＶによる感染を及ぼす作用 は、このウィルスが細胞の型において培養するのが非常に困難であるので、これ まで直接研究されることができなかった。それゆえ、試験は人間に直接案施され ねばならない。

他の非常に異なった種類のウィルス型による経験に基けば・しかしながら、薬剤 はまた、ＨＩＶの伝染が直接接触によって、例えば性交の間中行われる限りにお いて、体内細胞へのＨＩＶの侵入が予防されることが期待される。その製剤が一 般に公知であるクリーム担体での局所適用のために活性物質を先ず第一に利用す るとか提案される。

上記の試験において、液状の活性物質は、市販されている専門家に良く知られた 細胞増殖培地、すなわち「イーゲルのＭＥＭＪ（Ｍ　Ｅ　Ｍ　＝最小必須培地） において、場合によっては１％子牛血清を添加して使用された。

Ｌ−アセチル−カルニチン・ＨＣＪ２は水溶性であり、化粧品における通常の溶 媒に溶解可能である。その水溶媒は濃度の上昇により粘土が増加する。それ故、 １ｍβ中での４ｇのＬ−カルニチンの溶液はすでに非常に強い粘性である。

通常の方法で作られる２つの型のクリームが好ましい（は考慮に入れられること ができる。

ス差」Ｌ」− 例えば太陽光、紫外光、熱の作用により発生することのあるヘルペスの病変治療 用の外用クリーム。

担体はエチルアルコール１５％、カルボキシポリメチレン２％、ＥＤＴＡｏ、１ ％、ラベンダーエキス０．００７５％を含んでいる。この担体に１０ｍｇないし ４ｇ／ｍｊ２のし一アセチルーカルニチン・ＨＣｌが加えられる。

調合物の香りは所望によりバニラ、ジャスミン・イチゴ・ジャコラ等のごときそ れぞれ任意の香料により変更されることができる。

この軟膏を発症部位へ適用すると完全な治療が２日後すでにみられ、一方通常の 軟膏は約１０日を必要とする。また軟膏は感染前にそれを塗りつけられたすべて の皮層部分に信頼できる保護効果をもたらす。

液状または半液状形態の調合物の使用は日よけ薬剤と同様に使用される。治療す べき部位は調合物の薄い層によって完全にかつ均一に覆われる。

！施五−主 利用のために提案される第２の軟膏は強力な避妊用抗ウィルス剤として膣内剤層 の公知型の不活性担体ゲル中に殺精子剤を添加または添加なしで製造される。

最も実用的には、このような調製物はは性交の直前かつその後１度使用される。

軟膏はまた他の身体部位、例えば肛門性文中肛門に利用されることができる。

ス眉ｌ引−１ 膣クリーム ソルビトールモノステアリン酸塩　２％ポリソルビトール　５Ｑ　１．５％ スベルモイド　２〜３％ セチルステアリンアルコール　１０％ ２．８−オクチル　ドデカノール　１３．５％ベンジルアルコール　１％ Ｌ−アセチルーカルニチン・ＨＣＪ　１〜２０％残部　水 軟膏の代わりの活性物質としては、例えばローション、座剤、スプレィ、膣カプ セル、膣栓等として他の好適な局所に有効な形において使用することができる。

１隻撚−工 肛門クリーム メチル−ｐ−ヒドロベンゾエート　７％プロピル−ｐ−ヒドロベンゾエート　３ ％Ｌ−アセチルーカルニチン・ＨＣｆ　１〜２０％ポリエチレングリコール４０ ０、 比率２：１の混合物　残部 ス新ｌ（−足 ■剤 安息香酸　０．５ｇ グリセリルモノリシノリエート　０．２ｇ半合成グリセライド　２．３５ｇ Ｌ−アセチル−カルニチン・ＨＣＩ　１０ｍｇ〜４ｇ他の薬物投与の形態、例え ば経口、腹腔内、筋肉内または静脈内利用が現在考慮される。同様に動物および 植物におけるウィルス感染攻撃に対する一連の試験が進行中である。

国際調査報告 ―内−−Ａ−−−ｋ　ＰＣＴ／Ｃ）１８９１０００９７

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒト、動物および植物におけるウイルス感染の治療および予防薬剤において 、活用物質としてＬ−アシル−カルニチンを含むことを特徴とするヒト、動物お よび植物におけるウイルス感染の治療および予防薬剤。
2. ２．活性物質としてＬ−アセチルーカルニチンを含むことを特徴とする請求項１ 記載の薬剤。
3. ３．ヒトおよび動物において局所用剤型、即ち軟膏、ローション、スプレイ、膣 座剤、膣カプセルまたは座薬の形で使用されることを特徴とする訴求の範囲第１ 項または第２項記載の薬剤。
4. ４．前記活性物質を１０ｍｇないし４ｇ／ｍｌまたは／ｇの濃度において含むこ とを特徴とする薬剤。
5. ５．請求項１ないし４項のいずれか１項による薬剤を有効な投与量において適用 することを特徴とするヒト、動物およびウイルス感染の治療および予防方法。
6. ６．請求項１ないし４項のいずれか１項による薬剤を有効な投与量において適用 することを特徴とする植物におけるウイルス感染の治療または予防方法。