JPH03501031A - 酵素入り洗剤組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 酵素入り洗剤組成物 本発明は、プロテアーゼ及びリパーゼを含有する洗剤組成物に関し、さらに詳し くは前記二種の酵素を含有する酵素洗剤添加物に関する。

背景技術 酵素洗剤組成物は、当業界で周知である。洗剤組成物に配合させるため、多くの タイプの酵素が提案されてきているが、主な関心はプロテアーゼに向けられてき ている。洗剤中で用いられるために提案されている多くのプロテアーゼのうちで 、次の二種が特に本発明に関係があるニ ーズブチリシンノボ（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ　Ｎｏｖｏ）、バシラスアミロリフ ェファシエンス　（ｈ劇」μＬ幌対弧」近違曵国匣）から由来のアルカリ性セリ ンプロテアーゼ（ヨーロッパ’ｌＨ’Ｆ１３０．７５６（ジェネンテエック）参 照）。

一フサリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）のアルカリ性プロテアーゼ（例えば米国特許 ３，６５２，３９９（タケダ）及びＤＫ　８６１５６４０　（ノボ）参照）。

リパーゼは、また洗剤成分として提東されてきているが、この用途に対してリパ ーゼに関する従来技術は極めて少ない。

本発明に特に関連したものは、プソイドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）リパ ーゼに関する提案された使用である（例えば英国特許Ｌ３７２，０３４（ユニリ バー）疋びヨーロッパ特許２１４．７６Ｈノボ）参照）。

リパーゼ及びプロテアーゼを含有する洗剤はまた公知である。しかしリパーゼは たん白質であるので、該リパーゼは、洗剤溶液中でプロテアーゼにより消化及び 失活しやすい。か＜シて、ヨーロッパ特許２０５，２０８（ユニリバー）及びヨ ーロッパ特許２０６，３９０（ユニリバー）におけるデーターは、以下の内容を 実証している。すなわち洗剤溶液中のプソイドモナスフルオレセンス（Ｐｓｅｕ ｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）由来のリパーゼの安定性は、バシラ スリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｔｆｏｒｍｉｓ）に由来す るプロテアーゼ（アルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）　（登録商標））または好 アルカリ性バシラスｓｐ、　（Ｂａｃｉｌユ邦−杼一）由来のプロテアーゼ（サ ビナーゼ（登録商標）及びエスペラーゼ（登録商標）、ノボインダストリーＡ／ Ｓの登録商標）。

さらにヨーロッパ特許１３０，０６４（ノボ）、ヨーロッパ特許２１４．７６Ｈ ノボ）及び国際公開８７１００８５９（ギストーブロカデスＮ、Ｖ、）は、バシ ラスリケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）のプロ テアーゼ（アルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）及びマキサターゼ（ＭＡＸＡＴＡ ＳＥ）、それぞれノボ及びギストーブロカデスの登録商標として記載されている ）及びフザリウムオキシスベラム（Ｆｕｓａｒｉ憇」狂囲匹堕）、フッイドモナ スセパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｃｅ　ａｃｉａ）、Ｐｓ、　プソイドア ルカリゲネス（シュ２閂械姐旦剣山巴咀■もしくはＰｓ、シュツツゼリー（Ｐｓ 、　５ｔｕｔｚｅｒｉ）のリパーゼを含有する洗剤を開示している。

安定性のデーターは、公表されていないが、この明細書の実施例におけるデータ ーは、以下の内容を示している。すなわちこれらの組合わせにおけるリパーゼの 安定性は、プロテアーゼの影響のために劣っている。

本発明の目的は、以下の目的のためリパーゼ及びプロテアーゼの二種を含有する 洗剤組成物を提供することにある一一各々の酵素を含有することは、それぞれ脂 肪及びたん白質の汚れに対し洗浄力を著しく改善する、−別個に添加された各々 の酵素は、洗剤溶液中で良好な安定性を示し、さらに 一リパーゼは、洗剤溶液中でプロテアーゼの存在のため失活が少なく従って脂肪 の汚れに対する洗浄力は、プロテアーゼによって著しくは減少されない。

驚くべきことに、本発明者等は以下の内容を見い出した。

すなわち全てのこれらの目的は、ある種の群のリパーゼとある種の群のプロテア ーゼを選択することにより達成出来る。

特に、リパーゼ及びプロテアーゼのこの組合わせは、従来技術における洗剤溶液 中でのリパーゼの安定性をさらに改良するものである。

発明の開示 本発明は、プロテアーゼ及びリパーゼを含有する洗剤組成物を提供するものであ る。プロテアーゼは、ズブチリシンノボ（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ　Ｎｏｖｏ）、 この変種（以下ニコノ変種は定義すれている）またはフサリウム（Ｆｕｓａｒｉ ｕｍ）プロテアーゼのいずれかである。リパーゼはプロイドモナス（Ｐｓｅｕｄ ｏｍμ＋ａｓ）に由来する。

本発明はまた、該プロテアーゼ及び該リパーゼを含有する酵素洗剤添加物をも提 供するものである。

発明の詳細な説明 ブローアーゼ 本発明で使用出来るプロテアーゼの種類は、フサリウムｓ　ｐ、（Ｆｕｓａｒｉ ｕｍ　ｓ　、）　、ズブチリシンノボ（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ　Ｎｏｖｏ）及び 後者のある種の変異体のプロテアーゼを含有する。

本発明において使用出来るプロテアーゼは、フサリウムＳＰ、（Ｆｔ郵Ｊユ朋− 迂工）、特にＦ、オキシスポラム（Ｌ７−及びＦ、ソラニ（Ｆ、５ｏｌａｎｉ） の菌株を培養することによってうろことが出来る。好ましい菌株には、ＤＳＭ　 ２６７２゜ＩＦＯ５８８０、ＡＴＣＣ６５９及び米国特許３．６５２．３９９　 （タケダ）に記載されている他の菌株並びにこれらの突然変異株及び変異体が含 まれる。菌株の培養並びにプロテアーゼの回収は、例えば米国特許３，６５２， ３９９に従って、業界で周知の原理に基づいて行うことが出来る。

本発明で使用出来る好ましいフサリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）プロテアーゼは、 ｐｌ（７〜１２、特にｐＨ８〜１０．５の範囲内に活性を有し、さらに最も好ま しくはそれらはそれらの範囲内において最適ｐＨを有する。

菌株ＤＳＭ　２６７２は、ブタベスト条約に基づいて１９８３年６月６日に寄託 された。該菌株は、Ｆ、オキシスポラム（Ｆ。

幻ヱ肛ｙ１ｍｌ−として同一視されてきている。他の菌株は、公衆に自由に入手 可能である。ＤＳＭは、ドイチェザムルングホンマイクロオルガニション、西ド イツ（ＤＳＭ）を意味し、ＩＦＯは、インスティテユートオブファーメンティシ ョン、大阪（ＩＦＯ）を意味しさらにＡＴＣＣは、アメリカンタイプカルチュア コレクション（米国）を意味する。

ズブチリシンノボ（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ　Ｎｏｖｏ）は、バシラスアミロリフ ェファシエンス（ハ劇刀且り特り因ヱ山狡国１１５）　由来のアルカリ性プロテ アーゼである。ＢＰＮ　’の同意語として、バシラスプロテアーゼナガルゼ（ハ 旦旦旦」皿圏ａｓｅ　Ｎａ且■■、ズブチロペプチダーゼＢ　（Ｓｕｂｔｉｌｏ ｐｅｔｉｄａｓｅ　Ｂ）及びズブチロペプチダーゼＣ（Ｓｕｂｔｉｌｏｐｅｔｔ ｄａｓｅ　Ｃ）がまた記載されてきている（Ｍ、オテーセン及び■、シュベドゥ セン、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２０巻、１９９〜２１０ペ ージ（１９７１年）を参照）。

そのアミノ酸配列は、ヨーロッパ特許１９９．４０４に記載されている（ブロク ター及びガンプル）。

本発明で使用できるズブチリシンノボ（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ　Ｎｏｖｏ）の変 異体は、以下の内容の変異体であり、ここにおいて１６６でＭｅｔがＧｉｎ、　 Ｐｈｅ＋　Ｃｙｓ＋　Ｈ３ｓ、　Ａｓｎ、　Ｇ１ｕ＋　Ａｌａ　もしくはＴｈｒ で置換されており；１６６位でＧｌｙがＬｙｓで置換されかつ２２２位でＮｅｔ がＣｙｓで置換されているか；または１６９位でＧｌｙがＡｌａで置換されかつ ２２２位でＭｅｔがＡｌａで置換されている、これらの変異体プロテアーゼ及び それらの調製は、ヨーロッパ特許１３，７５６（ゼネンティック）（参考のため 本発明で記載されている）に記載されている。

プロテアーゼは、最終洗剤組成物がプロテアーゼ活性０．００１〜０．５　Ａｌ ｌ　（Ａ）／　ｇを有する量で好ましく含有されている。

アンソン単位アルカラーゼ、ＡＵ　（Ａ）におけるプロテアーゼ活性は、アルカ ラーゼ標準に対し、ジメチルカゼインの消化により決定される。反応は、トリニ トロベンゼンスルホン酸を用い色形成により同一反応系内で追跡され、ここにお いて単位時間あたり吸光度の変化を測定する。条件は次のごとくである：　３７ ’Ｃ、ｐＦ［８，３、波長４２０ｎＩ１１、反応時間８分、測定時間３分であり 、例えばコバスフラ（Ｃｏｂａｓ　Ｆａｒａ）遠心分離分析装置を用いる。

リパーゼ 本発明で用いられる好ましいプソイドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）リパー ゼは、ｐＨ７〜１２、特にｐＨ８〜１０．５の範囲内で活性であり、さらに最も 好ましくはそれらは上記範囲内のいずれかで最適ｐＨを有する。

最も好ましいリパーゼは、Ｐｓ、セパシア　（Ｐｓ、　ｃｅ　ａｃｉａ）、Ｐｓ 、フルオレセンス（Ｐｓ、　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）及びＰｓ、フラギイ（７ −由来のリパーゼである。

好ましいＰｓ、セパシア　（ハエ４菌株はＤＳＭ　３３３３　。

ＤＳＭ　３３３４　、’　ＤＳＭ　３３３５　、　ＤＳＭ　３３３６　、　ＤＳ Ｍ　３３３７　、　ＤＳＭ　３４０１　、　ＤＳＭ３９５９である。これらのう ちで最も好ましいものは、ＤＳＭ　３３３５゜ＤＳＭ　３４０１及びＤＳＭ　３ ９５９である。該菌株は、以下の日にちにブタベスト条約に基づいて寄託されて いる：１五」ＩＬ−ｍ−寄主：Ｓ−一一− ＤＳＭ　３３３３−３３３６　１９８５年５月２８日ＤＳＭ　３３３７　１９８ ５年６月１０日ＤＳＭ　３４０１　１９８５年７月２２日ＤＳＭ　３９５９　１ ９８７年１月３０日他の好ましい菌株は、ファーメンティションリサーチインス ティテユート（日本）に寄託されたＦＲＩ　５４９４でありさらに特公昭５７− ５９．７５３　（工業技術院）に関してそれらから人手出来るものである。Ｐｓ 、セパシア（ハエ７−リパーゼは、ヨーロッパ特許２１４．７６Ｈノボ）または この明細書の実施例に対して、言及された日本の公開公報に従ってこれらの菌株 を培養することにより調製することが出来る。

Ｐｓ、フルオレセンス（Ｐｓ、　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼは、特開昭 ５３−２０．４８７　（アマノ）、特公昭５７−４２，３１２　（工業技術院） またはソ連発明者証４９１　、６９３　（ＵＳＳＲマイクロパイオールとして） に従って調製出来さらに、天野製薬株式会社（名古屋、日本）から、リパーゼＰ 「アマノ」の登録商標として商業的に入手可能である。

Ｐｓ、フラギイ（Ｐｓ、　ｆｒａｇｉ）リパーゼは、特公昭５６−２８．５１７ 及びヨーロッパ特許２０４．２８４（サラポロ）に従って調製され、さらにサッ ポロビール株式会社（日本）からＰｓ、フラギイ（Ｐｓ、　ｆｒａ且Ω−２２− ３９から由来する登録商標リパーゼ−Ｂの名称のもとて商業的に入手可能である 。

本発明で使用出来るプソイドモナスリパーゼは、次の文献に従って調製すること も出来る： 特公昭５６−２８，５１６　（サラポロ）：Ｐｓ、ニトロリゾセンス（Ｐｓ、　 ｎ１ｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ）　ｉ特公昭５０−２５，５５３　（工業技術院） ：Ｐｓ、メチビカ菌株すボリティカ（焉Ｌ」駈助１すＣａヱ虹工旦匹り旦印）； 特開昭４８−１０３．７９１　（天野）；特公昭５５−４２．６１３　（天野） ；特公昭４９−４５．５９２　（天野）；特開昭５９−１８７．７８０（）ウヨ ウボウ）；国際公開８７１００５６９（ギストーブロカデス）：Ｐｓ、シュッッ ゼリー（Ｐｓ、５ｔｕｔｚｅｒｉ）及びＰｓ。

ブソイドアルコリゲネス（焉■」■堕旦凹士四上ｉμ透り一；英国特許１，３７ ２，０３４（ユニリバー）：Ｐｓ、シュッッゼリー（匠５ｔｕｔｚｅｒｉ）　、 後者はＰｓ、エルギノザ（Ｐｓ、　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）として再分類されて いる；リパーゼｅｘＰｓ、グラディオリ（Ｐｓ、Ｉａｄｉａｌｉ）。

リパーゼは、最終洗剤組成物が、リパーゼ活性２０ＬＵ／　ｇ〜２０、０ＯＯＬ ＬＩ／　ｇを有する量で好ましく含まれる。

１リパ一ゼ単位（ＬＵ）は次の条件のもとでｐＨスタット中１　ｕｍｏ１２の滴 定可能な脂肪酸を生成するリパーゼの量である：３０°Ｃ，ｐＨ７，０、基質と してトリブチリン及び乳化剤としてアラビアゴム。

盟１蕎１１赳 本発明の洗剤組成物は、アニオン性、非イオン性、カチオン性、もしくは両性イ オンタイプ、またはこれらの混合物の界面活性剤が含んでなる。

組成物は、通常典型的には５〜３０重量％の量でアニオン界面活性剤を通常含有 するであろう。例えば、界面活性剤は全てアニオン界面活性剤であるか、または アニオン性及び非イオン性界面活性剤の混合物も使用出来る。

アニオン界面活性剤の典型的例は、線状アルキルベンゼンスルフェート　（ＬＡ Ｓ）、アルファオレフィンスルホネート（ＡＯ３）、アルコールエトキシスルフ ェート（ＡＥＳ）及びアルカリ金属の天然石けんである。

この点に関し、驚くべきことに以下の内容が見い出されている。すなわち本発明 で用いられるリパーゼ及びプロテアーゼは、アニオン界面活性剤を含有する洗剤 溶液中で良好な安定性を有する。

洗剋組弐批 本発明の組成物は、当業者に周知の他の洗剤成分を含有することが出来、例えば ビルグー、漂白剤、漂白活性剤、坑腐食剤、金属イオン封鎖剤、坑汚れ再付着剤 、香料、酵素及び漂白剤に対する安定剤などを含有出来る。組成物はまたリパー ゼ及びプロテアーゼ以外の酵素、例えばアミラーゼ、セルラーゼ及びオキシラー ゼを含有することも出来る。

本発明の洗剤組成物は、常法により、例えば粉剤、液剤などに製剤化出来る。

洗■悶皿立 複数の酵素は、リパーゼ及びプロテアーゼを含有する別個の添加物を添加するこ とにより、あるいはまた本発明の一緒にしたリパーゼ／プロテアーゼ添加物を添 加することにより、本発明の洗剤組成物に含ましめることが出来る。

リパーゼ及びプロテアーゼは、本発明の添加物が好ましくはリパーゼ活性５００ 〜５００，０ＯＯＬＵ　／ｇを有しさらに好ましくはリパーゼ活性０．５〜１０ ．ＯＡ［Ｉ（Ａ）　／　ｇを意味する量で含まれる。

本発明の添加物は、例えばダストを有しない粒状物、液体、スラリー等として製 剤化出来る。ダストを有しない粒状物は、例えば英国特許１，３６２，３６５（ ノボ）または米国特許４，１０６，９９１（ノボ）に従って調製出来る。リパー ゼ及びプロテアーゼは、造粒前または造粒後に混合される。

液体添加剤の場合には、酵素安定化剤が含まれるか、または酵素がヨーロッパ特 許２３８，２１６に従って保護される（ノボ及びアルブライト＆ウィルソン）。

災旌拠 以下の酵素を実施例で用いた： −フザリウムオキシスボラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）　リパ ーゼ：ヨーロッパ特許１３０．０６４（ノボ）に従って調製、−アルカラーゼ： ノボインダストリーＡ／Ｓの製品、バシラスリケニホルミス（Ｂａｃｔｌｌｕｓ 　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の培養により産生されたプロテアーゼ、 −サビナーゼ及びエスベラーゼ：ノボインダストリーＡ／Ｓの製品、米国特許３ ，７２３，２５０に従って坑アルカリ性バシラスｓ　ｐ　、（ＢａｃｉｌユＱよ ）を培養することによって得られたプロテアーゼ、 一ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）リバーゼ：ソ連発明者証９０６、１ ８０に従ってＰ、サイクロピウム（Ｌｓ１１旦１１リーを培養することによって 得られる、 一アスペルギルス（紅匹■旦ハ旦リパーゼニアマノＡＰ６　ｅｘ　Ａ、ニガー（ Ａ、旦脛旦　、−Ｐ　ｓ、フルオレセンス（Ｐｓ、　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ） リパーゼ：リパーゼＰ「アマノ」、 −Ｐ　ｓ、フラギイ（バーなｄリパーゼ：リパーゼ−Ｂ、サラポロビール社の製 品、 以下の二種の洗剤を以下の実施例で用いた：迭凰上　洗ｍ ＬＡＳ　６．９％賀／ｗ　５．７％１６ＡＨ（アルコールエトキシレー））　４ ．３％　−４，０％　−石けん　１．３％　−０，８％　− トリポリリン酸ナトリウム　３６．５％　−２９，７％　−炭酸ナトリウム　６ ．４％　−３，８％　−硫酸ナトリウム　２２．３％　−３３，０％　−ケイ酸 ナトリウム　１．８％　−１，９％　−過ホウ酸ナトリウム四永和物　１８．１ ％　−１９，５％　−ＴＡＢＤ　１．５％　−１，５％　− 〇ＭＣ０，９％　−− 合計　１００．０％−／讐９９．９％１１／一実施例における溶液は、約１８° のドイツ硬度を有する水道水を用いて調製した。

製造例 寒天斜面で培養した各々の菌株の培養物を、以下の組成を有する８００Ｉｄ、の 培地を有する２００ｄの振とうフラスコに導入トリプシン消化カゼイン　４　ｇ ／ｆ 酵母エキス　３　ｇ／ｊ２ 肉エキス　１．５　ｇｅｌ デキストロース　１　ｇ／ｆ １２１°Ｃで６０分間オートクレーブ処理した。

３０°Ｃで１日間振とう後、ブロスを用い、以下の組成を有する３００ｄの培地 を含有する通常の撹拌及び通気ファーメンタ−接種した： 酵母エキス　１　ｇ／Ｉ！。

ＫＨ２Ｐ０．　０．６７　ｇ　／　Ｉ Ｎａｇ）ＩＰＯ，，１２）１２０　０．６７　ｇ　／　Ｉ！。

グルコース　０．１　ｇ／／！ プルロニック（登録商標＞　６ＯＬ　０．４　ｄ／ｆ１２０°Ｃで１時間オート クレーブ処理した。

１日間発酵後、２００！のブロスを用い、以下の組成を有する１５００ｄの培地 を有する通常の撹拌通気ファーメンタ−に接種した： 酵母エキス　２０　ｇ＃２” Ｍｇ５Ｏ＜、７Ｈｚ０　２　ｇ／ｊ２ 、プルロー’−７り（登録商標＞　６ＯＬ　０．４　ｄ＃発酵時間は、ＤＳＭ　 ３９５９に対しては２日間でありＤＳＭ　３４０１に対しては３日間である。更 に消泡剤（ナルコ４３０２／９）を用いた。発酵停止後、細胞を１時間５５°Ｃ で、ｐＨ９，５（ソーダで調節）で加熱処理することにより殺した。ｐｔ＋は、 ブロスを３５°Ｃで約２００４２に蒸発させる前に、リン酸を用い約７．５に調 節した。ついでリパーゼを、５０％賀／賀及び８６％−／Ｗエタノール間の分画 エタノール沈殿物を用いて回収しついで真空乾燥した。

例１ プロテアーゼを人　する？　ｒ′　におけるリパーゼの〜定性 ４．８ｇ／Ｉ！の洗剤番号１及び４　ＬＵ／ｄのリパーゼ溶液を、０、０３２Ａ υ／！！、のプロテアーゼとともにまたは言亥プロテアーゼを含有しないで３０ 分間３０’Ｃでインキュベートした。インキュベーションする前または後にリパ ーゼ活性を測定し、さらに加えられた活性を％で表わした。

本発明のプソイドモナス（ｐ３６ｕｄｏｍｏｎａｓ）リパーゼが洗剤溶液中で良 好な活性及び安定性を有することが明らかである。

Ｐｓ、フラギイ　（ハよｍσリパーゼは、ヨーロッパ特許２０４　、２８４にお いて認められるごとく洗剤によって強く活性化されている。安定性は、本発明の プロテアーゼ（フサリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）及びズブチリシンノボ）によっ てほとんど影響されていないが、しかしこれらのリパーゼの安定性は、他のプロ テアーゼの添加により劣ることとなる。

試験した他の洗剤リパーゼは、プロテアーゼが無い場合においても、洗剤溶液中 での安定性は悪い。

例２ ゛　ｒ゛　にお番るプロテアーゼの６ 洗剤１　（５ｇ／ｆ）及び以下に示すようなプロテアーゼ（０，０３ＡＵ／　ｊ ２　）の溶液を、以下に示す時間２２°Ｃでインキュベートした。インキュベー ションする前及び後のプロテアーゼ活性を、合成オリゴペプチド基質（シグマＮ α５７３８８．５ｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡ）を用いティ タテークマルティスカン（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ　Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ）に関して測 定した。

全てのプロテアーゼが良好な安定性を示すことは明らかである。

例３ ″　でのリパーゼの〜 水道水に溶解した５ｇ／ｆ！、の洗剤１または２．０．０３Ａυ／Ｉ！。

のプロテアーゼ及び４　ＡＵｌ−のリパーゼ（Ｐｓ、セパシア（Ｐｓ、　ｃｅ旦 ａｃｔリーＤＳＭ　３４０１より由来）の洗浄溶液を用いた。

汚染されたスワッチを、５０Ｊのオリーブ油（シグマＮα０１５００）を６０゛ Ｃで７Ｘ７ｃｍの清潔な綿スワッチに適用して調製した。スワッチは使用前に３ 日間エイジングした。

各々の実験において、１０００ｄの洗浄溶液及び７個のスワッチを、トルク−〇 −メタービーカーに添加し、ついで３０°Ｃで３０分間撹拌せしめた。溶液中の リパーゼ活性を、この処理前及び処理後に測定した。トルク−〇−メターは、Ｊ 、Ｃ，ハリス　（Ｄｅｔｅｒｇｅｎｃｙ　Ｅｖａｌｕａｔｆｏｎ　ａｎｄ　Ｔｅ ｓｔｉｎｇ、　ＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌ　１ｓｈｅｒｓ社（１９５４ 年）、６０〜６１ページ）に記載されている。

結果は、添加されたリパーゼの活性％で示されている：プロテアーゼが無い場合 の結果から以下の内容が明らかである。すなわちリパーゼは、スワッチまたはオ リーブ油での汚染に対し吸着することにより洗浄溶液から著しくは除去されてい ない。

該結果はさらに以下の内容を示している。リパーゼは、プロテアーゼを含有しな い洗剤溶液中で秀れた安定性を有し、さらに本発明にかかるプロテアーゼが添加 された場合はぼ同等の安定性を有している。他のプロテアーゼを添加するとリパ ーゼの安定性は激的に減少する。

例４ プロテアーゼのパ 洗剤１　（水道水中５ｇ／ｌ）に関し、トルク−〇−メーターを用い３０°Ｃで ２０分間１１００ｒｐ撹拌しながら洗浄試験を行なった。Ｏまたは０．０３ＡＵ ／　ｆの指定されたプロテアーゼを用い、さらにＰｓ、セパシア（Ｐｓ、−エシ リｃｉａ）ＤＳＭ　３４０１由来の０または６０００ＬＵ／　ｆのリパーゼを用 いて実験を行なった。

はうれん草で汚染されたスワッチを、連続操作によりマチスウォシイングアンド ドライグユニット　（Ｍａｔｔｓ　Ｗａｓｈｉｎｇ　ａｎｄＤｒｙｉｎｇ、ＩＪ ｎｉｔ）　（ウェルナーマチス社、スイス）を用いて作成し、その際綿織物をほ うれん草のジュースに通し、２本ロール間でしぼりさらに３０°Ｃの空気（温度 調節した）で風乾する。

スワッチを３週間２０°Ｃでエージング処理し、ついで使用するまで一１８°Ｃ で保存した。

洗浄後、スワッチを冷水で洗いさらに風乾し、さらに洗浄力を４６０ｎｍで反射 率を測定することにより決定した。

以下の内容が明らかにされる°。すなわちプロテアーゼは有効でありさらにリパ ーゼは、プロテアーゼの作用に関し何ら影響を与えない。

例５ 一九ぺ：」四ηｖｒ力 ４回の汚染洗浄手順を用い、プソイドモナスセパシア（Ｌ些μ蝕μ狙罎しμ狙肛 ｊリ−ＤＳＭ　３４１０リパーゼ及び種々のプロテアーゼを組合わせ、洗浄試験 を次のように行なった。

５０Ｘ７ｃｍの綿スワッチを用いた。脂質／たん白質／粘土の汚れを、次の成分 を含有するエマルション（重量％表示）に適用した。

オリーブ油　１４．４％ ステアリン酸　１．８０ モノグリセリド（グリンテークＭＳＰ９０）　１．８０カーボンブラツク（デグ ザ社、スヮッチ４）　０．１８墨汁（ロートリング）　０．１８ 水　７９．４ 汚染後少なくとも２日間スヮッチをエージング処理した。

次の洗浄手順を用いた： 装置：　トルク−〇−メーター 洗剤：　洗剤番号１．１’５ｇ／β 温度：３０°Ｃ 時間エ　３ｏ分 水の硬度＝１８°　（ドイツ硬度） ｐＨ：　調製せず（約９．５） リパーゼ用量：　Ｏまたは１０．０ＯＯＬＵ／　ｆプロテアーゼ用量：　０また は０．３ＡＵ／ｆ布／液体比＝　７個のスラッチ／１０００ｄ４回の汚染洗浄サ イクル後、残留脂肪分を、ソックスレー抽出器により抽出し、さらに脂肪分の含 量（脂肪分（ｇ）／織物（ｇ）　Ｘ１００）を、洗浄により決定し、さらに抽出 した脂肪分の組成を、ＴＬＣ／ＦＩＤにより分析した。　（ＴＧ＝）リグリセリ ド、ＤＧ＝ジグリセリド、ＭＧ＝モノグリセリド、ＦＦＡ＝遊離脂肪酸、全て脂 肪分の重量％で示される）。

以下の内容が明らかにされる。すなわちプロテアーゼが存在しない場合、リパー ゼは、残留脂肪分の量を減少するのに役立ちさらに比較的により多くの遊離脂肪 酸とより少ないトリグリセリドに対しその組成を変化せしめるのに役立っている 。リパーゼの作用は、本発明にかかるプロテアーゼを添加することによりわずか に減少しているが、しかしその作用は他のプロテアーゼの添加により強く減少し ている。

国際調査報告 １１曜ｊ＋１１時−＾−−−１家・１．−Ｎ＠、ｐ（丁／ＤＫ８８１００１７７

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．プロテアーゼおよびリパーゼを含んでなる洗剤組成物であって、リパーゼが プソイドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）から由来しており、かつプロテアー ゼがフサリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）から由来しているかまたはズブチリシンノ ボ（ＳｕｂｕｔｉｌｉｓｉｎＮｏｖｏ）もしくはズブチリシンノボの変位体であ り、ここにおいて１６６位でＧｌｙがＡｓｎ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ ，Ｇ１ｎ，ＡｌａもしくはＧ１ｕで置換されており；１６９位でＧｌｙがＳｅｒ で置換されており；２２２位でＭｅｔがＧｌｎ，Ｐｈｅ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ａｓ ｎ，Ｇｌｕ，ＡｌａもしくはＴｈｒで置換されており；１６６位でＧｌｙがＬｙ ｓで置換されかつ２２２位でＭｅｔがＣｙｓで置換されているか；または１６９ 位でＧｌｙがＡｌａで置換されかつ２２２位でＭｅｔがＡｌａで置換されている 、前記洗剤組成物。
2. ２．プロテアーゼが、Ｆ．オキシスポラム（Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）またはＦ ．ソラニ（Ｆ．ｓｏｌａｎｉ）から由来している、請求の範囲第１項記載の組成 物。
3. ３．リパーゼがＰｓ．セパシア（Ｐｓ．ｃｅｐａｃｉａ）、Ｐｓ．フルオレセン ス（Ｐｓ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、Ｐｓ．フラギィ（Ｐｓ．ｆｒａｇｉ）、 Ｐｓ．ニトロレデュセンス（Ｐｓ．ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ）、Ｐｓ．メフ ィティカ（Ｐｓ．ｍｅｐｈｉｔｉｃａ）、Ｐｓ．ステユゼリー（Ｐｓ．ｓｔｕｔ ｚｅｒｉ）、Ｐｓ．プソイドアルカリゲネス（Ｐｓ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉ ｇｅｎｅｓ）、Ｐｓ．グラディオーレ（Ｐｓ．ｇｌａｄｉｏｌｉ）またはＰｓ． エルギナゼ（Ｐｓ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、好ましくはＰｓ．セパシア（Ｐｓ ．ｃｅｐａｃｉａ）、Ｐｓ．フルオレセンス（Ｐｓ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ） 、またはＰｓ．フラギィ（Ｐｓ．ｆｒａｇｉ）から由来している、請求の範囲第 １項または第２項記載の組成物。
4. ４．プロテアーゼ活性が０．００１ＡＵ（Ａ）／ｇ以上である、請求の範囲第１ 項〜第３項のいずれかに記載の組成物。
5. ５．リパーゼ活性が２０ＬＵ／ｇ以上である、請求の範囲第１項〜第４項記載の 組成物。
6. ６．アニオン性洗剤活性物質を、好ましくは５〜３０重量％含有する、請求の範 囲第１項〜第５項のいずれかに記載の組成物。
7. ７．アニオン性物質が、アルキルベンゼンスルフェート、アルファオレフィンス ルホネートまたはアルコールエトキシスルフェートである、請求の範囲第６項記 載の組成物。
8. ８．プロテアーゼ及びリパーゼが請求の範囲第１項〜第３項のいずれかに記載の ものであることを特徴とする、プロテアーゼ及びリパーゼを含んでなる洗剤洗浄 剤添加剤。
9. ９．リパーゼ活性が５００ＬＵ／ｇ以上である、請求の範囲第８項記載の添加物 。
10. １０．プロテアーゼが０．５ＡＵ（Ａ）／ｇ以上である、請求の範囲第８項また は第９項記載の添加物。