JPH03501621A - チオール反応性架橋試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、構成員が各々さらに少なくとも１個の別の反応性官能基に共有結合し ている少なくとも１個のチオール反応性官能基を含む、新しい種類のチオール反 応性架橋試薬、およびその製造方法に関する。特に、本発明は、置換２−シクロ ペンテン−１，４−ジオンその製造方法、およびそれらの架橋試薬としての用途 に関する。

発明の背景 架橋試薬は、既知であシ、かなりの範囲のこのような試薬が市販されている。広 義において、架橋試薬は、−緒に共有結合している２個またはそれ以上の反応性 官能基を含む。共有結合は、直接であってもよいが、多くの場合、反応性官能基 は、架橋基にそれぞれ共有結合することによって離れている。反応性官能基は、 同一または異なってもよい（いわゆるホモまたはへテロ官能架橋試薬）。

架橋試薬の１つの応用は、ポリペプチドまたは蛋白質が他の化学物質に共有結合 している複合化合物の製造にある。このよつな抱合体化合物の例としては、エフ ェクター分子、例えば薬剤または毒素ちるいは酵素またはキレート化された放射 線不透過あるいは放射性の金属原子のような信号生成化学物質に共有結合された 抗体および抗原分析物に共有結合している酵素がちる。

蛋白質、特に抗体または抗体断片内のチオール基をエフェクター分子に結合する チオール反応性架橋試薬の使用に著しい興味がちる。アミノ反応性活性化された エステルのような異なった官能基に共有結合されたチオール反応性官能基を有す るヘテロ官能試薬がこの目的に用いられている。従って、一般にまずへテロ官能 架橋試薬を、蛋白質の結合が望まれるエフェクター分子と反応させる。これは、 例えばエフェクター分子上のアミノ基を架橋試薬上のアミノ反応性官能基と反応 させることによって行ってもよい。次いで、蛋白質上の遊離スルフヒドリル基を 架橋試薬上のチオール反応性官能基と反応させて、望まれる抱合体化合物を生じ る。

マレイミドをチオール特異性官能基として用いるヘテロニ官能チオール反応性架 橋試薬（すなわち２個の反応性官能基を有するヘテロ官能架橋試薬）は、知られ ている。このような試薬の特別の例は、抗体または抗体断片および酵素または細 胞毒化合物を含む複合分子の製造に用いられているｍ−マレイミド−ベンゾイル −Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ　）である（　０’５ｕｌｌ ｉｖａｎ、　Ｍ、Ｊ　、ら、（１９７９）アナリテイカル・バイオケミストリー （Ａ、ｎａｌ、　Ｂユｏｃｈｅｎ　）。

〜４２０、Ｙｏｕｌｅ、　Ｒ−Ｊ−ら（１９８４）、プロシーディンゲス・オシ ・ナショナル・アカデミイー・オシ・サイエンシズ・オシ・デ・ユナイテッド・ ステーク・オシ・アメリカ（ＰＮＡＳ　ｕｓ＊　）、７７．５４８３〜５４Ｂ６ ）。

マレイミドをベースとするヘテロ官能架橋試薬の植種の誘導体も知られている。

しかしながら、マレイミド試薬は、非常に反応性でアシ、シかも容易にマレアミ ド酸に加水分解する。一般にこれらは、特に得られた分子が確実に各抱合された 基１個のみを有するように、複合分子の製造に必要なことが多い−および化学量 論量で用いる場合にスルフヒドリル基に低い特異性を有する。

α−八フロ酸誘導体チオール特異性官能基を用いるヘテロニ官能チオール反応性 架橋試薬も知られている〔例えば、米国特許第４６７１９５８号明細書を参照さ れたい〕。マレイミド試薬よシも反応性は少ないが、これらは、容易に相轟する α−ヒドロキシ酸誘導体およびその互変異性体に加水分解する。アルデヒド互変 異性体は本質的に非特異性であシ、しかもα−ハロ酸綽導体のチオール基に対す る全特異性を減少する。

前記の既知のへテロニ官能チオール反応性架橋試薬の低特異性によって、反応生 成物の複合体混合物が生じ得る。この複合体混合物は、チオール反応基と蛋白質 の非チオール基−！たは結合した化学物質の非特異性反応から生じる。例えば、 既知のチオール反応基は、複合体重合生成物を生じ得るアミンに対する競合反応 性を通例示す。望ましくない副反応は、結合された化学物質が飽和環窒素（例え ば大環状キレート化配位子において）のような第２アミンを有する場合に特に不 利である。これらの混合物の分離が困難であるのみでなく、複合化合物は、生体 内用では、絶対純度が最も重要である。

チオール反応性官能基が芳香族窒素複素環と結合したビニル基であるチオール反 応性架橋試薬もまた記載されている〔国際特許第ＷＯ／８８１０５４３５号明細 書〕。

本発明者らは、チオール反応性官能基が置換シクロペンテンジオン基である、新 しい種類のチオール反応性架橋試薬を今や見いだした。本発明による化合物は、 既知のマレイミドチオール反応性架橋−試薬と比較してスルフヒドリル基に対し て者しく優れた特異性を有し、しかもチオールとすぐれた速度で有利に反応する 。

従って、本発明の１面によれば、本発明者らは、式： 〔式中、又は−（ＣＨ２）ｎ−または−（ＣＨ２）ｍＣＨ＝ＣＨ−基（但しｎは １，２または３の整数であシ、かつｍは０またはｇｌ数１である）であシ、 Ｙは架橋基であシ、 Ｒは反応性官能基であり、かつ Ｒ１は０１〜４アルキル基である〕 の化合物を与える。

弐（１１０化合物の基Ｘは一〇Ｈ２−、−（ＣＨ２）２−、−（ＣＨ２）３−１ −ＣＨ＝ＣＨ−または−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−であってもよい。

式（１１の化合物においては、Ｙによって示される架橋基は、化合物の全体的有 用性に影響することなく、広範囲の可能性内で変化してもよい。従って、一般に 、Ｙは任意の２価の有磯基であってもよいが、但し弐（１１の化合物で企図され た任意の架橋反応において妨害すると考えられる官能基が実質的に含まれない。

従って、弐（１１の化合物におけるｉＹは、−〇−または−Ｓ−から選ばれた１ 個またはそれ以上のへテロ原子あるいは１個またはそれ以上の−Ｎ（Ｒ２）−（ 但し、Ｒ２は水素原子またはＣ］〜６アルキル基である）　、−ＣＯＮ（Ｒ”） −１−Ｎ（Ｒ２）Ｃｏ−１脂環式、芳香族またはへテロ芳香族基によって場合に よシ中断された場合によジ置換された脂肪族ヒドロカルピル穎であってもよい。

従って、例えばＹは１種またはそれ以上の一〇−電たけ−Ｓ−原子あるいは０５ 〜８シクロアルキレン（例えばシクロペンチレンまたはシクロヘキシレン）、Ｃ ６〜１２芳香族（例えばフェニレンまたは置換フェニレン）、０５〜】０ヘテロ 芳香族（例えばフラニル、ピリジル）、−Ｎ（Ｒ２）−、−ＣＯＮ（Ｒ２）−ま たは−Ｎ（Ｒ”）Ｃｏ−基によッテ任意に中断された場合によジ置換された直鎖 または分枝Ｃ１〜２゜アルキレン、Ｃ２〜２０アルケニレンまたハ０２〜２０ア ルキニレン鎖であってもよい。

Ｙ鏡上に存在してもよい置換基の例としては、ノ・ロデン原子、例えばフッ素、 塩素、臭素またはヨウ素原子ＳるいはＣユ〜６アルコキシ（例えばメトキシまた はエトキシ）、ヒドロキシ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ’０Ｒ４）（但しＲ３は水素原子 または０１〜６アルキル基であシ、かりＲ４はＣ１〜６アルキル基であシ、例え ば−ＮＨＣＨ３あるいは−Ｎ（ＣＨ３）２である〕あるいは置換アミド、ｆｆＩ えば式％式％ 整数であシ、Ｒ５は水素原子またはＣ１〜６アルキル基、例えばメチルでろ９、 そしてＲ６は場合によジ置換されたＣ１〜６アルキル基である〕から選ばれた基 がある。

Ｒ６が置換されたアルキル基の場合、これは例えば１個またはそれ以上のアミノ または環式アミン基によって置換されたアλキル基であってもよい。

式（１）の化合物におけるＲによって示される反応性官能基は、チオール、アミ ノ、カルボキシル、ヒドロキシル、アルデヒド、芳香族またはへテロ芳香族基と 反応できる任意の基であってもよい。芳香族基としては、例えば、フェノール基 がろる。ヘテロ芳香族基としては、例えばイミダゾリル基がある。

従って、Ｒは、例えば・・ロデン原子、例えば塩素、臭素またはヨウ素原子ある いは一３Ｈ、−ＮＨ２、ヒドラジン（−ＮＨＮＨ２）　、またはその誘導体〔例 えば−Ｎ（ＣＨ３）ＮＨ２、−ＮＨＣＯＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ９ＮＨＮＨ２また はフェニルヒドラジン〕、−ＮＣＯ、−ＮＣ８、−ＮＨＯＨ、−ＣＯＲ７［但し Ｒ）は塩素または臭素原子のようなハロゲン原子あるいはＮ３．０１−６アルコ キシ、例えばメトキシ、Ｃ６〜１２アリールオキシ（例えばニトロフェニルオキ シまたはジニトロフェニルオキシ）、イミジルオキシ（例えばスクシンイミジル オキシ）あるいはイミダゾリルオキシ基である〕、イミド、例えばマレイミド、 式Ｈｅシ１−Ｃ（Ｈｅシ２）＝ＣＨ２（但し同一または異なってもよいＨａｔｌ およびＨｅＦ、２は各々窒素含有複素環式基、例えばピリゾル基であるか、ある いはＨｅＦ、”は窒素含有複素環式基でろってそしてＨｅｍ”は水素原子である ）のビニル基、例えば式のビニルピリゾル基あるいは式 Ｉ （式中　ＨＡはさきに定義された通９である）のジオンであってもよい。

式（１）の化合物における基Ｒ１は、例えばメチル、エチル、グロぎル（例えば ｎ−プロピル）あるいはブチル（例えばｎ−ブチル）基であってもよい。

一般に、式（１）の化合物において、架橋基Ｙは、場合により１個またはそれ以 上の一〇−または一８一原子あるいはシクロヘキシレン、フェニレン、−ＮＨ− 、−Ｎ（ＣＨ３）−１−ＣＯＮＨ−または−〇〇Ｎ（ＣＨ３）−基によって場合 により中断された場合により置換されｆｃ０１〜１ｏアルキレン、Ｃ２〜１０ア ルケニレンあるいはＣ２〜ｌｏアルキニレン鎖が好ましい。この型の領土に存在 してもよい特に有用な置換基としては、置換アミド基、特に式−（ＣＨ２）っＣ ０Ｎ（Ｒ５）（Ｒ６）の基がある。

式（１）の化合物におけるＲは基−ＣＯＲ７（但し、Ｒ７は０１〜６アルコキシ 、特にメトキシ、Ｃ６〜、２アリールオキシ、特ニニトロフェニルオキシまたは ジニトロフェニルオキシ、イミジルオキシ、特にスクシンイミジルオキシあるい は が好ましい。

弐（１）の荷に有用な化合物は、Ｒが一００Ｒ７であり、かつＲ７がニトロフェ ニルオキシまたはスクシンイミジルオキシのものまたはＲが 〔但し式（１）の化合物におけるＲ１はメチルが好ましい〕のものである。

本発明による化合物の１つの特別の詳は式（１）〔式中Ｘは−（ＣＨ２）−また は−（ＣＨ２）ｍＣＨ＝ＣＨ−基（但し、ｎは２または６の整数であり、かつｍ は０または整数１である）、Ｙは共有結合または架橋基であり、Ｒは反応性官能 基であシ、かつＲ１はＣ１〜４アルキル基である〕を有する。

本発明による特に有用な化合物は、２−（３−カルボキシプロパン−１−イル） −２−メチル−４−シクロペンテン−１，３−ジオン、そのスクシンイミドエス テルおよび置換誘導体、 ２−（３−カルボキシプロパン−１−イル）−２−メチル−４−シクロペンテン −１，６−ジオン、そのｐ−ニトロフェニルエステル２よび置換誘導体および１ ．２−エタンジイルビス［，２−（３−アミノカルボニルプロパン−１−（ル） −２−メチル−４−シクロペンテン−１，６−ジオン〕２よびその置換誘導体で るる。

前記化合物の置換誘導体としては、鎖Ｙについて前記の置換基を有するものがあ る。

式（１）の化合物は、蛋白質、例えば抗体または抗体断片のような分子を薬剤、 毒素およびキレート化された放射線不透過または放射性金属原子のようなエフェ クター分子あるいは他の蛋白質、炭水化物あるいは他の生物に存在する分子に架 橋して、診断または治療に使用する複合化合物（Ｃｏｎｊｕｇａシｅ　Ｃｏｍｐ ｏｕｎｄ　）の形成に有用である。使用時には、本発明の化合物は、逐次反応お よび既知のへテロまたはホモ官能チオール反応性架橋試薬の使用に記載のものと 類似の方法を用いて、架橋される分子と反応してもよい。従って、式（１）の化 合物における官能基Ｒは、まず前記のエフェクター分子、蛋白質、炭水化物筐た は愼の生物に存在する分子と反応して、チオール特異性シクロペンテンジオン基 が、蛋白質のような第２の分子におけるチオール基との反応に利用できる複合体 （Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ　）を形成できる。

基Ｘ、Ｙ、Ｒお工びＲ１が特記しない限υ前記に定義された通ジでらる式（１） の化合物は、下記のプロセスによって製造できる。下記の反応の若干において望 ましくない副反応′ｔ−避けるために、出発原料に存在し、しかも最終製品に望 まれるが反応自体に関与する必要のない官能基を保護することは必要であろう。

従来の保護および脱保護操作を使用してもよい。

従って、例えば弐（１）の化合物は、式（２）の中間体ジオンを、フェニルセレ ニルハライド、例えばフェニル上１／ニルクロリドと反応させ、次いで、過酸化 水素または過ヨウ素酸塩のような酸化剤を用いて酸化することによって製造でき る。

この反応は、エステル、例えば酢酸エチルあるいはエーテル、例えばテトラヒド ロフランのような環状エーテルのような有機溶媒またはこれらの混合物中で任意 の適当な温度、例えば１０″Ｃ〜３０°Ｃのような０°Ｃ〜５０℃において行う ことができる。

慣のプロセスにおいて、式（１）（式中、Ｒは一〇〇Ｒ７である）の化合物は、 場合によってジシクロへキシルカルボジイミドのようなカップリング剤の存在下 に、ノ・Ｉ：Ｉデン化された炭化水素、例えばジクロロメタンのような溶媒中で 、０℃〜５０℃の範囲内の温度において、式（３１ の相当するカルボン酸またはその活性化された誘導体（例えば）・ライドまたは 無水物）をアルコールＲ７０Ｈと、反応させることによって製造できる。

この反応は、式〔ｌ）（式中、Ｒは−ＣＯＲ’であシ、かつＲ７はアリールオキ シまたはイミジルオキシである）の化合物の製造において特に適当である。

式１．３１の中間体は、新しい化合物であり、シかも本発明の別の１面を形成す る。

’ｉｌ」のプロセス１において、式（Ｉ）〔式中、Ｙは−Ｃ０Ｎ（Ｒ２）−およ び−ＮＣＲ２）Ｃｏ−基によって中断された架橋基である〕の化合物は、ジアミ ンＨ２ＮＹ３ＮＨ２（式中ｙｌ　、ｙ２およびＹ３は−ＲＫなって架橋基Ｙを形 成する）の存在下式（４１ の酸を、ＲＹ２Ｃ○２Ｈ’１）ｔＲと反応させることによって製造できる。

この反応は、カップリング剤、例えばジシクロへキシルカルボジイミドの存在下 に、ノ・ロデン化された炭化水素、例えばジクロロメタンのような溶媒中におい て温度、例えば０゛Ｃ〜５０°Ｃにおいて行うのが好ましい。

式（２）（式中、Ｘは−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ＝ＣＨ−基でるる）の中間体は、ハ ロゲン化さｎた炭化水素、例えばジクロロメタンのような溶媒中において、適当 な温度、例えば０℃〜３０’Ｏにおいて式（５） のアルデヒドをイリド、例えば式（Ｒ８）３Ｐ＝ＣＩ（２−Ｙ−Ｒ（式中　Ｒ８ はアリール、例えばフェニル基である）と反応させることによって製造できる。

この反応において用いるイリドは、適切な容易に入手できる出発原料から標準操 作を用いて製造できる。

式１５）のアルデヒドは、ジクロロメタンのような溶媒中における、低温、例え ば−７８°Ｃにおいて、式（６）のジオンを、オゾンによるオゾン分解に付し、 次いで硫化ジメチルのような還元剤による処理によって製造できる。

式（６）のジオンは、既知の化合物であるか″または既知の化合物の製造（で用 いられるものと類似の方法によって製造できる。

式（２）（式中、Ｘは−（ＣＨ２）ｎ−基で６Ｃ１がっｎは２または６の整数で ある）の中間体は、エステル、例えば酢酸エチルのような溶媒中において炭素の ような組木上のパラジウムまたは白金の存在下に和尚する式（２）〔式中、又は −（ＣＨ２）　ＣＨ＝ＣＨ−テｈ　ル）　（Ｄ　化合物’ｌ”、例えば水素によ って水素添加することによって製造できる。

式（２）（式中、Ｘは−ｃＨ２−であシ、Ｙは共有結合であシ、かつＲは基−Ｃ ＯＲ７である） の中間体は、式（６）（但し、ｍは整数１である）のジオンを前記のようなオゾ ン分解に付し、次いで、クロム酸または＊ｇ（ＮＨｓ）２＋のような銀錯体のよ うな酸化剤を用いて、中間体酸（すなわちＲが−ＣＯ２Ｈである化合物）に酸化 し、次に式（３）の化合物からの式（１）の化合物の製造について的記のアルコ ールＲ’ＯＨとの反応によって製造できる。式（２）（式中、Ｘは−ＣＨ２−で あり、Ｙは共有結合であｐｌかっＲは−ＣＯＲ７以外である）の他の中間体は、 Ｒが−ＣＯＲ７またはＣ０２Ｈである相当する化合物から、本明細書において記 載されたようなカルボキシルまたはエステル化されたカルボキシル基の従来の変 成方法によって製造できる。

式（３）および（４）のφ間体酸は、相当するエステル〔例えば、式（１）（式 中、Ｒは一〇ＯＲ’であｐｌかりＲ７は０１〜６アルコキシ基である〕から、ジ クロロメタンのような溶媒中における酸、例えばトリフルオロ酢酸による処理に よって製造できる。

付定の実施預様の記載 下記の例は、本発明を具体的に説明する。温度は、すべて℃である。

中間体１ ２−７　！Ｊシル−−メチルシクロペンタン−１，３−ジオン ２−メチルシクロプロノぐノー１．３−ジオン（０，２２モル）を水酸化ナトリ ウム溶液〔水（１７６１／）中ＮａＯＨ（Ｄ、２２モル）〕に溶解し、次いで臭 化アリル（０，２６モル）を徐々に加えた。反応混合物を６０゜に３日間加熱し 、冷却し、次いでＣＨ２Ｃｌ２中に抽出した。ＣＨ２０１，２抽出液を一緒にし 、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、（ＭｇＳＯ４上で）乾燥し、ろ過し、次いで真空 中で濃縮した。得られた黄色油を、２０ａのｖ】ｇｒｅｕｘカラムを用いて蒸留 した。標記化合物（収率６９％）を、１０１°〜１０６°（水ポンプ圧力）にお いて捕集した。

中間体２ ２−フォルミルメチル−２−メチルシクロペンタン−１，３−ジオン 中間体（１）　（０，０７モル）をＣＨ２Ｃｌ２　（２０ｍｌ　）に溶解し、次 いで一７８°においてオゾン分解した。オゾン分解の完了時に、過剰の硫化ジメ チルを加え、次いで反応混合ｖＤを放置上て室温に温めた。この反応混じに中１ 闇体６の製造に用いた。

中間体２（０，０６２モル）をＣＨ２（Ｊ２　（２Ｑ　ｍｌ　）　Ｋ溶解し、０ °に冷却し、次いでｃＨ２ｃ’２（５Ｑ　ｍｌ　）　中ノｔｅｒｔ−ｉ　トキシ カルボニルメチレントリフェニルポスホラン（ｆ］、０７４モル）を徐々に加え た。次いで反応混合物を室温において１夜攪拌し、次に真空中で濃縮した。フラ ッシュカラムクロマトグラフィーを用いる精製を行って（固相−シリカゲル、溶 離剤＝１；１ジ用いたイリドがメトキシカルボニルメチ１／ントリフエニルホス ホラン（０，０７４モル）であった以外ハ、中間＃−４ 一イル）−２−メチルシクロペンタン−１，５−ゾ中１ｍ”Ｊ　不５　ｆａ）　 （０，０３７モル）　’ｅ昨（４１ｚチル（２５０ｍ！　）に溶解し、次いで活 １生炭上の肚媒童のパラジウムを加えた。次いで、反応混合物をＰａｒｒ水素添 加器に入れた。水素の吸収が停止した時に、反応混合物をろ過し、次いで真空中 で濃縮して、定量的収率で標記化合物を得た。

製造した。

例１（〜の化合物（４，７６×１０−３モル）をＣＨ２Ｃｌ２（１０’ｎｉに溶 解し、久いてトリフルオロ酢酸（９，５２Ｘ　１０−３モル）を加えた。反応混 合物を１０時間還流し、その後この反応混合物を真空中で濃縮した。フラッシュ カラムクロマトグラフィー（Ｉｄ相＝シリカケ９ル、溶離剤＝に１ゾエチルエー テルニ４０°〜６００石油エーテル〜５：１ゾエチルエーテル：４０°〜６００ 石率−７８％）を得た。

融点１１０°〜１１１゜ 実測分析値：　Ｃ，６１，６４；Ｈ，６，３Ｄ条Ｃ１０８１２０４に必要なイ直 　：　ｃ、６１．２１；Ｈ，６，１６％中間体４（ａ）（Ｄ−０１８モ／’　） 　ｋ酢酸エチル（４Ｑｍ？）に溶解し、次いでフェニルセレニルクロり　）”　 （０，０２６モル）を添加した。反応混合物を室温において１夜攪拌した。次い で、この反応混合物を水洗し、次いでテトラヒドロフラン（２Ｄｍ／）を酢酸エ チル層に添加した。反応を００に冷却し、次いで１０％Ｈ２Ｏ２（２，ｇ当量） を添加した。室温において２時間攪拌後、反応混合物を水洗し、次いでＮａＨＣ Ｏ３で飽和した。次に、酢酸エチル層を乾燥しくＭｇ５０４）、ろ過し、次いで 真空中で濃縮した。次に、フラッシュカラムクロマトグラフィーによるｎＩｇ’ ｉ行って（ｍｌ相；シリカゾル、溶離剤＝（１：１）ジエチルエーテル：４０° 〜６０°石油工標記化合物（収率４１％）を中間体４（ｂ）から同様に製造した 。

（ａ）２−（３−カルボキシプロパン−１−イル）−２−メチル−４−シクロペ ンテン−１，６−ジオン、スクシンイミドエステル 中間体５（’１．５３Ｘ１０−３％ル）’ｆｒ、ＣＨ２Ｃｌ２　ｋ溶媒とじて用 いてＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１，８４Ｘ　１０−３モル）と反応させた 。反応混合物を室温において２時間攪拌した。次いで、この反応混合物をろ過し て、沈殿した尿素を除去し、次に得られたＣＨ２ＣＺ２溶液を真空中で濃、縮し て、粗スクシンイミドエステル全生じ、これをフラッシュカラムクロマトグラフ （−によって精製して（固相＝シリカゲル、溶離剤（１：３）ジエチルエーテル ：　ＣＨ２Ｃｌ２）　、標記化合物（収率５１％）を得た。

融点１０４°〜１０６゜ 実１］１分析値’　Ｃｌ３７−２４”、Ｈ２Ｓ、２５＋Ｎ、４−６８％Ｃ１４Ｈ １５ＮＯ６に必要な値’　Ｃ’、５７．３３；Ｈ，５，１５；Ｎ、４．７７％狙 エステルを、同様に中［４体５から製造した。エーテル全周いてＣＨ２０１，２ から粗エステルを沈殿し、次いで得られたｍ１体をエーテル中で粉砕して標記化 合物（収率６９％）を得た。

融点９７°〜９８゜ 実測分析値：　Ｃ，６Ｃ１゜７１　；Ｈ，４，９８；Ｎ、４．５３％Ｃ１６Ｈ１ ５ＮＯ５に必要な値：　Ｃ，６０，５６：Ｈ，４，７６：Ｎ、４．４１％中間体 ５　（２，ＯＸ　１０−３モル）をＣＨ２（Ｊ２　（１０ｎ／）に溶解し、次い でエチレンジアミン（１，ＯＸ　１０−３モル）を添加した。これに次いでジシ クロへ中ジルカルボジイミン（２Ｘ　１０−３モル）を添加した。反応混合物を 室温において１９時間攪拌し、次いでろ過し、次に真空中で濃縮した。得られた 褐色油を、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して（固相＝シリ カゾル、溶離剤＝　（９：　ｉ　）　ＣＨ２ＣＺ２：メタノール）、標記化合物 を得た（収率２６％）。

融点９９°〜１０１゜ 実測分析値：　Ｃ，６３，０３；Ｈ，６，９９；Ｎ、６．５　％Ｃ２２Ｈ２８Ｎ ２０６に必要な値：　Ｃ，６３，４４；Ｉ（，６，７７；Ｎ、６．７２％ＰＣＴ ／Ｇ：ｉ　８９１００９２５ １１１Ｔｌ＋ＩｌｌＩｌｌａｌＡＩＩＭ１１□６汽ＮＩ−２−

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．式（１） ▲数式、化学式、表等があります▼（１）〔式中、Ｘは−（ＣＨ２）ｎ−または −（ＯＨ２）ｍＣＨ＝ＣＨ−基（但しｎは１，２または５の整数であり、かつｍ は０または整数１である）であり、 Ｙは架橋基であり、 Ｒは反応性官能基であり、かつ Ｒ１はＣ１〜４アルキル基である〕 の化合物。
2. ２．Ｙが−Ｏ−または−Ｓ−から選ばれた１個またはそれ以上のヘテロ原子ある いは１個またはそれ以上の−Ｎ（Ｒ２）−（但し、Ｒ２は水素原子またはＣ１〜 ６アルキル基である）、−ＣＯＮ（Ｒ２）−、−Ｎ（Ｒ２）ＣＯ−、脂環式、芳 香族あるいはヘテロ芳香族基によつて場合により中断された場合によつて置換さ れた脂肪族ヒドロカルビル鎖である、請求の範囲第１項に記載の化合物。
3. ３．Ｒがチオール、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシル、アルデヒド、芳香族 またはヘテロ芳香族基と反応し得る基である、請求の範囲第１項または第２項に 記載の化合物。
4. ４．Ｒがハロゲン原子または−ＳＨ、−ＮＨ２、ヒドラジン（−ＮＨＮＨ２）あ るいはその誘導体、−ＮＣＯ、−ＮＣＳ、−ＮＨＯＨ、−ＣＯＲ７〔但しＲ７は 水素原子またはＮ３、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ６〜１２アリールオキシあるいは イミダゾリルオキシ基である〕、イミド、式ｅｔ１−Ｃ（Ｈｅｔ２）＝ＣＨ２（ 式中、同一または異なつてもよいＨｅｔ１およびＨｅｔ２は各々窒素含有複素環 式基であるか、あるいはＨｅｔ１が窒素含有複素環式基であつてそしてＨｅｔ２ は水素原子である）のビニル基あるいは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１はＣ１〜４アルキル基である）のジオンから選ばれた基である、請 求の範囲第３項に記載の化合物。
5. ５．Ｒが基−ＣＯＲ７（但し、Ｒ７はｃ１〜６アルコキシ、Ｃ６〜１２アリール オキシ、イミジルオキシ、▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式 、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼基である） である、請求の範囲第４項に記載の化合物。
6. ６．２−（３−カルボキシプロパン−１−イル）−２−メチル−４−シクロペン テン−１．３−ジオン、そのスクシンイミドエステルおよび置換誘導体。
7. ７．２−（３−カルボキシプロパン−１−イル）−２−メチル−４−シクロペン テン−１，３−ジオン、そのｐ−ニトロフエニルエステルおよび置換誘導体。
8. ８．１，２−エタンジイルビス〔２−（３−アミノカルボニルプロパン−１−イ ル）−２−メチル−４−シクロペンテン−１，３−ジオン〕およびその置換誘導 体。
9. ９．反応性官能基Ｒがエフエクター分子または蛋白質、炭水化物あるいは他の生 物に存在する分子に共有結合され、かつチオール特異性シクロペンテンジオン基 はチオール基との反応に利用できる、請求の範囲第１項に記載の化合物。
10. １０．式（２） ▲数式、化学式、表等があります▼ のジオンをフエニルセレニルハライドと反応させそして得られた生成物を酸化す ることを特徴とする、式（１）の化合物の製造方法。