JPH03501624A - アロエ組成物およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 アロエ組成物およびその使用 関連出願 本出願は、１９８８年１月１４日に出願された米国出願シリアル番号１４４．８ ７２号の一部継続であり、それは「アロエ製品の製造方法」という名称であり、 その全内容および開示がここで参考として具体的に組み込まれる。前記米国出願 シリアル番号１４４．８７２号は、米国出願シリアル番号８６９，２８１号、名 称「アロエ製品の製造方法、それによって製造された製品およびその組成物」、 米国特許第４，７３５，９３５号として１９８８年４月５日に特許付与されたも のの一部継続出願であり、その全内容および開示もまたここに参考として具体的 に組み込まれる。前記米国出願シリアル番号８６９，２６１号は、１９８６年６ 月２０日に出願され、１９８７年１月１５日に国際公開番号Ｗ　Ｏ８７／　００ ０５２のもとに公開された国際公開番号Ｐ　ＣＴ　／　Ｕ　Ｓ　８Ｂ１０１３３ ５号に対応しており、その全内容および開示もまたここに参考として具体的に組 み込まれる。

１９８８年１月１４日に出願された、シリアル番号８６９．２８１号は、１９８ ５年１２月１７日に出願された米国出願シリアル番号８１０．０２５号（現在、 放棄された）の一部継続であり、これは１９８５年７月１２日に出願された米国 出願シリアル番号７５４．８５９号（現在、放棄された）の一部継続であり、こ れは１９８５年６月２８日に出願された米国出願シリアル番号７５０．３２１号 （現在、放棄された）の一部継続であり、これは１９８４年９月１２日に出願さ れた米国出願シリアル番号６４９．９６７号（現在、放棄された）の一部継続で あり、これは１９８２年５月７日に出願された米国出願シリアル番号３７５．７ ２０号（現在、放棄された）の一部継続である。出願シリアル番号８１０，０２ ５号は「アロエ製品の製造方法およびそれによって製造される製品」という名称 である。出願シリアル番号７５４，８５９号、７５０，３２１号、６４９．９６ ７号；および３７５．７２０号は「アロエベラ製品の製造方法」という名称でこ の発明はアロエ植物を処理し、この植物の一部を取り出して局所用ならびに内服 用の組成物に処理する技術ならびにこのアロエの部分を含む組成物およびその使 用に関する。

２、従来技術の説明およびその他の情報アロエ　ベラは広く信じられていたよう なサボテン植物ではなく、むしろユリ科の仲間である。約３６０種のアロエ植物 が知られている。バーディング１アロエズ　オブ　ザある。それらは暑い乾燥し た地方に生育するようであり、地中海、中東、アフリカ、中国、日本、メキシコ およびアメリカ合衆国南部から広く散在している。その医薬特性のために用いら れるいくらかの重要な種に、アロエ　パルレイノルズ（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ）　、 アロエズ　オブ　トロピカルＴｒｕｓｔｅｅｓ）　、アロエ記録基金（Ｔｈｅ　 Ａｌｏｅ　Ｂｏｏｋ　Ｆｕｎｄ）　、ババネ　スワジランド（Ｍｂａｂａｎｅ　 Ｓｗａｚｉｌａｎｄ）。しかし、Ａ。

バルバデンシスミラーは、広く用いられ、いわれるところの最も効果的な治療力 のため、「真のアロエ」として一般的に認められているが、日本ではＡ、アルボ レッセンスミラ−（Ａ、　ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ　Ｍｉｌｌｅｒ　）が胃腸疾 患から水虫までの範囲にわたる種々の病気のための民間治療薬として、伝統的に 用いられてきた。

アロエ　ベラは、ロゼツト模様で茎に結合しているふくらんだ緑の葉を持つ多年 生植物である。成熟した植物の葉は縁に沿ってのこぎり様の鋭い先を持ち、長さ ２５インチより大きくなりうる。

第１図および第２図に示したように葉を横断的に切ると、厚いクチクラで覆われ た表皮（３）の外壁が見える。表皮（３）の下に、柔組織として知られている葉 緑組繊細胞とより薄い壁で仕切られた細胞とに区別される葉肉がある。柔組繊細 胞は透明な粘液質のシェリー（１）を収容する。内に維管束鞘細胞を有する維管 束（２）は緩下剤特性を有する黄色の液汁を含み、また２つの主な細胞にはさま れている。植物細胞で代謝副産物として生成されるシュウ酸カルシウムの針状結 晶が、葉の中央部分で主に見つかる。

アロエ　ベラは２つの主な液源、すなわち黄色のラテックス（滲出液）と透明ゲ ル（粘液）を含んでいる。アロエバルバデンシス　ミラーの葉の乾燥させた滲出 液をアロエという。商業的名称はクラカオ　アロエ（Ｃｕｒａｃａｏ　ａｌｏｅ ）テある。それは主としてアロイン、アロエーエモジンおよびフェノールからな る。ブルース（Ｂｒｕｃｅ）　、サウス　アフリカン　メディカル　ジャーナル （Ｓｏｕｔｈ　Ａｆｒｉｃａｎ　ＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ）　、　４１： 　［４（１９８７）　；モロ（Ｍｏｒｒｏｗ）ら。

アーキブス　ダーマトロジー（Ａｒｃｈｉｖｅｓ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ）　 。

１１６：　１０６４−１０６５（１９８０）　；サレク（Ｓａｌｅｋ）ら、コロ −ジョン　プリペンション＆コントロール（ＣｏｒｒｏｓｉｏｎＰｒｅｖｅｎｔ ｉｏｎ　＆　Ｃｏｎｔｒｏｌ　）　、　９−１０（１９８３）　；　７　ツブ（ Ｍａｐｐ）ら、プランタ　メゾイカ（Ｐｌａｎｔａ　Ｍｅｄｉｃａ　）　、　１ ８　：　３６１−３６５（１９７０）　；ランワルド（Ｒａｎｗａｌｄ）、アー キブス　ファーマシ−（Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｐｈａｒｍａｚｉｅ）　、　３１５ ：４７７−４７８（１９８２）。

アントラキノン類およびそのグリコシド類を含む多くのフェノール類が、薬剤的 に活性であることが知られている。

ブルース（Ｂｒｕｃｅ）、エクセルサ（Ｅｘｃｅｌｓａ）　５　：　５７−８８ （１９７５）　、スガ（Ｓｕｇａ）ら、コズメティック　アンド　トイレタリー ズ（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ　ａｎｄ　Ｔｏｉ　１ｅｔｒｉｅｓ）　、　９８　：　ｌ 　０５−１０８（１９８３）。

その植物の柔組繊細胞からの粘液質のシェリーをアロエベラ　ゲルという。ゲル が不適当な処理技術によって汚染されなければ、分解したり、ゲルの変色の原因 となるアントラキノンは通常存在しない。

アロエ　ベラ　ゲルは、約９８．５重量％水である。全固形分の６０％より多く が炭水化物起源のポリサッカライドからできている。有機酸および無機化合物、 特にシュウ酸カルシウムが固形分の残余を成す。

アロエ植物の葉令部、滲出液および新鮮なゲルが、人間の種々の苦痛のために用 いられてきた。医薬の治療薬としてそれを使用した証拠は、紀元前４００年のエ ジプト人にさかのぼることができる。アロエ　ベラはまた死体に防腐保蔵処理を 施し、かつ死を引き起こすものから死体の防腐保蔵処理者を保護するために用い られた。他の初期の文明はアロエ　ベラを、皮膚の手入れ、虫に刺されたりくわ れたりした傷の手当て、かき傷および潰瘍の処置、傷の治療の促進、髪が失なわ れるのを防いだり下剤として用いられた。

それは駆虫剤として、下剤として、健胃剤として、多くの文化の伝統的な薬であ り、そしてとりわけ癩病、火傷およびアレルギー性の病気のために用いられた。

コール（ｃｏｌｅ）ら、アーキブス　オブ　ダーマトロジーアンド　シフィロロ ジー（Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｃ＋ｙ　ａｎｄ　５ｙｐｈ ｉｌｏｌｏｃ＋ｙ）　。

４７　：　２５０（１９４３）　：　：７プラ（Ｃｈｏｐｒａ）ら、グロサリー 　オブインディアン　メゾイカナル　プランタ（Ｇｌｏｓｓａｒ　ｏｆＩｎｄｉ ａｎ　）Ｉｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔｓ）　、カランシル　オブ　サイエン ティフィック　アンド　インダストリアルリサーチ（Ｃｏｕｎｃｉｌ　ｏｆ　５ ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ａｎｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）　 。

ニュー　プリー（Ｎｅｗ　Ｄｅｌｈｉ）　；シップ（Ｓｈｉｐ）　、ジャーナル 　オブ　ザ　アメリカン　メディカル　アソシエーション（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ ｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ）　 。

２３８　：　１７７０−１７７２（１９７７）　：モートン（Ｈｏｒｔｏｎ）　 、アトラスオブ　メディカル　プランタ　オブ　ミドル　アフリガンドマス　パ プリッシャ−（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｃ，Ｔｈｏｍａｓ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ）　。

７８−８０（１９８１）　、ディーズーマーチンズ（Ｄｉｅｚ　−Ｈａｒｔｉｎ ｅｚ）　。

ラ　ザビラ（Ｌａ　２ａｂｉｌａ）　、コミユニカドＮ０４６ソブレレクルソス 　ビオティコス　ポテンシャレス　デルバイス（Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｄｏ　Ｎａ ２Ｓ　５ｏｂｒｅ　Ｒｅｃｕｒｓｏｓ　ＢｉｏｔｉｃｏｓＰｏｔｅｎｃｉａｌｅ ｓ　ｄｅｌ　Ｐａ１ｓ）　、Ｉ　Ｎ　Ｉ　ＲＥ　Ｂ、メキシコ（Ｍｅｘｉｃｏ） 　（１９８１）　：ダスツール（Ｄａｓｔｕｒ）　、メゾイカナル　プランタ　 オブ　インディア　アンド　パキスタン（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔｓ　 ｏｆ　Ｉｎｄｉａ　ａｎｄ　Ｐａｋｉｓｔａｎ）　：　Ｄ、　Ｂ。

タラボレバラ　サンズ（Ｔａｒａｐｏｒｅｖａ　ｌ　ａ　５ｏｎｓ）＆　Ｃｏ、 　、プライベート（Ｐｒ１ｖａｔｅ）　Ｌ　ｔｄ、　、ボンペイ（Ｂｏｍｂａｙ ）　１６−１７（１９６２）。

アロエ　ベラは、「医薬」または「治療性」を持つとして素人の支持（ｌａｙ　 ａｃｃｅｐｔａｎｃｅ）の長い歴史を享受してきた。最近数年にわたって、科学 的基準を満たした多くの本や論文が、アロエ　ベラについて書かれてきた。アロ エベラ会議（Ａｌｏｅ　Ｖｅｒａ　Ｃｏｕｎｃｉｌ）のような組織および公認さ れた医学会が医者、獣医および他の科学者の発表や事例史を通して「アロエ現象 」を信じてきた。アロエ　ベラは皮膚科学、特に放射線に原因する皮膚病の治療 の分野において広く重要な役割を演じてきた。マツキー（Ｍａｃｋｅｅ）　。

Ｘ−レイ　アンド　ラジウム　イン　ザ　トリートメン）・第３版、リー　アン ド　フエビガー（Ｌｅａ　ａｎｄ　Ｆｅｂｉｇｅｒ）　。

フィラデルフィア（ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）　、３１９−３２０（１９３８ ）　；ロバルティ　（Ｒｏｖａｌｔｉ）ら、インダストリアル　メディら、クオ テーションズ　フロム　メディカル　ジャーナルスコーセン（Ｓｋｏｕｓｅｎ） 、アロエ　ベラ　リサーチ　インステイチュート（Ａｌｏｅ　Ｖｅｒａ　Ｒｅ５ ｅａｒｃｈ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）　、シブＩ／ス（Ｃｙｐｒｅｓｓ）、　カリ フォルニア（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、　１８−２３（１９７７）　；セラ（Ｃ ｅｒａ）ら、ジャーナル　オブ　ジ　アフリｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　 Ａｎｉｍａｌ　Ｈｏ５ｐｉｔａｌ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ）　、１８　：６３ ３−’６３８（１９８２）。殺ウイルス剤、殺菌剤および防カビ剤として消化系 統の問題における、また婦人科学的病気における医学的適用について記録した一 連の科学文献は広範囲であり、グリンドリー（Ｇｒｉｎｄｌｅｙ）とレイノルズ （Ｒｅｙｎｏｌｄｓ）により、十分に概説された〔ジャーナル　オブ　エトノフ ァーマコロジー（Ｊｏｕｒｎａ　ｏｆ　Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏ　ｏｇｙ） 　、　１６　：１１７−１５１　（１９８Ｂ））。

アロエにおいて見出された化学品の重要性はまた、それらが誰にも知られている 国定薬局方に載せられてきたという事実により示される。ｕ、　’ｓ、ファーマ コベイア（Ｌｌ、　Ｓ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）　、第２０改訂版、ザ　 ナショナルフォーミニラリ−（Ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ）　、第１４版・ユナイテッド　ステイッ　ファーマツベイアル　コンベンショ ン（Ｕｎｉｔ、ｅｄ　５ｔａｔｅｓ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ　Ｃｏｎｖｅ ｎｔｉｏｎ）　。

ＩｎＣ，、Ｄツクビル（Ｒｏｃｋｖｉｌ　Ｉｅ）、メリーランド、　１９８０年 ７月１日。しかし、Ｕ、　Ｓ、ファーマツイーはアロエの黄色の液汁の薬効部に ついて述べているが、粘液については述べていない。新鮮な保存されていないゲ ルは約９８．５〜９９．２％が水である。水を除去した後に残っている全固形分 は０．８から１．５％の範囲にある。固形分の主な構成成分は、粘液、糖、繊維 、タンパク質、天分、脂肪、アロインおよび樹脂を含む。ロブソン（Ｒｏｂｓｏ ｎ）ら、ジャーナル　オブ有機酸、無機塩、アミノ酸およびアルカロイドを含む 組成物の報告がなされている。ロウ（Ｒｏｗｅ）ら、ジャーナル　オブ　ジ　ア メリカン　ファーマシューティカル　アソシら１ジヤーナル　オブ　ジ　アメリ カン　ケミカル　ソサシーディングズ　オブ　オクラホマ　アカデミ−オブして 、粘液と糖が脱水したゲルの主成分である。みつかった糖は、ガラクトース、グ ルコース、マンノース、ラムノース、キシロースおよびウロン酸である。相反す る報告が見られるが、粘液は主にマンナンとグルコマンナンからなる。エベレン デュ（Ｅｂｅｒｅｎｄｕ）ら、ザ　ケミカル　キャラクタリゼーション　オブ　 キャリシン（Ｔｈｅ　Ｃ’ｈｅｍｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　 ｏｆ　Ｃａｒｒｉｓｙｎ　（登録商標））（調製）；マンダル（Ｍａｎｄａｌ） ら２カーボハイドレート　リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒ ｃｈ）、　８７　：　２４９−２５８　（１９８０ｂ）　；　。

ボッ（Ｒｏｂｏｚ）ら、ジャーナル　オブ　ジ　アメリカン　ケミカル　ソサエ ティ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　ＣｈｅｍｉｃａｌＳ ｏｃｉｅｔｙ）　、　７０　：　３２４８−３２４９（１９４８）　；ゴーダ（ Ｇｏｗｄａ）ら。

カーボハイドレート、リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｃｌｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃ ｈ）。

７２：　２０１−２０５（１９７９）　；セガル（Ｓｅｇａｌ）ら、ロイディア （Ｌｌｏｙｄｉａ）、　３１　：　４２３（１９６８）。

この仕事に先立って、アロエ　ベラにおける活性物質の同一性に関する論争は静 まっていない。それ故に、ゲルに依存する成分と滲出液に見出された成分を明確 に区別することが重要である。ゲルの比較的多い部分は、少量の種々の他の化合 物を含む主としてポリサッカライド質の粘液である。観察される活性のい（つか において、ポリサッカライド主成分と他の成分との間の何らかの相乗作用（ｓｙ ｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ａｃｔｉｏｎ）がありうることが観察された。

ロイング（Ｌｅｕｎｇ）、エクセルサ（Ｅｘｃｅｌｓａ）　８　：　６５−６８ （１９７８）　、ヘンリー（ｌｌｅｎｒｙ）、　コズメテイック　アンド　トイ レタリーズ（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ　ａｎｄ　Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ）　、　９４　 ：　４２−５０（１９７９）。例えば、傷の治療に効果的な成分は、タンニン酸 （ｔａｎｎｉｃ　ａｃｉｄ）　（フレイタグ（Ｆｒｅｙｔａｇ）　、ファーマツ イー（Ｐｈａｒｍａｚｉｅ）、９　：　７０５　（１９５４）３およびポリサッ カライドの一種でありうることが数人の研究者によって報告されている。カワシ マ（Ｋａνａｓｈｉｍａ）ら、ケミカル　アブストラクツ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　 Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）　、　９３　：　１３０７５（１９７９）　ｏ上記のマツ キー（Ｍａｃｋｅｅ）は、ゲル（外皮や滲出液ではなく）は、放射線火傷の治療 に有益な効果の原因となることを記し、そして彼は効果的な治療のために新鮮な 葉を用いることの重要性を強調した。ポリサッカライドは、時間とともに分解す る。そしである分子量サイズが特定の薬理学的応答を引き出すのに必要とされう る。ゴトウ（Ｇｏｔ、ｏ）ら、ガン他の成分からの助力なしに、ポリサッカライ ドは薬理学的および生理学的活性を示すことができるという多くの例が文献にあ る。Ｇ、ギアルドロニーグラッシ（Ｇｉａｌｄｒｏｎｉ−Ｇｒａｓｓｉ）　、イ ンターナショナル　アーキブス　オブ　アレ７６　（ｓｕｐｐｌ、　１）　；　 １１９−１２７　（１９８５）　；オオノ　（Ｏｈｎｏ）　ら。

ケミカル　アンド　ファーマシューティカル　ブレティン（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　 ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ）　、　３３　：　 ２５６４−２５６８（１９８５）　；ジー　ボビン（Ｌｅｉｂｏｖｉｃｅ）ら、 ケミコーバイオロジカル　インターナショナル（Ｃｈｅｍｉｃｏ−Ｂｉｏｌｏｇ ｉｃａｌＩｎｔｅｒａｃｔｌｏｎｓ）　、　８０：　１９１−２００（１９８Ｂ ）　；ウカイ（Ｌｌｋａｉ）ら。

ケミカル　アンド　ファーマシューティカル　ブレティン（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　 ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ）　、３１　：　７ ４１−７４４　（１９８３）　；ジー　ボビン（Ｌｅｉｂｏｖｉｃｉ）ら、アン チキャンサー　リサーチ（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　、５： 　５５３−５５８（１９８５）。１つのそのような例は、アテローム性動脈硬化 症（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の発生に関する。一般母集団における、 特に血統的なコレステロール過多血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｃｍ ｉａ）における脂肪過多血症（ｈｙｐｅｒ！１ｐｉｄｅＩｌｌｌｉａ）は冠状動 脈の心臓病および死と関連づけられる。食物繊維の摂取量が高い国では、アテロ ーム性動脈硬化症の発現は一般的ではない。トロウェル（Ｔｒｏｗｅｌ　ｌ）ら 編集、リファインド　カーボハイドレート　フードＤ１ｓｅａｓｅ）　、ロンド ン（Ｌｏｎｄｏｎ）、アカデミ・ンク　ブレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ ）、２０７（１９７５）。ペクチンおよびグアーは、正常者および脂肪過多血症 患者においてコレステロールを低くすることが報告されている。ケイ（Ｋａｙ） ら、アメリカン　ジャーナル　オブ　クリニカル　ニュートリジョン（Ａｍｅｒ ｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ） 　、　３０　：１７１−１７５（１９７７）　、　ハリエンジュの豆（Ｌｏｃｕ ｓｔ　ｂｅａｎ）のガムは、マンノースとガラクトースからなるポリサッカライ ドであり、これは正常者および血統的コレステロール過多血症の人の両方の場合 にプラズマリポタンパクコレステロール製炭を減少させた。ザボラル（Ｚａｖｏ ｒａｌ）ら、アメリカン　ジャーナル　オブ　クリニカル　ニュートリジョン（ Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｎｕｔｒｉｔｉ ｏｎ）　、　３８：　２８５−２９４　（１９８３）。炭水化物食にグアーガム を添加すると、正常者および糖尿病の人の両方において、食後のグルコースの上 昇を抑えた。ジエンキンズ（Ｊｅｎｋｉｎｓ）ら、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ） 　、２：　７７９−７８０（１９７７）　、クール（Ｋｕｈｌ）らは、グアーガ ムが妊娠しているインシュリン依存糖尿病患者の血糖制御を示すことを証明した 〔ダイアビーツ　ケア（Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｃａｒｅ）　、Ｂ：　（２）　：　 １５２−１５４（１９８３）　）。

ポリサッカライドの抗腫瘍活性は広く報告されてに対して宿主防御を増加させる ことが知られている。レティ（Ｒｅｔｈｙ）ら、アナールス　イムノロジー　ノ ＼ンガリセー（Ａｎｎａｌｅｓ　１ｍｌＩｌｕｎｏｌｏｇｉａｅ　Ｈｕｎｇａｒ ｉｃａｅ）　、　２１：　２８５−２９０（１９８１）。マツシュルーム、イー スト又はバクテリア抽出物由来のポリサッカライドがウィルスや腫瘍の侵入に対 しての高程度の宿主防御活性を引き出すことができるという、い（つかの報告が ある。チハラ（Ｃｈｉｈａｒａ）ら、ネイチ−？　−（Ｎａｔｕｒｅ）　、２２ ２：　６８７（１９６９）；シュワルツマン（Ｓｃｈｗａｒｔｚｍａｎ）　、　 プロシーデインダス　オブ　ザ　ソサイエティ　フォー　イクスペリメンタル　 バイオロジーアンド　メデイシン（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　５ ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍ ｅｄｉｃｉｎｅ　）　、　２９　：　７３７（１９３２）　；レティ（Ｒｅｔｈ ｙ）。エックス　インターナショナル　コンブ（１９Ｅｉ８）　。スズキ（Ｓｕ ｚｕｋｉ　）らはまた、菌類、グリフォラ７ｏンドサ（Ｇｒｉｆｏｌａ　ｆｒｏ ｎｄｏｓａ）の培養した子実体（ｆｒｕｉｔｉｎｇ　ｂｏｄｉｅｓ）から抽出し たポリサッカライド画分（ＧＦ−１）の抗腫瘍活性について報告した〔ジャーナ ルオブ　ファーマツバイオーダイナミックス（ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＰｈａｒｍ ａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎａｍｉｃｓ）　、７：　４９２−５００（１９８４））　 ｏこの画分は、腹腔内（ＩＰ）、静脈内（１ｖ）および腫瘍内（ＩＴ）投与した 時に、より高い阻害活性の等価レベルを示した。しかし、経口投与（ＰＯ）は効 果的でなかった。

ＧＦ−１画分はまた、マウスでメタ（Ｍｅｔｈ）Ａ繊維肉腫およびＭＭ４６癌の 固体形に対して、抗腫瘍活性を示した。レンチナン（Ｉ　ｅｎｔ　ｉ　ｎａｎ） はＧＦ−１に似た６−分枝Ｂ−１−３−結合グルカンであり、これはメタＡｆｌ ｉ維肉腫に対して効果がない。チホラ（Ｃｈｉｈｏｒａ）　、抗腫瘍ポリサッカ ライドレンチナン；総覧；「宿主防御機構の操作（）ｔａｎ　ｉ　ｐｕ　Ｉ　ａ ｔ　ｉ　０ｎｏｆ　ｈｏｓｔ　Ｄｅｆｅｎｓｅ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）　Ｊ　ニ アオキ（ＡＯｋｉ）ら編、エクセーブタ　メゾイカ（Ｅｘｃｅｒｐｔａ　Ｈｅｄ ｉｃａ）　、化オランダ。

１−１６（１９８１）　：ササキ（Ｓａｓａｋｉ）ら、カーポ゛ハイドレートリ サーチ（Ｃａｒｂｏｈ　ｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　、　４７　：　９９ −１０４（１９７６）。

合成した分枝ポリサッカライドは腫瘍に対して生物活性を示すことが報告された 。マツザキ（ＨａｔＳｕＺａｋｉ　）ら、マクロモル　ケム（Ｈａｋｒｏｍｏｌ 、　Ｃｈｅｍ、）　、ｔ８６：４４９（１９８５）　、　？ツザキ（Ｈａｔｓｕ ｚａｋｉ　）らは、著しい活性を示す、アイポリ−ナツト（ｉｖｏｒｙ　ｎｕｔ ）マンナン由来の分枝ポリサッカライドである。Ｂ−（１−４＞−Ｄ−マンノピ ラノースおよびＢ−＜１−４）−結合グルコマンナンを合成した〔マクロモル　 ケム（）ｌａｋｒｏｍｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）　、υ３７　：　３２５−３３１（ １９８ｆ＞）　）。ディクチオフォリア　イントウシアタフィッシュ（ＤｉＣｔ 　ｏｐｈｏｒｉａ　ＩｎｄｕＳｉａｔａ　ＦｉＳＣｈ）の子実体から抽出した、 部分的にアセチル化された線状Ｂ−（１−３）−Ｄ−マンナンはまた抗腫瘍活性 を示した。ハラ（Ｈａｒａ）ら、カーボハイドレート　リサーチ（Ｃａｒｂｏｈ ｙｄｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ）　、　１４３：１１１（１９８２）　。Ｂ　− （１−３）　−グルカンタイプのポリマーは、Ｂ−（１−４）−グルカンおよび ヘミセルロース性ポリマーより高い抗腫瘍活性を示すので、抗腫瘍活性はポリマ ー主鎖のタイプおよびその重合の程度に依存するようである。マツザキ（Ｈａｔ ｓｕｚａｋｉ　）ら、マクロモル　ケム（Ｍａｋｒｏｍｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）　 、１８７：　３２５−３３１（１９８６）。細菌の培養濾過液から得たＢ−（１ −：３）　−グルカンのカルボキシメチル化誘導体は、確立されたサルコーマ１ ８０腫瘍から、誘導体の注入後２時間以内に重大な細胞損失を引き起こした。バ バ（Ｂａｂａ）ら、ジェー　オブ　イムノロァーマコロジー（Ｊ、　ｏｆ　１ｍ ｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）　、８：５８９　−５７２（１９８６）。

同じ著者は、その物質の注入による、多形核白血球での代償的な増加を観察した 。ところで、ベスタチン（ｂｅｓｔａｔｉΩ）は、免疫調節および抗腫瘍活性を 持つことが知られているジペプチドであり　〔イシズカ（ｌｓｈｉｚｕｋａ）ら 、ジャーナル　オブ　アンチバイオティックス（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔ ｉｂｉｏｔｉｃｓ）　、　３２：　６４２−６５２（１９８０）　）、これは腫 瘍発生にも多形核白血球の総数にも影響を及ぼさなかった。ババ（Ｂａｂａ）ら 、上記。

ヘパリン（ｈｅｐａｒｉｎ）　（ジョレス（Ｊｏｌｌｅｓ）ら２　アクタ　ユラ ン（ｌ　ａｍｉｎａｒａｎ）およびデキストランを含む硫酸塩化したポリサッカ ライドの抗腫瘍効果について多くの報告がある。ジョレス（Ｊｏｌ　１ｅｓ）ら 、ブリティッシュ　ジャーナルオブ　キャンサ−（Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎ ａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ）　、　１７　：１０９　−１４５（１９１３３）。

ヤマモト（Ｙａｍａｍｏｔｏ）らは、さらに硫酸塩化することにより、フコイダ ン（ｆｕｃｏｉｄａ口）画分の抗腫瘍活性を高めることを報告した〔ジャパン　 ジャーナル　オブ　エクスベリメンタル　メディシン　（Ｊａｐａｎ　Ｊｏｕｒ ｎａｌ硫酸塩化した生成物はＬ　−１２１０白血病に対する活性を示した。著者 らは、抗腫瘍活性の機構は部分的に、腫瘍細胞と中皮細胞（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉ ａｌ　ｃｅｌｌ）との間の静電気的反発作用から生じるＬ　−１２１０細胞の侵 入生長の阻害によるものでありうると仮定した。ヤマモト（Ｙａｍａｍｏｔｏ） ら、上記。硫酸塩基を持つポリサッカライドはまた、ヒトのＴ細胞マイトゲン（ ｍｉｔｏｇｃｎ）およびネズミ科のポリクローナルＢ細胞活性化剤であることが 報告されている。スガワラ（Ｓｕｇａｗａｒａ）ら、ミクロバイオロジカル　イ ムノロジー（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）　、　 ２８　：　８３１−８３９（１９８４）。

一般に、硫酸塩基を有する高分子量のホモポリサッカライドはこれらの特性を持 っている。ドジーズ（Ｄｏｒｒｉｅｓ）ら、ヨーロピアン　ジャーナル　オブ　 イムノロジー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒ　ａｔ　ｏｆ　Ｉ＋ｎ＋ｎｕｎｏｌ ｏｇｙ）　、４：　２３０−２３３（１９７４）　；スガワラ（Ｓｕｇａｗａｒ ａ）ら、セル　イムノロジー（Ｃｅｌｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）　、　７４： 　１６２ｌ６２−１７１（１９゜イーストのサツカロマイセス　セルビシエ（Ｓ ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｂｉｓｉａｅ）から抽出したグルカンは細胞 性および体液性免疫を調節するものであることが報告さズミ利の多能性造血幹細 胞、顆粒球−マクロファージコロニー形成細胞および丹髄性および赤血球コロニ ー形成細胞の増殖を刺激した。ポスピシル（Ｐｏｓｐｉｓｉｌ）ら、エクスペリ はまた、Ｘ線にさらされることに対するネズミ科の造血幹細胞の保護を引き起こ （−１それによってそのようにさらされたマウスの死亡率を減少させる、ポリサ ッカライドの■Ｖ、ラコビック（Ｌａｃｋｏｖｉｃ）ら〔プロシーデインダスオ ブ　ザ　ソサエティ　フォー　エクスベリメンタル　バ細胞によるインターフェ ロンの製造の誘導の原因である、彼が見出した「マンナン類」のみを残して、す べての成分物質を抽出した。生理学的応答の原因であるといわれる「精製したマ ンナン」は５．５００〜２０，０００ドルトンの分子量を有していた。彼は、こ のマンナンがマウス腹膜のマクロファージを刺激してインターフェロンを製造す ることを理論づけた。彼は、彼が単離したマンナンが毒性を示さず、かつ「これ らが、弱い抗原である」ことを主張している。

ラコビックらによっては、これらの［精製したマンナン類」の抗ウィルス活性ま オこはＩＬ−１刺激に対する使用についての記載はなかった。我々は、一連の非 公知のそして同定されていない置換および非置換マンナン類を含む、ラコビック らの「精製し）２マンナン類」を提示しな。

セルジェリッド（Ｓｅｌ　ｊｅｌ　ｉｄ）らは、不溶性またはゲル形成性グリカ ンがインビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）て′マクロファージを活性化し、−力対応 する可溶性のグリカンは活性化しないことを観察した〔エクスリメンタル　セル 　リサーチ（ＥＸｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅ１ｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　、出 ：　１２１（１９８１）　）。

彼らは、グリカンが単核食細胞に提示される方向づけが活性化のために決定的で あると仮定しな。ボグワルド（１３ｏｇ■・ａｌｄ）らは、インビトロでマクロ ファージに刺激的効果を持つグリカンを固定した〔スカンジナビアン　ジャーは 、グリカンの固定した配置がインビトロでのマクロファージへの効果に決定的で あると信することとなった。

カンジダ　アルビ力７ス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）から単離した精 製ポリサッカライドは人間の末梢血液リンパ球によりインビトロでの抗体応答を 引き起こした。ウィルツ（ＷｉｒＺ）ら、クリニカル　イムノロジー　アンド　 イムノバンロン−（ＣＩｉｎｉｃａｌ　ＩｍｍｕｎＯｌＯｇａｎｄ　Ｉｍｍｕｎ ＯｐａｔｈＯ１００’／）、　３３：１９９−２０９（１９８４）。正常および カンジダ感染個体の血清中の抗カンジダ抗体の間には著しい差があった。ウィル ツ（讐１ｒｚ）　、上記。

ポリサッカライドおよびペプチドに結合したポリサッカライドの抗ウィルス活性 が観察された。スズキ（Ｓｕｚｕｋｉ）ら、ジャーナル　アンチバイオティック ス（ＪｏｕｒｎａｌＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、　３２　：　１３３６−１３４ ５（１９７９）　、上記のスズキらはレンティヌス　ニドデス（Ｌｅｎｔｉｎυ ｓ　ｅｄｏｄｅｓ）の培養菌糸体から抽出したペプチドマンナン（ＫＳ−２）の 抗ウィル。

ス作用を報告した。経口＜ｐｏ＞投与および腹腔内（ＩＰ）投与のいずれも、ウ ィルス感染に対してマウスを保護する最大血清インターフェロン力価を増加させ る結果となった。

これは、マウスに静脈内（ＩＶ）または腹腔内（ＩＰ）投与した場合のみインタ ーフェロンのより高い力価を引き起こすデキストランホスフェ）　（ＤＰ−４０ ）　（スズキ（Ｓｕｚｕｋｉ）ら、プロシーデインデス　オブ　ザ　ソサエティ 　フォー　エクスペリメンタル　バイオロジー　アン１０７５（１９７５）］お よび］９−メチルストレプトイミドン９−ＭＳ）（サイトウ（Ｓａｉｔｏ）ら、 アンチミア　エージェント＆ケモセラピ−（Ａｎｔｉｍｉｅｒ　Ａｇｅｎｔ　＆ 　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）　、　１０　：Ｌ４−１９　（１９７６）　）と は異っていた。

アロエ　ベラ　ゲルの抗炎症活性は、口頭の証言および尊重されている科学雑誌 の両方により広く報告されてきた。ルベル（Ｒｕｂｅｌ）は、アロエ　ゲルの抗 炎症効果の可能な機構について十分論じた〔コスメティックス　アンドトイレタ リーズ（Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｔｏｉｌｅｔｒｉｅｓ）　、　９８　： 　１０９−１１４（１９８３）　３　、ウカイ（Ｌｌｋａｉ）らは、いくつかの 菌類の子実体から抽出したポリサッカライドにおける抗炎症活性に注目した〔ジ ャーナル　オブ　ファーマコロバイオーダイナミックス（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ 　Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎａｍｉｃｓ）　、８：９８３−９９０（１９ ８３）　）。ポリサッカライドは、浮腫を引き起こすカラギーナンでの著しい阻 害効果を証明した。ポリマーの１つであるＯ−アセチル化−Ｄ−マンナン（Ｔ　 −２−ＨＮ）は、さらに、フェニルブタシンより火傷の痛覚過敏症におけるより 顕著な阻害効果を証明した。ウカイ（Ｕｋａｉ）ら、上記。ポリサッカライドが タンパク質および脂質から遊離しているという主張は、抗炎症効果がアセチル化 されたマンナンのみによることを強く示唆している。他の研究者達はまた、複合 ポリサッカライド〔サエキ（Ｓａｅｋｉ）ら。

ジャパニーズ　ジャーナル　ファーマコロジー（ＪａｐａｎｅｓｅＪｏｕｒｎａ ｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）　、２４　：　１０９−１１８（１９７４）　 ）　、グリコプロティン〔アリタ（Ａｒｉｔａ）ら、ジャーナル　オブファーマ コロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）　、　２４：８ ８１−８６９（１９７４）　）および硫酸塩化したポリサッカライド〔ロカ（Ｒ ｏｃｈａ）ら、バイオケミカル　ファーマコロジー（Ｂｉｏｃｈｅ［ｌ１ｉｃａ ｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）　、　１８　：　１２８５−１２９５　（１９ ６９）　）の抗炎症効果について報告した。

ポリサッカライドが薬理学的および生理学的活性を有するという文献報告は、よ く尊重される科学雑誌のページへ殺到し続けている。それ故に、アロエ　ベラの 粘液質のゲルが本質的にポリサッカライドであり、これがアロエ　ベラの医薬特 性に秘密を持つことは非論理的ではない。ポリサッカライドがグルコマンナン、 マンナン、ペクチンまたはいくつかの他の組成物であるかどうかについての不一 致は、化学的精製段階の結果である。本発明によるアロエの製造により、部分的 にアセチル化されたポリマンノースが薬理学的活性を有する主要ポリサッカライ ドとして一貫して単離された。ヤギ（Ｙａｇｉ）らは、少し変形した抽出法を用 いて、アロエ　アルボレッセンス　ミラー　バー　ナタレンシス（Ａｌｏｅ　ａ ｒｂｏｒｅｓｓｅｎｓ　Ｍｉｌｌｅｒ　ｖａｒ、　ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ）から アセチル化されたマンナン（アロエマンナン）を単離した〔プランタ　メゾイカ （Ｐｌａｎｔａ　Ｍｅｄｌｃａ）、　３１　：　１７−２０（１９７７）　）　 、しかし、オボドバ（Ｏｖｏｄｏｖａ）は、同じアロ工種の主成分としてペクチ ンをより早くに単離した〔キムプライアー　ソエディン（ＫｈＬｏ、　Ｐｒ１ｏ ｒ、　５ｏｅｄｉｎ）　、　８３：９３８３３（１９７５）　〕。

上記で論じたように、ポリサッカライドの生物活性は長年の間認識されてきた。

植物、イーストおよびバクテリアから回収したポリサッカライド物質は、ホスト の防御系における増加を引き出すことにより、直接の生物活性を証明した。この 反応は、他の抗原物質についての、増大したホストサーベイランスにより、第１ に明示される。ポリサッカライドはアジュバント（フロイントら）および免疫モ ジュレータ−（ｉｍｍｕｎｏ　−ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）として働く。それらはま た、唯一のＴ細胞非依存抗原として機能する。細胞性免疫および体液性免疫の両 方が影響され得る。そして、感染性の微生物および腫瘍細胞の食作用の増加が観 察され、またこれはイムノグロブリンの生産を高める。

このような免疫学的に活性なポリサッカライドの構造および構造的な変化の型は 、それらの有効性および毒性を制御する要因であるらしい。それらの活動の形式 はほとんど理解されていないままである：しかしながら最近の証拠は、いくつか のポリサッカライドは、リンパ球およびマクロファージを誘導して広い範囲の免 疫学−的活性物質を生産することを示す。本発明の組成物は、これらの免疫学的 活性物質のすべての特性を有している；それはすべての公知の生物活性ポリサッ カライドの最も有効なものの中にあるが、毒性が観察されなかったという点で異 なる。それはまた、ウィルス性のグリコプロティン合成の変更を通して、固有の 抗ウィルス活性を明示する。

本発明の概要 従って、単核細胞及びマクロファージ末梢血付着細胞によりインターフェロンエ 及びプロスタグランジンＥ２の生産を活性化、誘発及び高める方法において、単 核細胞及びマクロファージ刺激を行うに十分な量のアセマンナンを投与すること を含む方法を提供することが目的である。

また、単核細胞及びマクロファージ末梢血付着細胞によりインターロイキンＩ及 びプロスタグランジンＥ２の生産を活性化、誘発及び高める方法において、アセ マンナンが約０．１ｍｇ／ｋｇ　ｂｗｔ／日〜約１００．０ｍｇ／　ｋｇ　ｂｗ ｔ／口の範囲で経口投与される、又は約０．００１ｍｇ／　ｋｇ　ｂｗｔ／日〜 １０１１１１ｇ／ｋｇ　ｂｖｔ／口の範囲で注射投与されるところの方法を提供 することが目的である。

また更に、哺乳動物においてマクロファージ食細胞溶解を刺激する方法において 、単核細胞及びマクロファージ刺激を行うのに十分な量のアセマンナンを投与す ることを含む方法を提供することが目的である。

また更に、哺乳動物において抗ウィルス作用を作る方法において、単核細胞及び マクロファージ刺激を行うのに十分な量のアセマンナンを投与することを含む方 法を提供することが目的である。

また更に、ヒトにおいて欠陥ウィルスを作る方法において、単核細胞及びマクロ ファージ刺激を行いかつウィルス感染細胞における複製代謝を変えるに十分な量 のアセマンナンを投与することを含む方法を提供することが目的である。

また更に、ワクチン生産のためのマスター種培養物において欠陥ウィルスを作る 方法において、変化されたウィルス複製を作るのに十分な所定量のアセマンナン をマスター種培養物に加えることを含む方法を提供することが目的である。

また更に、アジュバント効果を作ることによるワクチンの免疫増強方法において 、ワクチン投与量当り約０．００１ｍｇ〜１０ｍｇの範囲の所定量のアセマンナ ンをワクチン製品に加えることを含む方法を提供することが目的である。

また更に、哺乳動物における腫瘍を処置する方法において、単核細胞及びマクロ ファージ刺激を行い、自然の殺細胞活動を高めかつ白細胞及び／又は抗体による 特異的腫瘍細胞溶解を高めるのに十分な量のアセマンナンを哺乳動物に投与する ことを含む方法を提供することが目的である。

また更に、　（ｉ）非感染細胞のゴルジ体中にアセマンナンを誘導して、ウィル ス感染からの保護を該細胞に与えるところの変えられたグリコプロティンを起す 、または（１１）ウィルス感染細胞のゴルジ体中にアセマンナンを誘導して、該 感染細胞中でのウィルス表現を破壊又は禁止するところのグリコプロティンを作 る方法において、細胞の表面のグリコブロチ、インを変性するのに十分な量のア セマンナンを細胞中に誘導することを含む方法を提供することが目的である。

また更に、ウィルス感染細胞のゴルジ体中にアセマンナンを誘導して、該感染細 胞中でのウィルス表現を破壊又は禁止するグリコプロティンを作る方法において 、アセマンナンがウィルスを非感染とするのに十分な量で細胞中に誘導される方 法を提供することが目的である。

また更に、ウィルス感染細胞のゴルジ体中にアセマンナンを誘導して、該感染細 胞中でのウィルス表現を破壊又は禁止するグリコプロティンを作る方法において 、細胞がウィルス感染され、（ｉ）誘導前に細胞が持っていたよりも広い免疫応 答を与える広域スペクトルの特異的抗体が産生されるようにする、又は（１１） 広域スペクトル抗体産生の速度を高めるのに十分な二でアセマンナンが細胞中に 導入される方法を提供することが目的である。

哺乳動物において、増加された量のマンノースを細胞内及び細胞外細胞代謝経路 に与えて、ヒトまたは動物における吸収不良及び粘膜細胞成熟症候群を矯正する 方法において、マンノシルトランスフェラーゼ活性のミバエリス定数を加速する ことによってグリコプロティンの合成のための追加的マンノースを与えるのに十 分な母のアセマンナンを哺乳動物に投与する段階を含む方法を提供することが目 的である。

また更に、哺乳動物においてウィルス感染細胞を、細胞毒リンパ細胞により抗体 依存性細胞溶解（Ａ、ＤＣＣ）を開始するであろうその表面上で変性ウィルスグ リコプロティン抗原を表現するよう誘導する方法において、変性されたウィルス グリコプロティンを作りかつ」二記変性されたウィルスグリコプロティンが、そ れらを体液性抗体に曝す感染細胞の表面上で表現されるようにするのに十分な量 のアセマンナンを哺乳動物に感染細胞中へ投与することを含む方法を提供するこ とが目的である。

また更に、ヒトの「旧こアセマンナンを誘導して、参発性硬化症に関連する症候 群を低減する効果を作る方法において、プラーク形成を低減し、かつ中枢神経系 細胞において官能性組織でのプラーク置換を誘発するのに十分な量のアセマンナ ンをヒトに投与することを含む方法を提供することを目的とする。

最後に、哺乳動物中にアセマンナンを誘導して、炎症性腸疾病に関連する症候群 を低減する方法において、病巣中の潰瘍の組織再生を増大することにより及び病 巣中の局部的組織中の自己免疫免疫グロブリンの低減により、炎症性腸疾病に関 連する病巣を解消するのに十分な曾のアセマンナンを哺乳動物に投与することを 含む方法。

カリジン（ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ、商標）は、アロエ　バルバデンシス　ミラーの 葉の内部ゲルの精製したエチルアルコール抽出物に対する、本発明の譲受人によ り与えられたブランド名である。カリジン抽圧物の活性成分は、合衆国命名委員 会により「アセマンナン」と名付けられた。カリジン抽出物の７８％以上がアセ マンナンである。カリジン抽出物は一般に、約７３〜９０％のアセマンナンを含 む。カリジン抽圧物は一般に、葉の外側鞘を除去し、次に内側のフィレット又は 粘液を取出し、加工し、ｐｉｔ：１７１整、エタノール抽出、凍結乾燥及び挽く ことにより作られる。米国出願シリアルＮα１４４，８７２　（１９８８年１月 出願、米国出願シリアルＮｏ、　８８９，２６１　（現在は米国特許４，７３５ ．９３５）の一部継続出願）を参照されたい。その開示を、引用することにより ここに含める。この方法での加工により、共有結合は変えられず、従って毒性化 合物が作られないと我々は信じる。これら製造工程は、伝統的なアロエ製品製造 者がこの多糖類を標準化し、安定化することができないことに困っていたという 事実により示される問題を克服するために開発された。カリジン抽圧物は、綿毛 状の白色非晶短粉末であり、水及びジメチルスルホキシドに難溶であり、他のほ とんどの有機溶媒に不溶である。この粉末は、綿状の（１〜４）−Ｄ−マンノシ ル単位より本質的に成る多糖類を７３％以上含む。

この多糖類は、酸素原子を介してポリマーに結合されたアセチル基をランダムに 散在させた長鎖ポリマーである。このポリマーの総称がアセマンナンである。ア セチル化度は、アルカリ性ヒドロキサメート法（ヘストリン、ジャーナル　オブ 　バイオロジカル　ケミストリー、１８０　：　２４０（１９４９））で測定し て、モノマー当り約０．８個のアセチル基である。中性糖結合分析によると、７ ０の糖に対し約１の比でＤ−ガラクトピラノースが、たぶん（１−６）結合を介 して鎖に結合されている。マンノース対ガラクトースの２０＝１の比は、ガラク トース単位が、主に（１−４）グリコシド結合により互に結合されていることを 示す。アセマンナンの化学構造は下記のように示すことができる。

−β−Ｄ−ｍｎｐ−（１−４）−β−Ｄ−）Ｌａｎｐ−（１−４）−β−Ｄ−Ｍ ａｎｐ−（１−４）−β−Ｄ−）１ａｎｐ−この組成物を作り、この構造に到達 するのに用いた方法の詳細な説明は、米国特許Ｎα４．７３５．９３５及び米国 特許出願シリアルＮｏ、１４４，８７２号に開示されており、引用することによ りその開示をここに含める。

アセマンナンは、カリジン抽出物の生理学的活性成分であり、Ｔ−非依存抗原Ｌ ＰＳ　（リポポリサッカライド）。

ＦＩＣＯＬ、デキストラン及びレバンと同じ化学的順に入る。Ｔ−非依存抗原は 、多数の共通の特性を有する。特にそれらは、繰返し抗原決定基を有する総て全 く負に荷電している大きなポリマー状分子であり、それらの多くは高濃度におい て、その抗原に特異的なもの以外のＢ細胞クローンを活性化する能力を有する。

即ち、それらはポリクローナルＢ細胞活性化を示す。ロイド、ブロストフ及びメ ール、イムノロジー、　１９８６．ザ　シー　ブイ　モスビイカンパニー、セン トルイス、８．３及び８．４ページ参照。

精製されたバルクのカリジン抽ａ物の少くとも７３％は、１０．０００ダルトン より大きい分子量を持つアセマンナンの多糖類ポリマーより成る。

アセマンナンは、インビトロテスト系において突然変異原性でなく、芽体発生性 でない。アセマンナンのインビボ毒性研究は、犬における９１日の準慢性経口毒 性研究及びラットにおける１８０日の慢性経口毒性研究を含む。これらの研究に おいて、１日当り８２５ｍｇ／ｋｇまでのアセマンナンを受けた犬に毒性効果は 見られなかった。食物中に３８，４７５ｐｐ口までのアセマンナンを受けたラッ トにおいて臨床的な大きな病理的又は毒性作用は見られなかった。

パイロット研究において、犬へのアセマンナンの投与は、完全白面細胞カウント 及び形態的差異について採られた血液サンプルにおいて明白な単球増加を起した 。アセマンナンの高投与量の経口投与後２時間内に、大きな活性化された単核細 胞が循環系中に現われた。

今、アセマンナンは、培養物中でヒト末梢血付着細胞によるインターロイキン１ （ＩΩ−１）及びプロスタグランジンＥ　（ＰＧＥ２）の有能な誘発剤であるこ とが発見された。本発明は、ＩΩ−１放出の初めての実際的な非毒性刺激剤であ ると信じられる。インターロイキン１は、Ｔ−リンパ細胞、線維芽、Ｂ−リンパ 細胞及び内皮細胞の活動及び産生に影響する、文献に報告されている重要なマク ロファージ生産物である。Ｌ、Ｊ、オルト、「チューマーネタロシス　ファクタ ー」、サイエンティフィック　アメリカン、　１９８８年４月参照。また、Ｇ、 ウィツトマン。

「ディー　アブソープション　フォノ　ＤＥＡＥ　デキストラン　ディー　オベ ルファッヒエ　フォノ　シュベインリンホラアイテン」、ツエントラルブラート 　フユールフエテリンアルメディツイン１巻Ｂ　、　２６　：　５７７−５９０ （１９７９）及びＣ，Ａ、ディナレロン、［バイオロジー　オブ　インターロイ キンＩＪ、ＦＡＳＥＢ　ジャーナル、２：１０８−１１５（１９８，８）をＩ、 Ｑ−１の生理学的特性のために参照。

Ｉρ−１は、傷治ゆを助ける線維芽増殖を誘発する。

Ｉｊ２−１はまた、（１）エネルギーとしての脂肪の利用を低減し、食欲の衰退 を起しくそれはやせる剤として働きうる）、（２）骨髄活動を高め（それは骨髄 が抑圧された個人において治療的でありうる）、及び（３）一般に免疫系を高め る。

混合リンパ細胞培養物（ＭＬＣ）での一連の実験によると、アセマンナンは、投 与量に依存する態様でこれらリンパ細胞の同種抗原応答を増大する。単核細胞で のアセマンナンのインキュベーションは、単核細胞駆動シグナルがレクチンに対 するＴリンパ細胞応答を高めることを許した。

ＭＬＣに対するアセマンナンの作用についての関係する研究は、食菌作用及び自 然のキラー細胞活動の増大を示した。

すなわち、これらインビトロテスト系において、アセマンナンは毒性でなく、免 疫向上剤である。ナノグラム／ミリリットル量に対して敏感なＥＬＩＳＡキット を用いて、検出しうるアセマンナン濃度は、ＩＶ投与後の犬の血液において検出 された。濃度は極めて迅速に低下し、１９５分後にほとんど検出できなくなった 。マクロファージ／単核細胞系内でのアセマンナンの摂取及び濃度もまた測定さ れた。

アセマンナンは、単核細胞分泌モノキン（ｍｏｎｏｋｉ　ｎｅｓ）の有能な刺激 剤であり、またＨＩＶ感染単核細胞をしてスワインソニン（Ｓｗａｉｎｓｏｎｉ ｎｅ）と類似のメカニズムにより、変性されたグリコプロティン（Ｇ　Ｐ　−１ ２０）を作らせＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａ ｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆｔｈｅ　Ｌ！ｎ１ｔｅｄ　５ｔａ ｔｅｓ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ、　７８：　７３９３−７３９７参照。アセマン ナンは、食菌され、明らかに単核細胞のゴルジ／グリコプロティン装置へ供給さ れて、そこで直接にグリコプロティン合成を妨害する。

アセマンナンは、ウィルス抗原に対するＩｇＭ及びＩｇＧ抗体の量を増加し、血 漿中でのそれらの出現に必要な時間を減少させる。加えて、アセマンナンは、ア ロ応答性（ａｌ　Ｉｏｒｃｓｐｏｎｓｅ）を高め、食菌作用を増大し、混合リン パ細胞培養物の自然のキラー細胞活動を増す。これらのメカニズムは、ＨＩＶ感 染患者における絶対ＣＤ−４（即ちＴ−４）カウントの増加ならびにそれらの併 発感染に関連する症状の低減を説明しうる。アセマンナンでＨＩＶ感染患者を処 置している医者は、ＨＩＶ症状及び併発感染に関連する他の症状の高度に有意な 低減を報告している。

ＨＩＶ感染に対するアセマンナンの作用の態様は下記の組合せのようである。

・　キラー細胞の活性化による、感染された又は欠陥の細胞の破壊 ・　非感染性の欠陥ＨＩＶウィルスの産生・　高められた抗体産生 ・　他の抗原性物質に対する増大された、ホストの監視。

プラシーボ対照臨床試験においてカリジン抽出物で現在処置されている２０人の エイズ／ＡＲＣ患者についての初期の情報は、毒性、悪影響又は副作用の証拠が 見られなかったことを示す。

アセマンナンは、標的細胞としてＶＥＲＯ単分子層を用いるウィルスプラークア ッセイにおいてヘルペス及びはしかウィルスに対する抗ウィルス活性を持つこと が報告された。該医薬は、感染しやすいリンパ細胞培養物のＨＩＶウィルスによ る感染を除かず、又はインビトロで逆転写酵素活動を禁止しなかった。

アセマンナンは、エイズ、大腸炎、褥瘉潰瘍、腫瘍の処置において、及び新規な 異例に有能なアジュバン）・とじての使用のために有用であると考えられる。ア セマンナンはまた、ワクチン有効性向上から、免疫欠陥を作るまたは、他の点で は健康な人において免疫検出が確立されるのを免れるところの病原性生物により 起こされる病気の阻止及び処置までの幅広い分野において有用である。アセマン ナンはまた、普通の風邪及びインフルエンザのいくつかの株の阻止及び処置にお いて有用である。３５０日までの間、２０オンス／日の安定化アロエジュース（ １，Ｑ当り３８８〜１１０９ｍｇのアセマンナンを含む）を飲んだ１５人のエイ ズ…者は、悪い作用なしに、ＨＩＶ感染に関連する症候の有意な低減を報告した 。２０オンス／日のアロエドリンクを消費した２６人のＨＩＶ感染患者の別のグ ループは９０日間観察され、悪い作用は見られなかった。

アロエドリンクで処置されたＨ　Ｉ　Ｖ陽性患者からのデータの作表及び分析に よると、３５０口間観察された１５人の患者において平均ウォルター　リード（ Ｗａｌｔｅｒ　Ｒｅｅｄ）　（修正）スコアは５．６〜１．５の間であった。９ ０口間観察された２６人の患者の第二群において、平均スコアは２４９８〜１． ７６の間であった。これらと同じ二群の患者における絶対ＣＤ−４リンパ細胞カ ウントは、夫々３５０から４４６へ、及び２１７から２５９へど上った。血漿コ ア抗原濃度の分析は、有意な傾向を示さなかった。１５人の患者群からのデータ の調査は、アロエドリンクでの処置に対するＨＩＶ患者の応答を千７ｆｔ＋１す るための判定基準の開発をもたらした。これら判定基準を、アロエドリンクで処 置されたＨＩＶ患者の第二群に予測的に適用すると、判定基準は一般に予測性が あると判った。

図面の説明 第１及び２図は、アロエ　ベラの葉の切開部分を示す。

第３〜５図は、種々の濃度のカリジン抽出物で刺激されたヒト付着末梢血白面細 胞（Ｐ　Ｂ　Ｌ）による、ヒトＡＢ血漿中のインターロイキン１（ＩΩ−１）及 びインターロイキン１Ｂの産生（胸腺細胞又はＥＬ　Ｉ　ＳＡアッセイにより測 定）を示すグラフである。

第６図は、ＨＩ　Ｖ　（ＨＴＬＶ−１１１Ｂ）のグリコプロティンコートに対す るカリジン抽８物（アセマンナン）の作用を示すグラフである。

第７図は、その中でテストされる細胞が同系刺激を受けるところの混合リンパ細 胞応答（ＭＬＣ）におけるアロ応答（ａｌｌｏｒｅｓｐｏｎｓｅ）に対するカリ ジン抽出物の作用を示すグラフである。

第８図は、ＭＬＣにおけるアロ応答に対するカリジンの作用を示すグラフである 。アロ応答は、同系応答の関数としてプロットされる。

第９図は、トリチウム化チモジン挿入の非特異的ＭＬＣ応答に対するカリジン抽 出物の作用を示すグラフである。

第１Ｏ図は、単核細胞−Ｔ細胞協働に対するカリジン抽出物の作用を示すグラフ である。

第１１図は、各剤による（：ｒ５１放出の時間経過を示す。ヒト線維芽細胞の培 養物を０．０５％Ｇｒａｎｕｌｅｘ、　Ｈｉｂｉｃｌｅｎｓ。

Ｂｅｔａｄｉｎｅ又はカリジン抽出物（ＣＤＷＧ）で種々の時間インキュベート シ、放射性放出の合計のパーセントを測定した。データは、各時点において３〜 ５個の夫々の測定の平均である。対照細胞（培地のみで処置された）は、３０分 間に合計Ｃｒ５１の３〜５％を放出した。

第１２図は、細胞損傷に対する濃度の影響を示す。培養された線維芽細胞を、種 々の濃度の１ｌｉｂｉｃｌｅｎｓ、　Ｇｒａｎｕｌｅｘ。

Ｂｃｔａｄｉｎｃ又はカリジン抽出物（ＣＤＷＧ）と共に３７℃で１５分間イン キュベートした。放出されたＣｒ５１のパーセントを各濃度について測定した。

対照放出（未処置細胞からの）は１〜５％であった。データは、３〜５つの別々 の測定の平均である。

第１３図は、クロムの放出：ＣＤＷＧ及び血漿の作用を示す。細胞は、培地単独 （黒棒）、又はカリジン抽出物（０，５％）を含む培地（ハツチした棒）又は１ ０％子件血清（ストライプを付した棒）を含む培地中で１５分間インキュベート した。　Ｂｅｔａｄｉｎｅ、　Ｇｒａｎｕｌｅｙ又は１ｌｉｂｉｃｕｌｅｎｓ　 （０，１５％）を加え、更に１５分間インキュベーションを続げた。データは、 ３〜４つの別々の実験の平均である。

第１４図は、テスト第１群（パルス−マクダニエル群）でのテストにおいて３５ ０口間のアロエドリンク投与された１５人のＨＩＶ感染虫者において、絶対Ｔ− ４ヘルパーリンパ細胞カウント（ｍｍ３）における変化を反影するデータを示す グラフである。

第１５図は、テスト第２群（ワトソンーマクダニエル群）でのテストにおいて９ ０Ｆ１間のアロエドリンク経口投与された２６人のＨＩＶ感染患者における絶対 Ｔ−４ヘルパーリ、ンパ細胞カウント（ｎ＋ｍ３）の変化を反影するデータを示 すグラフである。

第１６図は、上述の第１群（パルス−マクダニエル群）でのテストにおける３５ ０口間のアロエドリンク経口投与された１５人のＨＩＶ患者における修正ウォル ター　リード臨床スコアを示すグラフである。

第１７図は、上述の第２群（ワトソンーマクダニエル群）でのテストにおいて９ ０日間のアロエドリンク経口投与された２６人のＨＩＶ患者における修正ウォル ター　リード臨床スコアを示すグラフである。

第１８図は、上述の第１群（パルス−マクダニエル群）でのテストにおける３５ ０日間に亘るアロエドリンク経口投与された１５人のＨＩＶ患者におけるｐ　− ２４ｐｇ／ｄＬにおける血清コア抗原（アボット　ダイアゴノスティックス）を 示すグラフである。

第１９図は、第２群（ワトソンーマクダニエル群）における９０口間のアロエド リンク経口投与された２６人のＨＩＶ患者におけるｐ　−２４ｐｇ／ｄＬにおけ る血清コア抗原（アボットダイアゴノスティックス）を示すグラフである。

第２０図は、アセマンナン治療に対する応答において炎症性腸症候群を有する患 者の臨床評価スコアを示すグラフである。

第２１図は、アセマンナン治療に対する応答において炎症性腸症候群を有する患 者の内視鏡評価を示すグラフである。

第２２図は、アセマンナン治療に対する応答において炎症性腸症候群を有する患 者の粘膜生検評価を示すグラフである。

第２３図は、アセマンナン治療に対する応答において炎症性腸症候群を有する患 者のアセマンナンパイロット患者研究のまとの表を示すチャートである。

第２４図は、ＶＥＲＯ細胞／はしかウィルス／アセマンナン　インビトロ系にお いてＣＰＥをブロックするために要する濃度を知るためにアセマンナンの力価測 定を示すグラフである。

第２５図は、はしかウィルスによるＶＥＲＯ細胞の感染速度を時間に対して示す グラフである。

好ましい実施態様の詳細な説明 Ａ、毒　性 アセマンナンの毒性作用はインビボ及びインビトロ系で研究された。

アセマンナンは、アメス　サルモネラ　ミクロソームアッセイで突然変異原活性 を調べられた。このアッセイは、Ａｒｏｃｌｏｒ　１２５４誘発されたラット肝 臓代謝活性系の存在下及び不存在下で、サルモネラ　チフィムリウム株Ｔ　Ａ　 １５３７゜ＴＡ１５３ｇ、　ＴＡ９８及びＴ　Ａ　１００を用いて行われた。ア セマンナンは、これらアッセイ手順に従テストされたときに突然変異原性である とは見られなかった。

アセマンナンは、細胞に対する毒性、アセマンナンにより起される幼若化反応、 及びＨＩＶウィルス及びＨＩＶ感受性細胞への作用を評価するために、いくつか のインビトロテストに付した。予備研究において、標的細胞としてＨ−９細胞を 用いて、非毒性濃度として０．２％のストック溶液の１：１０希釈（最終希釈０ ．０２％）を選んだ。標的細胞として正常な白面細胞を用いて非毒性レベルとし て１：２０希釈を選んだ。毒性研究によると、０．０２％濃度のアセマンナンは 、培地対照Ａ群細胞と比べると、Ｂ群細胞に対して少しの刺激作用を有した。フ ィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）と共にテストした剤（Ｄ群）は、ＰＨＡ単独（０ 群）と比べて少しの抑止作用を有した。これら観察された差は、重大とは考えら れない。

アセマンナンのテストした濃度は、標的細胞のＨＩＶ−■（以前のＨＴＬＶ−ｍ ）による感染を実質的に粱止しなかった。いくつかの標的細胞は第０日にウィル スにより感染され、感染後３日から剤で処置された（■群）。また、他の標的細 胞は、ウィルス感染の３日前に剤で処置され、剤の存在下で培養を続けた（■群 ）。両側において、第７及び１４日の逆転写酵素の比較で示されるように、陽性 対照ウィルスの高濃度にまでさえウィルス感染及び／又は複製が類似に見えた。

第二の条件下で処置されたウィルスは、いく分低減された感染性を示したようで あり、しかしこれは剤活性の過大推定の故に、処置されたサンプル点の不十分な 希釈はテストの正確な終点を得ることを許さなかった。

およその投与量範囲を決めるための１４日毒性研究は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗ 　ｌｅｙ離乳しだてのラットを用いて行われ、カリジン抽出物（アセマンナン） の毒性効果を評価し、次に６ケ月準慢性研究のための投与量量レベルを決定した 。１０匹の雄及び１０匹の雌ラットの群の飼に０．８０００．１２５０００゜２ ５０００及び５００００ｐｐｍのカリジン抽出物の投与レベルを与えた。総ての 動物を、毒性の徴候、動き及び死亡について毎日観察した。体重及び飼消費を毎 週測定した。臨床化学及び血液学パラメーターは、終了時に測定した。最後の死 体検査は、２日間にわたって行った。器管重量を測定し、選んだ組織を１０％の 中性緩衝されたホルマリン中に保った。

化合物に関連する変化は、臨床的徴候、体重、飼消費、血液学、臨床化学又は器 官重量において見られなかった。全体の病理学的検査は、非化合物関連変化の発 生を示さなかった。従って、ＳｐｒａｇＬＩＯ−ＤａＷｌＯｙラットは、少くと も２週間の食餌中で５％までカリジンに耐えうるようである。

ラットでの別の研究において、２週間（１４日）のアセマンナンの探検的経口投 与において用いるために、６０匹のＣｈａｒｌｅｓ　Ｒｌｖｅｒ　ＣＤラットを 夫々５匹の雄と５匹の雌の６群にランダムに別けた。カリジン抽出物（アセマン ナン）を、下記の投与量（処置）　：　５００　、１０００．２０００．３００ ０及び５０００＋ｎｇ／ｋｇ体重／日を与える量で綿実油キャリア中に懸濁した 。対照は綿実油キャリアのみを受けた。総ての処置は、２０ｍ１／ｋｇ体重の一 定量で強制飼養により経口投与された。

総ての動物は、毒性、病気及び死亡の明白な徴候について少くとも日に二度観察 され、詳しい観察は週に少（とも一度行った。個々の体重及び飼消費値を毎週記 録した。２０００及び５０００ｍｇ／ｋｇ／日群の夫々において１匹の雄および ５０００ｍｇ　／　ｋｇ　／日群における２匹の雌を含む５匹のラットが死んだ 。死んだ１０００ｍｇ／　ｋｇ／日群の１匹の雌は、先立つ異常な徴候を示さな かった。他の４匹のラットのうち、少くとも２匹は異常は呼吸、口の周りの赤い 発色、脱ふんの減少を示し、触ると冷たかった。最も多い投与の群における全て の雄及び３０００ｍｇ／ｋｇ／日群における２匹の雌において第２週に腹の膨張 が見られた。異常呼吸は、１０００．２０００．３０００及び５０００ｍｇ／ｋ ｇ／口投与レベルで殆んどの動物で、特に第２週に見られ、また５００ｍｇ／ｋ ｇ／日投与レベルの１匹の雄で見られた。体重及び／又は飼消費は、対照群と比 べて５０００ｍｇ／　ｋｇ／日の雄及び雌ラットにおいて低減した。いくつかの 動物で見られた呼吸抑圧及び腹膨張は、テスト品の化学的性質ではなくてテスト 品／綿実油混合物の物理的性質に関係すると考えられた。ラットが、胃を正常に 空にするまで十分に物質を消化できなかったということはありうる。膨張した胃 が胸に侵入して、呼吸抑圧を起した。

急性研究において、５匹の雄と５匹の雌ラットが、５０００ｍｇ／ｋｇの投与レ ベルでテスト品カリジン抽出物（アセマンナン）を１度経口投与された。テスト 品は、２０ｍ１　／　ｋｇの量の綿実油中ｗ／ｖ　懸ｉ物として投与された。１ ５０研究期間の処置の評価基準は、死亡、薬理毒性徴候、体重及び病理学（全体 的死体検査で決定）であった。どの動物にも、テスト品に関係する毒性の証拠は 見られなかった。テスト品のＬ　Ｄ　５０値は、雄および雌ラットに一度経口投 与された場合、５０００ｍｇ／ｋｇより大きいと判った。同じ結果が、５匹の雄 および５匹の雌マウスを用いて同じ手順で行って得られた。

犬での９１日準慢性毒性研究をカリジン抽出物（アセマンナン）を用いて行って 、経口投与後の毒物学的応答を評価した。研究は、０．１００　、４００又は１ ５００ｍｇ／ｋｇ／口の経口投与量でカリジン抽出物（アセマンナン）を受ける ４匹の雄と４匹の雌の純血ピーグル大の４群より成った。１時間の給飼期間に犬 により消費されると予期される飼の量中に番犬の所定投与量を与えるのに十分な 世のテスト品示を入れることによって、物質を毎日投与した。与えられた飼の量 は、前日の飼消費に基づいた。総ての犬が理論投与二±１０％を受けた。犬は、 予備テスＩ・の間、１週間間隔で、そして最後の死体検査の前に体重測定した。

飼消費は、投与１週間前から毎日測定した。病的状態、死亡及び毒性徴候は、開 始前及び投与中、毎ロモニターした。臨床化学、電気泳動、血液学及び尿パラメ ータは、予備テストの間、４５０後、そして終りの前に測定した。第８６回の投 与後に、２４時間にわたり等間隔で高投与及び対照大から血サンプルを採って、 白面細胞パラメーターのありうる変化を評価した。総ての犬が研究の終りまで生 き残った。終了時に犬は、完全な総合死体検査を受けた。選んだ器官と組織を１ ０％の中性緩衝されたホルマリン中に保存し、これら組織のヘマトキシリン及び エオシン着色スライドを顕微鏡で調べた。

総ての犬からの選んだ器官を、絶対及び相対的器官重量の決定ならびに器官−扇 型量比の計算のために秤った。処置した動物で見られた臨床的徴候は、偶発的出 来事又は対照動物におけると同等の厳しさの故と考えられ、化合物投与に関係す るとは考えられなかった。化合物に関係する変化は、体重、飼消費、臨床化学、 尿又は電気泳動パラメーターにおいて見られなかった。単核細胞の絶対数の増加 へのありうる傾向は、２４時間継続採血で見られたが、しかし雄大においてのみ であった。平均の絶対及び相対器官重量は、対照大と化合物処置大とで同等であ った。総ての総合的及び顕微鏡的死体検査所見は、同じであると考えられ、化合 物投与と関係しなかった。

Ｂ、薬理学 アセマンナンの薬理学的挙動と作用を、種々のインビトロ及びインビボテスト系 で研究した。

カリジン抽出物（アセマンナン）は、抗ＨＩＶ及び抗マンノシダーゼ活性につい て評価された。用いたテスト系において、アセマンナンは抗ウィルス活性を持つ と示さなかった。アセマンナンは、テストした最高濃度（１０００ｍｃｇ／ｍＬ ）で培養物でＭＴ−２ヒトリンパ細胞の僅か４３％を保護し、マンノシダーゼの 抑止を示さなかった。アセマンナンは、グリコリル化（ＧＰ−１２０形成）を防 がず、しかしＨＩ　Ｖ　−Ｉウィルスのより大きい及びより小さい分子量のグリ コプロティンの多数の放射ラベルされた帯を作った。アセマンナンはまた、総て の濃度で細胞成長促進活性を示した。生体染料摂取は対照の１４０％及び１５８ ％であった。ＨＩＶに対する直接的活性を示さないけれど、アセマンナンは、免 疫刺激特性を持つと結論された。

アセマンナンは、ヘルペス　シンプレックス　ウィルスに対して標準抗ウィルス 　プラークアツセイでテストされ、０．７７１　ｍｇ／ｍＬのアセマンナン濃度 で抗ウィルス作用が見られた。この濃度は、成る免疫系において容易に達成しう る。

ＶＥＲＯ（グリーンモンキーじん臓）細胞の感染されやすい培養物にウィルスを 加える前にアセマンナンの種々の濃度ではしかウィルスを予備インキュベートし た場合、２．５　ｍｇ／ｍＬのいき値濃度でウィルスの細胞変性作用の不存在に より示されるように、アセマンナン処置されたウィルスはＶＥＲＯ単層を感染し なかった。ＣＰＨの完全な不存在は、ウィルス接種における５ｍｇ／ｍＬのアセ マンナンで達成された。アセマンナンでインキュベートされたアセマンナンでイ ンキュベートされた唾液は、はしかウィルスに曝されたＶＥＲＯ細胞単層培養物 においてアセマンナンの抗ウィルス活性を増大した。唾液処理されたアセマンナ ンは、抗ウィルス活性における５倍もの増加を示した。別の評価では、ＶＥＲＯ 細胞は、アセマンナン５ｍｇ／ｍＬの添加前に種々の時間（０，５〜６時間）は しかウィルスの４０ＴＣＩＤ／ｍＬを含む培地でインキュベートされた。しかし 、この評価において、細胞がはしかウィルスに曝された後のアセマンナンによる インキュベーションは、ＶＥＲＯ細胞を感染から保護しなかった。

アセマンナンの種々のポリマー鎖長のヘルペスウィルスへの作用を調べるために 、中空繊維サイズ排除限外濾過によりポリマー鎖長を分離した。得た鎖長画分を 、ヘルペスシンプレックス■ウィルスによるＶＥＲＯ細胞培養物の感染を防ぐそ れらの能力に従って評価した。この系において、ＶＥＲＯ細胞への最大の保護は 、３０００ダルトン未満の分子量を含む画分により与えられた。

ＶＥＲＯ細胞単層は、培地中で５ｍｇ／ｍＬのアセマンナンにより２，４．８及 び１２時間処置された。次に単層をアセマンナン不含の培地で洗った。夫々の処 置された単層に４０７ＣＩＤ／ｍＬのはしかウィルスを加え、培養物を５日後に 細胞変性について調べた。アセマンナンによるＶＥＲＯ細胞の予備処理は、はし かウィルス感染を防がなかった。

ＨＩＶ感染した末梢血リンパ細胞により作られたウィルスの数を定量するため及 びその感染性を評価するために、実験室的手順を考案した。このフロフィールに は、細胞がＨＩＶ感染を受けたことのインジケータとして抗補体免疫螢光（ＡＣ Ｉ　Ｆ）株、作られた抗原の量を評価するためのＨＩＶｐ２４コア抗原アッセイ 、及び生理学的に活性な感染性ウィルス抗原産生の定量的インジケーターとして の逆転写酵素アッセイが包含された。培養物中の細胞の成長及び生存性を評価す るために、細胞密度及びトリパンブルー染料除外テストを用いた。これら実験の 結果は、アセマンナンがＨＩＶの複製を逆転写酵素禁止を介して直接に禁しなか ったことを示唆した。

生理学的系へのアセマンナンの参入又は吸着を追跡するために、ヒト末梢血単核 細胞培養物及びＣ１４ラベルされたアセマンナンを用いて研究を行った（実施例 ２３以降）。この研究で、検出しうる量の０１４ラベルされたアセマンナンが、 ヒト末梢単核細胞／マクロファージ細胞により吸着又は取入れられた。参入のピ ークは４８時間に起った。５ｍｇ／畦濃度のＣ１４ラベルされたアセマンナンは 、単核細胞／マクロファージ細胞に対し細胞毒でなく、重量／体積（ｗ／ｖ）単 位での消化された細胞曾は、消化されたアセマンナン溶液のＷ／Ｖの７６０倍大 きかった。これらの結果は、マクロファージ細胞形が、細胞毒性でない極めて高 い濃度でのアセマンナンの細胞内濃度を可能にすることを示唆する。

ヒト患者及び動物の血清における遊離のアセマンナンの検出のためのＥＬＩＳＡ キットを開発するための実験が、３　ｍｇ　／　ｋｇのアセマンナンＩＶを与え られた１５匹の犬から得た血清サンプルについて行われた。結果は、アセマンナ ンが血清中で検出可能であり、血から迅速に除かれることを示した。アセマンナ ン注射後１９５分に採られたサンプルは、極めて低濃度を含んだ。腸管外使用の ためのアセマンナンの適合性を評価するために、２匹のラビットに５ｍｇのアセ マンナンＩＶを与え、注射の１及び２時間後にラビットにおける何らかの明らか な効果及び白面細胞形態の何らかの変化を調べた。アセマンナンは、いずれのラ ビットの物理的状況においても観察しうる臨床的変化を起さなかった。

１匹のラビットからの血サンプルは、未知の理由により（たぶん欠陥あるＥＤＴ Ａ管の故に）凝固した。別のロフトのＥＤＴＡ管が他のラビットについて使用さ れ、血サンプルは凝固しなかった。注射２時間後に調製された血塗法スライド上 の多数大きな単核細胞の存在は、アセマンナンに帰された。

皮肉注射後のアセマンナンのかゆくする特性を評価するために、皮膚テストをラ ビットに対して行った。１ｍｇ／ｍＬテスト溶液の０．１ｍｌの注射後にテスト 物質のいずれに対しても皮膚の又は全身的反応は見られなかった。

米国特許ＸＸＩ、生理学的テスト［１５１）に概要を示された発熱源テストプロ トコルに従い、アセマンナンの１ｍｇ／ｍｌ注射する溶液を用いて、ラビットに おいて発熱源アッセイを行った。注射されたアセマンナンのうちの精神的作用の 故に、米国特許に記載されているよりもひんばんな温度測定を行った。テスト動 物における変化は米国特許プロトコルにより許された最小変化を越えなかった。

従って、この溶液は発熱源存在の米国特許の要件を満たす。注射し得るアセマン ナンは、１匹のラビットにおいて測定された０、３℃の体温上昇を誘発した。こ の温度上昇は注射の９０分後に起こったことに注意されたい。アセマンナンはイ ンビトロのマクロファージ及び単核細胞によるインターロイキン−Ｉ　（１ｇ− ■）の誘発剤である。１４７−Ｉは潜在的な発熱源であるので、このことはこの ラビットにおける最少の遅延体温上昇を説明し得る。

動脈内腫瘍のためのアセマンナン溶液の適合性を評価するために、注射し得るア セマンナンの１．５ｍｌの投与量（１■／ｍ１）をラビットの取の中心動脈中に 困難なく注射した。

動脈により供給される組織は注射の後２４時間、４８時間または７日間後に何ら の大きな変化を示さなかった。注射し得るアセマンナンは、濃厚な粒子懸濁物を 形成するけれども、該物質は局所的組織により、良好に耐えられる。そして、耳 先端の毛細血管をつまらせなかった。

ＩＰ注射されたアセマンナンの大きな投与量が不快の徴候または体温の上昇を誘 発するかどうかを見るために一つの実験がまた行われた。直腸温度を含む基本的 な臨床的／物理的検査は二匹のラビットにて行われた。ラビットは５ｍｌのアセ マンナン溶液（１■／ｍ１）またはアセマンナンテスト物質を希釈して調製する ために用いるのと同じ規定度の食塩水の５ｍｌのＩＰ注射を受けた。ラビットは 注射の１゜２．２４．及び４８時間後に物理的変化、不快または体温上昇の徴候 について調べられた。テスト物質のいずれにも反応が検出されなかった。

ヒト末梢血付着細胞に対するアセマンナンの作用を調べるために、インビトロア ッセイを行った。アセマンナンが単核細胞及びマクロファージによるインターロ イキン−■及びプロスタグランジンＥ２の生成の有力な誘発剤であることが確認 された。

四匹の雑種犬にＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ”抽出物（アセマンナン）の単一投与量を与 え臨床的徴候及び実験室的血液パラメーターの変化を観察した。投与されたＣＡ ＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物の投与量は体重１ｋｇ当たり１５〜１５００ｍｇであっ た。対照のイヌはプラシーボ投与及び触しんを受けた。次に同じ五匹のイヌをＣ ＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物による９３日経口投与プロトコールに付した。選ばれ た投与量は１５０ｍｇ／ｋｇ／日であった。二つの研究において、処置された及 び対照の犬は挙動において及び臨床検査の結果において変化を示さなかった。テ スト品の投与とともに変化すべき観察された唯一の測定された変化は白色細胞変 異カウンティングの間に記録された循環する単核細胞の増加であった。これら単 核細胞のいくつかは、それらが血液スライド上に見られる他の単核細胞よりも大 きい故に、活性化されているようであった。研究の終わりにおける他の犬の死体 検査及び疫学的検査は何らの異常な所見を示さなかった。

犬に経口的に投与されるアセマンナンのための可能な生理学的マーカー（増加さ れた数の循環する単核細胞）を評価するために行われた研究において、２０匹の ピーグル大（１０匹の雄及び１０匹の雌）を三つの処理群に分けた。

ＣＡＲＲＩ　Ｓ　ＹＮＴＭｍ出物（７セマン＋ン）　ヲ０．０５．０．５または ５．０Ｉｌ１ｇ／ｋｇの投与量で経口投与した。血液塗抹をアセマンナン処理の 前及び処理後１．３，５．７及び２４時間後においてＷＢＣカウントの合計及び 差について調べた。

合計ＷＢＣ及び単核細胞カウントが０．５及び５．０ｍｇ／ｋｇ処理群において 増加した。単核細胞はアセマンナン投与後７時間で最大であった。この潜在的な この可能性ある生理学的マーカーのための無効果投与レベルは０．０５ｍｇ／ｋ ｇであった。

アセマンナンは他の実験において単核細胞機能を高めるように見えたので、アロ アンチゲンの免疫応答を高めるアセマンナンの能力をテストするために及び潜在 的向上が単核細胞により起こる現象であるかどうかをテストするために研究を行 った。アセマンナンは混合されたリンパ細胞培養物（ＭＬＣ）において同系抗原 に対するリンパ細胞応答を高めず、しかしそれは投与量に関係する態様で、アロ 抗原応答を著しく高めた（２．６ＸｌＯ’〜２．６　Ｘ　１０−９Ｍ）。アセマ ンナンのこの効果は特異的応答であるように見える。また、アセマンナンのイン ビトロモードと共に起きる、これはまた、インビボにおいても達成される。別の 一連の混合実験によると、単核細胞によるアセマンナンインキュベーションは単 核細胞により起こされるシグナルがレクチンに対するＴ細胞応答を高めることを 可能にする。アセマンナンはそれがアロアンチゲンに対するリンパ細胞応答を高 める点において免疫向上剤であると結論された。メカニズムはアロアンチゲンの 保護の下で、ＩＨの単核細胞放出の向上を含むことが示唆された。このメカニズ ムは動物及びヒトにおいてビールス感染を阻害するアセマンナンの最近観察され た能力を部分的に説明し得る。

ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物（７３〜９０％アセマンナン）の効果は、食作用機 能への効果を確認するためにインビトロで研究された。ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽 出物はＣＢＡマウスにＩＰ注射され、腹腔及び牌臓マクロファージが三日後に集 められた。チオグリコレート及び食塩水を陽性及び陰硅対照として夫々同様にテ ストした。抗５ＲＢＣタイターの存在下及び不存在下で摂取粒子として赤血球細 胞（ＳＲＢＣ）と共にマクロファージをインキュベートし、５ＲＢＣを摂取した 細胞パーセントでマクロファージを組織学的に測定した。ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ 抽出物処理後に非特異的食作用が少し増加したけれど食作用は抗体の存在下で少 し侵された。補体の存在下でＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭで刺激された抗体による食作 用はかなりの程度に増加された。

それらの結果はＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽ａ物がマクロファージの数を増加させ、 そしてそれらの食作用活性を増加させたことを示す。そのような応答は傷治癒の 刺激剤として及び抗感染剤としてのその有効性に帰せられ得る。

ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭ抽８物（アセマンナン）で刺激されたマクロファージは また、非特異的腫瘍の死に対して刺激された食作用の効果を測定するためにイン ビトロ及びインビボで、チオグリコレートで刺激された及び対照のマクロファー ジと比較された。Ｃｒ　５１標的細胞と共にインキュベートされたチオグリコレ ートで刺激されたマクロファージは平均２８００ｃｐｍでＣｒ５１を放出し、一 方、ｃｐｍの放射線を放出した。これら群の間に統計的な差異はなかった。刺激 されなかったマクロファージは２８００ｃｐｍの範囲で放出した。しかし、ＣＡ ＲＲＩＳＹＮ”抽出物でインビトロで刺激されたマクロファージは２１０００ｅ ｐｍのＣｒ５１放出を示した。このことは二つの明らかな事実を示した。ＣＡＲ ＲＩＳＹＮ”抽出物は長期間続く細胞分解作用を誘発せず、その活性は組織培養 において比較的短い時間生じる。細胞毒性パーセントはｃｐｍと比例する。続く 実験は経時的な細胞特性アッセイを用いて行われた。細胞毒性作用は刺激後６時 間と言う早期に生じ、１２時間でその最大に増加することが示された。この活性 化のメカニズムは研究されなかった。これら研究において示されたデータはＣＡ ＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物（アセマンナン）が癌の非特異的治療において重要な役 割を持ち得ることを示した。

ネコ族の病気に対して以前ワクチンを受けていない１６〜２０週齢の二十匹の健 康なネコを、ネコビールス鼻気管炎の処理におけるアセマンナンの有効性の研究 のために選んだ。

十匹のネコをＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物（アセマンナン）の−回の経口投与（ １５ｍｇ／ｋｇ）で処理し、他のものはアセマンナンなしの（陽性）対照どして 用いた。アセマンナン投与の４時間後に、ネコを鼻気管炎ウィルスに鼻孔内でさ らした。全ての非処理ネコは病気の徴候を示し、一方十匹のアセマンナン処理動 物の僅か二匹が、臨床的徴候を示した。また、後者の群の二匹の影響されたネコ は病気の緩和された症状を示した。

Ｃ０投与の態様 アセマンナンの物理的特性は、当業者に知られている全ての薬剤投与形態にアセ マンナンを処方し、加えることを。

可能にする。生きた生物の組織及び機関においてそれを用いること及び広い範囲 の投与量で付与することを可能に、する。

アセマンナンは一日当たり体重１　ｋｇ当たり０．００１ｍｇ〜１００ｍｇの毎 日の投与量で経口的に腸間外に、局所的に及び部分的に付与することが出来る。

アセマンナンを適当な助剤と混合して、錠剤及びコートした錠剤のような固体の 投与単位へと圧縮または充填することが出来、あるいはカプセルにすることが出 来る。経口投与は投与形態は一日当たり体重１　ｋｇ当たり約０．１〜１００ｍ ｇの投与量で投与されるであろう。

適当な液状ビヒクルを用いてアセマンナンは溶液懸濁物またはエマルジョンとし て注射され得る。これら製品は一日当たり体重１ｋｇ当たりｏ、ｏｏｉ〜１１０ １Ｉ１の速度で投与される。

ワクチンまたは他の製品のアジエバント成分としてアセマンナンはアジエバント 製品の単位投与量当たり０．００１〜１０ｒｎｇの速度で用いられるであろう。

一般に、アセマンナンは少なくとも１０ｇ／ｋｇ体重／日が利用出来るような任 意の形態で投与される時、ヒトにおいて有効となる。

アセマンナンの局所的投与は、加工されたゲル、クリーム、ローション、溶液、 軟こうまたは粉末の形であり得る。

これら処方は、９０％までのアセマンナンを含むことが出来た。

実施例　１ カリジンで刺激されたヒト付着性末梢白血球による、インターロイキンーエ及び ビジーイー２（ＰＧＥ２）ＰｉｃｏｌｌＨｙｐａｑｕｅ　（スウェーデン（Ｓｗ ｅｄｅｎ）　、ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ））中での密度変化遠心分 離（ｄｅｎｓｉｔｙ−ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ）によ り、ヘパリンで凝血を防いだ全血液からヒト単核細胞を分離した。洗浄後、５０ Ｕ／ｍＬのペニシリン、５０ｇ／ｍＬのステレプトミシン、及び２＋ｎＭのＬ− グルタミンの加えられたＲＰＭＩ−１６４０中に、細胞を２５ｍＨのＨｅｐｅｓ と共に２Ｘ１０６ｍｌの濃度に再分散した。細胞分散液２ｍｌの画分を６−くぼ み（ｓｉｘ−ｗｅｔ　ｌ）のプレートの各くぼみ（ｗｅｔ　ｌ）に分配し、５％ ＣＯ２及び湿気を含んだ雰囲気中、３７℃にて１時間培養した。粘着していない 細胞を除去した後、付着した細胞を上記の培地で３回洗浄した。

各くぼみに、５％のプールされたヒトＡＢ血清が加えられた培地２ｍｌを加えた 。培養液は第３〜５図に示されたようにして、異った濃度のＣＡＲＲＩＳＹＮＴ Ｍ抽出物で刺激された。同時に、大腸菌〔ジグｖ　（Ｓｉｇｍａ）　０１１１　 ：　Ｂ　４　）からのりポボリサッカライド（ＬＰＳ）を、いかなる添加物を加 えることなく、最終濃度２０ｇ／ｍｌに保つ対照を加えた（バックグラウンド） 。該培養液を上記のようにして３７℃で２４時間培養した。上澄み液を一採取し 、細胞を除去するために遠心分離し、５００体積のＰＢＳで４８時間（−回変え た）透析して、引き続き前記のように２５ｍ）４のＨｅｐｅＳ　、抗生物質及び Ｌ−グルタミンを含有する２０体積のＲＰＭ　Ｉ　−１６４０で４時間透析した 。工ρ−１の活性を評価するまで、上澄液は一２０℃にて冷凍された。

Ｂ、上澄液中のＩｆＪ−１の定量 ｌ１１−１を分析するなめに、二つの異った方法が用いられた：（１）胸腺リン パ球分析、及び（２）Ｉｌｌ−１に特異的なＥＬＩＳＡ分析。

１．５〜８週齢のＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスからのチモサイトが用いられた。５％の Ｆｅ２．１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、５０　ｇ　／　ｍｌのステレブトマイシ ン、２ｍＨのし一グルタミン及び５Ｘ１０−２Ｍの２−メルカプトエタノールを 含む最低必須培地（ＭＥＭ）中で、均一な細胞分散液を調製した。細胞の濃度を 、細胞／くぼみがｌＸ１０６となるように調整し、９６−くぼみのプレートに分 配した。ＰＨＡを各くぼみに１０ｇ／＜ぼみの濃度で加えた。引き続いて試料を 希釈し、最終希釈度１：１０から出発して、２５ρの体積が各くぼみに加えられ た。全ての希釈物は四回試験された。プレートは５％ＣＯ２を含む湿った雰囲気 中で３７℃にて７２時間培養され、最後の１６時間は〔Ｈ３〕−チミジン（０， ５Ｃｉ／＜ぼみ）がパルスされた（ｐｕｌｓｅｄ）。細胞を自動細胞採取機にて ファイバーグラスフィルター上に採取し、標準シンチレーション法により放射能 を測定した。第３図及び第４図は二つの別々の実験の結果を示す。結果は、最終 的な希釈度１：１０での上澄液に応じた胸腺リンパ球によるチミジンの導入のｃ ｐｍとして表されている。

この方法は、最近、ジャーナル　オブ　イミュノロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ 　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　１３８：４２３６．１９８７年）に掲載された。同 様に、米国特許第３．６５４．０９０号及び米国特許第３１　、００８号〔シュ ールス（Ｓｃｈｕｕｒｓ）他〕を見よ。手短かに言うと、１１−１に対するモノ クローナル純化抗体ｐｕｒｉｆｉｅｄａｎｔｉｂｏｄｙ　ＩＮ　−１−８６（１ ００Ｌ／＜ぼみ、１０ｇ／ｍｌ）をビニル分析プレートのくぼみ上、４℃で一夜 コートした（ｃｏａｔｅｄ）。該くぼみをＰＢＳｌｏ、５％　’ｒｈ＋ｍｅｒｏ ｓａ＋で洗い、５％の脱脂粉乳１０．５％　Ｔｈｉｍｅｒｏｓａｌ　／ＰＢＳ　 ２００ｇで室温で１時間カウンターコートした（Ｃｏｕｎｔｅｒ−Ｃｏａｔｅｄ ）。

洗浄後、５０Ｊ２／＜ぼみの試料、すなわちヒト組換体ＩＪＩ−１標準、及び１ ．！！−１の重複しないエピトープ（ｎｏｎ−ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ　ｅｐｉ ｔｏｐｅ）に対する他のモノクローナル抗体、１％脱脂粉乳１０．５％　Ｔｈｉ ｍｅｒｏｓａｌ　／Ｐ　Ｂ　Ｓ中のビオチン化されたＩρＢ　１−　Ｈ６７（２ ｒ／ｍｌ　＞　５０１を加え、該プレートを室温で２時間培養した。洗浄後、１ 　：　１０００希釈度のステレブタバイジンーペリオキシダーゼ１００．１！／ ＜ぼみを加え、該プレートを１時間培養した。くぼみを洗浄し、１００　、Ｑの ＯＰＤ基質溶液と共に暗所で３０分間培養し、４５０止での吸光度を測定した（ 第５図）。

プロスタグランジンＥ　は、未透析の上澄液と同じく、ラジオイムノアッセイで 測定した。製造元の教示に従い、ＰＧＥ２に対する抗体〔アイシーエヌ　バイオ メディカル社（ＩｃＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、　Ｉｎｃ、）　、ｍｌｌツタメ サ（Ｃｏｓｔａ　Ｍｅｓａ）。

カリフォルニア（ＣＡ））を使用した。

Ｄ、観測 典型的な実験が第３図〜第５図及び第２表に示されている。ＣＡＲＲＩＳＹＮ　 −７ｄｌｌｉ物はヒト付着性末梢白血球によるＩΩ−１構造の強力な誘発物であ る。１〜１０ｇ／ｍ１の間の量で、ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭ抽出物は、２０ｇ／ ｍｌのＬＰＳ　（このものはｌＮ−１生成の標準的な誘発物である）によって誘 発されるに匹敵する工Ω−１生成を誘発した。

ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭｔ＊出物は、同じ量の範囲にてもまた、２０ｇ／ｍｌの ＬＰＳによって誘発されるに匹敵するレベルでのＰＧＥ２の生成を誘発した（正 の対照）。

第　１　表 ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ及びリポポリサッカライド（ＬＰｓ）によって刺激された ヒ）・末梢血液付着性細胞によるプロスタグランジンＥ２生成の誘発 Ｌ　Ｐ　Ｓ　２０ｇ／ｍｌ　２．６　、　３．９ＣＡＲＲＩ　５ＹＮＴｌ′ｌＯ ｇ／ｍ１　３．５ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭ　Ｉｇ／ｍｌ　０Ｌ　Ｐ　５２０ｇ／ ｍｌ　Ｏ，５、ＩＪＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭｌＯｇ／ｍｌ　０．７実施例　２ インビトロでの食菌作用におけるＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭの作用 ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭ抽出物（７３％アセマンナン）の作用をインビトロで研 究して、食菌機能に対するその作用を確認した。ＣＢＡマウスにＣＡＲＲＩＳＹ ＮＴＭ抽出物を皮下注射した。そして、腹腔及び肺臓マクロファージを３日間後 に採集した。ポジティブ及びネガティブ対照として、チオグリコレート及び食塩 水を夫々同様にテス）・シた。抗５ＲＢＣタイターの存在下及び不存在下で摂取 粒子として、ヒツジ赤面細胞（Ｓ　ＲＢ　Ｃ）によりマクロファージをインキュ ベートし、食菌作用を組織学的に測定して、５ＲＢＣを摂取した細胞のパーセン トとして示した。

ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物の処理の後に、非特異的な食菌作用が僅かに増加し たが、食菌作用は抗体の存在下で有意に増加された。補体の存在下で、ＣＡＲＲ ＩＳＹＮＴＭで刺激された抗体による食菌作用は相当の程度まで増加された。こ れらの結果は、ＣＡＲｔＳＹＮＴＭ抽出物がマクロファージの数を増大させ、そ れらの食菌活動を高め得ることを示す。そのような反応は、傷の治癒の刺激剤と して及び感染防止剤としての有効性に寄与し得る。

Ａ、方法及び材料 ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物（アセマンナン）は、その乾燥された形で室温で貯 蔵された。夫々の実験に必要な量で秤られ、６００ワツトの出力で２分間マイク ロウェーブにさらした。それを殺菌されたプラスチックの遠心分離チューブに移 しさらに１分間マイクロウェーブにかけた。この物質を、細胞培養液培地（ＲＰ 　Ｍ　Ｉ　−１６４０）で所望の濃度まで希釈した。

食菌細胞：マウス肺臓細胞は、バーラン　スプラーグーダウレイ（）Ｉａｒｌａ ｎ　Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｉｅｙ）から購入したＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウ スから得た。マウスはＣＯ２で殺し、それらの肺臓は無菌的に取出された。次に 、細胞をジャーナル　オブ　イミュノ・ロジー、　７１．２２０（この開示を引 用することにより、ここに含める）の方法に従いナイロンウールカラム分画によ り、付着及び非付着集団に分離した。付着細胞を下記のように顕微鏡分析により 測定し、マクロファージ（単核細胞）及びリンパ球が、４：１の比であった。単 一細胞懸濁物を、単分子層破壊により得た後、付着及び非付着の両者の単一細胞 の標本を、ファイコール−ハイバーク（ｆｉｃｏｌ　−ｈｙｐａｑｕｅ）に配置 し、遠心分離して、リンパ球どマクロファージの混合物を得た。

幼若化アッセイ：標準的な幼若化アッセイは、以下のようにして行った。アッセ イで用いたマイトジェンは、プロウジウェルカム（Ｂｕｒｒｏｕｇｈｓ　Ｗｅｉ ｌｃｏｍｅ）から得たＰＨＰ　−Ｐであった。個々の実験について示したように 、培養物は５％ＣＯ２中加湿雰囲気下で７２時間保持された。トリチウム化した （ｔｒｉｔｉａｔｅｄ）チモジンを培養の最後の６時間の間に加えた。フラット ボトムマイクロタイター組織培養プレートを用いたくぼみ当たりの細胞濃度は５ ×１０５マウス細胞１０．２ｍｌであった。細胞は最初にくぼみに入れられ、次 にＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物またはマイトジェンを加えられた。刺激指数（Ｓ 、１．）は、下記の式を用いて計算した ｃｐｍ対　照−ｃｐｍバックグラウンド細胞着色：簡単に説明すると、細胞の塗 抹標本は下記のようにして、非特異的エステラーゼにより着色した。

二滴中の約２×１０６細胞を小牛血清二滴及び３５％ホルムアルデヒド２５ｍ１ ．アセトン４５ｍ１、ＫＨ２ＰＯ４１００ｍｇ。

Ｎａ２　ＨＰＯ４１０■及び水３０ｍ１の混合物より成る固定溶液４滴を混合し な。スライドを、１０■のナフチルアセテート、及び０．１Ｍトリス−マレエー ト緩衝液、ｐＨ７，８を伴うエチレングリコールモノエチルエーテル１．４ｍｌ 中ファスト　ブルー　スティン（Ｆａｓｔ　Ｂｌｕｅ　５ｔａｉｎ）　４．５ｇ の混合物〔う、イトのスティン（Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ　５ｔａｉｎ）　、ジャーナ ル　オブ　ヒストケミストリー（ＪＯＩＩｒｒｔａｌ　ｏｆ　ｌ（ｉｓｔｏｃｈ ｅｍｉｓｔｒい、　２１：１−１２（１９７３））でもって、インキュベートし た。スティンを１０分間反応させ、次に２０秒間水で洗った。再び洗浄する前に 、ｃｉｅｍｓａ　０．２ｇ　、Ｉ：−タノール１２．５ｍｌ及びグリセｏ−ル１ ２．５ｍｌの対比着色を３０秒間行った。

莫腔マクロファージ細　の誘　：食塩水チオグリコレートブロスまたはアセマン ナンを雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔的注射して腹腔浸出マクロファージ細胞を誘 発した。誘発された細胞は、３日間のポスト注射後に腹腔から取出した。

マクロファージをホスフェート乾燥した食塩水（ＰＢＳ）より二回洗い新鮮な培 地２ｍｌで覆った；マクロファージ懸濁物０．１ｍｌを各試験管に加えた。培養 物を３７℃、加湿、５％ＣＱ２９５％空気インキュベーター中、３０〜６０分間 置いた装培養物をＰＢＳで２度洗い、Ｐ　Ｂ　８２　ｍｌで覆った。一対のカバ ースライドの一つを針状先端のビンセットで取除き、蒸留水のみの中に５秒間浸 漬し、そして、素速く培養皿に置いた。ＰＢＳを除きそして培養物を水冷グルタ ルアルデヒドで覆った。１０分間後にグルタルアルデヒドを取除き、カバースラ イドを蒸留水に入れた。

セットしたカバースライドを、位相差顕微鏡の油浸レンズにより、素速く調べた 。浸透圧ショックを受けなかったスライドにおいてアタッチメントを数え、一方 、摂取は蒸留水ですすがれたカバースライドにおいて数えた。

抗体依存性及び抗体非依存性食菌作用：オースチンバイオロジックス　ラボラト リ−［Ａｕ５ｔｉｎ　ＢｉｏｌｏｇｉｅｓＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、オースチン（ Ａｕｓｔｉｎ）　、　Ｔｅｘａｓ（テキサス）〕から得たヒツジ赤面細胞（ＳＲ ＢＣ）をＰ　Ｂ　Ｓ　（ｐ）１７．２）中で３度洗った。Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　 ｃマウスに１０６細胞のＩＰ注射をして、１４日ポスト注射により飼育した。血 清を集め、プールし、５６℃で４５分間熱失活させた。丸底マイクロタイターく ぼみを用いて凝集タイターを測定して１０２４であった。

抗体依存性食菌作用は、２０％小牛血清（Ｆ　ＣＳ）を含むＲＰＭＩ−１６４０ 中でマクロファージ（１０６）と共にＳ　ＲＢ　Ｃ（０，５％Ｖ／Ｖ）のインキ ュベーションにより測定した。

スライドを種々のインターバルで調製し、着色した。スライド当たり２００の細 胞、及び動物光たり３つの細胞をカウントすることにより、赤面細胞を摂取した マクロファージの割合を視覚的に測定した。

抗体非依存性マクロファージは、抗５ＲＢＣ血清またはＩｇＭ画分（２０００の 最小タイター）と混合された５ＲＢＣ（２０％ＦＣ３を伴うＲＰＭＩ１６４０中 ０．５％）を用いて測定した。混合物を３７℃で１５分間インキュベートし、次 にＰ　Ｂ　Ｓ　（ｐＨ７，２）中で二度洗い、再懸濁して元の体積とした。

血清分画ニューグロブリン沈澱及び蒸留水に対する透析によって全血清を分画し てＩｇＭを除去した。４０℃で２４時間の透析の後、沈澱物をＬ５００Ｘ　ｇの 遠心分離２０分により除去し、上澄みをイオン電気泳動に補体介在分解により分 析した。５％未満の元のＩｇＭが残存した。

Ｂ、結果 マクロファージに対するアセマンナンの作用を評価するために、最初の実験はア セマンナンによるインビトロで培養されたマウス肺臓細胞を用いた（第２表）。

第　２　表 培養物中のマウス肺臓細胞の組織評価 による細胞タイプ（％） アセマンナン（ｇ／くぼみ） 培養時間ｍ　胞ａＯ，００，００２０，０２０，２７２時間　マクロファージ　 ３０±６３２±７４１±３４５±９リンパ細胞　７０±５８８±８５９±３５５ ±６９６時間　マクロファージ　２２±４２８±４５８±６３８±８リンパ細胞 　７８±８７２±７６４±１０６２±４ａ　マクロファージ（モノサイト）はニ スラーゼ着色により定量された。

結果は平均値±Ｓ、、Ｄ、とじて表現される。結果は実験当たり２００の研究さ れた細胞での六つの実験からのものである。“リンパ細胞”はエステラーゼによ り着色しなかった細胞であり、ライトの着色（Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ　５ｔａｉｎ） による細胞の外観を有した。

培養物は７２または９６時間インキュベートされ、実験の終わりに、塗抹剤をラ イト着色及びエステラーゼ法により着色し、マクロファージとリンパ細胞の相対 的パーセンテージを測定した。７２時間でアセマンナンなしで３０％から、くぼ み当たり０．２ｇのアセマンナンで４５％へのマクロファージ数の、投与量に関 係する増加があった。データは細胞パーセントとして示されているので、リンパ 細胞における付随する現象があった。９６時間においてやはりアセマンナンの存 在下でマクロファージとの、投与量に関係する増加があった。９６時間において 、くぼみ当たり０．２ｇのアセマンナンを伴う培養物は、黄色の着色により示さ れるように相当の酸分解があった。さらに、９６時間培養物は、マクロファージ の比較的低いパーセントを有し、これは多分、培養における培養のより長い時間 におけるものであろう。

マクロファージ数におけるアセマンナン誘発の増加のスタンダードに関係ずける ために、同様の実験をマイトジェンＰＨＡ−Ｐで行った。結果を表３に示す。

表　３ 培養物中のマウス肺臓細胞の組織的 評価による細胞タイプ（％） ＰＨＡ　−Ｐ　（ｇ／＜ぼみ） 培養時間　細　胞ａＯ，００，０２０，０１０，２７２時間　マクロファージ　 ３３±８３２±６３０±６３１±５リンパ細胞　７０±１２６８±８７０±６６ ９±４９６時間　マクロファージ　１８±８　２１±３２６±６２５±５リンパ 細胞　７７±１０７９±４７４±８７５±６ａ　マクロファージ（モノサイト） はニスラーゼ着色により足回された。

結果は平均値±Ｓ、Ｄ、　として表現される。結果は実験当たり２００の研究さ れた細胞での六つの実験からのものである。“リンパ細胞”はエステラーゼによ り着色しなかった細胞であり、ライトの着色（Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ　５ｔａｉｎ） による細胞の外観を有した。

マクロファージのパーセンテージは７２時間で変化しなかったが、ＰＨＡ−Ｐを 用いる９６時間のインキュベーション後に、マクロファージにおける投与世に関 係する増加があった。比較すると、アセマンナンはＰＨＡ−Ｐに比べ２倍効果的 である。マクロファージのパーセントはＰＨＡ−Ｐでの７に比べてアセマンナン で最大１６増加させた（表２及び３）。

アセマンナンがマクロファージのパーセントを増大させるようなので、食細胞の 活性もまた増加さすかどうが測定することにした。食塩水、チオグリコレートブ ロスまたはアセマンナンを与えられたＣＢＡマウスからの腹腔浸出細胞を、摂取 されるべきヒツジ赤面細胞と用いた（食細胞として）（表４〉。

表　４ 腹腔浸出物によるヒツジ赤血球の非特異的食作用８食作用のパーセントｂ 時間（分） 処　置　０　５　１０　２０　６０　１２０食塩水　３±３１１±６１５±１０ ２５±９４５±１２５２±１５−ｊ−オｉｌ）！レート１＋１　１４＋８　２０ ＋８　５２＋１４ｃ８４＋３２Ｃ８９＋２１Ｃアセマンナン　３±２１０±６１ ２土８４１±１８６１土１８６３±２３ａ　結果は動物当たり二つのスライドで スライｌζ当たり２００細胞を数えることにより測定した。結果は二つの実験に 基く。

ｂ　食作用パーセントは赤血球摂取を示す細胞割合を示す。結果は平均埴土Ｓ、 Ｄ、とじて示される。

ｃ　９５％信頼水準におけるスチューデン１−のｔ−テストにより評価すると、 食塩水対照グループと著しく異る。

１２０分間に渡って、非特異的食作用パーセンＩ・は、食塩対照において３％〜 ５２％に増加した。一方、チオグリコレートブロスで処理された動物からの細胞 における食作用パーセントは８９％に増加した。アセマンナンで処理した動物に おける食作用は、１２０分において６３％に上昇した。アセマンナンで刺激した 食作用は、２０〜１２０分後において、対称におけるそれよりも大きい。しかし 、差は統計的に有意ではない。

食作用におけるアセマンナンの作用が抗体依存性であるかどうかを測定するため に同様の実験を抗５ＲＢＣを用いて行った（表５）。

表　５ 抗体介在食作用８ 抗体タイター（×１０３）ｂ 食細胞源　予備処理　０　２　４　８ 腹腔　食塩水１５±８４３±１０３９±９１９±１１チオグリコレ−１・４９± １１８９±２２８０±２２５８±１４アセマンナン３Ｂ±１４７３±１３°６２ ±８４０±ｊ３牌臓　食塩水１１±４３８±９３２±１１２０±４チオグリコレ ート　２９±９７３±１３５４±１６３８±１２アセマンナン２１±１０６０± ９　５１±１７２６±１１ａ１食作用は赤血球摂取を示す細胞の平均％±Ｓ、　 Ｄ、とじて示される。

ｂ、凝集による抗体タイターは１　：　１０２４であることか示された。予備処 理及び細胞源は方法の欄で述べる。

ｃ、９５％信頼水準でのスチューデントのｔ−テストにより評価すると、食塩水 対照から有意に異る。

血清を熱により不活性化しく５６℃で３０分間）用いた抗体タイターは、血球凝 集タイターよりはるか上の２×１０３であった。この実験においてマクロファー ジは二つのソース、すなわち腹腔及び肺臓から得られた。また１、マウスは食塩 水チオグリコ１ノートまたはアセマンナンのＩＰインジェクションより予備処理 された。２ＸｌＯ”のタイターにおいて、チオグリコ１ノートで誘発された腹腔 マクロファージの食細胞活性は、食塩水により誘発された対照からの活性の２倍 （８９％対４３％）大きかった。一方、アセマンナンで誘発されたマクロファー ジは、対照に比べ３０％より活性であった（７３％対４３％）。アセマンナン処 理と食塩水対照群における食細胞の差は統計的に有意であった。

同様の結果がマウスの肺臓から得られたマクロファージにおいて見られた。食細 胞活性は腹腔から得られたマクロファージよりも低く、これは多分肺臓細胞の取 扱いによるのであろう（方法の欄参照）。やはり、２Ｘ１０”のタイターにおい て、アセマンナンで誘発されたマクロファージは９５％信頼水準で食塩水対照の 食細胞活性において有意に高い。食細胞活性は８　Ｘ　１０３のタイターにおい て対照と同等である。

抗体介在食作用に対する補体（Ｃ′）の作用を測定するために、Ｃ′の培地に対 する添加を用いた実験を行った（表６）。

表　６ 補体　上　作用の ％食作用８ 細胞源　食作用誘発剤　＋ｃ’　−ｃ’腹　腔　食　塩　水　２４±１１１８± 　９チオグリコレート　８４±１０６２±１２アセマンナン　７０±８ｂ５４± ４ 牌　臓　食　塩　水　１８±１１１６±９チオグリコレート　５４±９４１±１ １アセマンナン　４８±１０３５±６ ａ１食作用は３０分間のインキュベーションの後のヒツジ赤血球の摂取％±Ｓ、 Ｄ、として測定される。

モルモット補体を加えた。

ｂ、９５％信頼水準におけるステニープントのｔ−テストにより評価すると、− Ｃ′に比べ有意に異る。

分割が起こらないであろうことを確認するためにＩｇＭ−枯乾マウス血清の血奨 を用いた（方法の欄参照）。

用いたタイターは血沈凝集反応及びコーム（Ｃｏｏｍｂ）の方法を用いて測定す ると３０００であった。腹腔及び肺臓からの細胞はＣ′なしのものよりもＣ′の 添加を伴う食作用においてより活性であったが、但しアセマンナンにより誘発さ れた腹腔細胞においてのみ統計的に有意であった。

最後に、アセマンナン食作用及び付着の効果を区別するために実験を行っな（表 ７）。

表　７ 細胞源５　予　備　処　理　食作用　付　着膜　腔　食　塩　水　５±８　６± 　４チオグリコレート１２±９２３±９゜ アセマンナン　１１±９１８±１０ｃ 牌　臓　食　塩　水　８±７　１４±１１チオグリコレート１４±６３６±ｌＯ 。

アセマンナン　１０±８２０±７゜ ａ、細胞混合物は７分間インキュベートされた。

ｂ、結果は食作用または付着を示す食細胞％±Ｓ、　Ｄ。

として示される。結果は用いた三つの動物について動物当たり２００の記録した 細胞を用いた一つの実験からのものである。

０．９５％信頼レベルでのステニープントのｔ−テストにより評価すると、食塩 水対照とは有意に異る。

この実験において５ＲＢＣに対する抗体が２０００のタイターで用いられた。し かし、実験は７分後に停止された。

腹腔及び肺臓からアセマンナンで誘発されたマクロファージは付着において食塩 水対照よりもより効果的であり、また以前に見られたようにチオグリコレートで 誘発されたグループより有効でない。

Ｃ０検　討 この結果は、アセマンナンが食作用を直接及び間接に刺激することを示す。結果 はまた、アセマンナンが抗体の介在する反応を通して非特異的に及び特異的にマ クロファージによる食作用を高めることを示す。これは、アセマンナンが食作用 に対して免疫特性を持つことを示している。

例　３ 抗ＨＩＶ剤としてのアセマンナンの実験室評価洗浄したＨ９／ＨＴＬＶ−ｍ８細 胞の等密度培養物を種々の濃度のＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物（アセマ ンナン）の存在又は非存在のもとて２日間培養した。次いで条件培養液を取り出 して０３細胞の培養物をこれで感染させるのに用いた。この培養液中の逆転写酵 素（ＲＴ）活性も測定した。Ｃ３培養物における感染はＨＩＶ　Ｐ２４抗原合成 のための間接免疫蛍光により調べた。

結果は表８にあげる。

表　８ ＣＡＲＲＩＳＹＮ　ＲＴ活性　感染性 Ｂ　ＣＡＲＲＩＳＹＮ　（商標）抽出物のたちなたまめマンＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ 　（商標）抽出物（アセマンナン）を直接のたちなたまめマンノシダーゼ阻害に よる抗マンノシダーゼ活性について評価した。たちなたまめマンノシダーゼ活性 は基質としてＰＮＰ−マンノースを用いて分析した。

スウエンソニンを陽性のコントロールとして評価した。

結果は表９にあげる。

表　９ ＣＡＲＲＩＳＹＮ　スウェンソニン　平　均　阻　害０　１．４０　０ ０．００１　１．４５　０ ０．０１　１．３５　４ ０．１　１．４０　０ １　１．４５　０ １０　１．５０　０ １００　１．５５　０ −　０．１　１．４０　０ −　０．２　１．１０　２１ −　０．５　０．７４　４７ −　１．０　０．４６５　８７ Ｃ，ヱ歪タＰ炙ゴづ」シ鉱乙工欠乙 ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物（アセマンナン）（７，８１３〜１０００ 　ｚ　／　ｍｔ　＞をＭＴ−２細胞についてのマイクロタイタ怒染アッセイによ って抗ＨＩ　Ｖ活性について評価したが、ＨＩＶ隔［ＨＴＬＶ−Ｉ［［を用いた 。細胞（細Ｂ（ｌｉ９） 胞防御）又はウィルス（ＨＩＶ不活化）を感染試験（チャレンジ）に先立ってＣ ＡＲＲＩＳＹＮ　（商標〉抽出物の存在のもとに４時間予備培養した。細胞毒性 試験にはウィルスをアッセイから除いた。

結果は表１０にあげる。

表　１０ 初期濃度 ＭＷ　Ｍ ＤＲＵＧ　ｌ：　細胞毒性　４０００．０００　Ｅ　Ｒ，ＲＤＲＵＧ　２：　細 胞防護　４０００．０００　Ｅ　Ｒ，ＦｉＤＲｔＪＧ　３：　不活化　４０００ ．０００　Ｅ　ＲＲＤ　ｒｕｇ稀釈度：　２０００ ファイル識別体：　ＣＡ、ＲＲ，ｌ５ＹＮ（商ｒｓ）抽出物４ｄ細胞コントロー ル　ウィルスの染料吸収率ＣＡＲＲＩＳＹＮの投ウィルスコントロール　（標準 ０．３８７域の％どして）　４量（ｇ／ｍｌ）　ＭＤＲＵＧ　Ｉ　Ｄ　Ｉ　Ｌ　 １　１４３．７６２％　＋／−３３，２４８％　４０００．０００　Ｅ　Ｒ，Ｒ ＤＲＵＧＩＤＩＬ２　１４７．８１３％　＋／−８，４６９％　５００．０００ 　ＥＲｒｌＤＲＵＧＩＤＩＬ３　１３３．５０６％　＋／−２０，９１５％　２ ５０．０００　Ｅ　Ｒ，ＲＤＲＵＧ　Ｉ　Ｄ　Ｉ　Ｌ４　１４０．３１５％　＋ ／−８，９４５％　１２５．０００　ＥＲＲＤＲ，ｔＪＧＩＤＩＬ５　１４２． ７２８％　＋／−６，０６０％　６２．５００　ＥＲＲＤＲＵＧＩＤＩＬ６　１ ４２．９８６％　＋／−８，５Ｈ％　３１．２５０　ＥＲＲＤＲＵＧＩＤＩＬ７ 　１５４．２７７％　＋／−５，６２１％　＋５．６２５　ＥＲＲＤＲＵＧＩＤ ＩＬ８　１５８．８４５％　＋／−６，４６７％　７．８＋３　ＥＲＲＤＲＵＧ ２ＤＩＬ１　４３．３５３％　＋／−９，８８３％　＋ＯＯ０，０００ＥＲＲＤ ＲＵＧ２Ｄ　Ｉ　Ｌ２　１５．８５９％　＋／−４，２０５％　５００．０００ 　ＥＲ，ＲＤＲＵＧ２Ｄ　Ｉ　Ｌ３　１２．０６６％　＋／−１，７６０％　２ ５０．０００　ＥＲ，Ｒ。

ＤＲＵＧ２ＤＩＬ４　＋２．９２Ｌ％　＋／　−６，１１５％　＋２５．ＯＯＯ ＥＲＲＤＲＵＧ２Ｄ　Ｉ　Ｌ５　１２．４＋ｉ％　十／−４，９８８％　６２． ５００　ＥＲ，ｒｉＤＲＵＧ２Ｄ　Ｉ　Ｌ６　１４．０４９％　＋／−２，２０ ０％　３４．２５０　ＥＲＲ。

ＤＲＵＧ２Ｄ　Ｉ　Ｌ７　１３．８７６％　十／−５，０１７％　＋５．６２５ 　ＥＲＲＤＲＵＧ２Ｄ　Ｉ　Ｌ８　１０．０８４％　＋／−２，６８８％　７． ８１３　ＥＲＲＤＲＵＧ３ＤＩＬ１　１．８９６％　＋／−２，＋６９％　１ｏ ｏｏ、ｏｏｏ　ＥＲ，ＲＤＲＵＧ３ＤＩＬ２　Ｎ、９８０％　＋／−３，５８７ ％　５００．０００　ＥＲＲＤＲＵＧ３ＤＩＬ３　９．９９８％　＋／−４，０ ９２％　２５０．０００　Ｅ　Ｒ，ＲＤＲＵＧ３ＤＩＬ４　４４．９９７％　＋ ／−３，８７９％　１２５．０００　ＥＲＲＤＲＵＧ３Ｄ　Ｉ　Ｌ５　１３．６ １８％　＋／−４，１８＋％　６２．５００　ＥＲＲＤＲ，ＵＧ３Ｄ　Ｉ　Ｌ６ 　＋２．０６６％　＋／−４，４０７％　３＋、２５０　ＥＲＲＤＲＵＧ３Ｄ　 Ｉ　Ｌ７　２１．７１９％　＋／−２，２９９％　＋５．６２５　ＥＲＲＤＲ， ＵＧ３Ｄ　Ｉ　Ｌ８　１６，５４８％　＋／−３，８６２％　７．８＋３　ＥＲ ＲＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物（アセマンナン）はＭＴ−２ひとリンパ 球に対して毒性はなかったが、細胞の増殖促進剤であった。ウィルスの染料吸収 値はＣＡＲＲｌ５ＹＮ（商標）抽出物（アセマンナン）の全ての濃度においてＣ ＡＲＲＩ　ＳＹＮを含まない対照群の１４０　ｕｅｄ　１５０％であった。１０ ００ｇ／ｍｌにおいてのみなんらがの抗ＨＩＶ活性が得られた（すなわち細胞の ４３％が防護された）。

Ｄ、　ＨＩＶ　ＧＰ−１２０（７）分子量に対するＣＡＲＲＩ　５ＹＮ（商標） 抽出物の影響 ３Ｈ−マンノースの使用とＳＤＳ　−ＰＡＧＥゲルのオートグラフィーによる分 析とを用いてＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物（アセマンナン）をＨＩＶ　 ＧＰ−１２０の分子量に対するその影響によって抗マンノシダーゼ活性について 評価した。

洗浄したＨ９／Ｈｒｔｖ−ｍＢ細胞を、ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（１ｍｇ／ｍｌ） 　及ヒ（２−Ｈ３）　Ｄ　−マ＞）−ス（３０Ｃ１／ミリモル、５０Ｃ／ｍｌ） の存在のもとに２日間培養した。この条件培養液から次に高速遠心分離及び濾過 （０，４５ｍ）によって細胞を除去した。ウィルスを遠心分離（１８０００ｒｐ ｍ、ＪＡ−２０ｏ−９，４時間、２０℃）　ｌ：ｃｌ：ッで集め、１ミリモルの フェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）を含む燐酸塩緩衝塩水（Ｐ ＢＳ）で一度洗浄し、そして０．２ｍｌのＰＢＳ−ＰＭＳＦ中に懸濁させた。次 にこの可溶化したウィルスを適当な分子量のマーカーを有する１０％アシルアミ ド中で還元条件のもとに電気泳動し、そしてフルオログラフィーのために処理し た。対照群のウィルスはＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）を存在させなかったこと を除いて同じ方法で合成し、処理した。

アセマンナンはグリコシレージョン（ＧＰ−１２０生産）を阻害しなかったけれ ども多数のより大きな分子回帯域及びより小さな分子世帯域の出現をもたらした 。アセマンナンは第６図に示すようにグリコシレージョン（ＧＰ−１２０ＨＩＶ の被覆グリコプロティン）を劇的に変化させた。

ウィルス被覆蛋白（ＧＰ−１２０）は存在ｊ−ていたけれども、それらの高級及 び低級グリコプロティンは試験管中でＴ４受容体を奪い合う生存不能な欠陥ウィ ルスをもたらすのを証明することができた。これはＴ４受容体を非感染性ウィル スグリコプロティンによってブロックすることによりＴ４感染の割合を低下させ るであろう。

この例はＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物で刺激された食細胞により誘導さ れる非特異的腫瘍死亡の可能性を調べる。

Ａ、操作 ＣＡＲＲＩＳＹＮ　（商標）抽出物ポリマー；ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽 出物（アセマンナン）を乾燥形態で維持した。各実験に要した量を秤量し、そし て６００Ｗの出力で２分間マイクロウェーブ照射した。この物質を滅菌した遠心 分離チューブ（１５ｍｌ）中に移し、そして更に１分間マイクロウェーブ照射し た。この物質を）ＩａｎｋｓＢａｌａｎｃｅｄ　５ａｌｔ溶液（ＨＢＳＳ）中で 必要な濃度に稀釈した。若干の実験においてはこの物質はオートクレーブ加熱滅 菌したが、活性に明瞭な損失は無かった。

細　胞： Ｈａｒｌａｎ／Ｓｐｒａｇｕｅ　Ｄｅｗｌｅｙから得たＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ の雌のねずみの腹膜腔からマクロファージを採集した。この採集の６日前にそれ ら動物の若干の群には腹腔内注入でチオグリコレートブイヨン（２５ｍｇ／ｋｇ ）か又は、ＣＡＲＲＩ　５ＹＮ（商標）抽出物（２５ｍｇ／ｋｇ）かを注射した 。追加的な対照群として塩水−刺激した細胞も用いた。採集した細胞をＨＢＳＳ 中で３回洗浄し、そして５×１０６個／ｍｌの細胞濃度にＲＰＭＩ−１８４０中 で稀釈した。

ターゲット細胞： Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　（Ｃ＃ 　Ｈ／　Ｈｅ　ＮＦｉｂｒｏ　Ｓａｒｃｏｍａ　Ｌ９２９）からターゲット細胞 を得てこれを継代により維持した。標識化は、ＲＰＭＩ−１６４０中の１０７個 の細胞を含む細胞懸濁液１ｍｌと混合した１５０ｍ　Ｃｉのクロム５１　（Ｃｒ ５１）により行なった。細胞を１時間培養し、ＲＰＭ　Ｉ　−１８４０で３回洗 浄し、そして５×１０４個／ｍｌの最終細胞濃度に調節した。

分　析： エフェクタ細胞の一定ｆ！（１００個／Ｌ）を平底マイクロタイタブレートの中 に入れた。Ｃｒ５１−標識した細胞を実験点画たり最低３つの複製とともに加え た。この試験プレートを３７°Ｃにおいて７％Ｃｏ２　（以前は５％Ｃｏ２）中 テ２０時間培養しな。２５０Ｇで１５分間この板を遠心分離した後に上澄液（１ ００Ｌ　＞を得た。放射線量をＰａＣｋａｒｄガンマカウンタで計測した。対照 群は胸腺リンパ球よりなるものであった。細胞毒性％（％ＣＴ）は次式によって めな：表１１に最初の各実験の結果を示す。

表　１１ 生イ本中チオグツ”　−ト２８００±３００　６．６刺激した 試験管中チオグリ″ニアＬ／−ト　２９５０±２８０　７．０刺激した 刺激しなかった　２８７０±４００　８．８生体中ＣＡＲＲＩＳＹＮ　３１００ ±３６０　７．４刺激した 試験管中ＣＡＲＲＩＳＹＮ　２１０００±９００　５０．０刺激した 生イ本中及び試験管中　２０５００±１１００　４８．８ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ刺 激した Ｃｒ５１ターゲツト細胞とともに培養したチオグリコレート刺激したマクロファ ージはＣｒ５１放射線を平均２８００ｃｐｍの値で放射したが、一方、ＣＡＲＲ Ｉ　ＳＹＮ　（商標）抽出物で標識した細胞は平均３１００ｃｐｍの放射能を放 出した。これら両群の間には統計的な差異は存在しなかった。

刺激されなかったマクロファージは２８００ｃｐｍの程度の放射能を放出した。

しかしながらＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物で試験管中で刺激されたマク ロファージは２１０００ｃｐｍのｃｒ５１放射能放出を示した。このことはＣＡ ＲＲＩ　５ＹＮ（商標）抽出物が長く持続する細胞分解作用を誘起しないと言う こと、及びその活性化が組織培養において比較的短時間で現われ得るということ の二つの明らかな事実を示している。細胞毒性％はｃｐｍの値の経過と平行して いる。

表１２に時間的な細胞毒性分析についての引き続く実験を示す。

表　１２ 時間　刺　激　ａｐｔ″　細胞毒性 チオグリコレ−１−７８０１，９ ３ＣＡＲＲＩＳＹＮ抽出物　１４００　３．５チオグリコレート　８００　２． ０ ６ＣＡＲＲＩＳＹＮ抽出物　１８０００　４８．０チオグリコレート　１２００ 　３．０ ９　ＣＡＲＲＩＳＹＮ抽出物　２２６００　５７．９チオグリコレート　２２０ ０　５．８ １２ＣＡＲＲＩＳＹＮ抽出物　２２５００　５７．６チオグリコレート　２３０ ０　５．８ １５ＣＡＲＲＩＳＹＮ抽出物　２３０００　５８．９チオグリコレート２１１０ ０　５゜８ ａ）：注射後の時間（ｈｒ） ｂ）；対照群細胞ｃｐｍ　＝３９０００ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物の 細胞毒性作用は刺激の後６時間以内に開始し、そして９時間後までにその最大値 まで上昇した。この活性化の機構はまだ検討されていない。

この例において示されたデータはＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物が癌の非 特異的治療における重要な役割を有するかもしれないことを示している。

ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（、商標）抽出物の鳥類肉腫に対する強力な有効性のスク リーニング ２頭の馬の３つの類肉腫をＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物で静脈内及び疾 患部内注入により処理した。この実験の目的は、ＣＡＲＲＩＳＹＮ（商標）抽出 物が鳥類肉腫に対する効果的な処理剤であるかどうかを判定１−１また患者に有 害反応があるかどうかを調べることである。馬１については１個の類肉腫が完全 に分解したが、第２の類肉腫は大きさが減少しなかった。第３の結節性類肉腫は 処理の間に大きくなった。馬２についてはただ１つの類肉腫のみが完全に分解し た。

これらの結果はＣＡＲＲＩＳＹＮ　（商標）抽出物が鳥類肉腫の処置に有用であ るであろうことを示唆している。

３個の疑似疾患を有する２頭の馬を購入した。それらの疾患を写真に取り、測定 し、そして組織検査により類肉腫であることを確認した。

馬１： 第１日：右後脚の上の２個の疾患のそれぞれを直接注射（２０ｇａ、針）によっ て１０ｍ１の食塩水中に稀釈した（疾患１）５０ｍｇのＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（ 商標）抽出物及び５ｍｌの食塩水中に稀釈した（疾患２）５０ｍｇのＣＡＲＲＩ ＳＹＮ　（商標）抽出物で処理した。また７　、　５ｍｌの食塩水中に稀釈した ２５ｍｇのＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物を静脈内投与した。

第７日：疾患１（上側疾患）を１０ｍ１の食塩水中に稀釈した５０ｍｇのＣＡＲ ＲＩ　ＳＹＮ　（商標）抽出物で処理した（１８ｇａ。

針）。疾患２は７．５ｍｌの食塩水中に稀釈した２５ｍｇの抽出物で処理した。

また１０ｍ１の食塩水中に５０ｍｇ溶解したものを静脈内投与した。

第１４日：疾患１を１０ｍ１の食塩水中に５０ｍｇ溶解した溶液で処理したが、 一方疾患２は５ｍｌの食塩水中に２５ｍｇを溶解したもので処理した。また２５ ｍ１の食塩水中に７５ｍｇを溶解したものを静脈内投与した。

第２１日：疾患１を１０ｍ１の食塩水中の５０ｍｇの溶液で処置し、そして疾患 ２を１０ｍ１の食塩水中に２５ｍｇを溶解した溶液で処理した。また２５ｍ１の 食塩水中に１００ｍｇを溶解した溶液を静脈内投与した。

第２９日：疾患１を２１日口のそれと同様に処置したが、局部的な膨出のために 疾患２を直接は処置しなかった。２５ｍ１の食塩水中に１００ｍｇを溶解したも のを静脈内投与した。

第４２日目疾患１は直接は処理しなかった。疾患２は１０ｍ１の食塩水中に２５ ＋ｌ１ｇを溶解したもので処理した。５０ｍ１の食塩水中に１００ｍｇを溶解し たものを静脈内投与した。

第５７日：馬１を安楽死させ、そして疾患１の部位から幾つかの組織試料を採取 し、疾患２からは鼠径部リンパ節及び処置の間に発展してしまった右肩の結節疾 患を取り出した。

第１日；右胸下部の疾患を、３０ｍ１の食塩水中に稀釈した５０ｍｇのＣＡＲＲ Ｉ　ＳＹＮ　（商標）抽出物で処理した。その半分を皮下注射（Ｓ／Ｑ）Ｌ、残 りの半分を疾患内に注射した。

それぞれ第６．１６．２４．３０．４９．５６．６３．７０及び第７７日目に馬 ２に６０〜１２０　ｍｌの食塩水で稀釈したＣ　Ａ、　ＲＲＩ　Ｓ　ＹＮ（商標 ）抽出物１００＋ｎｇを投与し、その際稀釈剤の量は溶液を透明にするための必 要に応じて変えた。

それぞれ第１０５．１１３及び１２０口目日目の腫瘍を５ｍｌの食塩水中に稀釈 した２５ｍ１のＣＡＲＲＩＳＹＮ　（商標）抽出物で疾患内注射及びＳ／Ｑ注射 によりその疾患の基部において処置した。追加的に７５ｍｇを静脈内投与した。

第１日：疾患１は２．５ｃｍ　（水平長さ）　Ｘ　２．５ｃｍ　（垂直高さ）Ｘ １ｃｍ（厚さ）の大きさであった。この疾患の分解は次のように追跡することが できた。

馬の疾患１ にち　測　定　値 １　２．５ａｎ　Ｘ　２．５　ｃｎ　Ｘ　１ａｕ７　２．５　Ｘｌ、７５　Ｘｌ １４　２．０ｘｌ　ｘｉ ２１　２、Ｏｘ１　ｘ ２９　２、ＯＸＩ　Ｘ扁平で乾燥 ４２　全てが殆ど治癒状態 ５４　完全治癒 疾患２は第１日日に２　ａｎ　Ｘ　２　ｃｍ　Ｘ　１　ａｎの大きさであったが これには大きな変化はなかった。疾患２の結果を下記に示す。

馬１の疾患２ 日にち　測 １　２ａｎＸ　２ａｎＸ　１ａｗ ７　２Ｘ２　１ １４　２Ｘ２　１ ２１　２ｘ２　１ ２９２ｘ２１膝全体がまだ腫上がっ ており疼痛状態 ４２　大きさが僅かに低下したがなお腫れており、痛そうには見えない。

５４　大きさは同じ、膝の腫れは６５％に低下結果： 第１日二この疾患は５　ｃｍ　Ｘ　３．５ｃｍ　Ｘ　２．５ｃｍの大きさであっ て２．５ｃｍの肉径の着いた基部を有していた。完全分解までの変化を次に示す 。

馬２の疾患１ 日にち　測　定　値 １　５　ｃｍＸ３．５　ｃｍＸ　２．５ｃｍ６　変化なし １６　変化なし、より肉芽腫的 ２４　５　ｃｍＸ３　ｃｍＸ　２．５ｃｍ３０　肉芽腫性低下 ４９　４　ｃｍＸ３　ｃｍＸ　２　ａｍ５６　４　ｃｍＸ３　ｃｍＸ　２　ｃｍ ６３　３．８ｃｍＸ３　ｃｍＸ　２　ｃｍ７０　３．７ｃｍＸ２．８　ｃｍＸ　 １．８ｃｍ７７　２．７ｃｍＸ２　ｃｍＸ　１．３ｃｍ１０５　２．５ｃｍＸ２ 　ｃｍＸ　１．３ｃｍ１１３　３．５ｃｍ　Ｘ　２．２５ｃｍ　Ｘ　１．５ｃｍ １２０　２．５ｃｍＸ２．４　ｃｍＸ　Ｏ，６ｃｍ１７７　疾患完全分解 静脈内投与の後に心拍数に変化なく、そして発汗、筋肉の繊維束けいれん又は明 らかな苦痛の兆候がなかった。馬１についてのみ僅かな呼吸深度の上昇が見られ た。局部的に馬１は温和な性質の炎症性蜂巣炎を疾患１のところに、しそで疾患 ２のところでは第２９日日にこの疾患にスケジュール通り注射されなかった程の 急性の疼痛型のそれを示した。疾患２は繊維質であってそれへの注射がより困難 であり、従ってＳ／Ｑにおいてより多くの漏れがあった。

これが疾患２について効果がなかった理由と考えられる馬２は蜂巣炎を示さなか った。

結節性類肉腫が処置の間に広がったという事実は、静脈内投与が類肉腫を炎症肉 処理に対して感受性にするかもしれないけれども、ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮ　（商標 ）抽出物の主な効果が全身反応よりは局部的な組織の反応であるという推測に導 く。

馬２における疾患が分解した正確な日付は、観察者が６０日間の病気にかかった ために第１１３日から第１７７日までの間離れていたために確認できない。第５ ６日までの腫瘍の大きさに大きな減少がなかったことから判断するならば、毎週 の静脈内投与だけでは馬２の類肉腫に対しては僅かな効果しかなかったもののよ うである。

実施例　５ 本実施例は、ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭｔ［Ｉｌｌ出物（アセマンナン）（ａｃｅ ｍａｎｎａｎ）　）のアロ、（同種異系）抗原に対する免疫応答を増強する能力 を試験するとともに、潜在的な増強が単球衝動（ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｄｒｉｖｅ ｎ）現象かどうかを試験するために試みられた。ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物は 、混合リンパ球培養（ＭＬＣ）における同系抗原に対するリンパ球の応答を増強 しなかったが、用量応答様式におけるアロ抗原性応答を重要に増強した（２．６ ＸｌＯ−２，８ＸＩＯ’）。

ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物の効果は、特異的応答であり、ｉｎ　ｖｉｖｏで達 成できるＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物の１ｎｖ１ｔｒｏの濃度と一致することが 示された。別々の一連の混合実験は、ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物の単球とのイ ンキュベーションが、単球衝動（ｍｏｎｏｃｙｔｅ−ｄｒｉｖｅｎ）シグナルが レクチンに対するＴ細胞の応答を増強することを可能にすることを示した。ＣＡ ＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物のアセマンナン（ａｃｅｍａｎｎａｎ）は、アロエφベ ラ（ｖｅｒａ）植物の活性成分であり、アロ抗原に対するリンパ球の応答を増加 させたという点で重要な免疫増強剤であると結論された。この機構は、アロ抗原 の保護の下に、単球のＩΩ−■放出の増強を伴うことが示唆される。この機構は 、ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物が実験動物及びヒトにおけるウィルス感染を抑制 する能力を一部分説明するであろう。

本実施例は、混合リンパ球培養に供されたアロ抗原に対する単球−Ｔ−リンパ球 細胞間相互作用のモデルにおける免疫増強剤としてのＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出 物の影響を直接に評価するために試みられた。このモデルは、ＣＡＲＲＩＳＹＮ ＴＭの、免疫学的に適切なモデルにおいて更なる単球−マクロファージ機能を刺 激する能力を試験すＡ、材料及び方法 ｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ ｙ　ｏｆ　ＴｅｘａｓＳｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｅ ｒによって示された研究の後援で、正常で、知らされかつ承諾したヒト志願者の 末梢血液から得られた。末梢血液は、ハンクス（Ｈａｎｋｓ）の平衡に従ってフ ィコール−ハイバック（ｆｉｃｏｌ−ｈｙｐａｑｕｃ）勾配の上部に重ねた。主 要組織適合性が異なると知られている被検者（ｓｕｂｊｅｃｔｓ）からの細胞（ ｃｅｌｌｓ）は、陽性の混合リンパ球反応を確かめるために各試験日に得た。特 異的な実験のために、より注意して特徴付けられた、単核白血球プールに存在す る、細胞の系統を単離した。１９２８球は、Ｊｏｕｒｎａ！　ｏｆ　Ｃｌ１ｎｉ ｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、　５９：　３３８−３４４（１９７７） 記載の標準ナイロン繊維分離技術によって単離された。これによって、その開示 内容は参照によりこの中に明確に取り入れられている。ナイロン溶出液細胞は、 約９０％純粋なＴ細胞を含んでいた。Ｂリンパ球及び単球−マクロファージは、 優先的にカラムに接着する。接着した個体群は、プランジャーを用いて強制的に カラムに媒質を押し通すことによって除去された。単球（マクロファージ）を濃 縮するためにＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１１ｎｆｃａ　ＩｎｖｅｓｔｉｇａＨｏ ｎ、　５９：　３３８−３４４（１９７７）記載のガラス接着方法を利用して９ ５％を超えて純粋な個体群を得た。

物は、ＲＰＭ１４６４０培地中の０．５％（ｗ／ｖ）溶液を調製１−１更に次の 作業濃度＋２．６　Ｘ　１０−７Ｍ、２．６Ｘ　１０−８Ｍ及び２．６Ｘ１０− ９Ｍに希釈することによりこれらの研究において試験した。

３、混合リンパ球培養（ＭＬＣ） 一方向性ＭＬＣは、マイクロタイター、平底組織培養プレー）・内で始めた（マ サチューセッツ州ケンブリッジ２Ｃｏｓｔ、ａｒ　Ｇｏ、）　ｏ上述のフィコー ル−ハイパツク（ｆｉｃｏｌ−ｈｙｐａｑｕｅ）密度勾配技術により単離された 単核細胞は、セシウム源（カナダ国オンタリオ州、　Ｇａｍｍａｃｅｌｌ、　Ａ ｔｏｍｉｃＥｎｅｒｇｙ　ｏｆ　Ｃａｎａｄａ）において３０分間２０００ラド に被ばく後、刺激要因細胞として用をなした。同様に単離されたレスポンダ−（ ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ）細胞、及び刺激要因を１．３　ＸＩＯ”細胞／ｍＬに調整 した。各ウェルに、２５ＬのＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ又は培地（対照）、１０％ウ シ胎児血清で補足された２５ＬのＲＰＭＩ−１６４０及び７５Ｌの各細胞個体群 を加えた。細胞を５％Ｃ０３＝９５％空気中、３７°Ｃで６日間インキュベート した。培養は、２５Ｌの３Ｈ−チミジン（ＩＣ，ｉ／ウェル）で４時間瞬間標識 （ｐｕｌｓｅ）され、次いで細胞を取り、数えた。導入認識（ａｆｆｅｒｃｎｔ 　ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ）及びＭＨＣに対する応答についてのＣＡＲＲＩＳＹ Ｎ”抽出物の特異性を試験するために、細胞を３Ｈ−チミジンで瞬間標識（ｐｕ ｌｓｅ）するちょうど２０分前に加えられた前記作用物（ａｇｅｎｔ）を用いて 更なる一方向性ＭＬＣを始めた。

４、単球−Ｔ細胞相互作用　ルイス雌性ラット肺臓を無菌スチール製メツシュを 通してＲＰＭＩ−１６４０培地へ扼き裂いた（ｔｅａｓｅ）。単核白血球を上述 したようにフィコール−ハイパツク（ｆｉｃｏｌ　−ｈｙｐａｑｕｅ）密度勾配 の界面から集めた。ガラスベトリ皿上の濃縮により得られ、１０６／ｍＬの最終 濃度に調整された単球を、２ｍＬの全容量中のＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物又は 培地（対照）の用量を変えて、３７℃で２４時間インキュベートした。単球を取 り、新鮮な培地で広く洗浄し、次いで同系Ｔリンパ球と、Ｔ細胞１０：単球１の 割合で、植物レクチン・フィトヘマグルチニン（ミシガン州デトロイト、　Ｄｉ ｒｃｏ）　ｌ：（１：　１００））を用いて、３７℃で４８時時間項養（ｃｏ− ｃｕｌｔｕｒｅ）　した。細胞をＭＡＳＨＩＩ（メリーランド州ウォーカースピ ル。

Ｗｈｌｔｔａｋｅｒ、　Ｍ、　Ａ、　Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）上に取り、フッ 素（ｆｌｕｏｒ）内に置き、シンチレーション計数器（イリノイ州シカゴ、　Ｂ ｅｃｋｍａｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で数えた。１９２８球をＣＡＲＲＩ ＳＹＮＴＭ抽比物とともにインキュベートし、次いで、洗浄し、新たに調製した １９２８球と再び１０：１で、ＰＨＡ−Ｐとともに共培養（ｃｏ　−ｃｕｌｔｕ ｒｅ）することにより、対照実験を行なった。

抗原に対するＴ細胞、の応答について統計学的に重要な効果はなかった。混合リ ンパ球培養（ＭＬＣ）の初めに作用物（ａｇｅｎｔ）を加えると、同系間刺激を 受けた細胞はトリチェージョンされたチミジンを、記述した用量で試験試薬（ｔ ｅｓｔ　ｒｅａｇｅｎｔ）の存在又は不存在下で同等に取り込んだ（用量につい ての第７図参照）。経口的ＣＡＲＲＩ　５ＹＮＴ−出物の不存在下で、これらの ＭＬＣは、４時間の瞬間標識（ｐｕｌｓｅ）の終りに２６１６±１１０９９ｃｐ のトリチェージョンされたチミジンを取り込んでいた。加えられた作用物（ａｇ ｅｎｔ）の用量は増加傾向にあったけれども（２，６Ｘ　１０−９Ｍで３２８１ ±１３５５．２．６Ｘ　１０−”Ｍで３７４２±１６７０、及び２．６Ｘ　１０ ’Ｍで３８２８±１９７８）　、ＤＮＡへの同位体の取り込み率には統計学的に 有意差はなかった。

ＭＬＣにおける自己応答（ａｕｔ、ｏｒｅｓｐｏｎｓｅ）に対するＣＡＲＲＩＳ ＹＮ”抽出物の効果の欠如と対照的に、同様の免疫学的分析で、作用物（ａｇｅ ｎｔ）はアロ応答に対して効果があった（第７図）。先ず第一に、ＣＡＲＲＩＳ ＹＮＴＭ抽出物は、混合リンパ球培養においてクラス２のアロ抗原の差異を認識 し応答するリンパ球の能力を妨げなかった；これは、同系培養を、最小濃度の薬 剤の存在下における同種異系間応答と比較すれば明らかである。第二に、２．６ ×１０’Ｍの最大用量で処理された培養が薬剤を加えていない培養に比し約６０ ％の増加を示すように、用量応答に関連する、ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物によ るアロ応答の増強があった。同種異系間刺激に対するＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出 物の効果は、結果が同系間応答の機能としてアロ応答のＣｐ［ｌｌとしてプロッ トされている第８図に非常に明らかに示されている。同種異系間応答の増強が薬 剤なしの状態に関して試験された各用量のＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物で意味が あると示されていることから、用量応答関係は非常に明確に証明されている。

ＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物がリンパ球アロ応答に対する特異的効果又はトリチ ェージョンされたチミジン取り込みに対する非特異的効果を示すかどうかを確か めるために、７日の混合リンパ球培養ＭＬＣの終り、培養へのトレーサーの添加 ２０分前に試薬を加えた。第９図に示すことができるように、ＣＡＲＲＩ　５Ｙ ＮＴ−出物はＭＬＣの終りに瞬間標識（ｐｕｌｓｅ）としてこのように加えると 、効果がなかった。これらのデータは、ＭＬＣにおけるリン／・ζ系応答の増強 に対するＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭｔＩＩＩ出物の効果の特異性を裏付ける。

２、ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭ抽出物及び単球−Ｔ細胞協力作用ＣＡＲＲＩＳＹＮ ＴＭ抽出物は、アロ抗原に応答する単球を直接刺激し、シグナル（ｓｉｇｎａｌ 　（ｓ＞）を与え、抗原及び／又は分裂促進因子に対するリンパ系応答を増強す るという推定を試験するために、精製した単球の個体群を種々の用量の薬剤と２ ４時間インキュベートした。インキュベーションの終りに、細胞を広く洗浄し、 次いでＴリンノく球と１０：１の割合で共培養（ｃｏ　−ｃｕｌｔｕｒｅ）　ｔ 、、末梢血液にみられる自然割合（ｎａｔｕｒａｌ　ｒａｔｉｏ）をシミュレー ションした。

共培養（ｃｏ　−ｃｕｌｔｕｒｅ）　した細胞をフィトヘマグルチニンで刺激し た。第１０図に示すことができるように、予めＣＡＲＲＩＳＹＮＴＭ抽出物とイ ンキュベートした単球との共培養（ｃｏ　−ｃｕｌｔｕｒｅ）は、用量関連様式 において分裂促進因子に対する応答を有意に増加させた。

Ｃ９議論 本例は、アセマンナンが重大な臨床学的結果をもたらす免疫刺激剤として機能す る可能性を調べた。

キャリジノ　（ＣＡＲＲＩ　ＳＹＮＴＭ）抽出物は、動物並、ＴＭ びにヒトに重大な疾病を誘起するＤＮＡおよびレトロウィルス感染を抑制し得る ものと考えられている。例えば、動物モデルにおいて、ギヤ９２２フ 軽減した。

キャリシンＴＭｔ［Ｉｌ出物が江　呉１匹およびＵ　■些で単純庖疹■ウィルス 、ハシカウイルスおよび恐ら（ＨＩＶに対して有効であり得るというもう一つの 証拠がある。免疫機構が食細胞および抗原の心性認識に寄与する細胞両者として の単球の増強に関連するかも知れない証拠がある。研究によれば、一方で単球の 食細胞性の直接的増進が示され、かつ他方でこの重要な細胞の絶対数の増加が示 された。

ギヤ９２２フ 性化単球による同化を増進するという概念を支持する顕著な証拠がある。

本例で述べた研究は、特にキャリシンＴＭＩｔｈ出物が免疫増強剤であり得るそ の機序を調べるために行われた。このＭＬＣは、免疫担当細胞がウィルスの認識 および応答に必要な様々な抗原に対する応答に関与する、その様式の扛ｖｉｖｏ モデルである。この反応において、重要な単球−丁−リンパ球相互作用があり、 該相互作用がアロ抗１東に対する応答を生ずる。この薬剤の、免疫賦活剤として 機能する可能性を調べるために選択されたものがこのモデルである。

キャリシンＴＭｔｌＩＩ出物は、従ってＭＬＣにおけるアロ抗原応答の重要なエ ンハンサ−である。投与量応答相関があり、調べられた基準の約６０％を越える 最大の投与量での増進がみられる。このことは、統計的に有意であるばかりか、 生物学的にも有意なアロ抗原に対する応答の増大を示し、かつ該薬剤がウィルス 攻撃に対する生体の助けとなり得る一つの手段として機能し得る。このギヤ９２ ２フ用はアロ抗原性刺激に特異的であることが示された。但し、この薬剤は、薬 剤がＭＬＣの結論として添加された場合には、自己（同系ＭＬＣ）に対する基本 的応答も、トレーサＤＮＡプリカーサ、即ちトリチウム標識チミジンの非特異的 取込みも増強しなかった。

第２の一連の実験では、単球−Ｔ−リンパ球相互作用が少なくとも部分的に混合 リンパ球培養物中での高められたアロ応答に応答し得るという仮説を調べた。こ の一連の実験では、ギヤ９２２フ され、その後処理しかつ十分に洗浄した単球は新たに調製した同系Ｔーリンパ球 と混合された。該Ｔーリンパ球は薬剤に曝露されておらず、かつ曝露されてはな らない。これら実験は、ポリクｄーナルマイトジェンフィトへマグルチニンに対 するＴ−リンパ球応答の増進を立証しており、その大きさは、投与量応答相関の ベースラインの約５５％上方の、ＭＬＣについて以前みられた応答に等しいもの であった。

本研究でテストされ、ＭＬＣで有効であった最低投与量はこの単球の実験では何 の効果も示さなかった。このしきい投与量は調べられた２つのモデル、即ちマイ トジェンに対するポリクローナル応答およびＭＬＣにおけるアロ抗原性応答の間 で異っていることは驚くには及ばない。また、この単球実験はギヤ９２２フ ストであることもわかった。というのは、これがＴ細胞に対し処理型細胞、即ち 単球を与え、その結果薬剤のない場合に免疫刺激を示すからである。このアロ抗 原性応答は完全に、もしくは大部分インタロイキンＩ（ＩＩ−１）のキャリシン ＴＭｍ出物−増強単球産生によるものと思われる一方で、レッサーボリクローナ ルマイトジエンー増強応答は免疫刺激アッセイの結果であり、夫々キャリシンＴ Ｍ抽出物に対して異るしきい応答をもつ。

これらの実験で使用したギヤ９２２フ 臨床的に適切なものである。選択された投与量範囲は、薬剤が細胞外水中に分配 された場合に達成されると思われ、かつ経口投与された投与量の１／３の割合で 吸収されるギヤ９２２フ た薬理研究に基く）を包含するように正確に選択された。

ヒトにおいて達成される実際の濃度はこの範囲内にあることが示され、このこと は更に臨床的実際のこれら研究の有力な有意性を支持している。

キャリシン１Ｈ抽出物（アセマンナン）は、単球をして単球起源の信号を発せし め、結果としてレクチンに対するＴ４細胞を増強することがこれら実験によって 示された。

アセマンナンは混合リンパ球培養物中の同系抗原（ＭＬＣ＞に対するリンパ球応 答を増進しなかったが、投与量相関的にＭＬＣアロ抗原性応答を増大した。この 応答は、ｉｎ社籾で達成し得るアセマンナン濃度における、アセマンナン特異的 応答であることがわかった。

この実験的証拠は、アセマンナンがアロ抗原に対するリンパ球応答を増大すると いう点で生物学的応答修飾因子であり、かつ免疫エンハンサであることを立証し ている。

作用の提示された機序は単球を刺激して１．Ｑ−１を遊離させることを含み、ア セマンナンの存在下で■ρ−１が単球培養物から遊離させることが示された。単 球のアセマンナン刺激の薬理作用は動物並びにヒトにおけるウィルス感染に対す るアセマンナン活性を説明できる。

製品を得るに要する最終 ブレンド用の原料の量 抽出物粉末；ＵＳＰＮｏ、４，７３５，９３５＞　１２５　１２５０ｇ（２）ラ クトースＵＳ　Ｐ　２４９．５　２４９５ｇ（３）エーロシルＴ″３８０（コロ イド状　３．６　３６ｇシリコーン酸化物ＮＦ） ３８０ｍｇ　３８００　ｇ Ａ、カプセル剤混合物の製造 調製場所にあらゆる外来不純物がないがどうが検査する。

作業者は無菌条件を維持しなければならず、かつヘアーネット、ゴム手袋および ダストマスク（開放状の製品を及う場合）を身に付けることが好ましい。標準的 なホバートミキサ（Ｉｌｏｂａｒｔ　Ｍｉｘｅｒ）　（ホバート社、オハイオ州 、モデルＮｏ、Ｄ３００）　（３０クオート容量をもち、“Ｂ”型ビータブレー ドを備えている）を混合速度に設定する。原料を検査し、秤量した後、ミキサに は初め以下のよう充填する。成分（３）　（７）　ニー　ｏ　シル”３８０　Ｎ Ｆ　Ｉ：デグッサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）社、ニューシャーシー州テターボｏ　（Ｔ ｅｔｔｅｒｂｏｒｏ）　）を＃１２ステンレススチール製手動式スクリーンを通 して分級しつつ成分（２）のラクトースドラムに入れる。このエーロシル３８０ 酸化珪素は該ドラム内でスコップで混合して、該ラクトースＵＳＰＣ？ッケッソ ン（ＭｃＫｅｓｓｏｎ）社、カリフォルニア州バークレイ〕中にエーロシルを分 散させる。作業者はこのラクトース／エーロシル混合物の１／２をホバートＴＭ ミキサに加える。次に、作業者は成分（１）のキャリシン７Ｍ抽出物を＃１２ス テンレススチールスクリーンで分級し、これをホバートミキサに装入する。次に 、作業者はこの篩別した材料に、残り半分の該ラクト−ス／エーロシル混合物を 加える。次いで、この篩別した材料を１０分間混合する。

次に、作業者は成分（４）のステアリン酸カルシウムＮＦ〔マリンクロット（Ｍ ａｌｌｉ口ｃｋｒｏｄｔ）社、ミズジー州セントルイス〕を＃１２ステンレスス チール手動式スクリーンに通し、これをホバートミキサに装入する。更に３分間 撹拌した後に得られる混合物は混合粉末である。これを、次いで清浄な二重−多 層ライニング容器に放圧する。次いで、作業者は重量を記録し、この混合物を最 終的なプ１／ンドのために保存する。次いで、成分（ＤのキャリシンＴＭ粉末を 加え、更にこの最終ブレンドを清浄な二重多層ライニング容器に移す。最終ブレ ンドを含む各容器の重量を記録する。

この材料をカプセル化現場に送る。

Ｂ、カプセル充填 このカプセル化現場は予めあらゆる外来不純物につき検査される。作業者は無菌 条件下に維持されなければならず、かつ好ましくはヘアーネット、ゴム手袋およ びダストマスク（開放状態の製品を扱う場合）を身に付けるべきである。モデル ８カプセルＴＭ（Ｃａｐｓｕｌｅ”）カプセル充填機を０．６０−セット（ｒｏ ｗ　５ｅｔ）に設定する。この機械のオーガを粉末供給ホッパに取付ける。回転 台の速度を調節して、指定の正味カプセル充填重量を設定する。この機械の粉末 供給ホッパを粉末（最終ブレンド）の全体の３／４となるように維持した。真空 度およびび空気圧を＃０ポジロック（Ｐｏｓｔ　１ｏｋ）カプセルサイズ（不透 明白色ＱＸ）［エランコ（Ｅｌａｎｃｏ）　、インディアナ州インディアナポリ ス〕に調節する。カプセルの正味全重量を検査する。カプセルシェル使用に応じ てカプセル重量を記録する。

Ｃ，カプセル研磨（仕上げ） この処方領域を不純物につき検査する。作業者は無菌状態を保つべきであり、か つ好ま１−＜はヘアーネッ）・、ゴム手袋および防塵マスク（開放状態の製品を 扱う場合）を身に付けるべきである。カプセル研磨機〔ペンウォルト社のシャー ベルズーストークス部（Ｓｈａｒｐｅｌｓ−８ｔｏｋｅｓ　Ｄｉｖ、　ｏｆＰｅ 口ｎｗａｌｔ　Ｃｏｒｐ、）　、ペンシルバニア州つアーミンスタゴの３６イン チステンレススチールコーティングパンに、十分な量の塩化ナトリウムｕ、ｓ、 ｐ。グラニュラ−（Ｇｒａｎｕｌａｒ）〔モートンソルトディビジョン（Ｍｏｒ ｔｏｎ　５ａｌｔ　Ｄｉｖ、、リチャードソンテキサス〕を装入する。作業者は 装入（−だ塩化ナトリウムの重量を記録する。このパンを回転しつつ、作業者は 未研磨のカプセルをこのパンに装入（−１該塩床内でカプセルを回転させる。作 業者は必要に応じて研磨カプセルを撹拌する。次いで、研磨されたカプセルを手 動スクリーンでパンから取出し、＃１０ステンレススチールスクリーンに通して 過剰の塩またはカプセル屑を除去する。次いで、このカプセルを肉眼で調べて、 すべての空のカプセルシェル、キャップ、または本体を除く。次いで、このカプ セルを紙でライニングしたステンレススチール）・レイに移し、単一層状に広げ る。このカプセルを、ギザギザの端部、裂けをもつものがあるか否かあるいは充 填母不足につき肉眼で検査する。作業者は検査したカプセルを二重多層ライニン グ容器にあける。このカプセルをサンプリングのために維持し、かつ包装する。

最終重量、容器数および正味の重量を記録する。

実施例６の装置を清浄かつ５０％イソプロパツール〔デルタソルベント＆ケミカ ルズ社（Ｄｅｌｔａ　５ｏｌｖｅｎｔｓ　ａｎｄＣｈｅｍｌｃａｌｓ　Ｃｏ、） 、テキサス７５２８５ダラス〕で消毒し、次いで乾燥した。以下の材料を別々に 秤量し、２立方フイートのＰＫブレンダ〔“ツインシェルドライブレンダＣＴｗ ｉｎＳｈｅｌｌ　Ｄｒｙ　Ｂｌｅｎｄｅｒ）”　；　ハースコ社のパターシンケ リ一部内（Ｐａｔｔｃｒｓｏｎ　Ｋｅｌｌｙ、　Ｄｉｖ、　ｏｆ　Ｈａｒｓｃｏ 　Ｃｏｒｐ、）　、ペンシルバニアイーストストラスブルグ、シリーズＮｏ、７ １０３５２）に装入し、３０分間混合した。この最終製品を以下の（Ａ）に示す 組成の錠剤とする。

（Ａ）　（Ｂ） 製品を作成に要する最終 成　分　ｍｇ／単位　ブレンド用の原料の二段与剤　（Ａ） （１）アセマンナン（キャリシンＴＭ粉末とし　５０　５００　ｇて）　Ｕ、Ｓ 、Ｐ、Ｎｏ、４，７３５，９３５に従って調製（２）ステアリン酸（ＮＦ等級） 〔ユニオンキャンプ社（ｔｌｎｉｏｎ　Ｃａｍｐ　Ｃｏ、　、　６　６０　ｇニ ューシャーシー州つニイン〕 （３）シロイド”２４４　（デービソンケミカル社（Ｄａｖｉｓｏｎ　Ｃｈｃｍ ｊｃａｌ　Ｃｏ、、　０．６　６ｇメリジーンド州バルチモア〕 （４）ソルカ刊フロック［５ｏｌｋ”　Ｆｌｏｅ（顆粒）〕〔ジェームズリバー 社　１３０．９　１３０９ｇ（Ｊａｍｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｃｏｒｐ、）ジジージ ア州アトランタ〕 （５）コーンスターチ〔ベストフーズ社（Ｂｅｓｔ　Ｆｏｏｄｓ　Ｃｏ、）、　 ：−コーン＋　−１０Ｑ１．０００ｇジー州イングルウッド〕□□ ２８７．５　２８７５ 作業者によってこのＰＫブレンダを回転させ、混合を３０分間続けた。

Ｂ０錠剤調製 この混合粉末を１０ガロンのステンレススチール容器に移す。ステンレススチー ルスコップを用いて、該混合粉末を、錠剤成形機〔ストークス“モデルＦ“シン グルパンチタブレットプレス”　（Ｓｔｏｋｅｓ　”Ｍｏｄｅｌ　Ｆ”　Ｓｉｎ ｇｌｅ　Ｐｕｎｃｈ　ＴａｂｌｅｔＰｒｅｓｓＴＭ）　、ペンウォート社のシャ ーペルス−ストークス部門（Ｓｈａｒｐｅｌｓ−３ｔｏｋｅｓ　Ｄｉｖ、、　ｏ ｆ　Ｐｅｎｎｗａｌｔ　Ｃｏｒｐ、）Ｓペンシルバニア州つアーミンスタ〕の錠 剤プレスのホッパーに満した。この機械を手動で回転させて、数サイクルかけて バッチレコードに従う所定の錠剤成形圧（１〜４トン）に調節する。作業者はモ ータを始動させ、錠剤成形機を動作させる。必要な調整は錠剤が適当な重量およ び硬さに関して一定となるまで行われる。作業者は１０分毎に１０錠の重さを計 り、記録する。硬さはストークス硬度試験器で４〜６の範囲とすべきである。

Ａ、溶液の調製 キャリシンＴＭ抽出物（アセマンナン）をＬｌ　、　Ｓ　、　Ｐ　、　Ｎｏ。

４．７３５，９３５に従って調製する。夫々重量的１００ｇの、湿潤状態にある キャリシンＴＭ抽出物１２個のサンプルを滅菌メーソン（Ｍａｓｏｎ）ジャーに 入れ、凍結乾燥した（２単位：ソノーツハユニトッ、）ＴＭ（ＵｎｉｔＯｐＴＭ ）−６００ＳＬテ、他方ハフリーズモバイルＴＭ（Ｆｒｅｅｚｅ　Ｍｏｂｉｌｅ 　ＴＭ）　２１　；いずれもバーチイス社（Ｖｅｒｔｉｃ　Ｃｏｒｐ、）　、ニ ュージャージーガーディナー〕。得られたキャリシンＴＭｇ料粉末をを秤量し、 重さを記録する。最終的に凍結乾燥品的８７ｇを得る。クルツブＴＭ“ファース トタッチ”コーヒーミルモデル（ＫｒｕｐＴＭ”Ｆａｓｔ　Ｔｏｕｃｈ″Ｃａｆ ｆｅｅ　Ｍｉｌｌ　Ｍｏｄｅｌ）　２０３　（ロパートクルップ（Ｒｏｂｅｒｔ 　Ｋｒｕｐ）　Ｎ、　Ａ、ニュージャージークロスタ〕を５０％イソプロパツー ル（デルタ、ダラス）で消毒し、乾燥させた。作業者は無菌状態に保たれるべき で、かつ好ましくはゴム手袋および実験衣を身に付けるべきである。すべての作 業はバク−ダウ／（Ｂａｃ−ＤｏｗｎＴＭ）消毒薬、　ＴＭ （（１）　ｎ−アルキル−（６０％Ｃ１３０％Ｃ１６，５％Ｃ１２、５％Ｃ１ｏ ）−ジメチル−ベンジル・塩化アンモニウムと（２）ｎ−アルキル（６８％０　 ３２％Ｃ１４）ジメチルエチルベン１２ゝ ジル塩化アンモニウム両者を含む；カーチンマダーリンサイエンティフィック（ Ｃｕｒｔｉｎ　Ｍａｔｈｅｒｓｏｎ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）　、テキサス州ハ ウストンにより市販されているって消毒され、かつ清浄な下部パッディングでラ イニングされたバイオロジカルセーフティキャビネット（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ 　５ａｆｅｔｙＣａｂｉｎｅｔ）内で行われる。無菌コーニング（Ｃｏｒｎｉｎ ｇ）ジャーを粉砕キャリシンＴＭを装入する前に秤量する。約５ｇの凍結乾燥キ ャリシンＴＭ原料粉末を粉砕するが、その前に大きな片を小片に無菌Ｂ−Ｐブレ ードで細断した。このキャリシンＴＭ粉末はパルス化した作用で１００メツシユ まで粉砕して、微細粉末にした。このキャリシンＴＭ微粉末を無菌コーニングジ ャーに入れて再秤量した。溶液を得るために、５ｇの微粉砕キャリシンＴＭ粉末 を０．５％のクロロブタノール〔コダック社、ニューヨークロチェメタ〕を含む １Ωの通常の０．９％塩水〔トラベノール社（Ｔｒａｖｅｎｏｌ　Ｃｏ、）、イ リノイディアフィールド〕に移し、大きな無菌の発熱源を含まないビン（１，５ ，Ｑ　’）に入れた。このキャリシンＴＭ塩水溶液をオービトロンＴＭｏ　−チ ー　タ（ＯｒｂｉｔｒｏｎＴＭＲｏｔａｔｏｒ）　〔ホラケル社（Ｂｏｃｋｃｌ 　Ｃｏ、）、Ｓ、　Ｎ、　ＨＲＯ８１５５−２７、ペンシルバニアフィラデルフ ィア〕上に、冷蔵庫内で一夜保ち、キャリ・・ＴＭ、−。

７ノ　８有溶液を可溶化させた。次に、このキャリシンＴＭ塩水溶液をローテー タからとり出し、冷蔵庫内で１時間真直ぐに立てておき、粒子を沈降させる。

Ｂ、ビン詰め 無菌ゴムストッパを備えた皮下■注射用の滅菌６０ｍ１容の市販■ビン〔ホイー トン社（Ｗｈｅａｔｏｎ　Ｃｏ、）　、−’−ニーシャーシーミルビル〕を脱イ オン水で洗い、アルミホイルでふたをし、圧力１５ボンド、１２１℃にて１５分 間オートクレーブ処理Ｉ−た。この滅菌ビンを１７０℃で乾燥炉に一夜放置して 、残留している可能性のあるあらゆる発熱源を不活化する。

このビン用のキャップもビンと共に洗浄し、オートクレーブ処理する。該キャリ ジ２フ ６０ｍ１の滅菌した発熱源を含まないビンに分配する。この工程はバイオロジカ ルセーフティキャビネット〔クラス２、タイプＡ１ジャームフリー社（Ｇｃｒｍ 　Ｆｒｅｅ　Ｃｏ．）　、モデル８２０、フロリダマイアミ〕内で行われる。望 ましい濃度は塩水５０ｍ１または１ｍｌにつき夫々キャリシンＴＭ約５０ｍｇま たは１　ｍｇである。このビンは滅菌ゴムストッパで密封する。密栓したビン中 のキャリジ２フ サンプルを乾燥した後、ビンを金属バンドで密栓し、適当にラベルを貼布する。

次に、このサンプルを、良好な製造業務に従って、品質管理および安全性管理部 から許可されるまで保存する。使用する際、２５ｍ１の正規の塩溶液ｕ．ｓ．ｐ 。

をこの６０ｍ１バイアルビンの内容物に加える。この混合物は患者に投与する前 に十分に振盪すべきである。

実施例　９：キャリシンＴＭゲル剤およびクリームの調製本例で用いるすべての 器具は５０％イソプロパツール（デルタソルベント＆ケミカルズ　テキサス７５ ２８５ダラス）で清浄化かつ消毒し、次いで脱イオン水で洗浄する。１０ガロン （３７．９Ω）の脱イオン水を、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎｏ．　４．７３５．９３５号〔 プロセス　エクイツブメン）・社（Ｐｒｏｃｅｓｓ　ＥｑｕｉｐｍｅｎｔＣｏｒ ｐ．、ミシガンベルディング１、モデルＮｏ．　１０　０　０ガロンＯＶａ．シ リーズＮｏ．　４　０　８　６　６　−　２　３の実施例１の１０００ガロンミ キサの捕集タンクに入れる。この脱イオン水に以下の薬品を撹拌しつつ溶す。

成　分　量 （１）メチルパラベン〔サットンラボラトリーズ（Ｓｕｔｔｏｎ　Ｌａｂｓ．、 ニューシャーシーチャタン）　６８１．０ｇ（２）カリウムツルベート〔マイル ズラボラトリーズ（旧１ｅｓ　Ｌａｂｓ−インジアナエル　３７９．０ｇカート 〕 （３）イミダゾリジニル尿素〔ジャーツルＴＭ（Ｇｅｒｍａｌｌ”）１１５）　 （サツトンラホラ）　１８９．０ｇリーズ） （４）ナトリウムメタ重亜硫酸〔ジェネラルケミカル（Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｃｈｅ ｍｉｃａｌ，ニュージャー　７８．０ｇンハーシパニー〕 撹拌しつつ、原料アロエベラゲル（好ましくは湿潤キャリシンＴＭ抽出物）を粉 砕機から集めて、全体積１００ガロン（３７９．Ｑ　）　まで捕集タンクに入れ る。このタンクをはずして配合領域に移す。ホモジナイザ（クレパコフードエク イップメント＆レフリジレーション社（Ｃｒｅｐａｃｏ　Ｆｏｏｄ　Ｅｑｕｉｐ −ｍｅｎｔ　ａｎｄ　Ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｉｏｎ　Ｉｎｃ．、イリノイシカゴ ）の圧力を１５００ｐｓｉｇに設定し、該捕集タンクに接続する。このホモジナ イザを始動し、生成物を該１０００ガロンステンレススチールタンクに取付けた 開放ステンレススチールバスケットに放ａする。生成物がミキサのブレードを覆 ったら撹拌を開始する。撹拌は低速で一口中続ける。次いで、作製された１００ ガロン部分をＩＯＱガロンタンクに装入する。レスリースＴＭ（Ｌｃｓｌｉｃ’ ｓＴＭ）　’ｒイｉ土７　イルタ（モデルＤ　Ｅ　−　１８）を用いる。ケイ藻 土フィルタで処理した材料を５ｗｔ％の６５％の次亜塩素酸カルシウム〔ヨーク ケミカル社（　ＹｏｒｋＣｈｅｍｉｃａｌ）　、テキサスダラス〕で２０分間フ ラッシュ洗浄し、次いで脱イオン水で同様に処理する。１ｋｇのケイ藻土（イー グルピッチャ−社（Ｅａｇｌｅ　Ｐｉｔｃｈｅｒ　Ｃｏ．、オクラホマツルサ） を１１ガロンの脱イオン水に加え、懸濁するまで混合する。この最終混合物をレ スリーズＴＭケイ藻土フィルタを介して水が透明になるまで循環する。次に、過 剰の水を、生成物を含むケイ藻土フィルタからフラッシュする。この生成物を髄 （ｐｕｌｐ）がなくなるまでフィルタを循環させる。

次いで、最終製品を３０分間混合し、包装する。

実施例　１０：キャラ９２フ ミキサ、ホモジナイザおよび他の実施例９の装置を備えたタンクを、５０％イソ プロピルアルコール（デルタソルベント＆ケミカルズ社、テキサス７５２８５ダ ラス）で消毒し、熱脱イオン水で洗浄した。ケイ藻土フィルタを５％次亜塩素酸 カルシウム溶液（ヨークケミカル社、テキサスダラス）を全系に２０分間通すこ とにより消毒する。

１０ガロン（３７．９ｊ２）の脱イオン水を実施例９の１０００ガロンミキサの 捕集タンクに加える。撹拌しながら以下の薬品をこの脱イオン水に溶す。

成　分　量（ｇ） （１）ナトリウムベンゾエートｕ．ｓ．ｐ．　ｃサウスランド（Ｓｏｕｔｈｌａ ｎｄ）　、テキサス、ダラス〕７５８成　分　量（ｇ） （２）グリシン〔エム−チック（Ｅｍｕｅｔｅｃ）、テキサス、ダラス）　３． ０（ｋｇ） （３）クエン酸Ｌ１．Ｓ、Ｐ、　＜マイルズ、インジアナ、ニルカート）４１６ （４）カリウムツルベートｌＪ、ｓ、Ｐ、　（同上）５６９（５）ビタミンＥ　 （１０００単位）〔ホフマンーラロッシュ（Ｈｏｆ［１ｌａｎ−Ｌａ　Ｒｏｃｈ ｅ）社、　１カプセルテキサス、ダラス〕 撹拌を続け、キャリシンＴＭ、；ｉ潤抽畠物を粉砕機に装入して捕集タンクに送 り、全体積を１００ガロン（３７９ｆ：ｌ）とする。

このタンクを取りはずして実施例９のように配合領域に送る。実施例９の消毒し たタレパコホモジナイザの圧を１５００ｐｓ１ｇに設定し、該１０００ガロンミ キサの捕集タンクに接続する。このホモジナイザを始動し、該１０００ガロンの ジャケットを備えたステンレススチールタンクに取付けられた開口ステンレスス チールバスケットに生成物を放出する。このホモジナイズ処理の始動並びに停止 時間は記録される。

生成物がミキサブレードを覆ったら撹拌を開始する。約１５１．２　ｇ”のナト リウムメタ重亜硫酸（ジェネラルケミカル社、ニューシャーシー、パーシバニー ）をこの混合物に加え、２０分間撹拌を続ける。作られた全体の１００ガロン部 分を１０００ガロンタンクに装入する。この生成物を一夜放置する。次いで、ケ イ藻土フィルタを熱脱イオン水でフラッシュし、次に１ｋｇのケイ藻±（イーグ ルピッチャ−社、オクラホマ、ツルサ）を１０ガロンの脱イオン水に加え、懸濁 するまで混合する。この混合物を水が透明となるまで該ケイ藻土フィルタを通し て循環する。過剰の水を、生成物が髄を含まなくなるまで該ケイ藻土フィルタを 通して該生成物からフラッシュする。この生成物を、品質管理および安全性確認 部で許可されるまで保存する。生成物が許容されたら、ビン詰めを行う。

マス、すべての器具を５０％イソプロパツール（デルタ、テキサス、ダラス）で 消毒し、熱脱イオン水で洗う。約ＴＭ ９２７ｋｇのエウトフ　（ＥｕｔｒａＴＭ）パラフィンミネラル油＆ペトロレー タム（コリーンリアン社、テキサス、ダラス）を乾燥ケトルに装入し、撹拌する 。次に、約３０ｋｇのバラＭ フィン（カーボワックス　（ＣａｒｂｏｗａｘＴＭ）　；　ｍ、ｐ、　＝　３７ °Ｃ、ユニオンカーバイド社、コネクチカットダンバリー）を加該エウトうＴＭ 材料およびカーボワックスＴＭパラフィンを、まず撹拌しつつ５０℃±５℃に加 熱し、次いで加熱を止め、撹拌を続ける。１．０ｋｇのプロピルパラベン（サラ トンラボラトリーズ、チャタムＮＪ）と２．０ｋｇのブチルパラベン（デルタ、 テキサス、ダラス）とを加える。次いで、この溶液を、１５〜２０分、該保存剤 が溶けるまで混合する。３０．６ｋｇのレシチンとタンパクバインダ（アルコリ ーＴＭ（ＡｌｃｏｌｅｅＴＭ）　；アメリカンレシチン社；ジョーシア、アトタ ンク）を加え、２０分間混合する。温度をチェックし、この混合物を必要ならば 再加熱する。この混合物の温度を、約４０℃で・一定に保ち、ゆっくり撹拌しつ つ１９．１４ｋｇのミコナゾール（ｍ１ｃｏｎａｚｏｌｅ）ニトレート（Ｕ、Ｓ 、Ｐ、）を加える。次いで、加熱を停止し、撹拌を続けながら、１０２．０ｇの キャリシンＴＭ、１潤抽出物を加える。

Ｃ１坐剤の成形 この混合物を、公知の串刺成形機（これはＡ、１７合金、シンチュウまたはプラ スチック製でよい）に注入する前に十分に混合する。この混合物をゆっくり注入 して気泡の取込みを避けるべきである。この串刺と鋳型とを冷却により十分に冷 す。冷却した串刺を急冷した後、過剰の生成物をかき落とす。鋳型を開き、串刺 を取出す。十分な時間をかけて冷却して取出しを容易にし、かつ完成した串刺の 裂けを最小化することを推奨する。この製品は、標準的な良好な製造工程に従っ て品質管理安全部門から承７されるまで保存する。

（１）無菌り、１．水（７３ガロン）　２７６ｋｇ（２）湿潤キャリシンＴＭ抽 出物　２８４　ｋｇ（３）ホ　ウ酸　５．７ｋｇ （４）塩化ナトリウム　１．１ｋｇ （５）ＥＤＴＡ・２ナトリウムＮＦ　５８７ｇ（６）メトセル（Ｍｅｔｈｏｃｅ ｌ）　Ｅ　４　ＭプレミアムＮＦ　２８４ｇ（７〉塩化ベンザルコニウムＮＦ　 ５Ｂ、７ｇ（８）ナトリウムメタ重亜硫酸Ｎ　Ｆ　Ｌ１２．２ｇＡ、必要な器具 の消毒 予め公知の方法で清浄化したタンク、ミキサおよび付属品（上記実施例９参照） は５０％イソプロパツール（ＩＰＡ）溶液（デルタ、テキサス州、ダラス）で消 毒し、次いで、熱り、！、（脱イオン）水で洗ってアルコールをなくす。

次に５％次亜塩素酸カルシウム（ヨークケミカル、テキサス、ダラス）溶液をポ ンプおよび取付けたホース（これらは後に５０％ＩＰＡ溶液でフラッシュされ、 かつ最後に装置がアルコールを含まなくなるまで熱り、Ｉ、水でフラッシュされ る）を介して排液する。適当なホモジナイザ（および付属ホース）およびポンプ を、次に５０％ＩＰＡ溶液で消毒し、更にＩＰＡがなくなるまで熱り、Ｉ、水で フラッシュする。５％次亜塩素酸溶液を調製し、ケイ藻土フィルタ系全体に２０ 分循環させる。予め公知の手段で清浄化した０、２μフイルタおよびハウジング を次いで５０％ＩＰＡ溶液で消毒する。

Ｂ、製造 ７３ガロン（２７Ｂ！Ｑ　）のり、Ｉ、水とナトリウム重亜硫酸（ジェネラルケ ミカル社パーシバニー、ＮＪ）を１００ガロンのステンレススチールタンクに装 入する。次いで、撹拌を開始し、キャリシン７Ｍ湿潤抽出物を１０００ガロンミ キサから集めて実施例９の捕集タンクに入れ、全体積を１５０ガロン（５６７ｇ ）とする。このタンクを、上記のように、取りはずして配合場所に移し、予め消 毒したホモジナイザを圧力１５００ｐＳｉｇに設定する。これを該捕集タンクに 接続する。

このホモジナイザを始動し、生成物を開口ステンレススチールバスケットに放出 する。該バスケットは適当なサイズのジャケットをもつステンレススチールタン クに取付けられている。このホモジナイズの開始および停止時間を記録すべきで ある。すべての作成した１００ガロン部分を１０００ガロンステンレススチール タンクに装入する。

この消毒液を熱Ｄ、■、水を用いてケイ藻土フィルタからフラッシングで除き、 １ｋｇのケイ藻土（・イーグルピッチャ−社、オクラホマ、ツルサ）をｌＯガロ ンのり、Ｉ、水に加え、懸濁液が得られるまで混合する。この混合物を、水が透 明になるまで該ケイ藻土フィルタを通して循環する。

過剰の水をこのフィルタからキャリシンＴＭ抽出物でフラッシングで除き、次い で該フィルタを通して循環する。混合しつつ、このキャリシンＴＭ製品を９０℃ に加熱する。以下の試薬を加え、溶液が完全に均一になるまで混合を続ける。

ホウ酸（ハンコック、テキサス、フォートワース）、塩化ナトリウム（モルトン ソルトディビジョン、テキサス、リチャードソン）、ＥＤＴＡ、−２ナトリウム （ダウケミカル、テキサスホーストン）および塩化ベンサ゛ルコニウム（ラシャ −ケミカル、ヒルサイド、ＮＪ）。この生成物を一夜冷却する。

翌日、この溶液を撹拌しつつ９０℃に加熱し、次いで２７℃に冷す。混合しつつ 、メトセルＴＨＥ４Ｍプレミアム（ダウケミカル、テキサス、ホース）・ン）を 該混合タンクに加えて溶媒和させる。この溶媒和の際、この生成物はロミコン（ Ｒｏｍｉｃｏｎ）　０．２μフイルタ（アミコンＵＳＡ社、ダンバース、Ｍａ） を介して濾過される。ｐｈｉを調べて記録する。所定のｐＨは６．０±０．５で あり、必要ならば水酸化ナトリウム（サージャントウルヒ、テキサス、ダラス） を用いてｐ　ｉｔ　ｉ節してもよい。最終ｐ）Ｉを記録する。浸透圧を調べ記録 する。

所定の浸透圧は２９０±２０である。必要ならば塩化ナトリウムでこの浸透圧を 調節してもよい。最終浸透圧を記録する。

良好な製造手順に従ってサンプルが承認されたら、この生成物をポンプでドラム に移し、このドラムからミクロテスト用にサンプリングされる。この生成物は適 切な品質管理安全性部門で承認あるまで保存される。

実施例　１３：ギヤ９２２創傷側傷濯注液の調撃成　分　量 （１）Ｄ、１．　水（４０ガロン）１５２．０．Ｑ（２）メチルパラベン　９４ ８．０ｇ （３）イミダゾリジニル尿素ＮＦ（ジャーツル（Ｇｅｒｍａｌ　Ｉ）１１５）　 ９４８．０　ｇ（４）クォータニウム（Ｑｕａｔｅｒｎｉｕｍ）　−１５Ｎ　Ｆ （ダライシル（Ｄｏｗｉｃｉ　１）２００）　７５Ｓ、Ｏｇ（５）カリウムツル ベートＮ　Ｆ　７５８．０ｇ（６）すｊ・リウムメタ重亜硫酸Ｎ　Ｆ　７８．０ ｇ（７）キャリシン７Ｍ抽出物ゲル（５０ガロン）　２２４．（ＩＱ（８）ラウ リル硫酸ナトリウムＮＦ　Ｌ９０．０ｇＡ、消毒 予め清浄化した実施例９のタンク、ミキサおよび付属品を５０％のイソプロピル アルコール（ＩＰＡ）溶液（デルタソルベント＆ケミカルズ社、テキサス、ダラ ス）で消毒し、Ｄ、１．水でＩＰＡ、がなくなるまで洗浄する。５％の６５％次 亜塩素酸カルシウム（ヨークケミカル、テキサス、ダラス）の溶液を、ポンプお よび付属ホースから排液し、次に該装置をり、１．水でフラッシュする。このポ ンプ、ホモジナイザおよび付属ホースを５０％ＩＰＡ溶液で消毒しり、１．水で 装置がＩＰＡを含まなくなるまでフラッシュする。

予め清浄化した実施例９のレスリーズ７Ｍケイ藻土フィルタを分解し、すべての 部品を６５％の次亜塩素酸カルシウムの５％溶液中に入れる（１５分）。すべて の部品をプールしたフィルタに入れ替える。１０ガロンのり、Ｉ、水と４００ｇ の６５％次亜塩素酸カルシウムとから溶液を作る。この溶液を２０分に亘り全系 に循環する。次いで、この全系をり、Ｉ。

水で３０分、あるいは塩素がなくなるまで洗浄する。

Ｂ、製造 ４０ガロンのり、１．水（１５２ｇ）を該捕集タンクに入れ、以下の薬品を撹拌 しつつ該り、１．水に溶す。メチルパラベン（サラトンラボラトリーズ、シャタ ン、ＮＪ）　、イミダゾリジニル尿素（同）、クォーターニウム−１５（ダウケ ミカル、ヒユーストン、ＴＸ）、カリウムツルベート（マイルズ、インジアナ、 ニルカート）およびナトリウムメタ重亜硫酸（ジェネラルケミカル社、パーシバ ニー、ＮＪ）。

連続的に撹拌しつつ、キャリシンＴＭ抽出物を粉砕機から集めて捕集タンクに送 り、全体積を１００ガロン（３７９ｇ）とする。このタンクを前と同様に配合場 所に移し、予め消毒したホモジナイザの圧力を１５００ｐｓｉｇに設定し、該捕 集タンクに接続する。このホモジナイザを始動し、生成物を１０００ガロンステ ンレススチールタンクに放圧する。前と同様に生成物がミキサブレードを覆った ら撹拌を開始する。ラウリル硫酸ナトリウム（デュポン、ウィルミントン、ＤＥ ）を加え、一方ミキサは低速で撹拌を継続する。すべての作られた１００ガロン 部分を前実施例と同様に１０００ガロンタンクに装入し、この生成物を一夜放置 する。

消毒液を、Ｄ、Ｉ、水でケイ藻土フィルタからフラッシングで除き、１　ｋｇの ケイ藻土（イーグルピッチャ−社、オクラホマ、ツルサ）をり、１．水１０ガロ ンに加え、懸濁するまで混合する。この混合物を水が透明になるまで該ケイ藻土 フィルタに循環する。過剰の水を生成物で該ケイ藻土フィルタからフラッシング で除き、生成物を透明になるまで該フィルタに循環させる。この溶液は、良好な 製造実務に従い、品質管理並びに安全性確認部門で承認されるまで保存する。

成　分　量 （１）凍結乾燥キャリシン１Ｈ粉末 （Ｕ、Ｓ、Ｐ、Ｎ（１４，７３５，９３５号＞　１０２．０ｇ（２）Ｄ・■・水 　３０．６ｋｇ （３）塩化ナトリウムＵＳＰ（モルトンンルト　１０２．０ｇディビジョン、リ チャードソン、ＴＸ）（４）クォーターニウム−１５（Ｄｏｗｉｃｉｌ　２００ ）（ダウケミカル、ヒユーストン、ＴＸ）　３１．０ｇ（５）エラトラＴＨ（コ リーンライアン社、ダラス、ＴＸ）　９５７．０ｇ （６）レシチン（アルコリーＴＨ７−３，アメリカンレシチン社、アトタンタ、 ＧＡ）　３０．６）ｃｇ（７）プロピルパラベン（サラトンラボラトリーズ、チ ャクン、ＮＪ）　１．０ｋｇ（８）ブチルパラベン（デルタ、ダラス、ＴＸ）　 １．０ｋｇＡ、逍−遺 予め清浄化した実施例９のケトル、ミキサ、ポンプ、ホースおよび容器を消毒す る。

Ｂ、製造 エラトラ１Ｍ混合物〔ミネラルオイル、ペトロレータムおよびパラフィンから作 製（コリーンライアン社、ダラス、ＴＸ））を乾燥ケトルに入れ、撹拌を開始す る。この混合物を撹拌しつつ５０°Ｃ±５°Ｃに加熱する。加熱を停止し、撹拌 を継続する。プロピルパラベンとブチルパラベンとを次に加え、溶解するまで撹 拌する（約１５〜３０分）。レシチンを加え、混合を２０分間続ける。次に、キ ャリシンＴＨ湿潤抽出物溶液を該混合物に加える。ゆっくり撹拌しつつ強制冷却 を開始し、生成物が固体となるまで冷却を続ける（約２５°Ｃ）。このサンプル を試験に供し、該生成物は、良好な製造業務に準じた品質管理および安全性検査 部門の承認があるまで保存する。

実施例　１５ 主１Ｂ１１ カリジン（商標）抽出物が繊維芽細胞の増殖を促進するということが、インビボ およびインビトロの両方の実験により観察された。制御を越えた２〜３のファク ターによる促進が時々記録された。表１３は７２時間にわたって、０．１％（重 量／容積）の濃度でのカリジン抽出物により影響された繊維芽細胞増殖カウント を表わす。これらの実験は、種々の条件下で製造されたカリジン抽出物の試料へ の細胞の応答を評価するためになされた。

表　１３ ヵＩＪ　＞　＞　試料　濃度％２４時間　４８時間　７２時間（ｗ／ｖ）　％　 ％　％ ＴＣＸラボ（Ｌａｂ、）７／２５／８５　０．１　９０．７　１６２．２　１６ ３．８バツチ１　０．１　１０４．３　１３９．７　１２９．５バツチ２　０． １　７２．１　１２３．２　１４４．９バツチ３　０．１　７５．５　１３０． ９　１２８．４バツチ４　０．１　１０２．３　１３１．２　１３５．１バツチ ５　０．１　７９．３　１１５．０　１２９．２バツチ６　０．１　５７．７　 １３０．９　１１３．３バツチ７　０．１　６５．１　１１０．８　１２０．２ バツチ（ラボ、）５／８３　０．１　８１．１　１３８．３　１６９．７マン（ Ｍａｎ、）バッチＩＢ　Ｏ，１１２５，６１７４，８１１４，８マンパツチ２Ｂ 　Ｏ，！ＩσＬ５　１７５．３　ｒｉｇ、ｅマンパッチ３Ｂ　Ｏ，１１３８，９ １５Ｂ、４　１４７．０マンパツチ３Ｂ（水和物’）　０．１　１０３．３　１ ４１．３　１５８．９グ′し″７″／す’　０．１　１０３．３　６９．９　１ ０８．６（コンジャク植物＊） 対照Ｓ　ＣＭ　Ｏ，１１００，０１００，０１００，０＊　Ｋｏｎｊａｃ　ｐｌ ａｎｔ 実施例　１８ 傷を浄化するために普通使用されるいくつかの局所剤の細胞毒性を決定するため にヒト繊維芽細胞の培養物を使用した。その目的は、カリジン抽出物を含有する 傷のゲルを、異なった形式の作用を有するいくつかの標準の浄化剤を用いて比較 することであった。これらの標準の浄化剤は、表皮性の障壁の突破後の細菌性の 障害および組織破壊を減することを意図されている。放射性元素標識クロムの放 出およびトリパンブルー色素の取り込みが細胞毒性を測定するために使用された 。培養繊維芽細胞は０．５％の濃度のカリジン抽出物により障害を受けなかった 。対照的に、ボビドンーイオジン（ｐｏｖｉｄｏｎｅ−１ｏｄｉｎｅ）　Ｃベタ ジン（Ｂｅｔａｄｉｎ）　）　、トリプシンおよびベル（Ｐｅｒｕ）　（グラヌ レックス（Ｇｒａｎｕｌｃｘ）　）のバルサム、クロロへキシジン〔ヒビクレン （旧ｂｉｃｌｅｎ）　）および過酸化水素は、標識細胞からＣｒ５１を放出した 。ベタジン、ヒビクレンおよびグラヌレックスはまた、トリパンブルーでの着色 度を高めたが、カリジン抽出物での処理ではそうではなかった。これらのインビ トロでの研究に基づいて、カリジン抽出物は局所性の施与および傷の処置のため に安全であると思われる。

細胞培養 ヒト皮膚の繊維芽細胞は新生児の包皮の外植片から、および帝王切開で下腹部か ら集めた大人皮膚の試料から成長された。組織は、脂肪および皮下の結合組織を きれいにし、２ｍｍ’粒子に切り刻み、そして小さな（２５ｃｒＩ）培養フラス コに置いた。培地は、５％ウシ胎仔血清（ｆｅｔａｌ　ｃａｌｆｓｅｒｕｍ）　 （ベーゼルトン（Ｈａｚｅ　ｌ　ｔｏｎ）　）を追加した最小必要培地（Ｍｉｎ ｉｍｕｍ　Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ　（ＭＥＭ）　）　Ｃインランド ラボラトリーズ（Ｉｎｌａｎｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　）、　２００Ｉ ＩＩＭのグルタミンおよび１％の抗生物質からなり、この培地を添加した。培養 物は５％Ｃ０２雰囲気下、３７℃に維持した。

数日以内に、ケラチン生成細胞および繊維芽細胞の混合物が組織の端から成長し た。ケラチン生成細胞は、分裂に失敗したが、１８〜２１日以内に繊維芽細胞が 増殖して、特徴的なうずまき模様を有する伸長した細胞の単一層を形成した。す べての培養物は使用前に少なくとも３口締代を行ない、１０〜１５回の継代まで について使用した。

局所剤 インビトロ系での細胞障害を測定するために、傷や床ずれ（ｄｅｃｕｂｉｔｉ） の処置に普通に使用されるいくつかの製品を、ヒト繊維芽細胞の標準化した培養 物に直接添加した。

ポビドン−イントン溶液（ベタジン）、過酸化水素、グラス１ノツクスおよびタ ロ口へキシジン（ヒビクレンズ）が異なる作用メカニズムを有する普通に使用さ れる浄化剤である。これらの化合物（０，００１〜０．５％）を、培養繊維芽細 胞における細胞毒性効果について、カリジン抽出物と比較した。

融合性の単一層から得た細胞をパックス（Ｐｕｃｋｓ）　−ＥＤＴＡ溶液に短時 間（５〜１０分間）さらした後０．２５％のトリプシンで分離した。懸濁させた 細胞を遠心分離してペレット化し、新鮮な培地で１度洗浄し、そしてグルタミン 、抗生物質および１％ウシ胎仔血清を追加したＭＥＭ中に再懸濁させた。電子細 胞計数器〔コールターエ１ツク）・ロエックス（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｅｌｅｃｔｒ ｏｎｉｃｓ）　、ヒージー（ｌｌｉａｌｅａｈ）、ＦΩ、〕で細胞数を測定し、 個々の実験のために必要とされるように希釈して調整した。細胞はＣｒ”１（Ｉ 　ＣＥ／ｍｌ）で標識し、２４ウエルのマルチウェルプレートに１ウエル当たり １０５個の密度で培養した。このプレートは、インキュベーターに１８時間戻し た。各実験の最初に、放射性培地を吸引により除去し、各ウェルを１％ウシ胎仔 血清培地を加えた新鮮なＭＥＭで４回洗浄した。Ｍ　Ｅ　Ｍ単独または試験製品 の種々の希釈物を含むＭＥＭを、複製の（ｒｅｐｌ　１ｃａｔｅ）ウェルに添加 した。そしてプレートを１〜３０分間インキュベートした。インキュベーション 時間の最後に、培地を集め、放出された放射活性の測定のために取っておいた。

各ウェルの細胞を、０．１Ｍ　ＮａＯＨを加えたトリトンＸ−１００（１％）　 ０．５ｍｌを添加して溶解し、溶解物の試料を放射活性の測定に用いた。

細胞毒性の測定 種々の化学薬剤と共にインキュベートした標識繊維芽細胞から放射性クロムの放 出により、細胞毒性を定量した。

パーセント放出は、放射活性量を培地および細胞の両方で徐することにより計算 した。

細胞毒性の２つ以上の評価（ａ　ｌ　ｔｅｒｎａｔｅ　’　ａｓｓｅｓｓｍｅｎ ｔ　）をトリバンブルーで着色することにより行った。細胞は、それぞれの試験 薬剤と共に１５分間インキュベートした。トリバンブルー（１％）を各ウェルに 加え、さらに５分間インキュベーションを続けた。試料は光学顕微鏡で検分し、 ニコン逆相（１ｒｌＶｅｌ’ｔｅｄ　１）ｈａ３ｅ）顕微鏡に付けたニコン３５ ｍｍのカメラで写真を撮った。細胞毒性は、対照（非処理）ＭＡ胞と比較して、 トリパンブルーで着色した細胞のパーセンテージを決定することにより評価した 。

表　１４ トリバンブルー着　により ゛　した局戸剤の細　毒性 製　品　濃　度　イ′キ１″″″′β ベタジン０．０１％　１５分　１００ ヒビクレンズ　０．０１％　１５分　１００グラヌレツクス　０．０１％　１５ 分　１００カリジン抽出物　０．０１％　１５分　５培地のみ　−１５分　１ キュベートした。トリパンブルー（１％）を施与し、５分後に核を数えた。結果 は、着色された視野内の全細胞核のパーセントとして表した。

細胞傷害のタイムコース 局所剤による直接細胞傷害が急速に生じ、細胞からのＣｒ５１の放出の増加によ り反映された。培地のみで、または１０％ウシ胎仔血清で処理した培養繊維芽細 胞は、５〜６０分間のインキュベーション中全クロム標識物の５％より多くは放 出しなかった（図１１）。それに対して、０．０５％グラヌレックスまたはヒビ クレンズで処理した細胞は、５分以内に全標識物の５５％〜６２％を放出した。

１０分間又は１５分間のインキュベーションは、３種の薬剤全部についての放畠 量を増加させたが、より長いインキュベーション（３０分間）では、放射活性の 放出を口に見えるほど高めることはなかった。カリジン抽出物（ＣＤＷＧ）（０ ，０５％）で処理した細胞は３０分間のインキュベーション中に全標識物の５％ より多（は放出しなかった。

細胞傷害における濃度の影響 濃度０．００５〜０．０５％の範囲で、種々の薬剤についての細胞毒性を試験し た。第１２図に示したように、グラヌレックスおよびヒビクレン（０，０１％） はそれぞれ、繊維芽細胞から、全クロム標識物のおよそ２５％および７５％放出 した。

ベタジンの最低濃度（０，００５および０．０１％）による放出は、培地単独に よる放出より多くはなかったが、０．０１５％ベタジンにさらされた細胞は、全 放射活性の７０％より多（を放出した。カリジン抽出物の濃度を０．５％まで− ヒげても、培地単独のものより多くは放出しなかった。

トリパンブルー着色を細胞傷害を評価するために用いた場合に同様の結果が得ら れた。表１４に示したように、０．０１％ベタジン、ヒビクレンズ又はグラヌレ ックスを用いての１５分間のインキュベーションは細胞を１００％殺した。同、 じ濃度のカリジン抽出物を用いたインキュベーションは５％しか殺さなかった。

０．０１％の濃度の過酸化水素は形態学上の変化により判定されたように細胞に 悪い損傷を与えたが、この薬剤によるトリパンブルー着色はその脱色効果のため に測定できなかった。

組合せた薬剤の効果 いくつかの実験において、抽出物が保護効果を有するかどうか決めるために、他 の典型的な薬剤の添加前に、カリジン抽出物を繊維芽細胞に添加した。培地単独 およびｌＯ％ウシ胎仔血清含有培地で細胞毒性効果が測定された。図１３では、 カリジン抽出物単独では細胞を損傷しなかったが、１５分間のインキュベーショ ン中にベタジン、グラヌレックス又はヒビクレンズにより放出された（：ｒ５１ の量を変更しなかった。同様に、インキュベーション培地中のウシ胎仔血清の含 有は、これらの薬剤の細胞毒効果を変えなかった。

動物における焼けた組織へのカリジン抽出物の凍結乾燥していない、安定化され ていない初期のバージョン（ｅａｒｌｉｅｒｖｅｒｓｉｏｎ）の効果の独立した 評価のために、ミゲル　ロドリゲツービガス（Ｍｉｇｕｅｌ　Ｒｏｄｒｉｇｕｅ ｚ−Ｂｉｇａｓ）らの「テンジクネズミのやけどの傷の処置におけるアロエベラ の比較効果」〔Ｕ　プラスチック　アンド　リコンストラクティブサージェリー （Ｐｌａｓｔｉｃ　ａｎｄ　Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　Ｓｕｒｇｅｒｙ） 　８１　：３８６（１９８８）　：）を見よ。

実施例　１７ ８３才の女性患者、ＴＢ、左足の外側の端に直径２５ｍｍの潰瘍が発生した。こ の潰瘍は数ケ月間存在しており、いくつかの処置養生法に応答しなかった。

この傷を１日３回処置するというスケジュールで米国特許第４．７３５．９３５ 号明細書の実施例３の生成物および米国特許第４，７３５，９３５号明細書の実 施例７の生成物で処置した。

きれいな傷を米国特許第４，７３５，９３５号明細書の実施例２の生成物で１５ 分間浸した。過多の生成物は、乾燥した無菌の４×４ガーゼで傷から吸収した。

米国特許第４，７３５，９３５号明細書の実施例７の生成物を次に、傷をおおい 、かつ傷が包帯交換の間に脱水するのを防ぐのに十分な量で、施与した。

傷の治ゆの経過は、間隔をおいた写真および傷の欠損の面積測定により測定した 。傷の終結の経過を表１５に示す。

表　１５ 日　傷０領域　治ゆのパーセンテージ １　１．２４　０．００ ２８　０．５１　５８．８７ ７７　０．２９　７６．６１ ８３　０．１２　９ＤＪ２ ９７　０．００　１００．００ この表皮性の欠損は、１２週間で実質的に終結した；完全な終結は１４週間で生 じた。

実施例　１８ ３２才の患者は「長年」の間、潰瘍性大腸炎の病歴を示した。活性の発現の間は 、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）　４０ｍｇ。

アズルフィジン（Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ）　３　ｇ　、　６−メルカプトプリン ５０ｎｇおよびフラジル（Ｆｌａｇｙｌ）の日々の養生法に応答しなかった。彼 女は日ごとに腹痛と４〜８回の血性腸活動（ｂｌｏｏｄｙ　ｂｏｗｅｌ　ｍｏｖ ｅｍｅｎｔｓ）をうったえ続けた。彼女は過栄養に置かれた。内視鏡所見は、潰 瘍を横切るために、穏やかな肝臓薬を用いて、上行性の結腸にひどい潰瘍を示し た。この患者は、他の薬に加えて、１日に４回カリジン抽出物５０ｍｇを与え、 家へ帰した。１週間で彼女の症状は事実上消失した。彼女の腹は穏やかに柔か＜ 　（ｔｅｎｄｅｒ）　、そして内視鏡は治ゆしたそして穏やかに充血した粘膜を 示した。

彼女はゆっくりと他の薬物を取り去り、そして病像は改善し続けた。この患者は 唯一の薬物としてのカリジン抽出物に支えられた。そして、彼女の物理的試験お よび症状は、全体的に普通であると記録された。

潰瘍性大腸炎およびクローン病に対する同様の応答を有するさらに４つのケース がみられた。１人の患者は、カリジンカプセルを使った。４週間で、穏やかな症 状を訴えはじめ（穏やかな腹部の不快感を伴う便通が増加した）、彼女は薬物の 投与のために戻った。３日間で彼女は全体として普通の腸の総合的症状に戻った 。

実施例　１９ 多くのエイズ患者は、毒性作用や副作用を受けることなく、キャリシン・エキス を大量に投与される治療を長期間に亘って受けている。Ｔ−４及びＴ−８リンパ 球比率の上昇や、Ｔ−４の絶対数の増加がエイズ患者に見られたが、通性の感染 症が軽減されたばかりでなく、臨床的症状が軽減又は除去された。

エイズ患者のリンパ球が刺激されている現象が見られるので、キャリシン・エキ スは免疫変調に関与しているものと考えられる。

実施例　２０ 疼痛チック又は第５頭部神経の神経痛の特徴は、三叉神経の１つ以上の枝神経に 亘る激しい耐え難い痛みの発作である。この痛みは通常、一過性のものであり、 発作は顔のある部分、いわゆるトリガー・ゾーンに触れることにより収まる。

この疼痛性の病気の原因及び治療法は知られていない。

この疾患を治療する試みがいくつか成されているが、はとんど又は全く成功する には到っていない。鎮痛剤やフェニトインの使用、痛みのある技神経の末梢神経 部分の除去、またガラセル・ガングリオンへの９８％アルコールの注入のような 種々の治療法が試みられている。

より徹底的な治療法として、ガングリオンに最も近い神経の感覚根の切開が行な われるが、切開された神経が占める患者の体の部分はこれにより永久に無感覚に なる。最近試みられた方法として、カルマバゼビン（ｃａｒｂａｍａｚｅｐｉ　 ｎｅ）やフエノリオフエンシレート（ｐｈｅｎｏｌｉｏｐｈｅｎｄｙｉａｔｅ） の注射があげられる。しかしながら、これらの注射は痛みを伴うしびれや、大き な副作用をもたらすという問題がある。

上記の治療法はいずれも好ましいものではない。

４３歳の女性が疼通チック症であると診断された。患部は右側の三叉神経の第１ 及び第２部分であった患者は右側の部分の頭髪にブラシをかけたり、くしを当て ることによって痛みを誘発することができた。ジアゼパム（Ｖａｌ　ｉｕｍ）、 抗ヒスタミン、鎮痛剤、プロプラノロール塩酸塩（１０ｄｅｒａｌ）及びフエノ バルビタールによる治療は効を奏さなかった。

患者の話によれば、この病気にかかってから痛みの無い日は１日もなかったとい うことである。

そこで提案された方法が、米国特許第４，７３５，９３５号明細書の実施例２に 記載された生成物を毎日１〜２オンス３ケ月間服用することであった。３ヶ月後 この治療法の評価を行った。

この療法を開始してから２週間以内に患者の痛みは大きく軽減された。患者によ れば、その後数週間は気分が良かったという話であるが、それから２週間の旅行 に出がけなところ（その開渠を服用しなかっ７’：コ）、症状と痛みが再び戻っ てきた。患者は再び薬を服用しはじめたところ、数日の内に痛みは消えた。次の 数週間は再び良好な状態であった。

液剤を毎日６ケ月以上に亘って服用したところ、髪にブラシをかけても痛みが誘 発されることがなくなったという報告を患者から受けた。患者の表情も良くなり 、患者自身も以前より大分気分が良くなったという話である。

実施例　２１ 患者応答の試験的診断基準の開発を含む、４１人の症候ＨＩＶ患者において経口 アロニドリンクを用いて得られた結果 第一の２年間の臨床パイロットをテキサスおよび連邦ＩＮＤに基づき１４人のＡ 　Ｒ，Ｃエイズ患者について行い、アロエドリンクまたはアロエの凍結乾燥品（ カリジン（登録商標）抽出物）がＨＩＶ−■患者に臨床効果をもたらすかどうか を調べな。このパイロットが開始された時、ＨＩ　Ｖ感染の診断を確立し患者応 答を監視する試験は存在していないか、あるいは、有用ではなく、原始的なもの であった。

この研究において、カリジン抽出物の５００〜１ｏｏｏ■／日の摂取が、臨床応 答のための境界投与量を構成することがわかった。処置不可能な状態ではないパ イロットＡＲＣ−エイズ群の８人の患者が、９０日の治療において、改変したウ ォルターリード臨床スコアにおいて７１％の改善を達成した。病状が進み重症な 合併症を有する６人のパイロットエイズ患者は、彼らの臨床スコアにおいて２０ ％の増進を記録した。このように、病状の進んでいない患者ではさらに急速な改 善がみられ、より良い健康状態に進んだ。独立した学術的統計学者がこのデータ を分析し、患者の改善が９９．５％の信頼区間で治療によるものであると結論を 下した。このパイロット研究の結果は、このパイロットが結論づけられていると きに有用になりつつあったより客観的な評価方法を受けていた患者からのデータ の収集及び分析を正当化した。第一のこの研究において１５人の患者が分析され 、これらは「パルス−マクダニエル群」と称される。第２群の２６人の患者も分 析され、「ワＩ・ジン−マクダニエル群」と称される。

Ａ、治療中の患者の評価の一般的アプローチ（第１及び第２群） これらのパイロットにおけるアロエドリンクによる処置の結果の記録にたいする 一般的アプローチは以下のとおりであった。

１、患者群は、カリントン・ラボラトリーズ社が製造した経口アロニドリンクで １日あたり２０液量オンスで処置されたＨＩＶ症候患者で構成された。

２、これらは、この特定のアロエドリンクを医師により処方され、従ってプラシ ーボあるいはブラインド成分を使用しない患者の記録を分析する遡及研究であっ た。

３、研究患者は、ＨＩＶ治療に有用と考えられる秘密の薬及び追加の薬物を避け るように奨励された。かれらは、摂取したすべての薬物を医師に報告すべきこと が強調された。

しかし、各患者は薬物の摂取がアロエドリンク処置からの排除の基礎とはならな いとの助言を受けた。

４、臨床評価は、改変したウォルターリード臨床スコアシートを用いて、独立し た医師により行われた。

５、すべての臨床データは、秘密に処理され、標準チャートパケットに保存され た。

６、患者の身元と結果の秘密が守られた。コード番号がチャートとすべての記録 につけられた。

エイズ患者用に処方されたすべてのアロエドリンクの処方、成　分　％ｗ／ｗ 脱イオン水　４０．００ 安息香酸ナトリウム、Ｕ　Ｓ　Ｐ　０．１０グリシン、Ｆ　ＣＣＯ，８０ クエン酸、Ｕ　Ｓ　Ｐ　０．１１ ソルビン酸カリウム、Ｕ　Ｓ　Ｐ　Ｏ，０５メタ重亜硫酸ナトリウム、ＦＣＣＯ ，０２生アロエベラゲル　５８．５６ 香　料 「アダムスベスト」ブランドバニラエキス　０．０３２天然シナモン油、Ｆ　Ｃ ＣＯ，００２ 「リアル」ブランドライムジュース　０゜１２８「アダムスベスト」ブランドレ モンエキス　０．１９８１００．０００ 抗酸化剤としてビタミンＥを添加した。

Ｂ、評価基準 治療に対する好ましい患者応答は、改変したウォルターリード臨床スコアの減少 、各評価期間の先の試験より１０％以上の絶対Ｔ−リンパ球の増加及びコア抗原 レベルが陰性に保たれているか１０％以上減少したことが、臨床的に及び実験室 的に認められることとして定義された。

患者は以下の基準により選別された。

１．２種以上の反応性ウィルス抗原により、ウェスタンプロット法でＨＩＶ抗体 陽性 ２、少なくとも１つのエイズの典型的症状３、標的母集団は、１５０〜３５０　 ｍｍ２の絶対Ｔ−４ヘルパーリンパ球数を持つ患者であった。しかし、この範囲 より高いあるいは低い数値の患者も対象とした。

４、この研究群では、年齢、人種または性の差別をしなかった。

５、すべての患者は、外来患者とされ、他の調査のだめの実験研究群に属さない ことが要求された。この評価によって賦課された条件がより衰弱したＨＩＶ患者 の選別に使用された。

６、提案された処置は、ダラスワースメディカルセンターの人体実験調査レビュ ーボードにより受け入れられ承認された。この計画は、個人医師調査新薬免除の 拡張であった。

患者は、通知された同意セツションにおいてこれらの事実を評価された。

監視パラメーター １、履歴及び身体検査、並びに改変したウォルターリード臨床スコアにおける特 別の強調点 ２．８ＩＶ抗体及びウェスタンプロット３、血小板を持つ完全な血球数 ４．２１−試験生化学プロフィール ５、血清コア抗原試験（Ｐ−２４＞アボットダイアグノスティクス ６．７−４及びＴ−８リンパ球の比を含む定量的蛍光フロー血球計算 ７、１９８６−８７パイロツトにおけるＦＩＣＯＬ分離白血球の培養 ８、１９８６−８７パイロツトに対する遅延皮膚試験抗原Ｃ８結　果 パルス−マクダニエル群の患者におけるＨＩＶ患者の記録から集計したデータは 、１５人の患者の平均の絶対Ｔ−４ヘルパーリンパ球数が、経口アロニドリンク による９０日間の処置により３５５から３６０に上昇したことを示している。

１８０日後、これらの同じ患者の平均数は４６２に上昇し、３５０日後にデータ をとった１２人の患者では、Ｔ−４ヘルパ一リンパ球数は、４８９であった（第 １４図）。ワトソンーマクダニエル群では、２６人の患者の平均の絶対Ｔ−４ヘ ルパーリンパ球数は、経口アロニドリンクによる９０日間の処置により２１７か ら２５９に上昇した（第１５図）。これらのデータから、アロエドリンクはＴ− ４ヘルパ一リンパ球数に好ましい効果を有すると結論される。

標準ウォルターリードスケールを改変して、ＨＩＶ抗体の状態及びライフスタイ ルまたは危険な母集団を排除した。

これは、この処置がこれらのパラメーターに影響を及ぼすことが期待されなかっ たからである。さらに、医師がＨＩＶ症候に関連するとみなした場合には、患者 個人の苦情と身体の所見を評価スコアシートに加えた。

改変したスケールを用いると、パルス−マクダニエル群の患者の記録は、初めの 平均スコア５．６が、９０日で３．４に、１８０日で２．２に、３５０日で１． ５に低下した（第１６図）。ワトソンーマクダニエル群では、再調査した２６人 の患者において初期の平均改変ウォルターリードスコア２．９８が１．７６に低 下した（第１７図）。この図において、平均スコアは、２つのサブグループにつ いて示されている。１６人の患者のグループは処置に対する好ましい応答をもつ ことが予想され、１０人の患者のもう一つのグループは、応答が鈍いことが予想 された。両グループの平均スコアは減少した。しかし、好ましい応答が予想され た１６人のスコアは２．６から１．１に変化したのに対し、他方のグループのス コアは３．５から２．６に減少した。これは線の勾配によって示されているよう に、後者のグループについて改善の度合いが遅いことを示している（第１７図） 。

パルス−マクダニエル群の記録では、１５人のＨＩＶ患者のうち６人が初めにお いて検出可能な血清コア抗原をもっていた。９０日後、４人の患者が陽性であっ た。１８０日後、１４人の患者のうち３人が陽性であり、３５０日後、１１人の うち３人が陽性であった（第１８図）。ワトソンーマクダニエル群において同様 の結果が観察された。血清コア抗原の減少がデータから示唆された。しかし、そ の差は有意とは思われなかった（第１９図）。

予備処置絶対Ｔ−４リンパ球レベル（ＡＢＴ−４）及びＰ−２４コア抗原レベル が、どの患者がアロエドリンクの２０液量オンスの毎日投与に好ましく応答する かを明らかにすると思われたので、パルス−マクダニエル群の１５人のＨＩＶ患 者を２グループに分け、アロエドリンクに対する応答群及び非応答群とした。

パルス−マクダニエル群の結果から導かれた仮説は次のとおりであった。「初期 絶対Ｔ−４リンパ球レベルが１５０ｍｍ３より大きく且つ初期ＨＩＶコア抗原（ Ｐ−２４）が陰性または３００ｐｇ／ｄＬより小さい場合、患者はアロエドリン クに対して好ましく応答するであろう。逆に、初期絶対Ｔ−４リンパ球レベルが １５０ｍｍ３より小さく且つ初期ＨＩＶコア抗原レベルが３００ｐｇ／ｄＬより 大きい場合、患者はアロエドリンクに対してあまり応答しないであろう。」ワト ソンーマクダニエル群では、これらの推定予想基準が見込みをもって適用された 。１６人の患者が好ましい予想基準（Ａ　ＢＴ　−４＞　１５０ｍｍ’　、Ｐ　 −２４＜　３００１）（］／　ｄＬ）に合致した。９０日以内に、１３人の患者 （８１％）が予想どおり改善され、３人が混合及び／またはわずかな応答を示し た（表１６）。低い予想（ＡＢＴ　−４＜　１５０ｍｍ’　、Ｐ　−２４＞３０ ０　ｐｏ／ｄＬ）の１０人の患者のうち、７人は予想どおりあまり応答しなかっ た。しかし、２人はすべての改善基準を満たし、１人は混合応答を示しな。結局 、２６人の患者のうち２０人（７７％）が予想どおり９０日の処置後応答した。

２６人の患者のうち１５人（５８％）がすべての評価期間においてすべての改善 基準を満たした（ＡＢＴ−４が１０％以上増加しＰ−２４が陰性または減少し且 つ改変したウォルターリード臨床スコアが減少する）。表１６は、４回（０，９ ０，１８０及び３５０日）のそれぞれにおいてデータをとった１１人の患者のＴ −４／Ｔ−８ヘルパ一／サプレツサーリンパ球比を示している。

表　１６ 第２グループ（ワトソンーマクダニエル群）のアロエドリンクによる９０日処置 後の、２６人の患者の状態に対する予想基準の適用のまとめ が予想された１６人の患者 全基準改善　１３８１％ 混合及び僅かな応答　３　１９％ が予想された１０人の患者 全基準改善　２　２０％ 混合及び僅かな応答　１　１０％ 鈍い応答　７　７０％ ９０日間の治療を受けた２６人の患者 １５人　全改善基準を満足　５８％ ４人　混合及び僅かな応答　１５％ ７人　一様に鈍い応答　２７％ ２０人　予想どおり応答　７７％ 表　１７ パルス−マクダニエル群のそれぞれの期間においてデータをとった１１人の患者 のＴ−４／Ｔ−８ヘルパ一／サプレツサーリンパ球比 患者　処置日数 ＩＤ＃　０　９０　１８０　３５０ ２０　１．１３　０．６６　１．６６　１．０３２６　０．８２　０．６０　０ ．７６　０．６９３１　０．２６　０．９１　０．６３　１．１０３３　０．８ ６　０．４６　０．５２　０．４３３５　１．００　０．８８　１．０４　１． ０７４１　０．８２　０．７５　１．２９　１．１０４２　０．６０　０．３０ 　０．６７　１．０５４３　０．５６　０．５８０．８ｇ　１．６３５０　０． ６８　１．００　１．０９　０．９２５２　０１３３　１．１７　０．７３　１ ．１６５５　１．２ｇ　０．８１　０．４９　１．０４平均　０．８０　０．７ ４　０．８９　１．０２１．０以上の患者数　３　２　４　８ ハルス一マクタニエル群とワトソンーマクダニエル群ノ両者（１５＋２６人）に 、おいて、４１人の患者中２４人すなわち５９％が９０日の治療で上記改善基準 を越えまたはこれを満足した。うまく行くと期待された患者の臨宋及び実験室で の改善のこの傾向は、３５０日まで続いた。骨髄、肝臓、腎臓、またはその他の 器官の損傷または抑制を示す血液学的または生化学的証拠は認められなかった。

アロエドリンクを摂取した４１人のＨＩＶ感染患者は、毒性を示さず、アロエド リンクに起因するとみられる有意の、矛盾のない、または特有の副作用を示さな かった。

実施例　２２ 炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、クローン病及び潰瘍性大腸炎をまとめた用語である 。クローン病は主として回腸及び結腸に発生し、潰瘍性大腸炎は結腸に限定され る。ＩＢＤの原因を説明するために、少なくとも３つの信頼できる仮説が提唱さ れている。その第１は、未知の感染性物、例えば、ゆっくり成長するバクテリア やウィルスが免疫系の引き金を引き慢性の炎症性応答を引き起こすというもので ある。第２は、食品のボーン（ｂｏｒｎｅ）や環境中の汚染物のような毒性物質 により同じようなことがおこるとするものである。第３の仮説は、炎症性応答が 自己免疫状態だとするものである。しかし、この病気の正確な原因は不明である 。

Ａ、患者の選別 患者は、年齢、性、民族または人種的背景を考慮することなく選別した。すべて の患者がボランティアであった。

各患者は医師により簡単な説明がなされた同意書を受け取リ、それに署名するよ う要求された。

ＩＢＤの以下に示す症状及び兆候の組合せを有する患者だけが認められた。

１、排便の回数（下痢） ２、便中の血液（潜血） ３、過剰粘液生成 ４、自然発生的腹痛 ５、触診時腹痛 ６、絶えず続く痙塁 ７、その他（体重減少等） 上記症状を用いてＯから７までの臨床評価スコアを与えた。すなわち、１は１つ の症状を示し、７はすべての症状を示す。スコア０は患者が無症状であることを 示す。

Ｂ、内視鏡評価 内視鏡を用いて以下の基準により患者に前及び後治療のスコアをつけた。

潰瘍 融合性 斑点状 滲出物 その他 上記内視鏡観察を用いて０から５までのスコアを与えた。

すなわち、１は１つの症状を示し、５はすべての症状を示す。スコアＯは患者が 内視鏡検査で無症状であることを示す。

Ｃ０組織学的評価 組織学的所見のスコアは次のように記録した。

滲出物 潰瘍化した粘膜 浮腫 プラズマ細胞 リンパ球 多形核白血球 エオシン好性白血球 肉芽腫 陰窩腫瘍 繊維症 その他 上記臨床、内視鏡及び組織学的基準を用いてＩＢＤの症状を評価しアセマンナン 処置に対する応答を定量した。内視鏡と組織学的サンプリングを伴った身体検査 は、規則的な予定された通院に限定した。患者には、いつでも理由なく且つ通常 の治療に及ぼす影響を考慮することなく、この処置についての約束の撤回が認め られた。アセマンナンは、カリントンラボラトジーズ社から提供された。

Ｄ、臨床結果 ９人のＩＢＤ患者が受け入れられ、毎日カプセルに入りた２００ｍｇのアセマン ナンで処置された。患者の年齢は１４才から４６オまでであり、女性４人、男性 ５人であった。一般的に、患者は腹痛、下痢または多数回の排便を伴っていた。

便は普通血液が混じり、粘液の生成の増加とともに水のようになり、あるいは両 者を伴っていた。初期内視鏡検査は、粘膜の脆さを伴った血管の充血から焦点の 広範囲にわたる融合性潰瘍（全大腸炎と呼ばれる）に至る粘膜変化のスペクトル を示した。大腸のバイオプシーの組織学的検査は、慢性炎症細胞の非特異的増加 から多数の多形核白血球とエオシン好性白血球を伴った明らかな潰瘍に至る損傷 を示した。２人の患者は、微細肉芽腫と陰窩腫瘍をもっていた。

すべての患者は、アズルフィジン、プレドニゾン、６−メルカプトプリン及びア ラキルの一種または二種以上を含む通常の薬剤に対して非応答性であった。イモ ジウムとトランキライザーが、上記薬剤に添加されることがしばしばあった。

薬物投与に対する応答は一様に好ましく、すべての患者においてすべてのスコア が改善された（第２０〜２３図）。平均の前及び後薬物投与スコアは以下のとお りであった。

平均前処置臨床スコア　４．５６（９人の患者の平均）平均後処置臨床スコア　 ０．４４（９人の患者の平均）平均前処置内視鏡スコア　３．Ｈ（８人の患者の 平均）平均及処置内視鏡スコア　０．００（２人の患者の平均）平均前処置組織 学、的スコア　６．２５　（８人の患者の平均）平均前処置組織学的スコア　Ｎ ／Ａ　（全患者がバイオプシーを拒否した） アセマンナンに起因する副作用は研究期間中全（観察されなかった。病気の発現 をよく経験している数人の患者は、最終的に２〜５日痛み及び症状が消えたと報 告した。その他のもの、特に焦点分節疾患（クローン病及び回腸炎）の患者では 、アセマンナンの効果はより遅くそれほど劇的ではなかった。すべての患者が後 処置バイオプシーを拒否し、僅かに２人の患者が後処置内視鏡検査を受け入れた 。次の理由が患者によりあげられた。（１）これらの操作が不快であること、及 び（２）改善された条件のため費用が正当化されない。

２人の患者は気まぐれで症状が出たときのみアセマンナンを摂取した。２人は薬 物を摂取後２４〜４８時間で症状が軽減したと報告しているが、アセマンナン処 置をやめると４〜６週間で穏やかな症状が戻った。続いて、アセマンナン処置を ２〜３日行うと再び症状が軽減した。アセマンナンは、この疾患の急性炎症性の 場面で劇的な臨床改善を与える。

実施例　２３ ヒト末梢血液単球細胞培養物と０１４ラベルしたアセマンナンを用いてパイロッ ト研究を行い、アセマンナンの生体系への導入あるいは吸収を追求した。この実 験の目的は、Ｃ１４ラベルしたアセマンナンの普通の末梢単球／マクロファージ 細胞による取り込みが、（ａ）検出可能であるか、（ｂ）時間に対して定常的か 散発的か、（ｃ）０．５％濃度で毒性があるか、及び、（ｄ）最終的に、単球／ マクロファージ細胞が、培養環境（培地）中に存在するアセマンナンより高い濃 度までそれ自身の細胞中にアセマンナンを濃縮できるかどうかを調べることにあ る。

Ｃ１４ラベルした二酸化炭素で育成したアロエ植物のゲル由来の、Ｃ１４ラベル したアセマンナン１００　ｍｇを、５０ｍ１のポリプロピレン遠心管中に秤量し た。抗生物質ゲンタマイシンｌｏｏｍｇ／ｍｌを含む滅菌水５ｍｌを加えた。５ 日後、この管に、ＲＰＭ　Ｉ　１６４０＋Ａｂ　＋１％Ｈｅｐｅｓ　＋１０％加 熱不活性化ウシ胎児曲清＋１％Ｌ−グルタミンの５ｍｌを加えた。

時々攪拌して、可溶化を冷蔵庫温度（５℃）で１週間保持して行った。１４日ロ ー、１０ｍｇ／ｍｌアセマンナン溶液の２．５ｍｌを３つの滅菌１０ｍ１管のそ れぞれに分配した。２．５ｍｌの単球／マクロファージ培地を加えて５ｍｌ中の 最終濃度が５ｍｇ／ｍｌとなるようにした。これら５ｍｌの調製物を次に、末梢 血液起源の単球／マクロファージ細胞を約５００．０００含む３個の２５ｃｍ３ の組織培養フラスコのそれぞれに移した。

Ｂ、末梢血液単球／マクロファージ細胞の調製ダラス・ワースメディカルセンタ ーの血液学部から、ＥＤＴＡ中に集めた血液を入手した。正常な血液学的パラメ ーターを有する血液のみを用いた。セプラテック・コーポレーションのセプラセ ルーＮＭ（登録商標）システムを用いた２段分離法により、比較的純度の高い（ ８８％±９．２７）単球細胞画分を得た。このサスペンションを、３個のコーニ ング１２５１００２５ｃｍ３ｍ織培養フラスコのそれぞれにフラスコあたり約７ ５０，０００の細胞密度となるように入れた。

アッセイ中の細胞の仮定した最終数の細胞マスを実現するため、２個の２５ｃｍ ３フラスコからの細胞（それぞれ５０％未満コンフルエント）を培養しコールタ −モデルＺ　Ｎ、１電子細胞カウンターで計数した。この２個のフラスコは約７ ５０．０００の細胞を与えた（はぼ１個のコンフルエントフラスコに等しい）。

８０％コンフルエンスは６２５，０００細胞に等しく、従って計算に使用した５ ００，０００細胞／フラスコは合理的と考えられる。単球／マクロファージ培地 （ＲＰＭ１１６４０＋抗生物質＋１％１ｌｅｐｅｓ　＋ｌＯ％加熱不加熱不活性 化ウシ胎児血清＋１グＬタミン）を加え、フラスコを５％ＣＯ２インキュベータ ー中１週間保持し、単球をマクロファージの形まで成熟させた。成熟の週に１回 培地を交換した。７０口に、各フラスコを新鮮な単球／マクロファージ培地で充 分に洗浄ｊ７た。残存する粘着細胞（これは付着して広がり、表面積の約８０％ を占めている）は吸引して培地を除去した。５ｍｇ／ｍｌ濃度のＣ１４ラベルし たアセマンナンの５ｍｌの液を３個の粘着細胞フラスコのそれぞれに加２４、４ ８．７２時間後、３個のアッセイフラスコのそれぞれを次のように処理した。ア セマンナン溶液をインキュベーションフラスコから取り出し、１５ｍ１の滅菌円 錐型ポリスチレン遠心管（上清管）に移した。フラスコを１ｍｌの単球／マクロ ファージ培地により回転攪拌しながら洗浄し残存するアセマンナン溶液を集めた 。洗浄液を上清管に加えた。

１ｍｌのトリパンブルー（ＰＢＳ中０．０１％）をこのフラスコに加え５分間放 置しフラスコを相コントラスト顕微鏡で検査した。１％未満の粘着細胞が陽性で あった（生存していない）。トリパンブルーを除去した。このフラスコをＩＥＩ １１パックスＥＤＴＡで洗浄し、洗浄液は捨てた。パックスＥＤＴＡを粘着細胞 のフラスコに加え、３０℃で約３分放置した。パックスＥＤＴＡを除去し、１５ ｍ１の滅菌円錐型ポリスチレン遠心管（細胞マス管）に移した。１２．５％のト リプシンを含む３ｍｌのパックスを一度に１ｍｌ加え、粘着細胞を解放した。最 後に加えたのちゴムのポリスマンを用いて残存する粘着細胞を掻きとって解放し た。パックス／トリプシン中の細胞の最終濃度は細胞マス管中的４ｍｌであった 。

相コントラスト顕微鏡でフラスコを検査したどころ、フラスコ中には細胞は殆ど 残存していなかった。細胞フラスコに使用しなかったすべての０１４ラベルした アセマンナン溶液を対照として保存した。

すべての管とフラスコを酸加水分解中冷蔵した。すべての管を凍結しビルチス凍 結乾燥機で凍結乾燥した。凍結乾燥物に２ＮのＴＦＡ　（）リフルオロ酢酸）５ ｍｌを加えた。

可溶化後、容管の内容物をパイレックスガラス製、ねじ栓付管に移し７０℃のオ ーブンに入れた。内容物を消化させ約１ｍｌになるまで容積を減少させた。管を オーブンから取り出し、冷却し、多重渦巻き混合により管壁の乾燥物を溶解させ た。この時点て、管は約１ｍｌの黒ずんだ液体といくらかの不溶沈澱物を含んで いた。３５％Ｈ２Ｏ２の０．２ｍｌを上清管のそれぞれ及び対照管に加えた。管 に栓をして暗所に一晩放置して、消化したＣ１４を含む残存液体の最大限の脱色 を行った。水０．３ｍｌを細胞マス管のそれぞれに加えた。

７個の消化管のそれぞれの内容物全体を２０ｍ１ガラスシンチレーシヨンバイア ルに移した。各消化管を３ｍｌのシンチバースバイオＨＰ（フィッシャーサイエ ンティフィク）シンチレーション流体で洗浄し、レンチｌノージョンバイアルに 加えた。次にこのバイアルをシンチレーション流体て容量（２０ｍｌ）いっばい まで満たした。内容物を数回揺り動かして混合し一晩放置して不溶物を沈澱させ てから、パラカード・ミナクシ・トリーカーブ４０００シリーズベータカウンタ ーで計数した。

７個のサンプルのＣＰＭに基づき有効なＣ１４ラベルしたアセマンナンの取り込 み百分率を計算した。この百分率を時間に対してプロットシた。計算とプロット から細胞マスによる取り込みは、２４時間で２．０％、４８時間で５．１８％、 ７２時間で３．４８％と決定された。さらに、７個のサンプルのカウントを合計 して計算をした。この全百分率は使用したＣ１４ラベルしたアセマンナンの全１ ００ｍｇを示している。合計カウントを用いてカウントした細胞マスのｍｇｆｔ をめた。

４８時間５．１６％の最大の取り込みは単球／マクロファージ細胞マスにより吸 収または摂取されたＣ１４ラベルしたアセマンナンの０．９７ｍｇに等しかった 。細胞マス中に５００，０００の生存細胞が存在しそれぞれが０１４ラベルした アセマンナンの取り込みを行ったとすると、各細胞中のアセマンナンは１．９Ｘ １０’ｍｇであった。ガイギーサイエンティフィックテーブル、３巻、２０５頁 は、単球の容積を４７０フエムトリツトル（ｆＬ）と述べている。各細胞の容積 は単球がマクロファージに広がって行くので５００ｆ＋、と計算される。これは 、３８００フエムトグラム／ｆＬのＷ／Ｖ値を示す。これを、Ｃ１４ラベルした アセマンナンのＷ／Ｖ値、５　ｍｇ　／　ｍｌと比較すると、細胞中の濃度は上 清中より７６０倍高くなっている。

このパイロット研究に基づき、５ｍｇ／ｍｌの濃度の０１４ラベルしたアセマン ナンの検出可能量は、単球／マクロファージ細胞に対して毒性がなく、消化され た細胞マスは重量／容積で消化されたアセマンナン溶液のＷ／Ｖ値より７６０倍 高かった。

実施例　２４ ＶＥＲＯ細胞の感受性培養物に麻疹ウィルスを加える前に、麻疹ウィルスを種々 のアセマンナン濃度でインキュベートシた。この実験の目的は、アセマンナンが 感染を抑制するかすなわち感受性細胞培養物に導入する前に、アセマンナンで処 理した麻疹ウィルスを不活性化するかどうかを調べることである。アセマンナン 処理した麻疹ウィルス境界濃度２５ｍｇ／ｍｌにおけるウィルスの細胞変性効果 （ＣＰ　Ｂ）が存在しないことから明らかなように、ＶＥＲＯ単層に感染しなか った。ＣＰＥの完全な不存在はウィルス接種源中アセマンナン５ｍｇ／ｍｌで達 成された。

アフリカグリーンモンキーの腎臓細胞（ＶＥＲＯ細胞）を標的細胞として使用し た。麻疹ウィルスを滴定して、ウィルス／細胞単層上に３０〜５０プラ一ク／ｍ ｌ　（２０ＴＣＩ　Ｄ単位／、　０５ｍ１）のプラークカウントを得た。次に、 種々の濃度のアセマンナンを、この所定量のウィルスを含む培地に導入した。

アセマンナンの濃度は完全な組織培養培地で作った。風疹弱毒ウィルスワクチン の液を各滴定に使用した。混合物を３０℃で０．５時間予備インキュベートし、 組織培養室の予め調製したＶＥＲＯ単層に加えた。

コンフルエントＶＥＲＯ細胞単層上で丸５日間インキュベートした種々の濃度の アセマンナンと麻疹ウィルスを混合した結果を第２４図及び表１８に示す。

種々の濃度のアセマンナンによる反復攻撃により、保護濃度は２ｍｇ／ｍ１〜４ ｍｇ／ｍｌであり、これが、麻疹ウィルスの感染を抑制する遷移ゾーンであるこ とがわかった。５ｍｇ／＋ｍｌのアセマンナン４度がアセマンナンで予備処理し た麻疹ウィルスで攻撃されたＶＥＲＯ細胞単層に対する保護を与えることが明ら かである。

表　１８ ２．５　１２．５　３０　０　０　０ １．２５　６．２５　１Ｂ　１　１　６．２５０、Ｂ２５　３．１２５　１２　 ４　４　３３．３０９／１７／８６　５　２０　１００＋　０　０　０　０２． ５　２０　３０　２５　２５ １．２５　Ｇｏ　３０　５０　５０ ０．６２５　１００＋　１００＋　１００＋　１００＋０．３１２５　ｉｏｏ＋ 　１００＋　１００＋　１００＋０．１５２５　１００＋　１００＋１００＋　 １００＋１０／（１８／８６　５．０　２０　１００＋　０　１　１　＜１３． ５　１０　１　５．５　［ｉ ３．０　９　０　４．５　５ ２．５　５　９　７　７ ２Ｊ　１０　０　０　０ １．０　５　０　０　０ １０／１２／８Ｂ　５．０　２０　５．５　０　０　０　０　０　０４．５　０ 　０　０　０　０　．０ ４．０　０　０　０　０　０　０ ３．５　１　０　０　０　０．２５　４．５３．０　１　０　０　０　０．２５ 　４．５２．５　０　１　１　１　０．７５　１１２．５　１２．５　００００ ０　０ １．０　［ｉ、２５　０００００　０ 表　１８（続き） このパイロット研究における麻疹ウィルスに対するアセマンナンの効果は、未処 理（Ｖ　Ｅ　ＲＯ細胞対照）、麻疹ウィルス（陽性対照）及び５ｍｇ／ｍｌアセ マンナンで処理した麻疹ウィルス感染細胞を比較することにより行った。プラー クカウントアッセイにより決定されたアセマンナン予備処理ウィルス感染培養物 中のプラークの形成は著しく低下した。この処理ウィルスによる培養物の感染の 完全な防止は、ウィルスを５ｍｇ／ｍｌのアセマンナンで予備処理したときに達 成された。

実施例　２５ ＶＥＲＯ細胞をアセマンナン５ｍｇ／ｍｌを添加する前に麻疹ウィルスを４０Ｔ 　ＣＩ　Ｄ／ｍｌ含む培地で種々の時間（０，５〜６時間）インキュベートした 。細胞を麻疹ウィルスに暴露した後にアセマンナンとインキュベーションすると 、ＶＥＲＯ細胞を感染から保護しなかった。ＶＥＲＯ細胞を次に新鮮な培地で洗 浄１．て結合していないウィルスを除去した。５ｍｇ／ｍｌアセマンナンを含む 培地をこの培養物に加え、培養物を５１後細胞変性について検査した。

この実験の結果を第２５図及び表１９に示す。

表　１９ ＶＥＲＯ細　の簡単ｆｒインキュベーションの効果度ＢプＬ（少２」ンλブｙす ：こ竺ヱ２ヲ惑？牝哩イｌ　ウィルス仝与量　＃　１２３４　ＡＶ、　ＩＮＦ。

０９／２９／８６　５．０　０ｔ　２０１．’０．５１Ｌ　２５　２５　２５　 １０　２１．２５　＋００５．０　０．５ｈｒ　１　３１０　２　３．５　１６ ５．０　１．Ｏｈｒ　１１０９１６　９　４２５．０　４．Ｏｈｒ　８２１２５ 　７　１５．２５　７＋５．０　６．Ｏｈｒ　Ｘ　１８　１５　４　１２．３　 ５８１１／１４／８６　５．０　０ｔ　２０１，１０．５ＩＩＬ　１３　１７　 １７　２５　１８　１０００．５ｈｒ １．０　ｈｒ　バクテリア汚染されたアセマンナン４．０ｈｒ ６．０ｈｒ ０６／１０／８７　５．０　０ｔ　２ＯＬ１０．５１ＩＬ　１００１００　１（ Ｋ）　１００５．０　０．５ｈｒ　８　８　１０　９　８．７５　１４５．０　 １．Ｏｈｒ　１０　８　９　１４　９．５　１５．５５．０　４．Ｏｈｒ　２５ 　１５　２５　３０　２３．７５　３８５．０　６．Ｏｈｒ　２４　２４　２５ 　３１　２６　４２グラフは、２個のアッセイの平均　ｏｔ　＝ｉｏｏ％０．５ ｈｒ＝１５％ １、Ｏｈｒ　＝　２８．８％ ４、Ｏｈｒ　＝　５４．５％ ６．０ｈｒ＝　５０％ ０．５及び１時間アセマンナン予備インキュベーションした培養物では、より低 い感染率であった。アセマンナンでより長い時間、後インキュベートした培養物 ではＶＥＲＯ細胞の臨床的に有意な保護は認められなかった。

麻疹ウィルスで前インキュベートしたＶＥＲＯ細胞は、感染期間終了後アセマン ナン５　ｍｇ　／　ｍｌを添加することにより有意に保護されなかった。

実施例　２６ 市販家禽における防御免疫応答の誘発に関する疾病及び処置に関与する問題から の損失は、全国的に家禽産業に２０億＄／年以上を費やさせている。伝染性滑液 包疾患ウィルス（ＩＢＤＶ）や免疫抑制と関連する死亡及び／又は病的状態を誘 発するレトロウィルス等の伝染作用物は家禽産業に苛酷な経済的損失を引き起こ す。ＩＢＶＤはファブリシス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）の包中のＢ細胞前駆体を特 異的に的とし、免疫系の体液腕（ｈｕｍｏｒａｌ　ａｒｍ）の選択的崩壊をもた らす。これはエイズ（ＡＩＤＳ、後天的免疫不全症候群）と同種の免疫抑制状態 を生ずる。

家禽産業は、生きているウィルスの経口投与又は不活性化したウィルスの皮下注 入により、定常的に群れをＩ　ＢＤＶに対して予防接種している。両予防接種法 は、免疫応答を効果的に引き比すことができるが、ワクチンの使用に関連する固 有の問題を引き起こす。生きているウィルスワクチンは、特定の株に対する防御 免疫応答の引き畠すことにおいてより効果的であるが、ウィルス自身が有毒性に 復帰することがあり、ワクチンの複製は一時的な免疫抑制を生じ、二次病原体に 対する群れの罹患率を上昇させる。

殺したウィルスワクチンは、生きているウィルスワクチンに関連するこれらの問 題はないが、免疫反応性は減少ｊ７、投与量依存性である。複雑なハイテク溶液 を含む、多くの代わりの予防接種が評価されたが、殺したウィルスワクチンに追 加成分を含む包含物による免疫応答の管理された調節は、潜在的な能力を有する 単純な溶液を代表する。

予備的な観察に基づいて、カリジンＴＭ抽出物は免疫調節剤として作用する。こ の研究計画は、この化合物が殺した伝染性滑液包疾患ウィルス（ＩＢＤＶ）ワク チンの免疫窓５ＰＡＦＡＳ、　Ｉｎｃ、から購入した卵を畔化したヒヨコを全て の実験に用いた。卵は４化し、そして−日後のヒヨコはホースフォールユニット （Ｈｏｒｓｆａｌ　ｌ　１Ｊｎｉｔｓ）に置いた。

Ｂ、抗原 バルサバックＫ　（ＢｕｒｓａＶａｃ　Ｋ）　（オイルエマルジョン）−カリシ ンＴＭ抽出物を使用：ロット＃　８０２２６−００１；　１又は２ｍｇ／ｍ）再 懸濁（実験設計参照） 齢）のヒヨコを５群に分げた。各群のヒヨコは下記の通り予防接種した。

グループ１−コントロール、偽接種。

グループ２−背部に、オイルエマルジョンワクチン０．５ｍｌを皮下接種。

グループ３−オイルエマルジョンワクチン（Ｂｉｏ−Ｂｕｒｓ　Ｋ：Ｋｅｙ　Ｖ ｅｔ、、　ｎｅｓｖｉｌｌｅ、　ＧＡ）　０．２５ｍ１と水に懸Ｋ　Ｌ、　ｆ： 　力’）　シンＴＭ（０，５ｍｇ／　ｍｌ）　０．２５ｍ１　（！：（７）混合 物（１：　１）を皮下接種。

グループ４−酸性水中に懸濁したマイクロカプセル０．５ｍｌを経口接種。

グループ５−酸性水中に懸濁したマイクロカプセル０．５ｍｌと０．５ｍｇカリ ジンＴＭ抽圧物とを経口接種。

研究＃２（グループ２）、研究＃２のため、１１７羽のＳＰＦヒヨコ（１週齢） を６群に分けた。各群のヒヨコは下記の通り予防接種したニ グループ１−コントロール、偽接種。

グループ２−背部に、水に懸濁したカリジンＴＭ抽出物（２ｍｇ／ｍｌ）　０． ５ｍｌを皮下接種。

グループ３−背部に、オイルエマルジョンワクチン（Ｂｉｏ−Ｂｕｒｓ　Ｋ；　 Ｋｅｙ　Ｖｅｔ、、　Ｇａ１ｎｅｓｖｉｌｌｅ。

ＯＡ）　０．５ｍｌを皮下接種。

グループ４−背部に、オイルエマルジョンワクチン０，２５ｍ１ト水中に懸濁シ タカリシ２１Ｍ抽出物（１ｍｇ／　ｍ！　）　０．２５ｍ１との混合物（１：　 １）を皮下接種。

グループ５−背部に、オイルエマルジョンワクチン０．２５ｍ１と水中に懸濁し たカリジンＴＭ抽出物（２ｍｇ／ｍｌ）　０．２５ｍ１との混合物（１：　１） を皮下接種。

グループ６−背部にオイルエマルジョンワクチン０．５ｍｌと、大腿部に水中に 懸濁したカリジンＴＭ抽出物（２ｍｇ／ｍｌ）　０．５ｍｌを皮下接種。

両研究において、１週間毎に各ヒヨコから血清を採取し、そして血清ＩＢＤＶ　 ＥＬＩＳＡ価は、市販のＡｇｒｉＴｅｃｈよりＤＶ　ＥＬＩＳＡキットを用いて 測定シタ。ＥＬＩＳＡ価は、ＦＩｏｃｋＣｈｅｋ　ｓｏｆｔｗａｒｅ　（Ａｇｒ ｉＴｅｃｈ、　Ｉｎｃ、がら販売されているプログラム）を用いて測定した。

Ｄ、結果 水中懸濁又はオイルエマルジョンのカリジンＴＭｔＩＩＩ出物の皮下又は経口投 与の結果、ヒヨコは苦痛又は副作用を示さなかった。

研究＃１（グループ１）において、平均ＥＬ　Ｉ　ＳＡ価は、接種後６週間に亘 り表２０に示した： 表　２０ ＃Ｉ　Ｃｏｎｔ　００　０　０　７１０７１９１＃２　Ｅｍ　０　０　５４　３ ７２　５５６２１８４　９８３＃　３　Ｅｍ＆Ｃａ　０　５　２３１１１４２２ ２７６４５０８３１０１＃４　Ｈｉｅ　００　０　２　５　Ｅｉｌ１２７＃５　 Ｍｉｃ＆Ｃａ　０　０　１　０　１３　１５０　０−次予防接種の２週間後、Ｉ 　ＢＤＶ価は、オイルエマルジョン又はカリジン１Ｍｍ出物を補充したオイルエ マルジョンで処理されたヒヨコにおいて上昇が始まった。カリジンニー出物を補 充したオイルエマルジョンワクチンで処理したヒヨコは、オイルエマルジョンワ クチンで接種されたヒヨコより、オーバーオールの平均価が３．９倍高かった。

接種３週間後、ヒヨコは、−次接種と同じ抗原混合物を受けることにより再接種 された。二次接種１週間後、平均値比の差は約４．１に増加した。その後、両グ ループの平均価がそれらのピーくに達した二次注入２週間後、比は約２．１に落 ちた。二次接種３週間後、再接種されたグループの平均価は減少しだした。しか しオイルエマルジョン単独で接種されたヒヨコの価の減少は、カリジンＴＭ抽出 物を補充したオイルエマルジョンで免疫したヒヨコが３１％であるのに対し、５ ５％とより急激であった。カリジンニー出物を補充したオイルエマルジョンで処 理された鳥において、高価の維持はカリジンＴＭＩＩＩｌ出物の長い免疫刺激作 用によるものと見られ、カリジンニー出物の持続効果を示すものである。

二次接種３週間後、オイルエマルジョンワクチングループ（＃２）及びカリジン ＴＭｈｌｌ出物を補充したオイルエマルジョンワクチングループ（＃３）のヒヨ コは２つのグループ（Ａ及びＢ）に再分割された。グループＡのヒヨコは同種の 生きているワクチン株で刺激され、グループＢのヒヨコは毒性の野生株で刺激さ れた。刺激３日後、全てのヒヨコは剖検された。ワクチン株で刺激されたグルー プＡのヒヨコにおいては免疫系に影響が認められなかった。しかし、グループＢ の全てのヒヨコは組織病理学的に説明される病変があった。これらは予期される 結果であるが、もし−次接種だけされたヒヨコが刺激されたら、オイルエマルジ ョンワクチンのみを投与されたヒヨコにおける病変の大きな優勢が認められたで あろう。もしヒヨコが生きたウィルスワクチンで接種されたなら、同種のウィル ス刺激に抵抗するヒヨコにおけるリンパ系組織の病変が認められるであろう。

研究＃２において、グループの大きさ及び接種プロトコールは、変更された。テ ーブル２１に示されるように、結果は一致していない。

表　２１ Ｓｔｄ。

グループ　抗原の表示　ＩＢＤＶ　ＥＬＩＳＡ価　Ｄｅｖ。

＃Ｉ　Ｃｏｎｔ　０　１１　１　Ｓ、Ｄ、０＃２　Ｃａ（０，５ｍｇ）　１１　 ３７　１　Ｓ、Ｄ、０＃３　Ｅｍ　２１　１１　１８１　Ｓ、Ｄ、５７１＃４　 Ｅｍ＆０．２５ｍｇＣａ　４６　０　５　Ｓ、Ｄ、１１＃５　Ｅｍ＆０．５ｍｇ Ｃａ　１８８　０　２７９　Ｓ、Ｄ、８２４＃６　ＥｍＲｔ＆０．５ｍｇＣａＬ ｔ　３８　７９　５０４　Ｓ、Ｄ、８４２注人後２週間の鳥において、違いがあ ることが最初に判る。予期される以上の不全の動物がある。ヒヨコが一群になっ ているいくつかのサイトでは、感染されていることが認められた。それらは圧迫 壊死を有し、二次細菌感染に加え、毒物放出をもたらす。後者の問題を解決する 試みとして、ヒヨコは両群化し一般的な抗菌剤で処理した。しかし、上述の問題 は多分総体的な免疫抑制に起因し、この研究の結果を無効にする。従って、実験 は終了させた。

研究＃２に関連するメガティブファクターにもかかわらず、カリジンニー出物は 免疫系の総体的刺激効果を起こし、それはカリジンＴＭ抽出物投与部から遠く離 れた部位に抗原を投与した試験における増強された免疫応答から認識することが できる。当初の印象はカリンンＴＭ抽出物はオイルエマルジョンワクチンと混合 せねばならないということであったが、増強された免疫応答は抗原とカリジンＴ Ｍ抽出物とを別個に供給しても引き出せることは明らかである。この結果は、こ の化合物について、代わりの接種方法及び投与方法の調査を考慮させる。

カリジンニー出物は、アジュバント活性を有すると思われる。永続性を増強し、 又は体内におけるＩ　ＢＤＶ抗原の効果的な提示は多分リンホカインの放出及び 増大されたリンパ球応答をもたらすことは明らかである。カリジンＴＭ抽出物は 、オイルエマルジョンワクチンと混合せねばならない。増強された免疫応答は抗 原とカリジンＴＭｔ１１１１出物とを別個に供給しても引き出せると思われる。

この結果は、この化合物について、代わりの接種方法及び投与方法の調査を考慮 させる。

カリジンＴＭ抽出物は、アジュバント活性を有すると思われる。永続性を増強し 、又は体内におけるＩＢＤＶ抗原の効果的な提示は多分リンホカインの放出及び 増大されたリンパ球応答をもたらすことは明らかである。

実施例　２７ ヒトの吸収不良症候群は衰弱症状をもたらし、結果的には死に到らしめる。スプ ルー（熱帯性下痢）や腹腔病のような人間特有の症候群は、複合多糖類及び酵素 阻害ペプチド類を含有するある種の穀類の摂取を控えることによって改善するこ とができる。このような食事療法をとることにより上記の症状は軽減される。患 者にとって残された主な生理学的問題は細胞の成熟に必要な糖たんばく質の合成 阻害による小腸粘膜の成熟停止（１３２頁）である。このような小腸作用の欠陥 により吸収面は減少するばかりでなく、必須アミノ酸、脂肪酸、ミネラル、ビタ ミン及び食物中に存在するその他の重要な分子状物質の吸収が不可能になる。

糖たんばく質の合成に必要な物質であるマンノースを補助的に与えることにより 、ＫＭＡＸ速度を上昇し、糖たんばく質の合成速度を速めることが予想される。

酵素の合成は、マンノース代謝酵素によるリボソーナル（ｒｉｂｏｓｏｎａｌ） 　／糖たんばく質の合成を促進する、重要なマンノース基質のアベイラビリティ （ａｖａｉ　１ａｂｉ　１ｉｔｙ）によって促進される。このように糖たんばく 質の合成が促進されアベイラビリティ−が増大することにより、小腸粘膜細胞が 成熟し、スプルーや腹腔病に付随する症状が緩和される。糖たんば（質合成にお ける熱力学的変化は、現在有効な治療法がまだ発見されていない他分野の病気に おいても利用することができる。

実施例　２８　多発性硬化症 多発性硬化症は原因不明の神経病であり、これに対する有効な治療法は無い。患 者のデータやデモグラフィーを分析すれば、この病気は、恐らくウィルス由来の 伝染性媒体（ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ａｇｅｎｔ）　、によって発病する可能性 が高いということが分る。中枢神経系、を髄液及び血清を分析することにより、 自己免疫成分の存在も一つの要因と考えられる。この自己免疫応答はミニリン鞘 の崩壊をもたらす。

組織培養物、動物及びヒトに見られるアセマンナン（ａｃｅｍａｎｎａｎ）の抗 ウイルス性に基き、多発性硬化症が免疫変調複合多糖に応答するか否かを調べる 試みが初期になされた。５段階の症状の多発性硬化症患者の症状を臨床的に個々 に診断したところ急激に症状が緩和され、これはアセマンナンに見られた神話的 な有効性によるものである。

この臨床的応答の理論的根拠を下記に示す。

１、アセチル化ポリマンナン（アセマンナン）の単核細胞／マクロファージ系誘 発によるウィルス媒体に対して非特異的なガンマインターフェロン及び特異的な アルファインターフェロンの誘発。

２゜免疫液に対する好ましい効果の活性化及び単核細胞／マクロファージ系によ る、原因物質に対するＩ　Ｌ　−１産主の細胞抗ウィルス作用。

３、単核細胞／マクロファージ系によるインターロイキン−１の誘導によって自 己免疫組織の崩壊の防止に必要なＴ−８抑制リンパ球の規制力が弱められること が分った。

４、神経生長ファクター（ＮＧＦ）は８つの活性化単核細胞からＬＰＳによって 誘発される。マンナンはアセマンナンと同様に、ＬＰＳにおいて生物学的活性を 有する成分である。ニューロンから、活性化された神経突起が伸長し生長する過 程に、シュワン細胞によるミニリンの製造があり、それにより損傷されて機能を 失った神経が取り囲まれて神経インパルスの伝達機能が回復せしめられる。アセ マンナンによるこの第４の効果は、多発性硬化症患者の神経機能の修復及び回復 に有効であることは疑う余地がない。

アセマンナンによる治療を受けた多発性硬化症患者の神経機能の回復は、動物に 実験的に設けた特定の選ばれた鍵の病変やヒトの外傷が治癒する過程と同様に進 行する。

アセマンナンには数多くの用途がある。第１の用途は、免疫刺激性の抗腫瘍活性 剤としてであり下記の疾病に対して用いられる：ウマの類肉腫、ウシの眼球の鱗 状細胞癌、イヌの性器肉腫、ネコの白血病及びウシの白血病；寄生虫によるある いは伝染外皮フ疾患、例えば、ブドウ球菌性原皮症、デモデコシス（ｄｅｍｏｄ ｅｃｏｓｉｓ）　、痔ｔ４病、耳ダニ、ノミアレルギー；伝染性アレルギー性呼 吸器疾患、例えば、ウシの輸送性肺炎、ウシの慢性咳、ウマの鼻出血；伝染性消 化器疾患、例えば、ウィルス性又はバクテリア性の下痢、クリプトスポリジオシ ス症（ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ）　、コクシジオイデス症；その他 の全身性疾患、例えば、トキソブラスマ症。

アセマンナンの第２の用途は、キャリシン・エキスがウイールス性、寄生虫性も しくはバクテリア性の抗原を含有する非活性化ワクチン類に対する応答を促進す るアジュバントであり、ワクチンとしては下記のものがある：ウシ類のワクチン −ウシの感染性鼻気管炎、パラインフルエンザ３、呼吸器ジンシチウムウイルス 、ウシのウィルス性下痢、ロタウィルス、コロナウィルス、青舌病、狂犬病、ク ロストリジウム症、ヒツジの蹄軟化病（ｆｏｏｔｒｏｔ）　、伝染性急性結膜炎 、アナプラズマ症、バベシア症、パスツレラ症、サルモネラ症、大腸菌症、コリ ネバクテリチリウムＳＰ症、ビブリオ症、プルセラ症、レプトスピラ症、ヘモフ ィルス会ツムナス症、足及び口の病気、乳頭症ウィルス性及びブドウ球菌性の乳 腺炎に対して用いる；ヒツジのワクチン−クロストリジウム病、蹄軟化病、狂犬 病、足及び口の病気、丹毒、跳躍病、乾酪性リンパ節炎に対して用いる；ブタの ワクチンーパーボウイルス、丹毒、伝染性胃腸炎、擬狂犬病、気管支敗血症、大 腸菌症、バスツ１／う症、足と口の病気、クロストリジウム病、レプ）・スピラ 症、ヘモフィルス菌性胸膜炎に対して用いる；ウマのワクチン−インフルエンザ 、鼻肺炎、破傷風、腺疫、ウマの動脈炎、東部ウマ脳炎、西部ウマ脳炎、ベネズ エラ・ウマ脳炎、狂犬病に対して用いる；ネコのワクチン−鼻気管炎、ネコの白 血病、カリチウイルス、クラミジア症、レンチウィルス（ｌｃｎｔｉｖｉｒｕｓ ）　、汎白血病、狂犬病、伝染性腹膜炎に対して用いる；イヌのワクチン−ジス テンパー、アデノウィルス（１型及び２型）、狂犬病、パーボウイルス、はしか 、ロドコッカス（ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　ｅｑｕｉ）　、破傷風、狂犬病に対 して用いる；鳥類のワクチン−伝染性滑液嚢病、ニューキャッスル病、伝染性気 管支炎、伝染性、喉頭気管炎、マレク病（Ｍａｒｅｋｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）　、 コクシジウム症に対して用いる。

アセマンナンの第３の用途は、キャリシンがウィルスの複製（複製するためには ウィルスはそのたんばく質をグリコジル化しなければならない）を阻止する抗ウ ィルス剤である。この効果はレンチウィルスに対して示されている。

この抗ウィルス剤は下記のウィルスの複製を抑制するために用いることもできる 。レオウィルス、オルビウイルス及びロタウィルスをはじめとするレオウィルス 属（ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）　（これらのものの例としてはウマのアフリカ病及 び青舌病があげられる）；エンテロウィルス、ロタウィルス及びカリンウイルス をはじめとするピコルナウィルス属（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）　（これ らのものの例としては、ポリオウィルス、足及び口の病気のウィルス並びにコク スサッキイ（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ）ウィルスがあげられる）；アルファウィルス 及びラブドウィルスをはじめとするトガウィルス類（これらのものの例としては ウマの脳炎及びセントルイス脳炎があげられる）；オルトミクソウィルス（この ものの例としては、インフルエンザウィルス、ニューキャッスル病ウィルスがあ げられる）；はしかウィルス及び肺炎ウィルス（ｐｎｅｕｍｏｖｉ　ｒｕｓ）を はじめとするパラミオウィルス（これらのものの例としては流行性耳下腺炎、は しか、パラインフルエンザ及び呼吸器シンシチウムウイルスがあげられる）；オ ンコウイルス（ｏｎｃｏｖｉｒｕｓｅｓ）及びレンチウィルスをはじめとするレ トロウィルス（これらのものの例としてはヒト免疫不全ウィルス及びネコの白血 病ウィルスがあげられる）；ラブドウィルス（ｒｈａｂｄｏｖｉｒｕｓｅｓ）　 （このものの例としては狂犬病ウィルス及び小胞性口内炎ウィルスがあげられる ）；リフトバリー病（Ｒｉｆｔ　Ｖａｌｌｅｙ　ｆｅｖｅｒ）のようなバニアウ イルス（ｂｕｎｙａｖｉｒｕｓｅｓ）　；鳥類の伝染性気管支炎ウィルスのよう なコロナウィルス；イヌのパルボウイルス、ネコの汎白血病、及びミンクの腸炎 などのパーボウイルス；パピロマ及びパボアウイルスをはじめとするパポバウイ ルス類；アデノウィルス；ウシの伝染性鼻気管炎、単純ヘルペスウィルス、ネコ の鼻気管炎、水痘帯、エプスタイン・バー（Ｅｐｓｔｅｉｎ　Ｂａｒｒ）ウィル ス及びサイトメガロウィルスのようなヘルペスウィルス；オルトボックス（ｏｒ ｔｈｏｐｏｘ）ウィルス及びパラボックス（ｐａｒａｐｏｘ）ウィルスをはじめ とするポックスウィルス（これらのものの例としては、ワクシニア及び天然痘（ ｖａｒｉｏｌａ）があげられる）；Ａ型及びＢ型肝炎をはじめとする肝炎ウィル スなどである。

浄書（内容に変更なし） 特表平３−５０ｉ（Ｅ２４　（４４） ＯＭ　２．６ｘｌＯ’Ｍ　２．６ＸＩＯ−”Ｍ　２．６ＸＩＯ−７ＭＯＭ　２． ６ｘｌＯ−９Ｍ　２．６ｘｌＯ−８Ｍ　２．６ｘｌＯ−７Ｍ２．６ｘｌＯ−９２ ，６Ｘ１０−８２．６ＸＩＯ−７綺間（分） 始小ｉ、βζ谷のう１丸２Ｌ 茎ＩＪ′４：’＋：お乃テストＺ＝３５０８閏のアミル刀ンク設村ｈｒ：１ｓ人 ロ企、匙傷 Δ　処１し；、欠↑し乙りしい１ど；−、Ｗ力杼々ぐ４＾ｊ：１０人ｔＬ本二つ （１ての、ヌ＄１釣υ”（炎ｊ丁−４へ１−ぐ−ド膠Ｖウント ０　火ビ１めｂイ垂ヒ、リイさ、も確（二っｔｌどの毛りの倉邑文士下−斗脚と と１方クント区　ア乞マンナンラ瞥々、豹 邑　アを又ンナンＩ：村する（ｕ（穴・各図　アー＃Ｌマン丈ン力身、肖 匡　ア乞マンナン【：村する永人久浩 と４孔？！　炎覇」Ｌ爪い氾　アロンナンバイ口、ンｌ−，り側免０工り衿手続 補正書動式） 平成３年１月３０日

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．単核細胞及びマクロファージ末梢血付着細胞によりホ乳動物におけるインタ ーロイキンＩ及びプロスタグランジンＥ２の生産を活性化、誘発及び高める方法 において、単核細胞及びマクロファージ刺激を行うに十分な量のアセマンナンを ホ乳動物に投与することを含む方法。
2. ２．アセマンナンが約０．１ｍｇ／ｋｇｂｗｔ／日〜約１００．０ｍｇ／ｋｇｂ ｗｔ／日の範囲で経口投与される、又は約０．００１ｍｇ／ｋｇｂｗｔ／日〜１ ０ｍｇ／ｋｇｂｗｔ／日の範囲で注射投与される請求項１記載の方法。
3. ３．哺乳動物においてマクロファージ食細胞溶解を刺激する方法において、単核 細胞及びマクロファージ刺激を行うのに十分な量のアセマンナンを哺乳動物に投 与することを含む方法。
4. ４．哺乳動物において抗ウイルス作用を作る方法において、単核細胞及びマクロ ファージ刺激を行うのに十分な量のアセマンナンを哺乳動物に投与することを含 む方法。
5. ５．ヒトにおいて欠陥ウイルスを作る方法において、単核細胞及びマクロファー ジ刺激を行いかつウイルス感染細胞におけるウイルスの複製代謝を変えるに十分 な量のアセマンナンをヒトに投与することを含む方法。
6. ６．ワクチン生産のためのマスター種培養物において欠陥ウイルスを作る方法に おいて、変化されたウイルス複製を作るのに十分な所定量のアセマンナンをマス ター種培養物に加えることを含む方法。
7. ７．アジュバント効果を作ることによるワクチンの免疫増強方法において、ワク チン投与量当り約０．００１ｍｇ〜１０ｍｇの範囲の所定量のアセマンナンをワ クチン製品に加えることを含む方法。
8. ８．哺乳動物における腫瘍を処置する方法において、単核細胞及びマクロファー ジ刺激を行い、自然の殺細胞活動を高め、かつ白細胞及び／又は抗体による特異 的腫瘍細胞溶解を高めるのに十分な量のアセマンナンを哺乳動物に投与すること を含む方法。
9. ９．（ｉ）非感染細胞の小胞体およびゴルジ体中にアセマンナンを誘導して、ウ イルス感染からの保護を該細胞に与えるところの変えられたグリコプロテインを 起す、または（ｉｉ）ウイルス感染細胞の小胞体およびゴルジ体中にアセマンナ ンを誘導して、該感染細胞中でのウイルス表現を破壊又は禁止するところのグリ コプロテインを作る方法において、細胞の表面のグリコプロテインを変性するの に十分な量のアセマンナンを細胞中に誘導することを含む方法。
10. １０．細胞がウイルス感染され、かつアセマンナンがウイルスを非感染とするの に十分な量で細胞中に誘導される請求項９記載の方法。
11. １１．細胞がウイルス感染され、（ｉ）アセマンナン誘導前に細胞が持っていた よりも広い感染細胞に対する免疫応答を与える広域スペクトルの特異的抗原が産 生されかつ、感染細胞表面に表現されるようにする、又は（ｉｉ）ヒト又は動物 により広域スペクトル抗体産生の速度を高めるのに十分な量でアセマンナンが細 胞中に導入される請求項９記載の方法。
12. １２．哺乳動物において、増加された量のマンノースを細胞内及び細胞外細胞代 謝経路に与えて、ヒトまたは動物における吸収不良及び粘膜細胞成熟症候群を矯 正する方法において、マンノシルトランスフェラーゼ活性のミバエリス定数を加 速することによってグリコプロテインの合成のための追加的マンノースを与える のに十分な量のアセマンナンを哺乳動物に投与することを含む方法。
13. １３．哺乳動物においてウイルス感染細胞を、細胞毒リンパ細胞により抗体依存 性細胞溶解を開始するであろうその表面上で変性ウイルスグリコプロテイン抗原 を表現するよう誘導する方法において、変性されたウイルスグリコプロテインを 作りかつ上記変性されたウイルスグリコプロテインが、それらを体液性抗体に曝 す感染細胞の表面上で表現されるようにするのに十分な量のアセマンナンを哺乳 動物に感染細胞中へ投与することを含む方法。
14. １４．ヒトの中にアセマンナンを誘導して、多発性硬化症に関連する症候群を低 減する効果を作る方法において、プラーク形成を低減し、かつ中枢神経系細胞に おいて官能性組織でのプラーク置換を誘発するのに十分な量のアセマンナンをヒ トに投与することを含む方法。
15. １５．哺乳動物中にアセマンナンを誘導して、炎症性腸疾病に関連する症候群を 低減する方法において、病巣中の潰瘍の組織再生を増大することにより及び病巣 中の局部的組織中の自己免疫免疫グロブリンの低減により、炎症性腸疾病に関連 する病巣を解消するのに十分な量のアセマンナンを哺乳動物に投与することを含 む方法。