JPH03503531A - 大環状キレート化合物及びその利用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 大環状キレート化合物及びその利 用方法 二１Ｊと丸見 及ｊ」と１■ 本発明は大環状キレート化合物及びその利用方法に関する。より特別には本発明 は２位置−置換された１、４゜７、ｌＯ−テトラアザシクロドデカン−Ｎ、Ｎ’ 、Ｎ”、Ｎｏ−テトラ酢酸及び２位置−置換された１、４，７．１０−テトラア ザシクロドデカン並びに類自体大環状化合物、及びそれらの利用方法に関する。

ＬＩＬ皿豆旦１ 巨大環状化合物は治療用、診断用又はその他に用いる多くの金属イオンに対する キレート化剤としての有用性についてこれまで研究されている。キレート剤とし て特に有用な巨大環状化合物の一つは１，４，７．１０−テトラアザシクロドデ カン−Ｎ、Ｎ、Ｎ、Ｎ−ｆ　トラ酢酸（ＤＯＴＡ）　である、ＤＯＴＡ化合物は 種々の生体分子と結合させてそのキレートされた金属イオンを生体内の特定の部 位へ送り届ける送達系を形成させることが行われている。

Ｍｅａｒｅｓ　　等に与えられた米国特許第４，６７８，６６７　　号は巨大環 状の２官能性キレート剤を開示している。この文献のキレート剤はＣｕ（ＩＩＩ キレート化合物であるＤＯＴＡ化合物を包含することができる。このキレート剤 の有用性は銅イオンの作用に限定されている。この文献に開示されている物質の 合成は低くて常には再現しえない結果を与える。

Ｍｅａｒｅｓ　　等のより古い米国特許第４，６２２，４２２　　号は銅量外の 、例えばインジウムのような金属を結合するのに有用な非環状のリガンドのエチ レンジアミン−Ｎ、Ｎ’、Ｎｏ。

Ｎ″°−テトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の２官能性キレート剤を開示している。これら の化合物は腫瘍を映像化するのに有用である。

Ｗａｒｓｈａｗｓｋｙ　　等に与えられた米国特許第４，６５２，５１９号は種 々の２官能性キレ−１・剤及びそれらの製造方法を開示している。この特許に開 示されている化合物はＥＤＴＡの類自体である。これらの化合物は種々の金属イ オンをキレート化するのに用いられ、そして種々のハブテンと結合させて生体内 での特異的部位選択を提供する。

この特許の化合物は上記Ｍｅａｒｅｓ等の特許に開示されているようなＥＤＴＡ 化合物に対する改善された代替物を提供するために提案された。

Ｇａｎｓｏｗ　　等に与えられた米国特許第４，４５４，１０６　　号及び同第 ４，４７２，５０９　　号はそれぞれ金属キレート抱合モノクローナル抗体の利 用とそれら特別な金属キレート抱合モノクローナル抗体とを開示している。これ らの文献は細胞性疾患を処置するための種々の化合物及び方法を提供する。標的 細胞に対して特異的な放射性金属キレート抱合モノクローナル抗体がα線、β線 又はオージェ電子放出性金属イオンを送達するのに使用される。これらの文献は ＤＯＴＡ化合物に関係しない。

治療目的、診断目的又はその他の用途のためにリガンド抱合体に金属イオンをキ レートさせることの価値は営利的に重要である。この営利的重要性は多（の金属 イオンがそのような種々の用途に対する所望の特性を有するということによって もたらされるけれども、しかしながらそれら金属イオンについての種々の送達系 は標的細胞に対する特異性に欠けるか、又は金属イオンを適切に結合しない、特 別な金属イオンの有用性の例は下記の通りである。

癌治療における放射性核種物質の有用性はＫｏｚａｋ　　等の雑誌″Ｔｒｅｎｄ ｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ″４（１０１：　２５９−２６４（１９ ８５１の「放射性核種抱合モノクローナル抗体：有機化学及び原子核化学におけ る免疫学の総合」に開示されているやこの文献はα放射線又はβ放射線を照射す るために抗体抱合体を使用することを開示している。更に放射線核種治療におけ るＢｉ　２１２からのα放射線の価値が下記の２つの文献、すなわちＬｏｚａｋ 　　等の雑誌″Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、”、　８３：　４７４−４７ ８　（１９８６１のｒＢｉ２１２　　で標識したａｎｔｉ−Ｔａｃモノクローナ ル抗体：放射線免疫治療のためのモダリティ−としてのα粒子放出性の放射性核 種ｊ及びＧａｎｓｏｗ等の雑誌″Ａｍ、　Ｃｈｅｗ。

Ｓｏｃ、　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　５ｅｒｉｅｓ″、　１５：　２１５−２２７　 ｆ１９８４＋の「放射線治療に使用するための、化学的に改質されたモノクロー ナル抗体にキレートした、ジェネレータで作られたＢｉ　２１２　Ｊにおいて論 じられている。

キレートされた種々のイオンの他の用途の例は下記の文献に開示されている： Ｍａｇｅｒｓｔａｄｔ　　等：雑誌”Ｍａｇｎｅｔｉｃ　Ｒｅ５ｏｎａｎｃｅ　 ｉｎＭｅｄｉｃｉｎｅ″、　３：８０８８１２　（１９８６１；　ｒＧｄ（ＤＰ ＴＡ）：　ＮＭＲ映像法又は分光法のためのＴ１．Ｉ＃Ｉ和剤としてのＧｄ　（ ＤＰＴＡＩの代替物」　（これはＮＭＲ映像法のための緩和剤としてのガドリニ ウムの有用性を開示している）　＠　　５ｐｉｒｌｅｔ　　等：雑誌″Ｉｎｏｒ ｇａｎｉｃ　Ｃｈｅ＋＋＋１ｓｔｒｙ”、　２３（２５１：　４２７８−４２８ ３（１９８４１：　　ｒｌ、４．８．１１−テトラアザシクロテトラデカン−１ ，４，８，１１−テトラ酢酸とのテルビウム（ＩＩＩＩ　錯化合物の構造的特徴 付は一うンタニド類イオン及びその１４員の巨大環状化合物の形成」　（これは ランタニドキレートの有用性を開示している）。

多数の金属イオンに対して所望のキレート化特性を有し、かつ高収率で効率的に 作ることのできるＤＯＴＡキレート剤は工業において存在していない。

１１立１上 本発明は下記一般式　（Ｉｌ を有するキレート化合物であって、この式においてＲ＋ないしＲ４は−ＣＨＩＣ ０ＯＨを表わし、ｎは工ないし５の数であり、 Ｘは−ＮＯ諺、−ＮＨＩ、−ＮＣＳ、　−ＮＨＣＯＣＨ＊−２（但ＬＺハＢｒと 　工　とからなる群から選ばれるものを表わす）、−ＣＯＯＨ及び−ＯＣＨ，Ｃ ０ＯＨよりなる群から選ばれる基であり、そして Ｍは　Ｂｉ％Ｐｂ％Ｙ、　Ｃｄ、　Ｈｇ％Ａｌ、Ｔｈ、　Ｓｒ　　及びランタニ ド類よりなる元素の群から選ばれる金属イオンである。

本発明は上記式においてＭが銅イオンであってｎが２ないし５の整数であるよう なキレート化合物を含むことができる０本発明は上記一般式　（１）　　のキレ ート抱合体及び下記一般式　（ＩＩＩのリガンド抱合体を包含する。

本発明はまた更に、細胞性疾患を処置するため、及び診断テストのためにこれら の化合物を使用する方法をも包含する。

の　　　　ｔｅ 第１図は本発明の好ましい具体例のものを作り出すための化学的過程を説明する 。

の　　　　ｔ　！ 本発明の化合物は上にあげた一般式　（１）　　で示される置換されたＤＯＴＡ 又は第１図の化合物１０により示される置換されたＤＯＴＡである。化合物１０ は次に他の種々の置換されたＤＯＴＡ化合物に変えることができるけれども、化 合物１０はこれら他の化合物の親化合物である。この一般式は窒素原子がその１ ．４．７及び１０位置に存在する１２員の環式テトラアザ巨大環状化合物である 。窒素原子のそれぞれは１個のエチレン基によって「リブ連結」されている。

第１図の化合物１０で表わされる置換されたＤＯＴＡリガンドは種々の金属を錯 化する１種々の金Ｉ！＆錯化合物がこのＤＯＴＡをそのキレート化されるべき金 属の含まれた適当な金属塩とともに溶液にすることによって形成される。金属塩 はその金属の加水分解を防ぐように選ぶ必要がある。水性媒体中の反応条件もそ の金属が加水分解しないように選ばなければならない０例えば硝酸鉛錯化合物、 沃化ビスマス錯化合物又はイツトリウム酢酸塩がそれぞれ鉛、ビスマス、又はイ ツトリウムとの金属キレートを形成するために使用することができる。適当な塩 類の一般的な例はｐＨ４又はそれ以下において加水分解しないいずれの２価金属 の錯化合物又はいずれの３価金属の錯化合物をも包含する。トリウムは特に沃化 物塩の使用を必要とする。一般式　ＣＩ）　　によるキレート化のための最も望 ましい金属イオンはビスマス、鉛、イツトリウム、カドミウム、水銀、アクチニ ウム、トリウム、ストロンチウム及びランタニド類の全ての元素よりなる群から のものである。ランタニド類の最も望ましい元素はＮＭＲ映像法及びＮＭＲ映像 法における緩和剤として使用するためのガドリニウム、及び時間解像蛍光分光法 における発色団として使用するためのテルビウム及びユーロピウムである。これ ら蛍光性化合物は放射能アミノ分析よりは蛍光分析が用いられる試験管内診断分 析において便用することができる。

上記一般式の置換基Ｘは好ましくは、その化合物をハブテンと抱合させる置換基 である。この置換基は好ましくはアミンに還元することのできる遊離端ニトロ基 である。このアミンは次に塩化チオニルのような化合物で活性化してイソチオシ アネートのような反応性基を形成することができる１インチオシアネート基が好 ましく、というのはこれがモノクローナル抗体のようなハブテンのアミノ残基に 直接結合するからである。そのアニリン基は蛋白質の上の酸化された炭水化物に 結合することができ、そして次にこの結合したものはシアノボロハイドライドで 還元することによって固定される０次にそのアミノ基をブロモアセチルクロライ ド又はヨードアセチルクロライドと反応させて−ＮＨＣＯＣＨ＊−２（但しＺは 臭素又は沃素を表わす）を形成することができる。この基はハプテンの上のいず れかの利用可能なアミノ基又はスルフヒドリル基と反応して安定な共有結合を形 成する。その巨大分子の構成においてチロシンを用いた場合にはこの化合物のこ の位置に炭素環式酸又はメトキシカルボキシレート基が存在し得る。この位置の 最も好ましい置換基は−Ｎｏ、、−ＮＣＳ、　　−ＣＯＯＨ，−ＯＣＨ怠Ｃ０Ｏ Ｈ、−ＯＣＨ，Ｃ０ＯＨ及び−ＮＨＣＯＣＨ，−２（但しＺは臭素と沃素とから なる群から選ばれる）よりなる群から選ばれるものである。この位置の好ましい 置換基は−ＮＣＳである。

一般式　＋Ｉ）　　のＸの位置の置換基と結合するのに適したハブテンは極めて 広範囲に変化することができる。最も望ましいハブテンはホルモン類、ステロイ ド類、酵素類及び蛋白質よりなる群から選ばれるものである。これらのハブテン は身体の腫瘍に対し、及び／又は種々の器官に対して部位特異性があるために望 ましい、細胞性疾患又は種々の疾病状態を処置するのに用いる好ましいハブテン はモノクローナル抗体である。

本発明の化合物は工ないし５の整数に等しいｎを有することができる。好ましい 具体例ではｎは２である。ｎは１よりは２に等しいのが望ましく、というのはキ レート化リガンドが更に抗体から分離されてより大きな回転を有するからである 。自由回転の増大は金属がその巨大分子とより容易にキレートすることを許容す る。ｎが３以上であるときはその化合物の合成は冗長になる。

第１図は本発明の化合物を形成するための好ましい反応経路又は過程を説明する ものである。この反応は一般式　（Ｉ）　　においてｎが１である化合物をもた らす、もしｎが２に等しいときは追加的な１個のメチレン基がαアミノ炭素とそ の芳香族基との間に存在することになる。

この化合物は２−アミノ−４−ニトロフェニル酪酸である。

本発明に従う化合物を合成する方法は、まず２位置に置換基を有するトリアミン 化合物をもたらす、第１図の具体例は、連結のための最初の置換基として１個の メチレン基を有する。好ましい具体例のものはフェニルエチレン基を有する０次 にこの方法はその置換基を２位置に有するテトラアザ巨大分子を与える。ブロモ 酢酸によるアルキル化はその一般式のＲ１、Ｒｍ　、Ｒｓ及びＲ４のところのカ ルボキシメチレン置換基の４個の炭素−窒素結合を形成する。

第１図の方法ではｐ−ニトロフェニルアラニンをメタノール及び塩酸と反応させ てエステル化合物２を形成する。化合物２において形成されたエステルの塩酸塩 を除去するためにこのエステルをトリエチルアミンの存在のもとにエチレンジア ミンと反応させる。このエチレンジアミン付加物のアミドの縮合物すなわち化合 物３は次にジ活性のエステル又は化合物６と反応させて環状生成物すなわち化合 物７を形成させる。

所望のジ活性エステル６は第１図の４のアミドジ酢酸から順に形成される。その アミンをまずＢＯＣ−ＯＮ又は他の適当な、例えばＦＭＯＣのようなブロッキン グ剤によってその出発物質の脱プロトンに用いられるトリエチルアミンの存在の もとにマスクする。その得られた、窒素が保護されたジ酢酸５又は他のそのよう な窒素の保護された化合物を次にＮ−ヒドロキシこはく酸イミド、又は例えばフ ェノール類、Ｎ−ヒドロキシジカルボキシイミド類のような、反応性エステルを 形成する他の適当な化合物と結合させる０反応性エステルを形成する化合物や保 護基の選択は技術水準の範囲内である。上記の結合は”ＤＣＣ”すなわちジシク ロへキシルカルボジイミドによって行う、この段階によって化合物６の窒素の保 護された活性エステルが形成される。

アミノ酸アミドすなわち化合物３と化合物６の窒素の保護された活性エステルと の間の高度に稀釈された条件のもとての環形成反応が次に起こる。この縮合段階 によってトリアミド巨大環状化合物すなわち化合物７が形成される。化合物７は 極めて高い収率で形成される。この収率は典型的には少なくとも約８０％である 。この収率は約８０％と約９５％との間であるのがより望ましい。

この化合物７の巨大環状化合物の合成は２つの経路によって行うことができる。

化合物７のアミノ窒素をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で保護する。これによって 、トリアミド巨大環状化合物すなわち化合物８のＴＦＡ塩が形成される。この化 合物をボラン／テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）によって還元する。得られたボラ ン付加物を塩酸で分解して化合物９の、置換されたテトラアザ巨大環状化合物を 形成させる。このテトラアザ巨大環状化合物は次に塩基の存在のもとに八日酢酸 でアルキル化してニトロベンジルＤＯＴＡすなわち化合物１０を形成させること ができる。これに代えて、化合物７はボラン／ＴＨＦで還元し、そして塩酸と反 応させて直接化合物９を形成させることもできる。この別経路によれば、僅かに 劣った収率となる。

化合物１ｏのニトロ基は白金／炭素の触媒の上で水素で還元してアミノ基を形成 させ、そして化合物１１で示すアミノベンジルＤＯＴＡにすることができる０次 に化合物１１はチオホスゲンと反応させてイソチオシアネート又は化合物１２を 形成させることができる。

Ｗａｒｓｈａｗｓｋｙ　　等に与えられた米国特許第４．６５２．５１９号（参 照文献として採用する）の第３欄にあげられている方法は−ＣＯＯＨ置換基を形 成する手段を提供する。この方法によればエチレンジアミン中間体が形成される 。

所望の巨大環状化合物中間体はＮ、Ｎ’−エチレンジアミンジ酢酸を用いること によって化合物６の類似のジ活性エステルを形成させることによって作られる。

このジアミンとジ窒素ジＢＯＣジ活性エステルとの縮合により、ジアミド中間体 が形成され、これをジボランで還元して任意のテトラアザ巨大環状化合物が形成 される。ＤＯＴＡリガンドはこの巨大環状化合物から作ることができる。

Ｘ及びＺの基の合成もこのＷａｒｓｈａｗｓｋｙ特許によって開示されでいる。

化合物１ｏ、１１及び１２を作り出すための上に記述した各反応段階は公知であ る。笥１図の方法の新規な特徴は、環化方法である。化合物４を化合物らと反応 させてその巨大環状化合物を形成し、そしてこの巨大環状化合物を完全に還元し て化合物１０を作り出すことによって、予期されなかった化合物１０の極めて高 い収率の結果がもたらされる。

好ましい具体例において第１図の化合物１２のインチオシアネートキレートの結 合はこのイソチオシアネートを種々の蛋白質、酵素類又は例えば成る種のホルモ ンのような他の化合物の多くの残基の中に存在する遊離アミノ基と直接相合させ ることによって行われる。ホルモンとのこのような反応の１例はリジンのε−ア ミノ基によりもたらされる遊離アミノ基又はホルモンペプチド鎖としての末端ア ミノ基で見られる。いかなる遊離アミノ基もそのイソチオシアネートと反応して チオ尿素結合を形成し、これは共有結合的かつ非可逆的結合である。

ハブテンとしてステロイドを用いる場合はそのステロイド中にアミノ官能基の存 在することを必要とする。

第１図の化合物１１のアミン誘導体キレートの利点の一つは、種々の蛋白質に結 合させるときに、中でも抗体類に結合させるときにその抗体の炭水化物をこの結 合反応に先立って酸化することができるということである。

このアミンはその蛋白質の上に形成されたアルデヒドと反応する。この形成され たアルニンミンはシアツボロバ、イドライドによ−）で還元されて、成る部位に おいてその抗体との共有結合的第二級アミン結合を形成することができ、すなわ ち位置特異的である。この部位はモノクローナル抗体のＦＡＢ　’　２　　部の 結合位置から離れている。

本発明の望ましい具体例の一つは、銅金属イオンを有し、そしてｎが２ないし５ の整数であるものである０本発明のこの具体例のものはモノクローナル抗体を（ ｕ　＠　ｔで標識するのに使用することができる。ｎが２ないし５の整数である ときはｎが１であるときに現れるよりも蛋白質によるリガンドの分子鎖の掩蔽が 少ない、ｎが２ないし５の整数であるときはリガンドと蛋白質との間にそのリガ ンドのより自由な回転を許容する空間がもたらされる。このことは得られた抱合 体による銅イオンのより効率的なキレート形成をもたらす。

本発明の具体例の一つにおいて下記式　ｌｌ１１のりガント−ハブテンの抱合体 が含まれる。

この抱合体は種々の金属イオンとキレート結合する。

この蛋白質抱合体ができるだけ短い時間間隔の間に濃厚な金属溶液中で多くの金 属にさらされるのが望まし４い。

２価金属イオンのような成る種の金属はこの抱合体と迅速にかつ直接反応する。

これらの化合物についての形成反応は非常に迅速であり、従ってそのリガンド− ハプテン抱合体を使用の直前に薬局で入手できるようにしておくのが望ましい、 この抱合体は次に放射線核種中で混合して錯化合物を形成させることができ、そ してその後でその形成された金属キレート抱合体は例えばサイズ排除高圧液体ク ロマトグラフィーによって精製することができる。このリガンド抱合体に望まし いハブテンの一つをホルモン類、ステロイド類、酵素類及び蛋白質よりなる群か ら選ぶことができる。

本発明の営利的に最も有用な具体例のものは一般式ｆｉｌ　においてイ）ｎが１ ないし５の整数であり、口）ｘ゛が−ＮＨＱ　、　−ＮＣ３−Ｑ、−ＮＨＣＯＣ ＋（、−Ｑ、−０ＣＨ＊Ｃ００Ｑ及び−ＣＯＯＱ（但しＱはホルモン類、ステロ イド類、酵素類及び蛋白５ｆ類から選ばれたハブテンを表わす）よりなる群から 】■ばれたものであり、そしてハ）ＭがＢｉ　、Ｐｂ、　　Ｙ、　Ｃｄ、Ｈｇ、 　Ａｃ、　Ｔｈ、　Ｓｒ　　及びランタニド類よりなる元素の群から選ばれた金 属イオンであるようなキレート抱合体である。これらのキ【／−ト抱合体は特定 の細胞性疾患のとイτろへＰｂ！Ｉｎ、Ｂｉ″＋ｚ　、　ｙｓｏ　、　Ｔｈ２″ ４及びＳ　ｒ　”のような放射性金属イオンを送り届けることができる。

本発明の好ましい具体例ではＰｂ２′１を結合するキレート抱合体を用いる　ｐ ｂｌｌｌは細胞性疾患を処置するために、選ばれた部位へβ線及びα線の両方を 送達するのに非常に望ましい製薬化合物である。この送達はｐｂｚ１ｇイオンに よって行われ、このものは１０．５時間の半減期で１３ｉ１１１に変化する　Ｂ １１１１及び娘核種は１個のｐｂｔｌｆｆｉ原子核当たり１個のα粒子を放出す る。このキレート抱合体の望ましい結果は、ｐｂｌｌｌの半減期が、α粒子の放 出される前にハブテンによる体液からの部位選択を許容するに充分であるという ことである。

本発明は種々の細胞性疾患を処置する方法をも包含する。この方法はその細胞性 疾患のところへの選択的結合サイトを有するハブテンとのキレート抱合体を利用 するものである。例えばＱは、その抗体が腫瘍細胞の上に特異的に見いだされる エピトープに対して指向して作り出されたモノクローナル抗体であることができ る。すなわち、Ｐｂ！　＋　２が抗原部位へ輸送されて、５１き続いて放射平衡 においてＢＨ２１！及びその娘核種に崩壊するときに、鉛の崩壊から１個のβ線 放射がもたらされる。各ビスマス娘核種によって１個のβ線放射が作り出される 。このβ線放射はＹｌｏからのβ線放射と似ているけわとも、それに加えてビス マスの各崩壊ごとに１ｆＷのα粒子も作り出される。このようにして放射線治療 がもたらされ、その際放射はα粒子及びβ粒子の両方からもたらされるゎ所望の 場合には、白血病細胞のように処置さ第１るべき疾患部にＢｉｌｌ１２１時間の 半減期内に容易に到達できるような場合には１３ｉ１１１だけを導入することが できる。この方法は細胞が広く分化しているような種々の癌を処置するために利 用することも可能である。これは例えばｙ＠ｏのような長期β線放出源のみが望 まれるときに好ましいであろう０種々異なる環境において生体内でＢｉｔｌｌは β線放出の後、そのキレート内部に異なった量で保持される。

Ｂ１１１ｔの少なくとも９５％以上がそのキレート中に残留しているのが最も望 ましい０例えば胃のような酸性媒質中では少なくとも７０％以上の８１　ｍ　目 が保持される。少なくとも約８０ないし９０％以上保持されるときは媒質によっ てはＢｉｔｌｌも同様に望ましい。

本発明は診断的テスト方法も包含する。この方法は一般式　（Ｉ＋　　において Ｍがｐｂ２０１％７０１１９１１　、　Ｉｎｌ１ｌ、Ｇａ６？、Ｇａ■、５ｃ４ ｓ１Ｓｃ４４、Ｆｅ■、Ｆｅ　＠　４、Ｆｅ■、Ｆｅ＠テ、Ｆｅ■及びＣＯｏか ら選ばれたものであるキレート抱合体を用いる。

種々の金属イオンの試験管内診断方法及び生体内診断方法の両方による有用性は 参照文献としてここに採用する米国特許第４，４５４，１０６　　号公報に開示 されている。

この診断方法の最も望ましい具体例においてはｐｂｌｅｓが用いられる　ｐｂｌ ｅｓはγ線放出源として５２．１時間の半減期を有する　ｐｂｓｏｓはただ１個 のフォトンの放出によってのみ、高い％割合で崩壊するというユニークな性質を 有している。このγ線放射は好ましいものであり、そして他の全ての放出よりも 優れている。この単一フォトン放射はｐｂ！０ｍを診断装置の一つである単一フ ォトン放射コンピュータ分光法に利用することを可能にする。

すなわち、腫瘍に特異的に集中するハブテンに対してそのキレートを使用するこ ととｐｂｌｅｓとを組み合わせた場合に、その特別な集中を単一フォトン放射ト モグラフィーによって生体において診断目的のために３次元的地図作製に利用す ることができる。またこれと異なり、放射を放射線免疫評価において試験管中で 利用することができる。

種々の化合物を作る好ましい具体例について上に記述した各種方法及び薬剤をこ の例のために使用する。

ＩＬ−２抗原に対して特異的な抗体はモノクローナル抗体α−Ｔａｃ　　である 、この抗体は第１１図の化合物１２のキレートで次のように１１される。この抗 体を約８．５゛のｐＨの緩衝された標準食塩水中に懸濁させる。化合物１２の固 体リガンドをこの蛋白質懸濁液に加える。１夜の反応時間の間に蛋白質抱合体が 形成され、そしてこれは金属の含まれないｐＨ５，５の０．０５モル（えん酸１ ０．１５　　モル塩化ナトリウムに対して透析することにより精製する。金属で 標識するに先立ってこの蛋白質はｐＨ５，９において０．０２モルのＮ−モルホ リノエタンスルホン酸及び０．０２モルの酢酸塩を含む溶液に対して透析する。

この溶液中の蛋白質を１アイソトープの酢酸塩溶液を反応させ、引き続いてＴＳ Ｋ　３０００サイズ排除カラムを通過させることによってｙｗｏで標識する。こ れは高圧液体クロマトグラフィー法である。この化合物を製薬賦形剤と混合して 哺乳動物における成人Ｔ細胞白血病を処置するために治療的量で哺乳動物におい て使用する。Ｔ細胞白血病はその主要細胞の上に存在する異常に多量のＩＬ−２ 受容体を有するという特徴を示す、この抗体は特異的にこれらの腫瘍細胞に集中 してその放射能を打ち出す。

１１及ユニ 各化合物を作る好ましい具体例について上に記述した方法及び試薬をこれらの例 に使用する０例１とこの例２及び３との相違点は抗原８７２．３　　を用いたこ とであり、これはＬＳ−１７４７細胞の糖蛋白質に特異的に結合する。

この糖蛋白質は大腸癌を有する人においても存在する。

この例のモデル系はわき腹の上にその移植部において腫瘍を発現させるためにＬ Ｓ−１７４Ｔ　　細胞を移植した無胸腺マウスである。ｍ瘍の清澄を可視化する のに用いた診断方法は下記の各成分を含む、まず最初、化合物１２のキレートを 、そのキレート溶液をｐＨ４ないし５において硝酸ガドリニウム又は硝酸鉛８０ ３と混合することによってガドリニウム又はｐｂ１０＄と結合させる。この物質 を次に混合によってその抗体と直接結合させてその蛋白質と反応させ、そして先 行の例の方法に従い精製する。

例２においてはガドリニウムキレートリガンド蛋白質抱合体を哺乳動物の体液中 に注入又は導入する。ガドリニウムは次に体液によって腫瘍部へ集中し、そして この腫瘍を可視化するには通常の磁気共鳴映像法を用いる。

例３においては鉛８０３を用い、その金属で標識した蛋白質抱合体は同様に哺乳 動物に導入するが、但し腫瘍の可視化にはγ線カメラ又は５ＰＥＣＴ　　造影法 を用いる。

国際調査報告 にＴ／Ｕｓｅ９１０２２ｏｘ Ａｔｔａｃｈｍ費ｎｔ　　ｓｈ＠ｅｔ　　１（ＺＸＨＭｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｄｉ ｍｇｎｏｓｔｔｃ　ｔ＊ｓｔｉｒｉｇ　ｅｓｏｂｒａｃ會ｄ　ｂｙ　ｃｌａｉ＋ ｍ５２７−２９　ａｒ＋４　ｃｌａｓｓｉｆｉ＠ｄ　　ｉｒ＋　４２４−２゜琴 １頁の続き ［相］ＩｎＬ　Ｃ１−’　　　　　　　識別記号　　庁内整理番号９発　明　者 　　マーガーシュタット、ミヒヤエ　　　ドイツ連邦共和国、ル・アー　　　　 　　　　　　　　１９特表平３−５０３５３１　（９） 、　６２３８　　ホフハイム、ラインガウシュトラーセ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）一般式（Ｉ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）を有し、この式において Ｒ１ないしＲ４は−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、ｎは１ないし５の整数であり、 Ｘは−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＣＳ、−ＮＨＣＯＣＨ２−Ｚ（但しＺはＢｒとＩ とからなる群から選ばれるものを表わす）、−ＯＣＨ２ＣＯＯＨ及び−ＣＯＯＨ よりなる群から選ばれる基であり、そして ＭはＢｉ、Ｐｂ、Ｙ、Ｃｄ、Ｈｇ、Ａｌ、Ｔｈ、Ｓｒ及びランタニド類よりなる 元素の群から選ばれる金属イオンである、 キレート化合物。 （２）ｎが１ないし２であり、そしてＸが−ＮＯ２、−ＮＣＳ及び−ＮＨＣＯＣ Ｈ２−Ｚ（但しＺはＢｒとＩとよりなる群から選ばれるものを表わす）よりなる 群から選ばれるものである、請求の範囲１のキレート化合物。 （３）ＭがＢｉ、Ｐｂ、Ｙ、Ｔｈ、Ｓｒ、Ｇｄ、Ｅｕ及びＴｂよりなる群から選 ばれたものである、請求の範囲２のキレート化合物。 （４）ｎが２であり、Ｘが−ＮＣＳであり、そしてＭがＰｂ２１２、Ｐｂ２０２ 、Ｂｉ２１２、Ｙ９０、Ｔｈ２２４及びＳｒ９０よりなる群から選ばれたもので ある、請求の範囲１のキレート化合物。 （５）ＭがＰｂ２１２とＢｉ２１２とよりなる群から選ばれたものである、請求 の範囲４のキレート化合物。 （６）ｎが２であり、Ｘが−ＮＣＳであり、そしてＭがＥｕとＴｂとよりなる群 から選ばれたものである、請求の範囲２のキレート化合物。 （７）一般式（Ｉ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）を有し、この式において Ｒ１ないしＲ４は−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、ｎは２ないし５の整数であり、 Ｘは−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＮＣＳ、−ＮＨＣＯＣＨ２−Ｚ（但しＺはＢｒとＩ とからなる群から選ばれるものを表わす）、−ＣＯＯＨ及び−ＯＣＨ２ＣＯＯＨ よりなる群から選ばれる基であり、そして ＭはＣｕである、 キレート化合物。 （８）ｎが２であり、そしてＸが−ＮＯ２、、−ＮＣＳ及び−ＮＣＯＣＨ２−Ｚ （但しＺはＢｒとＩとよりなる群から選ばれるものを表わす）よりなる群から選 ばれるものである、請求の範囲７のキレート化合物。 （９）Ｘが−ＮＣＳである、請求の範囲８のキレート化合物。 （１０）一般式（ＩＩ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）を有し、この式において Ｒ１ないしＲ４は−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、ｎは１ないし５の整数であり、 Ｘ′は−ＮＨ−Ｑ、▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等 があります▼、−ＯＣＨ２ＣＯＯＱ、及び▲数式、化学式、表等があります▼を 表わすが、但しＱはホルモン類、ステロイド類、酵素類、及び蛋白質類の群から 選ばれるハプテンである、 リガンドーハプテン抱合体。 （１１）ｎが２であり、そしてＸ′が▲数式、化学式、表等があります▼である 、請求の範囲１０のリガンド抱合体。 （１２）Ｑが蛋白質であってこの蛋白質がモノクローナル抗体である、請求の範 囲１１のリガンド抱合体。 （１３）一般式（Ｉ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）を有し、この式において Ｒ１ないしＲ４は−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、ｎは１ないし５の整数であり、 Ｘ′は−ＮＨ−Ｑ、−ＮＨＣＳ−Ｑ、 −ＮＨＣＯＣＨ２−Ｑ、−ＯＣＨ２ＣＯＯＱ、及び▲数式、化学式、表等があり ます▼（但しＱはホルモン類、ステロイド類、酵素類、及び蛋白質類の群から選 ばれるハプテンである）よりなる群から選ばれるものであり、ＭはＢｉ、Ｐｈ、 Ｙ、Ｃｄ、Ｈｇ、Ａｌ、Ｔｈ、Ｓｒ及びランタニド類の元素の群から選ばれる金 属イオンである、キレート抱合体。 （１４）ｎが１〜２であり、そしてＸ′が▲数式、化学式、表等があります▼で ある、請求の範囲１３のキレート抱合体。 （１５）ＭがＢｉ、Ｐｈ、Ｙ、Ｔｈ、Ｓｒ、Ｇｄ、Ｅｕ及びＴｂよりなる群から 選ばれた元素である、請求の範囲１４のキレート抱合体。 （１５）ｎが２であり、そしてＭがＰｂ２１２、Ｐｂ２０２、Ｂｉ２１２、Ｙ９ ０、Ｔｈ２２４及びＳｒ９０よりなる群から選ばれたものである、請求の範囲１ ５のキレート抱合体。 （１７）ＭがＰｂ２１２とＢｉ２１２とよりなる群から選ばれたものである、請 求の範囲１６のキレート抱合体。 （１８）ｎが２であり、そしてＭがＥｕとＴｂとよりなる群から選ばれたもので ある、請求の範囲１５のキレート抱合体。 （１９）細胞性疾患を処置するに当たり、体液中に下記一般式（Ｉ）の金属キレ ート化合物の溶液を導入することよりなる処置方法： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）但しこの式において Ｒ１ないしＲ４は−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、ｎは１ないし５の整数であり、 Ｘは−ＮＨ−Ｑ、 ▲数式、化学式、表等があります▼、−ＮＨＣＯＣＨ２−Ｑ、−ＯＣＨ２ＣＯＯ Ｑ、及び▲数式、化学式、表等があります▼を表わすが、但しＱはホルモン類、 ステロイド類、酵素類、及び蛋白質類の群から選ばれるハプテンであり、ＭはＢ ｉ、Ｐｂ、Ｙ、及びＧｄよりなる元素の群から選ばれる金属イオンである。 （２０）ｎが２であり、Ｘが▲数式、化学式、表等があります▼であり、そして ＭがＧｄである、請求の範囲１９の方法。 （２１）ＭがＰｂ２１２であり、このＰｂ２１２はＢｉ２１２及びその各種娘核 種に変化し、このＢｉ２１２が上記細胞性疾患を処置するためのα粒子を放出す る、請求の範囲１９の方法。 （２２）ｎが２であり、Ｘが▲数式、化学式、表等があります▼である、請求の 範囲２１の方法。 （２３）少なくとも７０％のＢｉ２１２が上記キレート中に残留している、請求 の範囲２２の方法。 （２４）少なくとも８０％のＢｉ２１２が上記キレート中に残留している、請求 の範囲２３の方法。 （２５）少なくとも９０％のＢｉ２１２が上記キレート中に残留している、請求 の範囲２４の方法。 （２６）少なくとも９５％のＢｉ２１２が上記キレート中に残留している、請求 の範囲２５の方法。 （２７）診断的テスト方法において、テスト媒質中に下記一般式（Ｉ）の金属キ レート化合物の溶液をテスト媒質中に導入することよりなる、テスト方法：▲数 式、化学式、表等があります▼（Ｉ）但しこの式において Ｒ１ないしＲ４は−ＣＨ２ＣＯＯＨを表わし、ｎは１ないし５の整数であり、 Ｘ′は−ＮＨ−Ｑ、 ▲数式、化学式、表等があります▼、−ＮＨＣＯＣＨ２−Ｑ、−ＯＣＨ２ＣＯＯ Ｑ、及び▲数式、化学式、表等があります▼を表わすが、但しＱはホルモン類、 ステロイド類、酵素類、及び蛋白質類の群から選ばれるハプテンであり、ＭはＰ ｂ２０３Ｔｃ９９ｍ、Ｉｎ１１１、Ｇａ６７、Ｇａ６８、Ｓｃ４３、Ｓｃ４４、 Ｆｅ５２、Ｆｅ５４、Ｆｅ５６、Ｆｅ５７、Ｆｅ５８及びＣｏ５５よりなる群か ら選ばれる金属イオンである。 （２８）ｎが２であり、Ｘが−ＮＣＳ−Ｑであって、但しＱはモノクローナル抗 体である、請求の範囲２７の方法。 （２９）ＭがＰｂ２０３である、請求の範囲２８の方法。